Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Механизмы противовоспалительных эффектов артрофоона

На правах рукописи

РГБ ОД

г е лег гоов

КАЧАНОВА Мария Владимировна

МЕХАНИЗМЫ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ЭФФЕКТОВ АРТРОФООНА

(экспериментально-клиническое исследование) 14 00 25 - фармакология, клиническая фармакология 14 00 16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□□344563Э

Томск-2008

003445639

Работа выполнена в ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН и Научно-производственной фирме "Материа Медика Холдинг"

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, заслуженный работник высшей школы РФ

доктор медицинских наук, профессор

Эпштейн Олег Ильич Шерстобоев Евгений Юрьевич

Венгеровский Александр Исаакович Першина Ольга Викторовна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится "_" _2008 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 001.031 01 при ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН (634028, г. Томск, пр Ленина, 3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ фармакологии Томского научного центра СО РАМН

Автореферат разослан "_"_2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Амосова Е Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуачьность проблемы

Одним из важнейших достижений современной медицины является расшифровка механизмов развития воспаления, ключевым моментом которых являются цитокины Это позволило использовать принципиально новые подходы к лечению - применение белковых антагонистов ряда провоспалительных цитокинов, прежде всего при ревматических заболеваниях, в патогенезе которых ведущую роль играет хроническое иммунное воспаление (Агеев Ф Т и соавт, 2001, Nabel G J, 2004, Насонов Е JI, 2007)

Важное значение в патогенезе ревматоидного артрита придают дисбалансу между про-и противовоспалительными цитокинами, за счет гиперпродукции провоспалительных цитокинов преимущественно макрофагальной природы, прежде всего, таких как фактор некроза опухоли альфа (ФНО-а), который может как непосредственно способствовать воспалению, так и индуцировать (регулировать) экспрессию других провоспалительных цитокинов, включая ИЛ-1, ИЛ-6, ИЛ-8 и ГМ-КСФ (Feldmann М et al, 1996, Smith JB., Haynes MK, 2002, Сучков С В и соавт, 2004, Hehlgans Т, Pfeffer К, 2005) Также значительную роль провоспалительные цитокины, в первую очередь, ИЛ-lß, ФНО-а, играют в развитии деструкции хряща при остеоартрозе, стимулируя выработку металлопротеиназ, вызывающих дегенерацию коллагена и протеогликанов хряща, и подавляя синтез протеогликанов в хрящевой ткани (Martel-Pelletier J et al, 1999, Fernandes J С et al, 2002, Цветкова E С, 2004)

Изучение роли цитокинов в развитии воспалительных и деструктивных изменений в суставах при ревматоидном артрите (РА) и остеоартрозе (OA) актуально как для понимания патогенеза этих заболеваний, так и для создания новых препаратов для их лечения (Алексеева Л И, 2003, Olsen N J, Stem С М, 2004, Зорин Н А и соавт, 2005, Маколкин В И , Меньшикова И В , 2005, Клековкина Е В , Немцов Б Ф, 2006)

В настоящее время при лечении РА и OA сформировалась концепция «болезнь-модифицирующей терапии» - применение лекарственных средств, которые позволяют не только контролировать симптомы заболевания, но и приостановить его прогрессирование (Ефимцева Т К, 2002, Яременко О В , 2002, Бадокин В В , 2003, Денисов Л Н и соавт, 2007) При ревматоидном артрите в перечень таких препаратов включены биологические агенты, прежде всего, содержащие антитела к ФНО-а, которые в сочетании с другими базисными препаратами расширяют возможности терапии заболевания (Scott D L, Kingsley G Н, 2006, Лукина Г В и соавт, 2007, Оловникова Н И, Митерев Г10 ,2007)

В России разработаны и введены в широкую клиническую практику лекарственные препараты на основе сверхмалых доз антител к эндогенным регуляторам (Эпштейн О И и соавт, 2005) Их фармакологическая активность, основанная на модификации функций соответствующего регулятора, выявлена в экспериментальных исследованиях, а клиническая эффективность и безопасность доказана в контролируемых клинических испытаниях (Учайкин В Ф, 2003, Мазо Е Б , Петров В И, 2004)

Цель исследования

Изучить механизмы противовоспалительных эффектов артрофоона (сверхмалые дозы антител к ФНО-а) в эксперименте и оценить клинико-лабораторную эффективность препарата при лечении оевматоидного артрита и остеоартроза.

Задачи исследования

1 Исследовать анальгетическую активность артрофоона при лечебном и профилактическом введении в эксперименте

2 Изучить противовоспалительную активность артрофоона на экспериментальных моделях аутоиммунного воспаления

3 Вскрыть механизмы регуляторного влияния артрофоона на аутоиммунный воспалительный процесс в эксперименте

4 Оценить клинико-лабораторную эффективность артрофоона при лечебном введении пациентам с ревматоидным артритом и остеоартрозом, в том числе влияние на уровень провоспалительных цитокинов

Научная иовизна

В работе на моделях m vivo впервые выявлены локальные и системные противовоспалительные эффекты, а также анальгетический эффект артрофоона. Показано, что в условиях коллаген-индуцированного артрита при курсовом внутрижелудочном введении артрофоон снижает продукцию ряда провоспалительных цитокинов, при этом его действие однонаправлено с действием преднизолона.

Артрофоон эффективен в качестве средства лечения суставной формы ревматоидного артрита и остеоартроза, причем положительная клиническая динамика на фоне лечения препаратом сопровождается уменьшением системной выработки провоспалительных цитокинов По фармакодинамическим показателям артрофоон имеет черты болезнь-модифицирующего противоревматического средства.

Практическая значимость работы

Материалы доклинических и клинических исследований артрофоона вошли в комплект документов, представленных в Министерство здравоохранения и социального развития Российской Федерации с целью получения разрешения на медицинское применение препарата. Артрофоон разрешен к медицинскому применению на территории РФ (регистрационное удостоверение № 000373/01 от 29 12 2006 г )

Положения, выносимые на защиту

1 Артрофоон оказывает анальгетическое действие как при курсовом введении на фоне иммунного воспаления, так и при профилактическом введении интактным животным перед болевым раздражением

2 Курсовое лечебное введение животным артрофоона в условиях коллаген-индуцированного артрита (экспериментальная модель аутоиммунного воспаления) оказывает системное и локальное противовоспалительное действие

3 В условиях коллаген-индуцированного артрита (КИА) при курсовом введении артрофоон нормализует нарушенный баланс ряда про- и противовоспалительных цитокинов, при этом его действие однонаправлено с действием преднизолона.

4 Применение артрофоона способствует уменьшению клинических и лабораторных проявлений суставной формы ревматоидного артрита и остеоартроза, в т ч сопровождается снижением системной выработки провоспалительных цитокинов при этих заболеваниях

Апробация работы

Материалы диссертации докладывались и обсуждались на Британском конгрессе ревматологов (Эдинбург, 2004), Европейском ревматологическом конгрессе (Берлин, 2004), 8-ом Международном конгрессе клинической ревматологии и терапии (Брисбейн, 2004), 7-ом Конгрессе Европейской ассоциации по клинической фармакологии и терапии (Познань, 2005), XII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарством (Москва, 2005), IV Международном конгрессе «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» (Хабаровск, 2005), X Всероссийском научном Форуме с международным участием имени академика В И Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (Санкт-Петербург, 2006), 15-ом Международном конгрессе фармакологов (Биджинг, 2006), VI Международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» (Москва, 2007), VI Национальном научно-медицинском конгрессе «Здоровье человека» (Ереван, 2007)

Публикации: По теме диссертации опубликовано 40 научных работ

Объем н структура работы, диссертация изложена на 161 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, выводов и списка титературы Диссертация иллюстрирована 45 рисунками и 26 таблицами Библиографический указатель включает 290 источников, из них 152 - отечественных и 138 - иностранных.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальные исследования

Специфическая фармакологическая активность артрофоона была изучена в серии экспериментов Изучение анальгетических свойств было выполнено на 30 беспородных мышах-самцах (массой 22-25 г) и 30 беспородных крысах-самцах (массой 180-200 г), противовоспалительное действие было изучено на 90 крысах-самках 'М^аг (массой 150-200 г) и на 200 мышах-самцах линии СВА/СаЬас (массой 18-20 г), полученных из лаборатории биомоделирования НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН (сертификат № 174-01 от 11 05 2001 НИЛ биомоделей РАМН) Животных содержали по 6 особей в стандартных

клетках (VELAZ, Испания) с мелкой древесной стружкой в условиях контролируемого освещения свет/темнота (12 ч/12 ч) и температуры (22-23°С) Животные имели неограниченный доступ к корму (ПК-120-3, ГОСТ-Р-50258-92) и питьевой воде Содержание животных осуществлялось в соответствии с правилами, принятыми Европейской конвенцией по защите позвоночных животных, используемых в экспериментальных и научных целях (Страсбург, 1986) Животных умерщвляли методом дислокации шейных позвонков под эфирным наркозом

Артрофоон - аффинно очищенные антитела к ФНО-а, смесь гомеопатических разведений С12, СЗО и С200 Лекарственная форма - таблетки В экспериментальных исследованиях использовался водный раствор гомеопатических разведений антител

Модель «уксусных корчей» у мышей

Химическое болевое раздражение у мышей (Koster R et al, 1959, Хабриев Р У, 2005) индуцировали 0,75% уксусной кислотой (ЗАО «Мосреактив», Россия), которую вводили внутрибрюшинно в дозе 10 мл/кг В течение 5 дней до тестирования мышам (10 животных в каждой группе) внутрижелудочно вводили дистиллированную воду (ДВ) (10 мл/кг), артрофоон (10 мл/кг) или водный раствор индометацина ("Pharmacia AD", Болгария, 5 мг/кг) в эквивалентном объеме, последнее введение - за 1 час до индукции корчей В течение 15 минут после инъекции уксусной кислоты подсчитывали количество корчей для каждого животного, а также фиксировали латентный период возникновения корчей Анальгетический эффект оценивали по снижению количества корчей и увеличению латентного времени их возникновения

Модель «горячей пластины» у крыс

Влияние артрофоона на болевую чувствительность воспаленных тканей исследовали с помощью модели «горячая пластина» (Eddy NB , Leimbach D, 1953, Сюбаев Р Д и соавт, 1986) В течение 5 дней до тестирования крысам (по 10 животных в каждой группе) внутрижелудочно вводили дистиллированную воду (2,5 мл/кг), артрофоон (2,5 мл/кг) или водный раствор индометацина ("Pharmacia AD", Болгария, 5 мг/кг) в эквивалентном объеме Через 1 час после последнего введения препаратов у крыс вызывали воспаление правой задней лапы путем субплантарного введения 0,1 мл полного адъюванта Фрейнда (ICN Biomedicals, США) Через 3 часа, в 1-е и 3-й сутки после введения адъювангта Фрейнда животное помещали на горячую пластину (с температурой 64°С) Анальгетический эффект оценивали по длительности спокойного пребывания животного на пластине

Оценка противовоспалительного действия артрофоона на модели КИА у крыс

КИА моделировали путем двукратного (с интервалом в 7 дней) подкожного введения крысам в хвост (на расстоянии 2-3 см от основания) крысиного коллагена II типа ("Chondrex", США) в дозе 100 мкг на крысу в 100 мкл неполного адъюванта Фрейнда ("Sigma", США) (Trentham DE et al, 1977, Campo G M et al, 2003)

На следующий день после второй инъекции коллагена крысам (по 45 животных в каждой группе) начинали внутрижелудочно вводить дистиллированную воду (2,5 мл/кг) или артрофоон (2,5 мл/кг) и продолжали вводить препараты в течение 90 дней Интенсивность воспалительной реакции у крыс оценивали три раза в неделю (понедельник, среда, пятница) с 1-го по 90-й день введения препаратов При этом фиксировали срок появления симптомов артрита, количество животных, у которых развился артрит, количество пораженных суставов у каждой крысы Тяжесть поражения суставов оценивали в баллах (1 конечность от

0 до 4, общая тяжесть для 4-х конечностей - от 0 до 16 баллов)

Оценка противовоспалительного действия арггрофоона на модели КИА у мышей Коллаген-индуцированный артрит воспроизводили путем однократной субплантарной инъекции мышам в правую заднюю лапу коллагена II типа ("Sigma", США) в дозе 100 мкг на мышь в 50 мкл полного адьюванта Фрейнда ("ICN", США) (Kato F et al, 1996) В течение 14 дней (начиная за 1 день до индукции артрита) животным (по 64 мыши в каждой группе) внутрижелудочно вводили дистиллированную воду (10 мл/кг), артрофоон (10 мл/кг) или водный раствор преднизолона («Никомед», 53 мг/кг) в эквивалентом объеме, в качестве фона использовали группу интактных животных (8 мышей)

Интенсивность воспалительной реакции у мышей оценивали через 3 ч, а также в 1-е, 3-и, 5-е, 9-е, 13-е, 17-е и 21-е сутки эксперимента по индексу воспалительной реакции (ИВР), который вычисляли индивидуально для каждого животного по формуле

ИВР (%) = (Ро-Рк)/Рк х 100, где Ро - масса опытной лапы (введение коллагена в полном адъюванте Фрейнда), Рк - масса контрольной лапы

В эти же сроки общепринятыми методами определялось общее количество лейкоцитов в периферической крови с подсчетом лейкоцитарной формулы, а также оценивали содержание про- и противовоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1|3, ИЛ-6, ИФН-у, ИЛ-4 и ИЛ-10) в сыворотке крови и в супернатантах перитонеальных макрофагов (ФНО-а, ИЛ-1(5, ИЛ-6) и лимфоцитов (ИФН-у, ИЛ-4 и ИЛ-10) экспериментальных животных, иммуноферментным методом с использованием наборов фирмы "Amersham Pharmacia Biotech" (Великобритания)

Клинические исследования

Эффективность артрофоона была изучена при ревматоидном артрите (РА) и остеартрозе (OA) - заболеваниях, в патогенезе которых играют активную роль провоспалительные цитокины Всего в исследование было включено 122 больных 80 пациентов с ревматоидным артритом, 42 пациента с остеоартрозом Дизайн исследования открытое сравнительное рандомизированное в параллельных группах

Артрофоон принимали по 2 таблетки 4 раза в день (таблетку необходимо было держать во рту до полного растворения), препарат сравнения - диклофенак в дозе 100 мг в сутки (по

1 таблетке 2 раза в день) Длительность терапии и наблюдения за больными составила - 6 месяцев

В исследование клинической эффективности артрофоона включались амбулаторные пациенты обоего пола, с диагнозом достоверного или классического РА (критерии Американской ревматологической ассоциации - АРД) (Arnett F С et al, 1988, Насонова В А, Бунчук НВ, 1997), с суставной формой заболевания, активностью 1-2 степени, рентгенологической стадией 1-3, отсутствием системных проявлений РА (в возрасте от 18 до 70 лет), либо с достоверным диагнозом OA по критериям Л И Беневоленской (Насонова В А, Бунчук Н В , 1997) (в возрасте от 18 до 80 лет), способные адекватно оценить свое состояние, отменившие прием противовоспалительных средств за 48 часов до приема артрофоона и локальную терапию глюкокортикостероидами в течение последнего месяца, подписавшие информированное согласие на проведение исследования

Оценка эффективности проводилась через 3 и 6 месяцев терапии Критерием эффективности проведенного лечения, как при РА, так и при OA было уменьшение воспалительной активности в пораженных суставах, достоверное снижение клинических и лабораторных признаков воспаления Определяли следующие показатели (Хабриев Р У и соавт, 2005) общая интенсивность суставных болей (баллы), длительность утренней скованности (мин), суставной счет (абсолютное число болезненных суставов), суставной индекс Ричи (баллы), индекс припухлости (баллы), число припухших суставов (абсолютное число припухших суставов), функциональный индекс Ли (баллы), СОЭ (мм/час), С-реактивный протеин (СРП) (мг/л, «Ольвекс диагностикум», Россия), цитокины (ИЛ-ip, ФНО-а) (пг/мл, ИФА, «Протеиновый контур», Россия)

Эффективность проводимого лечения при РА также определялась согласно критериям Американской коллегии ревматологов (ACR), включающим оценку количества болезненных и припухших суставов, выраженности болевого синдрома, лабораторных показателей воспаления (СОЭ, СРП), активности болезни врачом и пациентом и индекс нетрудоспособности, (ACR20 указывают на улучшение на 20% по крайней мере 5 из 7 перечисленных показателей, причем улучшение первых двух является обязательным) (Felson D Т et al, 1995, Насонов Е Л , 2005), а при OA с использованием индекса WOMAC (комплексный показатель, включающий оценку интенсивности боли, длительности утренней скованности и функционального состояния суставов) (Dougados М et al, 1996, Насонов Е Л, 2005)

Статистическая обработка результатов проводилась с использованием программ Statistica 6 1, Microsoft® Office Excel 2003 Достоверность различий количественных признаков оценивалась с использованием параметрических (t-критерий Стьюдента для зависимых и независимых переменных) и непараметрических (критерий Манна-Уитни, критерий Вилкоксона) методов Сравнение долей осуществляли с помощью теста х2

Для обработки экспериментальных данных рассчитывали площади под кривыми зависимости концентрация-время методом трапеций и динамику сумм площадей под этими кривыми для каждого из исследуемых цитокинов в сыворотке крови и в супернатантах перитонеальных макрофагов или лимфоцитах (Каркшценко Н Н и соавт, 2001J

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Результаты экспериментальных исследований

В серии экспериментальных исследований была изучена анальгетическая и противовоспалительная активность артрофоона в сравнении с нестероидными противовоспалительными препаратами (НПВП) и ГКС

Анальгетическую активность артрофоона изучали в моделях «уксусные корчи» и «горячая пластина», широко использующихся для оценки анальгетического потенциала лекарственных препаратов

В условиях модели «уксусные корчи» артрофоон достоверно (на 29%) снижал количество уксусных корчей по сравнению с контролем, не влияя на латентный период их появления При этом эффект артрофоона был сравним с эффектом препарата сравнения индометацина, который снижал количество уксусных корчей на 44,2% (р<0,05) по сравнению с контролем, в тоже время достоверно увеличивая латентное время появления первых корчей (табл 1)

Таблица 1

Анальгетическая активность артрофоона на модели «уксусные корчи» (Mim)

Группа животных Латентное время первых корчей, мин Количество корчей, абс

контроль (ДВ) 3,0 ±0,4 43,4 ±5,1

индометацин 5,2 ±0,6* 24,2 ±3,1*

артрофоон 3,8 ± 0,4 30,8 ±3,7*

* - различие с контролем достоверно (р<0,05)

В условиях модели «горячая пластина» артрофоон повышал порог болевой чувствительности животных на 1 сутки - в 3,7 раз, на 3 сутки - в 3 раза по сравнению с контролем (р<0,05) Эффект артрофоона был более стабилен, чем эффект индометацина, достоверно повышающего порог болевой чувствительности крыс только на 1 сутки (табл 2)

Таблица 2

Анальгетическая активность артрофоона на модели «горячая пластина» (М±т)

Группа животных Анальгезия (латентное время, сек)

3 часа 1 сутки 3 сутки

контропь (ДВ) 11,0 + 2,3 10,0 + 2,8 5,5 ± 0,9

индометацин 21,8 + 7,3 38,6±10,5* 23,2 ± 10,8

артрофоон 24,2 + 8,9 36,6 ± 10,5* 16,7 + 8,3*

* - различие с контролем достоверно (р<0,05)

Таким образом, в условиях стандартных методик артрофоон продемонстрировал анальгетическую активность, не уступающую по выраженности индометацину (НПВП)

Противовоспалительная активность артрофооона была изучена в условиях КИА, который является наиболее адекватной экспериментальной моделью ревматоидного артрита (постепенное развитие КИА и множественные аутоиммунные поражения суставов), позволяющей оценивать эффективность новых средств терапии ревматоидного артрита (Bendele A et al, 1999, Tellander А С et al, 2000)

Противовоспалительный эффект артрофоона в условиях КИА изучали на двух видах экспериментальных животных - у крыс и мышей У мышей также оценивали влияние препарата на продукцию про- и противовоспалительных цитокинов

Противовоспалительное действие артрофоона на модели КИА у крыс

В результате двукратной подкожной инъекции крысам \Vistar крысиного коллагена II типа вместе с неполным адьювантом Фрейнда у животных развивался коллаген-индуцированный артрит На момент начала введения артрофоона, либо дистиллированной воды признаки артрита наблюдались у 57,8% и 53,3% животных в опытной и контрольной группах соответственно Количество крыс, у которых развивался артрит, постепенно увеличивалось в обеих группах, однако тяжесть поражения суставов в группе с введением артрофоона была ниже, чем в контрольной группе, а на 22-е и 24-е сутки после начала введения исследуемого препарата эта разница была достоверна (рис 1) Пик развития КИА отмечался с 31-х по 41-е сутки после повторной инъекции коллагена, когда признаки артрита наблюдались практически у 100% животных в контрольной группе Тяжесть поражения суставов у этих крыс варьировалась от 2,2 до 2,8 баллов При этом в группе артрофоона в эти же сроки исследования от 6,7% до 20% крыс были без признаков воспаления суставов, а тяжесть поражения суставов в данной группе с 31-х по 43-е сутки после начала введения исследуемого препарата была достоверно ниже по сравнению с контрольной группой (рис 1) Количество пораженных суставов в опытной группе также было статистически значимо меньше, чем в контрольной группе на 13-е, 22-е и с 31-х по 43-и сутки после начала введения исследуемого препарата (рис 2)

Противовоспалительное действие артрофоона на модели КИА у мышей В результате субплантарной инъекции мышам полного адъюванта Фрейнда вместе с коллагеном II типа у животных развивался коллаген-индуцированный артрит Динамика индекса воспалительной реакции (ИВР) носила волнообразный характер Максимальный прирост отека опытной лапы в контрольной группе наблюдался на 1-е, 5-е, 9-е и 21-е сутки исследования (табл 3)

Введение артрофоона экспериментальным животным снижало ИВР, начиная с 1-х и по 13-е сутки опыта, однако статистически значимое уменьшение указанного показателя (на 27% по сравнению с контрольной группой) отмечалось лишь на 5-е сутки исследования Использование преднизолона при данной экспериментальной модели приводило к значительному снижению ИВР с 1-х по 9-е сутки наблюдения как по сравнению с контрольной группой, так и с группой мышей, получавших артрофоон В дальнейшем объем отека больной лапы в группе преднизолона возрастал и достоверно не отличался от соответствующих показателей контрольной группы и группы артрофоона (табл 3)

Таблица 3

Влияние артрофоона на индекс воспалительной реакции у мышей линии CBA/CaLac на _фоне развития коллаген-индуцированного артрита (Mim)_

Сроки Экспериментальные гр уппы

исследования Контроль (ДВ) | артрофоон преднизолон

(сут) Индекс воспалительной реакции (в %)

3 часа 28,26±2,78 21,67+1,94 16,06±1,53*#

1 35,05±1,27 30,61±1,78 17,75±1,72*#

3 25,50±2,42 24,95±2,07 10,72+1,06*#

5 43,58±3,99 31,88+2,15* 20,51±1,95*#

9 39,4б±2,67 34,97±2,34 25,12+2,23 *#

13 36,97±3,01 34,86±3,33 36,28+2,08

17 24,61 ±2,22 25,14±1,95 24,47+1,91

21 39,71±3,80 45,4213,88 49,98±4,28

* - различия между опытными и контрольной группами достоверны (р < 0,05), # - различия между опытными группами достоверны (р < 0,05)

Уже через 3 часа после экспериментального воздействия у мышей контрольной группы наблюдался выраженный лейкоцитоз, который сохранялся практически на протяжении всего периода наблюдения Лейкоцитоз сопровождался перераспределением морфологического состава клеток периферической крови увеличением абсолютного количества лимфоцитов, сегментоядерных нейтрофилов, сохранявшимся на протяжении всего эксперимента, и палочкоядерных нейтрофилов - на ранних сроках исследования

У животных, получавших преднизолон, относительно контрольной группы наблюдался значительный противовоспалительный эффект (уровень лейкоцитов в периферической крови через 3 часа после индукции артрита, а также на 1-е, 3-й, 13-е и 17-е сутки опыта бьп в пределах значений у интактных животных) Применение артрофоона также позволило уменьшить воспалительную реакцию (снижение лейкоцитоза), хотя противовоспалительный эффект препарата в исследуемые сроки был менее выражен, чем у преднизолона

Исследование изменения уровня про- и противовоспалительных цитокинов в условиях КИА и фармакологической коррекции артрофооном и преднизолоном показало индукция КИА приводила к значительному повышению уровня ФНО-а и ИЛ-1(5 («ключевых» цитокинов в патогенезе РА) в сыворотке крови и супернатантах перитонеальных макрофагов животных, в то же время эффект артрофоона в отношении данных показателей был наиболее выражен

Время достижения максимальной концентрации (Чтах) ФНО-а после индукции артрита в сыворотке крови мышей контрольной группы составило 24 часа, максимальная концентрация (Спих) была в 3 раза выше уровня ФНО-а у интактных животных (р<0,05) Уровень цитокина оставался высоким до 9-х суток эксперимента, а затем снижался Введение преднизолона и артрофоона приводило к одинаково выраженному достоверному снижению уровня ФНО-а в сыворотке крови мышей с КИА (табл 4)

Время достижения максимальной концентрации ФНО-а в супернатантах перитонеальных макрофагов мышей контрольной группы составило 5 суток, уровень ФНО-а в контроле был достоверно выше, чем у интактных животных во все сроки наблюдения (21 сутки) И преднизолон, и артрофоон достоверно снижали выработку цитокина перитонеальными макрофагами Отмена обоих препаратов приводила к повышению продукции ФНО-а до уровня контротьной группы (табл 5)

Таблица 4

Влияние артрофоона на уровень ФНО-а в сыворотке крови мышей линии _СВА/СаЬас в условиях модели КИА (М±т)_

Сроки исследования (сут) Уровень ФНО-а в сыворотке крови (пг/мл)

контроль (ДВ) артрофоон преднизолон

Концентрация (С) (пг/мл)

Фон 0 12,89±1,13

0,125 8,41± 1,92 12,88±0,94* 9,79±0,69

1 40,16±0,63# 8,82±0,58*# 7,86±0,53*#

3 36,50±0,71# 9,24±0,75*# 7,68±0,55*#

5 36,24±0,69# 11,065±0,84* 7,82±0,80*#

9 32,58±2,11# 11,98±1,02* 14,66±0,74*

13 8,11±0,65# 6,05±0,46*# 8,06±0,67#

17 8,69±0,60# 8,83±0,69# 8,98±0,62#

21 10,94±1,06 14,04±0,56* 13,81±1,03

Таблица 5

Влияние артрофоона на уровень ФНО-а в супернатантах перитонеальных макрофагов _мышейлинии CBA/CaLac в условиях модели КИА (М±т)_

Сроки исследования (сут) Количество ФНО-а в супернатантах (пг/мл)

контроль (ДВ) артрофоон | преднизолон

Концентрация (С) (пг/мл)

Фон 0 3,60±0,33

0,125 12,01±1,17# 10,38±0,92# 6,09±0,49*#$

1 13,32±0,42# 6,46±0,62*# 9,66±0,82*#$

3 16,88±0,72# 8,36±0,76*# 7,85±0,67*#

5 18,52±0,61# 7,72±0,69*# 9,66±0,70*#

9 8,87±0,53# 2,49±0,16*# 2,70±0,22*#

13 13,88±0,37# 15,09i0,76# 12,72±0,44#S

17 14,71±0,26# 12,72±0,23*# 15,30±1,35#

21 14,34±0,71# 13,35±0,76# 13,30±0,90#

* - различия между опытными и контрольной группами достоверны (р < 0,05),

# - отличие от фона достоверно (р < 0,05)

$ - различия между опытными группами достоверны (р < 0,05)

Динамика сумм площадей под кривыми зависимостей концентрации исследуемого цитокина в сыворотке крови или в супернатантах перитонеальных макрофагов и спленоцитов от времени иллюстрирует усредненные концентрации на каждом интервале времени, где эти площади рассчитывались, и характеризует кумулятивные изменения концентрации за определенный период времени (кумулятивный индекс)

Анализ динамики сумм площадей под кривыми «концентрация ФНО-а в сыворотке крови - время» и «концентрация ФНО-а в супернатантах перитонеальных макрофагов мышей - время» животных контрольной и обеих экспериментальных групп позволяет сделать вывод, что уменьшение концентрации ФНО-а в сыворотке крови мышей, а также снижение выработки ФНО-а перитонеальными макрофагами при к>рсовом введении преднизолона и артрофоона имеет близкие кумулятивные индексы (рис 3, 4)

Рисунок 3 Динамика сумм площадей под кривыми «концентрация ФНО-а в сыворотке крови -время», рассчитанных методом трапеций

Время, сут

ш контроль "■•"■артрофоон ~*^^""преднизолон

Рисунок 4 Динамика сумм площадей под кривыми «концентрация ФНО-а в супернатантах перитонеальных макрофагов - время», рассчитанных методом трапеций

Время достижения максимальной концентрации ИЛ-1Р в сыворотке крови мышей контрольной группы составило 5 суток при С^^, в 17,9 раз превосходящим уровень цитокина у интактных животных (р<0,05) Снижение концентрации ИЛ-10 происходило очень медленно и на 21 сутки исследования содержание этого цитокина в сыворотке крови контрольных животных в 7,7 раза (р<0,05) превышало уровень ИЛ-1р у интактных животных Преднизолон и артрофоон достоверно снижали концентрацию ИЛ-1Р в сыворотке крови экспериментальных животных по сравнению с контрольной группой, причем отмена преднизолона приводила к повышению уровня этого цитокина, в то время как в группе артрофоона снижение ИЛ-ф было стабильным и сохранялось после отмены препарата (табл 6)

Таблица 6

Влияние артрофоона на уровень ИЛ-1/} в сыворотке крови мышей линии СВА/СаЬас в условиях модели КИА (М±т)

Сроки Уровень ИЛ-13 в сыворотке крови (пг/мл)

исследования (сут) контроль (ДВ) артрофоон преднизолон

Концентрация (С) (пг/мл)

Фон 0 0,55±0,027

0,125 2,05±0,26# 3,23±0,14*# 3,07±0,41*#

1 7,22±0,67# 5,71±0,36# 4,15±0,27*#$

3 5,93±0,25# 1,33±0,10*# 4,51±0,36*#$

5 9,85±0,78# 6,68±0,44*# 6,73±0,22 *#

9 9,09±0,47# 3,00±0,21*# 11,32±0,67*#$

13 9,88±0,51# 3,58±0,32*# 4,01±0,31*#

17 7,57±0,67# 2,41±0,23*# 3,94±0,22*#$

21 4,25±0,40# 1,36±0,13*# 7,31±0,45*#$

* - различия между опытными и контрольной группами достоверны (р < 0,05)

# - отличие от фона достоверно (р < 0,05)

$ - различия меэвду опытными группами достоверны (р < 0,05)

Время достижения максимальной концентрации ИЛ-1Р в супернатантах перитонеальных макрофагов мышей контрольной группы составило 3 часа, СтщИГИр в 21 раз превышала уровень ИЛ-1р у интактных животных Уровень ИЛ-1Р в контрольной группе был достоверно выше, чем у интактных животных в течение всего времени эксперимента Введение преднизолона приводило к снижению (р<0,05) продукции ИЛ-1Р перитонеальными макрофагами по сравнению с контрольной группой уже через 3 часа, этот эффект сохранялся до 17-х суток наблюдения Отмена преднизолона приводила к повышению продукции ИЛ-1Р (на 21-е сутки наблюдения в группе преднизолона уровень ИЛ-1Р был в 15 раз выше, чем у интактных животных, и в 4 раза выше, чем в группе артрофоона) Введение артрофоона, подобно преднизолону, приводило к достоверному снижению продукции ИЛ-1Р перитонеальными макрофагами мышей по сравнению с контрольной группой практически во все сроки наблюдения Отмена препарата не сопровождалась значительным повышением продукции ИЛ-1Р (табл 7)

Таблица 7

Влияние артрофоона на уровень ИЛ-1/3 в супернатантах перитонеальных макрофагов _мышей линии СВА/СаЬас в условиях модели КИА (М±т)_

Сроки исследования (сут) Количество ИЛ-1 в супернатантах (пг/мл)

контроль (ДВ) | артрофоон | преднизолон

Концентрация (С) (пг/мл)

Фон 0 47,86±4,21

0,125 1006,86±4,28# 885,85±13,61*# 767,77±22,28*#$

1 797,59±29,34# 478,94±19,64*# 383,88±9,51*$#

3 588,33±34,75# 467,52±22,02*# 273,50±7,23*#$

5 439,23±18,37# 391,32±15,55# 163,12±12,41*#$

9 367,36±15,12# 268,04±7,83*# 154,96±5,84*#$

13 265Д7±12,32# 137,53±8,92*# 147,22±4,95*#

17 0,00# 292,50±14,84*# 165Д9±5,36*#$

21 347,02±7,36# 171,43±4,78*# 721,42±18,70*#$

* - различия между опытными и контрольной группами достоверны (р < 0,05)

# - отличие от фона достоверно (р < 0,05)

5 - различия между опытными группами достоверны (р < 0,05)

Анализ динамики сумм площадей под кривыми «концентрация ИЛ-1Р в сыворотке крови - время» и «концентрация ИЛ-1р в супернатантах перитонеальных макрофагов мышей - время» позволяет сделать вывод, что уменьшение концентрации ИЛ-1р происходит с более высоким кумулятивным индексом (в 1,6 раза выше) при курсовом введении артрофоона (рис 5), а снижение выработки ИЛ-1р перитонеальными макрофагами происходит с более высокой скоростью (в 1,4 раза выше) при курсовом введении преднизолона (рис 6)

Время, сут

♦ - контроль ' ■ артрофоон * преднизолсн

Рисунок 5 Динамика сумм площадей под кривыми «концентрация ИЛ-1р в сыворотке крови - время», рассчитанных методом трапеций

8000

0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18

Время, сут

■ ♦ - контроль И артрофоон А преднизолон

Рисунок 6 Динамика сумм площадей под кривыми «концентрация ИЛ-1р в супернатантах перитонеальных макрофагов - время», рассчитанных методом трапеций

Клинические исследования эффективности артрофоона

Исследование эффективности артрофоона при лечении ревматоидного артрита В исследовании приняли участие 80 больных с достоверным диагнозом ревматоидного

артрита (РА) согласно критериям АРА, из них 72 женщины и 8 мужчин в возрасте 23-62 лег,

длительность заболевания 6 месяцев-25 лет Пациенты были рандомизированны в 2 группы

50 получали артрофоон (8 таб/сут), 30 пациентов - диклофенак (100 мг/суг) Сравнение

исходных показателей в группах достоверной разницы не выявило (табл 8)

Таблица 8

Характеристика пациентов, включенных в исследование

Группа артрофоона Группа диклофенака

Ко тичество пациентов 50 30

Возраст, лет 51,2±1,5 (23-62) 54,4±1,0(41-62)

Пол (женский) 47 (94%) 25 (83,3%)

Длительность заболевания, лет 8,9±0,95 (0,5-25) 11,8±1,27 (2-23)

Степень активности 1-6%, 11-78% III-16% 1-10%, II-80%, III-10%

Количество пораженных суставов 22,7±1,3 (10-44) 23,8±1,3 (8-42)

Серологический вариант (серопозитивный) 25 (50%) 15 (50%)

Характер течения (медленнопрогрессирующее) 7 (14%) 3 (10%)

Рентгенологическая стадия I - 6%, II - 52%, Ш-ГУ - 42% I -10%, II - 46,7%, III - 43,3%

Функциональный класс I -16%, II - 70%, III -14% I -10%, II - 70%, III-20%

Предшествующая терапия НПВП 45 (90%) 25 (83,3%)

Предшествующая базисная терапия 7 (14%) 3(10%)

Предшествующая терапия ГКС 27 (54%) 8 (26,7%)

Динамика клинических и лабораторных показателей в группах у пациентов с РА (М±т)

Показатели Группа артрофооиа Группа диклофенака

Исходные Через 1 месяц Через 3 месяца Через 6 месяцев Исходные Через 1 месяц Через 3 месяца Через 6 месяцев

Общая интенсивность болей (баллы) 1,8±0,07 1,7±0,07 1,3±0,07 *** 1,1±0,05 *** 1,7±0,09 1,2±0,10 *** 1,2±0,10 *** 1,2±0,10 ***

Длительность утренней скованности (мин) 134,0±9,85 127,2±9,21 * 101,1±7,11 *** 86,5±5,95 *** 131,7±13,7б 102,7±8,90 102,5±8,78 ** 101,3±9,40 ***

Суставной индекс Ричи (баллы) 20,0±0,90 16,6±0,85 13,9±0,77 *** # 12,3±0,75 *** т 22,0±1,П 17,7±1,12*** 17,2±1,07 *** 19,3±1,03 ***

Суставной счет (абсолютное число) 17,4±1,08 17,0±1,04 14,9±0,93 *** # 13,6±0,86 *** ## 19,5±1,36 18,5±1,14 17,8±1,10 17,6±1,22 **

Индекс припухлости (баллы) 11,8±1,19 11,3±1,25 * 9,0±1,02 *** 7,1±0,76 *** 13,9±1,42 9,8±1,21 *** 9,6±1,11 **♦ 10,3±1,46 ***

Функциональный индекс Ли (баллы) 17,0£0,72 1б,0±0,74 15,0±0,68 *** # 14,2±0,63 *** т 18,4±0,99 17,8±0,97 17,4±0,97 * 17,2±0,91 *

Число припухших суставов (абсолютное число) 6,7±0,74 6,5±0,76 *** 5,2±0,53 *** 4,2±0,45 *** 8,5±0,99 6,1±0,70 *** 5,8±0,67 **♦ 5,8±0,72 ***

СОЭ (мм/час) 31,5±1,90 30,0±1,56 30,3±2,16 25,8± 1,42 29,6±2,35 31,8±1,99 31,8±1,97 29,8±2,2

СРП (мг/л) 12,9±0,64 11,5±0,64 * 9,8±0,51 *** 8,5±0,43 *** 11,2±0,83 10,8±0,73 10,4±0,64 9,4±0,69 *

ФНО-а (пкг/мл) 353,9±38,47 348,4±39,78 299,8±31,34* 299,7±30,42 ** 329,0±37,36 Не проводилось 326,4±52,22 336,4±49,94

ИЛ-10 (пкг/мл) 299,5±33,24 306,3±39,98 272,9±32,44 254,6±29,35 * 25б,3±45,16 Не проводилось 199,8±32,1 255,6±28,74

Достоверность по сравнению с исходными значениями * - 0,01 < р < 0 05 ** -0,001 <р<0,01 ***-р< 0,001

Достоверность по сравнению с группой дихлофенака

# -0,01 < р < 0,05

# # -0,001 <р<0,01 # ## - р< 0,001

Динамика клинических и лабораторных показателей в группах у пациентов с О А (М±т)

Показатели Группа артрофоона Группа диклофенака

Исходные Через 1 месяц Через 3 месяца Через 6 месяцев Исходные Через 1 месяц Через 3 месяца Через 6 месяцев

Общая интенсивность болей (баллы) 2,0±0,15 1,5±0,14** 1,3±0,16** 0,9±0,19*** # 2,3±0,17 1,5±1,14*** 1,4±0,18*** 1,3±0,21***

Длительность утренней скованности (мин) 23,0±3,63 11,3±1,65** 7,8±1,33*** 3,4±1,05*** ### 19,0±3,58 11,0±2,01*** 10,3±1,64** 12,5±1,60*

Суставной индекс Ричи (баллы) 6,8±0,91 4,4±0,61** 3,6±0,59** 2,6±0,41*** # 8,7±1,37 б,9±1,17*** 6,4±1,25*** 5,8±1,26***

Суставной счёт (абсолютное число) 5,1±0,64 4,0±0,46* 3,5±0,46** 3,0±0,51** 6,7±0,85 6,3±1,24 5,2±0,91* 4,6±0,72***

Индекс припухлости (баллы) 5,2±0,77 3,3±0,55** 3,3±0,45** 2,4±0,52** 7,6±1,67 5,0±1,06* 4,2±1,16* 4,1±1,08*

Функциональный индекс Ли (баллы) 9,3±0,63 6,9±0,64*** # 5,4±0,69*** ## 3,4±0,53*** ### 11,2±1,16 9,1±0,84* 8,4±0,81** 8,3±0,78**

Число припухших суставов (абсолютное число) 3,4±0,62 2,7±0,37 2,4±0,37 2,0±0,45* 3,7±0,61 3,2±0,64* 2,9±0,58** 2,9±0,60**

Индекс \УОМАС (баллы) 55,1±2,51 48,3±2,39*** 28,5±2,67*** # 19,0±2,35*** ### 63,4±3,61 45,0±3,82*** 36,7±3,03*** 33,9±2,81***

СОЭ, мм/час 22,4±2,4б 15,9±1,34** # 12,8±0,85** 11,3±0,84*** §# 23,6±1,90 19,7±1,30* 15,5±1,04*** 15,5±1,09***

ФНО-а, пкг/мл 189,4± 15,93 Не проводилось 177,2± 11,83 165,2±10,57* # 183,3±11,73 Не проводилось 194,5±12,23 199,1±13,33

ИЛ-1(3, пкг/мл 250,4±22,74 Не проводилось 207,7±17,56** # 210,б±18,62** 289,1±24,19 Не проводилось 260,3± 18,68 247,3±22,51

Достоверность по сравнению с исходными значениями *-0,01 <р<0,05 ** - 0,001 <р<0,01 *»*-р<0,001

Достоверность по сравнению с группой диклофенака #-0,01 < р < 0,05 ##-0,001 <р<0,01 # # И - р < 0,001

Через 6 месяцев лечения отмечено достоверное уменьшение по сравнению с исходными значениями клинических и лабораторных признаков воспаления, более выраженное в основной группе Эффект артрофоона развивался постепенно, достигая максимума к 6 месяцу лечения Положительная клинико-лабораторная динамика сочеталась с достоверным снижением уровня ФНО-а и ИЛ-1Р в сыворотке крови (снижение у 72,2% пациентов) В группе диклофенака отмечалось уменьшение проявлений РА уже через 1 месяц после начала лечения, дальнейшее повышение эффекта не было столь значительным, как в основной группе Тенденция изменений цитокинового профиля была обратной при исходно более низком уровне провоспалительных цитокинов наблюдался его рост через 6 месяцев от начала терапии (табл 9)

Сравнение эффективности препаратов с использованием критериев АСИ показало, что доля пациентов, соответствовавших критериям не менее чем 20-процентного улучшения (АСЯ 20), в группе артрофоона, составила 58% и превысила данный показатель в группе диклофенака (25,8%) более чем в 2,5 раза

Исследование эффективности артрофоона при лечении остеоартроза В исследовании приняло участие 42 пациента с диагнозом остеоартроз (ОА) (41 женщина и 1 мужчина), в возрасте 42-79 лет, с длительностью заболевания 6 месяцев-30 лет, в основном с медленно прогрессирующим течением болезни (быстро прогрессирующее течение выявлено менее чем у 1/3 больных) Больные были рандомизированны в 2 группы 22 пациента получали артрофоон (по 8 таб/сут), 20 пациентов-диклофенак (100 мг/сут) При сравнении исходных показателей в группах достоверной разницы не выявлено (табл 11)

Таблица 11

_Характеристика пациентов включенных в исследование_

Группа артрофоона Группа диклофенака

Количество пациентов 22 20

Возраст, лет 63,8±1,99 (45-76) 65,0±2,53 (41-62)

Пол (женский) 100% 95%

Длительность заболевания, лет 10,7±1,75 (0,5-25) 13,3±1,82 (2-28)

Полиостеоартроз 16 (72,8%) 19 (95%)

Реактивный синоват 15 (68,2%) 14 (70%)

Рентгенологическая стадия 1-18,2%, II-81,8%, III- 0% 1-0%, II- 80%, III-20%

Уже через 1 месяц лечения артрофооном отмечено достоверное уменьшение клинических проявлений ОА, улучшение функционального состояния суставов, повышение качества жизни пациентов Эффект препарата нарастал при увеличении продолжительности применения, достигая максимальных значений к 6-месяцу терапии Положительная клиническая динамика сочеталась достоверным снижением уровня ИЛ-1Р и ФНО-а В группе диклофенака также отмечалась достоверная положительная динамика исследуемых показателей по сравнению с исходными значениями уже через месяц после начала терапии, однако дальнейшее повышение эффекта не было столь значительным, как в основной группе, статистически значимой динамики уровня цитокинов не обнаружено (табл 10)

Заключение: ФНО-а является ключевым медиатором патогенеза при ревматоидном артрите, играет важную роль в развитии воспалительных изменений тканей сустава и деструкции хряща при остеоартрозе, а следовательно представляется и наиболее важной мишенью для противовоспалительной терапии (Feldman M et al, 1996, Tetlow L С et al, 2001, Goldblatt F , Isenberg D A , 2005)

Показана высокая эффективность биологической терапии (прежде всего, антагонистов ФНО-а) при ревматоидном артрите (Breedveld FC et al, 2004, Ostergaard M et al, 2005) Антагонист ФНО-а инфликсимаб обладает очень высокой аффинностью к ФНО-а, эффективно подавляя tn vitro активность секрецируемого и мембран-ассоциированного ФНО-а (Scallon В J et al, 1995, Chou EH S, Panyi GS, 2001, Насонов ЕЛ, 2000a), y больных РА наблюдается ингибиция синтеза ФНО-а синовиальными клетками (Urfgren А-К et al, 2000, Насонов Е Л, 2000а) Также проводятся исследования эффективности препаратов, влияющих на экспрессию и продукцию провоспалительных цитокинов, при остеоартрозе (Маколкин В И и соавт, 2007) В то же время, сложность введения биологических препаратов, резистентность части больных РА к антицитокиновой терапии, возможность развития серьезных побочных эффектов и значительная стоимость лечения, свидетельствует о том, что ряд вопросов остаются нерешенными и требуют поиска новых методов терапии (Pincus Т et al, 2006, Wmtrop К L, 2006, Васильева Е А и соавт, 2007)

В настоящее время разработаны и введены в широкую клиническую практику лекарственные препараты на основе СМД антител к эндогенным регуляторам В экспериментальных исследованиях продемонстрирована их фармакологическая активность, основанная на модификации функций соответствующего регулятора, а клиническая эффективность доказана в контролируемых клинических испытаниях (Эпштейн О И и соавт, 2005) Кроме того, накоплено значительное количество данных о том, что артрофоон обладает существенной противовоспалительной и анальгезирующей активностью при различных воспалительных заболеваниях суставов, таких как ревматоидный артрит (Эйд Риад, 2005, Пешехонова Л К и соавт, 2006, Мазуров В И, Рассохин ВВ, 2007), остеоартроз (Алиханов Б А, 2004, Шостак H А и соавт, 2005, Камкина Л H, Соколова Л А, 2006, Проценко ГА и соавт, 2006), периартрит плечевого сустава (Хитров НА, 2007), анкилозирующий спондилоартрит (Кудрявцева и соавт, 2005), псориатический артрит (Бадокин В В, Корсакова Ю Л, 2006), а также при неспецифическом язвенном колите (Осадчук M А, Осадчук A M , 2006, 2007)

В настоящей работе проводилось изучение механизмов противовоспалительного действия артрофоона в эксперименте и его клинико-лабораторной эффективности у больных ревматоидным артритом и остеоартрозом, в том числе влияния на цитокиновый статус

Было показано, что артрофоон обладает анальгетической активностью как у животных с экспериментальной патологией, так и у интактных животных Эффект препарата сопоставим с эффектом индометацина у животных с иммунным воспалением и является

более слабым у интактных животных На модели коллаген-индуцированного артрита у крыс курсовое введение препарата приводило к уменьшению количества животных, у которых развивался артрит, а также к снижению тяжести поражения суставов и уменьшению их количества при развитии коллаген-индуцированного артрита по сравнению с контрольной группой При изучении противовоспалительного действия артрофоона на модели коллаген-индуцированного артрита у мышей показано, что применение препарата оказывает противовоспалительное действие несколько менее выраженное, чем у преднизолона, способствует снижению индекса воспалительной реакции и лейкоцитоза в периферической крови экспериментальных животных Была выявлена способность артрофоона уменьшать системную продукцию провоспалительных цитокинов, при этом его действие было однонаправлено с действием преднизолона.

В проведенном клиническом исследовании при оценке зависимости между изменениями показателей активности заболевания с одной стороны и содержанием провоспалительных цитокинов в сыворотке крови пациентов продемонстрировано, что положительная клинико-лабораторная динамика как при ревматоидном артрите, так и при остеоартрозе коррелировала со снижением уровня изученных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1р), что свидетельствует об объективности полученных результатов

ВЫВОДЫ

1 Артрофоон обладает анальгетической активностью сопоставимой с активностью индометацина у животных с иммунным воспалением и более слабой у интактных животных

2 Курсовое введение артрофоона на фоне развития коллаген-индуцированного артрита у крыс приводит к уменьшению признаков суставного воспаления, что выражается в снижении тяжести поражения и числа пораженных суставов, а также количества животных, у которых развивался артрит

3 Артрофоон оказывает противовоспалительное действие при коллаген-индуцированном артрите у мышей, однонаправленное с действием преднизолона снижает индекс воспалительной реакции и лейкоцитоз в периферической крови, влияет на цитокиновый статус способствует снижению в сыворотке крови уровня провоспалительных цитокинов (ФНО-а, ИЛ-1Р, ИЛ-6), и в то же время повышает продукцию противоспалительного цитокина - ИЛ-10

4 Артрофоон эффективно воздействует на основные признаки с>ставног о воспаления при ревматоидном артрите и остеоартрозе, по клинико-лабораторной эффективности не уступая диклофенаку, причем отмечается прирост эффекта препарата при увеличении длительности приема.

5 Динамика клинических и лабораторных показателей при лечении артрофооном сочетается со снижением уровня провоспалительных цитокинов, что указывает на патогенетическое действие препарата

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Клиническая эффективность препарата артрофоон при лечении ревматоидного артрита // Тез докл 3 Междунар конф «Клинические исследования лекарственных средств» - М - 2003 - С 177-179 (в соавторстве с Козловской ЛВ, Мухиным НА, Рамеевым ВВ, Саркисовой И А, Эпштейном О И)

2 Клиническая эффективность «Артрофоона», содержащего антитела к ФНО-а, в лечении ревматоидного артрита // там же — С 331-333 (в соавторстве с Петровым В И , Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Сергеевой С А, Эпштейном О И)

3 Эффективность препарата артрофоон при лечении ревматоидного артрита // Тез докл II Национальной конф «Здоровье человека» - Ереван -2003 -С 106 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Сергеевой С А , Эпштейном О И)

4 Клиническая эффективность и безопасность применения препарата артрофоон при лечении ревматоидного артрита // Тез докл Медико-фармацевтического форума 2003 — М - 2003 — С 75-76 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В, Котельниковой М П,Сергеевой С А, Эпштейном О И)

5 Влияние артрофоона на системную продукцию ФНО-а при артрите // Тез докл XI Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - М - 2004 - С 148 (в соавторстве с Дугиной Ю Л, Марпошевым-Покладом А В, Сергеевой CA)

6 Оценка клинической эффективности артрофоона в лечении больных ревматоидным артритом // там же - С 292-293 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В, Сергеевой CA)

7 Результаты применения артрофоона при лечении ревматоидного артрита // Тез докл III Национальной конф «Здоровье человека» - Ереван -2004 - С 100 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В, Дугиной Ю Л, Мартюшевым-Покладом А В, Сергеевой CA)

8 Влияние артрофоона на цитокиновый статус больных ревматоидным артритом // Russian Journal of Immunolodgy - 2004 - Vol 9, Suppl 1 - С (в соавторстве с Дугиной ЮЛ, Марпошевым-Покладом А В, Черевковой Е В , Бабаевой А Р, Петровым В И, Эппггейном О И, Сергеевой CA)

9 Применение гомеопатического препарата артрофоон в лечении больных ревматоидным артритом // Мат VIII Международного съезда «Фигофарм 2004» - Миккели - 2004 - С 368 - 371 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Эпштейном О И, Дугиной Ю Л, Мартюшевым-Покладом А.В , Сергеевой CA)

10 Механизмы действия артрофоона при иммунном воспалении данные экспериментального и клинического исследований // Медицинская иммунология - 2004 - Т 6, № 3-5 - С 457-458 (Мат VIII Всероссийского научного Форума «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге») (в соавторстве с Мартюшевым-Покладом А В , Дугиной ЮЛ, Черевковой Е В , Шерстобоевым Е Ю, Бабаевой А Р, Петровым В И, Эпштейном О И, А В Сергеевой CA)

11 Влияние артрофоона на системную продукцию провоспалигельных цитокинов при артрите данные экспериментального и клинического исследований // Тез докл 4 Междунар конф «Клинические исследования лекарственных средств» - М - 2004 - С 72-73 (в соавторстве с Дугиной ЮЛ, Мартюшевым-Покладом А В , Сергеевой CA)

12 Опыт применения препарата артрофоон в лечении остеоартроза // там же - С 173-174 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Кострюковой И В, Сергеевой С А, Эпштейном ОИ)

13 Оценка эффективности препарата артрофоон, содержащего антитела к фактору некроза опухоли альфа, в лечении больных ревматоидным артритом // Бюллетень Волгоградского научного центра РАМН и Администрации Волгоградской области - 2004 - № 1 - С 23-25 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Черевковой Е В, А В Сергеевой С А, Эпштейном ОИ)

14 Efficacy of artrofoon ш rheumatoid arthritis results of a six-month open-label study // Rheumatology - 2004 - Vol 43, Suppl 2 - P u47 (Abstract Book of the British Socienty for Rheumatolodgy Annual Meeting, 2004 & British Health Professionals in Rheumatolodgy Spring

Meeting, Edinburgh, 2004) (with Petrov VI, Babaeva A R, Dugina J L, Maityushev-Poklad A V, Tcherevkova E V, Epstein ОI, Sergeeva S A)

15 An open-label, comparative trial of artrofoon and diclofenac in rheumatoid arthritis clinical efficacy and effect on serum cytokines//Annals of the Rneumatic Diseases -2004 - Vol 63, SuppI 1 -P 254 (Abstracts of Annual European Congress of Rheumatolodgy EULAR, Berlin, 2004) (with Petrov VI, Babaeva A R, Dugina J L, Martyushev-Poklad A V, Tcherevkova E V, Epstein ОI, Sergeeva S A )

16 Artrofoon, oral ultra low doses of antibodies to TNF-a (in rheumatoid arthritis) // Clinical and Experimental Pharmacology and Physiology -2004 - Vol 31, Suppl 1 -P A66 (Abstracts of the 8th World Conference on Clinical Pharmacology and Therapeutics, Brisbane, 2004) (with Dugina J L, Petrov VI, Babaeva A R, Martyushev-Poklad A V, Tcherevkova E V, Epstein О I, Sergeeva S A)

17 Опыт применения нового отечественного препарата ангицитокинового действия в комбинированном лечении ревматоидного артрита // Научно-практическая ревматология — М — 2005 - №3 - С 13 (в соавторстве с Бабаевой А Р, Черевковой Е Р, Петровым В И, Сергеевой СА)

18 Клиническая эффективность препарата артрофоон в лечении остеоартроза // Сборник научных работ «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» - Волгоград -

2005 -С 70-71 (в соавторстве с Кострюковой И В , Рязановым Д С)

19 Эффективность нового антицитокинового препарата артрофоон в течении остеоартроза // Тез докл XII Российского национального конгресса "Человек и лекарство" - М - 2005 - С 422 (в соавторстве с Кострюковой И В , Петровым В И, Бабаевой А Р, Мартюшевым-Покладом А В , Сергеевой С А)

20 Антицитокиновая терапия ревматоидного артрита и урогенного артрита препаратом артрофоон // там же - С 507 (в соавторстве с Петровым В И, Черевковой Е В , Бабаевой А Р, Дугиной Ю JI, Сергеевой СА)

21 Экспериментальное изучение противовоспалительных свойств препарата артрофоон на модели коллаген-индуцированного артрита // Тез докл 5 Междунар конф «Клинические исследования лекарственных средств» - М — 2005 - С 159 (в соавторстве с Хейфец И А , Шерстобоевыч Е Ю, Душной Ю Л , Мартюшевым-Покладом А В, Сергеевой С А, Эпштейном О И)

22 Антитела к фактору некроза опухоли-альфа в лечении остеоартроза // Сборник научных работ «Актуальные проблемы современной ревматологии» - Волгоград. - 2005 - С 77-79 (в соавторстве с Кострюковой И В , Рязановым Д С , Бабаевой А Р, Сергеевой С А)

23 Результаты клинического исследования эффективности и безопасности применения артрофоона при лечении ревматоидного артрита // Тез докл IV Междунар конгресса «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» - Хабаровск - 2005 - С 188-189 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Душной Ю Л, Мартюшевым-Покладом А В Черевковой Е В , Клименко К С , Эпштейном О И, Сергеевой С А)

24 Artrofoon, oral ultra-low doses of antibodies to TNF-alpha, is effective both in rheumatoid arthritis and osteoarthritis // Basic & Clinical, Pharmacology & Toxicology - 2005 - Vol 97, Suppl 1 - P 95 (Abstract book Proceedings of the 7th Congress of the European Association for Clinical Pharmacology and Therapeutics, Poznan, 2005) (with Dugina J L, Petrov VI, Babayeva A R., Martyushev-Poklad A V, Kostryukova IV, Tcherevkova E V, Epstem О I, Sergeeva S A)

25 Препараты артрофоон и анаферон в лечении ревматоидного артрита // Мат I Национального конгресса терапевтов «Новый курс консолидация усилий по охране здоровья нации» - М -

2006 - С 202-203 (в соавторстве с Солоденковой К С, Черевковой Е В , Бурд О С, Сергеевой СА)

26 Эффективность артрофоона в лечении остеохондроза позвоночника // там же - С 13-14 (в соавторстве с Бабаевой А Р, Рязановым Д С , Кострюковой И В, Бурд О С , Сергеевой С А)

27 Экспериментальное изучение противовоспалительных свойств препарата артрофоон на модели коллаген-индуцированного артрита // Тез докл XIII Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - М - 2006 - С 317 (в соавторстве с Хейфец И А , Шерстобоевым Е Ю, Дугиной Ю Л , Мартюшевым-Покладом А В , Бородавкиной М В , Сергеевой С А, Эпштейном ОИ)

28 Артрофоон в лечении артритов, ассоциированных с урогенитальной инфекцией // там же - С 323 (в соавторстве с Черевковой Е В , Бабаевой А Р, Петровым В И, Дугиной Ю JI, Сергеевой С А, Эппггейном О И)

29 Результаты клинического исследования эффективности и безопасности применения артрофоона при лечении остеоартроза // Тез докл V Междунар конгресса «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» - Хабаровск - 2006 - С 70-73 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Дугиной Ю Л, Бурд О С, Косгрюковой И В , Черевковой Е В, Эпштейном О И, Сергеевой CA)

30 Краткий обзор результатов клинических исследований применения препарата артрофоон при ревматоидном артрите//Мат V конференции иммунологов Урала. - Оренбург -2006 - С 100101 (в соавторстве с Бурд О С , Дугиной Ю Л, Мартюшевым-Покладом А В , Эпштейном О И , Сергеевой CA)

31 Оценка влияния артрофоона на клиническое течение заболевания и цитокиновый craiyc при ревматоидном артрите и остеоартрозе // Медицинская иммунология - 2006 - Т 8, № 2-3 - С 440-441 (в соавторстве с Мартюшевым-Покладом А В , Бурд О С, Дугиной Ю Л, Тарасовым С А, Бабаевой А Р, Черевковой Е В, Косгрюковой И В , Клименко К С , Эппггейном О И, Сергеевой С А)

32 Эффективность препарата артрофоон при лечении ревматоидного артрита и остеоартроза // Мат V Национального научно-медицинского конгресса «Здоровье человека» - Ереван - 2006 -С 153-154 (в соавторстве с Петровым В И, Бабаевой А Р, Косгрюковой И В, Черевковой Е В , Клименко К С , Бурд О С, Тарасовым С А, Сергеевой С А, Эппггейном О И)

33 Artrofoon, an oral anti-TNF alpha therapeutic, is effective in both rheumatoid arthritis and osteoarthritis results of clinical trials // Acta Pharmacologica Sinica. - 2006 - Suppl 1 - P 271 (Abstracts of 15Ü1 World Congress of Pharmacology, Beijing, 2006) (в соавторстве с Dugina JL, Martyushev-Poklad A V, Petrov VI, Babayeva A R, Kostryukova I V, Klimenko К S , Epstein О I, Sergeeva S A)

34 Клиническая эффективность артрофоона и его влияние на цитокиновый статус при ревматоидном артрите и остеоартрозе // Тез докл XTV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» -М -2007 - С 51-52 (в соавторстве с Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Косгрюковой И В , Дугиной Ю JI, Солоденковой К С , Сергеевой С А)

35 Экспериментально-клиническое исследование артрофоона в качестве стредства лечения ревматоидного артрита // Тез докл 6 Междунар конф «Клинические исследования лекарственных средств» - М - 2007 - С 122-123 (в соавторстве с Хейфец Й А., Дугиной Ю Л, Бурд О С, Солоденковой К С , Сергеевой С А, Эпштейном О И )

36 Изучение противовоспалительного действия артрофоона на модели коллаген-индуцированного артрита // Физиология и патология иммунной системы - 2007 - Т 11, № 3 - С 16-18 (в соавторстве с Белопольской М В , Хейфец И А, Дугиной Ю JI, Эпштейном О И , Сергеевой CA)

37 Изучение эффективности артрофоона при ревматоидном артрите и остеоартрозе // Мат II Национального конгресса терапевтов «Новый курс консолидация усилий по охране здоровья нации» - М - 2007 - С 15-16 (в соавторстве с Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Косгрюковой И В, Дугиной Ю J1, Солоденковой К С, Эпштейном О И, Сергеевой CA)

38 Анализ клинической эффективности артрофоона и салофалька в терапии легких и среднетяжелых форм неспецифического язвенного колита // Мат VI Национального научно-медицинского конгресса «Здоровье человека» - Ереван - 2007 - С 187 (в соавторстве с Осадчуком М А, Осадчуком А М, Бурд О С, Елфимовой У В , Сергеевой CA)

39 Экспериментально-клиническое исследование влияния препарата «Артрофоон» на продукцию провоспалигельных цигокинов И Бюллетень экспериментальной биологии и медицины - 2008 -Т 145, № 1 - С 64-67 (в соавторстве с Шерстобоевым Е Ю , Бабаевой А Р, Черевковой Е В , Дугиной Ю Л, Кислицыной О С, Эппггейном О И , Сергеевой С А)

40 Возможности применения препарата артрофоон в лечении урогенных артритов // Тез докл XV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» — М - 2008 - С 355 (в соавторстве с Черевковой Е В , Бабаевой А Р, Петровым В И, Сергеевой С А, Дугиной ЮЛ)

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АРА - Американская ревматологическая ассоциация

ГКС - глюкокортикостероиды

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующнй фактор

да - дистиллированная вода

ИВР - индекс воспалительной реакции

ил - шггерлейкин

ил-ip - интерлейкин 1 бета

ИФА - иммуноферментный анализ

ИФН-у — интерферон-гамма

КИА - коллаген-индуцированный артрит

НПВП - нестероидные противовоспалительные средства

OA - остеоартроз

РА - ревматоидный артрит

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СРП - С-реакгивный протеин

ФНО-а - фактор некроза опухоли альфа

ACR - American College of Rheumatology (Американская коллегия ревматологов)

WOMAC - Western Ontario and McMaster Universitis Osteoarthritis Index