Автореферат и диссертация по медицине (14.00.06) на тему:Механизмы нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки в клинике и эксперименте
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.06
Автореферат диссертации по медицине на тему Механизмы нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки в клинике и эксперименте
На правах рукописи
Овчинникова Ольга Андреевна
МЕХАНИЗМЫ НАРУШЕНИЯ СТРУКТУРЫ КОЛЛАГЕНА ПРИ ДЕСТАБИЛИЗАЦИИ АТЕРОСКЛЕРОТИЧЕСКОЙ БЛЯШКИ В КЛИНИКЕ И ЭКСПЕРИМЕНТЕ
14.00.06 - кардиология 14.00.16 - патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург 2008
003454939
Работа выполнена в ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова»
Научные руководители: доктор медицинских наук
член корр. РАМН профессор Евгений Владимирович Шляхто
доктор медицинских наук профессор Наталья Алексеевна Гавришева
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук профессор
Алексей Владимирович Панов
доктор медицинских наук профессор Андрей Глебович Васильев
Ведущее учреждение: Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова
Защита состоится « 15 » декабря 2008 года в 13 ч. 15 мин. на заседании диссертационного Совета Д. 208.090.01 при ГОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет имени академика И.П.Павлова» (197089, г. Санкт-Петербург, ул. Л. Толстого, 6/8) в зале заседаний Ученого совета
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета
Автореферат разослан «_» ноября 2008 года
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор
Т.В. Антонова
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ОКС - острый коронарный синдром ЛПНП - липопротеины низкой плотности ЛПВП - липопротеины высокой плотности IFN-y - интерферон-у (interferon--/)
TGF-P - трансформирующий фактор роста-p (transforming growth factor-P) IL-ip - интерлейкин-ip (interleukin-ip)
МНС - главный комплекс гистосовместимости (major-histocompatibihty-complex)
П4Г - пролил-4-гидроксилаза LOX - лизил-оксидаза (lysyl-oxidase)
MMP - матричные металлопротеиназы (matrix metalloproteinase)
TIMP - тканевой ингибитор металлопротеиназ (tissue inhibitor of metalloproteinases)
ПЦР - полимеразная цепная реакция
иАПФ - ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента
\
^ Л 1
АКТУАЛЬНОСТЬ
Сердечно-сосудистые заболевания, связанные с атеросклеротическим поражением сосудов, занимают ведущее место среди причин летальности во многих странах мира, в том числе в России. Существует угроза стремительного роста заболеваемости атеросклерозом уже в молодом возрасте в результате прогрессирующего увеличения метаболических факторов риска и недостаточной эффективности существующих методов диагностики, профилактики и лечения данной патологии (Харченко В.И. и соавт., 2005; Hansson G.K., 2005; Lopez A.D. et al., 2006).
Согласно современным представлениям атеросклероз представляет собой многофакторное заболевание, в основе которого лежат два взаимосвязанных процесса: нарушение метаболизма липидов и воспаление сосудистой стенки (Климов А.Н. и соавт., 1999; Hansson G.K. et al., 2006; Libby P. et al., 2008). Воспалительный процесс играет ведущую роль на всех этапах атерогенеза, начиная с формирования атеросклеротической бляшки и заканчивая нарушением структуры атеромы с развитием тромботических осложнений (Нагорнев В.А. и соавт., 2001; Hansson G.K. et al., 2007; Ridker P.M. et al., 2008).
Стабильность атеромы зависит от целостности ее фиброзной капсулы, основными компонентами которой являются миофибробласты и фибриллярный коллаген I и III типов (Шехонин Б.В. и соавт., 1984; Barnes M.J. et al., 1999; Libby P. et al., 2005; Hansson G.K., 2005). К признакам нестабильной атеромы относят увеличение липидного "ядра", истончение фиброзной капсулы, а также воспалительную инфильтрацию (Falk Е. et al., 1995; Hansson G.K., 2005; Aikawa M. et al., 2006). Одной их причин дестабилизации атеросклеротической бляшки является дисбаланс между синтезом коллагена и его протеолизом в атероме, в результате чего возникает нарушение механической прочности фиброзной капсулы (Libby P. et al., 2005; Hansson G.K. et al., 2006; Schwartz S.M. et al., 2007).
Показано, что нарушение синтеза коллагена в атеросклеротической бляшке может быть связано с действием провоспалительных факторов, среди которых ведущую роль играет медиатор Т-лимфоцитов - интерферон-у, обладающий способностью уменьшать пролиферацию миофибробластов и снижать экспрессию гена коллагена (Robertson A.K. et al., 2006; Tedgui A. et al., 2006). Про-теолитическая деградация коллагеновых волокон в фиброзной капсуле происходит под влиянием активных ферментов, в том числе матричных металлопро-теиназ и цистеиновых протеаз, источником которых являются макрофаги, тучные клетки и другие (Aikawa М. et al., 2004; Newby A.C., 2005; Kovanen P.T., 2007; Raffetto J.D. et al., 2008).
Результаты многочисленных исследований по изучению патогенетических звеньев дестабилизации атеросклеротической бляшки имеют неоднозначный характер и в полной мере не освещают механизмы нарушений структуры коллагена в атероме, особенно на этапе до развития сердечно-сосудистых осложнений.
Использование линий генетически-модифицированных мышей позволяет целенаправленно изучать влияние факторов воспаления на морфофункциональ-ные свойства и метаболизм коллагена на этапах, предшествующих разрыву фиброзной капсулы (Heeneman S. et al., 2008). Исследование клинического материала атеросклеротических бляшек открывает возможности для поиска взаимосвязи между патогенетическими факторами дестабилизации атером и особенностью течения атеросклероза, а также проводимой медикаментозной терапией (Niessner А. et al., 2008).
Понимание механизмов нарушения структуры коллагена в нестабильной бляшке на этапах, предшествующих развитию острых сосудистых катастроф, может служить основой для разработки диагностических и профилактических методов решения данной проблемы.
В настоящей работе для выполнения поставленных задач был использован комплексный подход с применением экспериментального и клинического материала. Представленная работа проводилась на кафедре факультетской терапии СПбГМУ им. И.П. Павлова, а также в Центре молекулярной медицины Каролинского Института (Стокгольм, Швеция) при научной консультации профессора вогап К. НамБОп в рамках совместной международной исследовательской программы.
Цель исследования: Исследовать патогенетические факторы нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки у пациентов и в эксперименте.
Задачи исследования:
1. Исследовать структуру и метаболизм волокон коллагена на экспериментальной модели нестабильной атеросклеротической бляшки.
2. Оценить особенности структуры коллагена в зависимости от активности воспаления в атеросклеротической бляшке у пациентов.
3. Определить влияние воспаления на процессы модификации коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки у пациентов.
4. Исследовать взаимосвязь между морфологическими характеристиками атеромы, биосинтезом коллагена в атеросклеротической бляшке и клиническими проявлениями атеросклероза.
Основные положения, выносимые на защиту. Преобладание незрелых волокон коллагена в нестабильной атероме у пациентов и в эксперименте связанно со снижением экспрессии внеклеточного коллаген-модифицирующего фермента лизил-оксидазы.
Нарушение структурной стабильности коллагена в условиях активного воспаления может быть фактором дестабилизации атеросклеротической бляшки.
Научная новизна. В комплексном исследовании с использованием клинического и экспериментального материала показано, что дестабилизация атеросклеротической бляшки связана с нарушением структуры коллагена в результате снижения экспрессии фермента лизил-оксидазы, участвующего в формировании зрелых коллагеновых волокон.
Установлена отрицательная тесная корреляционная связь между экспрессией гена лизил-оксидазы и активностью воспаления в атеросклеротических бляшках пациентов и генно-модифицированных мышей.
У пациентов с сахарным диабетом обнаружено значительное снижение экспрессии фермента лизил-оксидазы в атеромах.
Научно - практическая значимость. Полученные результаты о снижении экспрессии фермента лизил-оксидазы, как патогенетического звена нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеромы до разрыва фиброзной капсулы, позволяют целенаправленно вести исследования по изучению предикторов острых сосудистых катастроф.
Снижение экспрессии фермента лизил-оксидазы в атеромах у пациентов, особенно при сахарном диабете, можно рассматривать одним из рисков дестабилизации атеросклеротической бляшки и патогенетической основой для проведения более активной противовоспалительной терапии, направленной на обеспечение структурной стабильности коллагена.
Создание биобанка атеросклеротических бляшек человека расширяет возможности для проведения исследований по изучению фундаментальных и клинических аспектов атеросклероза с целью разработки новых методов диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых осложнений.
Апробация работы. Материалы диссертации были представлены в виде докладов и тезисов на конгрессе европейского общества по изучению атеросклероза (Прага, 2005), международном конгрессе «Артериальная гипертензия - от Короткова до наших дней», Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы кардиологии» (Москва, 2005), третьей европейской научной конференции «Сосудистая биология и медицина» (Гамбург, 2005), конгрессе международного общества по изучению атеросклероза (Рим, 2006), Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2006).
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК.
Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный и лечебный процесс кафедры факультетской терапии и в работу кафедры патофизиологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика И.П.Павлова, а также Центра молекулярной медицины Каролинского Института (Стокгольм, Швеция).
Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 119 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания характеристик обследованных пациентов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, и практических рекомендаций. Список литературы содержит 244 источника, в том числе 24 отечественных и 220 иностранных.
Диссертация иллюстрирована 8 таблицами и 21 рисунком.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Общая характеристика обследованных пациентов.
Для изучения структурных особенностей и биосинтеза коллагена был использован материал атеросклеротических бляшек из сонных артерий человека, полученных в ходе операции эндартерэктомии по стандартному протоколу на основании диагноза ишемическая болезнь мозга, стеноз одного из брахиоце-фальных сосудов более 80% (White C.J. et al., 2008). Контролем служили биопсийные образцы стенки артерий, не имеющие микро- или макро- признаков атеросклеротического поражения, которые были взяты у доноров во время операций трансплантации почки. Исследования проводили на материале двух биобанков атером человека - на базе Каролинского института (Стокгольм, Швеция), включающего 310 пациентов в возрасте от 40 до 88 лет (средний возраст 69 лет) (Paulsson-Berne G. et al., 2006), а также биобанка атеросклеротических бляшек от 117 пациентов в возрасте от 45 до 79 лет (средний возраст 62 года), созданного на клинической базе ФГУ «Федеральный центр сердца, крови и эндокринологии имени В.А. Алмазова Росмедтехнологий» и на отделении сосудистой хирургии городской многопрофильной больницы Санкт-Петербурга №2.
Большую часть обследованных пациентов составили мужчины (80%). Средний процент стеноза внутренних сонных артерий по данным ультразвукового сканирования был 75,7 ± 1,5%. У большинства обследованных пациентов наблюдалось генерализованное атеросклеротическое поражение сосудистого русла, при этом 83% пациентов страдали ишемической болезнью сердца различной степени тяжести и 37% пациентов имели атеросклеротическое поражение артерий нижних конечностей. У 38% пациентов в анамнезе были сведения о перенесенном остром коронарном синдроме (ОКС).
Все пациенты, включенные в обследование, имели один или несколько факторов риска атеросклероза. На момент операции эндартерэктомии курили 33% больных. Средний показатель холестерина крови составил 4,7 ± 0,6 ммольл. Артериальная гипертензия была диагностирована у 78% больных, сахарный диабет типа 2 был у 23% больных. Индекс массы тела составил в среднем 26 ± 0,3 кг/м2.
Во время операции эндартерэктомии удаленную атерому разрезали на две равные части поперечно ходу сосуда и использовали для анализа мРНК или гистологических исследований. При создании информационной базы данных учитывали основной и сопутствующие диагнозы, симптоматическую картину на момент операции, анамнез, факторы риска развития атеросклероза, данные лабораторных и инструментальных исследований, а также сведения о медикаментозной терапии.
Генетически-модифицированные мыши.
Экспериментальные исследования проводили на 2 группах генетически-мофицированных животных. Для контроля были использованы мыши с врожденной гиперлипидемией - Арое-/- нокаутные (далее, контрольные мыши). У мышей из опытной группы (далее, трансгенные мыши), созданной на основе контрольной, на Т-лимфоцитах отсутствовал нормально функционирующий рецептор к противовоспалительному и основному профиброгенному цитокину -трансформирующему ростовому фактору-ß (TGF-ß), что приводило к гиперактивации Т-лимфоцитов и проявлялось большей инфильтрацией атеросклероти-ческих бляшек макрофагами и Т-лимфоцитами, а также увеличенной экспрессией главного комплекса гистосовместимости II класса (МНС) на поверхности большинства клеток атером по сравнению с группой контрольных мышей (Robertson A.K. et al., 2003). Таким образом, у трансгенных мышей воспаление
и
протекало более активно и, как следствие, наблюдалось раннее развитие и нестабильное течение атеросклеротического процесса.
В работе использовали самок трансгенных мышей в возрасте 12 недель и самок контрольных мышей в возрасте 18 недель, по 9 животных в каждой группе. Подобная разница в возрасте была обусловлена тем, что сравнимые по величине атеросклеротические бляшки формировались у мышей контрольной группы позже, чем у трансгенных мышей (Robertson A.K. et al., 2003). Все эксперименты проводили в соответствии с принятыми этическими нормами по работе с лабораторными животными (Baumans V., 2005; Radzikowski С., 2006).
Методы исследования.
1. Исследование структуры коллагеновых волокон в атеросклеротических бляшках пациентов и экспериментальных мышей проводили гистологическим методом с красителем пикро-сириус красным (Picro-sirius Red) с последующей количественной оценкой содержания коллагена с помощью компьютерной морфометрии (Junqueira L.C. et al., 1979; Whittaker P. et al., 1994);
2. Иммуногистохимическое окрашивание на маркеры миофибробластов (а-актин гладкомышечных клеток), макрофагов (CD 163) и Т-лимфоцитов (CD3) осуществляли на поперечных срезах атером пациентов и экспериментальных мышей с последующей количественной оценкой положительного сигнала в ткани с помощью компьютерной морфометрии (Ав-тандинов Н.Г., 1990; Robertson A.K. et al., 2003);
з Определение экспрессии генов проводили с помощью метода количественной полимеразной цепной реакции (ПЦР) в реальном времени (Heid С.А. et al., 1996; Tricarico С. et al., 2002). В ходе экспериментальной части работы исследовали экспрессию мышиных генов интерферона-у (IFN-y), интерлейкина-lß (IL-lß), а-цепей проколлагена типа I и III, а-субъедини-
цы коллаген-специфичного фермента пролил-4-гидроксилазы, фермента лизил-оксидазы, матричных метаплопротеиназ (ММР) -2, -3, -8, -9, -12, -13 и -14, цистеиновых протеаз - катепсинов К, L и S, тканевого ингибитора металлопротеаз-1 (TIMP-1) и ингибитора цистеиновых протеаз - ци-статина С. При анализе клинического материала оценивали экспрессию генов пролил-4-гидроксилазы и лизил-оксидазы, а также генов маркеров макрофагов (CD68) и главного комплекса гистосовместимости II класса (МНС). И в экспериментальных, и в клинических исследованиях определяли экспрессию гена ТАТА-бокс связывающего белка (TATAbbp), который принимали за внутренний контроль качества РНК. Результаты выражали в относительных единицах (отн.ед);
4 Количественный анализ суммарной активности фермента пролил-4-гид-роксилазы в атеромах мышей проводили методом оценки прироста радиоактивного продукта (4-гидрокси-[|4С]-пролин). Результаты выражали в процентах от активности фермента у контрольных мышей (Kivirikko K.I. et al., 1982);
5 Количественное определение белка фермента лизил-оксидазы в атеромах мышей проводили методом иммуноблоттинга (Вестерн блот гибридизация, Western blot). Результаты выражали в условных единицах (усл.ед.) (Csiszar К., 2001);
6. Количественную оценку продуктов деградации коллагена в атеросклеро-тических бляшках мышей осуществляли методом иммуноферментного анализа (тест-система RatLaps, Дания) на автоматическом фотометре для микропланшетов (DRG Eliza-Mat 2000). Результаты выражали в нг/мл. (Gamero Р. et al., 2003).
Методы статистической обработки.
Статистическую обработку полученных результатов проводили с помощью компьютерных программ Microsoft Excel 2003, StatView (SAS Institute, США) и Statistica 6 (StatSoft, Inc.). При проведении сравнительного анализа подсчитывали среднее арифметическое и стандартную ошибку средней. В случае нормального распределения анализ достоверности различий между группами выполняли с помощью t-критерия Стьюдента. В противном случае, а также с учетом малой выборки (экспериментальная часть работы), для оценки достоверности применяли непараметрические критерии Манна-Уитни. Для поиска связей и оценки их достоверности применяли корреляционный анализ с использованием показателя линейной корреляции Пирсона (г). Результаты считались достоверными при значении доверительной вероятности (риск ошибки, р) менее 0.05 (StatSoft, 1999).
РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
Результаты исследований метаболизма коллагеновых волокон атероскле-ротической бляшки в эксперименте.
По современным представлениям, метаболизм коллагена на посттрансляционном этапе включает процессы внутри- и внеклеточных модификации. Этапы внутриклеточной модификации заключаются в гидроксилировании некоторых остатков проколлагеновых а-цепей под действием гидроксилаз, в том числе пролил-4-гидроксилазы, что является основой для образования внутри- и межмолекулярных связей и формирования трехспиральной конформации молекулы. После секреции проколлагена происходят отщепление Ы- и С- концевых пептидов и фермент-зависимая агрегация молекул в фибриллы с формированием поперечных связей зрелых волокон под действием фермента лизил-оксидазы (Замараева Т.В. и соавт., 1985; Буржанидзе Т.В., 1992, МуИуЬади, 2001 #303;
Gelse К. et al., 2003). В дальнейшем коллагеновые волокна утилизируются под действием большого спектра протеолитических ферментов (Steins M.B. et al., 1999; Aikawa M. et al., 2004; Newby A.C., 2005; Lütgens S.P. et al., 2007; Kovanen P.T., 2007).
Анализ состояния коллагеновых волокон атеросклеротических бляшек экспериментальных мышей выявил, что содержание зрелых коллагеновых волокон в атеромах трасгенных мышей составило 1,4 ± 0,4%, что было достоверно ниже, чем в атеромах контрольных мышей (3,6 ± 0,4%; р < 0,05). Количество незрелых волокон коллагена в бляшках трансгенных мышей было выше, чем у контрольных, однако указанное различие было статистически недостоверно (2,8 ± 0,4% и 1,8 ± 0,3%, соответственно; р = 0,09). Коэффициент соотношения толстых волокон к тонким (далее, "коэф. коллаген ") был значительно меньше в группе трансгенных мышей по сравнению с контрольной группой (0,6 и 2,6, соответственно). При этом общее количество коллагеновых волокон (4,4 ± 0,7% у трасгенных мышей и 5,4 ± 0,7% у контрольных мышей; р = 0,34) и количественное содержание миофибробластов, экспрессирующих а-актин, достоверно не различалось в бляшках двух групп мышей (9,2 ± 1,7% и 6,0 ± 1,1%, соответственно; р = 0,22).
Таким образом, полученные результаты позволяют предположить, что у мышей с нестабильной бляшкой несостоятельность коллагена могла быть обусловлена как уменьшением экспрессии генов цепей коллагена в отдельных клетках, изменением посттрансляционной модификации волокон, так и повышенной их утилизацией. В нашей работе мы последовательно изучили все эти этапы метаболизма коллагена.
У трансгенных мышей экспрессия генов IFN-y и IL-Iß была достоверно выше по сравнению с контрольной группой, что является подтверждением высокой степени активности воспаления в атеромах этих животных. При этом до-
стоверных изменений экспрессии генов а-цепей проколлагенов типов I и III в атеросклеротических бляшках опытной группы не отмечалось (табл. 1).
Анализ экспрессии генов ферментов пролил-4-гидроксилазы и лизил-ок-сидазы, принимающих участие в посттрансляционной стабилизации коллагено-вых волокон, выявил достоверное снижение уровня экспрессии этих генов в атеромах трансгенных мышей (табл. 1).
Таблица 1.
Показатели экспрессии генов в атеросклеротических бляшках у экспериментальных животных.
Название гена Экспрессия гена (отн.ед.)
Трансгенные мыши Контрольные мыши
9,7 ±0,9*** 0,2 ± 0,03
II,-10 1,6 ±0,2 *** 0,6 ±0,1
Проколлаген I типа, альфа цепь 4,4 ± 0,5 5,0 + 0,3
Проколлаген III типа, альфа цепь 5,9 ±0,5 6,9 ± 0,7
П4Г, а-1 субъединица 7,3 ± 0,5 * 11,3 ± 1,0
ЮХ 0,6 ± 0,2 * 1,0 ±0,2
ММР-13 8,4 ± 0,5 * 2,8 ±0,3
Катепсин Б 10,1 ±0,8* 3,5 ±0,2
ММР-9 1,5 ±0,3 * 1,0 ±0,3
Цистатин С 0,42 ± 0,06 * 0,82 ±0,14
*** . р <0,001; * - р < 0,05
В атеромах трансгенных мышей, несмотря на снижение экспрессии гена внутриклеточного фермента пролил-4-гидроксилазы, отмечалось повышение суммарной активности этого фермента на 33% по сравнению с контрольными животными. Полагают, что данные результаты могут быть связаны с компенсаторным увеличением экспрессии других изоформ фермента пролил-4-гидрокси-лазы для стабилизации ткани (МуНуЬаци I. с1 а1., 2004). Проверка данной гипотезы требует проведения дальнейших целенаправленных исследований.
При изучении изменений внеклеточного коллаген-модифицирующего фермента лизил-оксидазы нами было обнаружено достоверное уменьшение ко-
личества активной формы данного фермента в атеромах трансгенных мышей (607 ± 364 усл. единиц и 1875 ± 696 усл. ед., соответственно; р < 0,05).
При исследовании двух групп протеолитических ферментов - ММР и ци-стеиновых протеаз - в атеросклеротических бляшках мышей показано, что у трансгенных мышей экспрессия генов ММР-13 и катепсина Б были, соответственно, в 3 и 2,9 раза выше, чем у животных контрольной группы, а экспрессия генов ММР-9 и цистатина С была достоверно меньше (табл. 1). Нами не были обнаружены достоверные различия экспрессии генов ММР-2: ММР-3; ММР-8; ММР-12; ММР-14, Т1МР-1, а также катепсинов К и Ь между двумя группами мышей.
В то же время, сравнительная оценка содержания фрагментированного коллагена не выявила достоверных различий количества продуктов протеолитического распада коллагена в атеромах экспериментальных животных (6,07 ± 1,36 нг/мл в группе трансгенных мышей и 5,1 ± 0,42 нг/мл - в контрольной группе; р = 0,53).
Таким образом, анализ экспериментальных результатов показал, что у трансгенных мышей в атеросклеротических бляшках с выраженным воспалением, нарушен синтез и активность фермента, участвующего во внеклеточной модификации коллагена, лизил-оксидазы, что позволяет сделать предположение об участии этого фермента в механизме дестабилизации атеромы.
Структура коллагена у пациентов в атеросклеротических бляшках с различной степенью выраженности воспаления.
Для исследования взаимосвязи между факторами нарушения структуры коллагена при дестабилизации атером и клиническими показателями течения атеросклероза нами были использованы образцы атеросклеротических бляшек их сонных артерий.
'Коэф коллаген" : СШбЗ; г = - (Ы2,
р <0,05 • •
Б "Коэф.шиаген" СТО, г = -0 44,
р < 0.05 • • •
СБЗ
Рис. 1. Морфометрические показатели атеросклеротических бляшек: корреляция между структурой коллагена ("коэф. коллаген") и маркерами макрофагов-Сй16$ (А) и Т-лгшфоцитов-СБЗ (Б)
Исследования гистологических препаратов обнаружили, что в атеромах пациентов с выраженной лимфоцитарной и макрофагальной инфильтрацией преобладали тонкие, незрелые волокна коллагена. В то время, как в участках атером с менее выраженной воспалительной инфильтрацией или в местах, где воспалительные клетки практически отсутствовали, были обнаружены толстые, зрелые коллагеновые волокна. При проведении морфометрического анализа окрашенных срезов, была выявлена достоверная линейная отрицательная корреляция между коэффициентом соотношения толстых волокон коллагена к тонким, как показателем структурных свойств коллагена ("коэф. коллаген"), и содержанием макрофагов (СБ 163) или Т-лимфоцитов (СБЗ) (рис. 1).
Инфильтрация атером макрофагами была достоверно выше у курящих пациентов по сравнению с некурящими (3,4 ± 0,3 усл. единицы и 2,2 ± 0,4 усл. ед, соответственно; р = 0,03). Анализ взаимосвязи других клинических показателей (функциональный класс стенокардии напряжения, сведения о перенесенном ОКС, степень артериальной гипертензии, а также терапия ингибиторами АПФ
(иАПФ) или статинами) со структурой коллагена или показателями воспалительной инфильтрации атером пациентов не выявил достоверных связей.
Биосинтез коллагена у пациентов в атеросклеротических бляшках с различной степенью выраженности воспаления.
Экспрессия гена лизил-оксидазы, фермента ответственного за внеклеточную стабилизацию коллагена, была достоверно ниже в атеромах пациентов по сравнению с ее экспрессией в стенке атеросклеротически неизмененной артерии (190,7 отн.ед. и 466,9 отн.ед, соответственно; р<0,0001). Экспрессия гена пролил-4-гидроксилазы, внутриклеточного фермента посттрансляционной модификации коллагена, в тканях атеромы и стенке контрольной артерии не различалась (4,8 отн.ед. и 4,8 отн.ед, соответственно; р = 0,95).
При исследовании корреляционной связи между экспрессией обоих коллаген-модифицирующих ферментов и генов маркеров воспаления в образцах атеросклеротических бляшек, была обнаружена отрицательная достоверная линейная корреляционная связь между экспрессией гена лизил-оксидазы и генами маркеров макрофагов (СБ68) (г = - 0.63; р < 0,0001) и МНС II класса (г = -0,44; р = 0,002). В то время, как связи экспрессии гена пролил-4-гидроксилазы с теми же маркерами воспаления обнаружено не было (для макрофагов: г = - 0,23; р > 0,05, для МНС II класса: г = -0,05; р > 0,05).
Показано, что атеромы с низкой экспрессией гена фермента лизил-оксидазы (ниже 180 отн.ед.) характеризовались меньшим содержанием зрелых кол-лагеновых волокон (коэффициент соотношения зрелых толстых волокон к незрелым тонким: 0,97 ± 0,08). Тогда как в атеромах с высокой экспрессией гена лизил-оксидазы (более 180 отн.ед) преобладали зрелые волокна коллагена (коэффициент - 1,69 ± 0,27; р < 0,05). Группы пациентов с разным уровнем экспрессии гена лизил-оксидазы в атеросклеротических бляшках не отличались по возрасту и лабораторным показателям крови (табл.2).
Таблица 2.
Возраст и лабораторные показатели крови у пациентов с разным уровнем экспрессии гена лизил-оксидазы в атеромах.
Группа с высокой Группа с низкой
экспрессией LOX экспрессией LOX
Показатели (>180 отн.ед) (<180 отн.ед)
Возраст (лет) 70,8 ± 1,7 71,5 ±0,8
Индекс массы тела (кг/м2) 25 ±0,7 26 ±0,35
Уровень С- реактивного белка (мг/л) 4,46 ± 0,9 6,5 ± 1,4
Уровень холестерина (ммоль/л) 4,58 ±0,16 4,73 ±0,12
Уровень триглицеридов (ммоль/л) 1,9 ± 0,19 1,73 ±0,13
Уровень ЛПНП (ммоль/л) 2,6± 0,16 2,9 ±0,12
Уровень ЛПВП (ммоль/л) 1,19 ±0,07 1,2 ±0,04
* - р < 0,05
Актуальной клинической проблемой являются сосудистые осложнения атеросклероза у пациентов с сахарным диабетом (Toutouzas К. et al., 2005; Bouhanick В. et al., 2006). Результаты проведенных нами исследований показали, что в атеромах у пациентов с сахарным диабетом типа 2 экспрессия гена лизил-оксидазы была достоверно ниже, чем при отсутствии данной патологии (log LOX = 0,37 ± 0,11 и 0,65 ± 0,08, соответственно; р = 0,02) (рис. 2).
Ретроспективный анализ образцов атером пациентов, получавших иАПФ и без терапии этими препаратами, показал отсутствие достоверных различий экспрессии гена лизил-оксидазы между этими группами больных, в то же время, отмечалась тенденция к положительному влиянию данных препаратов на экспрессию гена этого фермента (log LOX: при приеме иАПФ 0,55 ± 0,11, без приема иАПФ 0,47 ± 0,07; р = 0,94).
7 1.5
1.6
5 1.4
8 0.8
£ 0.6
С 0.4
& 0.2
~ 0
1_1
контроль атерома
(_) (+) сахарный диабет тип 2
Рис. 2. Показатели экспрессии гена лизип-оксидазы (ЬОХ) в ткани атероскле-ротически неизмененной стенки артерии (контроль) и в атеромах пагщентов с сахарным диабетом тип 2 и без данной патологии. *** - р < 0,001 по сравнению с контролем; # - р < 0,05 по сравнению с пациентами без сахарного диабета тип 2.
Таким образом, проведенные клинические и экспериментальные исследования выявили однонаправленные изменения структуры и биосинтеза коллагена атеросклеротических бляшек. Полученные результаты свидетельствуют о значении нарушения стабильности волокон коллагена фиброзной капсулы вследствие снижения синтеза фермента лизил-оксидазы, как патогенетического звена при дестабилизации атеросклеротической бляшки.
ВЫВОДЫ
1. В нестабильной атеросклеротической бляшке у трансгенных мышей преобладают незрелые волокна коллагена в результате уменьшения синтеза внеклеточного коллаген-модифицирующего фермента лизил-оксидазы.
2. У пациентов в атероме со значительной воспалительной инфильтрацией отмечаются структурные нарушения коллагена за счет преобладания незрелых волокон. При курении активность воспаления в атеросклеротических бляшках выражена в большей степени.
3. В пораженных атеросклерозом сосудах пациентов наблюдается снижение экспрессии гена фермента лизил-оксидазы. В атеросклеротических бляшках с низкой экспрессией гена лизил-оксидазы отмечается уменьшение содержания зрелых волокон коллагена.
4. При дестабилизации атеросклеротических бляшек пациентов установлена отрицательная корреляционная связь между экспрессией гена лизил-оксидазы и клеточно-молекулярными факторами воспаления (макрофаги и главный комплекс гистосовместимости II класса).
5. В атеромах пациентов с сахарным диабетом экспрессия фермента лизил-оксидазы достоверно ниже, чем в атеромах больных без данной сопутствующей патологии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
У пациентов для снижения риска осложнений при дестабилизации атеро-склеротической бляшки, особенно при сахарном диабете, следует рекомендовать отказ от курения и проведение более активной противовоспалительной терапии для обеспечения структурной стабильности коллагена.
С целью разработки новых методов диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых осложнений атеросклероза можно использовать биобанк атеросклеротических бляшек человека для изучения патогенетических и клинических аспектов атерогенеза.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Шляхто Е.В. Влияние индуцированного воспаления на метаболизм коллагена в атеросклеротических бляшках у мышей / Гавришева Н.А, Овчин-
никова О.А., Ханссон Г.К. // Медицинская иммунология, - 2008, - том 11, - № 6, - С.527- 536.
2. Шляхто Е.В. Состояние межклеточного матрикса в атеросклеротической бляшке в условиях воспаления ! Гавришева Н.А, Овчинникова О.А., Ро-бертсон АК., Ханссон Г.К. // Бюллетень НИИ Кардиологии им В.А. Алма-зова, - 2005, - том 3, - №1, - с.29.
3. Шляхто Е.В. Нарушение организации коллагена как причина нестабильности атеросклеротической бляшки при выраженном воспалении / Гавришева Н.А, Овчинникова O.k., Робертсон АК., Ханссон Г.К. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы кардиологии», - 2005, - С.38.
4 Ovtchinnikova О.А. Reduced collagen maturation in atherosclerotic lesions with excessive T cell-mediated inflammation / Robertson AKL, Gavrisheva NA, Shlyakhto EV, Hansson GK. // Atherosclerosis, suppl., - 2005, - № 6, - P. 17.
5. Ovchinnikova O.A. Atherosclerotic lesions with exaggerated inflammation show impaired collagen maturation / Robertson A-K, Gavrisheva NA, Shlyakhto EV, Hansson G.K. // J. Vase. Research, suppl, - 2005, - P.II/80.
6 Ovchinnikova O.A. Inhibited collagen maturation, but only modest proteolytic activity in hyperinflamed atherosclerotic lesions / Robertson AKL, Chaoyong Z, Ericsson P, Gavrisheva NA, Shlyakhto EV, Hansson GK. // Atherosclerosis, suppl., - 2006, - Vol.7, - P. 242.
7 Ovchinnikova OA. Mechanisms behind plaque vulnerability / Robertson AKL, Chaoyong Z, Ericsson P, Gavrisheva NA, Shlyakhto EV, Hansson GK. // CIS Cardiology, - 2006, - Vol.4, -№1, - P. 108.
8 Шляхто Е.В. Нарушение посттрансляционной модификации коллагена как причина дестабилизации атеросклеротической бляшки при экспери-
ментальном воспалении / Гавришева Н.А, Овчинникова O.A., Робертсон АК, Ханссон ГК. // Тезисы Российского национального конгресса кардиологов, - 2006. - С.76.
Подписано в печать 12-11 -2008 Тираж 100экз Заказ N° 1326 Отпечатано в цифровой типографии АЯТ-ХРИ-БВ 199155, Санкт-Петербург, ул Уральская, д 17 тел 331-33-22
Оглавление диссертации Овчинникова, Ольга Андреевна :: 2008 :: Санкт-Петербург
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1. Воспаление, как патогенетическая основа развития и дестабилизации ^ ^ атеросклеротической бляшки.
1.1. Общая характеристика атеросклеротической бляшки
1.2. Клеточный состав атеросклеротической бляшки
1.3. Цитокины в атероме
2. Метаболизм коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки
2.1. Фиброзирование в атероме.2Q
2.1.1. Структура и биосинтез коллагена. Роль ферментов пролил-4-гидроксилазы и лизил-оксидазы в биосинтезе коллагена
2.1.2. Регуляция фиброзирования в атеросклеротической бляшке
2.2. Протеолиз в атеросклеротической бляшке .^q
2.2.1. Участие матриксных металлопротеиназ в дестабилизации атеросклеротической бляшки
2.2.2. Роль цистеиновых протеаз в атерогенезе
ГЛАВА II. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА III. РЕЗУЛЬТАТЫ
ГЛАВА IV. ОБСУЖДЕНИЕ
Введение диссертации по теме "Кардиология", Овчинникова, Ольга Андреевна, автореферат
Актуальность проблемы.
Сердечно-сосудистые заболевания, связанные с атеросклеротическим поражением сосудов, занимают ведущее место среди причин летальности во многих странах мира, в том числе в России. Существует угроза стремительного роста заболеваемости атеросклерозом уже в молодом возрасте в результате прогрессирующего увеличения метаболических факторов риска и недостаточной эффективности существующих методов диагностики, профилактики и лечения данной патологии (Харченко В.И. и соавт., 2005; Hansson G.K., 2005; Lopez A.D. et al., 2006).
Согласно современным представлениям, атеросклероз представляет собой многофакторное заболевание, в основе которого лежат два взаимосвязанных процесса: нарушение метаболизма липидов и воспаление сосудистой стенки (Климов А.Н. и соавт., 1999; Hansson G.K. et al., 2006; Libby P. et al., 2008). Воспалительный процесс играет ведущую роль на всех этапах атерогенеза, начиная с формирования атеросклеротической бляшки и заканчивая нарушением структуры атеромы с развитием тромботических осложнений (Нагорнев В.А. и соавт., 2001; Hansson G.K. et al., 2007; Ridker P.M. et al., 2008).
Стабильность атеромы зависит от целостности ее фиброзной капсулы, основными компонентами которой являются миофибробласты и фибриллярный коллаген I и III типов (Шехонин Б.В. и соавт., 1984; Barnes M.J. et al., 1999; Libby P. et al., 2005; Hansson G.K., 2005). К признакам нестабильной атеромы относят увеличение липидного "ядра", истончение фиброзной капсулы, а также воспалительную инфильтрацию (Falk Е. et al., 1995; Hansson G.K., 2005; Aikawa M. et al., 2006). Одной их причин дестабилизации атеросклеротической бляшки является дисбаланс между синтезом коллагена и его протеолизом в атероме, в результате чего возникает нарушение механической прочности фиброзной капсулы (Libby P. et al., 2005; Hansson G.K. et al., 2006; Schwartz S.M. et al., 2007).
Показано, что нарушение синтеза коллагена в атеросклеротической бляшке может быть связано с действием провоспалительных факторов, среди которых ведущую роль играет медиатор Т-лимфоцитов - интерферон-у, обладающий способностью уменьшать пролиферацию миофибробластов и снижать экспрессию гена коллагена (Robertson А.К. et al., 2006; Tedgui A. et al., 2006). Протеолитическая деградация коллагеновых волокон в фиброзной капсуле происходит под влиянием активных ферментов, в том числе матричных металлопротеиназ и цистеиновых протеаз, источником которых являются макрофаги, тучные клетки и другие (Aikawa М. et al., 2004; Newby А.С., 2005; Kovanen P.T., 2007; Raffetto J.D. et al., 2008).
Результаты многочисленных исследований по изучению патогенетических звеньев дестабилизации атеросклеротической бляшки имеют неоднозначный характер и в полной мере не освещают механизмы нарушений структуры коллагена в атероме, особенно на этапе до развития сердечно-сосудистых осложнений.
Использование линий генетически-модифицированных мышей позволяет целенаправленно изучать влияние факторов воспаления на морфофункциональные свойства и метаболизм коллагена на этапах, предшествующих разрыву фиброзной капсулы (Heeneman S. et al., 2008). Исследование клинического материала атеросклеротических бляшек открывает возможности для поиска взаимосвязи между патогенетическими факторами дестабилизации атером и особенностью течения атеросклероза, а также проводимой медикаментозной терапией (Niessner A. et al, 2008).
Понимание механизмов нарушения структуры коллагена в нестабильной бляшке на этапах, предшествующих развитию острых сосудистых катастроф, может служить основой для разработки диагностических и профилактических методов решения данной проблемы.
В настоящей работе для выполнения поставленных задач был использован комплексный подход с применением экспериментального и клинического материала. Представленная работа проводилась на кафедре факультетской терапии СПбГМУ им. И.П. Павлова, а также в Центре молекулярной медицины Каролинского Института (Стокгольм, Швеция) при научной консультации профессора Goran К. Hansson в рамках совместной международной исследовательской программы.
Цель исследования.
Исследовать патогенетические факторы нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки у пациентов и в эксперименте.
Задачи исследования.
1. Исследовать структуру и метаболизм волокон коллагена на экспериментальной модели нестабильной атеросклеротической бляшки.
2. Оценить особенности структуры коллагена в зависимости от активности воспаления в атеросклеротической бляшке у пациентов.
3. Определить влияние воспаления на процессы модификации коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки у пациентов.
4. Исследовать взаимосвязь между морфологическими характеристиками атеромы, биосинтезом коллагена в атеросклеротической бляшке и клиническими проявлениями атеросклероза.
Основные положения, выносимые на защиту.
Преобладание незрелых волокон коллагена в нестабильной атероме у пациентов и в эксперименте связанно со снижением экспрессии внеклеточного коллаген-модифицирующего фермента лизил-оксидазы.
Нарушение структурной стабильности коллагена в условиях активного воспаления может быть фактором дестабилизации атеросклеротической бляшки.
Научная новизна.
В комплексном исследовании с использованием клинического и экспериментального материала показано, что дестабилизация атеросклеротической бляшки связана с нарушением структуры коллагена в результате снижения экспрессии фермента лизил-оксидазы, участвующего в формировании зрелых коллагеновых волокон.
Установлена отрицательная тесная корреляционная связь между экспрессией гена лизил-оксидазы и активностью воспаления в атеросклеротических бляшках пациентов и генно-модифицированных мышей.
У пациентов с сахарным диабетом обнаружено значительное снижение экспрессии фермента лизил-оксидазы в атеромах.
Научно - практическая значимость.
Полученные результаты о снижении экспрессии фермента лизил-оксидазы, как патогенетического звена нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеромы до разрыва фиброзной капсулы, позволяют целенаправленно вести исследования по изучению предикторов острых сосудистых катастроф.
Снижение экспрессии фермента лизил-оксидазы в атеромах у пациентов, особенно при сахарном диабете, можно рассматривать одним из рисков дестабилизации атеросклеротической бляшки и патогенетической основой для проведения более активной противовоспалительной терапии, направленной на обеспечение структурной стабильности коллагена.
Создание биобанка атеросклеротических бляшек человека расширяет возможности для проведения исследований по изучению фундаментальных и клинических аспектов атеросклероза с целью разработки новых методов диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых осложнений.
Апробация работы.
Материалы диссертации были представлены в виде докладов и тезисов на конгрессе европейского общества по изучению атеросклероза (Прага, 2005), международном конгрессе «Артериальная гипертензия — от Короткова до наших дней», Всероссийской научно-практической конференции молодых ученых «Актуальные проблемы кардиологии» (Москва, 2005), третьей европейской научной конференции «Сосудистая биология и медицина» (Гамбург, 2005), конгрессе международного общества по изучению атеросклероза (Рим, 2006), Российском национальном конгрессе кардиологов (Москва, 2006).
По теме диссертации опубликовано 8 научных работ, в том числе 1 статья в. журнале, рекомендованном ВАК.
Внедрение результатов исследования.
Результаты исследования внедрены в учебный и лечебный процесс кафедры факультетской терапии и в работу кафедры патофизиологии Санкт-Петербургского государственного медицинского университета имени академика
И.П.Павлова, а также Центра молекулярной медицины Каролинского Института (Стокгольм, Швеция).
Структура и объем диссертации.
Диссертация изложена на 109 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания характеристик обследованных пациентов и методов исследования, главы результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, и практических рекомендаций. Список литературы содержит 244 источника, в том числе 24 отечественных и 220 иностранных.
Заключение диссертационного исследования на тему "Механизмы нарушения структуры коллагена при дестабилизации атеросклеротической бляшки в клинике и эксперименте"
выводы
1. В нестабильной атеросклеротической бляшке у трансгенных мышей преобладают незрелые волокна коллагена в результате уменьшения синтеза внеклеточного коллаген-модифицирующего фермента лизил-оксидазы.
2. У пациентов в атероме со значительной воспалительной инфильтрацией отмечаются структурные нарушения коллагена за счет преобладания незрелых волокон. При курении активность воспаления в атеросклеротических бляшках выражена в большей степени.
3. В пораженных атеросклерозом сосудах пациентов наблюдается снижение экспрессии гена фермента лизил-оксидазы. В атеросклеротических бляшках с низкой экспрессией гена лизил-оксидазы отмечается уменьшение содержания зрелых волокон коллагена.
4. При дестабилизации атеросклеротических бляшек пациентов установлена отрицательная корреляционная связь между экспрессией гена лизил-оксидазы и клеточно-молекулярными факторами воспаления (макрофаги и главный комплекс гистосовместимости II класса).
5. В атеромах пациентов с сахарным диабетом экспрессия фермента лизил-оксидазы достоверно ниже, чем в атеромах больных без данной сопутствующей патологии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
У пациентов для снижения риска осложнений при дестабилизации атеросклеротической бляшки, особенно при сахарном диабете, следует рекомендовать отказ от курения и проведение более активной противовоспалительной терапии для обеспечения структурной стабильности коллагена.
С целью разработки новых методов диагностики, лечения и профилактики сердечно-сосудистых осложнений атеросклероза можно использовать биобанк атеросклеротических бляшек человека для изучения патогенетических и клинических аспектов атерогенеза.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Овчинникова, Ольга Андреевна
1. Автандинов Н. Г. Медицинская морфометрия. Руководство. М: Медицина // 1990. -С.115-127.
2. Белова Л. А., Оглоблина О. Г., Белов А. А. Процессы модификации липопротеинов, физиологическая и патогенетическая роль модифицированных липопротеинов. Вопр. мед. химии // 2000. Т.46. -№.1.- С.8-21.
3. Буржанидзе Т. В. Термодинамическое обоснование водно-мостиковой структуры коллагена. Биофизика // 1992. Т.37. -№.2. - С.231-237.
4. Вялов С. Л., Пшениснов К. П., Куиндоз П., Монтандон Д., Питте Б. Современные представления о регуляции процесса заживления ран Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии // 1999.- Т.1. С.49-56.
5. Денисенко А. Д. Модифицированные липопротеины и атеросклероз. / Денисенко А. Д. С.-Петербург: Наука. 2000.
6. Замараева Т. В., Лебедев, Д. А. Поперечные ковал ентные связи, стабилизирующие коллагеновые структуры, в норме и патологии. Вопросы медицинской химии // 1985. Т.31. -№.1. - С. 10-23.
7. Климов А. Н., Нагорнев В. А. Взгляд на расширение проблемы атеросклероза. Вестник РАМН // 1999. Т.9. - С.33-37.
8. Климов А. Н., Никульчева Н. Г. Липиды, липоиды и атеросклероз. / Климов А. Н. С.-Петербург. 1995.
9. Кремнева Л. В. Лейкоцитоз как показатель риска ишемической болезни сердца и ее обострений Терапепвт. арх. // 2004. Т.76. -№.11. - С.30-35.
10. Линецкая Н. Э. Провоспалительные цитоксины как возможные маркеры степени выраженности коронарного атеросклероза Мед. иммунология. // 1999. Т.1. -№.3-4. - С.71-72.
11. Лобзин Ю. В., Рудакова А. В. Роль инфекционно-воспалительного фактора в развитии атеросклероза. Мед. акад. журнал // 2003. Т.З. -№.2. - С.80-89.
12. Мазуров В. И., Столов С. В., Линецкая Н. Э. Измерение продукции некоторых провоспалительных цитоксинов у больных различными вариантами ИБС. Мед. иммунология // 1999. Т.1. -№.5. - С.53-59.
13. Нагорнев В. А., Яковлева О. А., Рабинович В. С. Атерогенез и воспаление Мед. акад. журн. // 2001. Т.1. - С. 139-150.
14. Насонов Е. Л. Иммунологические маркеры атеросклероза: Обзор Терапевт, арх. // 2002. Т.74. -№.5. - С.80-85.
15. Никульчева Н. Г., Климов А. Н. Обмен липидов и липопротеинов и его нарушения. / Никульчева Н. Г. СПб. 1999. — 512 с.
16. Покровская Е. В. Атеросклероз и иммунная система (по материалам семинара Европейского общества атеросклероза) Кардиология. // 2001. -Т.41. -№.10. С.69-73.
17. Протоколы молекулярной биологии // Электронный ресурс. 2008. -Режим доступа: http://www.protocol-online.org/prot/Histology/. - Дата доступа: 10.09.2008.
18. Севергина Л. О. Морфогенез нестабильной атеросклеротической бляшки и ее роль в развитии острого коронарного синдрома. Архив патологии // 2005. Т.З. -С.51.
19. Тотолян А. А., Фрейдлин И. С. Клетки иммунной системы I-II (Нейтрофил, Моноцит/Макрофаг). / Тотолян А. А. С.-Петербург: Наука. 1999.
20. Фёдоров Д. Н. Межклеточные и клеточно-матриксные взаимодействия при репарации длительно незаживающих ран. Автореф. диссертации канд. мед. Наук / Фёдоров Д. Н. Санкт-Петербург. 2002 - 22 с.
21. Фрейдлин И. С., Назаров П. Г. Регуляторные функции провоспалительных цитокинов и острофазовых белков Вестн. Рос. АМН // 1995.- №.5.-С.28-32.
22. Шехонин Б. В., Кондаленко В. Ф., Домогатский С. П., Рудин А. В., Рукосуев В. С. Распределение коллагена I, III, IV, V типов в стенке артерий человека Кардиология // 1984. Т.24. -№.4. - С.95-99.
23. Шлычкова Т. П., Жданов В. С., Карпов Ю. А., Чумаченко П. В. Основные типы нестабильных атеросклеротических бляшек и их распространенность в коронарных артериях при остром инфаркте миокарда. Архив патологии // 2005. Т.З. - С.24-28.
24. Ярилин А. А. Система цитокинов и принципы ее функционирования в норме и при патологии Иммунология // 1997. Т.5. - С.7-13.
25. Aikawa М., Libby P. The vulnerable atherosclerotic plaque: pathogenesis and therapeutic approach. Cardiovasc Pathol // 2004. Vol.13. -№.3. - P.125-138.
26. Amento E. P., Ehsani N., Palmer H., Libby P. Cytokines and growth factors positively and negatively regulate interstitial collagen gene expression in human vascular smooth muscle cells. Arterioscler Thromb // 1991. Vol.11. -№.5. -P.1223-1230.
27. Apostolakis S., Vogiatzi K., Krambovitis E., Spandidos D. A. IL-1 cytokines in cardiovascular disease: diagnostic, prognostic and therapeutic implications. Cardiovasc Hematol Agents Med Chem // 2008. Vol.6. -№.2. - P.150-158.
28. Armstrong D. G., Jude E. B. The role of matrix metalloproteinases in wound healing. J Am Podiatr Med Assoc // 2002. Vol.92. -№.1. - P.12-18.
29. Asslaber M., Zatloukal K. Biobanks: transnational, European and global networks. Brief Funct Genomic Proteomic // 2007. Vol.6. -№.3. - P.193-201.
30. Atamas S. P. Complex cytokine regulation of tissue fibrosis. Life Sci // 2002. -Vol.72.-№.6.-P.631-643.
31. Barnes M. J., Farndale R. W. Collagens and atherosclerosis. Exp Gerontol // 1999. Vol.34. -№.4. - P.513-525.
32. Baumans V. Science-based assessment of animal welfare: laboratory animals. Rev Sci Tech // 2005. Vol.24. -№.2. - P.503-513.
33. Bergwerff M., Verberne M. E., DeRuiter M. C., Poelmann R. E., Gittenberger-de Groot A. C. Neural crest cell contribution to the developing circulatory system: implications for vascular morphology? Circ Res // 1998. Vol.82. -№.2. -P.221-231.
34. Beveridge W. I. Acquired Immunity: Viral Infections. Mod Trends Immunol // 1963.-Vol.102.-P.130-144.
35. Blobe G. C., Schiemann W. P., Lodish H. F. Role of transforming growth factor beta in human disease. N Engl J Med // 2000. Vol.342. -№.18. - P. 1350-1358.
36. Bobryshev Y. V., Lord R. S. Mapping of vascular dendritic cells in atherosclerotic arteries suggests their involvement in local immune-inflammatory reactions. Cardiovasc Res // 1998. Vol.37. -№.3. - P.799-810.
37. Breslow J. L. Mouse models of atherosclerosis. Science // 1996. Vol.272. -№.5262. - P.685-688.
38. Brodsky В., Persikov A. V. Molecular structure of the collagen triple helix. Adv Protein Chem // 2005. Vol.70. - P.301-339.
39. Brodsky В., Shah N. K. Protein motifs. 8. The triple-helix motif in proteins. Faseb J // 1995. Vol.9. -№.15. - P.1537-1546.
40. Bruick R. K., McKnight S. L. A conserved family of prolyl-4-hydroxylases that modify HIF. Science // 2001. Vol.294. -№.5545. - P.1337-1340.
41. Buono C., Binder C. J., Stavrakis G., Witztum J. L., Glimcher L. H., Lichtman A. H. T-bet deficiency reduces atherosclerosis and alters plaque antigen-specific immune responses. Proc Natl Acad Sci U S A // 2005. Vol.102. -№.5. -P.1596-1601.
42. Byers P. H., Siegel R. C., Holbrook K. A., Narayanan A. S., Bornstein P., Hall J. G. X-linked cutis laxa: defective cross-link formation in collagen due to decreased lysyl oxidase activity. N Engl J Med // 1980. Vol.303. -№.2. - P.61-65.
43. Campbell G. R., Campbell J. H. The phenotypes of smooth muscle expressed in human atheroma. Ann N Y Acad Sci // 1990. Vol.598. - P. 143-158.
44. Chapman H. A., Riese R. J., Shi G. P. Emerging roles for cysteine proteases in human biology. Annu Rev Physiol // 1997. Vol.59. - P.63-88.
45. Chase A. J., Newby A. C. Regulation of matrix metalloproteinase (matrixin) genes in blood vessels: a multi-step recruitment model for pathological remodelling. J Vase Res // 2003. Vol.40. -№.4. - P.329-343.
46. Chobanian A. V., Haudenschild С. C., Nickerson C., Drago R. Antiatherogenic effect of captopril in the Watanabe heritable hyperlipidemic rabbit. Hypertension // 1990. Vol.15. -№.3. - P.327-331.
47. Csiszar K. Lysyl oxidases: a novel multifunctional amine oxidase family. Prog Nucleic Acid Res Mol Biol // 2001. Vol.70. - P. 1-32.
48. Daugherty A., Manning M. W., Cassis L. A. Angiotensin II promotes atherosclerotic lesions and aneurysms in apolipoprotein E-deficient mice. J Clin Invest // 2000. Vol.105. -№.11. - P. 1605-1612.
49. Davies M. J. Stability and instability: two faces of coronary atherosclerosis. The Paul Dudley White Lecture 1995. Circulation // 1996. Vol.94. -№.8. - P.2013-2020.
50. Davies M. J., Thomas A. C. Plaque fissuring--the cause of acute myocardial infarction, sudden ischaemic death, and crescendo angina. Br Heart J // 1985. -Vol.53. -№.4. P.363-373.
51. Di Ferrante N., Leachman R. D., Angelini P., Donnelly P. V., Francis G., Almazan A. Lysyl oxidase deficiency in Ehlers-Danlos syndrome type V. Connect Tissue Res // 1975. Vol.3. -№.1. - P.49-53.
52. Diaz A., Jimenez S. A. Interferon-gamma regulates collagen and fibronectin gene expression by transcriptional and post-transcriptional mechanisms. Int J Biochem Cell Biol // 1997. Vol.29. -№.1. - P.251-260.
53. Diet F., Pratt R. E., Berry G. J., Momose N., Gibbons G. H., Dzau V. J. Increased accumulation of tissue ACE in human atherosclerotic coronary artery disease. Circulation // 1996. Vol.94. -№.11. - P.2756-2767.
54. Dollery С. M., Libby P. Atherosclerosis and proteinase activation. Cardiovasc Res // 2006. Vol.69. -№.3. - P.625-635.
55. Doran A. C., Meller N., McNamara C. A. Role of smooth muscle cells in the initiation and early progression of atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2008. Vol.28. -№.5. - P.812-819.
56. Fajardo I., Svensson L., Bucht A., Pejler G. Increased levels of hypoxia-sensitive proteins in allergic airway inflammation. Am J Respir Crit Care Med // 2004. Vol.170. -№.5. - P.477-484.
57. Falk E., Shah P. K., Fuster V. Coronary plaque disruption. Circulation // 1995. -Vol.92.-№.3.-P.657-671.
58. Fields G. B. A model for interstitial collagen catabolism by mammalian collagenases. J Theor Biol // 1991. Vol.153. -№.4. - P.585-602.
59. Frid M. G., Kale V. A., Stenmark K. R. Mature vascular endothelium can give rise to smooth muscle cells via endothelial-mesenchymal transdifferentiation: in vitro analysis. Circ Res // 2002. Vol.90. -№.11. - P. 1189-1196.
60. Fuster V. Lewis A. Conner Memorial Lecture. Mechanisms leading to myocardial infarction: insights from studies of vascular biology. Circulation // 1994. Vol.90. -№.4. - P.2126-2146.
61. Galis Z. S. Vulnerable plaque: the devil is in the details. Circulation // 2004. -Vol.110. -№.3. P.244-246.
62. Galis Z. S., Sukhova G. K., Lark M. W., Libby P. Increased expression of matrix metalloproteinases and matrix degrading activity in vulnerable regions of human atherosclerotic plaques. J Clin Invest // 1994. Vol.94. -№.6. - P.2493-2503.
63. Gallop P. M., Paz M. A. Posttranslational protein modifications, with special attention to collagen and elastin. Physiol Rev // 1975. Vol.55. -№.3. - P.418-487.
64. Gebbia J. A., Coleman J. L., Benach J. L. Selective induction of matrix metalloproteinases by Borrelia burgdorferi via toll-like receptor 2 in monocytes. J Infect Dis // 2004. Vol. 189. -№. 1. - P. 113-119.
65. Geer J. C., Haust M. D. Smooth muscle cells in atherosclerosis. Monogr Atheroscler // 1972. Vol.2. -№.0. - P.l-140.
66. Gelse K., Poschl E., Aigner T. Collagens—structure, function, and biosynthesis. Adv Drug Deliv Rev // 2003. Vol.55. -№.12. - P. 1531-1546.
67. Ghosh A. K. Factors involved in the regulation of type I collagen gene expression: implication in fibrosis. Exp Biol Med (Maywood) // 2002. -Vol.227. -№.5. P.301-314.
68. Gibson U. E., Heid C. A., Williams P. M. A novel method for real time quantitative RT-PCR. Genome Res // 1996. Vol.6. -№.10. - P.995-1001.
69. Gilbert E. F. The effects of metabolic diseases on the cardiovascular system. Am J Cardiovasc Pathol // 1987. Vol.l. -№.2. - P. 189-213.
70. Glagov S., Weisenberg E., Zarins С. K., Stankunavicius R., Kolettis G. J. Compensatory enlargement of human atherosclerotic coronary arteries. N Engl J Med // 1987. Vol.316. -№.22. - P.1371-1375.
71. Goldring M. В., Krane S. M. Modulation by recombinant interleukin 1 of synthesis of types I and III collagens and associated procollagen mRNA levels in cultured human cells. J Biol Chem // 1987. Vol.262. -№.34. - P. 1672416729.
72. Gorelik L., Flavell R. A. Abrogation of TGFbeta signaling in T cells leads to spontaneous T cell differentiation and autoimmune disease. Immunity // 2000. -Vol.12.-№.2.-P.171-181.
73. Grainger D. J. Transforming growth factor beta and atherosclerosis: so far, so good for the protective cytokine hypothesis. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2004. Vol.24. -№.3. - P.399-404.
74. Gupta S., Pablo A. M., Jiang X., Wang N., Tall A. R., Schindler C. IFN-gamma potentiates atherosclerosis in ApoE knock-out mice. J Clin Invest // 1997. -Vol.99. -№.11. -P.2752-2761.
75. Hackett D., Davies G., Maseri A. Pre-existing coronary stenoses in patients with first myocardial infarction are not necessarily severe. Eur Heart J // 1988. -Vol.9.-№.12.-P.l317-1323.
76. Hallerstam S., Larsson P. Т., Zuber E., Rosfors S. Carotid atherosclerosis is correlated with extent and severity of coronary artery disease evaluated by myocardial perfusion scintigraphy. Angiology // 2004. Vol.55. -№.3. - P.281-288.
77. Hansson G. К. Immune mechanisms in atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vase Biol //2001. Vol.21. -№.12. - P. 1876-1890.
78. Hansson G. K. Inflammation, atherosclerosis, and coronary artery disease. N Engl J Med // 2005. Vol.352. -№.16. - P. 1685-1695.
79. Hansson G. K., Holm J., Holm S., Fotev Z., Hedrich H. J., Fingerle J. T lymphocytes inhibit the vascular response to injury. Proc Natl Acad Sci USA// 1991. Vol.88. -№.23. - P.10530-10534.
80. Hansson G. K., Holm J., Jonasson L. Detection of activated T lymphocytes in the human atherosclerotic plaque. Am J Pathol // 1989. Vol.135. -№.1. - P.169-175.
81. Hansson G. K., Jonasson L., Holm J., Clowes M. M., Clowes A. W. Gamma-interferon regulates vascular smooth muscle proliferation and la antigen expression in vivo and in vitro. Circ Res // 1988. Vol.63. -№.4. - P.712-719.
82. Hansson G. K., Libby P. The immune response in atherosclerosis: a double-edged sword. Nat Rev Immunol // 2006. Vol.6. -№.7. - P.508-519.
83. Hansson G. K., Robertson A. K., Soderberg-Naucler C. Inflammation and atherosclerosis. Annu Rev Pathol // 2006. Vol.l. - P.297-329.
84. Haust M. D. Myogenic foam cells in explants of fatty dots and streaks from rabbit aorta. Morphological studies. Atherosclerosis // 1977. Vol.26. -№.4. -P.441-464.
85. Hay E. D. Extracellular matrix. J Cell Biol // 1981. Vol.91. -№.3 Pt 2. -P.205s-223s.
86. Heid C. A., Stevens J., Livak K. J., Williams P. M. Real time quantitative PCR. Genome Res // 1996. Vol.6. -№.10. - P.986-994.
87. Isner J. M., Kearney M., Bortman S., Passeri J. Apoptosis in human atherosclerosis and restenosis. Circulation // 1995. Vol.91. -№.11. - P.2703-2711.
88. Johnson J. L., George S. J., Newby A. C., Jackson C. L. Divergent effects of matrix metalloproteinases 3, 7, 9, and 12 on atherosclerotic plaque stability in mouse brachiocephalic arteries. Proc Natl Acad Sci USA// 2005. Vol.102. -№.43.-P.15575-15580.
89. Junqueira L. C., Bignolas G., Brentani R. R. Picrosirius staining plus polarization microscopy, a specific method for collagen detection in tissue sections. Histochem J // 1979. Vol.11. -№.4. - P.447-455.
90. Kagan H. M., Li W. Lysyl oxidase: properties, specificity, and biological roles inside and outside of the cell. J Cell Biochem // 2003. Vol.88. -№.4. - P.660-672.
91. Kallikazaros I., Tsioufis C., Sideris S., Stefanadis C., Toutouzas P. Carotid artery disease as a marker for the presence of severe coronary artery disease in patients evaluated for chest pain. Stroke // 1999. Vol.30. -№.5. - P. 1002-1007.
92. Kanumakala S., Boneh A., Zacharin M. Pamidronate treatment improves bone mineral density in children with Menkes disease. J Inherit Metab Dis // 2002. -Vol.25. -№.5. P.391-398.
93. Katsuda S., Kaji T. Atherosclerosis and extracellular matrix. J Atheroscler Thromb // 2003. Vol.10. -№.5. - P.267-274.
94. Kenyon K., Modi W. S., Contente S., Friedman R. M. A novel human cDNA with a predicted protein similar to lysyl oxidase maps to chromosome 15q24-q25. J Biol Chem // 1993. Vol.268. -№.25. - P.l8435-18437.
95. Kingsley D. M. The TGF-beta superfamily: new members, new receptors, and new genetic tests of function in different organisms. Genes Dev // 1994. Vol.8. -№.2. - P.133-146.
96. Kivirikko К. I., Myllyharju J. Prolyl 4-hydroxylases and their protein disulfide isomerase subunit. Matrix Biol // 1998. Vol.16. -№.7. - P.357-368.
97. Kivirikko К. I., Myllyla R. Posttranslational enzymes in the biosynthesis of collagen: intracellular enzymes. Methods Enzymol // 1982. Vol.82 Pt A. -P.245-304.
98. Koch W. H. Technology platforms for pharmacogenomic diagnostic assays. Nat Rev Drug Discov // 2004. Vol.3. -№.9. - P.749-761.
99. Kolodgie F. D., Burke A. P., Wight T. N., Virmani R. The accumulation of specific types of proteoglycans in eroded plaques: a role in coronary thrombosis in the absence of rupture. Curr Opin Lipidol // 2004. Vol.15. -№.5. - P.575-582.
100. Koslowski R., Seidel D., Kuhlisch E., Knoch K. P. Evidence for the involvement of TGF-beta and PDGF in the regulation of prolyl 4-hydroxylase and lysyloxidase in cultured rat lung fibroblasts. Exp Toxicol Pathol // 2003. -Vol.55. -№.4. -P.257-264.
101. Kovacs E. J. Fibrogenic cytokines: the role of immune mediators in the development of scar tissue. Immunol Today // 1991. Vol.12. -№.1. - P.17-23.
102. Kovanen P. T. Mast cells and degradation of pericellular and extracellular matrices: potential contributions to erosion, rupture and intraplaque haemorrhage of atherosclerotic plaques. Biochem Soc Trans // 2007. Vol.35. -№.Pt 5. - P.857-861.
103. Kovanen P. Т., Kaartinen M., Paavonen T. Infiltrates of activated mast cells at the site of coronary atheromatous erosion or rupture in myocardial infarction. Circulation// 1995. Vol.92. -№.5. - P. 1084-1088.
104. Kubista M., Andrade J. M., Bengtsson M., Forootan A., Jonak J., Lind K., Sindelka R., Sjoback R., Sjogreen В., Strombom L., Stahlberg A., Zoric N. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med // 2006. Vol.27. -№.2-3. -P.95-125.
105. Kuivaniemi H., Peltonen L., Palotie A., Kaitila I., Kivirikko К. I. Abnormal copper metabolism and deficient lysyl oxidase activity in a heritable connective tissue disorder. J Clin Invest// 1982. Vol.69. -№.3. - P.730-733.
106. Kukkola L., Hieta R., Kivirikko К. I., Myllyharju J. Identification and characterization of a third human, rat, and mouse collagen prolyl 4-hydroxylase isoenzyme. J Biol Chem // 2003. Vol.278. -№.48. - P.47685-47693.
107. Kuzuya M., Nakamura K., Sasaki Т., Cheng X. W., Itohara S., Iguchi A. Effect of MMP-2 deficiency on atherosclerotic lesion formation in apoE-deficient mice. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2006. Vol.26. -№.5. - P. 1120-1125.
108. Laurat E., Poirier В., Tupin E., Caligiuri G., Hansson G. K., Bariety J., Nicoletti A. In vivo downregulation of T helper cell 1 immune responses reducesatherogenesis in apolipoprotein E-knockout mice. Circulation 11 2001. Vol.104. -№.2.-P. 197-202.
109. Libby P., Aikawa M. Stabilization of atherosclerotic plaques: new mechanisms and clinical targets. Nat Med // 2002. Vol.8. -№.11. - P. 1257-1262.
110. Libby P., Aikawa M. Vitamin C, collagen, and cracks in the plaque. Circulation // 2002. Vol.105. -№.12. - P.1396-1398.
111. Libby P., Sukhova G., Lee R. Т., Galis Z. S. Cytokines regulate vascular functions related to stability of the atherosclerotic plaque. J Cardiovasc Pharmacol // 1995. Vol.25 Suppl 2. - P.S9-12.
112. Libby P., Theroux P. Pathophysiology of coronary artery disease. Circulation // 2005. Vol.111. -№.25. -P.3481-3488.
113. Libby P., Warner S. J., Friedman G. B. Interleukin 1: a mitogen for human vascular smooth muscle cells that induces the release of growth-inhibitory prostanoids. J Clin Invest // 1988. Vol.81. -№.2. - P.487-498.
114. Liu J., Sukhova G. K., Sun J. S., Xu W. H., Libby P., Shi G. P. Lysosomal cysteine proteases in atherosclerosis. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2004. -Vol.24. -№.8. P.1359-1366.
115. Loftus I. M., Naylor A. R., Bell P. R., Thompson M. M. Matrix metalloproteinases and atherosclerotic plaque instability. Br J Surg // 2002. -Vol.89. -№.6. P.680-694.
116. Loftus I. M., Naylor A. R., Goodall S., Crowther M., Jones L., Bell P. R., Thompson M. M. Increased matrix metalloproteinase-9 activity in unstable carotid plaques. A potential role in acute plaque disruption. Stroke // 2000. -Vol.31. -№.l.-P.40-47.
117. Loree H. M., Kamra R. D., Stringfellow R. G., Lee R. T. Effects of fibrous cap thickness on peak circumferential stress in model atherosclerotic vessels. Circ Res// 1992. Vol.71. -№.4. -P.850-858.
118. Lutgens S. P., Cleutjens К. В., Daemen M. J., Heeneman S. Cathepsin cysteine proteases in cardiovascular disease. Faseb J // 2007. Vol.21. -№.12. - P.3029-3041.
119. Mallat Z., Tedgui A. The role of transforming growth factor beta in atherosclerosis: novel insights and future perspectives. Curr Opin Lipidol // 2002. Vol.13. -№.5. - P.523-529.
120. McCullagh K. G., Duance V. C., Bishop K. A. The distribution of collagen types I, III and V (AB) in normal and atherosclerotic human aorta. J Pathol // 1980. Vol.130. -№.1. - P.45-55.
121. Minor R. R. Collagen metabolism: a comparison of diseases of collagen and diseases affecting collagen. Am J Pathol // 1980. Vol.98. -№.1. - P.225-280.
122. Mizel S. B. Interleukin 1 and T cell activation. Immunol Rev // 1982. Vol.63. -P.51-72.
123. Molloy K. J., Thompson M. M., Jones J. L., Schwalbe E. C., Bell P. R., Naylor A. R., Loftus I. M. Unstable carotid plaques exhibit raised matrix metalloproteinase-8 activity. Circulation // 2004. Vol.l 10. -№.3. - P.337-343.
124. Moreno P. R., Falk E., Palacios I. F., Newell J. В., Fuster V., Fallon J. T. Macrophage infiltration in acute coronary syndromes. Implications for plaque rupture. Circulation // 1994. Vol.90. -№.2. - P.775-778.
125. Moustakas A., Pardali K., Gaal A., Heldin С. H. Mechanisms of TGF-beta signaling in regulation of cell growth and differentiation. Immunol Lett // 2002. -Vol.82.-№.1-2.-P.85-91.
126. Muller J. E., Tofler G. H., Stone P. H. Circadian variation and triggers of onset of acute cardiovascular disease. Circulation // 1989. Vol.79. -№.4. - P.733-743.
127. Myllyharju J. Prolyl 4-hydroxylases, the key enzymes of collagen biosynthesis. Matrix Biol // 2003. Vol.22. -№.1. - P. 15-24.
128. Myllyharju J., Kivirikko К. I. Collagens and collagen-related diseases. Ann Med // 2001. Vol.33. -№.1. - P.7-21.
129. Myllyharju J., Kivirikko К. I. Collagens, modifying enzymes and their mutations in humans, flies and worms. Trends Genet // 2004. Vol.20. -№.1. -P.33-43.
130. Naghavi M., Falk E., Hecht H. S., Shah P. K. The First SHAPE (Screening for Heart Attack Prevention and Education) Guideline. Crit Pathw Cardiol // 2006. -Vol.5.-№.4.-P. 187-190.
131. Nakata Y., Maeda N. Vulnerable atherosclerotic plaque morphology in apolipoprotein E-deficient mice unable to make ascorbic Acid. Circulation // 2002. Vol.105. -№.12. - P.1485-1490.
132. Newby A. C. Dual role of matrix metalloproteinases (matrixins) in intimal thickening and atherosclerotic plaque rupture. Physiol Rev // 2005. Vol.85. -№.1. - P.1-31.
133. Newby A. C., George S. J. Proliferation, migration, matrix turnover, and death of smooth muscle cells in native coronary and vein graft atherosclerosis. Curr Opin Cardiol // 1996. Vol.11. -№.6. - P.574-582.
134. Newby A. C., Zaltsman A. B. Fibrous cap formation or destruction—the critical importance of vascular smooth muscle cell proliferation, migration and matrix formation. Cardiovasc Res // 1999. Vol.41. -№.2. - P.345-360.
135. Nikkari S. Т., O'Brien K. D., Ferguson M., Hatsukami Т., Welgus H. G., Alpers С. E., Clowes A. W. Interstitial collagenase (MMP-1) expression in human carotid atherosclerosis. Circulation // 1995. Vol.92. -№.6. - P.1393-1398.
136. O'Garra A., Vieira P. Regulatory T cells and mechanisms of immune system control. Nat Med // 2004. Vol.10. -№.8. - P.801-805.
137. Owens G. K., Kumar M. S., Wamhoff B. R. Molecular regulation of vascular smooth muscle cell differentiation in development and disease. Physiol Rev // 2004. Vol.84. -№.3. - P.767-801.
138. Paigen В., Morrow A., Holmes P. A., Mitchell D., Williams R. A. Quantitative assessment of atherosclerotic lesions in mice. Atherosclerosis // 1987. Vol.68. -№.3.-P.231-240.
139. Parker R. E., Granger D. N., Cook В. H., Granger H. J., Taylor A. E. A histochemical analysis of vascular and nonvascular smooth muscles in the canine lung. Microvasc Res // 1979. Vol.18. -№.2. - P. 167-174.
140. Peiser L., Mukhopadhyay S., Gordon S. Scavenger receptors in innate immunity. Curr Opin Immunol // 2002. Vol.14. -№.1. - P.123-128.
141. Privalov P. L. Stability of proteins. Proteins which do not present a single cooperative system. Adv Protein Chem // 1982. Vol.35. - P.l-104.
142. Radzikowski C. Protection of animal research subjects. Sci Eng Ethics // 2006. -Vol.12.-№.1.-P. 103-110.
143. Raines E. W., Dower S. K., Ross R. Interleukin-1 mitogenic activity for fibroblasts and smooth muscle cells is due to PDGF-AA. Science // 1989. -Vol.243. -№.4889. P.393-396.
144. Raposo В., Rodriguez C., Martinez-Gonzalez J., Badimon L. High levels of homocysteine inhibit lysyl oxidase (LOX) and downregulate LOX expression in vascular endothelial cells. Atherosclerosis // 2004. Vol.177. -№.1. - P. 1-8.
145. Rekhter M. D., Zhang К., Narayanan A. S., Phan S., Schork M. A., Gordon D. Type I collagen gene expression in human atherosclerosis. Localization to specific plaque regions. Am J Pathol // 1993. Vol.143. -№.6. - P.1634-1648.
146. Riegman P. H., Bosch A. L. OECI TuBaFrost tumor biobanking. Tumori // 2008. Vol.94. -№.2. - P.160-163.
147. Roberts A., Thompson J. S. Inbred mice and their hypbrids as an animal model for atherosclerosis research. Adv Exp Med Biol // 1976. Vol.67. -№.00. -P.313-327.
148. Robertson A. K., Hansson G. К. T cells in atherogenesis: for better or for worse? Arterioscler Thromb Vase Biol // 2006. Vol.26. -№.11. - P.2421-2432.
149. Robertson A. K., Rudling M., Zhou X., Gorelik L., Flavell R. A., Hansson G. K. Disruption of TGF-beta signaling in T cells accelerates atherosclerosis. J Clin Invest//2003. Vol.112. -№.9. - P.1342-1350.
150. Rocnik E. F., Chan В. M., Pickering J. G. Evidence for a role of collagen synthesis in arterial smooth muscle cell migration. J Clin Invest // 1998. -Vol.101. -№.9. P.1889-1898.
151. Rodgers K. J., Watkins D. J., Miller A. L., Chan P. Y., Karanam S., Brissette W. H., Long C. J., Jackson C. L. Destabilizing role of cathepsin S in murine atherosclerotic plaques. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2006. Vol.26. -№.4. - P.851-856.
152. Rodriguez C., Raposo В., Martinez-Gonzalez J., Casani L., Badimon L. Low density lipoproteins downregulate lysyl oxidase in vascular endothelial cells and the arterial wall. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2002. Vol.22. -№.9. -P.1409-1414.
153. Rong J. X., Shapiro M., Trogan E., Fisher E. A. Transdifferentiation of mouse aortic smooth muscle cells to a macrophage-like state after cholesterol loading. Proc Natl Acad Sci U S A // 2003. Vol.100. -№.23. - P.13531-13536.
154. Rosenbloom J., Harsch M., Jimenez S. Hydroxyproline content determines the denaturation temperature of chick tendon collagen. Arch Biochem Biophys // 1973. Vol.158. -№.2. - P.478-484.
155. Rossert J., Terraz C., Dupont S. Regulation of type I collagen genes expression. Nephrol Dial Transplant// 2000. Vol.15 Suppl 6. - P.66-68.
156. Ruiz-Ortega M., Rodriguez-Vita J., Sanchez-Lopez E., Carvajal G., Egido J. TGF-beta signaling in vascular fibrosis. Cardiovasc Res // 2007. Vol.74. -№.2. - P.196-206.
157. Saito H., Papaconstantinou J., Sato H., Goldstein S. Regulation of a novel gene encoding a lysyl oxidase-related protein in cellular adhesion and senescence. J Biol Chem // 1997. Vol.272. -№.13. - P.8157-8160.
158. Samani N. J., Thompson J. R., O'Toole L., Channer K., Woods K. L. A metaanalysis of the association of the deletion allele of the angiotensin-converting enzyme gene with myocardial infarction. Circulation // 1996. Vol.94. -№.4. -P.708-712.
159. Saren P., Welgus H. G., Kovanen P. T. TNF-alpha and IL-lbeta selectively induce expression of 92-kDa gelatinase by human macrophages. J Immunol // 1996. Vol.157. -№.9. - P.4159-4165.
160. Schmitz G., Aslanidis C., Liebisch G., Orso E. The Danubian Biobank project. Stud Health Technol Inform//2008. Vol.134. - P. 143-159.
161. Schwartz S. M., Virmani R., Rosenfeld M. E. The good smooth muscle cells in atherosclerosis. Curr Atheroscler Rep // 2000. Vol.2. -№.5. - P.422-429.
162. Siegel R. C. Collagen cross-linking. Effect of D-penicillamine on cross-linking in vitro. J Biol Chem // 1977. Vol.252. -№.1. - P.254-259.
163. Skalen K., Gustafsson M., Rydberg E. K., Hulten L. M., Wiklund O., Innerarity T. L., Boren J. Subendothelial retention of atherogenic lipoproteins in early atherosclerosis. Nature // 2002. Vol.417. -№.6890. - P.750-754.
164. Slevin M., Wang Q., Font M. A., Luque A., Juan-Babot O., Gaffney J., Kumar P., Kumar S., Badimon L., Krupinski J. Atherothrombosis and plaque heterology: different location or a unique disease? Pathobiology // 2008. -Vol.75. -№.4. P.209-225.
165. Smith-Mungo L. I., Kagan H. M. Lysyl oxidase: properties, regulation and multiple functions in biology. Matrix Biol // 1998. Vol.16. -№.7. - P.387-398.
166. Spinetti G., Kraenkel N., Emanueli C., Madeddu P. Diabetes and vessel wall remodelling: from mechanistic insights to regenerative therapies. Cardiovasc Res // 2008. Vol.78. -№.2. - P.265-273.
167. StatSoft. (1999). Электронный учебник по статистике. . Москва: StatSoft, Inc.
168. Stoneman V. E., Bennett M. R. Role of apoptosis in atherosclerosis and its therapeutic implications. Clin Sci (Lond) // 2004. Vol.107. -№.4. - P.343-354.
169. Stultz С. M. Localized unfolding of collagen explains collagenase cleavage near imino-poor sites. J Mol Biol // 2002. Vol.319. -№.5. - P.997-1003.
170. Sukhova G. K., Shi G. P., Simon D. I., Chapman H. A., Libby P. Expression of the elastolytic cathepsins S and К in human atheroma and regulation of theirproduction in smooth muscle cells. J Clin Invest // 1998. Vol.102. -№.3. -P.576-583.
171. Szabo S. J., Sullivan В. M., Peng S. L., Glimcher L. H. Molecular mechanisms regulating Thl immune responses. Annu Rev Immunol // 2003. Vol.21. -P.713-758.
172. Tedgui A., Mallat Z. Cytokines in atherosclerosis: pathogenic and regulatory pathways. Physiol Rev // 2006. Vol.86. -№.2. - P.515-581.
173. Tellides G., Tereb D. A., Kirkiles-Smith N. C., Kim R. W., Wilson J. H., Schechner J. S., Lorber M. I., Pober J. S. Interferon-gamma elicits arteriosclerosis in the absence of leukocytes. Nature // 2000. Vol.403. -№.6766.-P.207-211.
174. Thompson J. S. Atheromata in an inbred strain of mice. J Atheroscler Res // 1969. Vol.10. -№.1. - P.l 13-122.
175. Tsuji A., Yanai J., Miura Т., Shirai Y., Osano M., Hosoda Y., Sato M., Asaishi Т., Oda Y., Hajikano H. Vascular abnormalities in congenital cutis laxa—report of two cases. Acta Paediatr Jpn// 1990. Vol.32. -№.2. - P.155-161.
176. Tupin E., Nicoletti A., Elhage R., Rudling M., Ljunggren H. G., Hansson G. K., Berne G. P. CD 1 d-dependent activation of NKT cells aggravates atherosclerosis. J Exp Med // 2004. Vol.199. -№.3. - P.417-422.
177. Turk В., Turk D., Turk V. Lysosomal cysteine proteases: more than scavengers. Biochim Biophys Acta // 2000. Vol.1477. -№.1-2. - P.98-111.
178. Weber К. T. Metabolic responses of extracellular matrix in tissue repair. Ann Med // 1997. Vol.29. -№.4. - P.333-338.
179. Weber К. Т., Sun Y., Katwa L. C. Local regulation of extracellular matrix structure. Herz // 1995. Vol.20. -№.2. - P.81-88.
180. Weir E. К., Joffe H. S., Blaufuss A. H., Beighton P. Cardiovascular abnormalities in cutis laxa. Eur J Cardiol // 1977. Vol.5. -№.3. - P.255-261.
181. Whitman S. C., Ravisankar P., Elam H., Daugherty A. Exogenous interferon-gamma enhances atherosclerosis in apolipoprotein E-/- mice. Am J Pathol // 2000. Vol.157. -№.6. - P.l819-1824.
182. Whittaker P., Kloner R. A., Boughner D. R., Pickering J. G. Quantitative assessment of myocardial collagen with picrosirius red staining and circularly polarized light. Basic Res Cardiol // 1994. Vol.89. -№.5. - P.397-410.
183. Wiley J., Sons I. (2007). Current Protocols in Molecular Biology. USA: Wiley InterS cience.
184. Vink A., Schoneveld A. H., Richard W., de Kleijn D. P., Falk E., Borst C., Pasterkamp G. Plaque burden, arterial remodeling and plaque vulnerability: determined by systemic factors? J Am Coll Cardiol // 2001. Vol.38. -№.3. -P.718-723.
185. Virmani R., Kolodgie F. D., Burke A. P., Farb A., Schwartz S. M. Lessons from sudden coronary death: a comprehensive morphological classification scheme for atherosclerotic lesions. Arterioscler Thromb Vase Biol // 2000. Vol.20. -№.5. - P.1262-1275.
186. Vogel W. F., Abdulhussein R., Ford С. E. Sensing extracellular matrix: an update on discoidin domain receptor function. Cell Signal // 2006. Vol.18. -№.8. - P.1108-1116.
187. Wrana J. L., Attisano L., Wieser R., Ventura F., Massague J. Mechanism of activation of the TGF-beta receptor. Nature // 1994. Vol.370. -№.6488. -P.341-347.
188. Ye S. Influence of matrix metalloproteinase genotype on cardiovascular disease susceptibility and outcome. Cardiovasc Res // 2006. Vol.69. -№.3. - P.636-645.