Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Медико-биологическая оценка стимуляторов роста сельскохозяйственных животных

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ

РГБ ОД

На правах рукописи

АДИГАМОВ Ленор Файзыевич

УДК 577.17:591.134:613.28

МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА СТИМУЛЯТОРОВ РОСТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ ЖИВОТНЫХ

14.00.07— Гигиена

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва — 1995

Работа выполнена " "в" " Институте питания РАМН (директор — академик РАМН, профессор М. Н. Волгарев)

Научный консультант — член-корреспондент РАМН, профессор В. А. Тутельян

Официальные оппоненты

Академик РАМН, профессор, доктор медицинских наук Б. Т. Величковский

Профессор, доктор медицинских наук И. А. Карплюк

Академик, профессор, доктор медицинских наук И. Б. Збарский

Ведущее учреждение:

Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова

Защита состоится фв&рб 199.5" г.

в «. АН- _» часов на заседании специализированного Совета Д 001.02.01 при Институте питания РАМН (109240, Москва, Устьинский проезд, 2/14).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института питания РАМН.

Автореферат разослан «Л^__» &Н¡ЬЯ_ 199^г.

Ученый секретарь специализированного Совета

кандидат медицинских наук: В. М. Жминченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

. Актуальность проблемы. Одной из важнейших проблем современности является дополнительное получение наиболее полноценного животного белка, производство которого в мире значительно отстает от потребностей населения (Потребность в белке и энергии, 1987; Ranke М. В., 1988; Rozón-gurtE.T., 1992; Chapekar M.S., 1992).

Как отмечено в материалах ФАО/ВОЗ (Joint FAO/WHO food standards programme codex, committee on residues of veterinary drugs in foods, 1984, 1991), за последние 15 лет в различных регионах мира .увеличилось использование стимуляторов роста сельскохозяйственных животных; в C1UA - 90%, в Англии - около 50% крупного рогатого скота обрабатывалось стимуляторами роста.

Вместе с тем при использовании стимуляторов роста и лактации сельскохозяйственных животных необходима гарантия отсутствия отрицательных последствий употребления в пищу полученных при этом продуктов животноводства. Пищевые продукты должны соответствовать требованиям биохимии и гигиены питания. Важное значение приобретают медико-биологические исследования стимуляторов роста и гигиеническая оценка продуктов животноводства. При решении вопроса возможности использования того или иного стимулятора роста в практике животноводства, необходимо выполнение всего комплекса медико-биологических и гигиенических исследований.

К настоящему времени осуществлен синтез большого числа биологически активных веществ, которые в опытах на сельскохозяйственных животных повышают мясную и молочную продуктивность (Dranghaday W. Н., 1984; Bines J. Е., 1991; Bree М., 1991; BachmanK.C., 1992; BarbanoD.M., 1992; Chapekar M.S., 1992; Dawson G.R., 1992; Никитенко А. M. с соавт., 1994). Химико-технологические и ветеринарно-токсикологи-ческие исследования для ряда групп стимуляторов (различных стероидов, пептидов,' белков, производных аминокислот и др.) завершены. Вместе с тем не проведена медико-биологическая характеристика большого числа анаболических препаратов и гигиеническая оценка продуктов животноводства, полученных в условиях их применения. Это обусловлено сложностью медико-биологических исследований, их дли-

тельностью, необходимостью применения комплекса биохимических, химических, биологических, гистохимических и др. методов. Кроме того, в литературе имеются лишь очень ограниченные сведения о системе критериев и специфических показателях медико-биологической оценки различных групп и классов биологически активных веществ, повышающих продуктивность сельскохозяйственных животных.

Как в нашей стране, так и за рубежом решение вопроса о применении того или иного стимулятора роста или лактации сельскохозяйственных животных, главным образом, зависит от результатов медико-биологической характеристики препарата и оценки степени безвредности продуктов животноводства (32-nd report of the Joint FAO/WHO expert committee on . food additives, 1988; Инструкция № 3202-85).

Таким образом, в проблеме использования стимуляторов роста и лактации з животноводстве медико-биологическая их оценка играет решающую роль.

Представленная работа проводилась в соответствии с отраслевыми, межотраслевыми и международными программами:

- „Программа развития научных исследований и ускорения внедрения достижений медицинской науки в отрасли агропромышленного комплекса" (С-10, разделы 01.01.01 и 02.01.02).

- „Программа научно-исследовательских и опытно-конструкторских работ в Нечерноземной зоне РФ на период до 2000 г." (разделы 02.02.Н1 и 03.01.Н16).

- „Межотраслевая программа по разработке физислого-биохимических основ высокой продуктивности сельскохо-хяйстбснных животных" (Осх. 49, разделы 05 и 05.01.Т).

- „Научно-техническая программа по животноводству на период до 2000 г." (раздел 0.51.25).

- Международные (совместно с фирмами США „Монсан-то" и „Элл;;-Л ил л и") программы по комплексной оценке генно-инженерных стимуляторов лактации и роста '.сельскохозяйственных животных.

Цель работы состояла в разработке основных направлений проблемы медико-биологической оценки стимуляторов ро.ста сельскохозяйственных животных: системы специфических критериев и показателей характеристики различных групп

биологически активных веществ, повышающих мясную и , молочную продуктивность животных; продлении медико-биологических исследований различных стимуляторов роста и лактации,, гигиенической оценки продуктов животноводства; разработан методов анализа остаточных количеств стимуляторов в продуктах животноводства, а также методик, регламентов й способов стимуляции роста животных.

Задачи исследования.

- Провести медико-биологическую характеристику различных групп стимуляторов роста и лактации сельскохозяйственных животных.

- Выполнить комплекс исследований по гигиенической оценке продуктов животноводства, полученных в условиях применения стимуляторов роста и лактации.

- Разработать методы анализа и регламенты содержания остаточных количеств анаболических соединений в продуктах животноводства.

- Провести исследования по разработке методик и схем стимуляции роста сельскохозяйственных животных.

- Разработать теоретические и экспериментальные подходы комплексной оценки различных групп стимуляторов роста сельскохозяйственных животных.

Научная новизна работы определяется новыми экспериментальными и теоретическими разработками основных направлений малоизученной проблемы - медико-биологической характеристики стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства. Опубликованная довольно обширная научная литература пссвящсна в основном химико-технологическим, ветсринарно-савитарным, зоотехническим разделам исследований еттгуллтероз роста и лактации, их влиянию на продуктивность сельскохозяйственных животных (Buttery Р. J., Sinnct-Smilh P.A., 1984; Brook С. G., Hindmarch Р. С., 1988; Blume Е., 1992; Chapekar М. S., 1992; Darbon Р., 1987; DawsonG.,R., 1992; Flakner F., 1985; Hoffmann В., 1981, 1988; Hutchinson С. F., Tomlfnson J.E., 1986; Marselos M., 1992; MatsumotoK., 1992; Noblet J., 1992). Медико-биологические разделы исследований и, особенно, аспекты гигиенической оценки продуктов животноводства, полученных в условиях применения стимуляторов роста, изучены явно недостаточно; в литературе отсут-

ствуют обобщающие сведения в целом по проблеме, не раз-« работана система комплексной медико-биологической характеристики стимуляторов роста, лактации сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства.

В работе проведена медико-биологическая характеристика стимуляторов роста, относящихся к различным классам химических соединений: циклическим соединениям группы стильбенов, эндогенным пептидным препаратам, белковым веществам, полученным методом генной инженерии. Медико-биологическая оценка проведена по специфическим критериям, которые основаны на влиянии стимуляторов на органы-мишени, функциональное состояние различных гормональных систем.

Разработаны показатели гигиенической оценки продуктов животноводства, полученных в условиях применения стимуляторов роста и лактации сельскохозяйственных животных. Гигиенические исследования включали: анализ остаточных количеств стимуляторов в мясе и субпродуктах; в условиях субхронических и хронических опытов исследования влияния скармливания мясо-продуктов экспериментальным животным на функциональное состояние органов-мишеней; определение показателей „безвредности" мясо-продуктов. Проведенная медико-биологическая характеристика стимуляторов и гигиеническая оценка продуктов животноводства позволили сделать заключение о возможности и регламентах применения отдельных групп анаболических препаратов в животнрводстве.

Выполнен объем медико-биологических исследований стильбенов, который поззолил обосновать санитарно-гигиенические требования к этой группе стимуляторов роста. Впервые показано, что наиболее выраженное токсическое действие диэтилстильбэстрола, проявляющееся на животных всех основных стадий онтогенеза, заключается в резком подавлении формирования и функционирования мужской половой сферы, ингибировании синтеза мужских половых гормонов (тестостерона, 5« - дигидротестостерона, андростен йиона), нарушении процессов сперматогенеза, снижении показателей плодовитости. Впервые в субхронических опытах на экспериментальных животных смоделированы усло-

щщ длительного поступления в организм человека таких * доз диэтилстильбэстрола, которые соответствуют его остаточным количествам в продуктах животноводства, и в этих экспериментах установлены изменения эстрогензависимых процессов и значительные нарушения функционального состояния различных органов-мишеней. С использованием химических и биологических тестов показано, что продукты животноводства содержат избыточную эстрогенную и анти-андрогенную активность.

Разработан способ стимуляции роста, основанный на применении эндогенного анаболического препарата. В настоящее время наиболее жесткие санитарно-гигиенические требования предъявляются к использованию биологически активных веществ в промышленном птицеводст-зе. В связи с этим предложен эндогенный. пептидный препарат для стимуляции роста птицы, который не обладает токсическими свойствами и по доступности производства, медико-биологическим и гигиеническим характеристикам отвечает необходимым критериям оценки. -

Предложен новый принцип при разработке способов стимуляции роста - для применения в промышленном звероводстве рекомендована комбинация анаболических препаратов, включающая стероид, гексапептид и перхлорат, которые одновременно воздействуют на несколько систем, регулирующих синтез и катаболизм белка.

Благодаря бурному развитию биотехнологии в различных странах в производственных условиях получена новая группа стимуляторов лактации и роста сельскохозяйственных животных - генно-инженерные соматотропины и были начаты исследования по комплексной ветеринарно-токсикологичес-кой и медико-биологической оценке- рекомбинантов. В работе приводятся данные по физико-химическим, биологическим свойствам бычьего генно-инженерного соматотропи-на и гигиенической оценки продуктов животноводства.

В целом по проблеме разработаны обобщающие материалы (рекомендации, указания, инструкции и пр.), в которых впервые предпринята попытка сформулировать не. только основные требования к оценке различных групп и классов стимуляторов, но и определить основные направления, объем, методическое обеспечение и порядок выполнения

химнко-технолгичсских, ветеринарно-токсол-л-ических, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Методические критерии и специфические показатели медико-биологической оценки исследуемых групп стимуляторов роста и лактации и гигиенической оценки продуктов животноводства.

2. Методы анализа остаточных количеств стимуляторов роста групп эстрогенов и андрогенов; уровни содержания половых гормонов в продуктах животноводства.

3. Токсигологическая характеристика зстрогонных стимуляторов роста группы стильбенов и гигиеническая оценка продуктов животноводства, полученных в условиях их применения.

4. Медико-биологические исследования эндогенного пептидногго препарата из боенской крови птицы и гигиеническая оценка продуктов животноводства.

5. Методики и схемы стимуляции роста животных с использованием комбинации анаболических препаратов.

6. Характеристика физико-химических и биологических свойств стимулятора лактации - генно-инженерного бычьего соматотропина, оценка продуктов животноводства.

7. Система комплексной оценки различных групп и классов стимуляторов роста сельскохозяйственных животных.

Научно-практическое значение работы. В целях методического обеспечения государственного надзора страны за содержанием в продуктах животноводства стимуляторов роста с наиболее выраженной специфической зстрогенной и андрогенной активностями разработаны:

- Методы определения диэтилстнльбэстрола и' его метаболитов в мясе, субпродуктах и биологических жидкостях сельскохозяйственных животных (Авт. свид. № 438928- Мет. реком. № 2944-83). -

- .Методы исследования остаточных количеств эстроген-ных гормонов в продуктах животноводства (Авт.. свид. № 1012138; Мет. реком. У: 3208-85).

- Методы определения андрог--енных гормонов в мясе, -субпродуктах и биологических жидкостях сельскохозяйственных животных (Авт. свид. № 1007520; Авт. свид. №376719;

Авт. свид. № 1273334; Мет. реком., утв. КО АН 1986).

- Гигиенические регламенты, порядс-с отбора биопроб, периодичность исследований при проведении контроля за остаточными количествами стимуляторов в продуктах животноводства (Мет. реком. №2944-83; Мет. реком. №3208-85; Санитарно-гигиенические требования № 4053-85; Мет. указ. № 5175-90).

Разработанные-методы и регламенты предназначены для использования з санитарно-эпидемиологических лабораториях, научно-исследовательских институтах и других учреждениях в целях гигиенического контроля за остаточными количествами стимуляторов роста в мясных и молочных продуктах; для санэпидслужбы страны проводились методические семинары по методам анализа и регламентам содержания остаточных количеств анаболиков в продуктах животноводства. В необходимых случаях осуществлялись арбитражные исследования стимуляторов роста в продуктах животноводства, поступающих по импорту.

Разработана система медико-биологических требований, специфических показателей и критериев при исследовании различных групп стимуляторов роста сельскохозяйственных животных. Система медико-биологической характеристики стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства внедрена в практику госсанветнадзора за использованием биопрепаратов в животноводстве (Инструкция № 3202-85, № 115-ба; Мет. реком. К5 2944-83; Мет. реком. №3208-55; Мет. указ. №5175-90; Санитарно-гигиенические требования №4053-85 и др.). Данная система использована при проведении гигиенической оценки фенольиых, стероидных, пептидных, белковых и других стимуляторов роста; в соответствии с полученными результатами в директивные орг.аны'гсссанЕетнадзора представлены экспертные заключении о возможности использования исследованных биологически активных веществ в животноводстве.

Разработаны методики, схемы и способ:.', стимуляции роста сельскохозяйственных животных (Авт. свид. № 1124467; Авт свид № 1431108; Мет. реком., 1985; 1986 гг.: Мет. реком., 1994 г.).

Основные положения работы доложены и обсуждены на Всесоюзных конференциях по проблемам питания (Моск-

ва, 1971, 1980; Алма-Ата, 1974, 1979); на Всесоюзных биохимических съездах (Рига, 1974; Ленинград, 1979; Киев, 1986}; 2-м Национальном конгрессе эндокринологов Болгарии (В. Тыр-ново, 1979); XXI Международном молочном конгрессе (Москва, 1982); на Всесоюзных конференциях: „Аминокислоты для сельского хозяйства, пищевой промышленности, здравоохранения и научных исследований" (Фрунзе, 1981; Ереван, 1988), „Фундаментальные проблемы гастроэнтерологии" (Киев, 1981), „Биология и патология пушных зверей" (Петрозаводск, 1981); на Всесоюзных симпозиумах: „Гормоны и гормональные препараты в животноводстве" (Ташкент, 1974), „Митохондрии: механизмы сопряжения и регуляции" (Пущи-но, 1981), „Хроматография в биологии и медицине" (Москва, 1983), „Биохимия сельскохозяйственных животных и продовольственная программа" (Витебск, 1982; Ташкент, 1986; Киев, 1989), „Химия белков и пептидов" (Рига, 1983). „Физиология и биохимия лактации" (Алма-Ата, 1987; Баку, 1990); на Всероссийском симпозиуме „физиологические основы повышения продуктивности животных" (Петрозаводск, 1991).

Структура диссертации. Текст диссертации изложен на 327 страницах машинописи. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 6 глав собственных исследований, заключения, выводов и приложения, иялюстрировна 73 таблицами, 22 рисунками и фотокопиями."-Цитированная литература представлена 78 работами на русском и 479 - на иностранных языках.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 90 работ, в том числе 13 Инструкций, Методических указаний, рекомендаций, 7 Авторских свидетельств на изобретения.'

МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ .

Основная часть работы-па лабораторных животных} кры-. сах различного возраста и пола; исследования эффективности использования стимуляторов роста в животноводстве, птицеводстве, пушном ~пероводстве проведены на различных видах продуктивных животных и птице. Объектом исследований являлся биоматериал от лабораторных и сельскохозяйственных животных.

Методы медико-биологической оценки стимуляторов роста группы стильбеюз. Разработаны отдельные стадии

методов определения остаточных количеств диэтилстиль-бэстрола и его производных в тканях п биологических жидкостях сельскохозяйственных животных: экстракции различных ферм стильбена, очистки экстрактов (с использованием перераспределения в растворителях, адсорбционной хроматографии на колонках, тонкослойной хроматографии) и количественного измерения на основе специфической фотохимической реакции и ГЖХ (электронный захват). Изложены различные варианты методов определения диэти л стильб-этрола и его метаболитов о мясных продуктах, субпродуктах (печени, почках), жире и различных биологических жидкостях - молоке, сыворотке крови, моче, желчи (Авт. свид. № 433928, Мет. реком. И9 29A4-S3).

Определение биологического и токсического влияния дштилстильбэстрола на органы-мишени и „эстроген-зави-сг-шыс" процессы, а таюхз субхронические и хронические эксперименты по гигиенической оценке продуктов животноводства яроподг-ши на крысах линии Внстар; использовали методы, предназначенные для анализа эстрогенной Dorf-man R. L, 1962; Кибак Я. M., 196В; Csaba G. М. et. al.,1986, Harmon J. R. et al,s 19S9) и антиандрогенной активностей (Dorf-manR.1., 1962; Трахтенберг И. M., 197S; Keel В. Л., AbneyT.O., 1985; Резников А. Г., Варга С. В., 1988),

Разработанные методы определения стероидных гормо-нсз гндрсстапового ряда - тестостерона, 5g - дигидротесто-стеропа и андоростендиона и ;:;еиских половых гормонов -зстрадуюла-17Д, эсгрсна и эстриола в продуктах животноводства включают экстракцию полярными и неполярными растворителями, хроматографию в тонком слое и на колонках и количестзеннсс измерение с использованием радиоиммуно-логичес5<ого анализа и ГЖХ (Авт. свид. № 1012138, № 1007520, К* 1273334; Мет, реком. № 3202-85). С использованием данных-методов проведены исследования уровней содержания основных половых гормонов групп эстрогенов и андрогенов в различных видах продуктов животноводства.

Разработан способ получения пептидного препарата из боенской крови птицы и регламенты его применения в промышленном птицеводстве (Авт. свид. № 1431108). В соответствии с принятыми требованиями и методами исследования эндогенного биостимулятора (Инструкция № 32-02-85; 32-nd

report of the Joint FAQ/WHO expert committee on food additives, 1988; Joint F AO/WHO food standards programme codex committee on residues of veterinary drugs in foods, 1991; Chapekar M. S., 1992) дана медико-биологическая характеристика пептидного препарата и гигиеническая оценка мясных продуктов, полученных в условиях егс применения.

Методы определения влияния биорегуляторов на продуктивность пушных зверей, принятые в промышленном звероводстве (Берестов Б. А., 1981), использованы. при разработке способа стимуляции роста, основанного на применении различных комбинаций анаболических препаратов.

Методы медико-биологической оценки генно-инженерного соматотропипа. Использованы методы химической характеристики рекомбинанта (Кунитц М., Нортропп Д. X., 1950; Choever Е. V., Levis U.J., 1969; FreckerP.J., 1978; ZeytinF-N.,

1986), исследования влияния биорегулятора на различные железы внутренней секреции, органы-мишени (Ford С. Е.,. Hamerton J. L., 1956; Herington А. С., YmerS., 1986; DarbonP.,

1987) и биологические методы определения его эффективности, характера действия па течение беременности, лактацию, раннее постнатальное развитие животных (Трахтенберг И. М., 1978; Harmon J. R. et. al., 1986). Гигиеническая оценка продуктов животноводства проводилась с применением химических методов их анализа, определения показателей физиологического развития и гормонального статуса экспериментальных животных, которым скармливалось молоко, полученное в условиях применения рекомбинанта (Инструкция К® 3202-S5; ZoytinF. N., 1986). РадпоиммунологическиП анализ гормонов проводили с использованием RIA-хситов фирм CIS (Фракция), BYK - Sangtes (Германки) и отечественных иабороз. Н-окси-кортиксстероиды в сыворотке крови и надпочечниках определяли флюориметрическнм методом Наугольных Э.З. (1969), тестостерон и андростенднон в биоматериале - по методу Ittrich G. (1560) с некоторыми модификациями (Авт. свид. К" 1273334).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

. Медико-биологическая характеристика стимуляторов роста группы стильбенов и гигиеническая оценка продуктов животноводства

После того, как был разработан промышленной способ получения диэтилстильбзстрола (ДЭС), длительное время (в течение нескольких десятилетий) данный стимулятор роста довольно широко использовался в животноводстве различных стран (Joint FAO/WHO Expert consultation on residues of veterinary drugs in food, 1984,1991).

В целях решения вопроса о возможности использования стимуляторов роста данной группы проведен комплекс исследований по медико-биологической характеристике ДЭС и гигиенической оценке продуктов животноводства.

Согласно полученным данным, ДЭС является одним из наиболее активных гормональных препаратов с антиандро-генным действием (табл. 1). Стильбен трансплапентарно подавляет рост и дифференцировку мужских половых желез плодов крыс, что в период половозрелости приводит к снижению синтеза андрогенных гормонов. Неонатальная эстрогени-зация стильбеном новорожденных крысят-самцов вызывает нарушения репродуктивной системы - в период полового • созревания (в 2-месячном возрасте) обнаружено резкое снижение плодовитости. Этот токсический -эффект ДЭС связан не только с прямым ингибирующим влиянием на гонады, но и с нарушением половой дифференцировки гипоталамо-гипофизарно-репродуктивной системы в ключевой период ее становления (Lopez J., 1984, 19S6; Czaba G., 1986; Turner Т., 1989). Пероралъное введение (0,5 мкг) ДЭС крысам-самцам в течение периодов молочного вскармливания и полового созревания приволит к ингибирсЕ^.анию процессов формирования репродуктивной системы; . в период полового созревания у подопытных жизотных выкалено значительное (з 4-5 раз) снижение весовых пска?-ат■::-л вентральной простаты и семенных пузырьков, секра:.мл -^„-тссгтерона и андро-етендиоиа снижалась в 5-S раз. Исс.:к"~сд<гиия на половозрелых животных показали, что jaayts при cs-.ократном подкожном ааедгнш: н-;г>:слх лоз ДЭС (0,4 мкг/lGör массы тела) «шягаются уровни тестостерона в сыворотке кре-аи в 1,9 раза,

Таблица 1.

Функциональное состояние органов-мишеней экспериментальных животных при воздействии диэтилстильбэстрола на' различных стадиях онтогенеза

Стадии развития экспериментальных животных -крыс

Беременные сайки

Лакт5фующие сайки

Неполовозрелые

С1МКИ

Оварнозктомиро-ванные самки

Новорожденные самцы

Нсполозозрелыо самцы

Самцы — на разит стадиях развития

Метаболизм

дэс

Изменения роста и дифференцирован репродуктивньк органов плодои женского и мужского пола

Сокращение продолжительности лактации; снижений массы тела крысят

Повышений роста и дифференцирован матки1

Эетрус

В период подозозрелости сыра-зг.екнео сш;гдаше плокоалтостп

Инткбироаздже роста сеыггтыг пузырысоз, простаты, сшсксгсхе ссхрацми поповмг гормонов .

Мох&нкш йитиандрогеиного дгйэтгця: простата и сеысшага пузырьки — ннгибированнг роста; семсншки — снижение секреция иглрогелоз, процесса сперматогенеза; гипофиз — снижение секр;п:г11Л5Этроп;па и повышение пралгктип&

Устойч;ш к гдот&безэдкаски превращениям; оснсакькь ко^огаты: моио- и дщ-ЛЕкури-ц^зы

Активность ДЭС по сравнению с с зстрадиолом-17 ¡31

ТрансплацеЬтар-ная активность ДЭС в 20 раз ваше эстрадиола-Ир

Активность ДЭС выше зстрадисн ка-Пр

Токе

Токе

То г.е

.То ае.

а также содержание в семенниках тестостерона - в 2 раза и андростендиона - в 2,5 раза; аналогичные изменения определены и при однократном пероральном введении стильбепа. И-нгибирование репродуктивной системы животных при экзогенном введении ДЭС в определенной мере связано со снижением секреции лютропина и повышением - пролакти-на. Столь.'выраженная активность ДЭС обусловлена не только прямым иигибирующим влиянием на гонады, но и изменениями в основных звеньях гипоталамотипофизарно-рспродуктивной системы (табл. 1).

ДЭС хараактеризуется очень высокой специфической эстрогенной активностью. Более высокая экстрогенная активность ДЭС по сравнению с таковой основного женского полово-го гормона - зстрадиола-17р выявлена на животных различных стадий развития (табл. 1). Трансплацентарная активность ДЭС в 20 раз выше таковой эстрадиола-17р. В значительной степени эти различия обусловлены низким „сродством" ДЭС к а-фетопротеину, количество которого при беременности резко возрастает; по сравнению с эстрадио-лом-173 лишь 2,7% ДЭС взаимодействует с данным эстроген-свяэывающим белком (БИееЬап Б. >1., 1987). Исследоваания последних лет (Магеекю М.', 1-992; УапсМепО., 1993) показали, что стильбен обладает' .мутагенной и канцерогенной активностями.

ДЭС устойчив к метаболическим превращениям, его изменения з организме животных' сводятся к образованию конъюгированных форм. Согласно полученным данным, основной формой конъюгации является образование глюку-рснидов; процентное содержание глукуронидов по отношению к общей конъюгированной фракции в различных тканях и биологических жидкостях бычков, крыс и собак составляет не менее 76%. Прежде всего, экзогенно вводимый ДЭС попадает в печень, где он коньюгирует. Так, в печени бычков (стимулированных 36, 100, 126 мг ДЭС) количество конъюги-рованного стильбена было равно 63-86%, свободного лишь 14_37%. Причем 80-90% от общего количестваа конъюгатов, выявленных в печени бычков, приходится на глюкурониды. Следует отметить, что в печени экспериментальных животных - крыс (которым вводился ДЭС) также большая часть стильбена ксл'Ыйгирована; 87% общей конъюгированной

фракции составляли глюкурониды. Из печени с желчью ДЭС поступает в кишечник почти целиком в конъюгированном виде. Так, в желчи бычков ДЭС на 95-100% конъюгирован; причем в процессе конъюгации на 87-90% образуются глюкурониды. Следует отметить, что в цепи дальнейших превращений в кишечнике происходит гидролиз конъюгатов, что связано с действием ферментов микрофлоры кишечника. В ряде работ установлена способность бактерий кишечника бычка, крысы и собаки (Fischer L. Е., 1970; Huber Т. L., 1972; Blume Е., 1992) вырабатывать f> -глюкуронидазу, специфичную к ДЭС-глюкурониду.

Приведенные выше результаты исследований (табл.2) и данные литературы позволяют считать, что конъюгирован-ный в ткани печени ДЭС доставляется с желчью в кишечник, где после гидролиза бактериальной /3-глюкуронидазой он абсорбируется стенкой кишечника и вновь поступает в печень. Наличие печеночно-кишечной циркуляции и рециркуляции ДЭС подтверждается также и тем* что именно в печени и слизистой кишечника животных выявлено значительно более высокое содержание глгокуронйдов, чем в мышцах, жировой ткани и др.

Таким образом, введенный в оргаНШМ ДЭС основные превращения претерпевает в печени и КйШбЧИйке и продукты его метаболизма находятся в fiöCrö&HHöft,циркуляции между печенью и кишечником. Это Täte ШзЫваемое „функциональное депо" ДЭС и его наличие прИйодит к задержке и своеобразной кумуляции стимулятора в организме.

Остаточные количества ДЭС в продуктах животноводства исследованы при различных (рекомендованных в нашей стране и за рубежом) вариантах использования стильбе'на в качестве стимулятора роста крупного рогатого скота. При всех исследованных регламентах применения ДЭС в качестве стимулятора (различных дозах, сроках воздействия и. пр.) выявлены остаточные количества препарата в мясе и субпродуктах. При увеличении дозы имплантированного ДЭС повышаются его остаточные количества в ткани печени, почек и мышц. Особенно высокие уровни остаточных количеств ДЭС определены в тканях бычков при сочетании следующих трех фактороз: высокие дозы имплантированного стильбена, снижение продолжительности периода от момен-

та введения имплантата до забоя животных - с 3-х месяцев , до 30-40 дней, двукратная имплантация.

По по луче иным данным ДЭС кумулнрусг в жировой ткани;

-- содержание остаточных количеств стильбсна в жиро-рой ткани выше, чем в мышцах;

- удлинение периода от момента имплантации до забоя бычков приводит к снижению уровня содержания ДЭС в мышечной ткани, но не изменяет остаточных количеств стимулятора в жире;

- в жировой ткани ДЭС обнаружен только в свободной, неконъюгировашгой форме. Накопление стильбсна в по-конъюгированной форме в жировой ткани приводит к длительной задержке стимулятора в организме.

В целях гигиенической опенки продуктов животноводства проводили хронические, субхронические и острые эксперименты на крысах. В этих исследованиях смоделированы условия поступления ДЗС в организм человека с пищевыми продуктами - количество стильбсна (в пересчете на экспериментальных животных) соответствовало выявленным уровням содержания зезрегена в продуктах животноводства. Гигиеническая оценка продуктов животноводства проведена с использованием наиболее чувствительных тестов - влияние ДЭС на основные органы-мишени репродуктивной системы. В этих исеггзхк?заниях при различных вариантах проведения суб^оякчвсккх и острых опытов показано подавление репро-дутезтгвкой системы самцов крыс:

- снижение секреции семенниками основных половых гормонов - тестостерона и андростендиона;

- ингибирование роста добавочных половых желез;

- снижение концентрации тестостерона в сыворотке крови;

- подавление плодовитости.

В хроническом (19 месячном) эксперименте по скармливанию крысам мяса (от стимулированных бычков) установлено снижение веса экспериментальных жйвОтных, что, вероятно, связано с подавлением секреции половых гормонов, оказывающих в период роста выраженное анаболическое действие; у подопытных животных выявлено такжз сни-

Таблица 2.

Гигиеническая оценка продуктов животноводства, : полученных в условиях применения диэтилстильбэстрола

Наименование раздела

Гигиенические исследования продуктов животноводства

1. Остаточные количества ДЭС и его метаболитов в продуктах животноводства

1.1. Суммарное содержание основных фракций ДЭС

1.2. Количество свободной фракции стильбена

1.3. Содержание глюкуро-нидов

1.4. Степень накопления (кумуляции) в тканях

2. Хронические опыты (в течение 19 месяцев) по скармливанию экспериментальным животным мяса от бычков, стимулированных ДЭС

3. Субхронические и краткосрочные опыты по введению экспериментальным животным препаратов пищевых продуктов, содержащие остаточные количества ДЭС

При использовании основных способов применения ДЭС выялены остаточные количества в пищейых продуктах.

Печень> почки > жир > мясо

В мясе 80-90%, в печени 20-37%, в жире 100% (по отношению к суммарному содержанию всех фракций ДЭС)

В печени, почх^-х и др. тканях — 80—90% .(от общей конъюгированной фракции)

Установлена кумуляция ДЭС в жировой ткани. ДЭС включается в печеночно-ки-шечную циркуляцию и рециркуляцию, создавая „функциональное депо эстрогена" в организме

Снижение функционального состояния репродуктивной системы и ингибироваиие процессов роста экспериментальных животных (самцов крыс)

Выраженное зстрогенное и антиацдроген-ное дейстпие

,жшие процессов сперматогенеза. В гигиенических исследо- * рдииях продуктов животноводства установлено также воздействие на функциональное состояние женской репродуктивной системы - утеротропный эффект и изменения полового цикла самок крыс.

На основании результатов проведенных медико-биологических исследований ДЭС и гигиенической оценки продуктов животноводства в нашей стране запрещено применение препаратов данной группы; утвержден наиболее жесткий из принятых в гигиене питания регламентов - пищевое сырье и продукты животноводства, поступающие по импорту, не должны содержать остаточные количества ДЭС. Разработаны и утверждены (Метод, рек. № 2944; Авт. свид. № 438928) методы определения ДЭС и его метаболитов в продуктах животноводства, поступающих по импорту. Методы включают различные способы экстракции, гидролиза, очистки адсорбционной хроматографией и количественное измерение с использованием специфической фотохимической реакции и ГЖХ (электронный захват).

Методы анализа и определение содержания половых гормонов в продуктах животноводства

Несмотря на то, что первые результаты определения раз' личных стероидов групп эстрогенов и андрогенов в биологических жидкостях бычков и телок опубликованы более 40 лет назад (PaskoliF., 1953), изучению их содержания в „съедобных" тканях сельскохозяйственных животных посвящено относительно небольшое количество работ (Henricks D. М., 1978; Hoffmann В., 1981; ChiongD.M., 1992). Это связано с определенными методическими трудностями определения половых гормонов и их биологически активных метаболитов в тканях сельскохозяйственных животных.

Разработаны методы определения андрогенных и эстро-генных гормонов и гормональных препаратов в различных видах продуктов животноводства (табл.3): проведена сравнительная оценка различных способов экстракции свободных и конъ.:огированных форм стероидных гормонов, гидролиза конъюгатов, очистки экстрактов с использованием адсорбционной и распределительной хроматографии, количествен-

ного измерения - радиоиммунологическиыи и ГЖХ методами; дана метрологическая характеристика методов (Авт. свид. № 1012138; И91007520; К" 1273334; К" 376719).

Методы предназначены для осуществления гигиенического контроля содержания гормональных стимуляторов роста в продуктах животноводства, поступающих по импорту.

Определены уровни „естественного" содержания половых гормонов в различных видах продуктов животноводства (табл. 4 и 5).

Выявлены существенные различия содержания стероидных гормонов группы андрогенов в тканях крупного рогатого скота различного возраста и пола. С увеличением возраста бычков резко повышается в тканях животных - мышцах, печени, почках и хсире содержание основного полового гормона - тестостерона. Так, соотношения выявленных количеств гормона в ткани мышц у животных в возрасте 11-14, 15-17 месяцев и 2-3 года составляли 1:2,5:4,4; в ткани печени - 1:2,1:2,9. Зга динамика обусловлена повышением функционального состояния репродуктивной системы бычков с увеличением их возраста. Так, содержание тестостерона в тканях семенников у 15-17 месячных бычков по сравнению с таковым у 11-14 месячных животных возрастало в 1*6 раза.

Таблица 5

Суммарное содержание свободной и конъюгированной фракций эстрогенных гормонов в тканях телок (14-18 месяцев)

Наименование Содержание гермэкд, кг/кг (М±т)

ткал н Эстргшисл-.Пр Зезро и Эстриол

Мышцы 42,3 ± 4,3 1С,6 25,4 ± 7Д

Печень 138,4 ± 15,9 53.2 72,3 ± 12,6

Почки 96,1 ± 25,0 •Я,« 33,9 ± 12,7

Жир 22,5 ± 4,9 42,5 ± 15,0 15,9 ± 3,4

Динамика содержания андростендисна в тканях мышц, печени, почек и жира в зависимости от возраста бычков незначительная, е. выявленные изменения статистически недостоверны. Однако нельзя считать, что синтез андрсетен-диона с возрастом бычков остается на одном и том же уровне.

Таблица2.

Методы определения стимуляторов роста в продуктах животноводства

Группы стт.гулятороа роста Анализируемое оещество Основные стадии Авторские свидетельства. Методические рекомендации

1. Стильбены Диэтилстильбэстрол (еаободные и К01гью-гированные фракции) Экстракция, гидролиз, очистка в системе: IН ИаОН-эфир, адсорбцио!шая хроматография, специфическая фотохимическая реакция, ГЖХ (электронный захват) Авт. свид. № 438928; Мот. рех. К" 2944-83

Ц. Природные эстро-гешшо гормоны Зстрадиол-170, э строи, . остриол (свободные и конъюгированные фрак-иии) Экстракция, гидролиз, адсорбционная хроматография на колонке и в тонком слое, ГЖХ (электронный захват), радисюшуно-логический анализ Авт. свид. К» 1012138; Мет. рек. № 3208-85

ИШриродные андро-гснные гормоны Тестостерон, андростен-яион, 5а-дигидротесто-стерон Экстракция, гидролиз, очистка на колонке и а тонком слое адсорбсна, ГЖХ, радиоиммунологический анализ Авт. свид. К® 1007520

IV. Синтетические стероиды аняро-станового ряда Метилтестостерон, метила ндростенди ал и др. Экстракция, хроматографические методы, ГЖХ (электронный захват) Авт. свид. К5 376719; Авт. свид. N° 1273334; Мет. рек. изд. АН, 1986 г.

Таблица 4.»

Содержание андрогенных гормонов в различных тканях сельскохозяйственных животных

Гормон Животные Возраст, Количество стероида, >.гхг/кг (М±ш)

месяцы Мышцы Печень Почки Жир

Тестостерон Бычки 11-14 0,11 ±0,03 0,13 ± 0,03 0,90 ±0,05 2,80 ±0,60

Тоже 15-17 0,23 ± 0,04 0,71 ± 0,14 1,11+ 0,10 5,77 ± 0,30

То же 24-36 0,48 ± 0,17 1,30± 0,07 2,80 ±0,21 8,00 ±0,88 '

Андростендион Бычки 11-14 0,08 + 0,02 0Д5± 0,05 - 0,30 ±0,09 0,81*0,15

То же 15-17 0,08 + 0,003 0,17 ± 0,03 0,20 +0,035 0,47± 0,07 .

Тоже 24-35 0,17 ± 0,07 0,23 + 0,06 • 0,31 +0,06 0,84+ 0,11

Тестостерон Телки 16-18 0,08 ± 0,008 0,09 + 0,01 0,42 ±0,07 0,34+ 0,05

Кастрированные бычки 15-17 0,04 ± 0,01 0,05 ± 0,01 0,10 ±0,03 0,08 ± 0,03

Коэффициент тестостерон/аидро- стендион Бычки 11-14 15-17 24-36 1.4 3.5 2.8 0,3 4,2 5.7 3.0 5,5 9,0 ' 3.4 12,3 9,5

Так .как биосинтез тестостерона осуществляется через андро-стендион, то можно предположить, что в условиях повышения репродуктивной функции у бычков (в соответствии с увеличением их возраста) андростендион в возрастающих количествах используется в качестве предшественника для продукции более активного полового гормона - тестостерона. На это указывает также значительный рост коэффициента тестостсрои/андростендион в исследованных тканях с увеличением возраста бычков в результате повышения их репродуктивной функции (табл. 4)..

Низкое содержание тестостерона определено в тканях телок, и особенно, кастрированных бычков. Выявленные количества тестостерона в тканях кастрированных бычков обеспечиваются стероидсинтезирующей функцией надпочечников.

Тестостерон и андростендион содержатся в печени и почках крупного рогатого скота в количествах, значительно более высоких, чем мышечной ткапп, так как именно в этих органах осуществляется биотралеформация избыточных количеств гормонов и их экскреция.

При анализе тканей семепннков и жира тестостерон, преимущественно, определен во фракции свободных (не-конъюгированных) стероидов. Наиболее высокие количества конъгагированного тсстсстзрона выявлены в ткани печени и почек.

Выявленные количества эстрогснных гормонов - эстро-на, зстрадиола-ГГЗ и остриола в печени и почках выше, чем в мышцах и жпг^псГз ткани телок (табл. 5), Содержание эстрогенов в бнематериале от стельных коров существенно выше, чем у текок. В молоке и молочных продуктах эстрадиол-17$ присутствует как в свободной, так и в связанной формах. Большая часть зстраднола-17р выявлена в молоке в свобод-нон (неконъюгнрованной) форме. Суммарное содержание кенъюгнреваннон и неконъюгированной фракций эстрадио-ла-17р в молоке составляло 39,0 ±11,2 пг/мл, в твороге-19,4± 1,8 пг/г, в сыре - 12,9±1,8 пг/г. Средние уровни связанного эстрогена по отношению к свободной неконъюгированной его форме равны в молоке 26%, в твороге - 19%, в сыре - 24%.

Полученные данные дополняют имеющиеся представле-

ния о распределении половых гормонов в различных ftëâHtf* и биологических жидкостях сельскохозяйственных животных и могут быть использованы при проведении ветеринарно-санитарных и медико-биологических исследований по оценке стимуляторов роста, кормовых добавок, разнообразных воздействий на репродуктивную систему, а также в целях разработки критериев качества продуктов животноводства.

Медико-биологическая характеристика эндогенного пептидного препарата из боенской крови птицы и гигиеническая оценка продуктов животноводства

Анаболический препарат получен из эндогенного сырья -боенской крови птицы и предназначен для использования в промышленном птицеводстве (Авт. свид. № 1431108). Из боенской крови птицы общепринятым методом получали сыворотку крови; высокомолекулярные соединения сыворотки крови осаждали при pli 5,2. Применение ультрафильтрации также позволяет провести очистку препарата от высокомолекулярных соединений. Метод получения биопрепарата включает стадии лиофилиэации и автоклавирования; препарат стерилен. Химические свойства; удельный вес- 1,005, рН 5,2, содержание пептидов, полипептидов и аминокислот -62 мг%; половые и тиР*оидные гормоны в препарате не обнаружены.

Ветеринарно-токсикологические исследования, проведенные Государственным контрольным институтом ветеринарных препаратов, не выявили каких-либо особенностей действия биогенного стимулятора, которые могли бы обусл-вить „нефизиологическое" развитие птицы. Эти результаты были получены в условиях сельскохозяйственных экспериментов как при применении рекомендованных регламентов введения биопрепарата, так и при обработке птицы агровированными количествами стимулятора, Эффективность эндогенного препарата показана в широких производственных опытах - 40 тыс., 20 тыс. и 60 тыс. голов цыплят, при применении биопрепарата установлено статистически достоверное повышение мясной продуктивности бройлеров; анаболическое действие реализуется через сАМР-систему.

При проведении медико-биологической оценки стимулятора роста, прежде всего, учитывали, что он получен из эндо-

генного сырья, является „природным" биопрепаратом, на содержит каких-либо чужеродных соединений или трксичес-ких веществ. В препарате не выявлены половые гормоны, применение которых в качество стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и птицы регламентируется в нашей стране и за рубежом (Инструкция II® 3202; Мет. указания №5061). По химическому составу биогенный стимулятор является, преимущественно, пептидным препаратом, который легко гидролизуется до аминокислот в желудочно-кишечном тракта и тканях организма.

Способ взедения цыплятом препарата из бсснской крови отвечает необходимым требованиям: стимулятор вводится за два месяца до забоя, однократно, в форме аэрозоля - выдерживание цыплят в течение 30 мин. в герметичном пространстве с распыленным биопрепаратом.

С использованием биологических методов проведено исследование влияния пептидного препарата на репродуктивную систему экспериментальных животных. Биогенный стимулятор не изменяет функционального состояния мужской и женской репродуктивных систем и не обладает гона-дотоксическим действием.

Проведена гигиеническая оценка мяса бройлеров, стимулированных пептидным препаратом; в условиях субхронического опыта экспериментальным животным скармливали исследуемые образцы мяса. Животные развивались нормально, каких-либо отклонений по показателям физиологического состояния выявлено не было, поведенческие реакции не были изменены; масса тела животных и" весовые показатели внутренних органов в опытной и контрольной группах не отличались. Проведенные морфологические исследования указывают на отсутствие каких-либо патологических, токсических изменений макро- и микроструктуры внутренних органов лабораторных животных, которым скармлизалп мясо, полученное в условиях применения пептидного препарата. У лабораторных животных исследовали также гормональный статус. В этих исследованиях не было выявлено различий в уровнях секреции гормонов периферических желез внутренней секреции. Следовательно, через мясо не передаются какие-либо факторы, вляющие на гормональный статус. Этот вывод согласуется с результатами исследований гормонов з

сывортке крови птицы на заключительной стадии ее выращивания. Величины содержания тестостерона (суммарно с 5 ß-дигидрстестостероном), тироксина, трпйсдтиронина, инсулина, Н-оксикортикостероидов, альдостерона в сывортке крови контрольных и опытных бройлеров не 'отличались и соответствовали физиологическим уровням.

Таким образом, по исследованным показателям химико-технологической, ветерипарнс-токснкологической и медико-биологической оценки биогенный пептидный препарат, рекомендованный для применения в птицеводстве, отвечает принятым требованиям (Инструкция №3202; Мет. у.кщз. К® 5061).

Сравнительные исследования эффективности использования в пушном звероводстве различных комбинаций анаболических препаратов

Производимые в различных странах (в промышленные услозпях) комбинированные препарата преимущественна состоят из стимуляторов роста, относящихся к классу сипте, тических й природных эстрогенов и андрогенов р близким механизмом анаболического действия (Joint FAO/WHQ foods standards programme codex committee.on residues of veterinary drugs in foods, 1984, 1989, 1991).

В проведенной экспериментальной работе предпринята попытка использовать другой подход к разработке способа стимуляции роста ".ивотннх - исследовать эффективность комбинаций биорегуляторов, 'одновременна влияющих на несколько регулятор;-:ьс; систем по синтезу белке в организме. Отработка способа стимуляции роста проводилась на норкам, так как планировался объем исследований, который можно было бы завершить получением ростстимулпругащего эффекта, увеличением размеров и качества шкурок (в пушное звероводстве утилизируются, как известно, только шкурки). В данном случае не было необходимости в проведении полного комплекса медико-биологических и гигиенически?; нссладозениЯ.

Изучено 3 группы стимуляторов роста: стероиды андроста-полого ряде, обладающие прямым стимулирующим влиянием lia синтез белка; пептиды, способствующие секреции гор-маки роста; перхлораты, влиякшше на процессы катаболиз-iii белка.

Следует отмстить, тгго специфический гипоталамичес-кий фактор, освобождающий гормон роста - соматолиберцн является крупным полипептндом,-состоящим пз 44 аминокислотных остатков. Производственный (или- лабораторный) синтез столь крупного полипептида .сложен. Вместе с тем в литературе имеются сведения (Jo'mston D. G., 1985; Zeytin F. N., 1986; Hoffmann В., 1988), что простые пептиды и даже отдельные аминокислоты (в. концентрациях значительно больших, чем соматолиберин) стимулируют секрецию гормона роста. Учитывая изложенное,*в Институте бпоорганпческой химии РАН им. М. М. Шемякина был синтезирован ряд простых пептидов, из которых самыми активными оказались гекса-пептиды-анаболлиберин и апаболлиберин-амид.

Выбор препаратов для включения в комбинации биорегуляторов осуществлен на основе исследований взаимосвязи химической структуры и биологического действия стимуляторов роста и их медико-биологической оценки (Мет. реком.. 1985, 1986,1987 гг.).

В производственных опытах было задействовано более 400 корок. Исслецовано 4 комбинации анаболических веществ, каждая из которых включала тот или иной стероид андроста-нового ряда, пептидный препарат и перхлорат аммония или магния. В результате проведенных исследований определена наиболее эффективная комбинация биорегуляторов: андростенолон, анаболлиберин, перхлорат магния.

Андростенолон малотоксичен, скорость его метаболического клиренса, биологической инактивации и элиминации выше, чем метиландростендиола, метандростенолена и других близких по химической структуре стероидов. Анаболлиберин нетоксичное соединение, в организме быстро гидролизуется до природных аминокислот. С использованием радиоиммунолсгических методов показано, что гскса-пептид не вызывает изменений глюкскортикоиднон функции коры надпочечников, ке влияет иа щитезндную желгезу, репродуктивную систему и другие железы внутренней секреции. Перхлорат магния характеризуется не высокой токсичностью; при различных способах введения препарат быстро диссоциирует и экскретируется из организма. Данный препарат не вызывает у норок изменений секреции гормонов репродуктивной системы, глюкокертикоидов, прогестерона.

Как показано на рисунке 1, при трех уровнях доз установлен анаболический эффект комбинации биологически активных веществ: андростенолон - 0,5-1,0 мг/кг массы • тела, анаболлиберин - 0,05-0,1 мг/кг, перхлорат магния 0,5-1,0 мг/кг (Ьй вариант); 0,75-1,5 мг/кг, 0,075-0,15 мг/кг, 0,75-1 ;5 мг/кг (2'й вариант); 1.0-2,0 мг/кг, 0,1-0,2 мг/кр, 1,0-2,0 мг/кг (З'й вариант).

В результата проведенных исследований разработан способ стимуляции роЬта (Авт. свид. К® 1124467) и предлржень» методические рекомендации для применения данного способа в промышленном звероводстве. -

Медико-биологическая характеристика стимулятора

лактации - генно-инженерного бычьего соматотропина

Дана характеристика физико-химических и биологических свойств генно-инженерного бычьего соматотропина, полученного в США фирмой „Монсанто" в производственных условиях. С использованием различных методов показано, что степень очистки рекомбината бычьего соматотропина (р-БСТ) очень высока (не менее 95%); препарат представляет собой почти гомогенный белок, свободный от примеси гене-: тически близкого гормона - пролактина, а также от бактериальных белков. В препарате р-БСТ определена небольшая примесь димера. По ряду характеристик; хроматографичес-кому профилю, электрофоретической подвижности, молекулярной массе, иммунологическим свойствам, специфичности к рецептору - рскомбинанг бычьего соматотропина в значительной мерс соответствует гипофизарному гормону и является блиуиш его аналогом.

Рокомбинант характеризуется высокой лабильностью, быстро и полностью гидролизуется протеолитическими ферментами; при пероральном введении животным подвергается, как любой белок, протеолизу до аминокислот. Р-БСТ. на ойпедсэт мутагенной, эмбриотропной, трансплацентарной и гсиздотропной активностями. Не выявлено изменений в урознях выработки стероидных гормонов андростанового ряда, глококоргнкоздов, инсулина, тиреоидных гомоноа у кнготкых раннего постнгтального периода, ползавших 1голо;хо от лшсшрукзщш самок, которым вводился рекомби-гшгг. В образцах мзлоха, полученных в условиях использова-

М|1 О °»»"|ооог« ;

,'Л.и' Л У О», с!

>1(4ЫНТ

Ярдом; Средине

ИИПТШЬ

Й

Г1'|.1>

■Чц-

! • ..Ч ..1. |

2.7

11

им

кши-ипь

А

10 "

'.-«.II

1 икт

р-Ц^М "И-"« Ч

Рис. 1. ЛняСзл:г-:ос:;оз лгГ:с-2;:е комС;-.;:ации биостимуляторов.

Уровни лоз стимуляторов роста СI, II, Ш варианты) приведены в тексте.

ния самых низких (из рекомендованных/ уровней доз р-БСТ, не выявлено статистически достоверных отличий суммарного содержания рекомбинанга и природного ерматотропина в биопробах от стимулированных корев по сравнению с „естее^ венным" уровнем природного гомона роста в Ыодоке от ии? тактных животных. В опытных образцах молока не выявле.-но изменений количественного содержания основных нутрит ентов - белков и жира, а также исследованных стероидных гормонов, тироксина и инсулина, Субхроническое введение (скармливание) экспериментальным животным опытного молока не влияло на функциональное состояние желез цнут- '' ренней секреции. В различных работах показаны значительные различия бычьего гормона роста и соматотропина человека по аминокислотному составу (на 35%), физико-химическим, иммунологическим свойствам, видовой специфичности и другим; бычий сомдтетропин не вртупает в гормон-рецепторные отношения с рецепторами к гормону роста, по- : лученными из тканей человека (Сагг D., 1976; J^esniak М- А., 1977; Daughaday W. Н., 1992; Zgytin F. N., 1986). Многократные попытки коррекции роста введением бычьегр сематотропи-на больным с нарушенной ремрецией гормона ростр, оказались неэффективны (BergenstaJ D, Mi, 1960s Seeburg Р, fi, 1983; Hoffmann В., 1988). Учитывая иэлрженные данные, можно предположить, что р-БСТ, являющийся nqjffiWM аналогом „природному" бычьему гормону ррстэ, не ддлжрн обладать специфической ростстимулирующей аКТНРНВ5Тьк) при его введении человеку.

В нашей стране не разработаны прргдоцшенные технологии получения генно-инженерных сом^тотропинов сельскохозяйственных животных; отсутствует производство биорегуляторов данного класса. В связи с этим в настоящее время проводятся химико-технологические, ветеринарно-токси-кологические и медико-биологические исследования тех . генно-инженерных соматотропинов, которые в наибольшей степени соответствуют критериям комплексной оценки. К их числу относится данный рекомбинант бычьего соматотропина, применение которого разрешено в отдельных странах (Food and Drug Administration, 1990).

Система комплексной оценки различных групп . стимуляторов роста сельскохозяйственных животных

Предлагаемая система комплексной оценки стимуляторов продуктивности сельскохозяйственных животных включает следующие разделы: краткая классификация стимуляторов роста, критерии характеристики биорегуляторов и основные стадии их изучения, общие токсиколого-гигиеничес-кие требования, порядок выполнения и объем исследований, гигиенический контроль содержания остаточных количеств стимуляторов роста в продуктах животноводства, специфические показатели ветеринарно-санитарных, медико-биологических исследований стимуляторов роста и гигиенической оценки продуктов животноводства.

В краткой классификации стимуляторов роста выделены основные группы гормональных, гормоноподобных и негормональных препаратов, которые производятся в нашей стране и за рубежом в промышленных услозиях для применения в животноводстве. Одним из ключевых разделов является разработка специфических показателей характеристики различных групп анаболических веществ, которая осуществляется на основе первых 2-х этапов исследований:

- химическая и физико-химическая характеристика биорегулятора, количественное содержание в препарате основного анаболического соединения, биологически активных веществ и токсических примесей;

- определение биологического действия стимулятора, основных органов-мишеней и процессов, язляющихся результатом непосредственного воздействия биопрепарата.

Ветеринарно-санитарные, медико-биологические исследования стимуляторов и гигиеническая характеристика продуктов животноводства выполняются как с использованием общепринятьпе критериев оценки, так и применением специфических показателей. !

Общие токсиколого-гигиенические требования едины для различных классов соединений химического и биологического синтеза, предложенных для использования в животноводстве. Эти общепринятые показатели медико-биологических исследований включают токсикологическую характеристику стимулятора роста, оценку гонадотропного, эм-

бриотоксического, канцерогенного, ^мутагенного действий препарата, его кумулятивных свойств и др. Гигиенические исследования продуктов животноводства проводятся в условиях субхронических и хронических опытов на экспериментальных животных. ,

При проведении гигиенического контроля продуктов животноводства на содержание остаточных количеств стимуляторов роста следует учитырдт& степень их токсичности-Прежде всего необходимо определять в пищевых продуктах „приоритетные загрязнителя", Для выполнения необходимого объема, частоты анализов ц соблюдения порядка отбора биопроб „приоритетные загрязнители" распределены на группы в зависимости от токвдчноетч, выраженности их специфической эстрогекной, щдрргецной активности и гигиенических регламентов их иШР^ьзования (табл. 3). Гигиеническому контролю на „пряорнтртные загрязнители" подлежат продукты животноводству, поступающих по импорту, так как о нашей стране стильбе^ (дизтилстильбэртрол), эстра-диол-17(3 и тестостерон не ирпо^ь»зуются в качестве стимуляторов роста сельскохозяйственных животных,.

Комплекс специфцче§нн^' Показателей для отдельных групп стимуляторов Р99Т& Н§ ГРрмр^рецепторных

отношениях в органах-мирш^я*» & пррнрхрдит изби-

рательное накопление гормрна-Льныг где они в

основном осуществляют ПрИРУЩ&Р РМ РЛИЯНШг Природные и синтетические стерр^дныг, эс^рргенные, андрогенные, прогестогенные горщю&ттш а также низкомо-

лекулярные соединения ЩУТШ Групп свободно проншеагзг через ¡слаточную мембрану в вдтрплазму, где связываются с соответствующе«! р^§§к:рмрлекулярными белковыми рецепторами, спеиифич^уми для каждого гормона; пептидно-белковые гормоны, не проникая е клетку, взаимодействуют с рецепторами клеточных мембран.

Необходимые показатели включают определение, прежде всего, тех эндогенных гормонов, уровень которых в биологических гладкостях и органах-мишенях может быть изменен в результате прямого влияния анаболических препаратов на их синтез, секрецию, связывание с рецепторами и транспорт.

Дополнительные тесты рассчитаны на исследование

систем организма, которые могут подвергаться вторичному воздействию. К числу дополнительных тестов отнесены также исследования, рассчитанные на применение сложных, трудоемких методов.

Система специфических показателей основана на химических, биохимических, иммунологических и морфометри-ческих методах и предназначена для проведения комплексной оценки стимуляторов продуктивности сельскохозяйственных животных.

ВЫВОДЫ

1. Стимуляторы роста группы диэтплстильбэстрола характеризуются выраженным токсическим действием на органы-мишени экспериментальных животных различных периодов онтогенеза: беременных самок, лактируюших самок, новорожденных особей, половозрелых самцов. Низкие дозы диэтилстильбэстрола оказывают резко зыражен-ное антиандрогенноз действие: подавляют формирование мужской головой системы в течение внутриутробного и постнатального периодов развития, ингибируют синтез половых гормонов, нарушают процессы сперматогенеза и плодовитости животных. Эстрогенная и трансплацентарная активности диэтилстильбэстрола выше, чем эстрадиола-17 Р.

2. Диэтилстильбэстрол устойчив к биотрансформации в организме животных, его метаболизм сводится к образованию конъюгированных форм- в основном глюку,ронидоз; стильбе:! включается в пачзночно-ккшечнуго циркуляцию и рециркуляцию, создавая „функциональное депо" эстрогена в организме. Г1рп всех рекомендованных специалистами сельского хозяйства способа" стимуляции роста крупного рогатого скота с использозанием диэтилстильбэстрола выявлены его остаточные количества в продуктах животноводства* эстроген кумулирует в жировой ткани. Наиболее высокий уровень остаточных количеств стильбена определен в почо ни бычков.

3. В условиях хронических, субтропических и острых опытов по гигиенической оценке продуктов животноводства (полученных в условиях применения диэтилстильбэстрола) выявлено подавление функционального состояния репро-

дуктивной стистемы экспериментальтпа? гапшггпь», процессов сперматогенеза, ингибированио секреции мужских половых гормонов, нарушение плодовитости.

На основании полученных результатов по медико-биоло-. гической характеристике диэтилстильбэстрола и гигиенической оценке продуктов животноводства в нашей стране запрещено применение препаратов данной группы в качестве стимуляторов роста сельскохозяйственных животных.

4. Разработаны методы определения и регламенты содержания диэтилстильбзстрол& в продуктах жирртнрврдства, поступающих по импорту (Мет. реком.. № 2944-83, № 4053-85, К9 5061-89; Авт. свид. № 433928), методы рсирваны на адсорбционной хроматограф}^? И количественном -измерении с использованием Г/КХ (эя§КТронный захват) и специфической фотохимической реакции.

5. Рекомендованы методы определения эстрогенных и андрогениых гормонов в продуктах животноводства (Авт, свид. №376719, № 1007520, Н3ШШ38, N'1273334; Мет. реком. . № 3208-85, №4053-85, №5175-90), -МбТРДЫ основаны на применении адсорбционной хроматографии, ГЖХ и радиоиммунологическом анализе. Определены уровни „естественного содержания" в продуктах животноводства эстрогенов - эст» радиола-17Р, эстрона, эстриола и андрогениых гормонов -тестостерона, 5а-днгидротестостерона и андростендиона.

6. Разработан способ стимуляции роста для применения в промышленном птицеррддтРР (Авт. спид. № 1431108), дана медико-биологическая "ощшкй ртиму-ПЯТОрз - пептидного препарата из Соенской крови ПШШ.- Эфф§и?г?рнрстъ предлагаемого биорегулятора ПР»?83аИ8 Р пррнзррдственньах опытах на птице, стимулятор гшишй.о? пул сАМР. Пептидный препарат не нарушает фуШШНрндльноге состояния периферических желез внутренней секреции и не обладает гонддоток-сическим действием, Показатели гигиенической оценки мяса опытных и контрольных бройлеров не отличались; при скрамлизании опытных образцов мяса бройлеров экспериментальным животным не выявлено изменений гормонального статуса, а также морфологических и гистохимических показателей органов и тканей.

7. Предложен способ-стимуляции роста, рассчитанный на применение о промышленном • звероводстве комбинации

анаболических препаратов: андростенолон, анаболлиберин и перхлорат магния (Авт. езид. №1124467); установлен диапазон действующих доз, определены оптимальные дозы комбинации анаболических препаратов и рекомендована методика их 'применения в качестве стимуляторов роста животных (Мет. реком. изд. КО АН, 1986,1987 гг.),

8. Дана характеристика физико-химических и биологических свойств генно-ипеженйрного бычьего соматотропнна, полученного в США в производственных условиях. Рекомби-нант является выскоочищенным белком (степень очистки 95%), свободен от примеси генетически близкого гормона -пролактина, а также бактериальных белков. По совокупности химических, физико-химических, иммунологических и биологических свойств рекомбинант почти полностью соответствует природному бычьему-гипсфизарному гормону.

Генно-инженерный .ррматотропии сысеколабильное соединение, быстро подвергается прртеолизу; не обладает мутагенной, трансплацентарной, эмбиотропной, гондоток-сичнсй-активностями. Не выявлено изменений гормонального статуса экспериментальных животных, получавших молоко от лактирующих самск, которым вводился рекомбинант. Биопрепарат повышает молочную продуктивность на 11-24%. . .

9. Разработана и внедрена s практику государственного санитарного надзора страны систра компле!ссной оценки разлтгчных групп стимуляторов роста сельскохозяйственных животных, которая определяет порядок, объем и методическое обеспечение работы по основным разделам данной проблемы;. х51микс-технолстачсск5жг, детеринарно-токсикологи-псскщ, медико-биологическ!^ исследований и гигиенической оценки продуктов .-"ИЕОтг'сзодстпа (Инструкции, Методические рекомендаций ' « укясзкия утверждены и изданы Министерствами здрасосхранения - N* 3202-85, Ка 2944-83,

3203-85, К9 3.177-34, 5QSÍ-S9, ^5175-90, сельского хозяйства- 1SS5,1937,1593,1994 гг. Академией наук - 1926, 1987 гг. и др.).

10. Система комплексной оценки стимуляторов роста включает основные направления и зтапы работы при проведении медико-биологических н ветеринарно-саннтарных исследований биопрепаратов, методы определения и регла-

менты содержания остаточных количеств стимуляторов в продуктах животноводства, общие токсиколого-гигиеничес-кие требования, а также специфические критерии и показатели характеристики различных групп биорегуляторов, предложенных для применения в животноводстве. •

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ В ПРАКТИКУ

1. „Методические рекомендации по определению химическим методом остаточных количеств диэтилстильбэстро-ла в продуктах животноводства и в биологических жидкостях", утверждены Министерством здравоохранения, Н° 2944-83; разработаны совместно с М. Ф. Нестериным и М. П. Черниковым, М., 1984, Юс.

2. „Методические рекомендации по определению химическим методом остаточных количеств эстрадиола-lTß в продуктах животноводства", утверждены Министерством здравоохранения, № 3208-85, М., 1985,7 с.

3. Регламенты содержания стимуляторов роста в продуктах животноводства изложены в рекомендациях „Санитарно-гигиенические требования к качеству продовольственного сырья и пищевых продуктов, поступающих Tic импорту", утверждены Министерством здравоохранения, 4053-85, М., 1985, С. 2.

4. „Инструкция по проведению ветеринарло-токсиколо-гических, медико-биологических исследований стимуляторов роста сельскохозяйственных животных и гигиенической оценки продуктов животноводства", утверждена Министерством здравоохранения, № 3202-85, Министерством сельского хозяйства, № 115-ба, Ветфармсоветом, №29-2; разработана совместно с А. И. Заиченко, В. А. Тутельяном, А. В. Архи-повым, А. С. Селивановой, М., 1985,17с.

5. Предельно-допустимые концентрации стимуляторов роста в мясных продуктах приведены в разделе У „Содержание гормональных препаратов" в Методических указаниях по проведению государственного санитарного надзора за поступающими по импорту продовольственным сырьем и пищевыми продуктами, утвержденными Министерством здравоохранения, К» 3177-84, М., 1985, С. 42.

" -6. '„Рекомендации по использованию стимуляторов рос-

та и промышленном звероводстве"; утверждены Карельским отделением Академии наук; разработаны совместно с В. л. Берестовым, II. Н. ТготгоНник, В. В. Баовым, Петрозаводск, 1936,12с.

7. Гигиенические регламенты использования перхлората магния в животноводстве изложены п рекомендациях „Препараты ХКМ (Ростом М) для интенсификации откорма крупного рогатого скота", утверждены Гссагропромом 10.09.36 г., согласованы с Министерством здравоохранения 05.09.86 г., М., 1937, С. 11-12.

8. Порядок отбора биопрсб и периодичность исследований остаточннх количеств гормонельных препаратоз в продуктах животноводства приведены з Методических указаниях „Порядок к периодичность контроля за содержанием чужеродных веществ в продуктах питания и продовольственном сырье учреждениями санитарно-эпидемиологической слу;хбы", утверждены Министерством здравоохранения, ?Г 5175-90, М., 1990, С, 16,20.

9. „Рекомендации по определению анаболических гор-коноз в биологических жидкостях и тканях пушных зверей", утверждены Карельским отделением Академии наук; разработаны совместно с В. А. Берестовым и Н. Н. Тютюнник, Петрозаводск, 1986, 1Сс.

10. Гигиенические регламенты содержания стимуляторов роста з мясных и молочных продуктах питания изложены в Методических указаниях „Медико-биологические требования. и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов", утверждены Министерством здравоохранения, №5061-89, М., 1990, С. 47, 51, 54-56, 59-62, 65-67, 166,167,177.

И. „Рекомендации по применению естественного им-муномодулирующего препарата - комплекса активных фак-тороз иммунитета в животноводстве", разработаны совместно с А. М. Никитенко, В. А. Журбенко, В. И. Шарандак, В. В. Малина, В. П. Киричз нко, Н. В. Булей, утверждены Министерством сельского хозяйства, Укриздат, 1994,15с.

12. Показатели медико-биологической оценки природных цеолитов изложены в рекомендациях по их использованию в животноводстве в качестве детоксикационного средства „Химические и биологически? сзойства цеолитов", М., 1994,20с.

13. „Рекомендации по применению природного иммуно-модулятора - гомотина б ветеринарии", разработаны совместно с А. М. Никитенко, В. И. Шарандак, В. В. Малина, В. П, Ля-сета, Л. А. Заика, В.П.Кириченко, И. И. Мельник, утв. Министерством сельского хозяйства, Укриздат, 1994; 18с»

ИЗОБРЕТЕНИЯ

1. Л. Ф. Адигамов. Способ количественного спррделзни^ гормонального препарата в мясных тканях. Двт, £ВИД» № 376719, Бюлл. К* 17,1973.

2. Л. Ф. Адигамов, М. Ф. Нестерин. Способ кольче стремного определения гормонального препарата в мясных тканям Авт. свид. К® 438328, Бюлл. К0 29,1974.

3. Л. ф. Адигамов. Способ количественного рпррделевдя стероидных: гормонов в биологических субстратах, Дсвущ. № 1012138, Бюлл. 14,1982.

4. Л. Ф, Аднггмоз, Ы. Ф. Нестерин, В. Д. Н^гфрнТ&Р.- Способ определения гормональных, препаратов в мясных. продуктах. Авт. свид. №1007520,1982,

5. Л. Ф. Адигамов, В. А. Берестов, Н. Н. Тютюнник, М.П.Черников, В.В.Баев. Способ выращнаакия молодняка пушных зверей (с использованием стимуляторов роста). Авт. спид. К0 1124467,1984.

6. Л. Ф. Адигамов. Способ определения стероидных гормонов в биологических, объектах. Авт. скид. К81273334, Бк>ял. № 44,1984.

7. | Е. Л. Щедрин,| Л. Ф, Адигамов, Б. И. Крюков, В. Д. Ни-

фонтов, Б. Н. Долгий, Т. Б. Логунова, Б. И. Трубицын, П. Е. Бар-рос, С. П. Петухов, Н. А. Криницкая. Способ выращивания птицы (с использованием стимуляторов роста). Авт. свид. К*1431108,1985.

СПИСОК ОСНОВНЫХ ПУБЛИКАЦИЙ • ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Л. Ф. Адигамов, Г. П. Вавилина, Л. Я. Соловьева. Определение диэтилстильбзстрола в мясе и субпродуктах.//Ги-гнена и санитария. -1971, .4° 10. - С. 73-75.

2." Л. Ф. Адигамов, К. А. Перевощикова. Использование некоторых методов хроматографии при определении метан-

дростенола в экстрактах мышц.//Вопросы мед. химии. -1971. - Вып. 5. - С. 552-558.

3. JI. Ф. Адигамов. К определению метандростенолона в экстрактах печени и почск.//Проблемы эндокринологии. - 1972. - № 4. - С. 99-102.

4. Л. Ф. Адигамов, Л. Я. Соловьева, М. Ф. Нестерин. Исследование остаточных количеств диэтилстильбэстрола с использованием специфических химических методов.// Вопросы питания. - 1972. - К0 3. - С. 76-80.

5. Л. Ф. Адигамов, М. М. Гаппаров, Б. В. Оттесен с соавт. К вопросу количественного определения тестостерона и его синтетических аналогов в тканях и биологических жидкостях стимулированных гормонами животных.// Вопросы питания. - 1973. - № 2. - С. 61-66.

6. Л. Ф. Адигамов, М. Ф. Нестерин. Специфический денси-тометрический метод определения диэтилстильбэстрола в тканях мышц, печени, почек.//БЬлл. эксперим. биол. мед. - 1973. - № б. - С. 7S-30.

7. Л. Ф. Адигамов. К вопросу количественного определения дианабола в тканях мышц, печени и почек.//Вопросы мед. хи:лии. - 1973. - Вып. 6. - С. 553-556.

8. Л. Ф. Адигамов, М. Ф. Нестерин. Метаболизм гормональных стимуляторов роста и химические методы их опре-деления.//Обзор литературы. - Вопросы питания. - 1973. -№6.-С. 43-50.

9. L. F. Adigamov, М. F. Nesterin. Spezifische densitometrische Methode zur Bestimmung von Diathylstiibostrol in Muskel-, Leber- und Nierengewebe.//Die Nahrung. - 1974. N3. -S. 281-283.

10. JI. Ф. Адигамов. Способы хроматографической очистки экстрактов и количественного определения синтетических аналогов тестастерона.//В кн.: „Гормоны и гормональные препараты з животноводстве". - 1974. - С. 141-144.

11. Л. Ф. Адигамов, М. Ф. Нестерин. К вопросу метаболизма гормональных стимуляторов роста в организме.//Ш Всесоюзный биохимический съезд. - Рига. - 1974. - Т. 1. - С. 90.

12. Л. Ф. Адигамов. Флюорометрический метод определения остаточных количеств ряда синтетических андрогеноз для токсикологической оценки ~ продуктов животновод-

ства.//В кн.: Питание эдоровр^р я больного человека. -Алм£-Ата. -1974. - С, 9-14,

13. В. П. Радченков, М, Ф, Педтерин, Л. Ф. Адигамов с соавт. Рост бычкоз под влиянием диандбрла и методы определения остаточных ¡адличРРТВ препарата в. органах и тка-няхУ/Бюлл. физиологии» биохимии и питания сельскр-хозяйственмых жиРОТИШ, ~ }976, - Вып. 4. - С. 44-47.

14. Л. Ф.'Адигамов, Г, И. Ррпт&Ш, Д. А.-Лебедев. Участке панкреатической РНК-ЗЗЫ й пррцессах пищеварения.// Вопросы питания, - 197(5, я = С. 20-26.

15. М. Ф;Нестерин, Л, Ф, Адигамов, Б. Г.Ляпков с соавт. Остаточные количества метандростенолона и его метаболитов в тканям сельскохозяйственных жквотных.//Воп-росы питания. 1917. № б. - С. 58-64. .

? 6. Л. Ф. Адигамор, М, Ф* Нестерии. К оценке влияния анаболических стсрридрз группы андрогенор на стероидгенез в микросомах додздшиков крыс./ЛУ Всесоюзный биохимический съезд, Дошшград - 1979. - Т. 3. - р. 5.

17. В. В. Баев, Л. ф, Ддигедлов. Влияние синтетических гексд? пептидов на гипрфпз }» периферические железы внутренней секреции.//2?п Н&циональный конгресс эндокринологов Болгарин, = Т1ДОРРР? ~ 1975. - С. 7-8.

18. Л. Ф. Адигамор, М» П» ЧррНИКее» Грр::;р?}ы ?дрдрка и их биологическая молочный конгресс. -М., 1982.-С. Ц7.

19. Л. Ф. Адигамов, В. В. Баев, М, П, Чрриц^од. Исследование способов синтеза и биологических свойств анаболических пептидов и л;агшберипа.//Материалы IV Всесоюзного симпозиума „Химия белков и пеггшдоз". - Рига. - 1983. -С. 18.

20. Л. Ф. Адигамр», М, П.- Черников. Определение активности щелочной р^брпу&лсазы в разных биологических жид-ксстях.//Лаб. дела, = 1984. - № 2. - С. 107-110.

21. С. Г. Грибакин, Д. ф, Адигамов. Значение анализа содержания гормонрд в молоке для ' практики детского пита1ШЯ.//ХИ съезд педиатров Эстонии. - Таллин. -1985. - С. 112-113.

22. Л.Ф. Адигамов, М.П.Черников. Исследование в женском грудном молоке гормонов, влияющих на синтез болкеУ/Проблемы эндокринологии. - 1985. - Т. 31..... КЧ.-С.31-33.

23. JI. Ф. Адигамов, М. П. Черников. Стероидные гормоны андростановсго ряда в тканях крупного рогатого скота различного пола, возраста и при воздействии перхлората аммакия.//Сгльскохозяйственная биология. — 1985. - № 4.-С. 79-81.

24. С. Г. Грибакин, JI. Ф. Адигамов. Значение защитных факторов и биологически активных веществ молока (обзор литературы).//Вопросы охраны материнства и детства. - 1985. -№ 1.-С. 15-18.

25. Л. Ф. Адигамов, Л. И. Смирнова, В. Д. Нифонтов с соавт. Гормональная регуляция анаболических процессов и эффективность утилизации белка в пеонатальном перио-де,//Вюлл. эксперимен. биологии и медицины. - 1985. -№ 6. - С. 687-639.

26. Л. Ф. Адигамов, М. П. Черников. Определение стероидных гормонов в тканях сельскохозяйственных животных с применением ГЖХ и радиоиммуно логического анали-за.//Дсклады В АСХНИЛ. - 1935. - № 10. - С. 28-30.

27. Л. Ф. Адигамов. Система специфических показателей комплексной оценки стимулятороз роста сельскохозяйственных животных (обзор литературных и собственных данных).//Труды Института питания АМН СССР, раздел „Гигиена питания". - М., 1985. - С. 77-86.

28. Л. Ф. Адигамов. Трансзстерификация с образованием циклических пиримидиновых нуклеотидоп.//Материэлы V Есесоюзногго симпозиума „Циклические нуклетиды". -Рязань.-1985.-С. 134.

29. Л. Ф. Адигамов, Е. М. Фатеева, Н. Д. Фанченко с соавт. Гормональная регуляция начальных этапов лактации у жснщин.//Сборни:-с научных трудов Института питания АМН СССР. - 1985. - Т. б. - С. 160-164.

30. Л. Ф, Адигамов. Новые данные о биологически активных факторах молока, их свойствах и специфичности.(обзор литературы).//Вопросы питания. - 1986. - N" 4. - С. 3-7.

31. Б. Г. Ляпков, Л. Ф. Адигамов, В.Д.Нифонтов с соавт. Биологическая оценка возможности использования солей хлорной кислоты как стимулятора росга животных.// Сельскохозяйственная биология. - 1987. - 4. - С. 69-74.

32. Л. Ф. Адигамов. Биохимические показатели комплексной оценки стимуляторов роста сельскохозяйственных живот-

ных и продовольственная программа". - Ташкент. -1986. -С. 16-17.

33. Б. Г. Ляпков, Л, Г, Левин, Л. Ф, Лдигамов g соавт. Бирло-гические и гигиенические исследования использования солей хлорной кирлэты в качестве стимуляторов роста сельскохозяйственных животныхУ/Сборник научных трудрв Института питания АМН СССР. -- ЭД., }087, -г Т, 7-С.250-258.

34. Л. Ф. Адигамрв, В, М, Фатеева, ff. Д. ф%щенка. Рлияние алиментарных ф&ктррор на дтзнорлрние лактрпоэза и еге регуляцию.//Материалы Всесоюзного симпозиума пе физиологии и бирхимии лакт^дии. - Алма-Ата. - 1987. -С.34-35.

35. Л. Ф. Лдигамов, ТИРРРИДНМР гормоны молока млекопитающих и их биологическая роль (обзор литературы).// Сборник научнвд трудрв Института питания АМН СССР, - М., 1986. - Т. 7. - С, 228,234,

36. L. F. Adigamov, L, J, ^ipitupya, V- D- Niphontov et al. Unter» suchung der hormeriftten Regulation der anabolen Prozesse und der Effektivität dejr Prptejpyenvertung in der frühen pes> tnataleii Peripde.//Die Nahrung. =• Bd. 32. - N 5, - S, 427-43}. * 1988.

37. H. H. Тютюнник, Л. Ф- Адигамов с соарт. С-ДМФ-зависи-мый механизм действия стимуляторов рортр, животных.// Материалы VI Всесоюзного симпозиума „Циклические нуклеотиды". - Петрязаврдск- т-1988. w С. Г55=-15б.

38. Е. Л. Щедрин, С. А. Петухов, Л. ф. АДИГЗ^СФ. ? соавт. Характеристика активно^ начала п г^ахавдзмов действия тканевых препаратрв.//Врртнии сзльс.кдхозяйсгшегшой науки. -1989. - № 3? = С-

39. Л. Ф. Адигамов. Система спе54Нф!1Ч§Р(?ИХ критериев комплексной оценки лдктании./7Материалы Всесоюзной конференции „Повышение продуктивности сельскохозяйственного производства". - М., 1989. - С. 26.

40. Л. Ф. Адигамов, В. Д. Нифонтрв, Н. Б. Маганова с сраат. Исследование физике-химических и биологических свойств бычьего гормона роста, полученного методрм генной ннженерии.//Материалы Всесоюзного симпозиума „Биохимия сельскохозяйственных животных и Продовольственная программа". - Киев. - 1989. - С. 8-9.