Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Лимфатический регион матки крыс после введения химиотерапевтических средств с коррекцией экстратом Pentaphylloides fruticosa

На правах рукописи

БАШМАКОВА Татьяна Владимировна

ЛИМФАТИЧЕСКИЙ РЕГИОН МАТКИ КРЫС ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ХИМИОТЕРАПЕВТИЧЕСКИХ СРЕДСТВ С КОРРЕКЦИЕЙ ЭКСТРАКТОМ РЕГЧТАРНУЬЬОЮЕв РШГПСОвА

14.00.15 - патологическая анатомия 03.00 25 - гистология, цитология, клеточная биология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 2005

Работа выполнена в ГОУ ВПО Новосибирской государственной медицинской академии Рос-здрава и ГУ Научно-исследовательском институте клинической и экспериментальной лим-фологии СО РАМН (Новосибирск)

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Пекарев Олег Григорьевич Майбородин Игорь Валентинович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук

доктор биологических наук, профессор

Семенов Димтрий Евгеньевич Бгатова Наталия Петровна

Ведущая организация:

ФГУ Новосибирский научно-исследовательский институт патологии кровообращения им. акад. Е.Н.Мешалкииа Росздрава

Защита состоится 005 года в часов на заседании диссертаци-

онного совета Д 001 037 01 в ГУ НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН по адресу: 630117, г. Новосибирск, ул. акад Тимакова, 2, тел 332-31-56

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ НИИ региональной патологии и патоморфологии СО РАМН

Автореферат разосланных года

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 001.037 01 доктор биологических наук, профессор

Лушникова Елена Леонидовна

¿/юе-ч

/Ш

тът

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования: Аитрациклины индуцируют апоптоз в неактивированных и активированных фитогемагтлютшшном лимфоцитах периферической крови Однократная внутрибрюшинная инъекция препарата этого ряда приводит к истощению Т- и В-клеток в селезенке, лимфатических узлах и сокращению размеров тимуса ((Ватин А Е, 1980, Kurebe M et al, 1986; Tone H et al, 19866; Saikawa Y et al., 1994; Comereski С R et al, 1994; Ferraro С et al, 2000)

Глюкокортикоиды индуцируют апоптоз T- и В-лимфоцитов (Nicoletti I et al, 1991; Sentman CL et al, 1991 ; Norimatsu M et al, 1995; Мог F., Cohen I R., 1996; Tamura A. et al., 1996; Morris 1 D et al, 1997; Murosaki S et al, 1997; Elitsur Y et al, 1998; Fukuzuka К et al., 2000; Brunner T et al, 2001; Ruiz-Santana S et al, 2001) Стероидная терапия значительно ин-гибирует миграцию лимфоцитов в лимфатические узлы и нарушает рециркуляцию этих клеток (Sackstein R , Borenstein M, 1995, Sackstein R , 1995) Показан супрессивный эффект кор-тизола и метилпреднизолона на Т-хелперы, ингибируется миграция этих клеток из лимфатических узлов в кровь (Cbow F S et al, 1999) Однако по другим данным повышение уровня эндогенных глюкокортикоидов индуцирует усиленный возврат лимфоцитов из крови в лим-фоидные органы (Toft P. et al, 1993а, 19936)

При создании новых противоопухолевых препаратов остается актуальной задача уменьшения их побочного токсического действия при сохранении аптибластомной активности (Ogawa M , Ariyoshi Y., 1993) Более 30 лет назад появились первые сообщения о потенцировании или антагонистическом действии, при совместном использовании флавоноидов и противоопухолевых препаратов, на пролиферацию и созревание нормальных и опухолевых клеток (Huot J et al. 1971) Многочисленные флавоноиды растительного происхождения обладают противоопухолевой активностью (Wang Н.К et al, 1998) Однако некоторые растительные биофлавоноиды могут тем или иным образом снижать противоопухолевое действие химиотерапевтических средств (Wang G et al., 1981; Critchfield J W et al, 1994; Mitsunaga Y. et al., 2000).

Таким образом, несмотря на большой объем литературных данных, посвященных ан-типролифсративному действию противоопухолевых препаратов на структуры различных органов, крайне мало сообщений о результатах действия этих средств на структуры матки и ее регионарных лимфатических узлов Имеющиеся сведения часто противоречивы и взаимно исключают друг друга Кроме того, отсутствуют сообщения о результатах действия биологически активных веществ, полученных из растений рода Pentaphylloides, на лимфатический аппарат матки в условиях применения препаратов для лечения злокачественных опухолей, хотя предварительные данные показывают выраженную эффективность использования этих средств при других патологических состояниях (Колпаков MA. и др., 2001; Майбородина В И, 2003, Банул H В, 2005) Цель исследования:

Изучить действие водного экстракта курильского чая (Pentaphylloides fruticosa) на изменения струк1ур лимфатического региона маткилсЕыс, вызванные применением комплекса

химиотерапевтических средств.

Задачи исследовании:

1 Методами световой микроскопии изучить влияние водного экстракта курильского чая на измененное химиотерапевтическими средствами соотношение слоев матки крыс

2 Исследовать действие экстракта Ре1ИарЬу11о1<1е8 йчШака на микроциркуляцию крови и лимфы в матке крыс после полихимиотерапии.

3 Определить реакцию регионарных к матке лимфатических узлов на введение комплекса противоопухолевых препаратов с последующей коррекцией препаратом курильского чая

Научная новизна результатов исследования:

Впервые получены морфологические данные, свидетельствующие об уменьшении толщины стенки матки за счет сокращения эндометрия и миометрия после введения комплекса химиотерапевтических средств При коррекции препаратом курильского чая обнаружена большая сохранность толщины миометрия

Впервые было обнаружено расширение компонентов регионального лимфатического русла эндометрия и миометрия после применения противоопухолевых средств После применения экстракта курильского чая отмечено более раннее возвращение к исходному уровню относительной площади компонентов лимфатического русла указанных слоев матки

Впервые получены данные, что полихимиотерапия приводит к подавлению митотиче-ской активности и увеличению числа клеток с деструктивными изменениями во всех зонах подвздошных лимфатических узлов Коррекция препаратом курильского чая не приводит к изменениям количества митозов, иммуно- и плазмобластов и нежизнеспособных клеток в данных органах.

Впервые показано, что уменьшение численной плотности клеток в паракортикальной зоне подвздошных лимфатических узлов и ее расширение после полихимиотерапии связано с застоем лимфы При применении водного экстракта Реп1арИу11о1()е5 йп^соза отмечено более раннее восстановление указанных изменений

Впервые обнаружено, что при полихимиотерапии происходит уменьшение численности моноцитов во всех структурах подвздошных лимфатических узлов крыс Применение водного экстракта Реп1арЬу11о1<1е5 йиКсоза не влияет на количество данных лейкоцитов.

Научное н практическое значение работы:

В связи с тем, что после комбинированной полихимиотерапии имеются признаки лимфостаза в тканях матки и блокады лимфотока на уровне ее регионарных лимфатических узлов, целесообразно создание и применение лекарственных препаратов для стимуляции сократительных элементов в стенке лимфатических сосудов, восстановления адекватного лим-фоотока от матки и ускорения прохождения лимфы через лимфатические сосуды и узлы Водный экстракт курильского чая не меняет митотическую активность клеток и, параллельно, обладает возможностью стимулировать гладкомышечные клетки стенки лимфатических сосудов и капсулы узлов Использование экстракта курильского чая после или в процессе по-лихимйсгтерапии позволяет снизить дегенеративные изменения миометрия, явления отека во всех слоях матки и в паракортикальной зоне подвздошных лимфатических узлов

Внедрение результатов исследования в практику:

Результаты исследования внедрены в практику научно-исследовательской работы группы патоморфологии лаборатории оперативной лимфочогии клинического отдела НИИ-КиЭЛ СО РАМН, Новосибирского областного онкологического диспансера и муниципального перинатального центра г Новосибирска

На защиту выносятся следующие основные положения:

1 Применение противоопухолевого комплекса химиотерапевтических средств приводит к уменьшению толщины стенки матки из-за сокращения эндометрия и миометрия Водный экстракт курильского чая оказывает протективиый эффект на миометрий, доза в 50 мг/кг более действенна.

2 Во всех слоях матки послс введения противобластомного комплекса химиопрепаратов были отмечены признаки лимфостаза После применения экстракта курильского чая было обнаружено более раннее купирование признаков застоя лимфы

3 Введение цитостатиков подавляет митотическую активность и увеличивает число нежизнеспособных клеток во всех зонах подвздошных лимфатических узлов, кроме мякотных тяжей Препарат курильского чая не эффективен в отношении коррекции данных изменений.

4 После полихимиотерапии в гтаракортексе подвздошных лимфатических узлов были найдены явления застоя лимфы Экстракта Реп1арЬу11о1(1еч ГгиПсояа приводит к более раннему восстановлению указанных изменений

Апробация материалов диссертации:

Основные положения диссертации доложены па 6 Всероссийском съезде клинических цитологов (Новосибирск, 2004) и объединенном заседании сотрудников кафедр Новосибирской государственной медицинской академии и научного персонала лабораторий НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН (Новосибирск, 2005)

Публикации:

По теме диссертации опубликованы 4 печатные работы

Структура и объем диссертации:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, собственных результатов с их обсуждением, выводов, практических рекомендаций и списка литературы Работа изложена на 201 странице, содержит 31 таблицу, иллюстрирована 46 рисунками. Список литературы включает 346 источников (75 отечественных и 171 иностранный) Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован лично автором

Автор искренне благодарен научным руководителям д м н, профессору И В Майбо-родину и д м н, профессору О Г Пекареву за научно-методическую помощь, ценные замечания и консультации в организации экспериментов и проведении исследований в холе выполнения работы

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объект исследования. Морфологическое исследование реакции лимфатического региона матки на введение экстракта курильского чая после полихимиотерапии проводили на половозрелых нерожавших самках белых крыс породы Вистар весом 200-240 г, полученных из вивария ГУ НИИ клинической и экспериментальной лимфологии СО РАМН Опытным животным в фазу преэструса однократно внутрибрюшинно вводили комплекс препаратов, применяемый в клинике' циклофосфан (21 мг/кг), адриамицин (2,1 мг/кг), винкристин (0,04 мг/кг) и преднизолон (2,1 мг/кг) (Запускапова О.Б и др, 1989). Выбранная доза является 1/5 LDso Модель эксперимента разработана на кафедре фармакологии Новосибирской государственной медицинской академии под руководством дм», профессора О Р Грека (Мишенина С В., 2002; Майбородииа В И, 2003) Далее части этих животных через зонд вводили водный экстракт Pentaphylloides fruticosa Введение осуществляли ежедневно в дозе 25 мг/кг или 50 мг/кг. Животных декапитировали в фазу преэструса через 8, 16 и 24 суток после введения комплекса препаратов Контролем служили интактные животные и крысы, которым вместо полихимиотерапевтических средств вводили физиологический раствор Количество животных в контрольных и опытных группах было не менее 6, всего было изучено 109 крыс Все манипуляции с животными проводили под эфирным наркозом

Подготовка материала к изучению методами световой микроскопии. Тело матки и общие подвздошные лимфатические узлы (nodi lymphatici iliaci communes) крыс фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (pH 7,4) не менее 24 часов, обезвоживали в серии этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в парафин Срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилином и эозином и по Романовскому (Саркисов Д С, Перов Ю.Л, 1996), изучали на световом микроскопе при увеличении до 1200 раз

Морфометрия в статистическая обработка полученных данных. Для определения структурной организации различных отделов исследуемых органов применяли квадратную тестовую систему, совмещаемую на экране компьютера с изображением, полученным при помощи цифровой видеокамеры микроскопа Для изучения показателей структурной организации матки и лимфатических узлов (использование объектива с увеличением X 4) конечная площадь тестового квадрата была равна 68906,25 мкм2 (сторона квадрата 262,5 мкм), при подсчете цитограммы клеток (применение объектива с увеличением X 100) - 110,25 мкм2 (сторона квадрата 10,5 мкм) (Майбородин И В и др., 2003а) Для изучения цитограммы клеток лимфатических узлов и тканевых лейкоцитов маггки определяли от 500 до 1000 клеток в различных местах препарата, в зависимости от однородности клеточного состава Типы клеток верифицировали в соответствии с рекомендациями M Г Абрамова (1985) Дифференцирование кровеносных и лимфатических сосудов проводили в соответствии с рекомендациями J R Head, L.L Seeling (1984) и В И Козлова с соавт (1994) Статистическую обработку результатов проводили на прикладной статистической программе MS Excel (Microsoft, USA), определяли среднее арифметическое и ошибку среднего арифметического (стандартное отклонение). Различия между средними считали достоверными при р<0,05

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Микрш емоциркуляция и лимфоток в матке крыс после введения комплекса химиоте-ряпевтических средств и коррекции изменений водным экстрактом Pentaphylloides

fruticosa

После введения противобластомного комплекса химиотерапевтических препаратов достоверно уменьшается толщина всей стенки матки Толщина миометрия на 8 сутки уменьшалась недостоверно, и общее снижение толщины стенки матки обусловлено, в первую очередь, сокращением объема эндометрия У интаетгных животных толщина эндометрия была больше на 74,4%, 85,4% и 77,1%, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиоло! ического раствора объем эндометрия был больше на 58,3%, 68,3% и 60,7%, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

Через 16 суток отмечено сокращение толщины и эндометрия и миометрия, но на 24 день не было обнаружено достоверных различий между сравниваемыми группами животных Относительно действия водного экстракта Pentaphylloides fruticosa на толщину и соотношение слоев матки экспериментальных животных после полихимиотерапии можно отметить большую сохранность толщины миометрия у крыс на фоне применения комплекса химиотерапевтических средств с последующей коррекцией Применение дозы в 50 мг/кг оказывало более выраженный эффект.

Видимо, из-за того, что полихимиотерапия приводит к подавлению деления клеток (эпителий эндометрия принадлежит к активно и быстро обновляющимся клеткам), па 8 и 16 сугки происходит снижение толщины эндометрия Согласно литературным данным, пролиферацию эпителиальных клеток блокируют антрациклины (Фомина ТИ., 1982; Buts J Р et al, 1983; Moore JV, 1984, 1986; Tsiftsoglou AS et al, 1986; Anilkumar TV et al, 1992, Thakkar N S , Potten С S , 1992, 1993, Killion J J. et al, 1996, Sun Z et al, 1998), аналоги вин-кристина (Anilkumar TV et al, 1992) и глюкокоргикоиды (Sturgis S H., Velardo J T., 1956; Castrup H J et al, 1979; Markaverich В M et al, 1981; Otomo S et al, 1981; Luzzani F. et al, 1982, Bakke О, Ronning О W., 1982; Stewart P J et al., 1983, Lentze M.J. et al, 1985; Schneider A et al, 1986, Bigsby R M , Cunha G.R, 1985, 1988; Rabin D S et al., 1990, Bigsby R M, 1993; Bigsby R M , Young P С , 1993, Spencer F et al, 1998; Gunin A G , 1998, Gunin A G et al, 2000, 2001,2003)

Кроме подавления пролиферации, возможно усиление гибели эпителиоцитов за счет включения механизмов апоптоза Апоптоз усиливается при применении антибиотиков ан-трациклинового ряда (Thakkar N S , Potten С S, 1992, 1993, Sun Z et al, 1998), на фоне использования препаратов группы винкристина (AnilkumarTV et al, 1992) и имеются данные о стимуляции апоптоза клеток эндометрия глюкокортикоидами (TeradaN. et al, 1991)

Сокращение толщины мышечных слоев матки с наибольшей вероятностью объясняются дистрофическими изменениями гладкомышечных клеток в результате воздействия препаратов для полихимиотерапии В научной литературе имеются данные о развитии признаков

дистрофии в кардиомиоцитах (Rosenoff S Н et а!, 1975; Formelli F et al, 1978; Van Vleet J F ct al, 1979; Herman E H, Fenans V J , 1981; Zhang J et al, 1996; Herman EH et al, 1998; Agha A M. et al, 2001)

При изучении состояния лимфотока в глубоком слое слизистой оболочки матки (эндометрия) было обнаружено, что через 8 суток после начала эксперимента относительная площадь лимфатических капилляров на срезе у интактных контрольных животных была меньше на 51,3%, 55,2% и 50,4%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значения данного показателя также была меньше на 83,7%, 88,4% и 82,7%, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

При изучении состояния лимфотока в мышечной оболочке матки (миометрии) было найдено, что через 8 суток после начала эксперимента относительная площадь лимфатических капилляров на срезе у интактных контрольных животных была меньше в 3,5, 3,4 и 3,5 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значения данного показателя также была меньше в 3, 3 и 3,1 раза, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Относительная площадь интерстициальных пространств на срезе эндометрия на этот срок в группе интактных крыс была меньше в 2,1 раза, на 88,4% и 93,4%, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора объемная плотность межклеточных щелей была меньше на 99,7%, 78,3% и 83%, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Объем межклеточных щелей в миометрии на этот срок у интактных крыс была меньше в 2,7, 2,8 и 2,9 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора объемная плотность межклеточных щелей была меньше в 3, 3 2 и 3,3 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

На 16 сутки отмечено возвращение к контрольному уровню показателей регионарного лимфатического русла различных слое матки у животных с коррекцией последствий полихимиотерапии растительным препаратом, у животных без коррекции нормализация произошла только к 24 дню эксперимента

Расширение компонентов регионарного лимфатического русла матки может быть связано с блокадой лимфотока на уровне лимфатических узлов В результате прямого повреждения тканей противоопухолевыми препаратами, присутствия антигенных веществ, проник-

ших через поврежденный эпителий эндометрия и образовавшихся в тканях, в лимфатическое русло попадает большое количество тканевого и клеточного детрита и данных антигенных веществ Происходит блокада лимфатических сосудов и лимфатических узлов, за счет чего и было отмечено расширение компонентов лимфатического русла в слизистой оболочке матки Мы предполагаем, что постоянная стимуляция гладкомышечных клеток биофлаво-ноидами водного экстракта РетарИуПоМе* Пирсов а (ВакгасЬеуа N е1 а1, 1986) способствует более быстрому прохождению токсичной лимфы через регионарные (подвздошные) лимфатические узлы и более равномерному распространению нагрузки на другие (вышележащие) узлы, за счет чего сокращаются размеры лимфатических сосудов и иигерстициальных пространств в тканях матки

Изменения общих подвздошных лимфатических узлов крыс после введения комплекса химиотерапевтических средств и коррекции изменений водным экстрактом РеШарИуНоМез Ггийсояа Структурная организация подвздошных лимфатических узлов

После введения комплекса препаратов для полихимиотерапии через 8 суток у интакт-ных животных относительная площадь паракортикальной зоны на срезе подвздошных лимфатических узлов была меньше на 68,1%, 84,3% и 63,7%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше на 54,5%, 69,4% и 50,5%, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг На 16 сутки у животных после полихимиотерапии сохранялось расширение паракортекса, а на фоне использования растительных экстрактов рашер паракортикальной зоны находился на нормальном уровне

У интактных животных на 8 сутки площадь лимфоидпых фолликулов без герминативных центров на срезе узлов была больше в 4,7, 4 и 3,9 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Регйар11у11о1(1еч АлИсова в дозах 25 мг/кг или 50 ш /кг После введения физиологического раствора этот показатель был больше в 4,5, 3,8 и 3,7 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг На последующие сроки исследования сохранялось такое изменение значений данного показателя, действия препарата Реп1арНу11о!(1еч {гийака в обеих дозах обнаружено не было

Возрастание размеров паракортекса через 8 и 16 суток после введения противоопухолевых препаратов может быть связано как с отеком зоны (депонирование большого количества лимфы), так и с изменением клеточного состава

При применении растительных экстрактов отмечено раннее восстановление объема паракортикальной зоны' нормализация отмечена раньше, уже к 16 суткам Экстракт Реп-1арЬу11о1Йеч {Гги^сова, обладая свойством стимулировать гладкомышечные клетки сосудов (ВакгасЬеуа N е1 а1, 1986), по-видимому, также стимулирует сократительную деятельность и

самих узлов. За счет усиления сократительной деятельности лимфа более активно «проталкивается» через лимфатические узлы Таким образом происходит перераспределение лимфы по вышележащим узлам

Наиболее вероятно, что снижение значений показателей доли лимфоидных фолликулов в лимфатических узлах связано в наших экспериментах с уменьшением в них числа В-клеток в результате действия препаратов группы анграциклинов (Ватин А Е , 1980, Ferraro С et а), 2000), глюкокортикоидов (Buerki Н et al, 1976; Dracott В N, Smith С Е, 1979, Meyer Е.М. et al, 1980, 1981; Сагреп Е et al, 1985; Ei Fouhil A F et al, 1993; EI Fouhil A F , Turkall R.M, 1995) или циклофосфана (Запускалова ОБ. и др, 1989), хотя СR.Comereski с соавт (1994) наблюдали лимфоидную гиперплазию мандибулярных лимфатических узлов после использования аналогов адриамицина Не исключено, что сокращение фолликулов связано с индукцией элиминации В-клегок из лимфатических узлов антрациклинами (Ватин A F, 1980) или подавлением миграции в эти органы (Sackstein R, Borenstein М , 1995; Sackstein R, 1995)

Цитоархитекгоника коркового плато

В корковом плато после применения комплекса химиотерапевтаческих препаратов через 8 суток у интактных животных численная плотность лимфоцитов была больше на 70,7%, 85,4% и 70,7%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерании с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была больше на 66,2%, 80,5% и 66,2%, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

У интактных животных иа данный срок процент ретикулярных клеток был меньше в 2,2, 2,2 и 2 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора этот показатель был меньше в 2,1, 2,2 раза и на 96,7%, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

На 8 сутки после полихимиотерапии у интактных животных относительное количество макрофагов было меньше в 3,4, 3,6 и 3,7 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше в 3,1, 3,3 и 3,4 раза, соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Абсолютное число макрофагов у интактных животных было меньше в 2,5, 2,5 и 2,7 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора данных клеток также было меньше в 2,3, 2,3 и 2,5 раза,

и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией экстрактом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Следует отметить, что на этот срок у всех животных после использования химиотера-певтических средств в корковом плато подвздошных лимфатических узлов отсутствовала митотическая активность, тогда как делящиеся клетки присутствовали в данной зоне у всех животных обеих контрольных групп.

Изменения численная плотности лимфоцитов и макрофагов сохранялось на все сроки наблюдения, количество ретикулярных клеток и митотическая активность нормализовалось

■4 к 24 суткам Мы не обнаружили достоверных данных, свидетельствующих о каком-либо

влиянии водного экстракта в обеих использованных дозах на цитограмму коркового плато, измененную в результате применения комплекса химиотерапевтических средств

Наиболее вероятной причиной снижения абсолютного числа лимфоцитов в корковом плато является угнетение пролиферации этих клеток на месте и, видимо, их предшественников после воздействия антрациклинов (Ватин А.Е., 1980; Ferraro С. et al., 2000), циклофосфа-на, винбластина (Лобзин В.С и др., 1981; Запускалова О.Б. и др., 1989) и глюкокортикоидов (Buerki Н. et а!, 1976, Dracott В N., Smith С.Е., 1979; Meyer Е.М. et al., 1980,1981; Carpen E. et al, 1985; Григоренко Д.Е , Будушкина E.E., 1985, El Fouhil A F et al., 1993; EI Fouhil A.F., Turkall R M, 1995). He исключены нарушения миграции клеток лимфоидного ряда из лимфатических узлов и в узлы (Ватин А Е., 1980; Sackstein R, Borenstein М, 1995, Sackstein R., 1995)

Убыль лимфоцитов возможна и за счет усиления процессов апоптоза антрациклинами (Ferraro С et al, 2000) и глюкокортикоидами (La Pushin R.W, de Harven E., 1971; Зак K.3., Винницкая M J1, 1973, 1975; Nicoletti I et al., 1991, Sentman С L. et al., 1991; Norimatsu M. et al., 1995, Мог F, Cohen IR, 1996; Tamura A et al, 1996; Morris I.D. et al., 1997; Murosaki S. et al, 1997; Elitsur Y et al, 1998; Fukuzuka K. et al., 2000, Brunner T. et al, 2001; Ruiz-Santana S. et al, 2001) Таким образом, погибшие, мигрировавшие или дифференцировавшиеся лимфоциты не замещаются «молодыми» клетками

В связи с уменьшением числа лимфоцитов (миграция, дифференцировка и другие причины) в корковом плато продолжает оставаться все тоже абсолютное число ретикулярных клеток и макрофагов, но процент их в цитограмме, из-за снижения численности других клеток возрастает. То есть сокращается число В-клеток (лимфоцитов, иммуно- и плазмобла-стов), а остается пустой остов структуры, состоящий из ретикулярных клеток и макрофагов.

f

Цитоархитектоника паракортикальной зоны

' Спустя 8 суток после применения комплекса химиотерапевтических препаратов в па-

ракортексе подвздошных лимфатических узлов группы интактных животных численная плотность всех клеток была меньше на 49,5%, 50,9% и 58,2%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше на 45,9%, 47,2% и 54,3%, также соответст-

венно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

У интактных животных к 8 суткам абсолютное число лимфоцитов было больше на 80,4%, 93,7% и 84%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была больше на 75,8%, 88,8% и 79,3%, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

На данный срок у интактных животных процент ретикулярных клеток был меньше на 99,2%, в 2,3 и 2,2 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом РеЖарИуИоМеч йийсоза в дозах 25 мг/к! или 50 мг/кг После введения физиологического раствора этот показатель был меньше на 91,1%, в 2,2 и 2,1 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

К этому сроку у интактных животных относительное число моноцитов было больше в 2,5, 2,3 и 2,3 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Реп1арЬу11о1(1е5 А-ийсоча в дозах 25 мт/кг или 50 мт/кг После введения физиологического раствора этот показатель был больше в 2,3, 2 и 2,1 раза, соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Абсолютное число моноцигов у интактных животных было больше в 3,8, 2,8 и 3,3 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора данных клеток также было больше в 3,3,2,4 и 2,8 раза, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией экстрактом РеМар11у11о1(1е8 йи^соза в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

На 8 сутки после полихимиотерапии у интактных животных процент макрофагов было меньше в 2,4, 2,6 и 2,7 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше в 2,3, 2,5 и 2,6 раза, также соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Кроме того, на 8 и 16 сутки у всех животных после использования химиотерапевтиче-ских средств в паракортикапьной зоне подвздошных лимфатических узлов отсутствовали митозы, тогда как делящиеся клетки были найдены в этой зоне у всех животных всех контрольных групп Только спустя 24 суток у всех крыс после применения химнотерапевтиче-ских средств в паракоргексе появились фигуры митозов, но митотическая активность была ниже, чем в контрольных группах

Количество лимфоцитов и моноцитов оставалось измененным на все сроки наблюдения, число ретикулярных клеток вернулось к уровню контроля к 24 суткам, а содержание макрофагов - к 16 дню. Численная плотность всех клеток при применении экстракта Реп-taphylloides fruticosa в обеих дозах нормализовалась к 16 суткам, а без растительного препарата - только к 24 дню эксперимента Других эффектов воздействия курильского чая отмечено не было

Уменьшение общего числа клеток в паракортексе может быть связано или с повышенным выходом их за пределы зоны для поддержания сниженного иммунитета (компенсация супрессированной пролиферации миелоидного и моноцитарно-макрофагального ростков), или подавлением пролиферации Т-клеток, как в самом паракортексе, так и в селезенке и тимусе антрациклинами (Ватин А Е , 1980; Kurebe M et al, 1986; Tone H et al., 19866; 3a-пускалова ОБ и др., 1989; Saikawa Y et al., 1994; Comereski C.R. et al., 1994; Ferraro C. et al., 2000), циклофосфаном (Лобзин ВС. и др, 1981) и глюкокортикоидами (Hartmann H et al, 1976; Perry G.A , Sharp J 0, 1988; Crouse D A. et al, 1989; El Fouhil A F. et al, 1993; El Fouhil A F , Turkall R M, 1995, Kraml J et al, 1995, Yano H et al, 2001). Скорее всего, имеют место оба процесса

Обнаруженное расширение паракортикальной зоны, о чем было сказано выше, в таком случае, по всей вероятности связано с депонированием лимфы. В паракортекс подвздошных лимфатических узлов по промежуточным синусам поступает лимфа из органов и тканей малого таза, в том числе и из матки, в этой лимфе содержится (из-за поврежденного эндометрия) большое количество токсинов и антигенов В связи с этим и с тем, что в пара-кортикальной зоне снижено количество клеток и подавлены их функции, детоксикация этой лимфы должна протекать намного медленнее, чем в нормальных условия Лимфа задерживается в этой зоне для более качественной обработки, возможно, что посредством какого-либо клапанного аппарата или через блокаду промежуточных синусов и, таким образом, происходит, отмеченное нами, расширение паракортекса

Снижение относительного и абсолютного числа моноцитов в паракортексе лимфатических узлов, наиболее вероятно связано с угнетением моноцитарного ростка красного костного мозга противоопухолевыми средствами Увеличение относительной и абсолютной численности макрофагов, по-видимому, обусловлено как резким снижением числа других клеток' моноцитов и лимфоцитов, так и ускорением дифференцировки из моноцитов. Видимо, также из-за сокращения численности лимфоцитов и моноцитов, в паракортикальной зоне возрастает процент ретикулярных клеток

Относительно действия растительных препаратов- Учитывая одновременное сокращение размеров паракортикальной зоны, о чем было сказано выше, можно предположить, что в результате стимуляции экстрактом Pentaphylloides fruticosa гладкомышечных клеток (Bakracheva N et al, 1986) активируется сократительная деятельность лимфатических узлов и, таким образом, лимфа быстрее проходит через эти узлы' ликвидируется застой лимфы в промежуточных синусах паракортекса В результате этого происходит сближение клеток между собой и возрастает их число на единицу площади среза данной зоны

Цитоархитектоиикя лимфоидных фолликулов без центра размножения

В лимфоидных фолликулах без герминативных центров подвздошных лимфатических узлов после применения комплекса химиотерапевтических препаратов через 8 суток у интактных животных численная плотность лимфоцитов была больше на 49,1%, 53% и 47,8%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была больше на 50 5%, 54,5% и 49,2%, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

У интакгных животных на данный срок процент моноцитов был больше в 5,6, 6 и 5,3 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом РеШарЬ^МсН Аносова в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора этот показатель был больше в 4,7, 5 и 4,5 раза, соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Абсолютное число мононитов у интактных животных было больше в 7,4, 8,3 и 7,2 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора данных клеток также было больше в 6,4, 7,1 и 6,2 раза, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией экстрактом РеМарМу11гис1е5 йп^соча в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

На 8 сутки после полихимиотерапии у интактных животных относительное количество макрофагов было меньше 91,5%, 84,3% и в 2,2 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дот 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше в 2,2, 2,2 и 2,5 раза, также соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Необходимо отметить, что на 8 и 16 сутки у всех животных после использования химиотерапевтических средств в фолликулах без центров размножения подвздошных лимфатических узлов отсутствовала митотическая активность, тогда как делящиеся клетки присутствовали в данной зоне у всех животных обеих контрольных групп

У интактных животных на 16 сутки абсолютное количество иммуно- и плазмобластов было больше в 4,3, 4,9 и 4,1 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом РегИар11у11о1<1ез Гш^соэа в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора этот показатель был больше в 3,4, 3,9 и 3,2 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Численность всех клеток оставалась сниженной на все сроки наблюдения, количество

моноцитов, митозов, иммуно- и плазмобластов нормализовалось к 24 суткам, макрофагов - к 16 суткам наблюдения Достоверных данных, указывающих на какое-либо влияние препарата из Реп1арЬу11о1£1е5 АтЦюова, обнаружено не было.

По нашему мнению, наиболее вероятной причиной снижения численной плотности всех клеток за счет, в первую очередь, абсолютного числа незрелых лимфоцитов, их делящихся и дифференцирующихся форм (иммунобластов и плазмобластов), в узелках является угнетение пролиферации В-клеток в корковом плато под влиянием противоопухолевых препаратов, что вместе с возможными причинами снижения численности моноцитов и возрастания - макрофагов было рассмотрено выше.

Кроме того, супрессивное влияние полихимиотерапии на митотически активные клетки лимфоидных фолликулов без центров размножения, скорее всего, является главной причиной уменьшения относительной площади этих структур на срезе лимфатических узлов, что было отмечено выше.

Цитоархитсктоника центров размножения лимфоидных фолликулов

В герминативных центрах лимфоидных фолликулов со светлыми центрами после применения комплекса химиотерапевтических препаратов через 8 суток у интакгных животных процент иммуно- и плазмобластов был больше в 2,4, 2,6 и 2,6 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была больше в 2,1,2,3 и 2,2 раза, соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/и или 50 мг/кг Численная плотность дифференцирующихся (властных) клеток у интактных животных была больше в 2,1, 2,4 и 2,3 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом РеШар11у1-■оМев йппсс«а в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. После введения физиологического раствора этот показатель был больше на 96,7%, в 2,3 и 2,2 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

Па 8 сутки после полихимиотерапии у интактных животных относительное количество макрофагов было меньше в 3,7, 3,2 и 3,5 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотсрапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше в 3,6, 3,1 и 3,3 раза, соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Абсолютное число макрофагов у интактных животных было меньше в 4,3, 3,6 и 4 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора данных клеток также было меньше в 3,7, 3,1 и 3,4 раза, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с

последующей коррекцией экстрактом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

На 8 и 16 сутки у всех животных после использования химиотерапевтических средств в герминативных центрах подвздошных лимфатических узлов отсутствовала митотическая активность, тогда как делящиеся клетки присутствовали в данной зоне у всех животных обеих контрольных групп

На 16 сутки у интактных животных процент ретикулярных клеток был меньше на 46,5%, 62,2% и 55%, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора этот показатель был меньше на 67,8%, 85,7% и 77,5%, соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Численность ретикулярных клеток на единицу площади среза центра фолликула интактных животных была меньше на 70,5%, в 2,1 раза и на 92,3%, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора ретикулярных клеток было меньше на 83,3%, в 2,3 и 2,1 раза, также соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

К этому сроку у интактных животных процент клеток с признаками деструкции был меньше в 3,8, 2,8 и 1,1 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического раствора деструктивных клеток было меньше в 4,7,3,4 и 3,8 раза, соответственно. чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Количество клеток с деструктивными изменениями на 103 мкм2 среза центра лимфоидною фолликула интактных животных было меньше в 4,4, 3,7 и 3,8 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора число таких клеток также было меньше в 5,1, 4,2 и 4,4 раза, также соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг ипи 50 мг/кг

Митотическая активность и количество иммуно- и плазмобластов вернулось к уровню контрольных групп к 16 суткам, число ретикулярных и нежизнеспособных клеток нормализовалось на 24 сутки, численность макрофагов оставалась измененной на все сроки эксперимента Клеточный состав герминативных центров фолликулов после полихимиотераиии достоверно не различался в результате попытки коррекции водным экстрактом Pentaphylloides fruticosa в обеих дозах

Несомненно, что снижение числа созревающих клеток (бзастов) и митотической активности в герминативных центрах произошло из-за торможения клеточной пролиферации и дифференцировки противоопухолевыми препаратами. Результатом снижения числа митозов в данных центрах может явиться нехватка плазматических клеток через определенное время

и опосредованное этим снижение напряженности гуморального иммунитета.

Возрастание относительной и абсолютной численности макрофагов, по нашему мнению, обусловлено как резким снижением числа бластов, так и миграцией из других тканей и ускорением дифференцировки из моноцитов, для более быстрот поглощения клеток с необратимыми некробиотическими признаками, число которых также увеличивается. Если увеличение процента ретикулярных клеток в герминативных центрах после полихимиотерапии можез быть объяснено снижением числа бластов, то, видимо, увеличение абсолютного числа ретикулярных клеток скорее связано с огрублением стромы, началом склероза.

Увеличение же количества клеток с деструктивными явлениями в ядре и цитоплазме, скорее всего, связано с торможением клеточного цикла противоопухолевыми препаратами и включение механизмов программируемой клеточной смерти (апоглоза) в клетках с высокой мизотической активностью и потенцией к дифференцировке антрациклинами (Ferraro С. et al, 2000) и глюкокортикоидами (La Pushin R W., de Harven E., 1971; Зак K.3., Винницкая M Л , 1973, 1975, Hellig Н R, Gerneke W.H., 1975, Nicoletti I. et al., 1991; Sentman C.L. et al., 1991, Norimatsu M. et al., 1995, Мог F., Cohen I.R., 1996, Tamura A et al., 1996; Morris I.D. et al, 1997, Murosaki S et al, 1997, Elitsur Y. et al., 1998, Fukuzuka K. et al., 2000, Brunner T. et al, 2001; Ruiz-Santana S et al., 2001).

Цитоархитектоника мякотных тяжей

В цитограмме мякотных тяжей подвздошных лимфатических узлов не было обнаружено достоверных различий между сравниваемыми группами животных на все сроки исследования.

Минимальная выраженность изменений после полихимиотерапии в мякотных тяжах лимфатических узлов, скорее всего, связана с тем, что в этих структурах преобладают высо-кодифференцированные плазматические клетки. Ввиду отсутствия в них процессов дифференцировки и митотической активности, плазмоциты мало подвержены воздействию противоопухолевых препаратов

Клетки в просвете мозговых синусов

В просвете мозговых синусов после применения комплекса химиотерапевтических препаратов через 8 суток у ингактных животных численная плотность лимфоцитов была больше на 74,4%, 71,1% и в 2,8 раза, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была больше в 2,8, 2,8 и 4,5 раза, и также соответственно, относительно только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг.

На данный срок у интактных животных процент моноцитов был больше в 3,4, 2,5 и 2,5 раза, соответственно, по сравнению с только полихимиотерапией и с лечением препаратом Pentaphylloides fruticosa в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг После введения физиологического

раствора этот показатель был больше в 3,8, 2,8 и 2,8 раза, соответственно, чем после применения только противоопухолевых препаратов и с последующей коррекцией растительным экстрактом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг Абсолютное число моноцитов у интактных животных было больше в 5,8, 3,4 и 5,5 раза, соответственно, чем после иолихимнотерании и полихимиотсрапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг. У крыс после введения физиологического раствора данных клеток также было больше в 10,1, 5,9 и 9,6 раза, и также соответственно, относительно только введения прогивобла-стомного комплекса и с последующей коррекцией экстрактом РсгиарЬуПоЫсз йч^соча в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

На 8 сутки после полихимиотерапии у интактных животных относительное количество макрофагов было меньше на 53,2%, 63,7% и 83,1%, соответственно, чем после полихимиотерапии и полихимиотерапии с коррекцией водным экстрактом курильского чая в до!ах 25 мг/к! или 50 мг/кг У крыс после введения физиологического раствора величина значений данного показателя также была меньше на 86,3%, 99% и в 2,2 раза, также соответственно, только введения противобластомного комплекса и с последующей коррекцией растительным препаратом в дозах 25 мг/кг или 50 мг/кг

Численность лимфоцитов и макрофагов пришла к контрольному уровню уже к 16 суткам, а количество моноцитов нормализовалась на 24 сутки наблюдения Достоверных изменений клеточного состава мозговых синусов в результате применения препарата из Рсп-(арЬ^Ыбев (гиНсояа не было найдено.

Мы считаем, что снижение числа лимфоцитов и моноцитов в просвете синусов после полихимиотерапии связаны с подавлением кроветворения и со снижением числа этих лейкоцитов в регионе лимфосбора и в паренхиме самих лимфатических узлов, откуда чти клетки и поступают в синусную систему

ВЫВОДЫ

1 После введения комплекса химиотсрапевтических средств происходит уменьшение толщины стенки матки крыс за счет сокращения эндометрия и миометрия На фоне коррекции препаратом курильского чая можно отметить большую сохранность миометрия, причем применение дозы в 50 мг/кг оказывало более выраженный эффект

2 В эндометрии и миометрии после применения противоопухолевых средств было обнаружено расширение компонентов регионального лимфатического русла, что свидетельствует о застое лимфы и создании препятствий лимфотоку После применения экстракта курильского чая было отмечено более ранее возвращение к исходному уровню относительной площади лимфатических сосудов и межклеточных щелей исследованных слоев матки

3. Полихимиотерапия приводит к подавлению митотической активности и увеличению числа клеток с деструктивными изменениями во всех зонах подвздошных лимфатических узлов, кроме мякотных тяжей, место специфических клеточных элементов занимают макрофаги и ретикулярные клетки Коррекция препаратом курильского чая не приводит к изменениям количества митозов, бластов и нежи шеспособных клеток в структурах данных

органов

4 Уменьшение численной плотности клеток в паракортикальной зоне подвздошных лимфатических узлов и ее расширение после полихимиотерапии связано с депонированием лимфы. При применении водного экстракта Реп1арЬу11о!(1е8 (Шока отмечено более раннее восстановление указанных изменений.

5 Полихимиотерапия приводит к уменьшению численности моноцитов во всех структурах подвздошных лимфатических узлов крыс Применение водного экстракта Реп!ар11уНо1<1е8 йийсоча не влияет на количество данных лейкоцитов

6. В цитограмме мякотных тяжей подвздошных лимфатических узлов не было отмечено достоверных различий меяеду сравниваемыми группами животных на все сроки исследования, это связано с преобладанием в данных структурах высокодифференцированных плазматических клеток

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ В связи с тем, что введение цитостатиков приводит к депонированию лимфы в подвздошных лимфатических узлах и блокаде лимфотока в тканях матки, необходимо проведение мероприятий по стимулированию лимфотока Использование экстракта курильского чая после или в процессе полихичиотерапии позволяет ликвидировать явления лимфостаза в указанных лимфатических узлах и в регионе их лимфосбора.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ: Майбородин И В., Майбородина В И., Позднякова С.В, Грек О Р., Банул Н.В., Башмакова Т В. Возможный показатель регенерации лимфатических узлов после полихимиотерапии: дистопия лимфоидных фолликулов. // Науч.-прак. журнал «Хирургия, Морфология, Лимфология» -2004. - Т. 1. -№2. - С. 83-86.

Майбородин И В., Прыткина О.К, Башмакова Т В, Майбородина В.И., Грек О.Р, Позднякова С В, Головнев В А., Пекарев О.Г Действие водного экстракта курильского чая на цитограмму лимфоидных органов после полихимиотерапии // Новости клинической цитологии России. - 2004. -№3-4.-С. 62.

Прыткина О.К, Башмакова Т.В., Майбородина В.И., Позднякова С В., Пекарев О.Г. Возможный патогенез изменений в лимфоидных органах после введения химиотерапевтиче-ских средств и применения для коррекции экстракта Реп1арЬу11о1(1е$ йшмхюа // Морфология и хирургия: Сб науч. тр.' Вып 5 - Новосибирск' Сибмедиздат НГМА, 2005. - С. 45-46.

Прыткина О К, Башмакова Т В., Майбородина В.И, Позднякова С В. Солитарные лим-фоидные фолликулы толстой кишки и брыжеечные лимфатические узлы крыс после введения химиотерапевтических средств. // Морфология и хирургия: Сб. науч. тр.: Вып. 5. -Новосибирск: Сибмедиздат НГМА, 2005. - С. 46-48.

Соискатель _ / , ^ Т.В.Башмакова

»20 746

РНБ Русский фонд

2006-4 18801

Подписано в печать 17 10 05 Формат 84*60х 1/16 Бумага офсетам Тираж 100 экз Печ л. 1,0. Заказ № 2370

Отпечатано в типографии ЗАО «Кант» г. Новосибирск, ул Путевая, 18 тел. ЭЯ-06-19

А ь-1Л ал ьность исследован им:

Многочисленные исследования показали, что комбинация химнотерапев-гнческнх препаратов для лечения злокачественных новообразований оказывается более эффективной, по сравнению с применением одного противоопухолевого антибиотика (Macdonald J.S., Gohmann J. J., 1988).

В экспериментах на мытах было показано, что комбинированное введете адрнамншша, вкнблаепша н шошофосфана приводит к нарушениям функциональной активности днмфондной ткани, проявляющейся в ингнбицни про-лнферагншюго ответа лимфоцитов селезенки к Т- и В-клегочным мнтогенаы По мнению О, Б Запускаловой с соавт, (1989) лимфотропный эффект адриами-цнна заключается в преимущественном нарушении функциональной активности Т-лныфоцнтоа. вннблаетнн супрессирует Т- и В-клсточные связи в иммунной системе, а цнклофосфан непосредственно ннгибирует В-клеточную популяцию.

Антрациклнны индуцируют апогпчп а неактнвнрованных и активированных фнтогемагглютиннном лимфоцитах периферической крови. Однократная внуфибрюшинная инъекция препарата этого ряда приводит к истощению I - и В-клешк в селезенке, лимфатических узлах и сокращению размеров гнмуса (Kurebe М. et а!. 1986: Tone Н et а], 19866, Saikawa Y. et al, 1994; Comereski f R. ei al., 1994; Ferraro С el al., 2000). Кроме того, препараты антрацнклиново-го ряда уменьшают общее число кариощттов в лнмфошишх органах и инди цируют иррегулярную элиминацию Т- и В-клеток из селезенки и лимфатических узлов. Сравнение скорости уменьшения численности популяций Т- и В-клеток показало, что численность тгих клеток сокращается независимо друг от друга, причем количество В-клеток сокращается быстрее, чем Т-клеток (Ватин АП, 1980)

Глюкокортнконды индуцируют пнкно! клеток в тимусе и лимфатических уыах (La Pushin R.W., de N erven E., 1971) и вызывают апонтоз T- и Влимфоцитов,, находящихся в кишечном эпителии и в Псйсровых бляшках (Nicoletti I. el al., 1991, Scntman C.L. et al„ 199); Nonmaisu M et al.f 1995; Мог F„ Cohen I R, 1996; Tamura A ei al., 1996, Morris I D el al., 1997; Murosaki S. et al. 1997; Elrtsur Y et al., 199Я; Fukuzuka К el al., 2000; Bnmaer T. et al2001; Ruiz-Samana S, c( al,, 2001), Стероидная терапия значительно ингибнрует миграцию лимфоцитов в лимфатические узлы н нарушает рециркуляцию этих клеток (Sacksicin R., Borenstein М, 1995, SacksteLn R., 1995). Показан супрессивный эффект кормно л а н метилпреднизолона на Т-хелперы, ннгибируется миграция этих клеток из лимфатических узлов в кровь (Chow F.S. et al., 1999). Но, по данным P.Tofl с соавт (1993а, 19936), повышение уровня эндогенных глюкокортикондов индуцирует усиленный возврат лимфоциюв из крови к лнмфомдные органы

При создании новых противоопухолевых препаратов остается акту альной задача уменьшения их побочного токсического действия при сохранении анти-бластомной активности (Ogawa М., Ariyoshi Y,, 1993), Более 30 лет назад появились первые сообщения о потенцировании или антагонистическом действии, при совместном использовании флзвоноидов и противоопухолевых препаратов, на пролиферацию и созрсваннс нормальных н опухолевых клеток (Huot J. et al., 1971), Многочисленные флавоноиды растительного происхождения обладают ггрогивооiiyхо 1 [свой активностью (Wang Н К et al., 1998). Однако некоторые растительные биофлавоноиды могут тем или нным образом снижать противоопухолевое действие хнмиотсрапсвгических средств (Wang G, et al., 1981; Criichfield J W et al„ 1994; Milsunaga Y. et al., 2000)

Водный экстракт курильскою чая (Pentaphylloides fruticosal нормализует аланин-амннотранеферазную активность н содержание билирубина в плазме крови при хроническом токсическом гепатите. Этот экстракт оказывает про-тектнвный эффект на мнкросомальный метаболизм ксенобиотиков и перекис-нос окисление липидов в плазме и мнкросомалыюй фракции печени (Колпаков М А, н лр , 2001). Препараты из растений рода Potentilta (Pentaphylloides) эффективны при лечении тиреотоксикоза (Прнходько Е.И., 1976) и варикозной болезни (Bakracheva N. e( al, 1986)- № Potentilla candieans была выделена калиевая соль 3,3',4-Tn-O-meihylel lagic acid 4'-suIfate, которая являегея потенциальным ингибитором aldose reductase, содержащейся в дрожжах (Tcrashima S el al., 1990). Метаиоловый экстракт игз Polcntilla arguta полностью подавляет развитие respiratory syncytia] virus (McCuicheon A.R. et aJ ., 1995), экстракт Po-teiiulla tormentilla эффективен в отношении ротавирусной днарреи у детей (Sub-botina M.D. et al., 2003). Добавление в схему лечения красного лншая слизистых оболочек полости рта полосканий с добавлением настойки Potentilla tor-mcntiila способствовало более эффективному контролю патологического процесса (Володина Е В. и др., 1997).

Таким образом, несмотря на большой объем литературных данных, посвященных антипролиферативному действию противоопухолевых препаратов на структуры различных органов, крайне мало сообщений о результатах действия этих средств на структуры матки и ее регионарных лимфатических узлов, Необходимо отметить, что в литературе имеется только одно сообщение, что в результате химиотерапии происходит уменьшение объема матки (Kolaehana Р. et al., 1995). Имеющиеся сведения часто противоречивы и взаимно исключают друг друга- Кроме того, отсутствуют сообщения о результатах действия биологически активных веществ, полученных из растений рода Potentilla (Penlaphyl-loides), на лимфатический аппарат матки в условиях применения препаратов для лечения злокачественных опухолей, хотя предварительные данные показывают выраженную эффективность использования этих средств при других патологических состояниях (Колпаков М. А- и др,, 200 Ц Майбороднна В И., 2003, Баиул КВ., 2005).

Цель исследования:

Изучить действие водного экстракта курильского чая (Peniaphylloides fruticosa) на изменения структур лимфатического региона матки крыс, вызванные применением комплекса химиотсралсвтичсских средств.

Замачн исследования:

J Методами световой мтткроскотш изучить влияние водного экстракта курильского чая на измененное хнмтютерапсвтнчсскнми средствами соотношение слоев матки крыс.

2 Исследовать действие экстракта Pentaphylloides fruticosa на микроштркуля-шио крови и лимфы в матке крыс после полихимиотсрапин.

3 Определить реакцию регионарных к матке лимфатических углов на введение комплекса протнвоопухолевы х препаратов с последующей коррекцией препаратом курильского чая

Научная навита Qetv.ibiaroB iicc-ic.iiibjhhh:

Впервые нолучекы морфологические данные, свидетельствующие об уменьшении толщины стенки матки hi счет сокращения эндометрия и мномет-рня ttocjte введения комплекса химиотерапевтических средств При коррекции препаратом курильского чая обнаружена большая сохранность толщины мно-мегрия.

Впервые было обнаружено расширение компонентов регионального лимфатического русла эндометрия и миомстрия после применения противоопухолевых средств 11ослс применения экстракта курильского чая было отмечено более раннее возвращение к исходному уровню относительной площади лимфатических сосудов и межклеточных щелей указанных слоев матки.

Впервые получены данные, что полих нмиотсряпия приводит к подавлению мнтотнческой активности и увеличению числа клеток с деструктивными изменениями во всех зонах подвздошных лимфатических узлов. Коррекция препаратом курильского чая не приводит к изменениям количества митозов, бластов и нежизнеспособных клеток в данных органах

Впервые показано, что уменьшение численной плотности клеток в пара-кортнкальтюй чоне подвздошных лимфатических узлов и се расширение после нолтш1миотералии связано с застоем лимфы При применении водного экстракта Pcntaphylloides fruticosa отмечено более раннее восстановление указанпых изменений

Впервые обнаружено, что при полнхнмнотсрапин происходит уменьшение численности моношпон во всех структурах подвздошных лимфатических узлов крыс Применение водного экстракта Peniaphylloides fruttcosa не влияет на количество данных лейкоцитов

Научное и практическое шячснис работы:

В связи с тем, что сюсле комбинированной полнхимнотерални имеются признаки лимфосгаза в тканях матки и блокады лнмфогока на уровне ее регионарных лимфатических узлов, целесообразно создание и применение лекарственных препаратов для стимуляции сократительных элементов в стенке лимфатических сосудов, восстановления адекватного лнмфоогока or матки и ускорения прохождения лимфы через людфатическне сосуды и узлы. Водный экстракт курильского чая не меняет митоппсескую активность клеток и, параллельно. обладает возможностью стимулировать глалкомышеч] сыс клетки стенки лимфатических сосудов и капсулы узлов. Использование экстракта курильского чая после или в процессе гюлнхимнотсрапнн позволяет снизить дегенеративные изменения мномстрня. явления отека во всех слоях матки н в паракор-тнкальной зоне подвздошных лимфатических узлов.

Инс;фснис,pcty.iьт»гон исследовании в практику: Результаты исследования внедрены в практику научно-исследовательской работы группы пато-морфолопш лаборатории оперативной лимфологин клинического отдела НИИКкЭЛ СО РАМН, Новосибирского областного онкологического диспансера и муниципального перинатального центра г. Новосибирска

11а зяшнту выносятся следующие основные положения:

1 Применение противоопухолевого комплекса хнмнотсрвпсвтических средств приводит к уменьшению толшикы стенки матки из-за сокращения эндометрия и миометрия Водный -экстракт курильского чая оказывает протективный эффект на миометрий, дои в 50 мг/кг более действенна

2, Во всех слоях матки после введения противобластомного комплекса хнмн-опрепаратов были отмечены признаки лимфостаза После применения экстракта курильского чая было обнаружено более раннее купирование признаков застоя лкмфы

3, Введение иитостатнков подавляет митотичсскую активность и увеличивает число нежизнеспособных клеток во всех зонах подвздошных лимфатических узлов, кроме макетных тяжей Препарат курильского чая не эффективен в отношении коррекции данных изменений.

4, После но.чнхкмногерашш в паракортексе подвздошных лимфатических узлов были найдены явления застоя лимфы Экстракта Pentaphvllouk-s frulico&u приводит к более раннему восстановлению у казанных изменений.

Апробация чат ецналов диссертации:

Основные положения диссертации доложены на 6 Всероссийском съезде клинических щггологов (Новосибирск, 2004) и объединенном заседании сотрудников кафедр Новосибирской государственной медицинской академии it научного персонала лабораторий НИИ клинической и экспериментальной лнмфологии СО РАМН (I 1овосибнрск, 2005)

Публикации:

По теме диссертации опубликовано 4 печатные работы

Структура и объем диссертации:

Диссертация состоит т введения, материалов и методов исследования, собственных результатов с нх обсуждением, выводов, практических рекомендаций и списка литературы. Работа изложена на 201 странице машинописного текста, содержит 31 таблицу, иллюстрирована 46 рису нками Список литературы включает 346 источников (75 отечественных и 171 иностранный)

Автор искренне благодарен научным руководителям л м и . профессору

И В Майбороднну и дни, профессору О.Г Пекареву за научно-методическую помощь, ценные замечания и консультации в оргашгшиш экспериментов и проведения исследований в холе выполнении работы

161 выводы После введения комплекса хнмнотерапевтнческих средств происходи! уменьшение толщины стенки матки крыс за счет сокращения эндометрия и мнометрия На фоне коррекции препаратом курильского чая можно отметить большую сохранность мнометрня. причем применение дозы в 50 мг/кг оказываю более выраженный эффект

2 В эндометрии и мнометрнн после применения противоопухолевых средств было обнаружено расшнрсштс компонентов регионального лимфатического русла, что свидетельствует о застое лимфы и создании препятствий лимфо-току. После применения экстракта курильского чая было отмечено более ранее возвращение к исходному уровню опюсительной площади лимфатических сосудов и межклеточных щелей исследованных слоев матки.

3 Полнхнмнотсрапня приводит к подавлению мнтотичсской активности н увеличению числа клеток с деструктивными изменениями во всех зонах подвздошных лимфатических узлов, кроме мякотных тяжей, место специфических клеточных элементов занимают макрофаги и ретикулярные клетки Коррекция препаратом курильского чая не приводт к изменениям количества митозов, бластов и нежизнеспособных клеток в структурах данных органов

4. Уменьшение численной плотности клеток в паракортикальной зоне подвздошных лимфатических узлов и се расшнрсштс после полихнмиотерапин связано с депонированием лимфы При применении водного экстракта Реп-taphylioides fruticosa отмечено более раннее восстановление указанных изменений

5 Палнхнмнотсрапня приводит к уменьшению численности моноцитов во всех структурах подвздошных лимфатических узлов крыс Применение водного экстракта Pentaphylloides fruticosa не влияет на количество данных лей-коцнтов.

6. В щпограмме макетных тяжей подвздошных лимфатических узлов не было or мечено достоверных различий между сравниваемыми группами животных на все сроки исследования, зто связано с преобладанием в донных структурах высокодифферснинрованных плазматических клеток.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

В связи с тем. что введение цитостатиков приводит к депонированию лимфы в подвздошных лимфатических узлах и блокаде лимфотока в тканях матки, необходимо проведение мероприятий по стимулированию лимфотока. Использование экстракта курильского чая после или в процессе полнхнмноте-рапни позволяет ликвидировать явления лнмфостаза в указанных лимфатических узлах и в регионе их лнмфосбора.