Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Коррекция фенюльсом анемического синдрома и процессов перекисного окисления липидов в эритроцитах при клещевых нейроинфекциях

2 0 1.:ДШ2

на правах рукописи

КОЩЕВЕЦ ЕКАТЕРИНА СЕРГЕЕВНА

КОРРЕКЦИЯ ФЕНЮЛЬСОМ АНЕМИЧЕСКОГО СИНДРОМА И ПРОЦЕССОВ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ЭРИТРОЦИТАХ ПРИ КЛЕЩЕВЫХ НЕЙРОИНФЕКЦИЯХ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ лиссертаиии на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск - 2002

Работа выполнена в НИИ фармакологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН и в Сибирском государственном медицинском университете

Научный руководитель:

Доктор биологических наук, профессор Плотников М.Б. Консультант:

Доктор медицинских наук, профессор Серебров В.Ю.

Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор,

член-корреспондент РА VIH Новицкий В. В.

Доктор медицинских наук Маслов JI.H.

Ведущая организация - Новосибирская медицинская академия

Защита состоится «_»_2002 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 001.03 L.01 при НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН по адресу: 634028, г. Томск, пр. Ленина, 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ фармакологии ТНЦ СО РАМН

Автореферат разослан «_»__ 2002 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Амосова Е.Н.

Р ¿ZO. *6 - S2 О Р ¿29 ért О

СОКРАЩЕНИЯ, ИСПОЛЬЗОВАННЫЕ В РАБОТЕ

ГП — глутатионпероксндаза

ДК — диеновые коньюгаты

ИКБ — иксодовый клещевой боррелиоз

КА — каталаза

КНТ — коэффициент насыщения трансферином

КЭ — клещевой энцефхтит

ЛЖСС — латентная железосвязывающая способность

ЛФХ — лизофосфатидилхолин

МДА — малоновый диальдегид

ОШ — основания Шиффа

ОЖСС— общая железосвязывающая способность

СМ — сфингомиелин

СОД —супероксиддисмутаза

ТК —триеновые коньюгаты

а-ТФ — а-токоферол

ФИ — фосфатидюшнознтол

ФХ — фосфатидилхолин

ФЭА — фосфатидилэтаноламин

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

При инфекционно-воспалительных заболеваниях наблюдается относительный дефицит железа в организме, что может приводить к развитию анемических состояний. Среди причин повреждения клеток красной крови при клещевых нейроинфекци-ях может быть нарушение метаболизма в эритроцитах, вызванное изменением состав; и свойств мембран (Морозов H.A., 1996).

Наличие в патогенезе клещевых нейроинфекций (иксодовый клещевой боррелиоз клещевой энцефалит, микст инфекция) повреждения сосудистой стенки может усугубить течение этих заболеваний, оказывая влияние на эритроциты периферической крови, что отражается на клиническом течении как основного заболевания, так и сопутствующей патологии (Зиганьшина Р.Г., 1943; Коваленко В.Н., Семенов В.А., 1998).

Наблюдения разных лет в Западно-Сибирском регионе выявили изменения показателей периферической крови в остром периоде клещевого энцефалита, которьк характеризовались умеренной анемией у четверти больных (Верета Л.А., 1963; Кан тер В.М., 1965). В Кемеровской области З.И Вежеватова (1965) отмечала сниженш уровня гемоглобина у 44-48% и эритропению у 60% больных. Полное восстановлена гематологических показателей у этих пациентов наблюдалось только через 3 года При исследовании эритрограмм было выявлено, что красный росток костного мозг; претерпевал изменения, связанные со снижением эритропоэтической функции, чт< сопровождалось снижением эритробластов, снижением индекса созревания этих эле ментов костного мозга. Имеются предположения о том, что в разные годы и в разны: очагах картина крови у больных не была тождественной (Шаповал А.Н., 1980).

А.В Еремян (1960), изучая кровь больных при менингиальной форме клещевоп энцефалита, установил, что в разгар болезни количество эритроцитов существснн« не менялось, а во второй период заболевания, после исчезновения менингиальны: симптомов, выступала тенденция к некоторому их снижению.

Нарушения в эритропоэзе могут приводить к утяжелению течения инфекцион ных процессов. Существенной медико-социальной проблемой является увеличени случаев хронизации болезни и нередко связанной с этим инвалидизации пациентов В связи с этим, клиническая и социальная значимость изучения клещевых нейроин

фекций, а также поиск эффективных методов коррекции возникающей анемии представляется очевидным (Лобзин Ю.Б., 2000; Иерусалимский Л.П.. 2001).

Цель работы. Исследовать выраженность анемического синдрома и процессов перекиского окисления липидов в мембранах эритроцитов и изучить возможность их коррекции фенюльсом у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, мнкст инфекцией.

Задачи исследования:

1. Изучить, показатели, характеризующие анемический синдром: гемоглобин, эритроциты, сывороточное железо, общую железосвязывающую способность, цветовой показатель у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией. Изучить возможные различия в формировании изменений показателей крови у этих больных.

2. Выявить состояние активности процессов свободнорадикального окисления липидов мембран эритроцитов по содержанию в них диеновых и трненовых коньюга-тов, оснований Шиффа, малонового диальдегида у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией.

3. Изучить состояние антиоксидантнон системы — активности каталазы, супер-оксиддисмутазы, глутатионпероксидазы, концентрации а-токоферола в эритроцитах, содержание церулоплазмина, активности каталазы в сыворотке крови у больных с клещевыми нейроинфекциями в динамике заболевания.

4. Исследовать состав липидов, содержание общих липидов, фракций холестеро-ла, общих фосфолипидов в мембранах эритроцитов у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, мнкст инфекцией.

5. Выявить эффективность применения фенюльса в комплексном лечении больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией в качестве корректора анемии.

Научная новизна

Впервые проведено комплексное изучение показателей, характеризующих развитие анемического синдрома у больных с иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией и выявлены общие закономерности и различия в формировании дестабилизации мембран эритроцитов.

Показано, что у этих больных анемия сопровождается нарушением в системе перекисного окисления липидов эритроцитов, антиоксидантной защиты организма и изменения фосфолипидного состава мембран эритроцитов. При данной патологии, сопровождающейся увеличением перекисного окисления липидов, применение фенюльса, содержащего в своем составе двухвалентное железо, не индуцирует дальнейший рост этих процессов.

Показана эффективность применения фенюльса при использовании его в комплексном лечении у больных с пониженным содержанием гемоглобина в периферической крови при иксодовом клещевом боррелиозе, клещевом энцефалите, микст инфекции с целью коррекции анемического синдрома, наряду с основной терапией.

Практическое значение

На основе проведенных исследований разработаны практические рекомендации по использованию фенюльса в комплексном лечения больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией с анемией легкой степени. Полученные данные свидетельствуют об изменении состояния мембран эритроцитов при изучаемых нами заболеваниях и дают возможность своевременной коррекции в комплексной терапии с применением фенюльса в случаях развивающейся анемии у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией, предотвращая переход этого осложнения в хроническую форму.

Внедрение

Результаты настоящих исследований внедрены в комплексное лечение бодьных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией на базе клиники инфекционных болезней СГМУ г. Томска.

Положения, выносимые на га щиту

1. У больных с клещевыми нейроинфекциями развитие анемии наблюдается в 15-22% случаях, что выражается в снижении концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, сывороточного железа, ОЖСС. Развивающаяся анемия является нормо-хромной, нормоцитарной в 98% случаев и характеризуется как анемия легкой степени.

2. При различных нозологических формах изучаемых нами нейроинфекций изменения происходят с различной интенсивностью, степень которой определяется понижением содержания гемоглобина, снижением количества эритроцитов в перифери-

¡ecKoií крови, снижением содержания сывороточного железа и общей железосвязы-¡ающей способности сыворотки крови.

3. Применение фенюльса в качестве корректора в случаях развивающейся ане-ши оказывает нормализующее воздействие как на показатели периферической крови концентрация гемоглобина, количество эритроцитов), показателей обмена железа концентрация сывороточного железа, ОЖСС), так и на состояние продуктов пере-исного окисления липидов и антиокислительной защиты в эритроцитах, включая табилизацию фосфолипидного спектра мембран.

Апробация работы

Материалы диссертации были представлены на Всероссийском конгрессе «По-имеразная цепная реакция в динамике и контроле лечения инфекционных заболева-ий» (Москва, 1998 г.), VI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарст-о» (Москва, 1999 г.), международном симпозиуме «Медицина и охрана здоровья» Москва, 1999 г.), Российско-итальянской конференции «Инфекционные болезни, ди-гностика, печение, профилактика» (С.-Петербург, 2000 г.), I международной юби-ейной конференции «Актуальные проблемы инфектологин и паразитологии» Гомск, 2001 г.), VI Всероссийской конференции «Биоантиоксидант» (Москва, 002 г.). Результаты работы были обсуждены на заседании кафедры биохимии и мо-екулярной биологии СГМУ (Томск, 2001,2002 гг.).

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из ведения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, резуль-ггов собственных исследований и их обсуждения, выводов, практических рекомен-аций, списка литературы. Исследования, приведенные в диссертации, представлены 24 таблицах, иллюстрированы 10 рисунками. Библиографический указатель содер-ит 241 источник (162 отечественных и 79 зарубежных авторов).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе представлены обследования 264 больных, в том числе 82 с иксодовым клещевым боррелиозом, 89 — с клещевым энцефалитом, 93 — с микст инфекцией. Возраст больных от 17 до 55 лет, мужчин 159 (62,2%), женщин 105 (38,8%).

Среди заболевших иксодовым клещевым боррелиозом мужчины составляли 32%, женщины - 68%. Преимущественных возрастных категорий не выявлено. Эри-темная форма заболевания являлась преобладающей. Основными формами течения заболевания являлись средняя (78%) и легкая степень (22%). Для подтверждения клинического диагноза у больных с иксодовым клещевым боррелиозом использовали иммуноферментный анализ (ИФА) с очищенными антигенами боррелий, а также ре-комбинантных антигенов, обусловливающих высокую степень специфичности теста; реакцию непрямой флуоресценции (нРИФ).

С заболеванием клещевой энцефалит лица мужского пола составляли 71 %, женского пола — 29% в возрасте 25-56 лет. У 90% больных установлена средняя степень тяжести течения заболевания. При клещевом энцефалите иммунологический диагноз устанавливался на основании выявления нарастания титра антител в парных сыворотках крови больного методом ИФА.

Клиническая картина смешанной инфекции характеризуется в большинстве случаев доминированием признаков одного заболевания и практически никогда нет сочетания их клинических симптомов у одного больного. Из клинических симптомов на первый план выступают симптомы общей инфекционной интоксикации. Обращает на себя внимание более легкое течение заболевания микст инфекции, что выражается в более частой регистрации стертой формы клещевого энцефалита.

Для оценки состояния здоровья больных была заведена индивидуальная карта, в которую вносились сведения о больном, клинический диагноз, эпиданамнез, клинические симптомы, лечение, лабораторные исследования, специфические исследования.

Критерием анемии принято снижение концентрации гемоглобина у мужчин ниже 130 г/л, у женщин - ниже 120 г/л. (ВОЗ, 1989 г.). Анализ показал, что клинические проявления анемии легкой степени выраженности (слабость, утомляемость, головокружение, плохой аппетит), как правило, объяснялись следствием основного заболевания.

Стандартное лечение при нксодовом клещевом боррелиозе включало антибио-тикотерапшо в различных схемах; при клещевом энцефалите - противовирусную терапию в различных схемах; при микст инфекции - сочетание противовирусной и антибактериальной терапии в различных схемах (табл. 1).

Таблица 1

Схемы лечения больных

Иксодовый клещевой боррелиоз Антибиотнкотерапия (пенициллин 500 тыс. в/м 14 дней или доксициклнн 0,1 в/в 2 раза в день 14 дней, затем бицнл-лин-5 в/м 3 млн. 1 раз)

Антибиотнкотерапия + йода1 (типирин (пенициллин 500 тыс. в/м 14 дней или доксициклнн 0,1 в/в 2 раза 14 дней, затем бициллин-5 в/м 3 млн. 1 раз; йодантипирин 0,1 в сутки в течение 7 дней)

Клещевой энцефалит Авирин (5,0 в/в струйно, однократно, в течение двух дней)

Авирин + рибонуклеаза (авирин 5,0 в/в струйно, однократно, в течение двух дней; рибонуклеаза 0,03 в/м 6 раз в сутки 5 дней)

Авирин + йодантипирин (авирин 5,0 в/в струйно однократно в течение 2дней; йодантипирин 0,2 в сутки в течение 5 дней)

Микст инфекция Антибиотнкотерапия + авирин (пенициллин 500 тыс. в/м 14 дней или доксициклнн 0,1 в/в 2 раза 14 дней, затем бициллин-5 в/м 3 млн. 1 раз; авирин 5,0 в/в струйно однократно в течение 2 дней)

Антибиотикотерапия + йодантипирин (пенициллин 500 тыс. в/м 14 дней или доксициклнн 0,1 в/в 2 раза, 14 дней, затем бициллин-5, в/м 3 млн. 1 раз; йодантипирин 0,1 в сутки в течение 7 дней)

В пробах крови исследовали:

1) концентрацию гемоглобина, количество эритроцитов, цветовой показатель, концентрацию сывороточного железа, общую железосвязывающую способность (ОЖСС), латентную железосвязывающую способность, коэффициент насыщения трансферрином;

2) в мембранах эритроцитов показатели перекисного окисления липидов, включающих определение содержания диеновых коньюгатов, триеновых коньюгатов, оснований Шиффа, малонового диальдегида, индекса окисленности;

3) показатели антиоксидантной защиты, включающие определение активности каталазы, супероксиддисмутазы, глутатионпероксидазы, содержание а-токоферола; в эритроцитах, активность каталазы, концентрацию церуллоплазмина в сыворотке крови;

4) липидный состав мембран эритроцитов, включающий определение содержания общих липндов, общих фосфолшшдов, холестерола, спектра фосфолипидов мембран эритроцитов.

Использование этих методик позволило объективно охарактеризовать изменения, происходящие на уровне мембран эритроцитов у больных с анемией при иксодо-вом клещевом боррелиозе, клещевом энцефалите, микст инфекции.

Определение концентрации гемоглобина проводили цианметгемоглобиновым методом, количество эритроцитов определяли фотометрически в 9,0 мл 3% NaC! и 0,02 мл крови при 670 км (Кост Е.А., 1968).

Концентрацию сывороточного железа, ОЖСС, определяли с использованием стандартных наборов «Vital Diagnostics» (Санкт-Петербург) (Колб В.Г. и соавт., 1982).

Определение белка проводили мнкробиуретовым методом (Itzhaki R., Gill D.M., 1964; Кочетов Г. А., 1980).

Состояние процессов перекисного окисления липидов оценивали по:

1) содержанию диеновых, триеновых коньюгатов, определяемых спектрофото-метрически (Plazer Z., Kuzela L., 1968; Гаврилова В.Б. и соавт,, 1983), индекса окис-ленности липидов (Лебедев A.C. и соавт., 1995);

2) содержанию оснований Шиффа, определяемых спектрофлюориметрически (Tappel АЛ., 1978);

3) содержанию малонового диальдегида в реакции с тиобарбитуровой кислотой (Владимиров Ю.А. и соавт., 1972; Андреева Л.И. и соавт., 1988).

Состояние антиоксидантной системы оценивали по:

1) активности каталазы по методу М.А Королкж (1988);

2) определению активности глутатионпероксидазы спектрофотометрически (Little С., O'Brien P.I., 1968; Гаврилова А.П. и соавт., 1986);

3) определению активности супероксиддисмутазы спектрофотометрически (Брусов О.Г. и соавт., 1976; Fridovich I., 1981; Oberley L.V., 1985);

4) содержанию а-токоферола спектрофлюориметрпчсски (Duggan D.E.. 1959; Досон Р. и соавт., 1991):

5) определению концентрации церулоплазмина в сыворотке крови по методу Н.А Ravin (Колб В.Г. и соавт., 1982).

Определение общих липидов проводили по методу Кнайта и соавт. (¡972) с фосфорнованилиновым реактивом, количество общих фосфолпппдов определяли по содержанию в них липидного фосфора (Колб В.Г. и соавт., 1982), липиды экстрагировали по методу J. Folch (1957) Разделение фракций фосфолипидов проводили на пластинах «Siiufol UV254» (Финдлей. Э., 1991).

Статистическая обработка результатов проведена с помощью пакета программ «Statistica-5». Для оценки статистической достоверности использован /-критерий Стыодентас определением средней арифметической (X) и её стандартной ошибки (т), при условии нормального распределении признаков. Проверка нормальности проведена с помощью показателей асимметрии и эксцесса. При распределении, отличающемся от нормального, результаты обработаны непараметрическим критерием Вил-коксона-Манна-Уитни. Различия считались достоверными при Я <0.05 (Гмурман В.Е., 1977; Лакин Г.Ф., 1990; Михайлов А.Г. и соавт., 1998).

Все больные с пониженным содержанием гемоглобина в каждой нозологической единице (иксодовый клещевой боррелиоз, клещевой энцефалит, микст инфекция) были разделены на 2 группы. В группу I вошли больные, получавшие стандартное лечение, в группу II — больные, получавшие стандартное лечение, сопровождающееся назначением фенюльса после двух недель терапии. Фенюльс (м.н.н., фирмы «Ranbaxy»), назначался по одной капсуле (45 мг) в день после еды в течение 2 недель.

Контрольную группу составили 24 практически здоровых человека, у которых не выявлено перечисленных выше заболеваний.

Первое исследование проводилось в период разгара болезни (до начала лечения), второе — в первой фазе периода реконвалесценции (через 2 недели), третье — перед выпиской из стационара после лечения (через 4 недели). Сравнивались показатели лечения в группе I и группе II (табл. 2).

Таблица 2

Распределение больных по группам наблюдения и периодам обследования

Группы наблюдения

Диагноз Количество обследованных больных Периоды наблюдения Группа I Группа II

Стандартное лечение Стандартное лечение, фенюльс

Количество больных

Иксодовый клещевой боррелиоз 82 До начала лечения 9 9

Через 2 недели 8 9

Через 4 недели 9 9

Клещевой энцефалит 89 До начала лечения 9 9

Через 2 недели 9 9

Через 4 недели 9 9

Микст инфекция 93 До начала лечения 7 7

Через 2 недели 7 7

Через 4 недели 7 7

Здоровые 24

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты проведенного нам» исследования подтвердили наличие изменений количественных показателей эритроцитов у больных иксодовым клещевым боррелио-зом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией и позволили выявить общие тенденции развития исследуемых патологических процессов.

Было отмечено, что среди пациентов с иксодовым клещевым боррелиозом анемия легкой степени регистрируется в 22% случаев. Она характеризуется снижением гемоглобина ниже 130 г/л у мужчин и ниже 120 г/л у женщин, уменьшением количества эритроцитов, снижением концентрации сывороточного железа и ОЖСС, имеет нормохромный и нормоцитарный характер. Величина цветового показателя соответствовала 0,90±0,05 у мужчин и 0,95±0,06 — у женщин. У больных с клещевым энцефалитом в 20% случаев отмечаюсь статистически значимое снижение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, концентрации сывороточного железа, ОЖСС. Величина цветового показателя соответствовала 1,05±0,05 у мужчин и 0,92±0,06 — у женщин. У больных с микст инфекцией эти изменения отмечены в 15% случаев. Величина цветового показателя соответствовала 0,95±0,03 у мужчин и 0,91±0,05 — у женщин. Надо отметить, что величина цветового показателя не выходила за пределы общепринятой гематологической нормы.

Наряду с этим выявлено, что у мужчин понижение концентрации гемоглобина было более выраженным, чем у женщин, и составляло 18-20% по отношению к аналогичным показателям у здоровых лиц; количество эритроцитов уменьшалось на 9%, концентрация сывороточного железа на 32-37% соответственно. У женщин эти показатели были снижены до 14-16%, 6-8%, 30-35% соответственно.

Возникновение анемического состояния чаще наблюдалось у больных с иксодовым клещевым боррелиозом и клещевым энцефалитом, однако, среднее значение гемоглобина у больных с клещевым энцефалитом в период разгара заболевания было более низким по сравнению с контролем, чем у больных с иксодовым клещевым боррелиозом и микст инфекцией.

При анализе показателей перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов у больных с иксодовым клещевым боррелиозом в период проявления острых симптомов заболевания было выявлено увеличение содержания ДК в 3,5 раза, ТК и ОШ — в 2 раза. Содержание МДА было увеличено в 1,6 раза, а индекс окисленно-

ста, отражающий долю липндов, окисленных до ДК в мембранах эритроцитов также, повышен по сравнению с показателями у здоровых лиц. У больных с клещевым энцефалитом в этот период содержание ДК и ТК, в мембранах эритроцитов было увеличено в 2 раза, ОШ — в 1,2 раза, МДА — в 1,6 раза. У больных с микст инфекцией было выявлено увеличение содержания ДК в 3 раза, ТК — в 3,2 раза, ОШ — в 1,2 раза, МДА — в 1,6 раза, показатель ИО был увеличен в 1,3 раза. Усиление процессов ПОЛ свидетельствует о развитии субкомпенсационных и декомпенсационных стадиях развития инфекционной патологии в остром периоде заболевания. Инфекционный процесс приводит к изменению всех параметров регуляторной системы клетки. Усиление окислительных превращений приводит к накоплению продуктов перекисного окисления липидов.

Состояние антиоксидангной защиты крови обеспечивает устойчивость к воздействию различных повреждающих факторов. Результаты исследования активности каталазы в эритроцитах у больных с иксодовым клещевым боррелиозом (у мужчин и у женщин) показали, что активность этого фермента в эритроцитах увеличена в период острой фазы заболевания. В сыворотке крови активность каталазы также была повышена в период разгара клинических симптомов. У больных клещевым энцефалитом активность каталазы в эритроцитах у мужчин в этот период не изменялась, а у женщин она была снижена на 33%. В сыворотке крови активность каталазы у мужчин была увеличена в 2 раза, а у женщин активность этого фермента не изменялась. У больных микст инфекцией активность каталазы у мужчин была снижена в 2 раза, а у женщин этот показатель оставался стабильным. В сыворотке крови у мужчин активность каталазы не претерпевала значимых изменений по сравнению с контролем, а у женщин активность этого фермента была увеличена в 2 раза. При ик-содовом клещевом боррелиозе активность глутатнонпероксидазы (ГП) у мужчин до начала лечения была снижена, а у женщин увеличена в 2 раза по сравнению с показателями у здоровых лиц. При клещевом энцефалите активность ГП у мужчин была увеличена на 19%, а у женщин — на 20% соответственно. У больных с микст инфекцией активность ГП не отличалась от соответствующих показателей у здоровых лиц. В период острых проявлений заболевания активность СОД в мембранах эритроцитов у больных иксодовым клещевым боррелиозом была увеличена в 2 раза. Активность СОД у больных с клещевым энцефалитом в этот период не имела статистически зна-

чимых отличий от аналогичных показателей у здоровых лиц. При микст инфекции активность СОД у мужчин не изменялась, а у женщин была увеличена более чем в 2 раза. Содержание а-токоферола у больных с иксодовым клещевым боррелиозом в острый период заболевания у мужчин не было изменено, а у женщин было снижено на 20%. У больных клещевым энцефалитом и микст инфекцией в период острых проявлений заболевания содержание а-токоферола не было изменено, что говорит о функциональной устойчивости внешней плазматической мембраны эритроцитов в этот период. Это можно расценивать как сохранение компенсаторных механизмов и выходом его в кровь из органов резервирования.

Значительные изменения претерпевает система актиоксидантных ферментов, играющих важную роль в поддержании окислительно-восстановительного гомеостаза клеток красной крови. Отмечено, что при иксодовом клещевом боррелиозе усиление процессов перекисного окисления липидов сопровождалось достаточно высокой активностью каталазы, глутатионпероксидазы и супероксиддисмутазы в эритроцитах в период острой фазы заболевания. Тем не менее, в этот период заболевания наблюдалось снижение содержания а-ТФ в мембранах эритроцитов, что, может быть причиной активации лизосомальных ферментов и повышения чувствительности к пере-кисному гемолизу. При клещевом энцефалите и микст инфекции снижения а-ТФ в этот период не наблюдалось.

Известно, что перекисному окислению подвергаются в первую очередь фосфо-липиды, содержащие в своем составе значительно больше ненасыщенных жирных кислот, чем нейтральные липиды. В этой связи необходимо было проследить за относительным содержанием отдельных липидных фракций в изучаемых нами группах.

Результаты исследования методом тонкослойной хроматографии показывают, что количество общих фосфолипидов колеблется в пределах 51-62 %, холестерина 40-50 %. Исследование отдельных фракций фосфолипидов в мембранах эритроцитов в процессе развития инфекционного процесса выявило изменения в их составе. При иксодовом клещевом боррелиозе в остром периоде заболевания у мужчин были выявлены изменения в увеличении фракции ФХ и снижении фракций ФС, ФИ. Наиболее стабильными фракциями оказались СМ и ЛФХ, которые составляют 12-15 % и 3-4% соответственно от общего количества липидов. У женщин наиболее лабильной оказалась фракция ФЭА, которая составляла 31-35 % от общего количества липидов.

У мужчин с клещевым энцефалитом в острый период заболевания наблюдалось снижение фракции ФХ, у женщин наблюдалось снижение фракций СМ и ФХ, увеличение фракции ФИ. У мужчин с микст инфекцией изменениям подвергалась фракция ФИ, у женщин фракции ФС, ФЭА.

Интенсификация процессов регенерации и разрушения эритроцитов в организме непосредственно связана с характерными качественными и количественными изменениями липидов в эритроцитарных мембранах. Усиление реакции ПОЛ в эритроцитах происходит на фоне снижения активности защитных антиокислительных систем клетки. Известно, что увеличение количества фосфолипидов, в состав которых входят ненасыщенные жирные кислоты, приводит к понижению микровязкости, к разжижению липидного компонента мембран, изменению характера липид-белковых взаимодействий, ускорению тех ферментных реакций , для которых данные фосфолипиды являются эффекторами (Сторожек Н.М., 1997). Они выполняют роль модуляторов функциональной активности клетки. Однако повышенное содержание в мембранах ненасыщенных жирных кислот при определенных условиях приводит к интенсивному развитию реакций перекисного окисления и повреждению клеточных структур.

Повышение процессов проницаемости мембран эритроцитов и выход из них субстратов и ферментов сопряжены с интенсификацией процессов свободноради-кального окисления липидных структур красных клеток крови на фоне нарушения их антиоксидантной клеточной защиты.

Таким образом, выявлено, что возникновение анемических состояний чаще наблюдалось у больных с иксодовым клещевым боррелиозом, хотя у этих у больных вышеперечисленные показатели отличались меньшей степенью выраженности по сравнению с больными клещевым энцефалитом и микст инфекцией.

Величина цветового показателя не выходила за пределы общепринятой гематологической нормы. У больных отмечалось развитие нормохромной анемии. На долю анемии легкой степени приходилось 98%. Анемический синдром, как правило, нарастал в течение первых двух недель после начала заболевания.

Из вышеизложенного следует, что изучение изменений, происходящих в клетках красной крови имеет важное клиническое значение для обнаружения в них изменений еще до начала регистрируемых клинически признаков анемии, так как симптомы интоксикации маскируют вполне вероятный процесс нарушений в эритроцитах. Отсюда

вытекает целесообразность выбора, наряду с комплексным лечением, дифференцированных методов коррекции состояния этого звена эритрона.

Опыт применения фенюлъса у больных с иксодовым клещевым боррелиозом после двух недель от начала стандартной терапии выявил статистически значимое (/'<0,05) увеличение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, сывороточного железа, ОЖСС в группе II по сравнению с группой I, в которой этот препарат не применялся. У больных с клещевым энцефалитом так же наблюдалось статистически значимое увеличение гемоглобина, сывороточного железа, ОЖСС в группе II, по сравнению с группой I. У больных микст инфекцией в группе II отмечалось достоверное увеличение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, сывороточного железа, ОЖСС по сравнению с больными до лечения (Р < 0,05). Исследуемые показатели достигали уровня аналогичных значений у здоровых лиц (табл. 3).

Таблица 3

Динамика концентрации гемоглобина (г/л), в периферической крови у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией (Х± т)

Диагноз Пол Больные до лечения Больные после лечения

Группа I Группа И

Иксодовый клещевой боррелиоз Мужчины 125,3±4,5 135,2±3,5* 147,6±4,6Л°

Женщины 117,5±3,5* 129,0±3,5Л 137,8±3,7Л°

Клещевой энцефалит Мужчины 121,5±3,1* 130,6±3,5*л 144,6±5,6*л°

Женщины П4,7±4,3* 125,7±3,9* 137,5±3,4Л°

Микст инфекция Мужчины 123,3±4,5* 135,6±3,1* 150,8±3,3ЛО

Женщины 117,6±3,7* 128,7±2,2Л 137,8±3,2ло

Здоровые Мужчины 151,2±4,6

Женщины 135,5±4,2

Примечание к таблицам 3, 4, 5:

* — Р < 0,05 по сравнению с аналогичными показателями у здоровых лиц; А — Р<0,05 по сравнению с аналогичными показателями у больных до лечения; ° — Р< 0,05 по сравнению с аналогичными показателями у больных группы I

Изучение основньгх механизмов дестабилизации клеточных мембран позволило установить повышение активности процессов ПОЛ у больных с изучаемыми инфекциями в острый период заболевания. Однако, после проведения терапии фенюльсом

наблюдалось значимое снижение (/><0,05) содержания МДА по сравнению с группой I, где данная терапия не применялась. У больных клещевым энцефалитом в группе И происходило снижение количества ДК, МДА. У больных с микст инфекцией было отмечено, что содержание ОШ, МДА в группе 11 после комплексного лечения нормализовалось по сравнению с таковыми значениями в группе 1 (табл. 4). Наиболее выраженное снижение содержания МДА, ДК, ИО при использовании фенюльса в комплексном лечении наблюдалось у больных с микст инфекцией по сравнению с иксодовым клещевым боррелиозом и клещевым энцефалитом.

Таблица 4

Показатели перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов (Х± т)

Диагноз Больные до лечения Больные после лечения

Группа I | Группа II

Диеновые коньюгаты (ДК, СЮ232/мг липидов)

Иксодовый клещевой боррелиоз 3,2б±0,05* 2,81±0,06* 2,25±0,03*л

Клещевой энцефалит 3,15±0,07* 2,30±0,05*л 1,70±0,08*ЛО

Микст инфекция 3,62±0,03* 2,50±0,03*л 1,70±0,02*ЛО

Здоровые 1,02±0,02

Малоновый диальдегид (нмоль/мг липидов

Иксодовый клещевой боррелиоз 2,00±0,02* 2,05±0,02* 1,45±0,01л°

Клещевой энцефалит 2,62±0,03* 2,35±0,03* 1,72±0,03ЛО

Микст инфекция 2,05±0,02* 1,75±0,03* 1,40±0,07ЛО

Здоровые 1,25±0,06

Индекс окисленности (отн. ед.)

Иксодовый клещевой боррелиоз 0,93±0,01* 0,85±0,03* 0,80±0,03*

Клещевой энцефалит 0,89±0,04* 0,86±0,03* 0,62±0,02*ЛО

Микст инфекция 0,84±0,03* 0,80±0,03* 0,70±0,03л

Здоровые 0,64±0,01

Анализ фосфолипидов мембран эритроцитов у больных с иксодовым клещевым боррелиозом показал, что изменения происходят в перераспределении фракций фосфолипидов в течение всего периода заболевания. В период клинического выздоровления у больных с иксодовым клещевым боррелиозом в группе II происходит нормализация фракций фосфолипидов, тогда как в группе I у мужчин остаются изменения во фракциях СМ, ФХ, ФС, ФЭА, у женщин сохраняются изменения со стороны фракций СМ, ФХ, ФС, ЛФХ (рис. 1).

Я

П Здоровые □ Группа 1 Ш Группа 2

б

СМ ФХ ФС ФИ ФЭА ЛФХ

Рис. I. Содержание фракций фосфолипидов в мембранах эритроцитов у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией I I — здоровые; ВШЯ — группа 1; ЦЦ — группа 2: Р < 0,05 по отношению к группе 1

При сравнительном анализе лнпидного спектра мембран эритроцитов в группах I и П у больных с микст инфекцией выявлено, что группе II (как у женщин, так и мужчин) к периоду клинического выздоровления содержание фракций фосфолипи-дов соответствовал аналогичным значениям у здоровых лиц. У мужчин и у женщин группы I к периоду клинического выздоровления содержание фракции ФХ было снижено по сравнению с таковыми в группе И. У мужчин группы I также оставалась повышенной фракция ФИ.

Одной из причин накопления эндогенных продуктов ПОЛ в мембранах эритроцитов может быть возникновение нарушения антиоксидантной защиты в системе регуляции реакций ПОЛ, основными компонентами которой являются а-ТФ, СОД, ГП. Возникшее накопление продуктов ПОЛ может приводить к снижению фонда эндогенных антиоксидантов.

При анализе показателей антиоксидатной защиты в эритроцитах и сыворотке крови у больных с иксодовым клещевым боррелиозом было установлено, что у больных группы II, получавших фенюльс, снижение а-ТФ в мембранах эритроцитов было менее значимым (Р < 0,05). Содержание а-ТФ в процессе заболевания в группе I было снижено более, чем в 2 раза (табл. 5). В то же время активность ГП в эритроцитах у больных, получавших фенюльс была повышена, по сравнению с активностью этого фермента у больных, не получавших его. У больных группы II с КЭ наблюдалось значимое увеличение активности ГП и СОД в период клинического выздоровления (через 4 недели) по сравнению с аналогичными показателями в группе I. Содержание а-ТФ в группе II (у мужчин и женщин) не изменялось в течение наблюдаемого периода, тогда как в группе I в период клинического выздоровления содержание а-ТФ было снижено на 6%.

□ Здоровые О Группа 1 0 Группа 2

И КБ КЗ Микст

Рис. 2. Содержание а-токоферола у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией: Р < 0,05 по отношению к группе 1

У больных С микст инфекцией было установлено, что содержание а-ТФ в группе II с применением фегао.тьса не изменялось по сравнению с соответствующим показателем в группе I. Активность каталазы в мембранах эритроцитов в период клинического выздоровления у больных в группе II нормализовалась, в отличие от таковой в группе I, где активность этого фермента у мужчин оставалась пониженной.

Способность фешольса ограничивать сдвиги изученных показателей можно объяснить действием входящих в его состав биоантиоксидактов и биологически активных веществ (железа, аскорбиновой кислоты, рибофлавина, тиамина мононитрата, никотинамида, пиридоксина гидрохлорида, пантотеновой кислоты), которые потеи-циируют защитные эффекты, связанные с их биологической активностью (торможение антибиотического неферментативного аутоокисления, индуцируемого неспецифическими агентами) и функционированием их в составе физиологической антиокси-дантной системы. Это определяет.перспективы использования данного препарата в качестве заместительной терапии при иксодовом клещевом боррелиозе, клещевом энцефалите, микст инфекции.

ВЫВОДЫ

1. Выявлены количественные и качественные изменения в эритроцитах крови у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией. У больных иксодовым клещевым боррелиозом отмечено снижение концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, сывороточного железа, ОЖСС в 22% случаев, клещевым энцефалитом — в 20% случаев, микст инфекцией — в 15% случаев. При клещевом энцефалите изменения этих показателей носили более выраженный характер по сравнению с аналогичными изменениями при иксодовом клещевом бор-релиозе и микст инфекции. Наибольший процент анемии встречается у больных с иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, из них на долю анемии легкой степени приходится 98 %. Усиление явлений анемии наблюдается через 2 недели после начала острого периода заболевания клещевой нейроинфекцией.

2. Применение фенюльса в качестве коррегирующего препарата у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией, осложненных анемией, приводит к нормализации концентрации гемоглобина, количества эритроцитов, сывороточного железа и ОЖСС в крови.

3. Развитие клещевых нейроинфекций характеризуется значительным повышением активности процессов перекисного окисления липидов в мембранах эритроцитов, высоким содержанием начальных (диеновых коньюгатов) и конечных продуктов переокисления (оснований Шиффа) на высоте клинических проявлений болезни и в период ранней реконвалесценции.

4. Включение в комплексную терапию фенюльса позволяет значительно снизить активность ПОЛ, что проявляется в понижении уровня диеновых коньюгатов, оснований Шиффа, концентрации малонового диальдегида.

5. Высокая активность процессов пероксидации мембранных липидов у больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией в период разгара болезни вызывает изменения в содержании легкоокисляемых (ФС. ФЭА). трудноокисляемых фосфолипидов (СМ, ФХ), холестерола, лизофосфатидилхолина.

6. Фенюльс оказывает стабилизирующий эффект, направленный преимущественно на нормализацию уровня основных структурных компонентов мембран эритроцитов (СМ, ФХ, ФЭА).

7. Усиление процессов перекисного окисления липидов и снижение антиокси-дантной защиты в эритроцитах у больных иксодовым клещевым боррелиозом. клещевым энцефалитом и микст инфекцией обнаружены как у пациентов с анемией, так и у пациентов без лабораторно регистрируемых признаков анемии, однако в первом случае они более выражены.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При клещевых нейроинфекциях у больных с пониженным содержанием гемоглобина в периферической крови целесообразно проводить исследование интенсивности процессов перекисного окисления липидов и состояния антиоксидантной системы для своевременной коррекции этих изменений. Показатели активности процессов переокисления липидов в эритроцитах могут служить дополнительным диагностическим критерием объективной оценки течения клещевых неГфоинфекций.

2. В комплексном лечении больных иксодовым клещевым боррелиозом, клещевым энцефалитом, микст инфекцией, осложненных анемией, целесообразно применение фенюльса, назначенного в период улучшения общеклинических симптомов, который способствует более эффективному восстановлению клеток красной крови.

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Опьгг применения фенюльса в комплексном лечении больных описторхозом / Лепехин A.B., Бужак Н.С., Смирнова И.В., Чернышова Н.П., Кощевец Е.С. // Сибирский медицинский журнал гепатологии и гастроэнтерологии. - 1999. 3. - С. 155-161.

2. Клиническая эффективность препарата фенюльс при инфекционных заболеваниях / Лепехин A.B., Бужак Н.С., Кощевец ЕС., Смирнова И.С., Чернышева Н.П. И Тезизы докладов VI Всероссийского национального конгресса «Человек и лекарство». -М., 1999.-J63.-C. 308.

3. Кощевец Е.С. Динамические изменения холестеринового спектра при нейро-инфекциях / Лепехин A.B., Бужак Н.С., Чернышова Н.П., Бужак H.H. // Материалы международного симпозиума «Медицина и охрана здоровья». - М., 1999. - С. 84-85.

4. Опыт применения фенюльса в комплексном лечении инфекционной и паразитарной патологии / Лепехин A.B., Бужак Н.С., Смирнова И.В., Чернышова Н.П., Кощевец ЕС. // Консилиум. - 1999. - № 5 (8). - С. 69-71.

5. Кощевец Е.С. Состояние мембран эритроцитов при КЭ, Лайм боррелиозе и микст инфекции / Лукашова Л.В., Лепехин A.B., Чернышова Н.П., Жукова H.H. // VI Российско-итальянская конференция «Инфекц. болезни, диагностика, лечение, профилактика». - С.-Петербург, 2000. - С. 124-125.

6. Клинические аспекты ассоциированной инфекции иксодового и клещевого боррелиоза и клещевого энцефалита / Лукашова Л.В., Лепехин A.B., Чернышова Н.П., Жукова H.H., Кощевец. Е.С. // VI Российско-итальянская конференция «Инфекц. болезни, диагностика, лечение, профилактика». - С.-Петербург, 2000. - С. 148-149.

7. Результаты лечения авирином, вирусоносительство при КЭ / Чернышова Н.П., Лукашова Л.В., Лепехин A.B., Жукова H.H., Кощевец. Е.С. // VI Российско-итальянская конференция «Инфекц. болезни, диагностика, лечение, профилактика». - С.Петербург, 2000.- С. 287.

8. Кощевец ЕС. Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиок-сидантной системы в мембранах эритроцитов у больных с микст инфекцией, вызванной болезнью Лайма и клещевым энцефалитом» I Серебров В.Ю., Лепехин A.B., Плотников М.Б., Маслов М.Ю., Сопрун Д.Н., Шепелев Ю.Ю. // Материалы I международ, конф. «Актуальные проблемы инфектологии и паразитологии». - Томск, 2001. - С. 67.

Отпечатано в лаборатории оперативной полиграфии СГМУ Захаз № jM- Ш-