Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Комплексное исследование количественного состава лейкоцитов и функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови в различные промежутки времени после наступления смерти организма
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.36
Автореферат диссертации по медицине на тему Комплексное исследование количественного состава лейкоцитов и функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови в различные промежутки времени после наступления смерти организма
На правах рукописи
Сафин Равиль Якупович
КОМПЛЕКСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПРОМЕЖУТКИ ВРЕМЕНИ ПОСЛЕ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ ОРГАНИЗМА
14 00 36 - аллергология и иммунология 14 00 24 - судебная медицина
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
003170884
Челябинск - 2008
003170884
Работа выполнена в научно-исследовательском институте иммунологии и на кафедре судебной медицины Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образовательного учреждения высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Научные руководители:
Заслуженный деятель науки РФ, Член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук,
профессор Долгушин Илья Ильич
Кандидат медицинских наук,
доцент Губайдуллин Мунир Ибрагимович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор
доктор медицинских наук, профессор
Сашенков Сергей Львович Конев Владимир Павлович
Ведущая организация:
Институт иммунологии и физиологии УрО РАН (г Екатеринбург)
Защита диссертации состоится «7 й» ц^ил 2008 года в I часов на заседании Диссертационного совета Д 208.117 03 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» по адресу 454092, г Челябинск, ул Воровского, 64
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Автореферат разослан « 1\ » алиА 2008 г.
Ученый секретарь Диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор Л.Ф. Телешева
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы
Проблема определения давности наступления смерти (ДНС) была и продолжает оставаться одной из наиболее актуальных и сложных в судебной медицине (Пиголкин Ю И и др , 1999, Витер В И и др, 1999) К настоящему времени разработан широкий спектр методов судебно-медицинского определения ДНС, который включает методы, изучающие ранние и поздние трупные изменения с использованием инструментальных методик, методы, построенные на изучении морфо-функциональных изменений, происходящих в органах, тканях и жидкостях трупа, и методы, в основе которых лежит создание математических моделей и специальных формул, позволяющих учитывать многообразие индивидуальных признаков, а также внутренних и внешних условий, влияющих на танатологические процессы (Henssge С et al, 2002) Современный этап развития экспертной оценки определения ДНС предполагает переход от качественной к количественной оценке трупных изменений, происходящих в органах, тканях и жидкостях организма
При рассмотрении проблемы определения ДНС важнейшим методологическим аспектом является выбор диагностической зоны (объекта исследования) В литературе, особенно зарубежной, широко обсуждается возможность использования изменений, происходящих струпной кровью в различные промежутки времени посмертного периода (Babapulle С J et al, 1993, Koliakos G et al, 1999, Dokgoz H et al, 2001, Edston E et al, 2001, Singh D et al, 2002, Xu X M et al, 2002, Unterer S et al, 2004, Bardale R et al, 2007) В перечисленных работах дана оценка некоторым параметрам трупной крови электролитам (натрий, калий, кальций, магний, фосфор), глюкозе, азотистым соединениям (мочевина, креатинин), энзимам (кислая и щелочная фосфатазы, амилаза, лактатдегидрогеназа) Многие исследования посвящены изучению морфологических изменений, происходящих с клетками крови в посмертном периоде (Эйд-лин Л М , 1928, Спижарская Л М , 1966, Симонян КП и др , 1975, Науменко В Г, Митяева Н А, 1980, Кадиев Б Б , Кононенко В И , 1986, Кадиев Б Б , 1987, Пальцин А А и др , 1991, De Bernardi А , Farditi
Vv
P., 1965, FindlayA В., 1976, Laiho К., PenttilaA , 1981,TomitaM , 1985, Babapulle С J , Jayasundera N P, 1993, Dokgoz H et al, 2001, Mohammed M.A , 2004; Bardale R , Dixit P.G., 2007). Недостаток методов по определению ДНС, основанных на изучении изменений морфологии клеток в посмертном периоде, заключается в том, что в их основе лежит оценка качественных признаков, изменения которых происходят скачкообразно Это приводит к существенным погрешностям при определении времени посмертного интервала
В доступной нам литературе не отражены вопросы об изменениях количественного состава клеток крови, а также их функциональной активности, в частности нейтрофилов, в посмертном периоде, которые могли быть применены при определении давности наступления смерти
Изложенное выше определило содержание представленной работы и позволило сформулировать цель и задачи исследования
Цель исследования
На основании комплексного исследования количественного состава лейкоцитов крови и функциональной активности нейтрофилов выявить, происходящие в них изменения после наступления гибели организма, и установить возможности применения данных методов исследования для определения давности наступления смерти
Задачи исследования
1. Исследовать количественный состав лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в образцах крови живых людей, хранившихся in vitro, в различные промежутки времени хранения Оценить динамику исследованных величин при различных вариантах хранения материала с учетом продолжительности времени хранения
2 Изучить количественный состав лейкоцитов, процент живых лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в крови умерших лабораторных крыс в различные промежутки времени после наступления смерти. Оценить динамику величины фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов при различных вариантах хранения труп-
ного материала с учетом продолжительности посмертного периода.
3 Определить количественный состав лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в крови умерших людей в различные промежутки времени после наступления смерти
4 Проанализировать полученные данные и выявить зависимость для каждого исследуемого параметра от времени, прошедшего с момента гибели организма или забора крови от живого человека
5 Оценить возможность использования методов исследования лейкоцитов крови для определения давности наступления смерти
Научная новизна
В данной работе было впервые проведено исследование ряда параметров трупной крови в различные промежутки времени после наступления смерти организма, а также крови, хранившейся in vitro, в различные промежутки времени ее хранения Были оценены величины количественного состава лейкоцитов крови, а так же ряда функций нейтрофильных лейкоцитов На основании полученных данных были выявлены изменения, происходившие с нейтрофиль-ными лейкоцитами, находившимися в сосудистом русле трупов, либо в условиях пробирки Произведено сравнение результатов исследованных показателей крови, полученных при хранении трупного материала или образцов крови при различных температурных условиях внешней среды
Получены новые сведения о процессах, происходящих с клетками в трупном материале, что имеет большое научно-прикладное значение для решения ряда важных вопросов в таких областях, как судебная медицина, реаниматология, трансплантология, оценено влияние факторов внешней среды на динамику изменения функциональной активности клеток
Практическая и теоретическая значимость
Настоящее исследование позволит расширить имеющиеся представления об изменениях, происходящих с нейтрофильными лейкоцитами крови после наступления смерти организма, либо при хранении крови in vitro, а также особенностях этих сдвигах в зависи-
мости от температурных условиях среды хранения трупного материала или образцов крови. Полученные данные позволят определить новые критерии по установлению давности наступления смерти на момент исследования трупа Сочетание полученных результатов этой работы с имеющимися на сегодняшний день данными о морфологических изменениях клеток крови в посмертном периоде может привести к созданию нового метода по определению давности наступления смерти, основанному на использовании сочетания качественных и количественных оценок
Положения, выносимые на защиту
1 С увеличением времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, отмечается постепенное снижение общего числа лейкоцитов крови, угасание жизненной активности и последующая гибель нейтрофильных лейкоцитов крови, что проявляется снижением показателей процентного содержания этих клеток в трупной крови, а также снижением их функциональной активности, вплоть до полного исчезновения этой фракции клеток Аналогичные изменения наблюдаются при хранении крови, полученной от живых людей, in vitro
2 Температура окружающей среды влияет на скорость изменения фагоцитарной активности нейтрофилов трупной крови в раннем посмертном периоде Подобные же закономерности наблюдаются с показателями количественного состава лейкоцитов и функциональной активности нейтрофилов крови in vitro.
3. Изменения количественного состава лейкоцитов, а также функциональной активности нейтрофилов трупной крови в раннем посмертном периоде зависят от времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, и с достаточной степенью точности описываются с помощью математических функций, поэтому данные показатели могут быть использованы в качестве диагностических критериев для определения давности наступления смерти
Апробация работы
Основные положения работы доложены на VI научно-пракги-ческой конференции молодых ученых ЧелГМА (2008 г) и заседани-
ях кафедры судебной медицины ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава (20062007 гг)
Реализация результатов исследования
Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, вирусологии, иммунологии и судебной медицины ГОУ ВПО "ЧелГМА Росздрава" и работу ОГУЗ "Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы"
Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы, включающего работы 82 отечественных и 98 иностранных авторов, и приложения Диссертация изложена на 154 страницах компьютерного текста, включает 15 таблиц и 29 рисунков
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Для решении поставленных задач за период с 2005 по 2007 год на базе иммунологического отдела центральной научно-исследовательской лаборатории и НИИ иммунологии ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава», патологоанатомических отделений клиники ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава» и ОГУЗ ЧОПАБ было проведено исследование образцов крови, полученных от 160 трупов лабораторных животных (нелинейные крысы), 35 трупов людей, 21 живого человека
Кровь, полученную из кубитальной вены от 21 живого человека, разделяли на 3 порции и помещали в стационарные температурные условия окружающей среды Первую порцию - при 4°С, вторую -при 16-21°С, третью - при 37°С Исследования образцов крови проводились сразу после забора материала, а также через 6, 24,48, 72
часа от момента забора материала
Образцы крови от трупов лабораторных животных, находившихся при температуре окружающей среды 16-21°С забирали сразу после наступления смерти, а также через 3,6, 9,12; 18,24; 36,48,72 часа от момента наступления смерти животного (от одного животного производили забор крови в момент наступления смерлги, а также от одного до трех заборов крови в различные промежутки времени после наступления смерти) Забор крови осуществлялся из полостей сердца животного шприцем, предварительно смоченным в растворе гепарина (500 ЕД/ мл) При исследовании фагоцитарной активности нейтрофильных лейкоцитов крови, кроме вышеуказанной температуры окружающей среды, часть трупов животных находилась при температуре окружающей среды 4°С (40 трупов), другая - при 37°С (25 трупов)
В ходе вскрытия трупов людей производился забор крови из восходящей части аорты и полости левого желудочка трупов людей Исследование образцов крови осуществляли почти сразу же после забора материала. Для исследования были использованы случайным образом отобранные трупы людей, скоропостижно умерших в лечебных учреждениях (Челябинская областная клиническая больница № 1, клиника ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава») Время наступления смерти определялось по записям в медицинской документации
В таблице 1 представлены данные по распределению исследованных случаев относительно времени забора крови от момента наступления смерти человека Все случаи разбиты на группы с определенными временными интервалами Это сделано для удобства подсчета средних арифметических и стандартных ошибок исследованных показателей
Таблица 1
Распределение исследованных случаев относительно времени забора крови от момента наступления смерти
человека
ООО 9 00 12 00 18 00 24 00 36 00 48 00- более
-8 59 -11 59 -17 59 -23 59 -35 59 -41 59 71 59 72 00
Количество 0 1 5 6 12 7 2 2
случаев
В крови определяли общее количество лейкоцитов, для лабораторных животных так же проводили подсчет процента жизнеспособных лейкоцитов с использованием 0,2% раствора трипанового синего
Оценивали лейкоцитарную формулу Для этого проводили микроскопию сухих и окрашенных по Романовскому-Гимзе мазков крови с дифференцированием следующих форм лейкоцитов нейтро-филы, лимфоциты и прочие клетки Подсчитывали 100 клеток, затем определяли процент нейтрофилов и лимфоцитов (Медицинские и лабораторные ,1998)
Исследование внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови проводили с помощью НСТ-теста НСТ-тест проводился в двух вариантах спонтанном (базальном) и индуцированном (стимулированном) (Медицинские и лабораторные , 1998) Определяли процент клеток, восстанавливающих НСТ, и интенсивность реакции по активности восстановления НСТ Кроме того, рассчитывали функциональный резерв нейтрофилов (ФРН), который определялся как соотношение между коэффициентами интенсивности реакции НСТ-индуцированного и НСТ-спонтанного тестов Изучение способности нейтрофилов к фагоцитозу проводили на модели поглощения частиц латекса (Фрейдлин И С , Немировс-кий Е В и др , 1976)
Полученные результаты исследования были подвергнуты статистической обработке стандартными методами с определением средней арифметической (М) и стандартной ошибки средней арифметической (т) Статистический анализ проведен с помощью пакета статистических программ "Statistica, version 6 0" компании StatSoft, Inc Были выбраны непараметрические методы анализа, так как отсутствовали данные о нормальности распределения исследованных величин При сравнении нескольких выборок был использован критерий Крускала-Уоллиса, дальнейшее множественное сравнение осуществлялось с использованием критерия Данна Критерий Дан-на подсчитывался по соответствующей формуле (Гланц С , 1998) с использованием программы «Microsoft Office Excel» Анализ силы зависимости между исследованными величинами и временем, прошедшим с момента смерти организма, либо забора крови от живых
людей, осуществляли с использованием корреляционного анализа (коэффициент ранговой корреляции Спирмена) (ГланцС , 1998, Реб-рова О Ю., 2003) Оценка характера зависимости между показателями крови и длительностью посмертного периода осуществлялась с помощью регрессионного анализа и последующим определением уравнения регрессии
При сравнении различия считались статистически значимыми при уровне значимости р<0,05 и статистически высокозначимыми при уровне значимости р<0,01
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
В ходе проведенных исследований было выяснено, что после наступления смерти организма, а также при хранении крови in vitro, происходит постепенное неравномерное снижение общего числа белых клеток крови При этом в трупной крови лабораторных животных и людей на фоне снижения данного показателя с увеличение времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, отмечались периоды незначительного роста количества лейкоцитов крови При статистическом анализе были выявлены средней силы и слабые отрицательные корреляционные связи между изменением числа лейкоцитов крови и временем, прошедшим с момента наступления смерти организма или забора материала от живых людей Это свидетельствует об отсутствии выраженной зависимости снижения данного показателя от длительности посмертного интервала, поэтому использование изменений числа лейкоцитов трупной крови в различные промежутки посмертного периода для определения давности наступления смерти не представляется возможным
Помимо общего количества лейкоцитов нами проведено определение процента живых лейкоцитов трупной крови лабораторных животных в различные временные промежутки Полученные результаты свидетельствуют о том, что в момент наступления смерти почти все лейкоциты крови представлены живыми клетками С увеличением времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, происходит статистически высокозначимое снижение данного показателя К концу наблюдений, а именно к 72-м часам с момента на-
ступления смерти, только малая часть клеток способна к удалению трипанового синего из своей цитоплазмы. Анализ зависимости изменения процента живых лейкоцитов трупной крови и длительности посмертного периода показал наличие сильной отрицательной статистически значимой корреляционной связи, это свидетельствует о наличии выраженной зависимости снижения данного показателя от длительности посмертного периода, поэтому данный показатель может быть использован в качестве критерия для определения давности наступления смерти (рис. 1).
120
я.
m
о
сх и 100
Э
£
s я 80
о
и
«в
й ^ Ч о4- 60
X
3
к
s 40
s
£
s я 20
с
о.
о L—■—■—'—1—■—■—■—■—■—■—■—•—-—■—■—■—--'—■—■—■—•—■—■—
О 6 12 18 24 30 36 42 48 54 60 66 72 . Время, часы.
Средняя арифметическая, I Стандартная ошибка
Рисунок 1. Процент живых лейкоцитов трупной крови лабораторных животных в различные промежутки времени посмертного периода.
Была исследована лейкоцитарная формула, а именно произве-I ден подсчет процентного содержания нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов крови. Из ранее проведенных исследований (Laiho К., , Penttila А., 1981; Babapulle C.J. et al., 1993; Warner B.A. et ai., 1991;
Gulati G. L. et al., 2001; Vogelaar, S. A. et al., 2002; Mohammed M.A., i 2004) известно, что данные показатели наиболее изменчивы в по-1 смертном периоде и информативны в плане определения давности i наступления смерти. Было установлено, что нейтрофилы достаточно I быстро разрушаются в крови в посмертном периоде и при хранении
крови в пробирках, в то время как лимфоциты крови идентифицируются в образцах крови значительно более длительный срок посмертного периода, а так же в условиях хранения образцов крови in vitro.
В результате проведенных исследований было выявлено постепенное статистически высокозначимое снижение процента нейтро-фильных лейкоцитов и роста процента лимфоцитов крови с увеличением времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, а так же времени хранения образцов крови в пробирке. В большинстве наблюдений к концу третьих суток нейтрофильные лейкоциты в крови не определялись, в тоже время, белые клетки крови в основном были представлены фракцией лимфоцитов (рис. 2, 3).
Время, часы
Средняя арифметическая, I Стандартная ошибка
Рисунок 2. Процент нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов трупной крови лабораторных животных в различные промежутки времени посмертного периода. 1 -Нейтрофилы; 2 - Лимфоциты.
Исследование корреляционных связей между показателями процентного содержания нейтрофилов и лимфоцитов крови и временем, | прошедшим с момента гибели лабораторных животных, либо забора крови от живых людей, показало наличие статистически значимых сильных корреляционных связей, при исследовании трупной крови людей были выявлены корреляционные связи средней силы. При этом между изменением процента нейтрофилов крови и длительностью
80
70
60
5?
* 50
Ь
а)
ё «
»30 о
О, & 20
10
•••• # , V
• * Л.
к /
...... А
1А *
А
А§
А *
-А.
20
40
60
Время, часы.
80
100
120
Рисунок 3. Процент нейтрофильных лейкоцитов и лимфоцитов трупной крови людей в различные промежутки времени посмертного периода. 1 - Нейтрофилы; 2 - Лимфоциты.
Время, часы
Средняя арифметическая, I Стандартная ошибка
Рисунок 4. Интенсивность «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов трупной крови лабораторных животных в различные промежутки времени
посмертного периода. 1 - "спонтанный" НСТ-теста; 2 - "индуцированный" НСТ-теста.
-0,1
О 10 20 30 40 50 60 70
Время, часы.
Рисунок 5. Интенсивность «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов трупной крови людей в различные промежутки времени посмертного периода. 1 - "спонтанный" НСТ-тест, 2 - "индуцированный" НСТ-тест.
О 6 12 18 24 30 ЗВ 42 43
Время, часы.
Рисунок 6. Интенсивность «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-теста нейтрофильных лейкоцитов крови в различные промежутки времени хранения крови in vitro. 1 - "спонтанный" НСТ-тест при 4°С; 2 - "спонтанный" НСТ-тест при 16-21°С; 3 - "спонтанный" НСТ-тест при 37°С; 4 - "индуцированный" НСТ-тест при 4°С; 5 - "индуцированный" НСТ-тест при 16-21°С; 6 - "индуцированный" НСТ-тест при 37°С.
so
-s -■---.-.-i-.-.---1-
О 3 6 9 12 15 18 21 24
Время, часы.
—Средняя арифметическая, | Стандартная ошибка
Рисунок 7. Активность фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов крови в различные промежутки времени посмертного периода при различных температурах хранения трупов крыс. 1 - Активность фагоцитоза при температуре 4°С, %; 2 - Активность фагоцитоза при температуре 16-21°С, %; 3 - Активность фагоцитоза при температуре 37°С, %.
посмертного периода или хранения крови in vitro имеют место отрицательные корреляционные связи, а для изменения процента лимфоцитов крови характерно наличие положительных. Это позволяет ! сделать вывод о наличии выраженной зависимости между изменением процентного содержания основных фракций белых клеток крови (нейтрофилов и лимфоцитов) и длительностью посмертного интервала времени. Таким образом, эти показатели могут быть использованы в качестве критериев для определения давности наступления смерти.
Исследованные варианты функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови также имели тенденцию к снижению в посмертном периоде и при хранении крови в пробирке (рис. 4,5,6, 7). При этом снижение значений показателей происходило достаточно быстро, наиболее значительное снижение отмечалось в течение первых 24-х часов j наблюдений. Так, к концу первых суток посмертного периода почти не определялись функционально активные нейтрофилы в трупной крови
лабораторных животных А в крови людей функционально активные ней-трофилы крови исчезали к концу вторых суток посмертного периода или хранения крови in vitro Но при этом необходимо отметить, что при исследовании киспородзависимого метаболизма нейтрофилов трупной крови лабораторных животных в течение первых 6-ти часов с момента наступления смерти отмечался некоторый рост показателей «спонтанного» и «индуцированного» НСТ-тестов В тоже время у нейтрофилов, полученных в результате забора крови от живых людей, данной закономерности не выявлено
Анализ корреляционных связей между исследованными показателями функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови и длительностью посмертного интервала или временем хранения материала показал наличие статистически значимых отрицательных сильных и средней силы корреляционных связей Это свидетельствует о наличии выраженной зависимости снижения данных показателей от длительности посмертного периода, поэтому показатели интенсивности и активности "спонтанного" и "индуцированного" НСТ-теста, активности и интенсивности фагоцитоза нейтрофилов могут быть использованы как критерии для определения давности наступления смерти, так как в проведенной работе была выявлена зависимость изменения данных величин от длительности посмертного периода
Кроме исследования корреляционных связей, которые позволили оценить силу зависимости изменения исследованных параметров крови от времени, прошедшего с момента наступления смерти организма или забора материала, также была проведена работа по анализу характера изменений исследованных показателей в посмертном периоде и при хранении крови in vitro Оценка проводилась с использованием регрессионного анализа Это позволило вычислить уравнения по определению времени, прошедшего с момента наступления смерти, на основании изменений, происходящих с некоторыми изученными показателями крови в посмертном периоде (табп 2, 3)
Таким образом, наличие сильных корреляционных связей между исследованными величинами и длительностью посмертного периода, а также возможность описания характера изменения этих вели-
Таблица 2
Определение времени, прошедшего с момента наступления смерти, на основании изменений, происходящих с некоторыми показателями трупной крови лабораторных животных (крысы) в посмертном периоде
Показатель Уравнение регрессии Статистические показатели регрессии
Процент живых лейкоцитов крови, % у=108,46 - 53,71 х1од10(х) п= 167, р< 0,000 г*= 0,91 5 = 6,12 5а= 2,18 Ра = 0,00 Эь=1,28 рь= 0,00
Процент нейтрофилов крови, % у = 52,96 - 34,93х1од10(х) п = 221, р< 0,000 г* =0,73 5 = 7,65 5а = 1,79 Ра =0,00 эь=1,44 рь = 0,00
Активность фагоцитоза нейтрофилов при 4°С, % у = 32,03 - 18,65х1одю(х) п = 104, р< 0,000 г* =0,84 5 = 3,24 Эа = 1,01 ра =0,00 Бь= 0,8 Рь= 0,00
Активность фагоцитоза нейтрофилов при 16-21°С,% у = 32,3 - 19,42х1одю(х) п = 221, р< 0,000 г^= 0,91 Б = 2,75 за= 0,65 Ра =0,00 бь = 0,48 рь= 0,00
Активность фагоцитоза нейтрофилов при температуре среды 37°С, % у = 28,66 - 17,21х1од10(х) п = 76, р < 0,000 1^=0,90 б = 2,1 8а= 0,9 Ра =0,00 5Ь = 0,68 рь= 0,00
Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов при 4°С, ед у = 2,44 - 14,36х1одю(х) п = 104 р< 0,000 1^=0,87 3 = 2,94 ва = 0,34 Ра =0,00 8ь= 0,55 Рь=0,00
Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов при 16-21°С, ед у = 2,12 - 14,22х1одю(х) п = 173 р< 0,000 г" = 0,90 5 = 2,8 За=0,25 Ра =0,00 5Ь= 0,35 рь= 0,00
чин с использованием уравнения регрессии, позволяет с полной уверенностью говорить о возможности использования исследованных показателей крови для определения давности наступления смерти
Для оценки степени влияния температуры окружающей среды на динамику изменения исследованных показателей крови в данной работе ряд наблюдений проведен при различной температуре Так при исследовании фагоцитарной активности нейтрофилов трупной крови лабораторных животных трупы крыс находились в различных услови-
Таблица 3
Определение времени, прошедшего с момента наступления смерти, на основании изменений, происходящих с некоторыми показателями трупной крови людей в посмертном периоде
Показатель Уравнение регрессии Статистические показатели регрессии
Процент нейтрофильных лейкоцитов крови, % у= 192,12 -92,03х1одю(х) n=35, р < 0,000 г'=0,63 8 = 12,34 Бд = 21,6 ра =0,00 8ь= 12,84 рь= 0,00
Активность фагоцитоза нейтрофилов крови, % у = 111,8 -54,93х1од10(х) п=33, р<0,000 г*= 0,54 э = 13,8 8а= 13,23 Ра =0,00 Эь= 8,88 рь= 0,00
Интенсивность фагоцитоза нейтрофилов крови, ед у = 17,34 -44,41 xlog10(x) 11=33, р<0,000 г^=0,50 8 = 14,35 ва = 3,44 Ра =0,00 8ь= 7,75 рь= 0,00
Активность «спонтанного» НСТ-теста, % у = 72,5 -41,29х1од10(х) п=33, р<0,000 г* =0,53 э = 8,44 За=7,93 Ра= 0,00 эь = 7,15 рь= 0,00
Интенсивность «индуцированного» НСТ-теста, уел ед у = 6,28 -38,Ох1од10(х) п=33, р<0,000 X1- 0,80 в = 6,48 За=2,29 Ра =0,01 эь = 3,37 рь= 0,00
Активность «индуцированного» НСТ-теста, % у = 82,21 -38,79х1од10(х) п=33, р<0,000 г^ = 0,76 э = 7,06 ва = 5,41 Ра =0,00 8Ь= 3,83 рь= 0,00
Примечание В таблицах 2 и 3 у - время, прошедшее с момента наступления смерти организма, в часах, х-величина соответствующего показателя, п-объем выборки (численность группы), р-уровень статистической значимости, ра-уровень статистической значимости коэффициента сдвига, рь-уровень статистической значимости коэффициента наклона, г2 - коэффициент детерминации, э - стандартная ошибка оценки модели, ва — стандартная ошибка коэффициента сдвига, эь - стандартная ошибка коэффициента наклона
ях среды. Одна группа при температуре окружающей среды в 4°С, другая - в 16-21 °С, третья - в 37°С Кровь, полученную от живых людей, разделяли на три порции и помещали при тех же температурных условиях, что и трупы крыс При этом определяли общее число лейкоцитов крови, процентное содержание нейтрофилов и лимфоцитов крови, а также исследовали функциональную активность нейтрофильных лей-
коцитов в различные сроки хранения образцов крови
При анализе показателей фагоцитарной активности нейтрофи-лов трупной крови лабораторных животных было выявлено, что сразу после наступления смерти, а также через 3 и 6 часов с момента наступления смерти животных статистически значимых различий между значениями групп, находившихся при различных температурных условиях хранения, выявлено не было А между группами, забранными через 9, 12, 18, 24 часа от момента наступления смерти, были выявлены статистически значимые различия Дальнейший анализ показал, что различия выявляются между группами результаты, которых получены от трупов животных, хранившихся при температуре 37°С, и группами результаты, которых получены от трупов животных, хранившихся при температуре 4°С и 16-21°С Между группами результаты, которых получены от трупов животных, хранившихся при температуре 4°С и 16—21°С, статистически значимых различий не выявлено во всех временных промежутках забора материала в посмертном периоде (рис 7)
При изучении крови людей, хранившейся in vitro, выявляется аналогичная тенденция, свидетельствующая о влиянии температуры окружающей среды на динамику изменения исследованных показателей Однако большой разброс значений показателей в сравниваемых группах и относительно небольшое число наблюдений не позйолило выявить в большинстве наблюдений статистически значимых различий
Результаты данной работы позволяют сделать вывод о том, что температура окружающей среды не сразу оказывает воздействие на динамику изменения ряда показателей крови в посмертном периоде В начальный посмертный период (в первые шесть часов с момента наступления смерти) это, аероятно, связанно с тем, что охлаждение трупа происходит постепенно и температура тела отличается от температуры окружающей среды, поэтому снижение исследованных показателей трупной крови во всех случаях происходит примерно в одних и тех же пределах После девяти часов с момента наступления смерти организма начинает проявляться влияние окружающей температуры на динамику изменения фагоцитйр-
ной активности нейтрофильных лейкоцитов крови
Таким образом, возможно создание метода по определению давности наступления смерти организма на основе использования изменений, происходящих с нейтрофильными лейкоцитами крови в посмертном периоде Для этого могут быть использованы не только морфологические изменения, происходящими сними в посмертном периоде (на чем основаны методики, предложенные H Dokgoz с сотрудниками (2001) и M A Mohammed (2004)), но функциональные, что было выявлено в данной работе Это позволит более точно устанавливать время, прошедшее от момента наступления смерти организма.
ВЫВОДЫ
1 В крови трупов в раннем посмертном периоде, а также при хранении образцов крови in vitro отмечаются постепенное снижение общего числа лейкоцитов, резкое падение процентного содержания нейтрофилов, а также показателей их функциональной активности (фагоцитоза и кислородзависимого метаболизма, оцененного с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия) При этом процент лимфоцитов крови возрастает и к концу третьих суток посмертного интервала времени или хранения крови in vitro большую часть белых клеток крови составляют лимфоциты
2 В ходе исследования процентного содержания живых лейкоцитов в крови трупов лабораторных животных в раннем посмертном п выявлено постепенное снижение числа живых лейкоцитов крови и почти полная их гибель к 72-м часам посмертного интервала времени
3 Влияние температурных условий окружающей среды выявлено только с 9-ти часов посмертного интервала времени Отмечается более быстрое снижение показателей фагоцитарной активности нейтрофилов крови трупов лабораторных животных, находившихся при температуре окружающей среды в 37°С, чем при других использованных в данной работе температурных условиях В тоже время средние (16-21°С) и низкие (4°С) температуры окружающей
среды статистически значимого влияния на скорость изменения показателей фагоцитоза нейтрофилов крови не оказывают
4 Выявленные зависимости динамики изменения исследованных параметров крови (процента живых лейкоцитов, процента ней-трофилов и их функциональной активности) от длительности посмертного периода позволяют использовать их в качестве критериев по определению давности наступления смерти организма
Практические рекомендации
На основании результатов выполненной работы для повышения точности определения давности наступления смерти в раннем посмертном периоде рекомендуем использование достаточно простых по технике проведения и недорогих методов исследования лейкоцитов крови Для лучшей интерпретации данных, полученных при исследовании лейкоцитов крови, необходимо проведение серий исследований через определенные промежутки времени
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1 Сафин, РЯ Актуальность применения иммунологических методов исследования нейтрофильных лейкоцитов для определения давности наступления смерти / РЯ Сафин // Материалы Ш-ей итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА -Челябинск изд-во ЧелГМА, 2005 - С 166-168
2 Сафин, РЯ Динамика изменения некоторых иммунологических показателей трупной крови в зависимости от давности наступления смерти организма / РЯ Сафин // Иммунология Урала материалы V конф иммунологов Урала - Оренбург ИД Димур, 2006 -№1(5).-С. 69-70
3 Сафин, РЯ Динамика изменения фагоцитарной функции нейтрофильных лейкоцитов крови в зависимости от давности наступления смерти / РЯ Сафин // Материалы IV итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА - Челябинск изд-во ЧелГМА, 2006 -С 98-100.
4 Сафин, РЯ Применение иммунологических методов исследования трупной крови для определения давности наступления смерти / Р.Я Сафин // Естествознание и гуманизм- сб науч трудов под ред проф НН Ильинских -Томск, 2006 -ТЗ, №2 - С 94-95
5 Сафин, РЯ Применение иммунологических методов исследования для определения давности наступления смерти / РЯ Сафин // Сибирский мед. жур - 2007. - Т 73, № 6 - С 18-21
6 Сафин, Р.Я Функциональные изменения, происходящие в ней-трофильных лейкоцитах крови после смерти организма и в процессе хранения крови in vitro / РЯ Сафин // Материалы V итоговой научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА - Челябинск изд-во ЧелГМА, 2007 - С.73-75
На правах рукописи
Сафин Равиль Якупович
КОМПЛЕКСНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПРОМЕЖУТКИ ВРЕМЕНИ ПОСЛЕ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ ОРГАНИЗМА
14 00 36 - аллергология и иммунология 14 00 24 - судебная медицина
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Челябинск-2008
Отпечатано в полиграфическом отделе ООО "Институт медико-социальных исследований" Подписано в печать 19 05 2008 г Формат 60x84 Vis Бумага офсетная Гарнитура Times New Roman Суг Уел пл 1,0 Печать на ризографе Тираж 100
Оглавление диссертации Сафин, Равиль Якупович :: 2008 :: Челябинск
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. НЕЙТРОФИЛЬНЫЕ ЛЕЙКОЦИТЫ КРОВИ ЖИВОГО
ОРГАНИЗМА И ТРУПА (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ).
1.1. Структура и функциональная активность нейтрофильных лейкоцитов крови живого организма.
1.2 Посмертные изменения нейтрофильных лейкоцитов крови.
1.3. Судебно-медицинский аспект изучения посмертных изменений лейкоцитов крови.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Материалы исследования.
2.2. Метод подсчета общего количества лейкоцитов крови и процента живых клеток.
2.3. Метод оценки лейкоцитарной формулы крови.
2.4. Метод оценки внутриклеточного кислородзависимого метаболизма нейтрофилов крови с помощью НСТ-теста.
2.5. Метод исследования фагоцитарной активности нейтрофилов крови.
2.6. Методы статистической обработки материала.
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ В РАЗЛИЧНЫЕ
ПРОМЕЖУТКИ ВРЕМЕНИ ХРАНЕНИЯ ОБРАЗЦОВ КРОВИ IN VITRO.
3.1. Изменения исследованных показателей крови в различные промежутки времени хранения образцов крови in vitro.
3.2. Анализ взаимосвязей между длительностью хранения образцов крови in vitro и изменениями исследованных показателей крови.
ГЛАВА 4. ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ТРУПНОЙ КРОВИ В РАЗЛИЧНЫЕ ПРОМЕЖУТКИ ВРЕМЕНИ ПОСЛЕ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ ЛАБОРАТОРНЫХ ЖИВОТНЫХ (НЕЛИНЕЙНЫЕ КРЫСЫ).
4.1. Изменения изученных величин трупной крови в различные промежутки времени после наступления смерти лабораторных животных (нелинейные крысы).
4.2. Анализ взаимосвязей между временем, прошедшим после наступления смерти лабораторных животных, и изменениями исследованных показателей крови.
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ ТРУПНОЙ КРОВИ в РАЗЛИЧНЫЕ ПРОМЕЖУТКИ ВРЕМЕНИ ПОСЛЕ НАСТУПЛЕНИЯ
СМЕРТИ ЛЮДЕЙ.
5.1. Изменения изученных величин трупной крови в различные промежутки времени после наступления смерти людей.
5.2. Анализ взаимосвязей между временем, прошедшим после наступления смерти, и изменениями исследованных показателей трупной крови людей.
ГЛАВА 6. ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОСТАВА ЛЕЙКОЦИТОВ И ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ НЕЙТРОФИЛЬНЫХ ЛЕЙКОЦИТОВ КРОВИ ДЛЯ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ДАВНОСТИ НАСТУПЛЕНИЯ СМЕРТИ.
Введение диссертации по теме "Аллергология и иммулология", Сафин, Равиль Якупович, автореферат
Актуальность проблемы
Проблема определения давности наступления смерти (ДНС) была и продолжает оставаться одной из наиболее актуальных и сложных в судебной медицине (Пиголкин Ю.И., Богомолов Д.В. и др., 1999; Витер В.И. Куликов В.А., 1999). К настоящему времени разработан широкий спектр методов для судебно-медицинского определения ДНС, который включает методы, изучающие ранние и поздние трупные изменения с использованием инструментальных методик, методы, построенные на изучении морфо-функциональных изменений, происходящих в органах, тканях и жидкостях трупа, и методы, в основе которых лежит создание математических моделей и специальных формул, позволяющих учитывать многообразие индивидуальных признаков, а также внутренних и внешних условий, влияющих на танатологические процессы (Henssge С. et al., 2002). Современный этап развития экспертной оценки определения ДНС предполагает переход от качественной к количественной оценке трупных изменений, происходящих в органах, тканях и жидкостях организма.
При рассмотрении проблемы определения ДНС важнейшим методологическим аспектом является выбор диагностической зоны (объекта исследования). В настоящее время, особенно в зарубежной литературе, широко обсуждается и исследуется возможность использования изменений, происходящих с трупной кровью в различные промежутки времени посмертного периода (Babapulle C.J., Jayasundera N.P., 1993; Koliakos G., Gaitatizi M. et al., 1999; Dokgoz H. et al., 2001; Edston E., Druid H., et al., 2001; Singh D., Prashad R. et al., 2002; Xu X.M., Gong Z. Q. et al., 2002; Unterer S., Lutz H. et al., 2004; Bardale R., Dixit P.G., 2007). В данных работах оцениваются такие параметры трупной крови, как электролиты (натрий, калий, кальций, магний, фосфор), глюкоза, азотистые соединения (мочевина, креатинин), энзимы (кислая и щелочная фосфатазы, амилаза, лактатдегидрогеназа), а также изменения, происходящие с форменными элементами крови. При этом основная часть исследований посвящена изучению морфологических изменений, происходящих с клетками крови в посмертном периоде (Эйдлин JI.M., 1928; Спижарская JI.M., 1966; Симонян К.С. Гутионтова К.П. и др., 1975; Науменко В.Г., Митяева Н.А., 1980; Кадиев Б.Б., Кононенко В.И., 1986; Кадиев Б.Б., 1987; Пальцин А. А. и др., 1991; De Bernardi A., Farditi P., 1965; Findlay A.B., 1976; Laiho К., Penttila A., 1981a,b; Tomita M., 1985; Babapulle C.J., Jayasundera N.P., 1993; Dokgoz H. et al., 2001; Mohammed M.A., 2004; Bardale R., Dixit P.G., 2007). Главный недостаток методов по определению ДНС, основанных на изучении изменений морфологии клеток в посмертном периоде, заключается в том, что в их основе лежит оценка качественных признаков, изменения которых происходят скачкообразно. Это приводит к тому, что точность определения времени посмертного интервала недостаточная. Данный недостаток мог бы быть исправлен, если в сочетании с исследованием морфологических изменений клеток оценивать также какие-либо качественные признаки, связанные с форменными элементами крови, например: количественный состав клеток крови, а также их функциональную активность. Однако, в современной литературе данному аспекту уделено недостаточное внимание, то есть в этих работах не нашли отражения важные не только для судебно-медицинской практики, но и для теоретической базы, вопросы о динамике изменения количественного состава клеток крови, а также их функциональной активности в посмертном периоде в плане определения давности наступления смерти.
Таким образом, вышеизложенное подчеркнуло актуальность проблемы, и определило содержание представленной работы, а так же позволило сформулировать цель и задачи исследования.
Цель исследования
На основании комплексного исследования количественного состава лейкоцитов крови и функциональной активности нейтрофилов выявить, происходящие в них изменения после наступления гибели организма, и установить возможности применения данных методов исследования для определения давности наступления смерти.
Задачи исследования
1. Исследовать количественный состав лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в образцах крови живых людей, хранившихся in vitro, в различные промежутки времени хранения. Оценить динамику исследованных величин при различных вариантах хранения материала с учетом продолжительности времени хранения.
2. Изучить количественный состав лейкоцитов, процент живых лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в крови умерших лабораторных крыс в различные промежутки времени после наступления смерти. Оценить динамику величины фагоцитоза нейтрофильных лейкоцитов при различных вариантах хранения трупного материала с учетом продолжительности посмертного периода.
3. Определить количественный состав лейкоцитов и функциональную активность нейтрофилов в крови умерших людей в различные промежутки времени после наступления смерти.
4. Проанализировать полученные данные и выявить зависимость для каждого исследуемого параметра от времени, прошедшего с момента гибели организма или забора крови от живого человека.
5. Оценить возможность использования методов исследования лейкоцитов крови для определения давности наступления смерти.
Научная новизна
В данной работе было впервые проведено исследование ряда параметров трупной крови в различные промежутки времени после наступления смерти организма, а также крови, хранившейся in vitro, в различные промежутки времени ее хранения. Были оценены величины количественного состава лейкоцитов крови, а так же ряда функций нейтрофильных лейкоцитов. На основании полученных данных были выявлены изменения, происходившие с нейтрофильными лейкоцитами, находившимися в сосудистом русле трупов либо в условиях пробирки. Произведено сравнение результатов исследованных показателей крови, полученных при хранении трупного материала или образцов крови при различных температурных условиях внешней среды.
Получены новые сведения о процессах, происходящих с клетками в трупном материале, что имеет большое научно-прикладное значение для решения ряда важных вопросов в таких областях, как судебная медицина, реаниматология, трансплантология, оценено влияние факторов внешней среды на динамику изменения функциональной активности клеток.
Практическая и теоретическая значимость работы
Настоящее исследование позволит расширить имеющиеся представления об изменениях, происходящих с нейтрофильными лейкоцитами крови после наступления смерти организма, либо при хранении крови in vitro, а также особенностях этих сдвигов в зависимости от температурных условий среды хранения трупного материала или образцов крови. Полученные данные позволят определить новые критерии по установлению давности наступления смерти на момент исследования трупа. Сочетание полученных результатов этой работы с имеющимися на сегодняшний день данными о морфологических изменениях клеток крови в посмертном периоде может привести к созданию нового метода по определению давности наступления смерти, основанному на использовании сочетания качественных и количественных оценок.
Положения, выносимые на защиту
1. С увеличением времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, отмечается постепенное снижение общего числа лейкоцитов крови, угасание жизненной активности и последующая гибель нейтрофильных лейкоцитов крови, что проявляется снижением процентного содержания этих клеток в трупной крови, а также их функциональной активности. Аналогичные изменения наблюдаются при хранении крови in vitro.
2. Температура окружающей среды влияет на скорость изменения фагоцитарной активности нейтрофилов трупной крови в раннем посмертном периоде. Подобные же закономерности наблюдаются с показателями количественного состава лейкоцитов и функциональной активности нейтрофилов крови, находящейся in vitro.
3. Изменения количественного состава лейкоцитов, а также функциональной активности нейтрофилов трупной крови в раннем посмертном периоде зависят от времени, прошедшего с момента наступления смерти организма, поэтому данные показатели могут быть использованы в качестве диагностических критериев для определения давности наступления смерти.
Апробация работы
Основные положения работы доложены на VI научно-практической конференции молодых ученых ЧелГМА (2008 г.) и заседаниях кафедры судебной медицины ГОУ ВПО ЧелГМА Росздрава (2006 - 2007 г.г.).
Реализация результатов исследования
Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедрах микробиологии, вирусологии, иммунологии и судебной медицины ГОУ ВПО «ЧелГМА Росздрава» и работу ОГУЗ «Челябинское областное бюро судебно-медицинской экспертизы».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ.
Структура и объем диссертации
Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, 4-х глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы,
Заключение диссертационного исследования на тему "Комплексное исследование количественного состава лейкоцитов и функциональной активности нейтрофильных лейкоцитов крови в различные промежутки времени после наступления смерти организма"
выводы
1. В крови трупов в раннем посмертном периоде, а также при хранении образцов крови in vitro отмечаются постепенное снижение общего числа лейкоцитов, резкое падение процентного содержания нейтрофилов, а также показателей их функциональной активности (фагоцитоза и кислородзависимого метаболизма, оцененного с помощью теста восстановления нитросинего тетразолия). При этом процент лимфоцитов крови возрастает и к концу третьих суток посмертного интервала времени или хранения крови in vitro большую часть белых клеток крови составляют лимфоциты.
2. В ходе исследования процентного содержания живых лейкоцитов в крови трупов лабораторных животных в раннем посмертном периоде выявлено постепенное снижение числа живых лейкоцитов крови и почти полная их гибель к 72-м часам посмертного интервала времени.
3. Влияние температурных условий окружающей среды выявлено только с 9-ти часов посмертного интервала времени. Отмечается более быстрое снижение показателей фагоцитарной активности нейтрофилов крови трупов лабораторных животных, находившихся при температуре окружающей среды в 37°С, чем при других использованных в данной работе температурных условиях. В тоже время средние (16-21°С) и низкие (4°С) температуры окружающей среды статистически значимого влияния на скорость изменения показателей фагоцитоза нейтрофилов крови не оказывают.
4. Выявленные зависимости динамики изменения исследованных параметров крови (процента живых лейкоцитов, процента нейтрофилов и их функциональной активности) от длительности посмертного периода позволяют использовать их в качестве критериев по определению давности наступления смерти организма.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
На основании результатов выполненной работы для повышения точности определения давности наступления смерти в раннем посмертном периоде рекомендуем использование достаточно простых по технике проведения и недорогих методов исследования лейкоцитов крови. Для лучшей интерпретации данных, полученных при исследовании лейкоцитов крови, необходимо проведение серий исследований через определенные промежутки времени.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2008 года, Сафин, Равиль Якупович
1. Авакян, А А. Морфологическая картина белой крови и фагоцитарная активность лейкоцитов у трупов / А.А. Авакян, М.И. Алавердян // Сборник трудов кафедры судебной медицины I Ленинградского медицинского института. Л., 1958. - Вып. 2. - С. 83-86.
2. Авцын, А.П. Ультраструктурные основы патологии клетки / А.П. Авцын, В.А. Шахламов. М. : Медицина, 1979 - 320 с.
3. Ананьева, С.К. Динамика фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови в восстановительном периоде после клинической смерти, вызванной электротравмой / С.К. Ананьева // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1972. - Т.74, № 9. - С. 37-39.
4. Боровиков, В. Statistica: искусство анализа данных на компьютере. Для профессионалов / В. Боровиков СПб. : Питер, 2001 — 656 с.
5. Вагнер, В.И. Количественная оценка теста восстановления нитросинего тетразолия / В.И. Вагнер, О.С. Насонкин, Н.Д. Борскина //Лечеб. дело. 1989.-№12.-С. 31-33.
6. Витер, В.И. Современное состояние проблемы давности наступления смерти / В.И. Витер, В.Ю. Толстолуцкий // Казан, мед. журн. 1994. -№4. - С.320-324.
7. Витер, В.И. Вопросы методологии в решении проблемы определения давности наступления смерти / В.И. Витер, В.А. Куликов // Суд.-мед. эксперт. 1999. - Т.42, №3. - С.3-6.
8. Воробьев, В.Г. Использование светоотражающих свойств кожи для установления давности наступления смерти / В.Г. Воробьев, В.М. Бушков // Молодежь и медицинская наука в XXI веке : материалы конф. Киров, 2003. - С. 74-75.
9. Галкин, А.А. Методы исследования подвижности нейтрофилов : обзор лит. / А.А. Галкин, Е.Н. Тимин, А.А. Карелин. // Клинич. лаб. диагностика. 2003. - №1. - С. 22-33.
10. Гланц, С. Медико-биологическая статистика : пер. с англ. / С. Гланц. — М. : Практика, 1998. 459 с.
11. Гордиенко, С.М. Современные методические подходы к изучению фагоцитарной активности лейкоцитов / С.М. Гордиенко. // Лаб. дело. — 1984.-№5.-С. 285-289.
12. Горизонтов, П.Д. Стресс и система крови / П.Д. Горизонтов, О.И. Белоусова, М.И. Федотова. М. : Медицина, 1983. - 293 с.
13. Долгушин, И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. Екатеринбург : Изд-во УрО РАН, 2001. — 288 с.
14. Иммунологические методы исследования : учеб. пособие / под ред. Е.А. Олейникова, Л.Я. Эберта. Саранск, 1981. - 92 с.
15. Кадиев, Б.Б. Применение гистохимических методов при исследовании степени альтерации лейкоцитов трупной крови / Б.Б. Кадиев, В.И. Кононенко // Диагностика давности процессов в объектах судебно-медицинской экспертизы. Кишинев : Штиница, 1986. - С. 14-15.
16. Кадиев, Б.Б. Установление давности наступления смерти по динамике посмертных изменений в форменных элементах крови // Суд.-мед. эксперт. 1987. - Т.ЗО, № 1. - С. 14-17.
17. Казарновская, M.JI. Репродукция лимфоцитов трупной крови. Судебно-медицинские и биологические аспекты / Казарновская M.JI. -Кишинев : Штиница, 1983. 104 с.
18. Караванов, Г.Г. Фагоцитарная деятельность лейкоцитов трупной крови / Г.Г. Караванов // Современные проблемы гематологии и переливания крови : тр. ин-та гематологии и переливания крови. М., 1935.-С. 96-99.
19. Ковальский, Г.Б. Количественная гистохимия дегидрогеназ / Г.Б. Ковальский // Введение в количественную гистохимию ферментов / под ред. Т.Б. Журавлевой, Р.А. Прочуханова. М. : Медицина, 1978. -Гл. З.-С. 58-115.
20. Коровин, А.А. Морфометрические подходы к диагностике давности наступления смерти / А.А. Коровин, Ю.И. Пиголкин, Д.В. Богомолов и др. // Суд.-мед. эксперт. 2001. - Т.44, №1. - С. 3-6.
21. Костылев, В.И. Применение иммунологических методов исследования для определения давности наступления смерти / В.И. Костылев // Суд.-мед. эксперт. 1984. - Т.27, №1. - С. 13-16.
22. Костылев, В.И. Динамика некоторых иммунных показателей в зависимости от места взятия крови и давности наступления смерти / В.И. Костылев // Суд.-мед. эксперт. 1985. - Т.28, №4. - С. 8-9.
23. Лаврова, B.C. Нейтрофилы и злокачественный рост / B.C. Лаврова, И.В. Чердынцева, Н.В. Васильев и др. Томск : Изд-во Томск, ун-та, 1992.- 124 с.
24. Лазорик, М.И. Показатели фагоцитоза в международной системе единиц / М.И. Лазорик // Лаб. дело. 1984. - №3. - С. 165-167.
25. Лимфоциты. Методы: руководство / С. Хайт и др. ;под ред. Дж. Клауса ; пер. с англ. А.Н. Maya, А.А. Фельдшеровой ; под ред. А.Н. Maya. М. : Мир, 1990. - 395 с.
26. Лисянский, Б.М. Гистоэнзимологическое исследование коры головного мозга при определении давности наступления смерти / Б.М. Лисянский, В.В. Язвиков, С.А. Морозов // Суд.-мед. эксперт. 1975. -Т. 18, №2. - С. 31-32.
27. Лопухин, Ю.М. Критерии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией / Ю.М. Лопухин, Э.М. Коган. М. : Медицина, 1975. -280 с.
28. Лопухин, Ю.М. Ультраструктурные основы жизнеспособности печени, почек и сердца / Ю.М. Лопухин, Э.М. Коган, Я.Л. Караганов. М. : Медицина, 1977. - 256 с.
29. Лушников, Е.Ф. Гистохимическое определение активности некоторых дегидрогеназ на секционном материале / Е.Ф. Лушников, Э.В. Рабина // Арх. патологии. 1963. - Т.25, №2. - С. 70-75.
30. Лушников, Е.Ф. Возможности гистохимического изучения активности ферментов в тканях после смерти / Е.Ф. Лушников, Н.А. Шапиро // Арх. патологии. 1969. -Т.31, №1. - С. 8-14.
31. Лушников, Е.Ф. Аутолиз. Морфология и механизмы развития / Е.Ф. — -Лушников-Н.А. Шапиро. Мг: Медицина, 1974.- 200 с.---------
32. Лушников, Е. Ф. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития / Е. Ф. Лушников, В. М. Загребин // Арх. патологии. 1980. - Т.42, №.1. - С. 3-10.
33. Лушников, Е. Ф. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития / Е. Ф. Лушников, В. М. Загребин // Арх. патологии. 1987. - Т.44, №.2. - С. 84-89.
34. Лушников, Е.Ф. Гибель клетки (апоптоз) / Е.Ф. Лушников, А.Ю. Абросимов. М. : Медицина, 2001. - 192 с.
35. Маринов, Х.Г. Некоторые гистохимические особенности клеток селезенки / Х.Г. Маринов // Арх. патологии. 1966. - Т.28, №11. - С. 58-62.
36. Маянский, А.Н. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия : метод, рекомендации / А.Н. Маянский, М.К. Виксман. — Казань, 1979.- 11 с.
37. Маянский, А.Н. Реактивность нейтрофила / А.Н. Маянский, А.Н. Галиуллин. Казань : Изд-во Казан, ун-та, 1984. - 160 с.
38. Маянский, А.Н. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.Н. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск : Наука. Сиб. отд-ние, 1989. - 340 с.
39. Маянский, А.Н. Клинические аспекты фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза. Казань : Изд-во Казан, ун-та, 1993. - 122 с.
40. Маянский, А.Н. Апоптоз нейтрофилов / А.Н. Маянский, Н.А. Маянский, М.И. Заславская и др. // Иммунология. 1999. - № 6. — С. 11-20.
41. Маянский, Н.А. Апоптоз экссудативных нейтрофилов человека / Н.А. Маянский, М.И. Заславская, Н.А. Маянский // Иммунология. 2000. -№2.-С. 11-13.
42. Медведев, А.Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза / А.Н. Медведев, В.В. Чаленко // Лаб. дело. 1991. - №2. -С. 19-20.
43. Медицинские и лабораторные технологии и диагностика : справочник / под ред. А.И. Каринщенко. СПб. : Интермедика, 1998. - 304 с.
44. Мельников, Ю.Л. Судебно-медицинское определение времени наступления смерти / Ю.Л. Мельников, В.В. Жаров. М. : Медицина, 1978.- 168 с.
45. Нагоев, Б.С. Функциональная активность лейкоцитов у больных пневмонией / Б.С. Нагоев, М.Г. Шубич // Клинич. медицина. — 1979. — Т.57, №4. С. 31-34.
46. Нагоев, Б.С. Значение теста восстановления нитросинего тетразолия для изучения функциональной активности лейкоцитов : обзор лит. / Б.С. Нагоев, М.Г. Шубич // Лаб. дело. 1981. - №4. - С. 195-198.
47. Нагоев, Б.С. Очерки о нейтрофильном гранулоците / Б.С. Нагоев. — Нальчик : Эльбрус, 1986. 142 с.
48. Науменко, В.Г. Гистологический и цитологический методы исследовании в судебной медицине / В.Г. Науменко, Н.Л. Митяева. — М. : Медицина, 1980. 304 с.
49. Пальцев, М.А. Межклеточное взаимодействие / М.А. Пальцев, А.А. Иванов. М. : Медицина, 1995. - 224 с.
50. Пальцын, А.А. Электронно-радиографическое исследование ----------- жизнеспособности клеток человека после смерти." Посмертнаяактивация синтеза РНК в нейтрофилах / А.А. Пальцын, О.А. Захарова,
51. Р.И. Каем и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1991. -Т. 111, №2.-С. 199-201.
52. Пермяков, Н. К. Патология реанимации и интенсивной терапии / Н. К. Пермяков. М. : Медицина, 1985. - 287 с.
53. Пиголкин, Ю.И. Современные методы определения давности наступления смерти / Ю.И. Пиголкин, Д.В. Богомолов, А.А. Коровин // Суд.-мед. эксперт. 1999. - Т.42, №3. - С. 31-33.
54. Поликар, А. Элементы патологии клетки : пер. с фр. / А. Поликар, М. Бесси. М.: Мир, 1970. - 348 с.
55. Ребров, Л.Б. Некоторые энзиматические аспекты посмертного аутолиза / Л.Б. Ребров, В.Л. Козельцев, С.С. Шишкин и др. // Вестн. АМН СССР. 1983. -№10. -С. 82-89.
56. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STATISTICA / О.Ю. Реброва. М. : Медиа Сфера, 2003. - 312 с.
57. Сапрыкин, В.П. Морфологические варианты нейтрофильных гранулоцитов крови практически здоровых людей / В.П. Сапрыкин, С.Л. Кузнецов // Морфология. 2001. - Т. 120, №6. - С. 37-41.
58. Селье, Г. Стресс без дисстресса : пер. с англ. / Г. Селье. М. : Прогресс, 1979. - 124 с.
59. Симонян, К.С. Посмертная кровь в аспекте трансфузиологии / К.С. Симонян, К.П. Гутионтова, Е.Г. Цуринова. М. : Медицина, 1975.
60. Скудина, М.Г. Переливание трупной крови / М.Г. Скудина. М. : Медгиз, 1940.- 105 с.
61. Спижарская, JI.M. Морфологическая характеристика и некоторые функциональные свойства кроветворных клеток посмертного мозга и изменения их при хранении в консервирующих растворах : дис. . канд. мед. наук / JI.M. Спижарская. JL, 1966. - 125 с.
62. Струков, А. И. Патологическая анатомия / А. И. Струков, В.В. Серов. М. : Медицина, 1993. - 687 с.
63. Томилин, В.В. Определение давности наступления смерти / В.В. Томилин, В.В. Жаров, Г.М. Мельникова // Суд.-мед. эксперт. — 1984 — Т.27, №4. С. 44-47.
64. Томилин, В.В. Проблема переживаемости тканей при использовании современных методов морфологического исследования / В.В. Томилин, В.П. Туманов, О.А. Захарова и др. // Суд.-мед. эксперт. — 1999. Т.42, №4. - С. 12-15.
65. Тотолян, А.А. Клетки иммунной системы / А.А. Тотолян, И.С. Фрейдлин. СПб. : Наука, 2000. - 231 с.
66. Федоров, Б.М. Стресс и система кровообращения / Б.М. Федоров. -М.: Медицина, 1991. 320 с.
67. Физиология лейкоцитов человека / В.А. Алмазов, Б.В. Афанасьев, ------ А.Ю. Зарицкий и др. JI. : Наука, 1979. - 232 с. ----------
68. Цуринова, Е.Г. Переливание фибринолизной крови / Е.Г. Цуринова. -М.: Медгиз, 1960.- 155 с.
69. Хижнякова, К.И. Возможности судебно-медицинской экспертизы при определении времени наступления смерти / К.И. Хижнякова. — М. : ЦОЛИУВ, 1973.-Ч. 1. -43 с.
70. Щепочкин, О. В. Определение давности наступления смерти по результатам краниоэнцефальной термометрии / О. В. Щепочкин // Проблемы экспертизы в медицине. Ижевск : Экспертиза, 2001. -Вып. 3. -С. 9-13.
71. Шор, Г.В. О смерти человека (введение в танатологию) / Г.В. Шор. -СПб. : Изд-во СПбГМУ, 2002. 271 с.
72. Шубич, М.Г. NBT-тест у детей в норме и при гнойно-бактериальных инфекциях / М.Г. Шубич, В.Г. Медникова // Лаб. дело. 1978. - №9. -С. 515-518.
73. Шубич, М.Г. Цитохимия фагоцитоза / М.Г. Шубич // Цитохимические и биохимические исследования в эксперименте и клинике : межвуз. сб. вопр. теоретич. м клинич. медицины. Нальчик, 1979. - Вып. 8. — С. 26-27.
74. Шумаков, В.И. Консервация органов / В.И. Шумаков, Е.Ш. Штенгольд, Н.А. Онищенко. М. : Медицина, 1975. — 252 с.
75. Эйдлин, JI.M. Белые тельца в крови трупа / JI.M. Эйдлин // Суд.-мед. эксперт. 1928. — №9. — С: 61-65. ----------~ —
76. Aderjan, R. Investigation of cardiac glycoside levels in human postmortem blood and tissues determined by a special radioimmunoassay procedure / R. Aderjan, H. Buhr, G. Schmidt // Arch. Toxicol. 1979. - Vol.42. - P.107.
77. Althaus, L. Rectal temperature time of death nomogram: sudden change of ambient temperature / L. Althaus, C. Henssge // Forensic Sci. Int. 1999. -Vol. 99.-P. 171-178.
78. Babapulle, C.J. Cellular changes and time since death / С J. Babapulle, N.P. Jayasundera // Med. Sci. Law. 1993. - Vol.33, №3. - P. 213-222.
79. Baccino, E. Outer ear temperature and time of death / E. Baccino, L. De Saint Martin, Y. Schuliar et al. // Forensic Sci. Int. 1996. - Vol. 83. - P. 133-146.
80. Baccino, E. Letter to the Editor / E. Baccino // Forensic Sci. Int. 1997. -Vol. 87.-P. 173.
81. Bardale, R. Evaluation of Morphological Changes in Blood Cells of Human Cadaver for the Estimation of Postmortem interval / R. Bardale, P.G. Dixit // Medico-legal update. 2007. - Vol. 7, №2. - P. 35-41.
82. Bins, M. Neutrophil granulation stained with May Grunwald Giemsa or ~ pure'Azure B-eosin'Y quantified by image'analysisV'MrBins, WrHuiges,
83. T. Timmers, et al. // Blut. 1989. - Vol. 58, №2. - P. 79 - 82.
84. Braunstein, H. A histochemical study of the enzymatic activity of lymph nodes / H. Braunstein, D.G. Freiman, W. Thomas et al. // Cancer. 1962. -Vol.15.-P. 130-138.
85. Brecher, G. Present status of speculated red cells and their relationship to the discocyte-echinocyte transformation: critical review / G. Brecher, M. Bessis // Blood. 1972. - Vol.40, №3. - P.333-344.
86. Carrel, A. The fundamental processes of fibroblast and macrophage. II. The macrophage / A. Carrel, A.H. Ebeling // J. Exp. Med. 1925. - Vol.44. - P. 285.
87. Chitnis, D. Inhibition of apoptosis in polymorphonuclear neutrophils from burn patients / D. Chitnis, C. Dickerson, A.M. Munster et al. // J. Leukoc. Biol. 1996. - Vol.59, №6. - P.835-839.
88. Сое, J.I. Post-mortem chemistry, practical considerations and a review of the literature / J.I. Сое // Forensic Science. 1974. - Vol.19. - P. 13-19.
89. Сое, J.I. Postmortem peripheral blood glucose and cardiopulmonary resuscitation / J.I. Сое // Forensic Sci. Gaz. 1975. - Vol.6, №4. - P.l.
90. Сое, J.I. Postmortem chemistry of blood, cerebrospinal fluid, and vitreous humour / J.I. Сое // Forensic Medicine / ed. by C.G. Tedeschi, G.E. William, L.G. Tedeschi. Philadelphia, London, Toronto : Saunders company, 1977. - Vol. 2. - P. 1033-1036.
91. Сое, J.I. Postmortem biochemistry of blood and vitreous humour in paediatric practice / J.I. Сое // Pediatric Forensic Medicine and Pathology / ed. by J. K. Mason. London : Chapman & Hall Medical, 1989. - P. 191203.
92. Сое, J.I. Vitreous potassium as a measure of the postmortem interval: an historical review and critical evaluation / J.I. Сое // Forensic Science Int. -1989.-Vol.42.-P.201.
93. Сое, J.I. Post-mortem chemistry update: Emphasis on forensic application / J.I. Сое // Am. J. Forensic Med. Pathol. 1993. - Vol.14. - P.91-117.
94. De Bernardi, A. Rillievi tanatologicic snigli ellementi firurati del sangue. Nota limit della indentificabilita dei granulociti a contrasto di fase / A. De Bernardi, P. Farditi // Minerva Med. Leg. 1965. - Vol. 85. - P. 23-26.
95. De Chatelet, L.R. Effect of phorbol myristate acetate on the oxidative metabolism of human polymorphonuclear leukocytes / L.R. De Chatelet, P.S. Shirley, R.B. Johnston // Blood. 1976. - Vol. 47. - P. 545-554.
96. De Letter, E.A. Can routinely combined analysis of glucose and lactate in vitreous humour be useful in current forensic practice? / E. A. De Letter, M. H. Piette // Am. J. Forensic Med. Pathol. 1998. - Vol.19, №4. - P.335.
97. Densen, P. Granulocytic phagocytes / P. Densen, W.R. Clark, W.M. Nauseff // Principles and Practice of Infectious Diseases; Eds. G.L. Mandell, J.E. Bennett, R. Dolin. 3rd ed. - New York : Churchill Livingstone, 1995. - P. 78-101.
98. Dix, J. Time of death, decomposition and identification: an atlas / J. Dix, M. Graham. Boca Raton, Florida : CRC Press LLC, 2000. - 119 p.
99. Dix, J. Color atlas of forensic pathology / J. Dix. Boca Raton, Florida : CRC Press LLC, 2000. - 181 p.
100. Dixon, K.C. Protein in dying B-cell of the pancreatic islets / K.C. Dixon, A.J. King, T. Malinin // Quart. Rev. Exp. Physiol. 1960. - Vol. 45. - P. 202.
101. Dixon, K.C. Events in dying cells / K.C. Dixon // Proc. Roy. Soc. Med. -1967.-Vol. 60.-P. 217.
102. Dokgoz, H. Comparison of morphological changes in white blood cells- after death and in vitro storage of blood for the estimation of postmortem"interval / H. Dokgoz, N. Arican, I. Elmas et al. // Forensic Science Int. -2001.-Vol.124.-P. 25-31.
103. Edston, E. Postmortem measurements of thyroid hormones in blood and vitreous humour combined with histology / E. Edston, H. Druid, M. Ostrom // Am. J. Med. Pahtol. 2001. - Vol.22, №1. - P.78-83.
104. Findlay, A.B. Bone marrow changes in the post mortem interval / A.B. Findlay // J. Forensic Sci. Soc. 1976. - Vol.16, №3. - P.213-218.
105. Frickenstein, M.L. Untersuchungen uber den ATP, ADP und AMPGehaltim Leichenblut in Beziehung zum Leichenalter / M.L. Frickenstein -Marburg : Philipps-Universitat, 1967. 57 p.
106. Gineste, J. Storage of Blood / J. Gineste, M. Forest, B. Munpin. London : Academic Press, 1968. - 225 p.
107. Gormsen, H. The diagnostic value of postmortem blood glucose determinations in cases of diabetes mellitus / H. Gormsen, A. Lund // Forensic Sci. Int. 1985. - Vol.28. - P.103.
108. Hebert, M.J. Sequential morphologic events during apoptosis of human neutrophils. Modulation by lipoxygenase-derived eicosanoids / M.J. Hebert, Т. Takano, H. Holthofer et al. //J. Immunol. 1996. - Vol.157, №7. — P.3105-3115.
109. Henke, S.E. Changes in vitreous humour associated with postmortem interval in rabbits / S.E. Henke, S. Demarais // Am. J. Vet. Res. 1992. -Vol.53, №l.-P.73-77.
110. Henry, J.B. Estimation of the post-mortem interval by chemical means / J. B. Henry, F.A. Smith // Am. J. Forensic Med. Pathol. 1980. - №1. - P. 341-347.
111. Henssge, C. Integration of different methods casework. In the estimation of the time since death in the early post-mortem period / C. Henssge, B. Knight, T. Krompecher et al. London : Edward Arnold, 1995. — 269 p.
112. Henssge, C. The estimation of the death in early postmortem period / C. Henssge, B. Knight, T. Krompecher et al. 2nd ed. - London : Edward Arnold, 2002.-271 p.
113. Homburg, C.H. Apoptosis of neutrophils / C.H. Homburg, D. Roos // Curr. Opin. Hematol. 1996 - Vol.3, №1. - P. 94-99.
114. James, R. A. Determination of postmortem interval by sampling vitreous humour / R. A. James, P. A. Hoadley, B. G. Sampson // Am. J. Forensic Med. Pathol. 1997. - Vol. 18, №2. - P. 158.
115. James, R. A. Precision of estimating time of death by vitreous potassium. Comparison of vitreous equations / R.A. James, P.A. Hoadley, B.G. Sampson // Am. J. Forensic Med. Pathol. 1997. - Vol.18, №2. - P. 158162.
116. Knight, B. Forensic Pathology / B. Knight. London : Edward Arnold, 1991.-421 p.
117. Krause, J.R. Automated "differentials"in the hematology laboratory / J.R7 Krause // Am. J. Pathol. 1990. - Vol. 93, №4, Suppl.l. - S. 11-16.
118. Krause, J.R. The automated white cell differential. A current perspective / J.R. Krause // Heamtol. Oncol. Clin. North Am. 1994. - Vol.8, №4. - P. 605-616.
119. Kernbach, G. Biochemical measurements of glucose metabolism in relation to cause of death and postmortem effects / G. Kernbach, K. Puschel, B. Brinkmann // Z. Rechtsmed. 1986. - Vol. 96, №3. - P. 199-213.
120. Koliakos, G. Stability of serum TSH concentration after nono-refrigerated storage / G. Koliakos, M. Gaitatizi, P. Grammaticos // Panminerva Med. -1999. -Vol.41, № 2. -P.99-101.
121. Kolmer, J.A. Liquid preservation of granulocytes for transfusion / J.A. Kolmer//Progress Clin. Biol. Res. 1977.-Vol.13.-P. 185-191.
122. Laiho, K.U. The relationship between cell viability and changes in mitochondrial ultrastructure, cellular ATP, ion and water content following injury of Ehrlich ascites tumor cells / K.U. Laiho, B.F Trump // Virchows Arch. 1974. - Vol.15. -P.267-277.
123. Laiho, K. Autolytic changes in blood cells and other tissues of human cadavers viability and ion studies / K. Laiho, A. Penttila // Forensic Science Int. 1981. - Vol.17, №2. - P. 109-120.
124. Laiho, K. Autolytic changes in blood cells of human cadavers II, Morphological studies / K. Laiho, A. Penttila // Forensic Science Int. -1981. Vol.17, №2. -P.121-132.
125. Lange, N. Human postmortem interval estimation from six different studies. /N. Lange, S.T. Swearer, W.Q. Sturner // Forensic Sci. Int. 1994. -Vol. 66.-P. 159-174.
126. Lewis, W.H. The survival of cells after the death of the organism / W.H. Lewis, C.C. McCoy // Bull. Johns Hopk. Hosp. 1922. - Vol. 33. - P. 284.
127. Lindquist, O. Determination of insulin and glucose postmortem / O. Lindquist//Forensic Sci. 1973. -Vol. 2. — P.55.
128. Lythgoe, A.S. The activity of lactate dehydrogenase in cadaver sera: A comparison of different sampling sites /A.S. Lythgoe // Med. Sci. Law. -1980.-Vol.20.-P.48.
129. Lythgoe, A.S. Postmortem activity of alkaline phosphatase in serum from different sites of the cadaver cardiovascular system / A.S. Lythgoe // J. Forensic Sci. Soc. 1981. - Vol.21. - P.337.
130. Madea, B. Estimating time of death from measurement of the electrical excitability of skeletal muscle. / B. Medea // J. Forensic Sci. Soc. — 1992. — Vol. 32.-P. 117-129.
131. Madea, B. Postmortem biochemical examination of synovial fluid — a preliminary study / B. Medea, С Kreuser, S. Banaschak // Forensic Sci. Int. -2001.-Vol. 118.-P. 29-35.
132. Maeda, H. Evaluation of postmortem oxymetry with reference to the cause of death / H. Maeda, K. Fukita, S. Oritani et al. // Forensic Sci. Int. 1997. -Vol.87.-P.201-210.
133. Mallach, H.J. Comparative studies with enzymatic methods on vital and cadaveric blood with regard to the time of death / H.J. Mallach, G. Laudahn // Klin. Wochenschr. 1964. - Vol. 42. - P. 693-699.
134. McDowal, K.L. The use of absolute refractory period in the estimation of the erly postmortem interval / K.L. McDowal, D.V. Lenihan, A. Busuttil et al. // Forensic Sci. Int. 1998. - Vol. 91. - P. 163-170.
135. Metcalf, J.A. Laboratory manual of neutrophil function / J.A. Metcalf, J.I. Gallin, W.M. Naussefet al.-N.Y., 1985.-191 p.
136. Mohammed, M.A. Blood changes as a possible tool for estimation of the postmortem interval. Thesis Electronic Recourse. / M.A. Mohammed /
137. Faculty of Medicine, Cairo University. 2004. - Mode of access: http://www.cdml.edu.eg.
138. Phillips, H.J. Dye exclusion tests for cell viability. / H.J. Phillips // Tissue Culture, Methods and Applications / ed. by P.F. Kruse, M.K. Patterson. -N. Y.; London : Academic Press, 1973. P. 406-408.
139. Querido, D. Linear rate of change in the product of erythrocyte water content and potassium concentration during the 0—120 hour postmortem period in the rat / D. Querido, B. Pillay // Forensic Sci. Int. 1988. -Vol.38, №1-2.-P.101-112.
140. Querido, D. Linearization of the relationship between postmortem plasma chloride concentration and postmortem interval in rats / D. Querido // Forensic Sci. Int. 1990. - Vol.45, №1-2. - P.l 17.
141. Querido, D. In vitro loss of potassium from erythrocytes during the 0 — 108 hours postmortem period in rats: relationship between potassium loss and postmortem interval / D. Querido // Forensic Sci. Int. 1991. - Vol.51, № 1. -P.l 11.
142. Querido, D. A preliminary study of changes in scalp impedance during the early post-mortem periods in rats / D. Querido // Forensic Sci. Int. 1999. — Vol.101.-P.123-130.
143. Penttila, A. Transformation of rat blood cells postmortem. A scanning electron microscopic study / A. Penttila, J. Ohman // Zacchia. 1978. -Vol.13. -P.l-16.
144. Penttila, A. Postmortem and in vitro changes of human red blood cells. II Scanning electron microscopic studies / A. Penttila, H. Sumuvuori, J. Ohman // Proc. 6th Scand. Meeting Forensic Med. Helsinki, 1976. -P.218-226.
145. Perry, V.P. Techniques of viable tissue storage / V.P. Perry // Fed. Proc. -1963.-Vol. 22.-P. 102.
146. Rajs, J. Comparison of anoxic changes in isolated rat cardiac myocytes in suspension and in histological sections / J. Rajs, D. P. Jones, S. W. Jakobsson // Acta Pathol. Microbiol. Scand. Sect. A. 1978. - Vol.86. -P.401-408.
147. Rohr, K. Das menschliche Knochenmark / K. Rohr. Stuttgart, 1960. - 160 P
148. Rosenholtz, M. Morphologic histochemical aminopeptidase / M. Rosenholtz, L.W. Wattenberg // Arch. Path. 1961. - Vol.71. - P. 63.
149. Schenck, P. A. Effects of storage on serum ionized calcium and pH values in clinically normal dogs / P. A. Schenck, D. J. Chew, C. L. Brooks // Am. J. Res. 1995. - Vol.56, №3. p. 304-307.
150. Schleyer, F. Postmortem blood viscosity, blood cell volume, osmotic erythrocyte resistance and blood sedimentation in relation to cadaver age and cause of death / F. Schleyer // Virchows Arch. 1958. - Vol.331, №3. -P. 276-286.
151. Schleyer, F. Uber Bezichungen zwischen postmortaler Leukozytenvitalitat und Leichenalter / F. Schleyer // Blut. 1960. - № 6. - P. 147-150.
152. Snyderman, R. Molecular and cellular mechanisms of leukocyte chemotaxis / R. Snyderman, E.J. Goetzl // Science. 1981. - Vol.231. - P. 830.
153. Smolen, J.E. Function of neutrophils / J.E. Smolen, L.A. Boxer // Williams hematology; Eds. E. Beutler, M.A. Lichtman, B.S. Coller and T.J. Kipps. -New York : McGraw-Hill, 1995. P. 779-798.
154. Takubo, T. Quality control in a manual and an automated leukocyte differential count / T. Takubo, N. Tatsumi // Southeast Asian J. Trop. Med. Public Health. 1999. - Vol.30, Suppl.3. - P.66-74.
155. Thomsen, H. The postmortem activation status of platelets / H. Thomsen, B. Krisch // Int. Leg. Med. 1994. - Vol.107. - P. 111-117.
156. Thomsen, H. How and why does the platelet count in postmortem blood change during the early postmortem interval / H. Thomsen, H. J. Kaatsch, B. Krisch//Forensic Sci. Int. 1999. - Vol.101. - P. 185-194.
157. Tomita M. Studies on autolytic changes in red blood cells after death / M. Tomita//Jap. J. Legal Medicine. 1985. - Vol. 39, №5. -P.371-385.
158. Trump, B.F. The pathogenesis of subcellular reaction to lethal injury / B.F. Trump, F.L. Ginn // Methods and Achievements in experimental Pathology / ed. by E. Bajusz, G. Jasmin. -Basel; N. Y. : Karger, 1969. Vol.4. - P. 129.
159. Vogelaar, S. A. Blood sample stability at room temperature for counting red and white blood cells and platelets / S.A. Vogelaar, D. Posthuma, D. Boomsma et al. // Vascul. Pharmacol. 2002. - Vol.39, №3. - P. 123-125.
160. Unterer, S. Evaluation of an electrolyte analyzer for measurement of ionized calcium and magnesium concentrations in blood, plasma, and serum of dogs / S. Unterer, H. Lutz, B. Gerber et al! // Am. J. Vet. Res. — 2004.-Vol.65, №2.-P. 183- 187.
161. Urban, R. Todeszeitbestimmung Mogglichkeiten und Grenzen der Elektrolyt estimmung in Leichenliquor / R. Urban, H. D. Troger // Beitr. Gerichtl. Med. 1987. -Vol.45. - P. 157-161.
162. Warner, B. A. A field evaluation of the Coulter-STKS / B. A. Warner, D. M. Reardon // Am. J. Clin. Pathol. 1991. - Vol. 95. - P. 207-217.
163. Xu, X. M. Study on the relationship between PMI and the concentration of magnesium and iron in the vitreous humour of rabbit after death / X. M. Xu, Z. Q. Gong, Y. G. Sun. // Fa Yi Xue Za Zhi. 2002. - Vol. 18, №2. - P. 65 - 66.
164. Zimmerman, H. Kritisches zur histochemischen darstellung pyridinnucleotid-gebundener dehydrogenasen / H. Zimmerman // Acta histochem. 1961. -Bd.2, Suppl.l. - P. 164.
165. Zucker-Fronnkin, D. Electron microscopic studies human granulocytes / D. Zucker-Fronnkin // Semin. Hematol. 1968. - Vol. 15. - P. 109-111.139