Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Клинико-патогенетическое значение определения прямой дегрануляции базофилов и высвобождения липидных медиаторов аллергии при атопической бронхиальной астме у детей

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР

МОСКОВСКИЙ ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ПЕДИАТРИИ И ДЕТСКОЙ ХИРУРГИИ

На правах рукописи

ПОГОМИЙ Наталья Николаевна

УДК 616.248-053.3-072.85

КЛИНИКО-ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ПРЯМОЙ ДЕГРАНУЛЯЦИИ БАЗОФИЛОВ И ВЫСВОБОЖДЕНИЯ ЛИПИДНЫХ МЕДИАТОРОВ АЛЛЕРГИИ ПРИ АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМЕ

У ДЕТЕЙ

14.00.09— Педиатрия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 1989

Работа выполнена в Московском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте педиатрии и детской хирургии Министерства здравоохранения РСФСР.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор С. Ю. Каганов, доктор медицинских наук О. Б. Святкина.

Официальные оппонент ы:

доктор медицинских наук, профессор И. И. Балаболкин, доктор медицинских наук, профессор А. А. Ананенко.

Ведущее учреждение: II Московский ордена Ленина государственный институт им. Н. И. Пирогова.

Защита диссертации состоится « » '^#£1990 г.

в « УЗ. » часов на заседании специализированного ученого совета Д.084.15.01 при Московском ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательском институте педиатрии и детской хирургии Минздрава РСФСР (Москва, Талдомская ул., д. 2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан « » . г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

3. К. Землянскап

' ' ! > г \

' ОБЮЯ ХАРАКТйРИСТ/М РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема диагностики, лечения и профилактики бронхиальной астш в Аетском ¿озрасте остается актуальной. Это связано с ростом распространенности бронхиальной астш среди детей, смещением манифестами болезни к более раннему возрасту увеличением числа больных с тяжелым течением заболевания и летальным его исходом (Тзрин H.A. 1974: ' Каганог С.!0., 1978; Балабодкин И.И., 1985; Соколова Т.С.,19~6)

По современные представлениям ключевую роль б патогенезе бронхиальной астмы играет каскадная медиаторная реакция, запускаемая аллергенен, формирующая немедленный патофизиологический ответ. .Перекрестное связывание аллергена рецепторами на поверхности мембран клеток-мишеней приводив к активации метилтраксфераз и изменению физико-химических свойств клеточных мембран, что способствует активному току ионов кальция в клетку. Повышение проницаемости мембран для ионов кальция ведет к секреции уже имепщихля в клетке медиаторо» (мор-фологич» ,ки опреде~чемой кяг дегранудяция), а также к с л- ■ тезу вновь образующихся липидкых медиаторов, к которым относится фактор активации тромбоцитов (ФАГ), лзйкогриены (J1I) и лростагландины (ПГ).

Известно, что пептадосодержащие лейкотриены

(ЛТС4, ЛЗД^, JlTi^) вызывают длительное сильное сокращение гладкой мускулатуры мелких бронхов и бронхиол человека ) (dbt-C-З с соагт. 1380 год), усидкЕйаЯ- секрецию бронлиаль-ьой слизи и. нарухао-г ее згакуациа? С ,1931;

ЗДосо. у • t 1982). В приступном периоде бронхиальной аст ч в артериальной крови актийность состоя.,его ко ЛТС^и ЛВД ^ медленно дейс-чукщего зещестг а-афилакоии (МДВ-А) увеличи-

вается в 1000 раз, в то время как уровень ЛГ^и ПГГ^существен-но не меняется ( О'А/Ьш с соавт. ,1985).

В отличие от пептидосодержащих лейкотриенов, лейкотриен В^ (1:ТБ^) оказывает сильное хемотаксическое действие на нейт-рофилы, эоэикофилы и макрофаги человека и животных с ссавт., 1960; 1983).

Однако, веществом, в эксперименте наиболее полно имитирующем патофизиологическою картину бронхиальной астмы при внутривенном и внутритканевом введении (включая гиперреактивность , воспаление и отсроченный бронхоспазм), является фактор активации тромбоцитов (ФАТ) с соавт., 1ЭсГ7). Действие этого фактора на легочную ткань опосредуется в значительной степени другими медиаторами с соавт., 1979; У^хъ^а^ЛС^ с соавт. ,1980; 'ТТЬг'Жлт^ с соавт., 1985.), в частности лейкотриенами.

Существуют лишь единичные исследования, касающиеся высвобождения ФАТ у человека ( ^¿¿-/гг^^м с соавт.,1987; '^■я^гЛ^'С с соавт., 1985). До настоящего времени отсутствуют данные о влиянии ФАТ на высвобождение лейкотриенов из лейкоцитов периферической крови больных бронхиальной астмой, о взаимосвязи прямой дегрануляции базофилов, первично вовлекаемых в опосредованный ответ на аллерген, и высвобождением липидных медиаторов клетками, участвующими в аллергической реакции.

Открытие новых липидных медиаторов аллергии поставило ряд.новых, проблем в клинике, в частности, это оценка их диагностического значения и поиск лекарственных препаратов, подавляющих синтез или действие этих медиаторов.

- С-

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы является разработка новых методов диагностики специфической сенсибилизации 'ит. и оценки эффективности различных фармакологических средств, используемых при лечении атопической бронхиальной астмы.

ЗАДАЧИ РАБОТЫ.

1. Исслздовать уровень высвобождения из лейкоцитов периферической крови лейкотриенов (ЛТ) и фактора активации тромбоцитов (ФАТ) под воздействием аллергена у детей, страдающих атопической бронхиальной астмой.

2. Установить значение фактора активации тромбоцитов как промотора высвобождения ЛТ из лейкоцитов периферической крови.

3. Сопоставить зависимость результатов кохного тестирования и прямой дегрануляцил базофилов (ц^Ь) от способности лейкоцитов к высвобождению гистамина и лейкотриенов под воздействием аллергена в условиях специфической сенсибилизации.

4. Разработать новые методы лабораторного контроля за проводимой терапией (зуфиллин, интал, кортикостероиды и новый мембраностабилизирующий препарат- димефосфон ) при атопической бронхиальной астме у детей.

Работа выполнялась в отделе пульмонологии (руководитель-доктор медицинских наук, профессор - С.Ю.Каганов) и в лаборатории клинической мембранологии (руководитель - доктор медицинских наук О.Б.Святкина) Московского научно-исследовательского института педиатрии и детской хирургии Минздрава.РСФСР (директор- академик АМН СССР, заслуженный деятель науки РСФСР, профессор Ю.й.Вельтищев).

Научная новизна. Впервые при атопической бронхиальной

астме у детей доказана тесная корреляции прямой дегрануляцйи базофилов с уровнем высвоб. яденкя гистамина и лейкотриенов из лейкоцитов периферической крови под воздействием причин-нозначимых аллергенов m irvt"\и? .

Впервые выявлена способность лейкоцитов периферич _ гкой крови детей с ат^ ..ичзской бронхиальной астмой к высвобождению SiT под воздействием прит,иннозьачимого аллергена. Доказано непосредственное влияние ФАТ на высвобождение лейкотриенов из лейкоцит j периферической крог;. Обосновывается гипотеза опосредованной активации высвобождения лейкотриенов при связывании комплекса аллерген-реагин с мембранами клеток-мишеней. На основании получзнных данных в качестве биологически активного соединения-посредк-ка выступает фактор активации тромбоцитоз.

Обнаружена прямая зависимость опосредованного SAT синтеза лейкотриенов от тяжести бронхиальной acm._j.

Показано, что прямая дегрануляция базофилов и высвобождение лейкотриенов под воздействием специфического аллергена могут использоваться как дополнительные критерии для оценки эффективности проводимого лечения и изучении механизма' действия лекарственных препаратов, в частности мембраностабилизи-рующего действия.

Практическая значимость. Предложен новый ■ микрометод определения vn. fgifcisO специфической сенсибилизации и ее количественного выражения у детей с атопической бронхиальной астмой (прямая дегрануляция базофилов). Метод прост не требует лабораторных животных и специальной аппаратуры и позволяет обследовать больного в любом периоде заболевания.

Для клинических условий предлагается исследовать высвобождение ФАТ под воздействием причинксзнамкмрго аллергена и лейкотриенов под влиянием ФАТ из лейкоцитов больных атонической бронхиальной астмой.

Реализация результатов исследования. Практические рекомендации, изложенные в диссертации, используются в клинике пульмонологии Московское у каучно-исслгдовательского институт." педиатрии и детзксй хирургии Минздрава РСФСР, в республиканском санатории для детей с заболеваниями органов дыхания "Отдых", в санатории " Г о л;-бак волна".

Результаты работы эксонирозаяксь ка ДДЬХ СССР (19ОС.), защищены I залг::ой на изобретение и I рацпредложением отраслевого значения. Материалы работы изложены и обсуждены в С докладах на научно-практически:-: конференции.

Объём и структура работа. Диссертация изложена ка страницах машинописного текста и включает следующие разделы: введение, об ор литературы, главы ссЗстзешшх наблюдений и нсследованк,., заключение, выводы, практические рекомендации и указатель литературы. Работа иллпетрарована рисунками, таблицами, выписками из истории болезни. Указатель лите~ ратуры содержит источника, из кдх отечественных - , ■ иностранных -

СОДьРКАШ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МьТОДЫ ЖСВДОВАЫЙ.

Под нашим наблюдением находилось 24о детей в вощрасте от 2 до 14 лет , больных атопической бронхиальной астмой. Среди больных было 162 (65,8?) мальчиков и 84 (34,25?) девочки. Кроме того, обследован 31 здоровый ребенок того же возраста без признаков воспаления , с неотягощенным ал-лергологическим анамнезом.

Тяжелая бронхиальная астма была у 95 больных, средне-тяжелая у 134, легкая - у 14. У II детей атопическая бронхиальная астма сочеталась с нейродермитом, у 34- с поллинозом

При диагностике и определении форм и тяжести заболевания использовали общепринятый комплекс клинических методов исследования, включающий сбор анамнеза, наблюдение больных в динамике заболевания, рентгенологические и лабораторные исследования.

Определение прямой дегрануляции базофилов проводили в микроколичествах (0,5-0,8 мл) гепаринизированной крови, взятой из пальца, модифицированным методом (Погомий H.H. Святкина О.Ь.,1985 ) с применением сухого ал -лергена из домашней пыли производства Московского НИЛ вакцин и сывороток им.И.И. Сеченова, сухих аллергенов ежи, полыни и березы Ставропольского ШИ вакцин и сывороток. Показатель прямой дегрануляции базофилов выражался в процентах, при этом принималось, что колебания величин от 0 до 30% соответствуют спонтанной дегрануляции в контрольных пробах ( '

1дИ).

Лейкотриены исследовали в надосадочной жидкости лейкоцитов. Лейкоциты периферической крови выделяли с исполь- • зованием 10/£ раствора желатины после инкубации их со специфическим аллергеном или I ШШ ФАТ " " США или производства лаборатории химии и технологии биологически активных соединений ШГХТ им. Ломоносова М.В. Спектр и количество ЛТ определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, при градиентном делении на колонках

с соавт., 1963г.).

ФАТ, экстрагированный из плазмы и из надосадочной жидкости лейкоцитов после инкубации их с причиннозначнмым аллергеном, определяли методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на колонке & по методу {1985).

Количественное определение гистамина проводили по с соавт. (1979). Высврбоздение гистамина оценивали в процентах к общему содержанию в 3 X 10° клеток.

Результаты проведенных исследований анализировали в зависимости от периода и тяжести бронхиальной астмы и статистически обрабатывали с вычислением величины средней ошибки. Коэффициенты корреляции при сравнении двух рядов, а также достоверности различия одноименных показателей вычисляли по формулам параметрической вариационной статистики с использованием критерия Стъюдента (В.Ю^Урбах, 1975).

РЕЗУЛЬТАТЫ 1ЕСВД0ВАНЩ И ИХ СБСУВДЬЖЕ. .

Определение прямой дегрануляции базофилов (ЦДБ) до назначения медикаментозной терапии или в первые дни лечения проводили у 149 детей, в возрасте от 15 до 14 лет, больных

атопической бронхиальной астмой. Тяжелая бронхиальная астма была у 44, среднетяжелид- у 91, легкая - у 14 детей.

При обследованич здорогчх .г-тей и больных бронхиальной ' астмой с отрицательными аллергологчческими гожными пробами обнар^ены колебания прямой дегрануляции базофилов от 1,о до 27%. Средний уровень прямой де. рануляции бчзофилов у здоровых детей соответствовал - 0,6$ (И- - 14), что ■ соответст-овало показателю спонтанной деграну^яц!.1.

У детей, сенсибилизированных к аллергену домашней шли ( коздые пробы от + до ++++), показатель колебался в пределах от 42 до 00%. Процент дегрануляции базофилов у больных бронхиальной астмой с различными резульгатени ска-рификг-дионкых кожных проб с аллергеном из домашней шли представлен в таблице I. '

Таблица I.

\

Сопоставление результатов кокного тестирования и прямой дегрануляции базофилов с аллергеном из домашней шли у детей при атопической бронхиальной астме.

Выраженность скариф::-ках^онкых проб Число обследованных всего :по группам процент дегрануляции базофилов

' 13 11,1 ± 1,3

8Э 67,9 ± 2,3

+ 16 59, «з — £ ,7

++ 34 65,9 ± 1,9

+-Н- 28 71,8 ± 1,7

пн II 77,3 ± 2,4

Полученные данные свидетельствуют об определенной степени корреляции результатов кожного тестирования и показателей

ЦДЬ ( прямой дегрануляции базофилон), которая мояет быть определена у всех больных детей, независимо от периода болезни и тяжести состояния.

Обнаружено, что величин^. прямой дегрануляции баэофилов не зависит от степени тяжести и периода заболевания. На это указывает анализ показателей в группе детей с одинаковой степенью сенсибилизации к аллергену из домашней пыли, соответствующий ++ (таблица 2).

Таблица 2.

Изменение прямой дегрануляции базофилов в зависимости от тяжести и периода атопичес-кой бронхиальной астмы у детей.

Тяжесть заболевания ' Период заболевания

тяжелое среднетяжелое приступныи межприступный

65,2 ±2,5 «■ = 13 65,7 ± 2,7 П = 21 63,1 ± 2,1 И. = II 66,9 ± 2,6 К - 22

р>0,5 Р> 0,2

У 65 детей определяли прямую дегрануляцига.базофилов с пыльцевыми аллергенами березы, ежи и полыни, у 34 детей этой группы бронхиальная астма сочеталась с поллинозом. Уровень прямой дегрануляции базофилов с пыльцевыми аллергенами колебался от 44,7 до 85,и соответствовал степени сенсибилизации организма, определяемой по выраженности кохных проб (от + до -Н-Н-), причем результаты ЦЦБ достоверно не' отличались в группах с одинаковой сенсибилизацией к пыльцевым аллергенам И к аллергену домашней пыли.

При сравнении показателей прямой дегрануляции базофи-

лов (от 34,9 до 8Т,е$) и уровня высвобождения гистамина кз лейкоцитов (от 15,4% до j3,3 %) под воздействием аллергенов выявлена отчетливая положиф«*льная корреляция ( = 0,85; р<о,о1, к = ю:.

Таким обргзом, прямая дегрянуляция базофилов является чувствительным методом определения -пециф/ческ^й сенсибилизации больше, бронхиально.: астмой, ..освенно отражающим и уровень высвобождения гистамина под воздействием аллсрг на.

Для исследования взаимосвязи прямой дегрануляции базофилов (ЦЦБ) и высвобождения JIT из лейкоцитов "или обследованы 20 детей, больных атопической бронхиальной астмой. Из них 10 детей были обследованы в приступив, 10 больных - г меж-приступном периоде заболевания. Тяжел-ая бронхиальная астма была у 13, среднетяжелая - у 7 детей.

При воздействии Intptio аллергена чиз дом'шней шли на лейкоциты детей этой группы общее количество ЛТ колебалось от 0,4 до 6,15 нг, показатель ВДВ - от 53,4 до 76,7 %. При этом у всех больных обнаруживалось высвобождение ЛТС^ , у 7 больных - ЛТВ^, у 7 больных - JITK4, ЛЗД^ высвобождался у большинства борных в приступном периоде (1,42 - 0,43 нг , Я- = w). Ни у одного' больного в межприитупном периоде (Л- = 10) высвобождения ЛЗД^ не было.

У детей в контрольной группе ( И, = 10), высвобождения ЛТ из лейкоцитов под воздействием аллергена не обнаружено.

При сравне-ии общего количества высвобождаемых ЛТ у больных и величины показателей ДцБ выявлялась отчетливая положительная корреляция ( t- « 0,71, р^С 0,001).

Не было обнаружено разницы в суммарном высвобождении

лейкотр'ие№,,з в зависимосл.» от степени тяжести заболевания л у больных в приступком (3,03 - С,6 нг ; уи л 1С) и меятриступном (2,37 - 0,71 кг ) периоде заболевания. Однако, следует подчеркнуть, что приступном периоде атонической бронхиальной астмы обнаружено высвобождение ЛВД^, оказывающего максимальное бронхоспастичеикоз дейстаиа ¿Рл^иьъ 1985г.),

Так:ж обра;,.ы , воздействие лричинкозкачикого аллерг на на лейкоциты больных атипической бронхиальной аптмой ¡вызывает высвобождение лейкотриенов, количество которых четко коррелирует с величиной показателя пгтмой дегрануляции баг>офигов. Заметим здесь, что ОкьгиЛь^т, с соавт.(1936 ) при ис-сдедовании уг^стия различных клеток периферической крови р 1с|Е - ответе показали, что шмунореактивный ЛТС^ продуцн-руется только базофилами. Основной же источник :->того медиатора - зозинофилы ( ^-йлГ с СОавт., 1904; 'I.ругл"й Б.И., 1985)- привлекаются в очяг аллергического воспаления СИ'ГЛс/-¿ЙЛ1Г елк/ 1987) и высвобождаю? пептидосодеркаг,;ие

дейкотр^ны с ссазт., 1935),' вероятно,

после их активации ФАТ.

Количество ЛТ, высвобождаемого лейкоцитами под воздействием аллергена, как к йначежя показателя прл»-"1-! деграну-ляции базофилоа, не зависят от тяжести и периода заболевания, однако во время приступов спектр лейкотриенов обогащен

ДД4. .

Исследозаане чысаобрздсчия лейксцетоци ФАТ под ссздеЪ:-теисм аллергена из доматаей пыли 1п проводилось •

14 болы п- атепкческой бронхиальной астмой и 7 де-: Л конт

рольной группы. Обнаружено, что у детей контрольной группы а также у больных бронхиальной астмой , имевших отрицательные кожные пробы и показатель прямой дегрануляции базофилов

ниже 30%> высвобождения ФАТ в этих условиях не регистриро-

гу

валось. Воздействие же аллергена на лейкоциты (10 ) периферической крови сенсибилизированных больных приводило к высвобождению ФАТ, количество которого в значительных пределах - от 3,45 нг до 1,254 мкг, в среднем 221,29-109,74 нг ( п * 12). Корреляции количества высвобождаемого лейкоцитами ФАТ с показателями прямой дегрануляции базофилов не было обнаружено. Известно, что синтез и высвобождение ФАТ осуществляется человеческими моноцитами, полиморфноядерными нейтрофилами, эозинофилами и базофилами (.С-ати^И* с т., 1981 ; "Сауги>п с соавт.,1967). Вероятно, базофилы не являются единственными клетками, синтезирующими ФАТ при -ответе, поэтому высвобождение ФАТ из лейкоцитов при -ответе не коррел1фует с ЦЦЬ.

При сравнении величины выхода ФАТ из лейкоцитов под воздействием аллергена. т пЬк> у детей в приступом и межприступном периоде заболевания существенной разницы не выявлено (р > 0,5).

При определении количества высвобождаемого лейкоцитами ФАТ у больных с различным течением заболевания выявлена тенденция к повышению высвобождения этого медиатора у детей при тяжелой атопической бронхиальной астме по сравнения с таковым у детей со среднетяжелой астмой. Это может свидетельствовать как о повышении клеточной реактивности, так и о вовлечении дополнительных пулов клеток в антигенный

ответ при тяжелой форме заболевания. SAT, согласно исследованиям ^Цгъс-tsi&'&t-L с соавт. (1938), даже в низких концентрациях способен увеличивать число полкморф-

ноядерных лейкоцитов, отвечающих на антигенную стимуляцию.

У детей, больных бронхиальной астмой, ФАТ определялся не только в сулернатанте инкубированных с аллергеном клеток, но и иногда обнаруживался в существенных количествах в плазме крови в приступном периоде заболевания. Показано, что ФАТ связывается с рецепторами клеток для реализации специфического биологического эффекта и поступает внутрь клетки ( 9/wa^u^. , 1983; a-tkt с i'an-^т., 1986). Кроме .

того , ФАТ и лизо-ФАТ могут локально взаимодествовать в мембране, вызывая увеличение ее текучести и модулируя функцию мембранных рецепторов( е иоп.-1тп}\^(х>\ divert с. и^пЛтп^ 1937). Возможно, именно воздействие этого медиатора на цитоплазматическую мембрану приводит к изменению клеточной реактивности ( Ij^v'c&fiicsfct-t с .соавт., 1988).

Таким образом , у детей с атопической'бронхиальной астмой при воздействии специфичкскими аллергенами происходит высвобождение ФАТ из лейкоцитов. Увеличение содержания ФАТ у тяжелых больных свидетельствует о том, что ФАТ принимает непосредственное участие в формировании патофизиологических изменений при бронхоспазме.

Учитывая, что действие ФАТ, в частности на бронхоле-гочные пути опосредуется лейкотриенами, нами было проведено определение влияния этого медиатора на уровень высвобождения ЛТ из лейкоцитов в обследуемых группах детей.

Было обследовано 17 детей, больных атопическойброн-

хиал'-ной нстиой и 7 детей контрольной группы, не имевших воспалительной патологии.

У больных атонической бронхиальной астмой воздействие синтетического ФАТ на лейкоциты ¿г. пп/Ьхо приводило к высвобождению ~ТСЛ ( у 72) и ЛТЬ4 ( у'5 детей). ¿редкий уровень ЛТС^ вцелом г.о группе составил 14,47 - 3,94 нг, 1Т34 - 3,13 £ 1,53 нг. При этом урогень ЛТО, был достоверно выше в супернатакг-е лейкоцитов больных с тяжелой бронхиальной гстмои - в средне:.'. 26,С - 6,6 нг , по сравнению с 7,85 - 3,93 нг у больных со среднетякелой форь^й заболевания. {р<0,СС). Количество суммарных ЛТС^ и ЛТ, высвобождаемых пс,1; воздействием ФАТ, не зависит от периода бронхиальной астмы.

Под воздействием синтетического ФАТ у детей контрольной группы высеос кдения лейкотпиенов из лейкоцитов периферической крови обнаружено не было.

Количество Т1Т, высвобождающихся при стимуляции лейкоцитоз £АТ, было достоверно выше, чем при стимуляции аллергенами (р-¿.0,001). Это может быть сьязано с тем, .что высвобождение ЛТ под действием аллергенов происходит в основном из ббзефшюп, тогда как ФАТ вызывает шунтирование метабол"з-ма арахидоновой кислоты по липоксигеназному пути в общем пуле лейкоцитов с со^вт.,1983.,

с соавт.,1986).

"йга;: , воздействие ФАТ на лейкоциты периферичечой кроы; больных бронхиальной ас-шо£ приводит к мсвобождснию лойкотриенов, при этом количество ЛТС^ достоверно выше-у детей с тяжелой формой заболевания. Выявленное высвОбож-

дение ФАТ из лейкоцитов периферической крови под действием аллергена, а также выход лептидссодержащих дейкетриеноз под воздействием са?лого ФАТ свидетельствует о важнейшем патогене-тиче.ком значении этого липидчого медиатора з механизме развития бронхиальной астмы у детей.

Определение показателя прямой'дегрануляцлк базофилов (ДЦЕ) проводилось у детей, больных атопической бронхиальной астмой, при использовании различных терапевтических средств. При лечении эуфиллином, кортикостероидкл...! горысна»,ш и д:я/.е-фосфоном определяли также уровень высвобождения IT под воздействием аллергена.

Обнаружено, что прга/енение эуфиллкна в дозе 10-20 :лк/кг массы тела в течение 2-6 недель приводило к снижению прямой дегрануляции базофилов: показатель ВДВ у детей этой группы достоверно отличался от такового у больных атонической бронхиальной астмой, не получавших этого препарата (соответственно в среднем 60,2 ± 2,% и 71,8 ± 1,7$,-(р 0,001). При определении высвобождения (под действием специфического аллергена in пЛ$и>) ЛТСц у детей, получавших эуфиялин в течение 4 недель, обнаружено некоторое снижение высвобождения этого медиатора (2,58 - 1,22 нг) по сравнению с таковым у детей, не лечившихся эуфиллином (2,75 - 1,27 нг).

Значительный интерес представляют данные, касающиеся показателей прямой дегрануляции базсфилов у детей (tt = !?)> которым в связи с тяжестью бронхиальной гстш были назначены глюкокортикоиднне гормоны.

У 17 детей, обследованных во время лечения преднизолоном внутримышечно (1-2 мг на кг массы тела в сутки"), показатель

ПДГ. составил 4Ь,7 £ 6,356, достоверно отличаясь от средних показателей 1ЩБ у детей, клавших аналогичную по выраженности сенсибилизацию к аллергену из домашней пыли (67,9-2,3$ , р 0,001).

При лечении преднизолоном внутрь (0,Ь -1,0 мк/кг массы тела в сутки) было обследовано 10 детей до и после назначения гормонотерапии. Назначение кортикостероидов № приводило к выраженной положительной клинической динамике и снижению реактивности базофилов до уровня показателей в группе несенсибилизированных больных ( с 63,2 + 4,3л до 11,9 - 2,4% , р*0,001). Причем ВДВ была также достоверно ниже, чем у детей, получавших преднизолон внутримышечно (р «С 0,001).

!Аенее выраженный эффект от глюкокортикоидов при внутримышечном введении может быть связан как с различной фарма-кокинетикой препарата в зависимости от способа введения, так и с недостаточной экспозицией гормона с клеткой-мишенью, в связи с его быстрой элиминацией при парентеральном введении,

У 7 детей, получавших преднизолон внутрь, проводилось определение высвобождения лейкотриенов под воздействием аллергена. Оказалось, что лейкотриены в супернатанте инку- ' бированных клеток не обнаруживались.

Таким образом, клинический эффект кортикостероидных препаратов очевидно связан не только с активацией аденилат-циклазы, повышением уровня цАИФ и супрессорной активности лимфоцитов , но

и со стабилизацией мембран клеток- мишеней и торможением синтеза и высвобождения ЛТ. Такой эффект кортикостероидных

(1973г.) связывает с взаимодействием этих соединений с фосфолипидными структурами мембран. йкгибиция синтеза и высвобождения липидных медиаторов аллергии глюко-кортгкоидаии происходит также в результате образования в клетке белков типа липомодулина, понижающих активность . фосфолипазы ( с'соавт., 1-ЗОг.).

Под нашим наблюдением находилось 34 ребеРжа, больных тяжелой (7) и среднетяжелой атонической бронхиальной астмой, в терапии которых использовался димефосфон (15 ^раствор по 10-15 мл (75-100 мл/ кг ;зса) 3 раза а день в течение 4 недель). У II больных бронхиальная астма сочеталась с г.оллинозом, у 5 детей наблюдались явления нейродермита. Только димефосфон получали 22 ребенка, 12 детей получали препарат одновременна с эуфиллкнсм.

Назначение димефосфона приводило к прекращению или уре-зхенига приступов затрудненного дыхания, наблюдалось улучшение вентиляционной функции легких. При сочетании бронхиальной астмы и поллиноза назначение препарата предотвращало развитие типичных сезонных проявлений.

Назначение димефосфона больным вызывало торможение примой дегрануляции базофилов уже на первой неделе лечения. Однако, у 7 детей с тягхелой бронхиальной астмой сохранялись приступы удушья и снижение прямой дегрануляции базсфилов было незначительным. Увеличение дозы препарата в пределах рекомендуемой инструкциями <5армадологического комитета МЗ СССР (1971) уже через три дня приводило к снижению показателя ВДБ до 30% и ниже. Применений димефосфона влечение 2 недель вызывало снижение показателя ЦЦЬ при воздействии

аллергеном домашней пыли с 64,0 ± 1,7% до 21,0 ~ 1,Ь% , а на 3-4 неделе после назначения до 14,0 - 0,8? .

Аналогичное снижение показателя прямой дегранулядии базофилов было выявлено при назначении димефосфона детям с атопической бронхиальной астмой и поллинозом при использовании т 1п£ю аллергена пыльцы ежи ( 1Ъ = 9).

У £>-ти детей этой группы, сенсибилизированных к аллергену из домашней пыли, исследовали высвобождение ЛТ из лейкоцитов под действием причикнозначимого аллергена . И если исходный уровень этого медиатора составлял 2,Ь2±0,3? нг, то после лечения димефосфоном (в течение 4 недель) ЛТ в супернатанте стимулированных клеток не определялись.

Этот эффект димефосфона связан с его действием на фос-.фолипидный состав и текучесть цитоплазматических мембран, что приводит к торможению синтеза липидных медиаторов и изменению рецепции клетки ( Святкина О.Б., 1987).

Таким образом, назначение димефосфона приводило к сни-яению реактивности базофилов независимо от вида аллергена и торможению высвобождения ЛТ из лейкоцитов. Снижение уровня прямой дегрануляции базофилов зависит от дозы препарата и может служить методом лабораторного анализа, контроля определения эффективной дозы димефосфона.

Итак, в результате проведенных исследований установлено, что ВДВ является чувствительным методом специфической диагностики , косвенно отражающим высвобождение гистамина и лейкотриенов из лейкоцитов .под действием аллергена.

Выявлена способность лейкоцитов больных атопической бронхиальной;астмой высвобождать ФАТ под воздействием ал-

лергена и лейкотриены под воздействием экзогенного ФАТ. Причем у больных с тяжелой бронхиальной астмой высвобождение ЛТС^ под воздействием ФАТ выше, чем у больных со среднетяжелой формой заболевания.

В результате проведенной работы установлено, что прямая дегрануляция базофилов и высвобождение лейкотрие-нов под воздействием специфического аллергена объективно отражают э^ективность проводимой терапии у больных ато-пической бронхиальной астмой.

ВЫВОДЫ.

I.Атопичёская бронхиальная астма у детей характеризуется способностью лейкоцитов периферической крови к высвобождению липидных медиаторов аллергии (лейкотриенов и фактора активации тромбоцитов), дегракуляцией базофилов под воздействием причиннозначимого аллергена. При этом уровень прямой дегранудяции базофилов зависит от степени сенсибилизации организма и тесно коррелирует с количеством высвобождаемых лейкотриенов и гистамина.

¿.Воздействие 2АТ ¿га лейкоциты периферической крови детей с атопической бронхиальной астмой приводит к высвобождению лейкотриена С^ я а некоторых случаях В^, причем количество ЛТС^ достоверно вкпе у больных с тяжелым течением болезни. Доказано значение фактора активации тромбоцитов как стимулятора высвобождения лейкотриенов из лейкоцитов, что имеет существенное патогенетическое значение при бронхиальной астме у детей.

ЗЛивмбраностабилизирующие препараты , применявшиеся у детей больных атопической бронхиальной астмой (глкко-

кортккондкые ггрмоны), димефосфон на фоне общего улучшения клинического состояния больных приводили к 1гпнс¡.¡у торможению показателя прямей дегрануляции базофилов и высвобождения ЛТ из лейкоцитов под воздействием аллергена.

1ШАКТШг£КИЫ РиКОЬЛйВДкЩИ.

1 I. Определение прямой дегрануляции бг-зофилов может служить дополнительным методом диагностики специфической сенсибилизации иг 1п^ло , отражающим процесс высвобождения гостамина и лейкотриенов под воздействием аллергена. Это исследование может быть проведено в микроколичествах крови и во все периоды заболевания.

2. Определение прямой дегрануляции базофилов и высвобождения ЛТ под воздействием аллергена могут служить дополнительным критерием оценки эффективности проводимого лечения и использоваться для оценки еффективности новых противоаллергических лекарственных препаратов.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАШаХ ЛО'-ШЛд ДЖ^РТАЦЖ

1. Структурно-функциональные изменения плазматических мембран лейкоцитов и лимфоцитов у детэй с атопической бронхиальной астмой// Кат. УН симпозиума педиатров социалистических стран по поблемам пульмонологии. - Москва, 1951. - C.I0C-101 (в соавт. со Сзяткиной О.Б., Тулуевской Л.М., Ьагла-евкм Т.Н., Ардашниковой С.Н., Окатьевым B.C.).

2. Лабораторная диагностика повреждения цитомембран у детей// Методические рекомендации. - Москва, 1983. - С. 1-22 (в соавт. с Юрьевой Э.А., Казанской И.В., Пуховской Н.В., Верещагиной В.М., Смирновым A.B., Алексеевой Н.В., Гаса-новкм М.Д., Мусаевым М.-Я.А., Чакветадзе С.С., ЫалашиноЯ O.A., Варсанович ¿.А., Зацепиной С.К., Дайхиккм ¿.И., . Тулуевской Л.М., Воздвиженской ¿'.С., Сугоняевой В.Т.)

3. Изменение липидных структур мембран лейкоцитов при атопической бронхиальной астме у детей// Педиатрия. - 1983.- ■ №12. - С.15-19 (в соавт. со Сзяткиной О.Б., Тулуевской Л. М., Ардашниковой С.Н., Окатьевым B.C., Вельтицевым Ю-а.).

4. Модификация теста дегрануляции базо^илоЕ для определения сенсибилизации к аллергенам домашней пыли// Лабор. дело.-№12.- С.732-734. (в соавт. со Святкиной О.Б.)

5. Метод прямой дегрануляции базофилов для определения сенсибилизации к пылевым аллергенам// "Современные методы диагностики в педиатрии". Сб. научн. трудов. - Москва, 138Ь. - С.159-162 (в соавт. со Святкиной О.Б.).

6. Определение антиген-специфической супрессии (АСС) у де- ■ тей с атопической бронхиальной астмой в процессе специфической гилосенсибилизации// Тез. докл. Всесоюзной конфе-

ренции. - Москва, 1985. - С.144-145 (в соавт. с Сараево К.Б.).

7. Изменение высвобождиния лейкотриенов из лейкоцитов детей с атопической бронхиальной астмой// Кед. реф. журн.-1ЭсЪ. - №. - Разд.а. - Публ. 977 (Рукопись - 2с. - Деп. во Bhilvilyl AlViH СССР, 27.0o.8p, ВД-Ю328) (в соавт. с Круглом Б.И.).

8. Исследование высвобождения лейкотриенов из лейкоцитов// "Синтез и исследование простагландинов" Тез. Всесоязн.

симпозиума с между народам участием. - Таллин, Я986. -С. 133 (в соавт. со Святкиной О.Б., Круглым Ь.И., Вель-тивовым Ю:^.).

9. Исследование высвобождения лейкотриенов из лейкоцитов

у детей с атопической бронхиальной астмой// Тезисы докл. областной научно-практической конференции. - Орёл, 1987. C.I5I-Ib2 (в соавт. со Святкиной О.Б., Круглым Б.И.). 10. Использование димефосфона для лечения бронхиальной астмы у детей// "Теоретическая медицина и педиатрическая практика". Сб. научн. трудов. - Москва, I9№. - C.I23-14о (в соавт. со Святкиной 0.Б., Круглым Б.И., Несте-ренко В.И., Тулуевской Л,М.). Я1. Новые методы диагностики и лечения аллергических заболеваний у детей// "Педиатрическая наука - практическому . здравоохранению". Сб. научн. трудов. - Москва, 1987. -С.123-146 (в соавт. со Святкиной О.Б., Круглым Б.И., Вельтищевым Ю.£.). 12. Исследование высвобождения лейкотриенов из лейкоцитов у детей при атопических состояниях// Иммунология. - 1987. №3. - С.51-53 (в соавт. со Святкиной О.В., Круглым Б.И.,

Кагановым С.С., Вельтищевми 10.л.).

3. Лечение димефосфоном атопическол бронхиальной астмы у детей 2 условиях стационара и санатория// "Реабилитация иммунной системы". Тезисы I Всесоюзного симпозиума. -Цхалтубо, 1986. - C.I2u (в соавт. со Саяткккой O.E., Круглым Ь.'Л., ТулуевскоЯ Л.ы., 'Басовой л.Н., Гусейновы;/. А.Т., Догель Н.э.).