Автореферат и диссертация по медицине (14.00.40) на тему:Клинико-морфологическая диагностика рака мочевого пузыря с использованием опухолевых маркеров

КИЕВСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ

^ ^ " УРОЛОГИИ И НЕФРОЛОГИИ

На правах рукописи САФВАТ САБРИ АВДЗЛЬ ШЛАК

КЛИНИНО-МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГН0СГИ1М РАМ МОЧЕВОГО ПУЗЫРЯ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ОПУХОЛЕВЫХ МАРКЕРОВ

14.00.40 - урология

Авгорефера г диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Киев - 199Г

Работа вкполнена в ¡{невском научно-исследовательском институте урологии и нефрологии МЗ УССР.

Научные руководители: академик АН УССР, доктор медицинских наук, профессор А.Ф.Воэианов.

доктор медицинских наук, профессор А.М.Романенко

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор В.Н.Блаподаров доктор медицинских наук И.А.Клименко

Ведущая организация -Московский областной научно-исследовательский клинический институт им.М.Ф.Владимирского.

Защита состоится " " О 1991г. в " )3 "часов на заседании специализированного совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата медицинских наук в Киевской научно-исследовательском институте уроло- \ гии и нефрологии по адресу: 254053,г.Киев,ул.Ю.Коцюбинского' д. 9-а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан "" О ¡4 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

Н.И.Бойко

■'1 • Актуальность проблемы. Рак мочевого пузыря, развившийся

а

¡_ ¡с фоне шистосомоза, является одной из наиболее распространеНных причин смерти в Египта /НазЬеш м. ,ot в1., 1961! е1-' Ъо1ка1пу м. еЪ а1., 198У. Однако только в последние годы интерес к данной проблеме достиг достаточно высокого уровня, приближающегося к ее социальной и экономической значимости / 25аЬгап М. 'еЪ а1., 1973) С111еуаг А. еЪ а1., Л97в/• Высокой заболеваемость раком мочевого пузыря (7С^) среди урологических больных в Египте обусловлена, как известно, его связью с шистосомозом. Несмотря на недостаточно изученный механизм действия этиологического фактора и патогенез заболевания, уже более 20 лет известна четкая корреляция между эндемичво-стью возбудителя БсЫз^аоша Ьота1;оЪ1ии , широким распространением мочеполового бильгарциоза и частотой рака мочевого пузыря / йНоаэ1т м. et а1., 197^ /• Хронический шистосо-моз мочевого пузыря обычно осложняется пролиферативными и метапластическими изменениями уротелия с последующим развитием преимущественно плоскоклеточного рака / Е1Ьо1ка1ду ы.(вк а1., 1981/.

Бильгарцио&ный рак мочевого пузыря встречается главным образом у мужчин, занятых сельскохозяйственным трудом, пик его распространения приходится на 5-й десяток лет жизни / аЬопа1в И. et а1.,1974-/. Сравнивая с особенностями рака мочевого пузыря в. Европе и, в частности, в СССР, следует отметить, что здесь он чаще всего встречается в возрасте 65 лет, представлен переходноклеточным раком и является наиболее распространенной формой рака мочеполовых органов, который обнаруживается чаще всего среди населения ивдустрияльньгх

стрян /Mostofi F,,1975/.

Кик известно, рек мочевого пузыря независимо от этиологии является мультицентрическим новообразованием, которое может быть представлено двумя группами опухолей /Javad-pour N.,193^. Первая груша объединяет поверхностные неинва-эивные опухоли низкой степени злокачественности, которые могут -эффективно устраняться с помощью консервативной терапии, такой как эндоскопическая резекиия, интравезеквльная химиотерапия или иммунотерапия /Кгименко И.A., I987;Moatofl Р., 1975» Irwin R. et al., 1989 /. Вторая группа включает инва-зивннй рак мочевого пузыря, т.е. наиболее агрессивные и злокачественные опухоли, которые часто метастазируюг и имеют относительно неблагоприятный прогноз ! David. F. et al.,1984- /• Они требуют интенсивного лечения> ограничивают возможности выживания и снижают продолжительность жизни пациента. Важнейшей проблемой диагностики и лечения рака мочевого пузыря является клиническая дилемма распознавания этих двух групп и планирование адекватного специфического лечения с целыо избежания недостаточной или избыточной терапии /Menengsг М. et al., 1986; Irwin к. et al., 1989 /. Вместе с тем клинические исследования, включающие компьютерную томографию, ядерный магнитный резонанс, цитологические исследования, у многих пациентов не позволяют установить различия мещцу данными группами /Javadpour N., 1984j Teitz W. et al., 1986/.

Особенно это касается ранних стадий явне неинвазивного рака мочевого пузыря низвой степени злокачественности /David F. et al.,1984/, Поэтому проблема разработки реально воспроизводимых и неинвазивных тестов для выявления и диф-

ференциальной диагностики этих групп гетерогенных опухолей мочевого пузыря является весьма актуальной. Несмотря ня обширную литературу по проблеме диагностики и лечения рака мочевого пузыря, до настоящего времени отсутствуют объективные критерии, позволяющие дифференцировать степень малигнизаиии однородных по своему гистологическому строению опуходей, а также судить об их биологической потенции в плане склонности к инвазивному росту.

Цель .исследование. Разработать клинико-морфологические дифференциально-диагностические критерии с использованием опухолевых маркеров для определения степени инвазивности и других особенностей опухолевой прогрессии бильгарциозных и небильгарциозных опухолей мочевого пузыря.

Задачи исследования.

1. Выяснить эффективность применения внутривенной уро-графии, цитоскопии и ультразвуковой эхографии для диагностики бильгарциозного и небильгарциозного рака мочевого пузыря.

2. Разработать морфологические, я также новые иммунопатологические критерии бильгарциозных неопухолевых предраковых заболеваний и рака мочевого пузыря путем выявления имму-нореантивности цитокерагинов с применением моноклоняльных антител, полученных во Франции д-ром G.Serré /1966/.

3. Определить при помощи световой и электронной микроскопии изменения в свойствах и количестве протеинов ядршковых организаторов ( AgNoEa ) при пролиферативном цистите, неин-вазивном и инвазивном переходноклеточном раке мочевого пузыря.

Практическая. ценность. Впервые проводится сопоставительный анализ бильгарциозного и небильгарциозного рака мочевого пудыря с анализом клинического течения заболевания и разработкой ранних диагностических критериев (УЗН, экскреторная урогряфия, цистоскопия).

Впервые выделяются наиболее информативные иммуногистохи-мические критерии с использовчнием моноклонвльных антител к цитокерптиням плоскоклеточной дифф>еренцировки, позволяющие судить о степени агрессивности бильгпрциозного рака мочевого пузыря. Разработаны новые критерии оценки потенциальной склонности к инвпзивному росту переходноклеточного рака мочевого пузыря путем использования опухолевого маркера д^ой протеина.

Нлучцяя^новизна^ Впервые изучены ранние стадии злокачественной трансформации эпителия мочевого пузыря, пораженного бильгарциозом, посредством выявления цитокератинов в качестве маркера опухоли, а также предложены критерии определения потенциальной возможности возникновения рака мочевого пузыря у больных бильгарциозом, составляющих группу больных повышенного риска.

Впервые доказана возможность определения потенциальной пролиферптивной активности клеток при различных формах про-лиферативного цистиха, неинвазивном и инвазивном переходно-клеточном раке мочевого пузыря посредством изучения состояния протеинов ядрышковых организаторов уротелия.

Публикации., По теме диссертации опубликовано 3 работу.

Структура и,объомлзаботы. Д)ссертяция состоит из введения, обзора литературы, одной глявы "Материал и методы иссле-

дования", 3-х глав результатов собственных исследований, заключения, выводов и списка литературы. Работа изложена на

страницах машинописного текста, иллюстрирована 17 таблицами и 41 рисунками. Список литературы включает 24 источников отечественных и 128 иностранных авторов.

Материал и методы исследования. Кэмплексное кликико-мор-фологическое исследование проведено у 105 больных, которые были разделена на 2 группы.

Первая группа больнвх представлена 40 пациентами, обследованными и отобранными из числа амбулаторных больных клиники Теодора Бильгарца при Каирском институте в Египте. Эти больные после цистоскопии и диагностической биопсии слизипт той оболочки мочевого пузыря р свою очередь разделены на 3 подгруппы: I подгруппа включает 2 пациента с бильгарциозным гранулематозным циститом; П подгруппа состоит из 6 пациентов, больных бильгарциозным циститом с плоскоклеточной метаплазией эпителия мочевого пузыря; 11] подгруппа включает 32 пациента, у которых на фоне бильгарциоза развился рак мочевого пузыря: из них 22 - с плоскоклеточным раком,. 6 - с переходноклеточ-ным раком и 4 - с недифференцированной формой рака.(табл.1).

Вторая группа представлена 65 больными, отобранными из числа пациентов онкологического диспансера при Киевском научно-исследовательском институте урологии и нефрологии. Они прошли обследование с использованием цистоскопии и биопсии и классифицированы по 3 подгруппам: в I подгруппе - 5 пациентов с пролиферативным циститом, во П - 30 пяпиентов, больных неинвазивным переходного!еточным раком; в 111 подгруппо -30 пациентов, у которых диагностирован переходноклсто'шый

рак (табл.2).

Таблица I

Распределение больных с бильгярциоэным поражением мочевого пузыря в зависимости от гистологической формы заболевания

Гистологический диагноз ¡Количество больных .

Гранулематозный цистит 2

Бильгарциозный цистит с плоскокле- . точной метаплазией эпителия 6

Плоскоклеточный рак 22

Переходноклеточный рак 6

Недифференцированный рак 4

ВСЕГО . ' ' 40~""

Таблица 2

Распределение больных с небильгврциозным поражением мочевого пузыря в зависимости от гистологической формы заболевания

Гистологический диагноз :Количество больных

Пролиферативный цистит 5

Неинвязивный переходноклеточный

рак 30

Инвазивный переходноклеточный рак 30

ВСЕГО" ■"*"'' ; ' 65

На кавдого больного обеих вышеназванных категорий была составлена подробная история болезни, каждый из них прошел полный курс клинического и рентгенологического обследования; включая внутривенную урографию, ультразвуковую эхографию и цистоскопию. В течение курса лечения данных больных была

проведена эндоскопическая трансуретрельная резекция опухоли (ТУР) при помощи фиброоптического цистоскопа фирмы Вульфа, включая стадии Т0, Т cia , и Tj.

Да.бо^а.тосиа^иссдедования: а) В группах пациентов с бильгар-циозом во время биопсии иссекали 2 кусочка ткани: один из них ^ыл заморожен при -всРс в специальной камере, другой зафиксирован в 12" забуференном формалине рН 7,2. Приготовленные из парафионовых блоков последнего препараты окрашивались гематоксилином и эозином. Замороженные срезы для иммуногисто-химического исследования были дбставлены в Шевский научно-исследовательский институт урологии и нефрологии самолетом в специальном термосе, содержащем жидкий азот.

Для проведения иммуногистохимической реакции использовали моноклональные антитела против кератинов, изготовленные в г.ТУлуза (Франция) доктором G.Serré /1966/. E^i.gg выявляет цитокератин 1,2,9,10,11; выявляет цитокератин от I до 19; А28_01 выявляет цитокератин 1,2,5,9,10,11,13,14, 15,16; выявляет цитокератин 7,8,18,19. Замороженные срезы были окрашены ПАП методом по Огренбергеру. Контрольная группа: замороженные срезы, приготовленные из кожи человек«, полученной при аутопсии и окрашенные тем же ПАП методом по Стренбергеру (табл.3).

Таблица 3

Цитокератины, выявляемые использованными в работе монокло-нал.ьными антителами (МАТ>

МАТ : Цитокератины

ï%_œ 1,2,9,10,11

Р12-19 1-19

А28 01 1,2,5,9,10,11,13,14,1Г>,16

h46_oi 7,8,18,19

б) У пациентов, небильгарциозной группы взятые при биопсии кусочки.ткяни сразу же помещались в 12? формалин-при рН 7,2. В каждом случае были изготовлены парафиновые блоки. Срезы подвергнуты: a) обычному методу окрашивания гематоксилином и ооэином, б) модифицированному методу выборочного окрашивания серебром протеинов ядрьшшовЫх организаторов. В контрольной группе при исследовании AgNoRs использована нормальная слизистая оболочка мочевого пузыря, полученная у больных с нодозной аденоматозной гипертрофией предстательной железы, подвергшихся'аденомэктомии {10 случаев). Дискретные точки AgNoHq были подсчитаны в 200 клетках с" помощью светового микроскопа при увеличении в 400 раз и с помощью маслоиммер-оионных линз. Представляется важным проведение такого подсчета в различных произвольно выбранных участках среза.

Среднее-число в каждом очаге поражения может быть рас-

ло для каждого наблюдения.

Электронномикроскопическое исследование было проведено в 2-х случаях пролиферативного цистита, в 4-х - неинвазивно-го переходноклеточного река и в 4-х - инваэивного переходно-клеточного рака с применением метода р1оЪоп /1964/ для определения А-еНоИ^ протеинов при помощи электронного микроскопа ЗМ125К. Грпанулярннй коэффициент (ГК) определялся , как отношение площади, занимаемой АцИоНа , протеинами (А)

А/

Среднее число подгруппы = \j

к площади ядрышка (В) по следующей формуле: ГК = —■ ,

В

Результаты и дискуссия

Результату клинических ^с следований. Изучив случаи биль-гарциоза мочевого пузыря, осложненного раком, мы пришли к выводу, что в каждом случае рак мочевого пузыря развивался на фоне бильгарциозного цистита с тяжелым и продолжительным течением от 5 до 10 лет. Следует также учесть, что большая часть больных из этой группы не получила полный курс анти-бильгарциозного лечения. Наиболее распространенными клиническими симптомами у пациентов, с бильгарциозным раком мочевого пузыря были некротурия, гематурия, идизурия, тогда так при небильгарциозном рака наиболее характерной были безболезненная гематурия.

При поверхностных..поражениях мочевого пузыря аффективным методом, позволяющим обнаруживать повреждения площадью более 0,5 см в диаметре, оказалась ультразвуковая эхография, особенно в тех случаях, когда внутривенная урография была безрезультатной. Ультразвуковая яхография дялп возможность поставить диагноз 39 больным бильгарпиозом из обследованных 40 (97,5"'), в в небильгарциозной группе - 62 случая из СИ (95,3^). Внутривенная урография была диагностически показательной у 61 (93,8"') больных небильгарциозной группы и у 38 (95%) больных с бильгарциоэными поражениями мочевого пузыря.

Эндоскопия также представляется важным диагностическим методом для рака мочевого пузыря, особенно-при шистосомояе. В ходе исследования было обнаружено 3 типа эндоскопических характеристик бильгарциозного рака мочевого пузыря: тип уэ-

ловатой грибовидной опухоли (62,5?), язвенный тип (12,5?.) и папиллярный тип (25?); в небильгарциозной группе эти типы опухолей составили соответственно 16,6$, 16,6? и 66,6?. Для бильгарциозного цистита патогномоничными, обнаруживаемыми ¡эндоскопически,- являются частая лейкоплакия в 25? исследованных случаев, а также бильгорциозные бугорки, мелкие, инкрустированные солями желтые, так называемые "песчаные", пятна и гранулемятоз.

Результаты л аборатормж исследований., Среднее число (СЧ) ядршковых организаторов ( AgNoBg ) в неизмененных клетках уротелия мочевого пузыря ровно 0,9+0,11, тогда как при про-лиферативном цистите в 4-х из 5 изученных случаев оно составляет 2,05+0,65, при этом ноблпдается умеренный плеомор-физм ядрышковых организаторов. В названных 4-х случаях отмечен рецидив заболевания после двукратного иссечения опухоли. Мы относим подобные наблюдения к группе повышенного риска, так.как AgNoRo (СЧ) достигает такового для AgNoHg при карциноме in situ.

Ото было подтверждено электронномикроскопическими исследованиями, при которых AgNoRs коэффициент составил 22,6+2,3.

АцНоВа СЧ при неинвазивном переходноклеточном раке равно 2,4+0,5 при папилломе (Tfl) и 2,05+0,651ри карциноме in situ (Tcis ) с незначительным умеренным плеоморфизмом. Количество

•AgNoEs в клетках неинвазивного перехдюклеточного рака возрастает по мера продвижения к поверхности опухоли, что подтверждает факт возникновения рака из разрастаний очагов ба-зального слоя уротелия, клетки которого наиболее активно про-лиферируют, занимая всю толщу эпителия, что свидетельствует

и

об опухолевой прогрессии. Электронномикроскопически для ры;а этого типа получен гранулярный коэффициент 29,4+1,8.

При инвэзивном переходноклеточйом раке, при котором АеИоИд СЧ в степени I равен 2,8+0,7, в степени П - 4,45+ +0,45, в степени Ш - 5,85+0,65 с соответственно незначительным, умеренным и значительным плеоморфизмом, количество в ядре клетки увеличивается с возрастанием степени злокачественности переходноклеточного рэка, что отражает биологическую активность клеток опухоли, а значит, и степень и* инвазивнос-ти.

Нами выявлено 3 морфологических типа А^оН^ : с бизэар-ной (почкообраэной) формой, круглой формой и неравномерно распыленной. Выраженная степень плеоморфизма А§1?оНа отмечена на третьей стадии инвэзивного переходноклеточного рака, когда преобладаицими морфологическими формами являются биз-зарная и неравномерно распыленная. Это подтверждено электронной микроскопией, при которой активность АцроП^ характеризовалась гранулярным коэффициентом 46,8+3,1, что свидетельствует о том, что чем более атипична клетка, тем большим будет количество АйНоНд , что отражает степень плоидности и инвазивности клеток опухоли.

Полученные нами результаты доказывают важное значение АбНойд как опухолевого маркера и показателя степени инвазивности и потенциальной биологической активности ее клеток. Кроме того, этот метод наиболее информативен при вынвлении рака на ранней стадии развития, особенно у пациентов, страдающих пролиферативным циститом, что невозможно сделать при классическом гистологическом исследовании препаратов.

в) Результаты проведенногл иммуносистологического исследования цитокератинов у 40 пациентов с бильгарциозным поражением мочевого пузыря показали, что в наблюдениях с бильгарциозным грануломатозным циститом сохранившийся переходный эпителий давал саабо положительную реакцию с цитокератинами, выявляемыми с помощью моноклональных антител (МАТ) ЕЬ^^, Г12-19' Умеренную реакцию с МАТ которая заметно

усиливалась в гнездах Брунна, отрицательную реакцию с МАТ ^28-01* При этом яйца бильгарции, часто обнаруживаемые в слизистой оболочке мочевого пузыря при его бильгарциозном поражении, всегда характеризовались выраженной экспрессией всех изучаемых цитокератинов. При бильгарциозном цистите с зонами плоскоклеточной .метаплазии уротелия иммуногистохимическое окрашивание обнаруживалось только в метаплазированном эпителии и колебалось от сильного и умеренного до слабого, в зависимости от применяемых МАТ. Так, при использовании МАТ ЕЬ,^^. определялась как высокая иммунореактивность (4 случая)» так и умеренная (2 случая) в срединных слоях эпителия.

А МАТ-Р-^28-01 вийвляли умеренно выраженную иммунореактивность в клетках многослойного плоского эпителия, осе-бенно в его поверхностных слоях. При этом в метаплазированном плоском эпителии цигокератины 7,8,18,19 (МАТ не обнаруживались. Бильгарциозный плоскоклеточный рак мочевого : пузыря отличался различным набором и иммунореактивностью цитокератинов в зависимости от степени злокачественности заболевания. Бели в I'-степени раковые-клетки характеризовались сильным окрашиванием КАТ Е%1„с5 и .умеренным, КАТ Е д и а28-01* то прии особенно Ш степенях злокачественности

плоскоклеточного" рака'-яммукЬреа^тивность'цитокерптинов, выявляемых МАТ снижалась до умеренной и слабой, а иммунореактивность с МАТ ^12-19 и ^28-01 ПР0ЯВлялась во всех слоях клеток опухоли. Экспрессия цитокератинов, обнаруживаемых МАТ в плоскоклеточном^'раке мочевого. пузыря; ни в одном наблюдении не определялась". •. •

В бильгарниозном переходной еточном .раке мочевого пузыря выявлялись цитокератины с МАТ и '¡46-01' УРовенъ ш~

мунореактивности которых аависел от стадии заболевания, а также степени дифференцировки раковых клеток.. Наиболее сильной и постоянной была иммунореактивность цитокератинов с- МАТ > ^46-01' пРоявля™(аяся при выскокодифференцированном переходно-клеточном раке высокой, н при низкодиф<$еренцированном раке слабой степенью окрашивания. Цитокератины, определяемые МАТ I" 1£-1д> являются менее информативными, так как проявляют -более слабую иммунореактивность, а выявляемые МАТ Е%>];_06 и -^28-01 ее" воо(5Ще не обнаруживали1. Что^ касается бильгарциоз-ного недифференцированного рака мочевого пузыря, то в его -клетках наблюдалась в трех случаях из четырех слабая экспрессия лишь кератинов с МАТ ЕЕэ^^, тогда как все остальные изучаемые цитокератины вообще не определялись.

Проведенное иммуногистохимическое исследование с целью совершенствования ранней диагностики процессов мйлигнизации. у. \ при бильгарниозном поражении мочевого пузыря позволило.прид- -ти к заключению, что иммунореактивность изученных-,цитокера- • ; тинов уротелия при этом обусловлена прежде всего гистогенезом развивающееся опухоли, так как переходноклеточный и.плос-коклето'чннй' рак обладают различными набор лад што кератинов*

Кроме того, уровень иммунореактивности цитокератинов зависит от степени дифференцировки опухолевых клеток. Так, в высококвалифицированных новообразованиях;отмечается наиболее высокая иммунореактивность этих протеинов: с МАТ ПРИ плоскоклеточном раке I степени а (в меньшей пере г 12-19^ ПРИ переходноклеточном раке той же степени. Следует подчеркнуть, что уровень-иммунореактивности прогрессивно уменьшается при снижении степени дифференцировки опухолей. Поэтому недифференцированный рак, как правило, был цитокера-тинонегативным. Особого вниняния заслуживают наблюдения биль-гарциозного цистита с плоскоклеточной метаплазией уротелия, в котором уровень иммунореактивности цитокератинов с МАТ Ьц-Об был идентичен высокодифференцированному плоскоклеточному раку, однако при бильгарциозном грануломатозном цистите иммунореактивность этой группы цитокератинов была очень слабой тогда как экспрессия цитокератинов с МАТ была умеренной и усиливалась в гнездах Брунна идентично I степени пере-ходноклеточного рака мочевого пузыря.

Таким образом, моноклональные .антитела Е%1_об и ^46-01 могут использоваться как опухолевые маркеры для дифференциальной диагностики и выявления наиболее ранних стадий малиг-. низации эпителия при бильгарциозном поражении мочевого пузыря. Больных с плоскоклеточной метаплазией уротелия при бильгарциозном цистите необходимо отнести в группу повышенного риска для развития плоскоклеточного рака мочевого пузыря, а пациентов с грануломатозным циститом - переходнокцеточного рака. Обнаружение недифференцированного рака мочевого пузыря слабой иммунореактивности цитокератинов 1,2,9,10,11 (МАТ

в трех наблюдениях иа четырех подтверждает гистоге-нетическую принадлежность этихгопухолей к уротелию, метапла-зированному в многослойный плоский эпителий в отличие от недифференцированного рака, развившегося из переходного эпителия, что трудно определить при обычной окраске гематоксилином и эозином.

На основании сказанного, можно заключить, что иммуногис-тохимическия идентификация цитокератинов 1,2,9,10,11 при использовании моноклональных антител Е^л.об и цитокератинов 7,8,18,19 с МАТ против различных эпитопов в цитоплаз-

ме эпителия при бильгарциозном цистите прогностически перспективно для диагностики ранних форм рана мочевого пузыря.

В Ы, В О Д Ы

1. Внутривенная урография.цгетоскопия и ультразвуковая эхография, хотя и имеют определенное значение при распознавании предраковых и раковых поряжёнйй мочевого пузыря, все же не позволяют точно отличить их друг от друга. Сравнивая информативность перечисленных методов исследования можно заключить, что ультразвуковая эхография представляет собой более точный метод диагностики заболеваний мочевого пузыря, чем внутривенная урография, а цистоскопия и биопсия слизистой оболочки представляются наиболее важными при обследовании амбулаторных больных.

2. Изученные наш цитокерагины уротелия мочевого пузыря могут служить опухолевыми маркерами при выявлении бильгар-циозного рака мочевого пузыря на ранней стадии его развития. Путем определения иммунореактивности указанных цитокератинов

при различных бильгарциозных повреждениях мочевого пузыря среди них возможно ввделить группу больных с повышенным риском опухолевой трансформации" уротелия.

3. Моноклональные антитела Е%х-С6' ^46-01' обладая наиболее высокой специфичностью к определенным группам цитоке-ратинов, могут быть использованы для иммуногистохимического их выявления в клетках уротелия при различных бильгарциозных заболеваниях мочевого пузыря.

4. Цитокератины эпителия, выявляемые моноклональными антителами и ^46-01' являются высокоспецифичными опухолевыми маркерами и дают возможность установить окончательный диагноз недифференцированных форм бильгарциозного рака, что обычно вызывает затруднения при использовании традиционных гистологических методов.

5. Иммунореактивность цитокератинов является одним из критериев при определении потенциальной биологической активности и инвазивности клеток опухоли при бильгарциозном раке мочевого пузыря.

6. Определение состояния ядрышковых организаторов (AgNoR )

S

в уротелии мочевого пузыря можно использовать в качестве нового цитотехнического маркера опухоли, определяющего степень биологической активности клеток и позволяющего выявить склонность переходноклеточного рака к инвазивному росту..

7. ЯдрышкоЕые организаторы ( AgNoRa ) - объективный маркер опухоли, который можно применять для выявления карциномы in situ среди больных, страдающих пролиферативным циститом с повышенным риском к опухолевой трансформации, что невозможно достичь при использовании традиционных методов окрашива-

вания гистологических препаратов. Указанный маркер, так же, как и цитокератины при Йильгарциознои раке мочевого пузыря, имеет большое значение для определения степени потенциальной активности и дифференцировки клеток опухоли, позволяя уточнить градацию переходноклеточных опухолей мочевого пузыря по степени их зрелости.

Внедрение результатов исследования Разработанные по иатериалам диссертации методы окрашивания азотнокислым серебром регионов ядрышковых организаторов, а также определение иммунореактивноети цитокерати-

нов с помощью МАТ Е^Г-Об» А28-01 •Р 12-19» Н4б-01 те№е~ ны в практическое здравоохранение для диагностики ранних стадий малигнизации и карциномы in situ в Киевском НИИ урологии и нефрологии МЗ УССР, а также в городском и областном онкодиспансерах г.Киева. Внедрение результатов исследования осуществлялось также путем докладов отдельных фрагментов диссертации на заседаниях научных обществ урологов, конференциях, научно-практических семинарах.

. Предложен новый метод ускоренного окрашивания азот- . нокислым серебром яДрыпковых организаторов. Модифицированный метод выборочного окрашивания азотнокислым серебром регионов ядрышковых организаторов (AgHoRe) представляет собой метод быстрой и точной диагностики опухолевых, предопухолевых и неопухолевых поражений мочевого пузыря на светооптическом уровне может быть использован при скрининге и обследовании амбулаторных больных для раннего выявления злокачественного перерождения эпителия

мочевого пузыря.

Мы называем этот метод модифицированным, так как он отличается от традиционного метода, имея следующие преимущества:

1. В нашем методе время окрашивания рабочим раствором сокращено до 15 мин.

2. Для очистки цитоплазмы клетки от избытка ионов азотнокислого серебра применяется раствор тиосульфата. Это облегчает обнаружение и подсчет количества AgWoRs f а также определение их морфологии.

3. Время, затрачиваемое на проведение реакции в нашем методе, составляет 30 мин, что дает возможность применять его для быотрой интраоперационной диагностики мочевого пузыря.

Модифицированный метод выборочного окрашивания зарегистрирован как рационализаторское предложение № 535 ( 22.06.90 г.) Киевским научно-исследовательским институтом урологии и нефрологии МЗ УССР.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Wiohahi Ы., El Shemi Е., Ismail I., Safwat Sabry. Ante g rade and. retrograde dilatation for bilharzial urete-rio etricture: cllnical and experimental assessment // 5-th World Congreea on, Endourology and E.S.W.L. Cairo, Hovember, 1-4, 1987.

2. Safwat Sabry. Complications and management of bilharzial ureter submitted in partial fulfillment of the requirement

of K3.C. // Urology Faculty of Medioine. - Cairo University, November, 1986,

3. Safwat Sabry, Abdelhakim A., El Metanawy W., Romanenko A.M., Vooianov A.P. Value of nuoleolar organiser region (AgWoR) in the early detection of malignant transformation of bilharzial bladder // J.Cano.Inst.- Cairo University.-Jan., 1991.