Автореферат и диссертация по медицине (14.03.10) на тему:Клинико-лабораторные и экспериментальные исследования растворов, содержащих активные формы кислорода, в сочетании с наночастицами
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.10
Автореферат диссертации по медицине на тему Клинико-лабораторные и экспериментальные исследования растворов, содержащих активные формы кислорода, в сочетании с наночастицами
На правах рукописи
Боровский Алексей Львович
Клинико-лабораторные и экспериментальные исследования растворов, содержащих активные формы кислорода, в сочетании с наночастицами
14.03.10 - клиническая лабораторная диагностика 14.03.03 - патологическая физиология
Автореферат
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 7 ОЕ3 2011
Саратов - 2011
4854285
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный медицинский университет имени В.И. Разумовского Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».
Научные руководители:
доктор медицинских наук, профессор Бородулин Владимир Борисович;
доктор медицинских наук, профессор Мареев Олег Вадимович;
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Луцевич Игорь Николаевич;
доктор медицинских наук, профессор Девдариани Зураб Леванович;
Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»
Защита состоится « 25 » февраля 2011 года в часов на заседании
диссертационного совета Д 208.094.04 при ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава.
Автореферат разослан « 24 » января 2011г.
Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор
Бородулин В.Б.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
Широкое распространение заболеваний наружного уха, разнообразие микрофлоры (бактериальной и грибковой), склонность к рецидиву заболевания, с одной стороны, а с другой, - неудовлетворительная эффективность применяемых методов лечения и лекарственная устойчивость микроорганизмов, делают проблему весьма актуальной (Чеботарева Е.Г.,2004; Бабушкина И.В.,2010). Необходимо отметить и экономический фактор проблемы - многие медикаментозные препараты весьма дороги и вследствие этого лечение нередко проводят неадекватными препаратами (Richards J.,2002). Электрохимически активированные биоцидные растворы обладают универсальным спектром действия, то есть оказывают повреждающее влияние на все крупные систематические группы микробов (бактерии, грибы, вирусы и простейшие), не причиняя вреда клеткам тканей человека (Ревазова Ю. А., Верстакова О. Л. и соавт., 2000; Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И. и соавт., 2001). Это обусловлено принципиальными отличиями в строении и условиях жизни клеток микро- и макроорганизма. Клетки высших организмов в процессе жизнедеятельности продуцируют и используют целый ряд высокоактивных оксидантов, подобных тем, что содержатся в анолите. Система антиоксидантной защиты животных клеток предотвращает токсическое воздействие оксидантов на жизненно важные клеточные структуры. Микроорганизмы не продуцируют высокоактивных оксидантов и не имеют мощных систем антиоксидантной защиты, поэтому электрохимически активированные биоцидные растворы являются для них высокотоксичными. Вероятно, вследствие этого не формируется резистентность микроорганизмов к ЭХА- растворам.
Цель исследования
Целью настоящей работы является выявление биологического действия растворов, содержащих активные формы кислорода в сочетании с наночастицами, на бактериальные клетки, выделенные от больных с заболеваниями наружного уха, и определение основных биохимических показателей у белых беспородных мышей-самцов.
Задачи исследования
. Изучить изменение основных биохимических показателей в экспериментах на белых мышах при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях.
з
2. Изучить состояние перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты) белых беспородных мышей-самцов при введении им католита и анолита.
3. Исследовать влияние католита и анолита на бактериальные клетки, выделенные от больных при различных воспалительных заболеваниях наружного уха.
4. Исследовать влияние католита и анолита в сочетании с наночастицами меди на бактериальные клетки, выделенные от больных при различных воспалительных заболеваниях наружного уха.
Научная новизна
Предложены новые критерии оценки действия растворов католита и анолита в различных концентрациях на модельных животных.
Обнаружена выраженная антибактериальная активность католита и анолита, а также в сочетании с наночастицами.
Показано достоверное изменение биохимических показателей при введении животным растворов католита и анолита.
Практическая значимость
Проведенный анализ позволит использовать результаты научных исследований для более широкого использования растворов анолита и католита в лечении больных с наружными отитами различной этиологии.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Обнаружено изменение биохимических показателей у белых мышей при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях.
2. Выявлено изменение состояния перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты) у белых беспородных мышей-самцов при введении им католита и анолита.
3. Установлено антибактериальное действие растворов католита и анолита, а также в сочетании с наночастицами.
Внедрение результатов работы в практику
Результаты работы внедрены в лечебно-диагностическую работу МУЗ ««Городская клиническая больница №10». Материалы работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами и слушателями ФПК и ППС ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава».
Апробация работы
Основные положения диссертации рассмотрены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы» (Саратов,
2008); в сборнике научных трудов «Современный мир, природа и человек» (Томск,
2009).
Материалы диссертации обсуждены и одобрены на заседаниях кафедры биохимии и кафедры оториноларингологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в которых отражены основные положения диссертации, в том числе 1 работа в изданиях, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Иллюстрирована 17 таблицами и 46 рисунками. Список использованной литературы содержит 165 отечественных и 56 иностранных источников.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования
Для получения растворов католита и анолита использовали серийную установку электрохимического синтеза моющих, дезинфицирующих и стерилизующих растворов - СТЭЛ (рис. 1).
Рис. 1. Внешний вид и схема установки СТЭЛ.
Наночастицы, используемые в экспериментальных исследованиях
Использовали наночастицы меди, железа, цинка (нанопорошки синтезированы на плазмохимическом комплексе в лаборатории № 33 г. Саратов, филиал ФГУП РФ ГНЦ ГНИИХТЭОС, г. Москва) в различных концентрациях.
Методы исследования биохимических показателей сыворотки крови
Биохимическое исследование сыворотки крови белых беспородных мышей' проводилось по протоколу Laboratory Animals Ltd., Laboratory Animals (1998), v. 32,; p. 364-368. Эксперименты на животных проводили в соответствии с Женевской конвенцией (Geneva, 1990). Определение биохимических показателей крови выполняли с помощью полуавтоматического биохимического анализатора
«HOSPITEX» Screen master, производства Швейцарии, оборудованного термостатом, фотометром и микропроцессором, в котором запрограммирован алгоритм проведения 60 биохимических тестов, инкубатором, обеспечивающим температуру +37°С. Для работы на анализаторе использовали стандартные наборы реактивов производства ЗАО «Диакон-ДС». В сыворотке крови определяли активность у-глутамилтрансферазы, щелочной фосфатазы,
аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы, лактатдегидрогеназы, креатинкиназы, а-амилазы, концентрацию креатинина, мочевины, глюкозы, лактата, общего холестерина, общего белка, альбумина.
Бактериальные клетки и среды
Исследования проводили на штаммах Escherichia coli ( 20 штаммов) и Pseudomonas aeruginosa (20 штаммов), S. aureus ( 20 штаммов), выделенных от больных, которые находились на лечении в ЛОР - отделении МУЗ «Городская клиническая больница №10».Микроорганизмы выращивали на МП А в чашках Петри. Твердая питательная среда готовилась из дистиллированной воды и агара "Bacto Mac Concey Agar Base" (фирма "Difco") в пропорции 20 г агара на 1 л дистиллированной воды и автоклавировалась в течение 30 мин при 2 атм., разливалась в чашки Петри диаметром 90 мм (по 20 мл). Посеянные культуры инкубировали в термостате при температуре 37 °С 1 сутки.
Суспензию бактерий приготавливали из выращенной культуры с содержанием на 1 мл дистиллированной воды миллиарда бактериальных клеток, что определяли по оптическому стандарту мутности на 10 единиц. Рядом последовательных разведений суспензии получали конечную концентрацию бактерий (500 клеток на 1 мл).
В пробирки с разведениями смеси нанопорошков добавляли по 100 мкл конечной суспензии микроорганизмов, встряхивали и оставляли на полчаса. После этого с каждого из разведений производили посев по 20 мкл на каждую чашку Петри с агаром. Для контроля на такой же среде сеяли исходную суспензию культуры бактерий. Все чашки помещали в термостат (37 °С) на 24 часа. Результат учитывали на второй день. Тогда же ставили пробу на биохимические показатели жизнедеятельности микроорганизмов до, и после воздействия исследуемой смеси веществ. Для биохимических тестов использовали специальную дифференциально-диагностическая систему ENTEROtest 16 (La Chema).
После подсчета клеточных колоний на чашках производили статистическую обработку полученных результатов. Формула для расчета:
2_ (01-02)2 * О! + 02
где х2 - критерий соответствия, О1 и Ог - полученные из эксперимента величины общего числа бактериальных клеток, выросших на чашках в контроле и опыте соответственно.
С помощью критерия соответствия определяли величину Р - вероятность значения % 2 (величина табличная). Сравнение между собой числа клеточных колоний в контроле и опыте с использованием критерия соответствия у? указывает на достоверное различие между фактическими и теоретически ожидаемыми результатами (Р < 0,05). Это свидетельствует о достоверности полученных результатов.
Статистическая обработка результатов
На заключительном этапе исследования полученные результаты проанализированы и систематизированы математическим методом оценки с применением пакета прикладных программ «МескйаЬ) и ПЭВМ класса ШМ ИБ ХТ.
ИССЛЕДОВАНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У МЫШЕЙ ПРИ ПРИЕМЕ РЕИ Ов РАСТВОРОВ АНОЛИТА И КАТОЛИТА Исследование биохимических показателей у мышей при приеме рег ов раствора анолита
Действующими началами в анолите являются радикал гидроксила, пероксиданион-радикал, супероксиданион-радикал, синглетный молекулярный кислород, озон, атомарный кислород и другие активные радикалы, включая активный хлор. Антиоксидантные системы защиты животных клеток предотвращают токсическое воздействие оксидантов на жизненно важные клеточные структуры.
Приготовление анолита производили на установке «Стел», сила тока - 1,75 А, напряжение - 32 В, рН анолита - 7,0; концентрация активного хлора в анолите составляла 48,32 мг\л, или 0,68 ммоль\л. В работе использовали белых беспородных мышей-самцов. Анолит вводили рег об в количестве 50 мкл однократно и на протяжении 3-х дней с последующим забором крови и изучением основных биохимических показателей в сыворотке крови мышей.
При однократном введении анолита обнаруживается увеличение активности АсАТ до 1000,0 ед\л (контроль - 120,0 ед\л); АлАТ- до 300,0 ед\л (контроль 50,0 ед\л); ДДГ- до 9620 ед\л (контроль - 2025 ед\л); ГГТ- до 400 ед\л (контроль -50 ед\л). При введении анолита в течение 3-х дней наблюдались следующие изменения в биохимических показателях: концентрация общего белка возрастала до 295 г\л
8
(контроль -117,74 г\л); концентрация альбумина уменьшалась до 40,0 г\л (контроль-58,08 г\л); креатинин увеличивался до 300 мкмоль\л (контроль- 165,3 мкмоль\л); глюкоза возрастала до 15,12 ммоль\л (контроль- 7,12 ммоль\л).Активность ферментов возрастала: АлАТ- до 900 ед\л, АсАТ- до 960 ед\л, ЛДГ- до 21960 ед\л, ГГТ- до 450 ед\л (контроль- 50 ед\л); КФК- до 3100 ед\л (контроль- 1290 ед\л); концентрация ЩФ уменьшалась до 10 ед\л (контроль- 396 ед\л).При поступлении активного католита в организм мышей отмечаются выраженные нарушения в метаболизме гепатоцитов, что сопровождается нарастанием активности ферментов АсАТ, АлАТ, ЛДГ, ГГТ, уменьшением синтеза альбуминов. Нарастание концентрации креатинина в сыворотке крови мышей на 3 сутки указывает на вовлеченность в процесс почечной паренхимы, а увеличение концентрации глюкозы - на поражение поджелудочной железы, хотя амилазу в этой экспериментальной серии не исследовали (табл.1).
Исследование биохимических показателей у мышей при приеме per os раствора католита
Электрохимически активированные биоцидные растворы обладают универсальным спектром действия, то есть оказывают повреждающее влияние на все крупные систематические группы микроорганизмов. В то же время клетки высших организмов в процессе жизнедеятельности продуцируют и используют целый ряд высокоактивных оксидантов, подобных тем, что содержатся в анолите. Система антиоксидантной защиты животных клеток предотвращает токсическое воздействие оксидантов на жизненно важные клеточные структуры. С другой стороны, не проводилось систематических исследований по изучению влияния анолита на биохимические показатели макроорганизма.
Действующими началами в католите являются радикал гидроксила, пероксиданион-радикал, супероксиданион-радикал, синглетный молекулярный кислород, озон, атомарный кислород за исключением активного хлора.
В работе использовали белых беспородных мышей-самцов. Католит вводили per os в количестве 50 мкл однократно и на протяжении 3 дней с последующим забором крови и изучением основных биохимических показателей в сыворотке крови мышей. Приготовление католита производили на установке «Стел», сила тока-1,75 А, напряжение- 32 В, рН католита- 7,0.
При однократном введении католита обнаруживается увеличение активности АсАТ до 1400,0 ед\л (контроль- 120,0 ед\л); АлАТ- до 400,0 ед\л (контроль- 50,0 ед\л); ЛДГ- до 13840 ед\л (контроль- 2025 ед\л). При введении католита в течение 3-х дней наблюдались следующие изменения в биохимических показателях: концентрация общего белка уменьшалась до 70 г\л (контроль- 117,74 г\л); концентрация альбумина уменьшалась до 25,0 г\л (контроль- 58,08 г\л), креатинин
увеличивался до 500 мкмоль\л (контроль- 165,3 мкмоль\л). Активность ферментов возрастала: АлАТ- до 300 ед\л, АсАТ- до 320 ед\л, ЛДГ- до 5400 ед\л, ГГТ- до 300 ед\л (контроль- 50 ед\л), КФК- до 3180 ед\л (контроль- 1290 ед\л); концентрация ЩФ уменьшалась до 190 ед\л (контроль- 396 ед\л).
При поступлении активного католита в организм мышей отмечаются выраженные нарушения в метаболизме гепатоцитов, что сопровождается нарастанием активности ферментов АсАТ, АлАТ, ЛДГ, ГГТ, уменьшением синтеза альбуминов и других белковых фракций. Нарастание концентрации креатинина в сыворотке крови мышей на 3 сутки указывает на вовлеченность в процесс почечной паренхимы (табл.2).
Таблица 1. Биохимические показатели у мышей при применении анолита
Показатель Контроль Анолит однократно Анолит в течение 3 дней
М±щ М±т Р М±т Р
Глюкоза, ммоль/л 7,12±0,76 7,28±0,36 Р>0,05 15,12±0,76 Р<0,001
Общ белок, г/л 117,74±12,00 75,00±3,75 Р<0,01 295,00±14,75 Р<0,001
Альбумин, г/л 58,08±0,27 30,00±1,50 Р<0,001 40,00±2,00 Р<0,001
Креатинин, мкмоль/л 165,30±13,82 320,00±16,00 Р<0,001 300,00±15,00 Р<0,001
АсАТ, ед/л 120,00±9,25 1000,00±50,00 Р<0,001 920,00±47,00 Р<0,001
АлАТ, ед/л 50,00±2,06 800,00±40,00 Р<0,001 840,00±55,00 Р<0,001
ЛДГ,ед/л 2025,00±53,28 9620,00±481,00 Р<0,001 21960,00±109,8 Р<0,001
ГГТ, ед/л 50,00±6,00 400,00±20,00 Р<0,001 450,00±22,50 Р<0,001
КФК, ед/л 1290,00±60,80 7070,00±353,50 Р<0,001 3100,00±155,00 Р<0,001
ЩФ, ед/л 396,00±2,18 210,00±10,50 Р<0,001 100,00±0,50 Р<0,001
Таблица 2. Биохимические показатели у мышей при применении католита
Показатель Контроль Католит однократно Католит в течение 3 дней
М±ш М±т Р М±т Р
Глюкоза, ммоль/л 7,12±0,76 8,96±0,44 Р<0,05 7,35±0,37 Р>0,05
Общ белок, г/л 117,74±12,00 95,00±4,75 Р>0,05 70,00±3,50 Р<0,01
Альбумин, г/л 58,08±0,27 60,00±3,00 Р>0,05 25,00±1,25 Р<0,001
Креатинин, мкмоль/л 165,30±13,82 130,00±6,5 Р<0,05 500,00±25,00 Р<0,001
АсАТ, ед/л 120,00±9,25 1400,00±70,00 Р<0,001 300,00±15,00 Р<0,001
АлАТ, ед/л 50,00±2,06 400,00±20,00 Р<0,001 300,00±15,00 Р<0,001
ЛДГ,ед/л 2025,00±53,28 13840,00±692,00 Р<0,001 5400,00±270,00 Р<0,001
ГГТ, ед/л 50,00±6,00 50,00±2,50 Р>0,05 300,00±15,00 Р<0,001
КФК, ед/л 1290,00±60,80 1350,00±67,50 Р>0,05 3180,00±159,00 Р<0,001
ЩФ, ед/л 39б,00±2,18 680,00±3,40 Р<0,001 190,00±9,50 Р<0,001
Антибактериальное действие растворов католита и анолита в сочетании с
наночастицами
Проведенные исследования показали, что при увеличении концентрации наночастиц в суспензии число колоний микроорганизмов уменьшается вплоть до полного их отсутствия. В то же время наблюдалось защитное действие наночастиц в отношении растворов анолита и католита, так как число выросших клеточных колоний увеличивалось при одновременной обработке суспензии клеток наночастицами меди и растворами, содержащими активные формы кислорода. Вероятно, происходило взаимодействие между свободными радикалами, с одной стороны, и наночастицами, с другой, что и служило причиной снижения антибактериальной активности растворов анолита и католита.
Растворы анолита по сравнению с растворами католита обладали повышенной антибактериальной активностью, что, видимо, связано с присутствием ионов хлора в растворах анолита (табл.3-7, рис.2-3).
Таблица 3. Влияние исследуемой ферромагнитной жидкости (смесь наночастиц меди, цинка и железа) различной концентрации на число колоний клинических штаммов микроорганизмов
Штамм Концентрация, мг / мл Контроль
100 10 1 0,1 0,01
Е.соН (число выросших колоний на агаре) 1 2 4 78 103 184
Рэ. аепщ. (число выросших колоний на агаре) 0 0 0 12 44 364
Примечание: Р<0,001.
Таблица 4. Влияние анолита на клинический штамм S. aureus
Концентрация анолита Контроль 1 мкл/мл 5 мкл/мл 10 мкл/мл 50 мкл/мл
Кол-во колоний 3000 300 200 70 0
Примечание: Р<0,001.
3500 3000 2500 2000 1500 1000 500 0
контроль 1 мкл/мл 5 мкл/мл 10 мкл/мл 50 мил/мл конценртация анолита
Рис. 2. Влияние анолита на клинический штамм S. aureus.
Таблица 5. Влияние смеси анолита (5 мкл/мл) и наночастиц меди на S. aureus
Концентрация наночастиц меди Контроль 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1
Кол-во колоний 2000 1000 500 350 0 0 0
Примечание: Р<0,001.
2500
2000 +-—.
1500
1000
500
контроль 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 концентрация наночастиц меди, мг/мл
Рис. 3. Влияние смеси анолита (5 мкл/мл) и наночастиц меди на S. aureus.
Таблица 6. Влияние католита на клинический штамм S. aureus
Концентрация католита Контроль 1 мкл/мл 5 мкл/мл 10 мкл/мл 50 мкл/мл
Кол-во колоний 3100 820 450 80 0
Примечание: Р<0,001.
Таблица 7. Влияние смеси католита (5 мкл/мл) и наночастиц меди на S. aureus
Концентрация наночастиц меди Контроль 0,00001 0,0001 0,001 0,01 0,1 1
Кол-во колоний 2900 1500 900 570 320 130 0
Примечание: Р<0,001.
В результате проведенных опытов было выявлено выраженное подавление жизнедеятельности патогенных штаммов Escherichia coli и Pseudomonas aeruginosa суспензией сплава ультрадисперсных порошков металлов. Резко уменьшалось число колоний микроорганизмов S. aureus на твердых питательных средах; изменялись показания биохимической активности микроорганизмов, что указывает на глубокие изменения в метаболизме бактериальных клеток. Полученные данные оправдывают раздельное использование нанопорошков металлов или растворов анолита (католита) при лечении заболеваний наружного и среднего уха.
ИССЛЕДОВАНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ГОМОГЕНАТАХ ТКАНЕЙ, ПЛАЗМЕ И ЭРИТРОЦИТАХ ИНТАКТНЫХ МЫШЕЙ
Методы изучения свободнорадикального окисления липидов
Измерение оптической плотности экспериментальных проб проводили с помощью спектрофотометра «SPECORD UV - VIS», произведенного в Германии.
Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты (Стальная, Гаришвили, 1977) Принцип метода: при 100°С в кислой среде малоновый диальдегид реагирует с 2-тиобарбитуровой кислотой, образуя окрашенный триметиновый комплекс, с
максимумом поглощения при 532 нм. Молярный коэффициент экстинкции этого комплекса - е = 1,56-105см"1-М'1.
Реактивы: 0,025 М трис-HCL буфер (рН=7,4), содержащий 0,175 М хлорида калия; 17%-ный раствор трихлоруксусной кислоты; 0,8%-ный раствор 2-тиобарбитуровой кислоты.
Ход определения: Подготовленный биологический материал в буферном растворе по 2,0 мл помещают в центрифужные пробирки и осаждают белок добавлением 1 мл 17%-ного раствора трихлоруксусной кислоты.
Образующийся осадок отделяют центрифугированием в течение 10 минут при 400 g (центрифуга ЦУМ - 1). Надосадочную жидкость по 2 мл переносят в пробирки, добавляют по 1 мл 0,8% раствора тиобарбитуровой кислоты и помещают пробы на 10 минут в кипящую водяную баню. В качестве контроля используют пробы, содержащие вместо надосадочной жидкости буферный раствор. После появления розовой окраски пробы охлаждают до комнатной температуры и измеряют оптическую плотность при 532 нм.
Метод определения диеновой конъюгации ненасыщенных высших жирных кислот (Стальная, 1977)
Принцип метода: В ходе перекисного окисления на стадии образования свободных радикалов в молекулах полиненасыщенных высших жирных кислот возникает система сопряженных двойных связей, что сопровождается появлением нового максимума в спектре поглощения -Х = 233 нм, е = 2,2-10"5-М"'-см"1.
Реактивы: гептан-изопропаноловая смесь (1:1); раствор HCL (рН=2,0); гептан; 0,025 М трис-HCL буфер (рН=7,4), содержащий 0,175 М хлорида калия.
Ход определения: Подготовленный биологический материал в буферном растворе по 2,0 мл помещают в центрифужные пробирки, добавляют 4 мл гептан-изопропаноловой смеси и встряхивают 10 минут. Затем в пробу добавляют 1 мл раствора HCL и 2,0 мл гептана, интенсивно встряхивают. После центрифугирования в течение 10 минут при 400 g (центрифуга ЦУМ - 1) отбирают гептановый слой, измеряют оптическую плотность при 233 нм в кварцевых кюветах по сравнению с контрольной пробой. В качестве контроля используют пробы, содержащие вместо биологического материала буферный раствор.
Исследованные ткани различаются по интенсивности процессов ПОЛ (табл. 8). Наиболее активно свободнорадикальное окисление липидов осуществляется в поджелудочной железе, сердце, легких, почках и мозге. В этой группе органов содержание диеновых коньюгатов изменяется от 19,53 до 11,95 ммоль/л, а содержание малонового диальдегида - от 2,44 до 1,41 ммоль/л.
Таблица 8. Содержание ДК и МДА в гомогенатах органов, плазме и эритроцитах интактных мышей
Исследуемый материал ДК, ммоль/л МДА, ммоль/л Кмда/дк
Х±Шх X ± шх
Поджелудочная железа 19,53 2,05 2,44 0,24 0,125
Сердце 18,03 2,13 1,28 0,14 0,071
Легкие 16,99 1,01 1,93 0,11 0,114
Почки 14,12 0,85 1,58 0,13 0,112
Мозг 11,95 0,54 1,41 0,08 0,118
Эритроциты 7,54 1 0,39 0,46 0,06 0,062
Печень 6,53 0,41 0,35 0,03 0,054
Плазма 4,39 | 0,27 0,28 ! 0,04 0,065
Мышцы 3,57 0,21 0,41 | 0,04 0,117
Примечание: пересчет проводили на 1г ткани для гомогенатов или на 1 мл для плазмы и эритроцитов.
Относительно низкая активность процессов пероксидации выявлена в эритроцитах, печени, плазме, мышцах. Для этой группы биопроб содержание диеновых коньюгатов изменялось от 7,54 до 3,57 ммоль/л, содержание малонового диальдегида - от 0,46 до 0,28 ммоль/л.
При анализе соотношения МДА/ДК установлено, что в гомогенатах поджелудочной железы, легких, почек, мозга и мышц интактных мышей, относительное содержание МДА практически вдвое - втрое выше, чем в гомогенатах сердца, печени, а также в эритроцитах и плазме.
Таким образом, скорость образования диеновых коньюгатов и их превращение в малоновый диальдегид различаются в исследованных тканях, что указывает на состояние соответствующих звеньев антиоксидантной системы клетки. Так, высокая скорость образования и деградации ДК характерна для поджелудочной железы, легких, почек и мозга. В сердце, печени и эритроцитах интенсивная генерация ДК сочетается с относительно низкой скоростью их распада до МДА. Для плазмы и мышц в норме отмечается низкое содержание ДК и МДА.
Исследование содержания продуктов ПОЛ в тканях, плазме и эритроцитах интактных мышей в условиях оксидативного воздействия
Для повышения интенсивности процессов ПОЛ в гомогенатах органов, плазме и эритроцитах проводили обработку католитом (табл.9) и анолитом (таблЛО). В воде при участии католита и анолита образуется озон, который легко превращается в О2. Процесс протекает через промежуточное образование свободных радикалов. Растворение озона сопровождается генерацией трех радикалов: супероксидного (02~), гидроперекисного (Н02') и гидроксильного (ОН'). Супероксидный анион-радикал при взаимодействии с протоном переходит в гидроперекисный радикал (Владимиров А.В., 1998). В физиологических условиях при рН=7,4, количество НО2' составляет 0,25 % от количества 02 , а при рН=7,0 -1%. Так как супероксидный радикал имеет заряд, он плохо мигрирует через мембраны, в отличие от гидроперекисного радикала. 02являясь нуклеофильным соединением, окисляет липопротеины сыворотки крови и фосфолипиды мембран, что приводит к разрушению эритроцитов, выходу лизосомальных ферментов, образованию цитотоксинов (Cross, 1987; Зенков В.Н., 2001). 02 служит предшественником Н202 и ОН', которые обладают более выраженным цитотоксическим действием. Молекула Н202 не ионизирована, легко проникает через гидрофобные мембраны и может мигрировать в клетки и ткани. Н202 является источником возникновения высокореактивного гидроксильного радикала в реакции Фентон. В присутствии ионов железа цитотоксическое действие Н202 возрастает в 1000 раз (Зенков В.Н., Меньшикова О.И., 1993). Гидроксильный радикал является наиболее реакционным и «вредным» из радикалов кислорода, с его образованием связывают цитотоксическое и мутагенное действие в условиях окислительного стресса. ОН' индуцирует образование органических радикалов, запускает ПОЛ, вызывает повреждение альбумина, фибронектина, ингибирует белки С5 фракции системы комплемента (Лукьянова Н.П., 1982; Меньшикова О.И., Зенков В.Н., 1993). Таким образом, обработка анолитом тканей позволяет генерировать ОН' без внесения в экспериментальную систему дополнительных согенераторов ПОЛ (аскорбат, Fe2+).
Полученные экспериментальные данные показали, что обработка анолитом гомогенатов тканей, плазмы и эритроцитов белых мышей вызывает достоверное увеличение содержания продуктов ПОЛ во всех биопробах (табл. 10).
По абсолютным величинам ДК и МДА весь исследованный биоматериал можно разделить на две группы:
а) группа тканей с высокой интенсивностью ПОЛ. По уровню содержания продуктов ПОЛ исследованные ткани можно распределить в следующей последовательности: поджелудочная железа > сердце > легкие > почки > мозг. Содержание ДК в группе изменяется от 32,6 ммоль/л (гомогенаты поджелудочной железы) до 21,1 ммоль/л (гомогенаты мозга). Наибольшее содержание МДА отмечается в гомогенатах поджелудочной железы и составляет 13,7 ммоль/л. В пределах группы наименьшее содержание МДА обнаружено в почках и составляет 8,5 ммоль/л.
Таблица 9. Содержание ДК и МДА в гомогенатах органов, плазме и эритроцитах интактных мышей в условиях оксидативного воздействия католитом
Исследуемый материал ДК, ммоль/л МДА, ммоль/л Кмда/дк
х ± тх Р х±тх Р
Поджелудочная железа 27,22 2,17 Р<0,02 10,58 0,89 Р<0,001 0,389
Сердце 28,54 1,67 РОДИ 16,86 1,59 Р<0,001 0,591
Легкие 21,59 1,01 Р<0,01 9,00 1,18 Р<0,001 0,417
Почки 19,85 1,15 Р<0,001 6,76 0,69 Р<0,001 0,341
Мозг 18,21 1,13 Р<0,001 8,10 0,99 Р<0,001 0,445
Эритроциты 11,67 0,98 Р<0,001 5,04 0,34 Р<0,001 0,432
Печень 10,01 1,05 Р<0,01 4,48 0,24 Р<0,001 0,448
Плазма 19,01 1,88 Р<0,001 7,83 0,56 Р<0,001 0,412
Мышцы 5,99 1,01 Р<0,05 1,80 0,29 Р<0,001 0,302
Примечание: пересчет проводили на 1г ткани для гомогенатов или на 1 мл для
плазмы и эритроцитов.
Таблица 10. Содержание ДК и МДА в гомогенатах органов, плазме и эритроцитах интактных мышей в условиях оксидативного воздействия анолитом
Исследуемый материал ДК, ммоль/л МДА, ммоль/л Кмда/дк
х + шх Р х±шх Р
Поджелудочная железа 32,64 2,04 Р<0,001 13,74 0,98 Р<0,001 0,421
Сердце 30,18 1,84 Р<0,001 18,59 1,02 Р<0,001 0,616
Легкие 26,55 1,08 Р<0,001 12,34 1,26 Р<0,001 0,465
Почки 21,98 0,98 Р<0,001 8,52 0,74 Р<0,001 0,388
Мозг 21,14 1,22 Р<0,001 10,12 0,65 Р<0,001 0,479
Эритроциты 20,11 1,32 Р<0,001 9,00 0,58 Р<0,001 0,448
Печень 14,03 1,12 Р<0,001 6,74 0,35 Р<0,001 0,481
Плазма 11,58 1,54 Р<0,001 4,92 0,38 Р<0,001 0,425
Мышцы 7,32 1,26 Р<0,01 2,30 0,41 Р<0,001 0,315
Примечание: пересчет проводили на 1г ткани для гомогенатов или на 1 мл для
плазмы и эритроцитов.
Для всех тканей указанного ряда содержание ДК в результате воздействия анолита возрастает приблизительно в 1,5 раза, а МДА - приблизительно в 5 -10 раз. Исключением из общей тенденции является плазма: содержание ДК возросло в 2,5 раза, а содержание МДА - в 15 раз ; эритроциты: содержание ДК возросло в 3 раза, а содержание МДА - в 20 раз. Такая значительная активация ПОЛ может быть связана с особенностями антиоксидантных свойств плазмы (Дубинина Е.В., 1993);
б) группа тканей с относительно низкой интенсивностью ПОЛ. По уровню содержания продуктов ПОЛ ткани группы можно распределить в следующей последовательности: эритроциты > печень > мышцы (табл. 10). В пределах группы содержание ДК изменяется от 20,1 ммоль/л (эритроциты) до 7,3 ммоль/л (гомогенаты мышц). Наибольшее содержание МДА в пределах группы отмечается для эритроцитов и составляет 9,0 ммоль/л. Наименьшее в пределах группы содержание МДА установлено для гомогенатов мышц - 2,3 ммоль/л. Для всех
тканей указанного ряда содержание ДК в результате воздействия анолита возрастает приблизительно в 1,5 - 2 раза, а МДА - приблизительно в 5 - 20 раз.
Если концентрацию продуктов ПОЛ в опыте выразить в процентах от концентрации продуктов ПОЛ в контроле, органы можно распределить следующим образом;
а) по степени снижения концентрации диеновых коньюгатов в гомогенатах: поджелудочная железа (50%) > почки (35%) > легкие (31%) > сердце (25%);
б) по степени снижения концентрации малонового диальдегида в гомогенатах: сердце (66%) > поджелудочная железа (55%) > легкие (44%) > почки (39%).
Выводы
1. Обнаруживается изменение значений биохимических показателей в экспериментах на белых мышах при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях. Изменения для анолита более выраженные по сравнению с католитом.
2. Введение животным per os растворов католита и анолита в течение нескольких дней приводит к более выраженным изменениям биохимических показателей по сравнению с однократным введением растворов.
3. Происходит подавление роста бактериальных клеток в присутствии католита и анолита, причем анолит и католит в концентрации 50 мкл\мл полностью подавляют рост клеток; при этом анолит в концентрации 1 мкл\мл - 10 мкл\мл обладает более высокой антибактериальной активностью по сравнению с раствором католита.
4. Использование наночастиц меди совместно с анолитом и католитом ослабляет антибактериальное действие анолита и католита в несколько раз.
5. Обнаруживается увеличение концентрации малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в тканях мышей и сыворотке крови при их обработке растворами католита и анолита; при этом анолит оказывает более выраженное прооксидантное действие на ткани белых беспородных мышей.
Практические рекомендации
Проведенный анализ позволит использовать результаты научных исследований для более широкого применения растворов анолита и католита в оториноларингологии для лечении больных с наружными отитами различной этиологии.
Список работ, опубликованных по теме диссертации
1. Боровский А.Л. Исследование биохимических показателей у мышей при приеме per os раствора анолита / А.Л. Боровский, О.В. Мареев, В.Б. Бородулин // Молодежь и наука: итоги и перспективы: Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Саратов, 2008. - С. 63.
2. Боровский А.Л. Исследование биохимических показателей у мышей при приеме per os раствора католита / А.Л. Боровский, О.В. Мареев, В.Б. Бородулин // Молодежь и наука: итоги и перспективы: Материалы межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием. - Саратов, 2008. - С. 63-64.
3. Изучение биохимических показателей у мышей при приеме per os раствора католита / А.Л. Боровский, О.В. Мареев, Ю.С. Дудакова и др. // Современный мир, природа и человек: Сборник научных трудов. - Томск, 2009. - Т. 1. - № 2. -С. 26.
4. Биохимические показатели белых беспородных мышей-самцов при приеме per os электрохимически активированного раствора анолита / А.Л. Боровский, О.В. Мареев, Ю.С. Дудакова и др. // Современный мир, природа и человек: Сборник научных трудов. - Томск, 2009. - Т. 1. - № 2. - С. 27.
5. Действие наночастиц меди на клинические штаммы грамотрицательных бактерий / И.В.Бабушкина, В.А. Мартьянова, А.Л. Боровский и др. // Вестник Российского университета дружбы народов. Серия: Медицина. - 2010 - №4. - С. 162-164.
Подписано в печать 18.01.2011 г. Объем 1.0 п.л. Тираж 100. Заказ № 6-Т Отпечатано в типографии СГУ г. Саратов, ул. Б. Казачья 112а тел.: (845-2) 27-33-85
Оглавление диссертации Боровский, Алексей Львович :: 2011 :: Саратов
ВВЕДЕНИЕ.
1.1. Некоторые аспекты получения и применения электрохимически активированного раствора анолита.В
1.2. Электрохимическая активация как физико-химический процесс.
1.3. Технология получения анолита АНК в установках СТЭЛ.
1.4. Химический состав анолита АНК.
1.5. Контроль физико-химических параметров и обозначение анолита АНК.
1.6. Практическое применение анолита АНК в многопрофильном лечебном учреждении.
1.7. Состояние иммунной системы при воздействии нейтрального анолита -АНК.
1.8. Изучение вероятности мутагенного эффекта электрохимически активированного раствора - анолит нейтральный АНК.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Установка СТЭЛ для получения анолита АНК в ЛИ У.
2.3. Методы исследования биохимических показателей сыворотки крови.
2.4. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. ИССЛЕДОВАНИЕ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ У МЫШЕЙ ПРИ ПРИЕМЕ PER OS РАСТВОРА АНОЛИТА.
3.1. Исследование биохимических показателей у мышей при приеме per os раствора католита.
ГЛАВА 4.
4.1. Бактериальные клетки и среды.
4.2. Влияние анолита на клинический штамм S. aureus.
4.3. Влияние смеси анолита и наночастиц меди на Е. coli.
ГЛАВА 5. ИССЛЕДОВАНИЕ ИНТЕНСИВНОСТИ ПЕРЕКИСНОГО ОКИСЛЕНИЯ ЛИПИДОВ В ГОМОГЕНАТАХ ТКАНЕЙ, ПЛАЗМЕ И ЭРИТРОЦИТАХ ИНТАКТНЫХ МЫШЕЙ.
Введение диссертации по теме "Клиническая лабораторная диагностика", Боровский, Алексей Львович, автореферат
Актуальность проблемы
Широкое распространение заболеваний? наружного уха; разнообразие микрофлоры (бактериальной и грибковой), склонность к рецидиву заболевания, с одной стороны, а с другой, - неудовлетворительная эффективность применяемых методов лечения и лекарственная устойчивость микроорганизмов, делают проблему весьма актуальной (Чеботарева Е.Г.,2004; Бабушкина И.В.,2010). Необходимо отметить и экономический фактор проблемы - многие медикаментозные препараты весьма дороги и вследствие этого лечение нередко проводят неадекватными препаратами (Richards Ji,2002).: Электрохимически активированные биоцидные растворы обладают универсальным спектром действия, то есть оказывают повреждающее влияние на все крупные систематические группы микробов (бактерии; грибы, вирусы и простейшие), не причиняя вреда клеткам тканей человека (Ревазова Ю. А., Верстакова.О. J1. и соавт., 2000; Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И. и соавт., 2001). Это обусловлено принципиальными отличиями в строении и условиях жизни клеток микро- и макроорганизма. Клетки высших организмов в процессе жизнедеятельностишродуцируют и используют целый/ ряд высокоактивных оксидантов, подобных тем; что содержатся в анолите. Система антиоксидантной защиты животных клеток предотвращает токсическое воздействие оксидантов на жизненно важные клеточные структуры. Микроорганизмы не продуцируют высокоактивных оксидантов и не имеют мощных систем антиоксидантной защиты, поэтому электрохимически активированные биоцидные растворы являются для них высокотоксичными. Вероятно^ вследствие этого не формируется резистентность микроорганизмов к ЭХА- растворам.
Цель исследования
Целью настоящей работы является выявление биологического действия растворов, содержащих активные формы кислорода в сочетании с наночастицами, на бактериальные клетки, выделенные от больных с заболеваниями наружного уха, и определение основных биохимических показателей у белых беспородных мышей-самцов.
Задачи исследования
1. Изучить изменение основных биохимических показателей в экспериментах на белых мышах при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях.
2. Изучить состояние перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты) сыворотки белых беспородных мышей-самцов при введении им католита и анолита.
3. Исследовать влияние католита и анолита на бактериальные клетки, полученные от больных при различных воспалительных заболеваниях наружного уха.
4. Исследовать влияние католита и анолита в сочетании с наночастицами меди на бактериальные клетки, полученные от больных при различных воспалительных заболеваниях наружного уха.
Научная новизна t
Предложены новые критерии оценки действия растворов католита и анолита в различных концентрациях на модельных животных.
Обнаружена выраженная антибактериальная активность католита и анолита, а также в сочетании с наночастицами.
Показано достоверное изменение биохимических показателей при введении животным растворов католита и анолита.
Практическая значимость
Проведенный анализ позволит использовать результаты научных исследований для более широкого использования растворов анолита и католита в лечении больных с наружными отитами различной этиологии.
Основные положения, выносимые на защиту
1. Обнаружено изменение биохимических показателей у белых мышей при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях.
2. Выявлено изменение состояния перекисного окисления липидов (малоновый диальдегид, диеновые конъюгаты) у белых беспородных мышей-самцов при введении им католита и анолита.
3. Установлено антибактериальное действие растворов католита и анолита, а также в сочетании с наночастицами.
Внедрение результатов работы в практику
Результаты работы внедрены в лечебно-диагностическую работу МУЗ ««Городская клиническая больница №10». Материалы работы используются в учебном процессе при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами и слушателями ФПК и ППС ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского Росздрава».
Апробация работы
Основные положения диссертации рассмотрены и обсуждены на межрегиональной научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежь и наука: итоги и перспективы» (Саратов, 2008), в сборнике научных трудов «Современный мир, природа и человек» (Томск, 2009),
Материалы диссертации обсуждены и одобрены на заседаниях кафедры биохимии и кафедры оториноларингологии ГОУ ВПО «Саратовский ГМУ им.В.И.Разумовского Росздрава».
Публикации
По теме диссертации опубликовано 5 научных работ, в которых отражены основные положения диссертации, в том числе 1 работа в изданиях, рекомендованном ВАК Минобрнауки РФ.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 135 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав, заключения, выводов и практических рекомендаций. Иллюстрирована 17 таблицами и 46 рисунками. Список использованной литературы содержит 165 отечественных и 56 иностранных источников.
Заключение диссертационного исследования на тему "Клинико-лабораторные и экспериментальные исследования растворов, содержащих активные формы кислорода, в сочетании с наночастицами"
110 Выводы
1. Обнаруживается изменение значений биохимических показателей в экспериментах на белых мышах при введении животным per os растворов католита и анолита в различных концентрациях. Изменения для анолита более выраженные по сравнению с католитом.
2. Введение животным per os растворов католита и анолита в течение нескольких дней приводит к более выраженным изменениям биохимических показателей по сравнению с однократным введением растворов.
3. Происходит подавление роста бактериальных клеток в присутствии католита и анолита, причем анолит и католит в концентрации 50 мкл\мл полностью подавляют рост клеток; при этом анолит в концентрации 1 мкл\мл — 10 мкл\мл обладает более высокой антибактериальной активностью по сравнению с раствором католита.
4. Использование наночастиц меди совместно с анолитом и католитом ослабляет антибактериальное действие анолита и католита в несколько раз.
5. Обнаруживается увеличение концентрации малонового диальдегида и диеновых конъюгатов в тканях мышей и сыворотке крови при их обработке растворами католита и анолита; при этом анолит оказывает более выраженное прооксидантное действие на ткани белых беспородных мышей.
Практические рекомендации
Проведенный анализ позволит использовать результаты научных исследований для более широкого использования растворов анолита и католита в оториноларингологии для лечения больных с наружными отитами различной этиологии.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Боровский, Алексей Львович
1. A.C. № 1594411, СССР. Способ деструкции комплексов металлов с гумусовыми веществами для анализа природных вод / Каплин A.A., Свинцова Л.Д., Мордвинова Н.М. и др. Опубл. 1990 г., Бюл. 35.
2. A.C. №1608560, СССР. Способ обработки поверхности индикаторного электрода для вольтамперометрического анализа/ Каплин A.A., Свинцова Л.Д., Мордвинова Н.М. и др. Опубл. 1990 г., Бюл. № 43.
3. Акимов Ю.П., Беликов B.C., Давыдов A.A., Бахир В.М. Электроактиватор бытовой. Свидетельство на промышленный образец №26926, 05.04.1988.
4. Алексеев A.A., Яковлев В.П., Федоров В.П., Крутиков М.Г. Инфекция у обожженных: вопросы патогенеза, профилактики и лечения.-//Хирургия.- 1999.- № 6.- С. 4- 9.
5. Алехин С.А., Бахир В.М., Борн Р.И., Гончаров П.В., Каримов Р., Кузнецов Э.Б., Мариампольский H.A., Тихонов Ю.П., Буров A.A. Устройство для электрообработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 997507, 27.05.1980.
6. Антонченко В.Я., Давыдов A.C., Ильин В.В. Основы физики воды. -Киев: Наукова думка, 1991 -668с.
7. Арчаков А.И. Микросомальное окисление. М.: Наука, 1975. - 327 с.
8. Арчаков А.И., Карузина И.И. Окисление чужеродных соединений и проблемы токсикологии // Вестник АМН СССР, 1988. №1. - С. 14-28.
9. Баженов Л.Г., Хаджибаев A.M. //Междунар. симпозиум "Электрохимическая активация", 1-й: Тезисы докладов и краткие сообщения. — М., 1997.—С. 124-125.
10. Бахир В.М. Дезинфекция питьевой воды: проблемы и решения. "Питьевая вода", 2003, - №1, - с. 13 - 20.
11. Бахир В.М. Лабораторный электрохимический диафрагменный проточный реактор РПЭ-1. Руководство по эксплуатации. М., ФМПК ГВЦ Госкомстата СССР, 1990. 35 с.
12. Бахир В.М. Медико-технические системы и технологии для синтеза электрохимически активированных растворов. М., ВНИИИМТД998. -66 с; - ил.
13. Бахир В.М. Современные технические электрохимические системы для обеззараживания, очистки и активирования воды. М.: ВНИИИМТ, 1999.-84 с.
14. Бахир В.М. Структура и физико-химическая активность электрохимически активированных водных растворов // Конференция Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности -М , 1994-С 24-28
15. Бахир В;М. Электрохимическая активация. М.; ВНИИИМТ, 1992, ч. 1. с. 197.
16. Бахир В.М. Электрохимическая активация. М.: ВНИИИМТ, 1992. 2ч. -657 с; -ил.
17. Бахир В.М., Алехин С.А., Наджимитдинов А., Мариампольский H.A., Бахир Т.М. Способ униполярной электрообработки жидкости и устройство для его осуществления; Авторское свидетельство СССР № 904394, 27.05.1980.
18. Бахир В.М., Веденков В.Г., Лир И.Л., Леонов Б.И., Пулавский A.M., Рыжнев В.Ю. Способ получения моющего и стерилизующего растворов для очистки и подготовки биофильтров к повторному использованию. Авторское свидетельство СССР № 2033807, 19.04.1990.
19. Бахир В.М., Вторенко В.И., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И. Некоторые аспекты получения и применения электрохимически активированного раствора анолита
20. Бахир В.М., Вторенко В.И., Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И. Эффективность и безопасность химических средств длядезинфекции, предстерилизационной очистки и стерилизации. Дезинфекционное дело, 2003, №1, с. 29-36.
21. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г. Установка для электрохимической обработки воды. Патент № 2056364, 15.03.1993.
22. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г. Устройство для электрохимической обработки воды. Патент № 2042639, 03.04.1992.
23. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г. Устройство для электрохимической обработки жидкости. Патент № 2063932, 11.10.1993.
24. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г. Устройство для электрохимической обработки воды. Патент № 2078737, 26.05.1994.
25. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для получения моющих и дезинфицирующих растворов. Патент № 2076847, 07.03.1995.
26. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для получения моющих и дезинфицирующих растворов. Патент № 2079575, 31.05.1995.
27. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для электрической обработки воды. Свидетельство на промышленный образец №3599, 22.11.1995.
28. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для электрохимической обработки воды и водных растворов. Патент № 2088539,31.05.1995.
29. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для электрохимической обработки воды. Свидетельство № 3600, 17.11.1995.
30. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Барабаш Т.Б. Устройство для электрохимической обработки воды. Свидетельство на промышленный образец № 3601, 27.11.1995.
31. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Веденков В.Г. Устройство для электрохимической обработки воды. Патент № 2038322, 03.04.1992.
32. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Машков O.A., Перловский Р.Ш., Прилуцкий В.И., Пулавский A.M., Рыжнев В.Ю., Штерн К.Л. Способ очистки диализных мембран. Авторское свидетельство СССР № 1707823, 13.09.1988.
33. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И., Сухова О.И. Электрохимическая активация: история, состояние, перспективы. -М.; ВНИИИМТ, 1999, -256 е.; ил.
34. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И. Электрохимическая активация: очистка воды и получение полезных растворов. М.: ВНИИИМТ; МСС, 2001.- 176 е.; ил
35. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Леонов Б.И., Паничева С.А., Прилуцкий В.И., Сухова О.И. Электрохимическая активация: история, состояние, перспективы. -М.; ВНИИИМТ, 1999, -256 е.; ил.
36. Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Рахманин Ю.А., Найда И.Н., Найда H.H., Джейранишвили Н.В., Бутин С.К. Устройство для очистки и обеззараживания воды. Патент № 2038323.03.04.1992.
37. Бахир В.М., Задорожный Ю.Г., Рахманин Ю.А. Устройство для обеззараживания и очистки воды. Патент № 20404477, 03.04.1992.
38. Бахир В.М., Кузнецов Э.Б., Алехин С.А., Мариампольский H.A., Борн Р.И. Устройство для электрообработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 904391, 27.05.1980.
39. Бахир В.М., Мязитов К.У. Использование электрохимически активированных растворов в сельском хозяйстве. Сельскохозяйственная117 ' '".v .экология: учеб; пособие. Саратов: Саратовская с.-х. акад., 1997, 146 -153с.
40. Бахир В.М., Спектор'Л;Е., Задорожний-Ю;Г., Лысен1со Н.М.; Рудинский Я.А. Устройство: для электрохимической .обработки жидкости. Авторское-свидетельство-СССР№1719316, 17.10.1986.
41. Бахир В.М., Спектор Л.Е., Латышев Ю.В., Задорожний Ю.Г., Мамаджанов У.Д., Мирзакаримова Г.Р., Кирпичников П.А., Лиакумович А.Г., Бахир Т.М. Переносное устройство для электрообработки-жидкости. Авторское свидетельство СССР № 1215306, 08.12.1982.
42. Белицкий Г. А., Фонштейн Л. М., Худолей В. В. и др. Совол, как индуктор микросомальных ферментов, активирующих проканцерогены. -Эксп. онкология, 1987, т. 9, № 3, с. 20.
43. Вакс В.Л., Домбачев Г.А. и др. // Известия вузов. Радиофизика, 1994. т.37, № I, с. 149-154.
44. Вторенко В.И., Вазило В.Е., Воронцов О.Н., Белицкий Г.А., Ревазова Ю.А., Юрченко В.В., Лычева Т.А., Хитрово И.А., Кривцова Е.К. Изучение вероятности мутогенного эффекта электрохимически активированного раствора анолит нейтральный АНК.
45. Вторенко В.И., Вазило В.Е., Воронцов О.Н., Суринов Б.П., Шарецкий А.Н., Исаева В.Г., Петров В.Н., Остроухова Ж.Ф. Состояние иммунной системы при воздействии нейтрального анолита АНК.
46. Гак Е.З., Девятое В.А. , Петров С.В. Перспективы применения электроактивированных растворов в медицине и санитарии. Тез. докл. на Международной конференции.- Алушта, 1992.- С. 51- 52.
47. Герловин И.Л. Основы единой теории всех взаимодействий в веществе.-Л.; Энергоатомиздат. 1990. 432 с.
48. Григорян P.M., Блатун Л.А., Зиганшина Л.Е. и др. Консервативное лечение больных с посттромбофлебитическим синдромом (ПТФС), осложненным язвами. Местное лечение ран. Материалы Всесоюзной конференции.- М., 1991.- С. 19- 20.
49. Грязнухин Э.Г. Афиногенов Г.Е. //Междунар. симпозиум "Электрохимическая активация", 2-й: Тезисы докладов и краткие сообщения. — М., 1999. —С. 156-158.
50. Гусак В.К., Сперанский И.И., Загоруйко H.H. Местное применение препаратов* вилозен и интерлок для подготовки длительно незаживающих ран> и трофических язв к аутодермопластике. Местное лечение ран. Материалы Всесоюзной конференции1.- М;, 1991.- С. 6970.
51. Даценко Б.М., Блатун Л.А., Перцев И.М. и др. Современные возможности и перспективы местного медикаментозного лечения гнойных ран. Материалы Всесоюзной конференции.- М., 1991.- С.20-23.
52. Даценко Б.М., Перцев И.М., Белов С.Г. и др. Многокомпонентные мази на гидрофильной основе длялеченшэьгнойных ран.- //Клин, хир.- 1984.-№1.- С. 10-14.
53. Девятов В.А. Мазь Девятова В.А. для лечения ран на. заявку №97116761'. Патент РФ №2145496.
54. Девятов В'.А. Применение в хирургии электрохимически .активированных водных- растворов и лекарственных средств^ на: их основе.- //Врач.- 2000:- №5.- С. 30- ЗГ.
55. Девятов: В.А1. Эффективно, безвредно, дешево. «Медицинская газета» от 25 сентября 1992 г. -№ 76 (5301);
56. Девятов В.А., Лахно B.Mi, Петров'C.B. Состояние иммунной системы при гнойных хирургических заболеваниях и пути» повышения ее эффективности. Тезисы Межрегиональной конференции с участием членов проблемной комиссии РАМН.- Екатеринбург, 1994.- С. 18-20.
57. Девятов В.А., Лахно В.М., Петров C.B., Куколева М.И. Пути* повышения эффективности санитарной обработки медицинскихпомещений.- Тез. докл. II Международного симпозиума врачей.-Анапа,1994.-С. 240- 242.
58. Девятов В.А., Петров C.B. Применение активированной электрохимическим методом воды для лечения гнойных, вялогранулирующих ран и трофических язв.- «Изобретатель и рационализатор».-1988,- №5.- С.45.
59. Девятов В.А., Повстяной Н.Е., Петров C.B. Иммунный фактор у больных с гнойными хирургическими заболеваниями. Тезисы докладов Второго Национального конгресса по профилактической медицине. Впервые в медицине. Санкт-Петербург, 1995. - № 2 - С. 48-49.
60. Девятов В.А., Розенфельд Л.Г., Повстяной Н.Е. и др. Профилактика инфекции в хирургии.-Челябинск, 1994.- 152с.
61. Дурнев А. Д., Ревазова Ю. А., Верстакова О. Л. и др. Методические указания по оценке мутагенных свойств фармакологических веществ. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва 2000, стр. 47-65.
62. Еськов А.П., Каюмов Р.И. Количественный экспресс-метод оценки токсичности полимеров с использованием клеточного тест-объекта. Методические рекомендации. Минздрав СССР. 1987.
63. Жарков С.С., Кустов В.В., Серяпин А.Д. Космическая биология и медицина, 1966.- 257 с.
64. Жегалов В.А., Дмитриев Г.И., Аминев В.А. и др. Современное понимание концепции медицинской реабилитации обожженных. Пластическая хирургия при ожогах и ранах. // Материалы конференции.- М., 1994.- С. 32- 34.
65. Задорожний Ю.Г., Бахир В.М., Спектор JI.E., Беликов B.C., Лысенко Н.М., Подколзин A.A., Дмитриев H.H., Штефан В.Н., Грачев Ю.А. Устройство для электрохимической обработки жидкости. Авторское свидетельство СССР № 1634643, 02.12.1986.
66. Задорожный Ю.Г., Бахир В.М. Переносное устройство для электрохимической обработки жидкости. Патент № 2040479, 16.06.1992.
67. Зарезаев О А , Корнеев Т К, Пани-чева С А Обработка рук хирурга электрохимически активированными водными растворами // Конференция Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности -М , 1994-С 88-90
68. Казанкин Д.С. Электрокинетические методы прижизненного исследования клеток. «МИС-РТ», сб. 17-3, 2000.
69. Кирпичников П.А., Бахир В.М., Гамер П.У., Добреньков Г.А., Лиакумович А.Г., Фридман Б. С., Агаджанян С.И. О природе электрохимической активации сред //Докл. АН СССР, 1986. Т. 286. № 3. С. 663-666.
70. Киселев Б.И. Метод адаптивного лечения (искусственный источник биополя в медецине). С.-Петербург; «Комплекс», вып. 1. 1997, 9 с.
71. Клосс А.И. Электрон-радикальная диссоциация и механизм активации воды // Доклады АН СССР. 1988. Т. 303, № 6, с. 1403-1407.
72. Концепция профилактики внутрибольничных инфекций / В.И.Покровский и др. МЗ РФ, 1999.
73. Красиков Н.Н.//Электротехника, 1996, № 4, с.57-59.
74. Краснобородько И.Г. Деструктивная очистка сточных вод от красителей. Л.: Химия, 1988. — 193 с.
75. Кузнецов Э.Б., Алехин С.А., Бахир В.М., Мариампольский H.A., Звягин B.C., Иванов В.Ю. Устройство для обработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 904396, 26.06.1980.
76. Лебедев П.Н. Избранные сочинения под ред. А.К. Тимирязева. М.-Л.: Гостехиздат, 1949. 244 с.
77. Леонов Б.И., Машков O.A., Веденков В.Г., Прилуцкий В.И., Оверченко A.B., Задорожний Ю.Г., Лир И.Л., Найда H.H., Бахир В.М. Устройство для гемодиализа. Авторское свидетельство СССР № 2032426, 06.07.1990.
78. Леонов Б.И., Прилуцкий В.И., Бахир В.М. Физико-химические аспекты биологического действия электрохимически активированной воды.: -М.: ВНИИИМТ, 1999. 244 е.; - ил.
79. Липсон А.Г., Кузнецов В.А. //Ж-п физической химии, 1996, т. 70, №9, с. 1718-1722.
80. Локтионова Н.В., Мельникова В.М., Шальней А. Н. и др. //Всерос. конф. "Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности": Тезисы докладов. —М., 1994. —4.2.—С. 115-118.
81. Локтионова Н.В., Самков A.C., Сухова О.И. и др. //Междунар. симпозиум "Электрохимическая активация", 1-й: Тезисы докладов и краткие сообщения. —М., 1997.—С. 68-69.
82. Лопаткин H.A., Лопухин Ю.М. Эфферентные методы в медицине (теоретические и экспериментальные аспекты экстракорпоральных методов лечения). М.: Медицина, 1989. - 352 с.
83. Лукашов В.В. Влияние гипохлорита натрия на эритроциты человека. В кн. «Новые методы дезинфекции и стерилизации в медицине». Дагомыс. 1991. С. 9-10.
84. Мамаджанов У.Д., Алехин С.А., Гуревич Л.Е., Юмашев А.П., Гончаров П.В., Кузнецов Э.Б., Бахир В.М. Устройство для электрообработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 1021210, 11.12.1980.
85. Мамаджанов У.Д., Алехин С.А., Султанов А.Я., Бахир В.М., Соколов Ю.Н., Лагуткин A.C. Система автоматического регулирования процесса очистки буровых растворов. Авторское свидетельство СССР № 604964, 12.04.1976.
86. Мамаджанов У.Д., Алехин С.А., Султанов А.Я., Бахир В.М., Сорокин Л.А., Задорожний Ю.Г. Способ приготовления бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 609867, 17.03.1976.
87. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Александров A.A., Задорожный Ю.Г., Соколов Ю.Н., Сорокин Л.А. Устройство для регулирования параметров бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 746082, 11.02.1976.
88. Мамаджанов У.Д:, Бахир В.М., Александров A.A., Соколов Ю.Н., Задорожний Ю.Г., Ризаев Г.С., Бахир Т.М., Александров В.А. Способ обработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР №• 716321, 11.07.1977.
89. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Алехин С.А. Способ регулирования свойств бурового раствора в процессе циркуляции. Авторское свидетельство СССР № 904370, 27.03.1979.
90. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Алехин С.А., Задорожний Ю.Г., Бахир Т.М. Способ обработки бурового раствора и устройство для его осуществления. Авторское свидетельство СССР № 904364, 22.03.1979.
91. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Алехин С.А., Клименко В.И. Способ очистки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 895172, 27.03.1979.
92. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Тихонов Ю.П., Алехин С.А., Звягин B.C. Устройство для приготовления жидкости затворения. Авторское свидетельство СССР № 970840, 28.05.1980.
93. Мамаджанов У.Д., Бахир В.М., Шамсутдинова В.Н., Бахир Т.М. Способ обработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 929682, 22.04.1974.
94. Мамаджанов У.Д., Гаврилов Е.Г., Алимджанов Х.А., Бахир В.М., Александров- A.A., Сорокин JI.A., Соколов Ю.Н., Задорожний Ю.Г. Способ приготовления бурового раствора. Авторское свидетельство СССР №619500; 19.01.1977.
95. Мамаджанов- У.Д., Кузнецов Э.Б., Бахир В.М., Буров A.A., Спектор JI.E., Клименко В.И. Устройство для обработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 1134697, 22.03.1982.
96. Мамаджанов У.Д:, Сорокин? Л.А., Бахир В.М., Соколов Ю.Н., Александров A.A. Устройство для разрушения пены., Авторское свидетельство СССР № 835169,- 06.10.1977.
97. Мамаджанов УД:, Сорокин Л.А., Бахир. В.М., Соколов. Ю.Н., Задорожний Ю.Г. Устройство для регулирования параметров бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 895152, 01.09.1976.
98. Материалы II Международного . Симпозиума- «Электрохимическая активация; в медицине; сельском- хозяйстве;. промышленности»; Mi: ВНИИ-Медтехники. 1999 . 4 1, 300 с. Ч 2 122с.
99. Мельникова^ B.Mi, Беликов. ЕП:, Локтионова Н.В. и др. //Конф. "Внутрибольничные инфекции^ — проблемы эпидемиологии, клиники, диагностики и профилактики": Тезисы докладов. — М;, 1999. — С.
100. Методические указания по применению нейтрального анолита АНК, вырабатываемого в установке СТЭЛ-1 ОН-120-01, ' для целей • дезинфекции; пред стерилизационной очистки и стерилизации;
101. Разрешение Департамента Госсанэпиднадзора Минздрава России от 14 февраля 1997г., № МУ-17-12.
102. Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей Среды с помощью бактериальных тест-систем (методические указания). М., 1985, с. 34.
103. Мирошников А.И. //Биофизика, 1998, т.43, вып. 3, с.555-559.
104. Мирошников А.И. //Биофизика, 1999, т.44, вып. 3, с.488-492.
105. Мирошников А.И. Влияние католита питательной среды на рост клеток Escherihia coli при экстремальных температурах//, Биофизика. 1999. Т.44, вып. 3. С.488-492.
106. Мирошников А.И. Исследование причин биологической активности прианодных растворов хлористого натрия после их обработки в диафрагменном электролизере //Биофизика. 1997. Т.42, вып.4. С.979-984. '
107. Наджимитдинов А.Х., Бахир В.М., Александров; A.A., Соколов Ю.Н., Задорожний Ю.Г., Александров В А. Устройство' для «опреснения воды:,. Авторское свидетельство СССР № 713140, 21.11.1977.
108. Отраслевой стандарт 42-21-2-65; Стерилизация и дезинфекция изделий медицинского назначения128/ Паничева С.А. Новые технологии дезинфекции ш стерилизации сложных изделий; медицинского назначения. Mi, ВНИИИМТ, 1998, . с. 122. ■ "
109. Пантелеева Л;Г., Арефьева Л.И., Киселева Г.А. и др. //Всерос. конф. "Методы и средства стерилизации и дезинфекции в медицине": Тезисы докладов. — М. 1992.—С. 74-75.
110. Патент РФ № 2024993. Способ очистки изделий, преимущественно полупроводниковых пластин./ Хаханина Т.И., Красавина Л.З., Клюева Т.Б. и др. Опубл. 15.12.94. Бюл. № 23.
111. Перова М. Д., Петросян Э. А., Банченко Г. В. Гипохлорит натрия и его использование в стоматологии.- Стоматология. 1989.- № 2.- с. 84 - 87.
112. Практическое руководство по применению средств дезинфекции и стерилизации в лечебно-профилактических учреждениях. Под ред. А.В.Авчинникова. Издание 4-е, исправленное и дополненное. -Смоленск: СГМА, 2002. 200 с.
113. Прилуцкий В.И., Бахир В.М. Электрохимически активированная вода. Аномальные свойства, механизм биологического действия. — М.: ВНИИИМТ. 1997. — С. 228.
114. Прилуцкий В.И. Аномальные свойства электрохимически активированных водных сред // II Всероссийская конференция — М., ВНИИИМТ, 1993 С. 38-41.
115. Пулавский A.M., Бахир В.М., Рыжнев В.Ю., Бялко М.В., Задорожний Ю.Г., Штерн К.Л. Устройство для электрохимической обработки жидкостей. Авторское свидетельство СССР № 1679746, 26.12.1988.
116. Пулавский A.M., Бахир В.М., Рыжнев В.Ю., Бялко М.В., Задорожний Ю.Г., Штерн К.Л. Способ стирки белья и устройство для его осуществления. Авторское свидетельство СССР № 1687684, 26.12.1988.
117. Рачитский Г.И., Чуев В.П., Камалов Р.Х., Сметаняк С.М., Колченко JI.A. Гипохлорит натрия: широкие возможности в стоматологии. Стоматология. 2001. -№6.
118. Реактор электрохимический 23.3.0061.00.00. (СТП 21.5-19-31). Полный комплект технических документов. ВНИИИМТ, М., 1989 г.
119. Руководство по краткосрочным тестам для выявления мутагенных и канцерогенных химических веществ. Гигиенические критерии состояния окружающей Среды 51. ВОЗ, Женева, 1989, 212 с.
120. Свинцова Л.Д., Каплин A.A., Вартаньян C.B. // Журн. анолит. химии. 1991. Т. 46. №5. С. 896.
121. Смоленская Л.З. Современные проблемы клинической микробиологии в инфекционной клинике // Актуальные проблемы клинической микробиологии. Сб. науч. тр. М., 1989 - С. 8-11.
122. Соколов Ю.Н., Бахир В.М., Александров A.A., Задорожний Ю.Г., Бахир Т.М., Александров В.А., Мошнягер Я.И. Устройство для очистки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 662688, 22.02.1978.
123. Соколов Ю.Н., Бахир В.М., Мамаджанов У.Д., Александров A.A., Хашимов М.А., Александров В.А., Задорожний Ю.Г., Газиев Д.Ш., Копач A.A. Устройство для электрообработки воды. Авторское свидетельство СССР № 691419, 11.07.1977.
124. Спектор Л.Е., Бахир В.М., Задорожний Ю.Г. Устройство для униполярной электрообработки жидкости. Авторское свидетельство СССР № 1476806, 05.03.1987.
125. Спектор Л.Е., Бахир В.М., Задорожний Ю.Г., Штефан В.Н. Устройство для униполярной обработки жидкости. Авторское свидетельство СССР № 1476807, 05.03.1987.
126. Спектор Л.Е., Кирпичников П.А., Бахир В.М., Лиакумович А.Г., Кузнецов Э.Б., Фридман Б.С., Мамаджанов У.Д. Устройство для электрической обработки жидкости. Авторское свидетельство СССР № 1100770,31.05.1982.
127. Спектор Л.Е., Лиакумович А.Г., Бахир В.М., Кузнецов Э.Б., Мамаджанов У.Д., Гамер П.У., Задорожний Ю.Г. Устройство для обработки бурового раствора. Авторское свидетельство СССР № 1090049, 06.10.1982.
128. Статистическая обработка данных тестирования на мутагенность. Методические указания. Вильнюс, 1989.
129. Тарасенко С. В., Агапов В. С. .Лакшин A.M. //Междунар. симпозиум "Электрохимическая активация". 2-й: Тезисы докладов и краткие сообщения. —М. 1999:—С. 176-178.
130. Тихонов Ю.П., Алехин С.А., Бахир В.М. Устройство для приготовления жидкости затворения. Авторское свидетельство СССР № 963220, 10.10.1979.
131. Тихонов Ю.П., Бахир В.М., Алехин С.А., Мариампольский H.A., Звягин B.C. Устройство для приготовления жидкости затворения. Авторское свидетельство СССР № 970841, 28.05.1980.
132. Федоров В.Д., Алексеев A.A., Лавров В.А. Пластическая хирургия при ожогах: этапы развития и перспективы. Пластическая хирургия при ожогах и ранах.// Материалы конференции.- М., 1994.- С.58- 59.
133. Фесенко Е.Е., Новоселова Е.Г., Огай В.Б., Агафонова Т.А., Глушкова О.В., Алющев Ф.К. Еремин С.М., Марков И.А., Тен Ю.А. Иммуномодулирующие свойства бидистиллированной модифицированной воды. // Биофизика 2001. Т. 46. вып. 2. С.353-358.
134. Филоненко В. И. и др. Использование электроактивной воды в процессе проращивания зерна для сельскохозяйственных животных. , Ж. «Активированная вода», М.: ВНИИМТ, №-5, 1997, 1 5с.
135. Чернышова H.H., Чернова Е.Е. // Журн. анолит. химии. 1992. Т. 47. № 8. С. 1472.
136. Шандала М.Г. Методологические проблемы современной дезинфектологии / Там же, с. 9—16.
137. Широносов В.Г. Резонанс в физике, химии и биологии. Ижевск. Издательский дом «Удмуртский университет», 2000/01, 92 с.
138. Широносов В.Г. Физические основы резонансной активации воды, 1-й Международный симпозиум. «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности», сб. докл.- М; ВНИИИМТ, ОАО НПО «Экран». 1997. с. 220.
139. Яфина Р.Х., Зуева J1.H. Эпидемиология внутрибольничной инфекции. -Л.: Медицина, 1989-С. 8-49, 100-150
140. Ames B.N., Gold L.S., Willet W.C. The Causes and Prevention of Cancer. J. Am. Med. Assoc., Special jssue on cancer, 1995/167. . Akar I.F. Resistence des bacterius, probleme mondial M/S: Med. Soi 1987.v.5№2p.66-67.
141. Amyes S.G.B., Gemmel C.G. Antibiotic resistance in bacteriae J. Med. Microbiol. 1992Y.36,1 ,p.4-2
142. Bakhir V.M., Zadorozhny Y.G. An electrolytic method of drinking water purification. UK Patent 2 257 982 B, 24.07.1991.
143. Bakhir V.M., Zadorozhny Y.G. The electrochemical treatment of water and a device for electrochemically treating water. UK Patent 2 253 860 B, 12.03.1991.
144. Bisno A.L., Stevens D.L. Streptococcial infections of skin and soft tissues. N. Engl. J. Med. 1996; 334; 240-245.
145. Boyce I.M., lackson M.M. Pugliese G., et al. Methicillin resistant Staphylococcus aureus (MRSA): a briefing for acute care hospitals and nursing facilities//Infect Control Hosp Epidemiol. 1994; 15; 105-115.
146. Brook I., Finegold S.M. Bacteriology of ofitis media J.A.M.A. 1979 v. 241. p.487-488.
147. Bauchner H., Adams W., Bernet E., et.al. Therapy for acute otitis media // Arch pediatr adolesc med. -1996. V. 150. - P. 396-340.
148. Crane A. B. Practicable Root Canal technique. Philadelphia, 1920. - p. 69.176. . Crossley K. Streptococci. In: Mayhall C.G., editor. Hospital epidemiology and infection control. Baltimore: Williams and Wilkins; 1996, p.326-24.
149. Dakin H. D. British Medicine Journal, 1915, vol. 2. - p. 318-320.
150. Department of Health, United Kingdom. Standard Principles for preventing hospital acquired infections. Journal of Hospital Infection 2001; 47 (Suppl); p.21-37.
151. Esser C. Dioxins and the immune System Mechanisms of interference. Int. Arch. Allergy andAppl. Immunol., 1994, v. 104, p. 126.
152. Elmer G.W., Mc Farland L.V., Surawioz M. Bioterapeutic Agents and infections Diseases. Humana Press, Totowa, New Jersey, 1999, p.316.
153. Faust S.D., Aly O.M. Chemistry of water treatment // 2nd Edition, Lewis Publishers, L., NY, W. D.C., 1998. 582 p.
154. Flanagan P., Flanagan G.C. Elixer of the Ageless, Liquid Crystal Water, Electro-Colloidal Mineral Concentrate, 2nd ed. Flagstaff, AZ. Vortex Press; 1986.
155. Foca M., et al. Endemic Pseudomonas aeruginosa infection in a Neonatal Intensive Care Unit. N. Engl J. Med 2000; 343; 695-700.
156. Geo, Clifford White, Handbook of chlorination and alternative disinfectants -1999, Fourth Edition, A Wiley-Interscience Publication, 1659 p.
157. Glass B. Exposure to Glutaraldehyde Alone or in a Fume Mix: a Review of 26 cases//Journal of the NZMRT, 1997. V. 40. - № 2, June. - P.13-17.
158. Gonte I.E. Manual of antibiotics and infections diseases. 8-th ed Williams and Wilkins. Baltimore, Maryland, USA, 1995, 499 p.
159. Giebinc C.S. The microbiology of otitis media Pediatr. Infect. Dis-1989.-V.8.-P. 18-20.
160. Global Consensus Conference on Infection Control Issues Related to antimicrobial Resistance. Global Consensus Conference: Final Recommendation. American Journal of Infection Control 1999: 27:503-513.
161. Hariharan R., Weinstein R.A. Enterobacteriaceae. Yn: Mayhall C.G., editor. Hospital epidemiology and infection control. Baltimore: Williams and Wilkins Publishers; 1996, p.345-366.
162. Maron D. M., Ames B. N. Revised methods for the Salmonella mutagenicity test. Mutat. Res., 1983, 113, №3-4, P. 173-215.
163. Madigan M.T., Martinko J.M., Parker J. Brock Biology of microorganisms. 8 ed. Prentice Hall International. Inc., Upper Saddle River, 1997.
164. Mehta R.M., Niederman M.S. Curr. Opin. Infect. Dis. 2002. Vol.l5.P.387197. . Morris A.J., Wenzel R.P. Epidemiology of infection clue to Pseudomonas aeruginosa. Rev. Infect. Dis. 1984: 6: p.627-642.
165. National Comittee for Clinical and Labaratory Standards. Performance Standarts for antimicrobial susceptibility testing: Ninth inform, supple, M. 100,p9,1999.
166. Nemec A., Dijksboorn L., Jezek P.J. Clin.Microbiolog. 2000; 38; 39373941
167. Pitsigavdaki E., Apostolou D., Mitsou I., et al. Isolation frequency of aerobic microorganisms in infections from ears //Acta Microbiol. Hellenica 1986. V. 31.P.81-94.
168. Post J.C., Preston R.A., Aul J.J., et al. Molecular analusis of bacterial pathogens in otitis media with effusion // JAMA. 1995. - V. 273. -P. 15981604.
169. Richards J. Withdrawal of Disinfectant Hit by Safety Fears // BBC News on Line: Health. January 22, 2002.
170. Rhame F.S. The Inanimate Environment Yn. Bennet J.V., Brachman P.S., editors. Hospital infection. 4 ed. Philadelphia; Lippincott Raven, p. 299-324.
171. Schwartz B., Marcy S.M., Phillips W.R. et al. Pharyngitis principles of indicions use of antimicrobial agents. Pediatrics 1998; 101; 171.
172. Swartz M.N: Hospital-acgruired infections: diseases with increasingly Limited-Therapies. Proc. Natl. Acad. Sci USA 1994; 91; 2420-2427.
173. Shlaes D.M., Gerding D.N., John J.F., et al. Society for Healthcare Epidemiology of America and Infections Diseases Society of American joint committee on the prevention of antimicrobial resistance in hospitals. Clin. Infect. Dis 1997; 25; p.584-99.
174. Teele D.W., Relton S.I., Klein J.O. Bacteriology of acute otitis media unresponsive to initial antimicrobial therapy // J. Pediatr. 1981. - V. 98. -P. 537-539.
175. U.S. Environmental Protection Agency. 1991. Status Report on Development of Regulations for Disinfectants and Disinfection By-Products.
176. Van Peursem, R.M., Pospishu, B.K., Harris, W.D., "Antiseptic Hypochlorite by electrolisys," Iowa State College J. Sci, -1929, vol. 4.
177. Verbist L. Incidence of multi-resistance in gram-negative bacterial isolates from intensive care units in Belgium: a Surveillance study Scand. J. Infect. Diseases. Suppl. 1991. 78. P. 45-53.
178. Welch H.C. Antibiotic resistance. A new kind of epidemic Postgrad. Med. 1984. v.76, №6 p.63-66.
179. Wenzel R.P., Edmond M.B. Managing Antibiotic Resistance. N. Engle. J. Med. 2000; 343; p. 1961-1963.219. . Wolff M. Epidemiology of antibiotic resistance: implications for empirical treatment in intensive care, Schweix Med Wochenschz, 1995,p 125,p 36
180. Wong E.S. Surgical site infections. Yn: Mayhall C.G., editor hospital epidemiology and infection control. Williams Wilkins, 1996, p. 155-156.
181. Water Quality & Treatment. A Handbook of Community Water Suppliers. American Water Works Association. Fifth Edition. Technical Editor Raymond D. Letterman. McGRAW-HILL, INC., 1999.