Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:Клинико-лабораторное обоснование применения метода полимеразной цепной реакции при диагностике воспалительных заболеваний полости рта

005009469

ЧОНИАШВИЛИ ДАВИД ЗУРАБОВИЧ

Клинико-лабораторное обоснование применения метода полимеразной цепной реакции при диагностике воспалительных заболеваний полости рта

14.01.14 - стоматология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2012

2 5 ЯНВ 2072

005009469

Работа выполнена на кафедре клинической стоматологии и имплантологии ФГОУ ДПО «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства» (ФМБА России).

Научный руководитель

доктор медицинских наук, профессор Олесова Валентина Николаевна

Научный консультант

Официальные оппоненты

Ведущее учреждение

доктор биологических наук Щербо С.Н.

доктор медицинских наук, профессор Шугайлов Игорь Александрович доктор медицинских наук Амхадова Малкан Абдрашитова»

ГОУ ВПО Московский государственный медико-стоматологический университет Минздравсоцразвития РФ

Защита состоится « » 2012 г. в СЮ часов

на заседании диссертационного Совета Д 208.120.01 при Институте повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства (125371, Москва, Волоколамское шоссе, 91)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства (125371, Москва, Волоколамское шоссе, 91)

Автореферат разослан « » 2012г.

Ученый секретарь диссертационного Совета, д.м.н., профессор

Кипарисова Е.С.

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. В основу этиологии и патогенеза воспалительных заболеваний пародонта положена мультифакторная модель (Аболмасов Н.Н, 2005; Безрукова И.В. 2001; Грудянов А.И., 2007; Дмитриева Л.А., Чернышева С.Б., 2007; Курякина Н.В., 2007; Орехова Л.Ю.Дучумова Е.Д. и др., 2008; Янушевич О.О., Гринин В.М., 2010; Marsch P.D.. 2003; Naka S., Yamana A. et al., 2009). В зависимости от результатов оценки причин, связанных с началом и прогрессированием заболеваний пародонта, выбирают дизайн обследования больных и оценки значимости его результатов.

В этиопатогенезе воспалительных заболеваний тканей полости рта, в частности пародонтита, важнейшую роль играют нарушения ассоциативных взаимоотношений представителей автономной флоры полости рта: частичное или полное вытеснение характеристических видов; усиленное размножение бактерий, не свойственных для микробиоценоза полости рта здорового человека. Микроэкологические изменения на поверхности зубов и десен, усиленное размножение оппортунистических патогенов являются одной из важнейших причин развития воспалительно-деструктивных процессов в тканях пародонта. Основным этиологическим фактором воспалительных заболеваний пародонта в настоящее время считаются микроорганизмы, прежде всего, пародонтопатогенные бактерии (Афанасьев У.В., Соловьева A.M. и др., 2001; Бадреддин Дж., 2007; Грудянов А.И., Овчинникова Л.И., 2009; Дмитриева Л.А., Чернышева С.Б., 2007; Иванов С.Ю., Царев В.Н. и др., 2005; Царев В.Н., Николаева E.H. и др., 2009; Allais G., 2006; Holt S.C., 2004; Tanner A.C.R. et al., 2011). Микроорганизмы и продукты их жизнедеятельности вызывают воспалительно-дегенеративные изменения тканей пародонта. Риск прогрессирования заболевания и резистентности к лечению выше при комбинации нескольких видов патогенных микроорганизмов.

В связи с этим при обследовании пациентов с пародонтитом, в частности при подготовке к операции дентальной имплантации, необходима информация о наличии в пародонтальных карманах инфекционных агентов, что связано с задачей рационального выбора антибактериальных препаратов, адекватных методик лечения и контроля эффективности лечения.

В ряде случаев недостаточная эффективность лечения может быть связана с вовлечением в этиопатогенез пародонтита не только бактерий, г~ " f

вирусов и грибов кандида. Актуально изучение стоматологических аспектов герпесвирусной инфекции, актиномицет, хламидиоза и кандидоза.

В ряде работ представлены результаты использования молекулярно-генетических методов в стоматологии и, в частности, в пародонтологии (Грудянов А.И., Овчинникова В.В. 2008, 2009; Николаева E.H., 2008; Царев В.Н. и др., 2007;) . Молекулярно-генетические методы получили широкое применение в диагностике инфекционных и наследственных заболеваний (Молочков В.А. Кириченко И.М. и др., 2004).

Полиэтиологичность микробиологических и вирусных агентов заставляет исследователей изыскивать и внедрять мультипраймерные технологии молекулярно-генетической диагностики. Интенсивно развиваются современные генетические технологии - амплификационные методы, в частности, полимеразная цепная реакция (ПЦР и ее разновидности) (Николаева E.H., Царев В.Н., Щербо С.Н., 2004; Безрукова И.В., Петрухина Н.Б., Щербо С.Н., 2005; Ребриков Д.В и др., 2009) Актуальны отечественные разработки для комплексного выявления генетических маркеров пародонтопатогенов и других инфекционных агентов с использованием молекулярно-генетического метода ПЦР и их внедрение в практику.

Цель исследования: совершенствование диагностики и контроля . эффективности лечения пародонтита с использованием молекулярно-генетического исследования содержимого пародонтальных карманов.

Задачи исследования:

1.Для ускорения молекулярно-генетической диагностики пародонтопатогенных бактерий разработать высокочувствительный мультипраймерный набор ПЦР-диагностики пародонтопатогенов и оптимизировать оценку результатов исследования.

2. Определить частоту выделения и относительную концентрацию пародонтопатогенных бактерий в десневой борозде у лиц с здоровым пародонтом по данным ПЦР-диагностики.

3. Изучить частоту выделения и относительную концентрацию пародонтопатогенов в пародонтальных карманах при хроническом генерализованном пародонтите с использованием мультипраймерного набора молекулярно-генетической диагностики.

4. Сопоставить данные молекулярно-генетической диагностики микрофлоры полости рта у лиц с радиационно-опасными и нормальными условиями труда.

5. Разработать и провести апробацию мультипраймерного набора для выявления ДНК ряда актиномицет в пародонтальных карманах при пародонтите.

6. С помощью мультипраймерного набора для молекулярно-генетической диагностики вирусов установить их содержание в пародонтальных карманах у больных пародонтитом.

7. Выявить эффективность предимплантационной санации пародонта по данным ПЦР-диагностики содержимого пародонтальных карманов.

Новизна исследования. Впервые разработан и апробирован мультипраймерный набор для полимеразной цепной реакции при молекулярно-генетической диагностике основных пародонтопатогенных бактерий: Prevotella intermedia, Tannerella forsythensis, Treponema denticola, Actinobacillus actinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis; определены критерии качественной оценки наличия пародонтопатогенов.

Впервые сопоставлено содержание пародонтопатогенов у лиц с нормальными и радиационно-опасными условиями труда. Проведено сравнение частоты выявления пародонтопатогенов методом ПЦР-диагностики у лиц с здоровым пародонтом и при пародонтите.

Впервые прослежена динамика снижения пародонтопатогенов в ходе лечения хронического пародонтита средней степени тяжести перед дентальной имплантацией и дана оценка эффективности лечения пародонтита по результатам ПЦР-диагностики.

Впервые разработан и апробирован мультипраймерный набор для ПЦР-диагностики актиномицет при пародонтите. Применен мультипраймерный набор для ПЦР выявления герпесвирусов в пародонтальных карманах при пародонтите.

Впервые проведена молекулярно-генетическая диагностика сопутствующих инфекций в содержимом пародонтальных карманов при пародонтите (хламидии, кандида альбиканс) с помощью мультипраймерного набора до и после лечения.

Практическая значимость исследования. Для практической стоматологии предложены мультипраймерные наборы для молекулярно-

генетической диагностики пародонтопатогенов, актиномицет в содержимом пародонтальных карманов. Показана возможность использования генодиагностики грибов кандида и вирусов для исследования содержимого пародонтальных карманов при пародонтите.

Дана частота выявления разных микроорганизмов в пародонтальных карманах у лиц с здоровым пародонтом, при пародонтите и после его лечения. По данным ПЦР-диагностики пародонтопатогенов установлена эффективность предимплантационной пародонтологической подготовки.

Показана идентичность микробиоценоза в полости рта у лиц с нормальными и радиационно-опасными условиями труда по результатам молекулярно-генетического выявления потенциальных возбудителей пародонтита.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный мультипраймерный набор для ПЦР-диагностики пародонтопатогенных бактерий обеспечивает выявление и способствует адекватной оценке пародонтопатогенов в пародонтальных карманах.

2. Частота выявления и относительная концентрация пародонтопатогенных бактерий в десневой борозде у лиц с здоровым пародонтом несущественна.

3. ПЦР-диагностика с использованием мультипраймерного набора выявляет наличие пародонтопатогенов в пародонтальных карманах у всех больных пародонтитом с относительной концентрацией разных бактерий до уровня среднего и сильного ответа у 38,1% больных.

4. Радиационно-опасные условия труда не влияют на состав и относительную концентрацию пародонтопатогенных микроорганизмов при пародонтите.

5. Эффективность лечения хронического генерализованного пародонтита перед операцией имплантации по данным ПЦР-диагностики пародонтопатогенных бактерий составляет 89,1%; частота выделения пародонтопатогенов в пародонтальных карманах снижается в 4-10 раз.

6. По данным молекулярно-генетической диагностики хронический генерализованный пародонтит сопровождается выявлением в пародонтальных карманах у трети больных, наряду с пародонтопатогенными бактериями, возбудителей сопутствующих инфекций: хламидий, вируса Эпштейна-Барра и

кандида альбиканс, которые практически исчезают из пародонтальных карманов после лечения пародонтита.

7. Разработанный мультипраймерный набор для молекулярно-генетической диагностики актиномицет у большинства больных пародонтитом выявляет Actinomyces spp. в пародонтальных карманах.

8. Мультипраймерный набор для молекулярно-генетической диагностики вирусов выявляет вирус простого герпеса и Эпштейна-Барра в среднем у 10,0% больных пародонтитом.

Апробация работы. Результаты исследования доложены на II съезде микологов России (Москва, 2008), XV Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2008), VIII научно-практической конференции с международным участием «Современные методы диагностики, лечения и профилактики стоматологических заболеваний» (Санкт-Петербург, 2011), а также на заседании кафедры клинической стоматологии и имплантологии ИПК ФМБА России (2011).

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в практику работы Клинического центра стоматологии ФМБА России, ООО «ДИАСАН» (г. Москва), Центральной районной больницы г.Ардона (Северная Осетия-Алания), Медицинского центра «XXI век» (Северная Осетия-Алания, г. Владикавказ); в учебный процесс на кафедре клинической стоматологии и имплантологии ИПК ФМБА России, кафедре стоматологии ФПДО ГОУ ВПО СОГМА Росздрава.

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 6 в журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 119 листах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований собственных исследований, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы. Диссертация иллюстрирована 15 рисунками и 5 таблицами. Указатель литературы включает 239 источников, из которых 140 отечественных и 99 зарубежных.

Содержание работы

Материал и методы исследования. В период 2006-2011гг. проведено комплексное обследование 300 человек (154 женщин, 146 мужчин), обратившихся в Клинический центр стоматологии ФМБА России и ряд других

стоматологических клиник Москвы в связи с проявлениями хронического генерализованного пародонтита (ХГП). Возраст обследованных варьировал от 32 до 56 лет (в среднем 41,3±1,2 лет). Среди обследованных 116 человек мужского пола работали на предприятиях атомной промышленности с опасными условиями труда (радиационный производственный фактор не менее 5 лет). После проведенного пародонтологического лечения у 46 человек были установлены дентальные имплантаты (Alfa Bio, Израиль) по двухэтапной методике. Лечение пародонтита проводилось с использованием стандартных терапевтических, хирургических и ортопедических методик (Грудянов А.И., 2004; Грудянов А.И., Ерохин А.И., 2006; Довбнева Е.С., 2011;)

Контрольная группа лиц с здоровым пародонтом включала 122 человека с средним возрастом 21,6±0,7 лет.

При оценке состояния пародонта, наряду с клиническим обследованием, проводилась рентгенортопантомография, по показаниям дентальная рентгенография, конусная компьютерная томография (ортопантомограф ОРЮО D, Финляндия; компьютерный томограф Galileos, Германия;

рентгенрадиовизиограф Sidexis, Германия).

Индексная оценка состояния пародонта включала определение следующих показателей: индекс РМА (в модификации Parma), индекс кровоточивости Muhlemann-SBI, индекс гигиены Greene-Vermillion (OHI-S), пародонтальный индекс (PI).

Молекулярно-генетическая диагностика микрофлоры пародонтапьных карманов проводилась до и после лечения пародонтита в ходе подготовки к имплантации. После забора из пародонтапьных карманов материал переносили зондом в пробирку типа Эппендорф с физиологическим раствором. Ускоренную пробоподготовку клинических образцов проводили с использованием экстрагена (смеси ионообменников) и энзимикса (протеолитического комплекса). Анализируемые ДНК-пробы центрифугировали, инкубировали, в реакции амплификации использовали Юмкл чистого (без частичек экстрагена) супернатанта. Реакцию амплификации проводили на аппарате «Терцик МС2» (НПФ ДНК-Технология, Россия).

Конструирование олигонуклеотидных праймеров для ПЦР при генодиагностике пародонтопатогенов и актиномицет проводилось с помощью программы Oligo 6.31 и Vector NTI. Теоретический анализ специфичности праймеров для ПЦР проводился с помощью on-line программы

BLAST/(www. ncbi.nlm.nih.gov/BLAST). подбор праймеров в полуавтоматическом режиме - по данным сети интернета с сайта www.ncbi.org и при обращении к базам данных Medline, Medscape, Medpulse и Medconsult.

При определении ДНК герпесвирусов, хламидии трахоматис, кандида альбиканс, использовали реактивы ООО НПФ «Гентех» (Москва, Россия).

Регистрацию результатов ПЦР проводили с помощью электрофоретической детекции, применяя буфер для электрофореза (ЭФБ), агарозу, раствор этидиума бромида при напряжении в электрофоретической камере 10-15 В/см. После окончания электрофореза гель переносили на стекло УФ трансиллюминатора и проводили анализ результатов. Светящаяся полоса на уровне К+ свидетельствует о наличии, а ее отсутствие - об отсутствии данного возбудителя в анализируемой пробе.

Статистическая обработка результатов исследования проводилась с помощью стандартного набора инструментов офисного приложения Microsoft Office Excel 2010. Вычислялись среднее арифметическое значение (М), стандартная ошибка среднего (т). Статистическая значимость полученных результатов (р) вычислялась с использованием критерия Стьюдента (t) и его интерпретации на основании стандартной таблицы критических значений коэффициента Стьюдента. Уровень значимости (а) соответствовал вероятности ос-ошибки равной 5% (а=0,05), статистически значимыми признавались результаты при р<0,05.

Результаты исследований. При разработке набора реагентов для выявления пародонтопатогенных бактерий (Pi - Prevotella intermedia, Tf -Tannerella forsythensis, Td - Treponema denticola, Aac - Actinobacillus actinomycetemcomitans, Pg - Porphyromonas gingivalis) в качестве молекулярно-генетического метода исследования нами применен метод мультипраймерной ПЦР. На первом этапе были выбраны нуклеотидные последовательности праймеров для генодиагностики микроорганизмов из генетических баз данных и литературных источников. Затем производили оптимизацию условий проведения ПЦР. На третьем этапе происходила визуализация получаемых результатов с помощью видеокомпьютерной системы для просмотра электрофореграммы в УФ-свете с оценкой размеров амплифицированных фрагментов для определения наличия исследуемых микроорганизмов. Размеры амплифицированной области геномов в парах нуклеотидов (п.н.) составляли:

для Р1 - 1000 п. н„ Т^ 747 п.н., Т(1 - 512 п.н., Аас - 360 п.н., - 174 п.н. Области геномов и амплифицирующие фрагменты были выбраны с учетом того обстоятельства, что размеры апликонов должны отличаться настолько, чтобы обеспечивать хорошее разделение при электрофоретическом анализе в геле. В амплификации использовали прямые и обратные олигонуклеотидные праймеры, специфичные для фрагментов геномов определяемых микроорганизмов. Чувствительность созданного набора реагентов составляет не более 104 копий/мл для каждого возбудителя. Для предотвращения появления неспецифических продуктов ПЦР проведена оптимизация условий протекания ПЦР реакции: структура олигонуклеотидных праймеров, концентрация термостабильной Тад-полимеразы и дНТФ, содержания ПЦР буфера, времени и температуры отжига праймеров, количество и продолжительность циклов реакции.

Выбран наиболее предпочтительный режим амплификации для термостата «Терцик» - при температуре отжига праймеров 60 С°. Предложенный набор реактивов позволяет одновременно и быстро идентифицировать в одной пробе пять видов пародонтопатогенов с помощью одноступенчатой мультипраймерной ПЦР (Рис. 1).

М 1 2 3 45 678 К

Рисунок 1. Электрофореграмма продуктов ПЦР в 1,6 % агарозном геле: К - положительный контрольный образец ДНК, М - маркеры молекулярного веса ДНК, 1- 6, 8 - положительные клинические пробы, 7 - отрицательная

клиническая проба.

Определение возбудителя используемым набором реактивов качественное, поэтому результат должен интерпретироваться, как «обнаружено» или «не обнаружено». Однако интенсивность полос на электрофореграмме в определенной степени отражает концентрацию

инфекционного возбудителя, поэтому результат можно дополнить в терминах: «+» - очень слабый ответ, «++» - слабый ответ, «+++» - средний ответ и «++++» - сильный ответ.

При обследовании с помощью мультипраймерного набора содержимого десневой борозды у 122 лиц со здоровым пародонтом выявлена ДНК Аас у 4,1% обследованных, И - у 0,8%, ТГ-у 3,3%, Тс! - у 1,6%; Pg - 0,0% (Рис. 2.). При этом относительное содержание указанных пародонтопатогенов не превышала уровень слабого ответа («++» - 41,6% из всех случаев регистрации возбудителей), или соответствовала уровню очень слабого ответа («+» -58,4%).

По сравнению с контрольной группой у больных пародонтитом частота выявления пародонтопатогенных бактерий возрастала в среднем в 30 раз (Рис. 2.): Р1 выявлена у 50,0% больных, ТГ-у 73,3%, Тс1 - у 70,0%, Аас - у 33,3%, Р§ -у 63,3%.

р| _.....^

тf № ,....,.,.......................„.„,,, ......^„„.^Г^аа^р! 3

тс< Ш^Ш/^ШШЯЯШШШЯШШ^о

Аас —...А1__-

■ Контроль к Пародонтит

Рисунок 2. Частота выявления ДНК пародонтопатогенов в области зубодесневой борозды у больных ХГП и людей со здоровым пародонтом.

Относительная концентрация выявленных пародонтопатогенов в среднем соответствовала следующим уровням: очень слабый ответ 38,7%, слабый ответ 23,3%, средний ответ 18,6%, сильный ответ 19,5% (Рис.3). Соответствующие показатели для Р1 26,7%, 33,3%, 13,3%, 27,7%; для Tf 63,6%, 13,6%, 13,6%, 9,2%; для Т<1 42,9%, 28,6%, 9,5%, 19,0%; для Аас 50,0%, 20,0%, 20,0%, 10,0%; для Рё 10,5%, 21,1%, 36,8%; 31,6%.

Р1 Tf

та

Аас

33,3

13.3__ 27,7

Л

,„„„63.6

42.9

. 13.6 13.6 9.2

28.6...... 9.5 19.0

20,0 20,0 10,0

Н),!> 21,1. 36,8 31.6

1 20 40 60 80 100

Очень слабый Слабый Средний Сильный

Рисунок 3. Сравнительная структура выявляемое™ пародонтопатогенных бактерий у больных пародонтитом (по относительному содержанию).

Не выявлено разницы в результатах ПЦР исследования содержимого пародонтальных карманов у работников с радиационно-опасными и нормальными условиями труда (Рис. 4). Соответвующее содержание Р1 в пародонтальных карманах было 50,9% и 48,9%; Т^ 74,9% и 71,7%; Т<1 - 72,1% и 67,9%; Аас - 34,0% и 32,6%; Р§ - 64,1% и 62,5%.

Рисунок 4. Частота выявления ДНК пародонтопатогенов при пародонтите у работников с нормальными (НУТ) и радиационно-опасными (РОУТ) условиями труда.

В группе пациентов перед дентальной имплантацией в результате лечения хронического генерализованного пародонтита средней степени тяжести произошла элиминация пародонтопатогенных бактерий из пародонтальных карманов у большинства обследованных (Рис. 5)

Так, частота выявления Р1 снизилась в 4,4 раз (от 47,8% до 10,9%), в 8,2 раз (от 71,7% до 8,7%), Тс! - в 10,4 раз (от 67,4% до 6,5%), Pg - в 7,2 раз (от 63,0% до 8,7), Аас не выделялась после лечения. У 5 человек (10,9%) выявлены пародонтопатогены после пародонтального лечения, в связи с этим операция имплантации у этих пациентов были отложены.

Л %

Р1 10,9 тт^^т^шввяшвшгя 47,8

Tf 8,7 . ШЛШ 717

Тс1 6,5 , В 67,4

Аас 0 ВйША ■ ? «ь

Рё 8.7 ... Ш 63,0

После лечения и До лечения

Рисунок 5. Динамика результатов ПЦР-диагностики пародонтопатогенных бактерий до и после лечения пародонтита.

Относительное содержание пародонтопатогенов перед началом лечения составляла по уровню ответа: очень слабый ответ 37,0%; слабый ответ 21,7%; средний ответ 17,4%; сильный ответ 19,6%; частота проявления сильного и среднего ответа была значительна. После лечения у пациентов с положительной ПЦР при выявлении пародонтопатогенов регистрировался исходный, преимущественно сильный или средний ответ.

При диагностике возбудителей сопутствующих инфекций в пародонтальных карманах перед лечением пародонтита частота выявления составляла: Хл - 0,0%; ВПГ - 4,4%; ЦМВ - 0,0%; ВЭБ - 21,7%; кандида альбиканс - 30,4%. При этом относительная концентрация ВПГ не превышала уровень очень слабого ответа: ВЭБ - у 20,0% соответствовал сильному ответу, у большинства - очень слабому и слабому ответу; кандида альбиканс - у 85,7% сильному ответу и у 14,3% - среднему ответу (Рис. 6).

После лечения перечисленные возбудители выделялись в единичных случаях: хламидия трахоматис у 0,0% обследованных, вирус простого герпеса-у 2,2%, цитомегаловирус и вирус Эпштейн-Барра- у 0,0%, кандида альбиканс -у 6,6%. Относительное содержание всех возбудителей (кроме кандида альбиканс) соответствовала очень слабому ответу, а кандида альбиканс при ее наличии соответствовала сильному ответу.

После лечения «До лечения

Рисунок 6. Динамика результатов ПЦР-диагностики возбудителей сопутствующих инфекций в пародонтальных карманах до и после лечения пародонтита.

Сопутствующие инфекции всегда выявлялись в пародонтальных карманах в сочетании с пародонтопатогенными бактериями, в то же время при сохранении возбудителей после курса лечения структура выявляемых пародонтопатогенов и сопутствующих возбудителей менялась.

Апробация разработанного метода ПЦР для выявления ДНК некоторых Actinomyces spp. (Actinomyces gerencseriae, Actinomyces meyer, Actinomyces naeslundii, Actinomyces neuii, Actinomyces odontolytians) показала наличие A.spp у 88,2% больных пародонтитом.

Выводы

1. Для разработки мультипраймерного набора для полимеразной цепной реакции при молекулярно-генетической диагностике основных пародонтопатогенных бактерий произведен подбор условий проведения реакции и характеристик реагентов, обеспечивающие чувствительность набора реагентов не более 104 копий/мл для каждого возбудителя.

2. По данным ПЦР-диагностики с использованием мультипраймерного набора для определения пародонтопатогенных бактерий в десневой борозде у лиц со здоровым пародонтом частота выделения пародонтопатогенов колеблется от 0,0% до 4,1% (АйтоЬааНиэ айтотусйетсоткапз) с относительной концентрацией не выше уровня слабого ответа.

3. Пародонтопатогенная флора определяется с использованием мультипраймерного набора для ПЦР-диагностики у всех больных хроническим генерализованным пародонтитом. При этом частота выявления разных пародонтопатогенных бактерий из пародонтальных карманов колеблется от 33,3% до 73,3% с относительным содержанием бактерий до уровня среднего и сильного ответау 38,1% больных.

4. Состав и относительное содержание в пародонтальных карманах пародонтопатогенных микроорганизмов у работников с радиационно-опасными и нормальными условиями труда не имеют существенных различий.

5. По данным ПЦР пародонтопатогенные бактерии выделяются после лечения пародонтита при подготовке к операции имплантации у 10,9% больных, при этом частота выявления разных патогенных микроорганизмов снижается в 4-10 раз.

6. Молекулярно-генетическая диагностика возбудителей сопутствующих инфекций (хламидий, вируса простого герпеса, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барра и кандида альбиканс) выявляет вирус Эпштейна-Барра и кандида альбиканс в пародонтальных карманах соответственно у 21,7% и 30,4% больных пародонтитом.

7. Возбудители сопутствующих инфекций, выделяемые из пародонтальных карманов, регистрируются в единичных наблюдениях после лечения пародонтита. При этом относительное содержание вирусов соответствует очень слабому ответу, а при наличии кандида альбиканс сохраняется уровень сильного ответа.

8. По данным ПЦР-диагностики с использованием мультипраймерного набора актиномицет установлено наличие в слабой концентрации А.Брр в пародонтальных карманах у большинства больных пародонтитом (у 88,2% ).

Практические рекомендации

1. Для совершенствования диагностики и обоснования антисептического и противовоспалительного лечения пародонтита рекомендуется молекулярно-

генетическое исследование содержимого пародонтальных карманов с использованием разработанных мультипраймерных наборов для определения пародонтопатогенов, актиномицет, а также определение герпесвирусов и кандида альбиканс.

2. Целесообразно использование показателей частоты выявления в пародонтальных карманах пародонтопатогенов, вирусов и возбудителей сопутствующих инфекций, полученных в данном исследовании, при диагностике и контроле эффективности лечения пародонтита.

3. Для профилактики осложнений дентальной имплантации рекомендуется использовать ПЦР-диагностику микробиоценоза полости рта до и после предимплантационного лечения пародонтита.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Применение молекулярно-генетических методов диагностики в пародонтологии // Тезисы докладов II съезда микологов России - Москва-2008,- С.469 (соавт. Щербо С.Н., Садовский В.В., Сергеев А.Ю., Дё Д.А., Щербо Д.С., Сергеев Ю.В.).

2. Применение генетических технологий в диагностике пародонтопатогенных бактерий // Тезисы докладов XV Российского Национального конгресса «Человек и лекарство»,- Москва- 2008.- С.425 (соавт. Щербо С.Н., Дё Д.А., Садовский В.В.).

3. Молекулярно-генетические методы диагностики и анализ полученных данных с использованием компьютерных программ // Маэстро стоматологии-2008,-№29.- С.58 (соавт. Садовский В.В., Дё Д.А., Щербо С.Н.).

4. Применение молекулярно-генетических методов диагностики в пародонтологии и имплантологии // Клиническая лабораторная диагностика.- 2009 - № 9 - С.48-50 (соавт. Щербо С.Н., Дё Д.А., Садовский В.В., Тогузов Р.Т.).

5. Зависимость клинической эффективности цельнокерамических коронок от биомеханических условий их функционирования // Стоматология для всех- 2011.- №3.- С.66-69 (соавт. Бронштейн Д.А., Олесов Е.Е., Довбнева Е.С., Перевозников В.И., Заславский С.А.).

6. Применение ПЦР для выявления ДНК некоторых актиномицетов при воспалительных заболеваниях полости рта // Российский

стоматологический журнал.- 2011.- №4- С.49-50. (соавт. Олесова В.Н,, Щербо С.Н., Садовский В.В., Дё Д.А., Талицкий В.В., Шайхаев Г.О.).

7. Влияние негативных биомеханических условий на эффективность протезирования у рабочих - вахтовиков на северных газовых месторождениях // Российский стоматологический журнал.- 2011.- №5.-С.39-41а (соавт. Макеев A.A., Кузнецов A.B., Перевозников В.И., Довбнева Е.С., Микрюков В.В., Олесов Е.Е.).

8. Стоматологический статус воспитанников Детского дома №1 // Российский стоматологический журнал.- 2011.- № 5.- С.44-46 (соавт. Хавкина Е.Ю., Макеев A.A., Кокнаева В.Г., Довбнева Е.С., Олесов Е.Е., Микрюков В.В.).

9. Эффективность новых зостерин- и серебросодержащих препаратов при местном лечении заболеваний пародонта // Материалы VIII научно-практической конференции с международным участием «Современные методы диагностики, лечения и профилактики стоматологических заболеваний ».-Санкт-Петербург, СПбИНСТОМ.- 2011.- С.71-72 (соавт. Довбнева Е.С., Кащенко П.В., Микрюков В.В., Макеев A.A., Золотарев A.C.)

10. Факторы риска дентальной имплантации у вахтовых работников северных газодобывающих предприятий // Российский вестник дентальной имплантологии.- 2011- № 1.- С.101-103 (соавт. Макеев A.A., Кузнецов A.B., Магамедханов М.Ю., Берсанов Р.У., Каирбеков Р.Д., Золотарев A.C.)

Сдано в набор 09.01.12 г. Подписано в печать 10.01.12 г. Гарнитура Тайме. Печать трафаретная. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 210.

Типография ООО НПКП «МАВР», Лицензия Серия ПД №01107, 362040, г. Владикавказ, ул. Августовских событий, 8, тел. 44-19-31