Автореферат и диссертация по медицине (14.00.09) на тему:Клинико-иммунологическое значение определения экспрессии мембранных рецепторов лимфоцитов крови у детей с атопической бронхиальной астмой при проведении аллергенспецифической иммунотерапии

На правах рукописи

Громов Иван Александрович

КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ЭКСПРЕССИИ МЕМБРАННЫХ РЕЦЕПТОРОВ ЛИМФОЦИТОВ КРОВИ У ДЕТЕЙ С АТОПИЧЕСКОЙ БРОНХИАЛЬНОЙ АСТМОЙ ПРИ ПРОВЕДЕНИИ АЛЛЕРГЕНСПЕЦИФИЧЕСКОЙ ИММУНОТЕРАПИИ

14 00 09 - педиатрия 14 00 36 - аллергология и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва-2007

003070581

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте педиатрии

ГУ Научный центр здоровья детей Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор Лейла Сеймуровна Намазова

доктор медицинских наук Елена Леонидовна Семикина

Официальные оппоненты;

доктор медицинских наук, профессор Галина Ивановна Смирнова

доктор медицинских наук, профессор Виктория Владимировна Ботвиньева

Ведущее научное учреждение:

ГОУ ВПО Российский Государственный Медицинский Университет Росздрава

Защита диссертации состоится ^¿^¡¿^Р/ 2007 г в 14 00 на заседании

Диссертационного совета Д 001 023 01 при Государственном учреждении Научный центр здоровья детей РАМН по адресу. 119296, г Москва, Ломоносовский проспект, д 2/62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГУ Научный центр здоровья детей РАМН

Автореферат разослан » 2007 г

Ученый секретарь Диссертационного совета,

кандидат медицинских наук Тимофеева А Г

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Бронхиальная астма (БА) остается одной из актуальных медико-социальных проблем в педиатрии И, несмотря на разработку и внедрение новых лечебных технологий, появление новейших высокоэффективных противоастматических лекарственных средств, астма продолжает оставаться причиной летальных исходов, причем примерно в равной степени у пациентов с среднетяжелым и тяжелым течением, что, безусловно, говорит о неадекватности проводимой терапии Ранняя диагностика и своевременное начало адекватного лечения чрезвычайно важны для предотвращения формирования необратимых изменений в дыхательных путях, инвалидности и смертности от БА В настоящее время активно обсуждается концепция персистирующего воспаления, которая обосновывает применение при бронхиальной астме постоянной адекватной тяжести базисной терапии (вША 2006)

Важнейшая роль в регуляции иммунного ответа отводится растворимым медиаторам, называемым цитокинами Детальное изучение цитокинов показывает, насколько разноплановую роль играют они в имммунных воспалительных реакциях (Намазова Л С , 1991, 2000, Семикина Е Л, 2002, Гущин ИС, 1998, Потапнев МП, 1997, Ыигака К, 1989) В ходе исследований выяснено, что при бронхиальной астме имеет место дисбаланс в системе лимфоцитов с фенотипом Т хелпер/индуктор, с превалированием субпопуляций Т хелперов 2-го типа и относительным снижением активности Т хелперов 1-го типа Смещение функциональной активности в сторону Т хелперов 2-го типа сопровождается повышением содержания в сыворотке крови таких цитокинов, как 1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8 и снижением уровня ШЫ у и 1Ь 10 Выявление механизмов формирования аллергического воспаления, особенно на ранних стадиях развития заболевания, позволяет определить объем, характер и длительность противовоспалительной терапии

(Намазова Л С 2000, Ботвиньева В В , 2004, Stelmach I, 1996, Purello-D'Ambrosio F , 1999, Wang L , 2002)

Аллергенспецифическая иммунотерапия (АСИТ) является единственным методом патогенетической терапии аллергических заболеваний, воздействующим на все звенья аллергического процесса и обладающим длительным профилактическим эффектом (Гущин И С , 1998, Балаболкин И И, 1998, Каганов С.Ю., 1999, Хутуева С X , Федосеева В H, 2000, Горячкина JIА , 2002, Abramson M , 1999, Garcia-Selles F J , 2002, Wen Z., 2002) Аллергенспецифическая иммунотерапия приводит к угнетению IgE-опосредованной аллергической реакции, уменьшает выраженность аллергического воспаления и неспецифическую тканевую гиперреактивность Однако сведения о воздействии этого способа лечения на субпопуляции лимфоцитов остаются мало изученными и требуют дальнейшего исследования, а описаний экспрессии цитокиновых рецепторов и экспрессии низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII) у детей с БА, в том числе на фоне проведения АСИТ, в доступной нам литературе не встретились

Таким образом, оценка экспрессии рецепторов к IgE CD 23 и цитокинам на мембране лимфоцитов крови и определение субпопуляций лимфоцитов крови позволит уточнить и дополнить представления о патогенезе бронхиальной астмы, а также позволит более тщательно оценивать эффективность аллергенспецифической иммунотерапии Цель исследования.

Определить экспрессию мембранных рецепторов лимфоцитов крови к низкоафинному рецептору IgE CD 23 (FceRII), патогенетически значимым цитокинам и определить субпопуляции лимфоцитов крови у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии и после проведения аллергенспецифической иммунотерапии (АСИТ)

Задачи исследования.

1 Определить субпопуляции лимфоцитов крови у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии и после проведения курса АСИТ

2 Изучить экспрессию рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8,1Ь 10,

у) и экспрессию низкоафинного рецептора к 1§Е СБ 23 (РсеГШ) на поверхности лимфоцитов периферической крови у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии в сравнении со здоровыми детьми, а также их изменение на фоне проведения АСИТ

3 Определить в составе В лимфоцитов популяцию клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к ^Е СБ 23 (РсеМ1), у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии в сравнении со здоровыми детьми и ее изменение на фоне проведения АСИТ

4 Сравнить влияние спектра сенсибилизации на экспрессию мембранных рецепторов лимфоцитов крови у детей с бронхиальной астмой

Научная новизна.

Впервые определена экспрессия рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5, 1Ь 8, 1Ь 10, у) и экспрессия низкоафинного рецептора к 1§ Е СО 23 (РсеМ1) у здоровых детей

Впервые определена экспрессия рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5, 1Ь 8, 1Ь 10, ШИ у) и экспрессия низкоафинного рецептора к ^ Е СО 23 (РсеМ1) у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии

Впервые установлено, что лимфоциты крови детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии имеют повышенный уровень экспрессии низкоафинного рецептором к СО 23 (РсеЯН), рецепторов к таким патогенетически важным цитокинам, как 1Ь 2 (за счет высокоаффинной субъединицы СО 122), 1Ь 4, 1Ь 5 и 1Ь 8 по сравнению со здоровыми детьми В то же время у данной группы детей выявлено понижение уровня лимфоцитов с рецептором к 1Ь 10

Показано, что экспрессия рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8, 1Ь 10, IFN у) и экспрессия низкоафинного рецептора к Е СБ 23 (РсеШ1) не отличается у детей, имевших пыльцевую и бытовую сенсибилизацию по сравнению с детьми, у которых была выявлена только пыльцевая сенсибилизация

Впервые выявлено, что у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии отмечается повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к СБ 23 (РсеЫ1).

Впервые оценена экспрессия рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8, 1Ь 10, ШЫ у) и экспрессия низкоафинного рецептора к 1д Е СБ 23 (РсеШ1) у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии

Впервые оценена динамика субпопуляций лимфоцитов крови у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии

Установлено, что у детей с бронхиальной астмой при проведении аллергенспецифической иммунотерапии отмечается повышение уровня В клеток в периферической крови, увеличение экспрессии низкоафинного рецептора к 1§Е СБ 23 (РсеШ1) и рецепторов к 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 10, а также понижение экспрессии рецептора к 1Ь 2 за счет высокоафинной субъединицы СБ 122

Практическая значимость.

Сохранение у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой даже в периоде ремиссии повышенной экспрессии рецепторов на поверхности лимфоцитов периферической крови к ^Е и наиболее значимым цитокинам (1Ь 2, 1Ь 4, 1Ъ 5, 1Ь 8) - доказывает необходимость длительной патогенетической терапии в целях поддержания стойкой клинической ремиссии

Выявленное в исследовании повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к 1цЕ СБ 23 (FceR.II), является одним из диагностических критериев атопического статуса ребенка

Охарактеризована реакция системы клеточного иммунитета при проведении АСИТ повышение уровня В клеток, повышение числа лимфоцитов, экспрессирующих мембранные рецепторы к ^Е (РсеМ1), 1Ь 4,1Ь 5,1Ь 10 и понижение экспрессии к 1Ь 2 Внедрение результатов работы.

Результаты исследований внедрены в практику работы отделения стационарозамещающих технологий и клинико-гематологической лаборатории НИИ педиатрии, Консультативно-диагностического центра Государственного учреждения Научного центра здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН)

Основные положения диссертации доложены на X и XI Ежегодных Конгрессах педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2006, 2007), на Ежегодной научно-практической конференции педиатров России «Фармакотерапия в педиатрии» (Москва, 2006) По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ Структура диссертации.

Диссертация изложена на^Игтраницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов и объема исследований, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций Работа иллюстрирована^таблицами, рисунками, клиническими примерами Список литературы включает в себя ^"^отечественных и^^&рубежных источников Содержание работы.

Работа проводилась в отделении стационарозамещающих технологий НИИ педиатрии ГУ НЦЗД РАМН (заведующая - д м н , профессор Л С Намазова) Всего в исследование было включено 82 ребенка 70 детей в возрасте от 7 до 17

7

лет с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой (2-я группа), а также 12 здоровых детей в качестве контрольной группы Клиническая характеристика пациентов с астмой представлена в таблице 1

Таблица 1.

Клиническая характеристика пациентов

Птгячятепь п=7П

Возраст и число пациентов 7-11 лет 31 (44,2%) Мальчики 25 (80 %)

Девочки

12-17 лет 39 (55,8 %) Мальчики 32 (82 %)

Девочки 7(18%)

Диагноз Атопическая легкая персистирующая бронхиальная астма, ремиссия Сезонная Бронхиальная астма, ремиссия (подгруппа 2а) 40 (57%)

Сезонная бронхиальная астма, ремиссия 30 (43%)

(подгруппа 26)

Базисная терапия до начала исследования Кромоны (в течение 3 месяцев до исследования) 40 (57%) у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой

Без терапии 30 (43 %)

Длительность заболевания (лет) 7,2±4,2

Отягощенная По линии оша 18(25,7%)

насчедственность

(67,1 %)

По линии матери 25 (35,7%)

По линии обоих родителей 4 (5,7%)

Проявления аллергии на 1-ом году жизни 55 (78,6%)

Поливалентная сенсибилизация 40 (57 %)

Группа сравнения (1-я группа) включала 12 практически здоровых детей от 7 до 17 лет (8 мальчиков и 4 девочки), поступивших для проведения диспансеризации, кровь забиралась для проведения рутинных анализов (с согласия пациентов и их родителей), проявлений атопических заболеваний у пациентов не было

Всем пациентам с бронхиальной астмой при поступлении в отделение было проведено комплексное обследование, включавшее общеклиническое (определение массы и длины тела, клинический анализ крови, общий анализ мочи, исследование функции внешнего дыхания (ФВД), рентгенологическое исследование органов грудной клетки, ультразвуковое исследование органов брюшной полости и придаточных пазух носа, электрокардиограмма), аллергологическое (сбор данных аллергологического анамнеза, постановка кожных скарификационных проб с аллергенами, определение уровня общего 1цЕ), иммунологическое (определение уровней иммуноглобулинов А, М, в), определение субпопуляций лимфоцитов переферической крови и экспрессии рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8,1Ь 10, ШЫ у) на поверхности лимфоцитов периферической крови и экспрессии низкоафинного рецептора к1§ЕСВ23 (РсеШ1)

20 детям из обследованной группы были оценены субпопуляции лимфоцитов крови, экспрессия рецепторов к цитокинам и низкоафинному рецептору к ^ Е СЮ 23 (FceR.II) на поверхности мембраны лимфоцитов периферической крови в динамике на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии

Определение субпопуляций лимфоцитов периферической крови проводили методом проточной цитофлюорометрии в реакции прямой иммунофлюоресценции в клинико-гематологической лаборатории ГУ НЦЗД РАМН (заведующая - д м н , Семикина Е Л) Для определения мембранных дифференцировочных антигенов использовались реактивы серии 8нпике51 фирмы РЬагти^еп, ВБ ВюзыепсеБ, США меченные флюорохромами моноклональные антитела (МКА) Диагностическая панель представлена в таблице 2

Таблица 2

Список использованных моноклональных антител

Вид клеток Кластеры дифференцировки Характеристика субпопуляций лимфоцитов

Т-лимфоциты CD 3 Зрелые Т-лимфоциты

CD 4 Хелперы/индукторы

CD8 Супрессоры/цитотоксические клетки

Nic-лимфоциты CD 16/56 Естественные киллеры

В-лимфоциты CD 22 В-лимфоциты всех стадий дифференцировки

Определение экспрессии рецепторов к цитокинам (IL 2,1L 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) на поверхности лимфоцитов периферической крови и экспрессии низкоафинного рецептора к Ig Е CD 23 (FceRII) проводили методом проточной цитофлюорометрии в реакции прямой иммунофлюоресценции, использовались меченные флюорохромами моноклональные антитела фирмы Pharmingen, BD Biosciences, США представленные в таблице 3

Таблица 3

Список использованных моноклональных антител

Кластеры дифференцировки Вид рецептора

CD 23 Рецептор к ^ Е (РсеШ 1)

CD 25 Низкоафинная субъединица рецептора к 1Ь 2

CD 119 а цепь рецептора к 1РМ-у

CD 122 Высокоафинная субъединица рецептора к 1Ь 2

CD 124 а цепь рецептора к 1Ь 4

CD 125 а цепь рецептора к 1Ь 5

CD 128 Рецептор к1Ь 8

CD 210 Рецептор к 1Ь 10

Оценка результататов проводилась на проточном цитометре FASC Calibur фирмы Pharmingen, BD Biosciences, США Для сбора и анализа данных использовалась программа Cell Quest

Все данные, полученные в ходе обследования, были внесены в базу данных Microsoft Excel Статистическая обработка результатов проводилась в пакете программ Statistica 6 О

Результаты исследования.

В таблице 4 представлены данные уровня иммуноглобулинов у обследованной группы здоровых детей (группа 1)

Таблица 4

Содержание IgG, IgA, IgM, IgE у здоровых детей

Показатель IgG, мг% IgA, мг% IgM, мг% IgE, МЕ/мл

Группа здоровых детей 1092+6,2 139+1,23 107+1,1 42+3,67

Референтные данные лаборатории иммунологии ГУ НЦЗД РАМН 1099±16 142±3 107±3 До 150

Уровни иммуноглобулинов у здоровых детей соответствовали нормальным показателям, описанным ранее (Ботвиньева В В., 1982)

В таблице 5 представлены собственные и литературные данные (Применение проточной цитометрии для оценки функциональной активности иммунной системы человека, пособие для врачей-лаборантов, Москва 2001) по характеристике субпопуляций лимфоцитов у здоровых детей

Таблица 5

Субпопуляции лимфоцитов здоровых детей

Субпопуляции Тлф Тсупр Тхелп В Ж

лимфоцитов (СО 3) (СО 8) (СО 4) СО 4/ (СО 22) (С016/56)

% % % СО 8 % %

Собственные 77+2,2 30+1,4 47+2,6 1,6+0,14 8,4+0,9 11,2+1,2

данные

Литературные 55-80 12-30 31-51 1-2,5 5-19 6-20

данные

Как видно из данных таблицы 4, состав и соотношение субпопуляций лимфоцитов периферической крови детей группы сравнения полностью соответствовали нормальным показателям

В таблице 6 представлены данные, характеризующие экспрессию низкоафинного рецептора к ^Е СБ 23 (РсеГШ) и к И 2 (низкоафинной субъединицы рецептора СБ 25 и высокоафинной субъединицы СБ 122) у здоровых детей

Таблица 6

Экспрессия низкоафинного рецептора к 1§Е СБ 23 (ГсеШ1) и к 1Ь 2 у

здоровых детей

Яс1Ь2 Ис 1Ь 2 11с ^Е СО 23 на % В лф с Яс ^Е

(СО 122) (СО 25) (СО 23) СО 22

16,84+1,9 8,51+1,3 5,6+0,44 5,6+0,47 71,4+4,9

Низкоафинную субъединицу рецептора к 1Ь 2 (СБ 25) экспрессировали 8,5+1,3% лимфоцитов периферической крови Высокоафинную субъединицу рецептора к И 2 (СБ 122) экспрессировали 16,84+1,9 % лимфоцитов периферической крови Обращает внимание достаточно выраженная экспрессия на мембране лимфоцитов рецепторов к интерлейкину 2 - цепи альфа (СБ 25 - 8,5 %) и особенно цепи бета (СБ 122 - 16,8%) Особый интерес представляет экспрессия на мембране лимфоцитов детей этой

группы низкоафинного рецептора к ^Е СЭ23 (Рсе1Ш) - среднее значение этого показателя 5,6+0,44 % Так как низкоафинный рецептор ^Е СО 23 (РсеЯН) является одним из антигенов В линейной дифференцировки, проведен анализ популяции с антигенами СБ 22+ СБ 23+ у здоровых детей, которая составила 5,6+0,47 % Из всех В лимфоцитов экспрессировали низкоафинный рецептор к ^Е СО 23 (РсвШГ) 71,4+4,9 % В клеток Нами были определены рецепторы к ШИ у и интерлейкинам - 4,5,8,10 Данные об экспрессии которых на мембране лимфоцитов крови у здоровых детей, представлены в таблице 7.

Таблица 7

Экспрессия рецепторов к цитокинам условно здоровых детей

Яс к у Яс к 11-4 Яс к 1Ь-5 Кс к 1Ь-8 Яс к 1Ь-10

Средние значения 67+1,8 3,7+0,32 5,3+0,55 24,3+2,17 27,2+2

При анализе данных отчетливо видно, что максимальное число лимфоцитов экспрессируют рецептор к у Рецепторы к интерлейкинам 4 и 5

определяются на мембране малого количества клеток, в среднем - 3 7 - 5,3% соответственно Экспрессия рецепторов к фактору хемотаксиса И 8 и к противовоспалительному цитокину 1Ь 10 выявлена на достаточно большой популяции лимфоцитов (24,3 % и 27,2 % соответственно) Далее был проведен анализ уровней иммуноглобулинов (^О, ^А, ^М, ^Е), а также субпопуляций лимфоцитов периферической крови и экспрессии рецепторов низкоафинного рецептора к СО 23 (РсеШ1) и рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8,1Ь 10, ШЫ у) у 70 детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой (группа 2), из которых 40 детей имели бытовую и пыльцевую сенсибилизацию (группа 2а) и 30 детей только пыльцевую сенсибилизацию (группа 26)

В таблице 8 представлены данные уровня иммуноглобулинов у детей 2-ой группы в сравнении с 1-ой группой

Таблица 8

Содержание ^А, ^М, у детей 2-ой группы в сравнении с

1-ой группой

Показатель ДО, мг% ^А, мг% ^М, мг% ^Е, МЕ/мл

2-я группа 1115+9,8 124+1,46 107+1 206,5+3,4*

1-я группа 1092+6,2 139+1,23 107+1,1 42+3,67

*р<0,001 по сравнению со здоровыми детьми

Как видно из таблицы, уровни иммуноглобулинов (^в, 1§А, 1§М) у детей 2-ой группы достоверно не отличаются от 1-ой группы, в то же время у детей 2-ой группы отмечается достоверное повышение 1§Е, р<0,001 В таблице 9 представлены данные по субпопуляциям лимфоцитов у детей 2-ой группы

Таблица 9

Субпопуляции лимфоцитов у детей 2-ой группы

Субпопуляции Тлф Тсупр Тхелп СБ 4/ В Ж

лимфоцитов (СО 3) (СО 8) (СО 4) СО 8 (СО 22) (С016/56)

% % % % %

2-я группа 75+1 33,3+0,76 41,6+1 1,3+0,06 8,2+0,67 14,2+0,72

Литературные 55-80 12-30 31-51 1-2,5 5-19 6-20

данные нормальных

значений показателя

Из приведенной таблицы видно, что субпопуляции лимфоцитов периферической крови у детей 2-ой группы находятся в пределах возрастной нормы

В таблице 10 приведены данные, характеризующие экспрессию низкоафинного рецептора к ^Е СО 23 (РсеШ!) и к И 2 (низкоафинной

субъединицы рецептора СБ 25 и высокоафинной субъединицы СБ 122) у детей 2-ой группы

Таблица 10

Экспрессия иизкоафинного рецептора к ^Е СБ 23 (РсеМ!) и к 1Ь 2 у

детей 2-ой группы

Яс к И 2 (СО 122) Яс к И 2 (СО 25) Ис к 1д Е (СО 23) СО 23 на СО 22 % В лф с Яс к 1дЕ

2-я группа 22,17+0,53* 8,3+0,2 7,6+0,6* 7,3+0,5 91,2+0,85**

1-я группа 16,84+1,9 8,51+1,3 5,6+0,44 5,6+0,47 71,4+4,9

*р<0,05, **р<0,005 по сравнению со здоровыми детьми

Как видно из таблицы у детей 2-ой группы отмечено достоверное повышение экспрессии рецептора к 1Ь 2, в основном за счет высокоаффинной субъединицы - СЭ 122, число таковых лимфоцитов составило 22,17+0,53 %, р<0,05 В то же время низкоаффинная субъединица рецептора к 1Ь 2 - СБ 25 у детей 2-ой группы составила 8,3+0,2 %, что достоверно не отличалось от референтного уровня 8,5+1,3 % У детей 2-ой группы отмечается достоверное повышение по сравнению с группой здоровых детей процента клеток, имеющих на своей поверхности низкоафинный рецептор к СБ 23 (РсбКП) и составляет 7,6+0,6 %, р<0,05 Популяция В клеток с низкоафинным рецептором к 1§Е (СБ 22+СБ 23+) у детей 2-ой группы составляет 7,35+0,5 % Таким образом доля В лимфоцитов, экспрессирующих низкоафинный рецептор к 1§Е СБ 23 (РсбШ1) у детей с атопической бронхиальной астмой составляет 91,2+0,85 %, что достоверно выше того же показателя здоровых детей 71,4+4,9 %,р<0,005

В таблице 11 представлены данные по экспрессии на мембране лимфоцитов рецепторов к различным цитокинам у детей 2-ой группы

Таблица 11

Экспрессия рецепторов к цитокинам у детей 2-ой группы

КскШЧу Яс к 1Ь-4 Яс к 1Ь-5 Яс к 1Ь-8 Яс к 1Ь-10

2-я группа 64+1 5,46+0,37** 9,3+0,43*** 29,6+0,66* 21,3+0,6*

1-я группа 67+1,8 3,7+0,32 5,3+0,55 24,3+2,17 27,2+2

*р<0,05, **р<0,005, ***р<0,001 по сравнению со здоровыми детьми

Максимальный уровень экспрессии отмечен для рецептора к ШИ у - он выявлен на 64+1 % клеток лимфоидного региона у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой и на 67+1,8 % лимфоцитов группы сравнения

Число лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к 1Ь 4, у детей 2-ой группы составило 5,46+0,37 %, в то время как у группы сравнения этот показатель был в 1,5 раза ниже и составил 3,7+0,32 %, р<0,005 Уровень экспрессии рецептора к II. 5 составил 9,3+0,43 %, у группы сравнения этот показатель равнялся 5,3+0,55 %, р<0,001

Рецептор к 1Ь 8 экспрессировали 29,6+0,66 % лимфоцитов детей 2-ой группы и средний уровень в группе сравнения составил 24,3+2,17 %, р<0,05 Экспрессия рецептора к 1Ь 10 у детей с бронхиальной астмой составила 21,3+0,6 %, а у детей группы сравнения - 27,2+2 %, р<0,05

Таким образом, у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии отмечается повышение в составе В лимфоцитов клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к ^Е СО 23 (РсеЛИ), кроме того лимфоциты крови имеют повышенный уровень экспрессии рецепторов к таким патогенетически важным цитокинам, как ГЬ 2 (за счет высокоаффинной субъединицы СБ122), 1Ь 4,1Ь 5 и 1Ь 8 В то же время у данной группы детей имеется понижение уровня экспрессии рецептора к П. 10 В ходе исследования проведен сравнительный анализ уровня иммуноглобулинов у 40 детей с пыльцевой и бытовой сенсибилизаций

(подгруппа 2а) и 30 детей только с пыльцевой сенсибилизацией (подгруппа 26), данные представлены в таблице 12

Таблица 12

Содержание ^А, ^М, ^Е у детей 2а и 2в подгрупп в сравнении

с 1-ой группой

Показатель ДО, мг% 1дЛ, мг% 1дМ, мг% ^Е, МЕ/мл

2а подгруппа 1112+14 122+2,2 106±1,3 207+4,3*

26 подгруппа 1127+13,6 128+1,6 108,6+1,6 204,6+5,5*

1-я группа 1092+6,2 139+1,23 107+1,1 42+3,67

*р<0,001 по сравнению со здоровыми детьми

Как видно из таблицы, уровни иммуноглобулинов (1^0, ^А, ^М) у детей подгрупп 2а и 26 не отличаются друг от друга и находились в пределах нормальных значений, в то же время у детей обеих подгрупп отмечается достоверное повышение 1§Е, р<0,001

В ходе исследования проведен сравнительный анализ субпопуляций лимфоцитов периферической крови у детей с различными видами сенсибилизации (подгрупп 2а и 26), данные представлены в таблице 13

Таблица 13

Субпопуляции лимфоцитов переферической крови у детей подгруппы 2а

и подгруппы 26

Субпопуляции лимфоцитов Тлф (СО 3) % Тсупр (СБ 8) % Тхелп (СО 4) % СО 4/ СО 8 В (СО 22) % Ж (СО 16/5 6) %

2а подгруппа 76+1,4 33,6+1 42+1,4 1,3+0,1 8,21+0,95 13,15+0,94

26 подгруппа 74+1,45 33,5+1,24 40,4+1,4 1,25+0,08 8,6+1 15,8+1,26

Литературные данные нормальных значений показателя 55-80 12-30 31-51 1-2,5 5-19 6-20

Как видно из таблицы 13, основные субпопуляции лимфоцитов крови в данных двух подгруппах достоверно не отличались друг от друга и находились в пределах нормальных значений

В таблице 14 приведены данные, характеризующие экспрессию низкоафинного рецептора к 1§Е СО 23 (РсеМ!) и к И 2 (низкоафинной субъединицы рецептора СО 25 и высокоафинной субъединицы СО 122) у детей подгруппы 2а и подгруппы 26 в сравнении со здоровыми детьми

Таблица 14

Экспрессия низкоафинного рецептора СБ 23 (РсеШ1) и 1Ь 2 у детей

подгруппы 2а и подгруппы 26

Яс к 1Ь 2 (СБ 122) Яс к 1Ь 2 (СЭ 25) Лс к ^ Е (СБ 23) СЭ 23 на СИ 22 % В лф с Яс к ^Е

2а подгруппа 22+0,7* 8,32+0,22 7,6+0,8* 7,2+0,74 91+1,3**

26 подгруппа 22,55+0,78* 8,1+0,34 7,98+0,8* 7,74+0,77 91,6+1,02**

1-я группа 16,84+1,9 8,51+1,3 5,6+0,44 5,6+0,47 71,4+4,9

*р<0,05, **р<0,005 по сравнению со здоровыми детьми

Как видно из таблицы 14, экспрессия низкоафинного рецептора к 1£Е СО 23 (РсеШ1) и к 1Ь 2 в данных двух подгруппах не отличались При этом в обеих подгруппах отмечалось повышению экспрессии рецептора к 1Ь 2, в основном за счет высокоаффинной субъединицы - С0122 по сравнению со здоровыми детьми, р<0,05, в то же время низкоаффинная субъединица рецептора к 1Ь 2 -СБ 25 в обеих подгруппах достоверно не отличалась от референтного уровня В обеих подгруппах детей отмечается достоверное повышение числа клеток, имеющих на своей поверхности низкоафинный рецептор к ^Е СО 23 (РсеКЛ), р<0,05 Так же в обоих подгруппах отмечается достоверное увеличение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к 1§Е СО 23 (РсгЬШ), р<0,005

В таблице 15 представлены данные по экспрессии на мембране лимфоцитов рецепторов к различным видам цитокинов у детей подгруппы 2а и подгруппы 26 в сравнении со здоровыми детьми

Таблица 15

Экспрессия рецепторов к цитокинам у детей подгруппы 2а и

подгруппы 26

Яс к 1РЫ у Яс к 1Ь-4 Яс к 1Ь-5 Яс к 1Ь-8 Яск1Ь-10

2а подгруппа 63+1,3 5,32+0,45* 8,7+0,5** 29,2+0,9 21,5+0,75*

26 подгруппа 65,7+1,7 6+0,7* 10+0,83** 30+1 21+1,1*

1-я группа 67+1,8 3,7+0,32 5,3+0,55 24,3+2,17 27,2+2

*р<0,05, **р<0,001 по сравнению со здоровыми детьми

Как видно из таблицы 15, экспрессия рецепторов к цитокинам (ШИ у, 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 8, 1Ь 10) в данных двух подгруппах не отличались В то же время в обеих подгруппах отмечается достоверное повышение числа лимфоцитов экспрессирующих рецепторы к 1Ь 4 (р<0,05) и к 1Ь 5 (р<0,001), понижение лимфоцитов, экспрессирующих рецептор к 1Ь 10 (р<0,05), тенденция к повышению экспрессии рецептора к 1Ь 8

Таким образом спектр сенсибилизации не оказывает значительного влияния на уровни иммуноглобулинов, а также соотношение субпопуляций лимфоцитов, экспрессию низкоафинного рецептора к СБ 23 (РсеМ1) и экспрессию рецепторов к цитокинам (1Ь 2,1Ь 4,1Ь 5,1Ь 8,1Ь 10, у) Далее у 20 детей были оценены субпопуляции лимфоцитов и экспрессия рецепторов к цитокинам (1Ш у, 1Ь 2, 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 8, 1Ь 10), а также экспрессия низкоафинного рецептора к 1§Е СО 23 (Рс£М1) на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии пыльцевыми аллергенами АСИТ проводилась по схеме, представленной в таблице 16

Таблица 16

Схема проведения аллергенспецифической иммунотерапии

неинфекционными аллергенами

Разведение Доза

В мл В каплях В PNU

1 1000000 0,1-0,2-0,4-0,6-0,8 2-4-8-12-16 0,001-0,002-0,0040,006-0,008

1 100000 0,1-0,2-0,4-0,6-0,8 2-4-8-12-16 0,01-0,02-0,04-0,060,08

1 10000 0,1-0,2-0,4-0,6-0,8 2-4-8-12-16 0,1-0,2-0,4-0,6-0,8

1 1000 0,1-0,2-0,4-0,6-0,8 2-4-8-12-16 1-2-4-6-8

1 100 0,1-0,2-0,3-0,4-0,50,6-0,7-0,8 2-4-6-8-10-12-14-16 10-20-30-40-50-6070-80

1 10 0,1-0,2-0,3-0,4-0,5 2-4-6-8-10 100-200-300-400-500 Всего 1883,33 PNU

В ходе исследования проведен сравнительный анализ субпопуляций лимфоцитов периферической крови у детей на фоне проведения АСИТ Полученные данные представлены в таблице 17

Таблица 17

Динамика субпопуляции лимфоцитов крови у детей на фоне АСИТ

Субпопуляции лимфоцитов Тлф (CD 3) % Тсупр (CD 8) % Тхелп (CD 4) % CD 4/ CD 8 В (CD 22) % NK (CD 16/5 6) %

До АСИТ 76+1,5 33,9+1,6 42+1,44 1,3+0,1 7,49+0,96 15,29+1,29

После АСИТ 71+1,8 31,45+1,3 38,94+1,7 1,3+0,1 11,71+1,27* 13,49+1,35

Литературные Данные нормальных значений показателя 55-80 12-30 31-51 1-2,5 5-19 6-20

*р<0,05 по сравнению с исходными значениями

Выявлено, что популяция супрессоров/цитотоксических клеток (СБ 8), Т хелперов (СБ 4), естественных киллеров (МК) на фоне проведения АСИТ остается без изменений в пределах нормальных значений Популяция В клеток (СБ 22) была на нижней границе нормы (7,49+0,96 %), а при проведении АСИТ достоверно увеличилась до 11,71+1,27 %, р<0,05, также оставаясь в пределах нормальных показателей

В таблице 18 приведены данные, характеризующие экспрессию низкоафинного рецептора к ^Е СБ 23 (РсеШ1) и 1Ь 2 (низкоафинной субъединицы рецептора СБ 25 и высокоафинной субъединицы СБ 122) у детей на фоне проведения АСИТ

Таблица 18

Динамика экспрессии низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII) и

к IL 2 у детей на фоне АСИТ

Показатели До АСИТ После АСИТ Группа сравнения

CD25 (Rc к IL 2),% 8,43+0,45 9,34+0,47 8,51+1,3

CD 122 (Rc к IL 2),% 22,31+1,5 17,59±1,36* 16,84+1,9

Rc к Ig Е CD 23 (FceRII) 7+0,89 10,79+1,18* 5,6+0,44

CD 22+CD 23+ 6,85+0,87 10,46+1,1 5,6+0,47

% В лф с Rc к Ig E 91,8±1,52 89,75+0,78 71,4+4,9

*р<0,05 по сравнению с исходными значениями

Как видно из таблицы 15, при проведении АСИТ достоверно снижалась экспрессия рецептора к IL 2 за счет высокоафинной субъединицы СБ 122 с 22,31+1,5 % до 17,59+1,36 %, р<0,05 Отмечено достоверное повышение экспрессии низкоафинного рецептора к IgE СБ 23 (FceRII) с 7,0+0,87 % до 10,79+1,18 %, р<0,05 На фоне АСИТ в составе В лимфоцитов популяция клеток, экспрессирующих низкоафинный рецептором к IgE СБ 23 (FceRII), оставалась повышенной

В таблице 19 приведена динамика экспрессии цитокиновых рецепторов у детей на фоне АСИТ

Таблица 19

Динамика экспрессии цитокиновых рецепторов на фоне АСИТ

Показатели До АСИТ После АСИТ Группа 1

ЯскГШ у,% 64,5+2,25 67,2+1,6 67+1,8

Яс к 1Ь 4,% 4,88+0,73 7,12+0,69* 3,7+0,32

Яс к И. 5,% 9,34+0,8 15,6+2* 5,3+0,55

Яс к 1Ь 8,% 29,1+1,29 30,75+2,4 24,3+2,17

Яс к 1Ь 10,% 23,85+1,25 29+1,39* 27,2+2

*р<0,05 по сравнению с исходными значениями

На фоне АСИТ отмечалось достоверное повышение экспрессии рецептора к 1Ь 4 с 4,88+0,73% до 7,12+0,69 %, р<0,05, экспрессии рецептора к 1Ь 5 с 9,34+0,8% до 15,6+2 %, р<0,05 и экспрессии рецептора к 1Ь 10 с 23,85+1,25 до 29,03+1,39, р<0,05

Таким образом при проведении АСИТ отмечается достоверное повышение В клеток, экспрессии низкоафинного рецепторов к 1§Е СБ 23 (РсеКП), экспрессии рецепторов к цитокинам 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 10 и снижение экспрессии рецептора к 2 за счет высокоаффинной субъединицы СБ 122 Выводы:

1 У детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии состав субпопуляций лимфоцитов крови находится в пределах значений здоровых детей При проведение АСИТ отмечается повышение уровня В клеток, не выходящее за границы нормы

2 Установлено, что у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии сохраняется повышенная экспрессия рецепторов на поверхности лимфоцитов периферической крови к низкоафинному рецептору ^Е СБ 23 (Рсе1Ш), 1Ь 2, 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 8 и снижение экспрессии рецептора к 1Ь 10 При проведении АСИТ отмечается увеличение экспрессии рецепторов к 1Ь 4, 1Ь 5, 1Ь 10, низкоафинному рецептору ^Е СБ 23 (FceR.II), понижение экспрессии рецептора к 1Ь 2

3 У детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии отмечается значительное повышение в составе

В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к СО 23 (Рсе1Ш), который и после проведения АСИТ остается повышенным и является признаком атопической природы болезни

4 Спектр сенсибилизации не оказывает значительного влияния на соотношение субпопуляций лимфоцитов и экспрессию низкоафинного рецептора к ^Е СБ 23 (РсеШ!) и экспрессию рецепторов к цитокинам (1Ь 2, 1Ь 4,1Ь5,1Ь8,1Ь 10, ШМу)

Практические рекомендации:

1 В целях поддержания стойкой ремиссии у детей с легкой атопической бронхиальной астмой необходимо проведение длительной базисной терапии в сочетании с АСИТ

2 Использовать в качестве дифференциального критерия атопической патологии определение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к 1§Е СО 23 (РсеЬШ)

Список работ, опубликованных по теме диссертации.

1 Семикина Е Л, Громов И А , Вознесенская Н И , Копыльцова Е А , Намазова Л С, Торубарова Н А Цитокиновые рецепторы лимфоцитов крови при бронхиальной астме у детей // Материалы X Конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» - М -2006 -с 522-523

2 Семикина Е Л, Намазова Л С , Мигали А В , Турти Т В , Зиновьева Т Е, Вознесенская Н И , Копыльцова Е А , Громов И А Особенности экспрессии цитокиновых рецепторов на мембране лимфоцитов у новорожденных детей // Материалы X Конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» - М -2006 -с 523

3 Семикина Е JI, Намазова JI С , Мигали А В , Турти Т В , Зиновьева Т Е , Громов И А , Вознесенская Н И, Копыльцова Е А Особенности экспрессии рецептора к IgE на лимфоцитах крови детей // Материалы X Конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» - М -2006 -с 523-524

4 Громов И А Цитокиновые рецепторы лимфоцитов крови при бронхиальной астме у детей // Педиатрическая фармакология - 2006 -Т 3 - №2 - с 64-65

5 Громов И А Динамика экспрессии цитокиновых рецепторов лимфоцитов крови на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии при бронхиальной астме у детей // Вопросы современной педиатрии - 2006.-Т 5 - № 4 - с 108

6 Громов И А , Рязанов М В , Намазова JIС Исследование больших слюнных желез и оценка динами цитокиновых рецепторов лимфоцитов крови на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии при бронхиальной астме у детей // Материалы XI Конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» - М-2007-с 183

7 Громов И А , Семикина Е J1, Вознесенская Н И , Копыльцова Е А , Намазова JIС Динамика субпопуляций лимфоцитов крови детей с атопической бронхиальной астмой при проведении специфической иммунотерапии // Материалы XI Конгресса педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» - М-2007-с 184

8 Громов И А, Рязанов М В, Намазова JIС Динамика цитокиновых рецепторов лимфоцитов крови и исследование больших слюнных желез на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии при бронхиальной астме у детей // Материалы XIV Российского Национального Конгресса «Человек и лекарство» - М -2007 -с 281

9 Громов И А , Семикина Е JI, Намазова JIС Клинико-иммунологическое значение определения экспрессии мембранных рецепторов у детей с атопической бронхиальной астмой при проведении аллергенспецифической иммунотерапии // Вопросы современной педиатрии - 2007 -Т 6 - № 2 - с 151-152

Подписано в печать 25 04 2007 г Исполнено 26 04 2007 г Печать трафаретная

Заказ № 470 Тираж 100 экз

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш , 36 (495) 975-78-56 www autoreferat ru

Актуальность темы.

Бронхиальная астма (БА) остается одной из актуальных медико-социальных проблем в педиатрии. И, несмотря на разработку и внедрение новых лечебных технологий, появление новейших высокоэффективных противоастматических лекарственных средств, астма продолжает оставаться причиной летальных исходов, причем примерно в равной степени у пациентов с легким, среднетяжелым и тяжелым течением, что, безусловно, говорит о неадекватности проводимой терапии. Ранняя диагностика и своевременное начало адекватного лечения чрезвычайно важны для предотвращения формирования необратимых изменений в дыхательных путях, инвалидности и смертности от БА. В настоящее время активно обсуждается концепция персистирующего воспаления, которая обосновывает применение при бронхиальной астме постоянной адекватной тяжести базисной терапии (GINA-2006).

Важнейшая роль в регуляции иммунного ответа отводится растворимым медиаторам, называемым цитокинами. Детальное изучение цитокинов показывает, насколько разноплановую роль играют они в имммунных воспалительных реакциях (Намазова J1.C., 1991, 2000, Семикина Е.Л., 2002, Гущин И.С., 1998, Потапнев М.П., 1997, Ishizaka К., 1989). В ходе исследований выяснено, что при бронхиальной астме имеет место дисбаланс в системе лимфоцитов с фенотипом Т хелпер/индуктор с превалированием субпопуляций Т хелперов 2-го типа и относительным снижением активности Т хелперов 1-го типа. Смещение функциональной активности в сторону Т хелперов 2-го типа сопровождается повышением содержания в сыворотке крови таких цитокинов, как IL 2, IL 4, IL 5, IL 8 и снижением уровня IFN у и IL 10. Выявление механизмов формирования аллергического воспаления, особенно на ранних стадиях развития заболевания, позволяет определить объем, характер и длительность противовоспалительной терапии

Намазова JI.C. 2000., Ботвиньева В.В., 2004, Stelmach I, 1996, Purello-D'Ambrosio F., 1999, Wang L., 2002).

Аллергенспецифическая иммунотерапия (АСИТ) является единственным методом патогенетической терапии аллергических заболеваний, воздействующим на все звенья аллергического процесса и обладающим длительным профилактическим эффектом (Гущин И.С., 1998; Балаболкин И.И., 1998; Каганов С.Ю., 1999; Хутуева С.Х., Федосеева В.Н., 2000; Горячкина Л.А., 2002; Abramson М., 1999; Garcia-Selles F.J., 2002; Wen Z., 2002). Аллергенспецифическая иммунотерапия приводит к угнетению IgE-опосредованной аллергической реакции, уменьшает выраженность аллергического воспаления и неспецифическую тканевую гиперреактивность. Однако сведения о воздействии этого способа лечения на субпопуляции лимфоцитов остаются мало изученными и требуют дальнейшего исследования, а описаний экспрессии цитокиновых рецепторов и экспрессии низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII) у детей с БА, в том числе на фоне проведения АСИТ, в доступной нам литературе не встретились.

Таким образом, оценка экспрессии рецепторов к IgE и цитокинам на мембране лимфоцитов крови и определение субпопуляций лимфоцитов крови позволяет уточнить и дополнить представления о патогенезе бронхиальной астмы, а также более тщательно оценть эффективность аллергенспецифической иммунотерапии. Цель исследования.

Определить экспрессию мембранных рецепторов лимфоцитов крови к низкоафинному рецептору IgE CD 23 (FceRII), патогенетически значимым цитокинам и определить субпопуляции лимфоцитов крови у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии и после проведения аллергенспецифической иммунотерапии (АСИТ).

Задачи исследования.

1. Определить субпопуляции лимфоцитов крови у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии и после проведения курса АСИТ.

2. Изучить экспрессию рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) и экспрессию низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FcsRII) на поверхности лимфоцитов периферической крови у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии в сравнении со здоровыми детьми, а также их изменение на фоне проведения АСИТ.

3. Определить в составе В лимфоцитов популяцию клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к IgE CD 23 (FceRII), у детей с бронхиальной астмой в периоде ремиссии в сравнении со здоровыми детьми и ее изменение на фоне проведения АСИТ.

4. Сравнить влияние спектра сенсибилизации на экспрессию мембранных рецепторов лимфоцитов крови у детей с бронхиальной астмой.

Научная новизна.

Впервые определена экспрессия рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) и экспрессия низкоафинного рецептора к Ig Е CD 23 (FceRII) у здоровых детей.

Впервые определена экспрессия рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) и экспрессия низкоафинного рецептора к Ig Е CD 23 (FcsRII) у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии.

Впервые установлено, что лимфоциты крови детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии имеют повышенный уровень экспрессии низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII), рецепторов к таким патогенетически важным цитокинам, как IL 2 (за счет высокоаффинной субъединицы CD 122), IL 4, IL 5 и IL 8 по сравнению со здоровыми детьми. В то же время у данной группы детей выявлено понижение уровня лимфоцитов с рецептором к IL 10.

Показано, что экспрессия рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) и экспрессия низкоафинного рецептора к Ig Е CD 23 (FceRII) не отличается у детей, имевших пыльцевую и бытовую сенсибилизацию по сравнению с детьми, у которых была выявлена только пыльцевая сенсибилизация.

Впервые выявлено, что у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии отмечается повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к IgE CD 23 (FceRII).

Впервые оценена экспрессия рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у) и экспрессия низкоафинного рецептора к Ig Е CD 23 (FceRII) у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии.

Впервые оценена динамика субпопуляций лимфоцитов крови у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой на фоне проведения аллергенспецифической иммунотерапии.

Установлено, что у детей с бронхиальной астмой при проведении аллергенспецифической иммунотерапии отмечается повышение уровня В клеток в периферической крови, увеличение экспрессии низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII) и рецепторов к IL 4, IL 5, IL 10, а также понижение экспрессии рецептора к IL 2 за счет высокоафинной субъединицы CD 122.

Практическая значимость.

Сохранение у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой даже в периоде ремиссии повышенной экспрессии рецепторов на поверхности лимфоцитов периферической крови к IgE и наиболее значимым цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8) доказывает необходимость длительной патогенетической терапии в целях поддержания стойкой клинической ремиссии.

Выявленное в исследовании повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к IgE CD 23 (FceRII), является одним из диагностических критериев атопического статуса ребенка.

Охарактеризована реакция системы клеточного иммунитета при проведении АСИТ: повышение уровня В клеток, повышение числа лимфоцитов, экспрессирующих мембранные рецепторы к IgE (FceRII), IL 4, IL 5, IL 10 и понижение экспрессии к IL 2. Внедрение результатов работы.

Результаты исследований внедрены в практику работы отделения стационарозамещающих технологий и клинико-гематологической лаборатории НИИ педиатрии, Консультативно-диагностического центра Государственного учреждения Научного центра здоровья детей РАМН (ГУ НЦЗД РАМН).

Основные положения диссертации доложены на X и XI Ежегодных Конгрессах педиатров России «Актуальные проблемы педиатрии» (Москва, 2006, 2007), на Ежегодной научно-практической конференции педиатров России «Фармакотерапия в педиатрии» (Москва, 2006), XIV Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007). По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Выводы:

1. У детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии состав субпопуляций лимфоцитов крови находится в пределах значений здоровых детей. При проведение АСИТ отмечается повышение уровня В клеток, не выходящее за границы нормы.

2. Установлено, что у детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии сохраняется повышенная экспрессия рецепторов на поверхности лимфоцитов периферической крови к низкоафинному рецептору IgE CD 23 (FceRII), IL 2, IL 4, IL 5, IL 8 и снижение экспрессии рецептора к IL 10. При проведении АСИТ отмечается увеличение экспрессии рецепторов к IL 4, IL 5, IL 10, низкоафинному рецептору IgE CD 23 (FceRII), понижение экспрессии рецептора к IL 2.

3. У детей с атопической легкой персистирующей бронхиальной астмой в периоде ремиссии отмечается значительное повышение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к IgE CD 23 (FceRII), который и после проведения АСИТ остается повышенным и является признаком атопической природы болезни.

4. Спектр сенсибилизации не оказывает значительного влияния на соотношение субпопуляций лимфоцитов и экспрессию низкоафинного рецептора к IgE CD 23 (FceRII) и экспрессию рецепторов к цитокинам (IL 2, IL 4, IL 5, IL 8, IL 10, IFN у).

Практические рекомендации:

1. В целях поддержания стойкой ремиссии у детей с легкой атопической бронхиальной астмой необходимо проведение длительной базисной терапии в сочетании с АСИТ.

2. Следует использовать в качестве дифференциального критерия атопической патологии определение в составе В лимфоцитов популяции клеток, экспрессирующих на своей поверхности низкоафинный рецептор к IgE CD 23 (FceRII).