Автореферат и диссертация по медицине (14.01.09) на тему:Клинико - генетическое исследование аскаридоза в Республике Башкортостан

004683235

На правах рукописи

МУРЗАГАЛЕЕВА ЛИРА ВАЛЕРЬЕВНА

КЛИНИКО - ГЕНЕТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ АСКАРИДОЗА В РЕСПУБЛИКЕ БАШКОРТОСТАН

14.01.09 - инфекционные болезни 03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 4 ИЮН 2010

Москва - 2010

004608285

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Федерального агентства по Здравоохранению и социальному развитию.

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук доктор медицинских наук, профессор

Валишин Дамир Асхатович Хуснутдинова Эльза Камилевна

Ермак Татьяна Никифоровна Петрин Александр Николаевич

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Московский государственный медико -стоматологический университет» Федерального агентства по Здравоохранению и социальному развитию.

Защита диссертации состоится «29» июня 2010 г. в «_» часов на заседании

диссертационного совета Д 208.114.01 Федерального государственного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека по адресу: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, д.За.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного учреждения науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Федеральной службы по надзору в сфере прав потребителей и благополучия человека по адресу: 111123, Москва, ул. Новогиреевская, д.За.

Автореферат разослан Л, ММ 2010 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Александр Васильевич Горелов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

По официальным данным ВОЗ и отдельных авторов, в мире аскаридозом ежегодно поражается свыше 1 млрд. человек [Такмолаев А.К., Бронштейн A.M., 2002]. Аскаридоз является ведущей инвазией в группе геогельминтозов и распространен на всей территории Российской Федерации [М.Н. Лебедева, Ф.С. Михайлицина, 1998; В.П. Сергиев, 2005; Г.Г. Онищенко, 2007]. Так, в 2006 году зарегистрировано 66548 больных аскаридозом, в том числе - 46398 детей [Романенко H.A., Черникова Е.А., Гузеева Т.М., Глиненко В.М., Сергиев В.П., 2006 г.]. Аскаридоз также относится к наиболее распространенным гельминтозам в Республике Башкортостан.

В настоящее время, несмотря на широкую распространенность аскаридоза, нет достаточных данных о патогенетических механизмах развития болезни. Известно, что на ранней стадии аскаридозной инвазии восприимчивость организма к паразитам контролируется механизмами клеточного иммунитета, повышается метаболическая, рецепторная и синтетическая активность моноцитов, наблюдается индукция Т-клеточного звена в основном за счет повышения супрессорной активности без соответствующей активации Т-хелперов. Гельминты нарушают функции желудочно-кишечного тракта, являются причиной аллергических реакций, интоксикации и ослабления иммунитета [Чахирева Н.Е., 2003; Курашвили В.А., 2007]. Особенностью аскаридоза является полиморфизм клинических проявлений - от бессимптомного (субклинического) течения до тяжелейших форм. Это объясняется сложным воздействием комплекса разнообразных и многочисленных внешних и внутренних патогенных факторов, влияние которых закономерно изменяется в зависимости от стадии, длительности болезни; а также иммунореактивности организма во взаимоотношении с условиями окружающей среды. Многочисленные исследования, проводимые во всем мире, показывают, что восприимчивость к инфекционным агентам генетически детерминирована [Смольникова М.В., 2001; Wucherpfenning К., 2001; Meyer С., 2002; Khakoo S., 2004].

Одним из наиболее доступных подходов, применяемых в молекулярно -генетических исследованиях многофакторных заболеваний, является изучение ассоциаций заболевания с полиморфными вариантами генов, белковые продукты которых участвуют в патогенезе болезни. Ассоциация полиморфных вариантов генов про- и противовоспалительных цитокинов, определяющих баланс «активации - ингибирования» иммунореактивности с инфекционными заболеваниями, в настоящее время интенсивно исследуется в различных странах мира. Sarah Williams-Blangero и соавт. при полногеномном скрининге выявили ряд локусов сцепления с аскаридозом в непальской популяции - 13q33, 13q21, 11р14, 8q23, 1р36,1р34 [Williams - Blangero S., 1999; Williams - Blangero S., 2008]. Согласно данным литературы, обнаружены ассоциации полиморфных вариантов генов интерлейкинов 1, 4, 10, 13 с развитием аскаридоза и

аллергических заболеваний [Schall T.J., 1994; Tsunemi Y., 2002; Peisong G., 2004].

В доступной литературе мы не нашли данных о молекулярно-генетических исследованиях аскаридоза, в связи с чем является актуальным изучение ассоциации полиморфных вариантов генов-кандидатов с данным заболеванием.

В рамках рассматриваемой проблемы идентификация генов, вовлеченных в патогенез аскаридоза, является важной медико - генетической задачей, которая способствует формированию фундаментальных представлений о патогенезе этого социально значимого заболевания, а также позволит прогнозировать риск развития и характер клинического течения аскаридоза.

Цель работы:

Проанализировать роль полиморфных вариантов генов цитокинов (TNFA (-308G>A), IL4 (-5900Т), а-цепи IL4Ra (Ile50Val), ILIO (-6270Л), IL13 (Argl30Gln) и CCL11 (~384A>G)) в развитии клинических вариантов течения аскаридоза.

Задачи исследования

1. Охарактеризовать и проанализировать эпидемиологическую ситуацию по аскаридозу в РБ.

2. Изучить и проанализировать клинико - лабораторные особенности течения кишечной стадии аскаридоза.

3. Провести исследование полиморфных вариантов генов фактора некроза опухоли альфа (TNFA (-308G>A)), интерлейкина 4 (ПА (-590С>Т')), альфа цепи рецептора интерлейкина 4 (a-цеии IL4Ra (Ile50Val)), интерлейкина 10 (ILIO (-627С>А)), интерлейкина 13 (1113 (ArgBOGln)) и эотаксина (CCL11 (~384A>G)) у больных аскаридозом и здоровых индивидов контрольной группы.

4. Провести анализ ассоциации исследуемых полиморфных вариантов генов с развитием клинических проявлений аскаридоза и с различными клиническими вариантами течения данного заболевания.

5. Провести анализ роли межгенных взаимодействий изученных полиморфных локусов в развитии аскаридоза.

Научная новизна исследования

Впервые на основе анализа клинических проявлений у больных с аскаридозом определены варианты течения кишечной стадии аскаридоза.

Впервые у больных с кишечной стадией аскаридоза проведено исследование частот генотипов и аллелей полиморфных локусов генов цитокинов и их рецепторов (интерлейкина-4, а-цепи рецептора интерлейкина-4, интерлейкина-10, интерлейкина-13, гена фактора некроза опухоли а и эотаксина). Проведен анализ ассоциаций данных полиморфных локусов с

аскаридозом в Республике Башкортостан. Выявлены маркеры повышенного риска развития аскаридоза.

Впервые установлена ассоциация изученных полиморфных локусов генов цитокинов с различными клиническими вариантами течения аскаридоза.

Впервые с помощью программы GMDR исследовано межгенное взаимодействие генов цитокинов, а также изучено их взаимовлияние с учетом половой принадлежности индивидов и клинических проявлений аскаридоза.

Научно-практическая значимость работы

Результаты работы вносят вклад в расшифровку патогенеза аскаридоза и общее представление о генетических основах предрасположенности к аскаридозу. Впервые выявлены генетические маркеры предрасположенности к различным клиническим вариантам течения кишечной стадии аскаридоза.

Внедрение результатов исследования в практику

Результаты исследований используются в учебном процессе кафедры инфекционных болезней с курсами дерматовенерологии и косметологии ИПО ГОУ ВПО "Башкирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию".

Данные диссертационной работы могут послужить основой для последующих исследований по определению генетических факторов риска развития аскаридоза в РБ. Результаты исследования также могут быть использованы при чтении спецкурсов на факультетах биологии, в медицинских ВУЗах, на курсах повышения квалификации медицинских работников.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Генотип CCL11*A/*A и аллель CCL11*A полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 являются маркерами повышенного риска развития аскаридоза.

2. Ассоциация генотипа CCL11 *А/*А и аллеля CCL11*A полиморфного варианта —384A>G гена CCL11 с аллергическим вариантом течения, генотипа IL4Ra*50 Val/Val полиморфного варианта IleSOVal гена IL4Ra с диспепсическим вариантом течения и генотипа IL10*C/*A полиморфного варианта -627С>А гена ILIO - со смешанным вариантом течения кишечной стадии аскаридоза.

3. Статистически достоверные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных локусов генов IL4(-590C>T), IL13 (Argl30Gln) и TNFA(-308G>A) между пациентами с аскаридозом различной половой принадлежности.

4. Межгенное взаимодействие полиморфных локусов генов эотаксина CCL11 (-384A>G'■) и a-цепи рецептора интерлейкина 4 IL4Ra (IleSOVal), детерминирующее развитие аскаридоза; комбинация полиморфных вариантов генов a-цепи рецептора интерлейкина 4 lL4Ra (IleSOVal) и

интерлейкина 10 ILIO (-627С>А), ассоциированные с развитием

аскаридоза у женщин.

Апробация работы

Основные положения диссертации были представлены на 72-й юбилейной Республиканской конференции студентов и молодых ученых, посвященной Году 450-летия единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ, 60-летию СНО и 40-летия СМУ (Уфа, 2007), ХП Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: актуальные вопросы в клинике и эксперименте», посвященной 75-летию Дагестанской МГА (Махачкала, 2007), Международном Евро - Азиатском Конгрессе по инфекционным заболеваниям (Витебск, 2008), XIV Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционных болезней в клинике и эксперименте» (Махачкала, 2009), VIII областной научно -практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной 65-летию кафедры эпидемиологии и инфекционных болезней Оренбургской ГМА (Оренбург, 2010), 2 Ежегодном Конгрессе по инфекционным болезням (Москва, 2010) и на совместном научном заседании кафедр инфекционных болезней, инфекционных болезней с курсами дерматовенерологии и косметологии ИПО, детских инфекционных болезней ГОУ BIIO «Башкирский государственный медицинский университет» и лаборатории молекулярной генетики человека ИБГ УНЦРАН (Уфа, 2010).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 научных работ, в том числе 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 156 страницах, содержит 29 таблиц и 34 рисунка, состоит из введения, обзора литературы, материалов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и практических рекомендаций. Список литературы включает 266 источников (89 отечественных и 177 зарубежных).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Под нашим наблюдением находилось 140 больных аскаридозом в кишечной стадии в возрасте от 15 до 80 лет (средний возраст 34,94±2,49лет). Лечение и обследование пациентов проводилось на базе МУ ИКБ № 4 г. Уфы. Наблюдение проводилось в течение 2005 - 2009 гг., и все обследованные являлись жителями Республики Башкортостан.

Критериями включения в исследование больных являлись: больные обоих полов (15 - 80 лет) с установленным диагнозом «Аскаридоз. Кишечная стадия». Диагноз устанавливался на основании клинико-эпидемиологических и лабораторных данных. Сбор данных, включающих в себя: жалобы больного,

индивидуальный, эпидемиологический и аллергологический анамнез, проводился в личной беседе с больным. У всех пациентов диагноз аскаридоза подтвержден обнаружением яиц в фекалиях методом нативного мазка и Като. Критерием исключения являлось наличие у больного с кишечной стадией аскаридоза сопутствующего острого или обострение хронического соматического заболевания.

Группа контроля представлена 100 практически здоровыми индивидами (средний возраст 37,7±3,30 лет), не имевшими в анамнезе данных за аллергические заболевания как со стороны самого представителя контрольной группы, так и его родственников, с отрицательными результатами анализов крови в ИФА на наличие антител к антигенам известных гельминтов (аскаридоз, лямблиоз, токсокароз, эхшюкоккоз, трихинеллез) и исследованиями кала на наличие яиц гельминтов.

ДНК выделяли из периферической крови методом фенольно-хлороформной экстракции [Mathew С .С., 1984]. Амплификацию изученных локусов проводили с помощью метода полимеразной цепной реакции (ПЦР) синтеза ДНК на амплификаторе "Терцик" производства компании «ДНК-технология» (г. Москва). Для амплификации использовали реакционную смесь объёмом 25 мкл, которая содержала 2,5 мют lOxTaq-буфера (67 мМ трис-НС1 (рН 8,8), 16,6 мМ (NH4)2 S04„ 1,5мМ MgC12, 0,01% Tween-20), ОД мкг геномной ДНК, смесь dNTP (dATP, dGTP, dCTP, dTTP no 200 мкМ каждого), 1 ед. ДНК-полимеразы Termus aquaticus (производства фирмы «Силекс», г. Москва) и 5-10 пМ локусспецифичных олигонуклеотидных праймеров. Для определения нуклеотидных замен проводили гидролиз амплифицированных фрагментов соответствующей рестриктазой. Разделение фрагментов ДНК после амплификации и рестрикции проводили при помощи электрофореза в 7% полиакриламидном геле (ПААГ), приготовленном из 30% раствора ПААГ (соотношение акриламид:1\т,Ы'-метиленбисакриламид - 29:1). Электрофорез проводили в 1 хТБЕ буфере (0,089 М трис-НС1; 0,089 М борная кислота; 0,002 М ЭДТА, рН=8,0). Перед нанесением на гель пробы смешивали в соотношении 5:1 с краской, содержащей 0,25% бромфенолового синего, 0,25% ксиленцианола и 15% фикола. После окончания электрофореза гель окрашивали раствором бромистого этидия и фотографировали при УФ -освещении.

Статистическая обработка полученных данных проводилась с использованием параметрической и непараметрической статистики в зависимости от шкал и характера распределения переменных. Все расчеты проводились с использованием пакета «Statistica 6.0» [StatSoft Inc., 2001]. При попарном сравнении частот генотипов и аллелей в группах больных и здоровых лиц использовался точный двухсторонний критерий Фишера Р (F2), а также критерий х2 (Р) Для таблиц сопряженности 2*2 с поправкой Йейтса на непрерывность (Леонов, 1998). Силу ассоциаций оценивали в значениях показателя отношения шансов Odds Ratio (OR) (Бабич П.Н. и соавт., 2005). С

целью преодоления проблемы множественных сравнений применялись поправка Бонферрони (Рсброва О.Ю., 2003).

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Клинико - анамнестическая и лабораторная характеристика больных с кишечной стадией аскаридоза

С целью оценки особенностей клинических и лабораторных проявлений аскаридоза были проанализированы жалобы, анамнез и результаты осмотра 140 больных с кишечной стадией аскаридоза, получавших амбулаторное и/или стационарное лечение в клинической инфекционной больнице № 4 г. Уфы. Возраст пациентов колебался от 15 до 80 лет (34,94±2,49). Анализ структуры сопутствующих заболеваний выявил, что у значительной части больных аскаридозом - 45% регистрировалась патология желудочно-кишечного тракта (в сравнении с 13% в контрольной группе, х2~64,82; р=0,001) и железодефицитная анемия - 37% (в сравнении с 1% в контрольной группе, х2=39,80; р=0,001). При изучении данных анамнеза установлено, что большая часть заболевших имела контакт с землей (в частном доме, саду, лесу, даче при посадке, прополке и уборке урожая) - 83,6%; 45% пациентов употребляли в пшцу немытые («с грядки») ягоды, овощи и фрукты; 5,7% больных аскаридозом регулярно выезжает на отдых в страны с жарким климатом (Турция, Египет, Таиланд, Индия) и 11,4% - часто питаются в заведениях общественного питания. Также было установлено, что максимальная зараженность аскаридозом наблюдается среди лиц трудоспособного возраста от 21 до 50 лет - 60 %. При распределении больных по полу, мужчины составили 36 %, женщины - 64 %. Отмечается повышение заболеваемости у женщин, по сравнению с мужчинами практически в 2 раза. Наиболее значимая разница между заболевшими мужчинами и женщинами наблюдается в возрасте 31-40 лет, что связано, по-видимому, с наибольшей вовлеченностью женщин данного возраста в садово-огородную деятельность. Динамика обращаемости пациентов имела сезонный характер, пик отмечался в осенне - зимний период (78%). В первые 3 месяца от момента появления первых симптомов заболевания в стационар обратилось 18,6% больных; в период 3-6 месяцев -24,3%; 30% пациентов поступило спустя 6 месяцев от начала заболевания и 27,1% - через 1 год и более. В клинике всех обследованных больных с кишечной стадией аскаридоза были выявлены 4 синдрома: кожно -аллергический, диспепсический, астено - невротический и респираторный. С учетом выраженности таких ведущих синдромов как аллергический и диспепсический (абдоминальный) все пациенты были разделены на 3 клинические группы: аллергическую (п=48; 34,3%), диспепсическую (п=59; 42,1%) и смешанную (п=33; 21,4%), где отмечались и аллергические симптомы, и диспепсические расстройства.

В клинической картине у больных аллергической группы преобладающими являлись высыпания на туловище (75%), лице (50%),

конечностях (60,4%) в виде крапивницы, атопического дерматита, нейродермита, зуд кожных покровов (87,5%) и перианальной области (4,2%), отек век, лица (4,2%), приступы удушья и одышка (8,3%), раздражительность (27,1%), слабость (89,6%) и нарушение сна (25%).

В диспепсической группе доминировали боли в животе (89,8%) стойкого, иногда приступообразного характера, преимущественно в околопупочной области, часто сопровождающиеся тошнотой (42,4%) и рвотой (5,1%), расстройством стула в виде запоров (18,6%) и/или разжижения (50,8%); субфебрильная лихорадка (20,3%); похудание (22%); сухость во рту (6,8%); изжога (15,3%); снижение аппетита в 30,5% и слюнотечение в 15,3% случаев.

В клинике у больных аскаридозом из смешанной группы в одинаковой степени регистрировались как аллергические, так и диспепсические симптомы. Так, у каждого пациента помимо высыпаний на лице и/или туловище и/или конечностях (100%) и кожного зуда (69,7%), отмечались боли в животе - 91,0%, в 75,8% - жидкий стул, в 21,2% - субфебрильная температура тела, тошнота, ухудшение аппетита, изжога и гепатомегалия; у 27,3% - снижение массы тела, а в 18,2% случаев наблюдалась сухость кожных покровов и сухой кашель. Также двое пациентов (6%) предъявляли жалобы на постоянное чувство голода, слюнотечение и скрежет зубами и трое (9%) - на тяжесть в правом подреберье.

Анализ некоторых лабораторных показателей выявил статистически значимые различия между группами больных и группой контроля. Так, среди пациентов с аскаридозом наблюдалась относительная эозинофшшя (5 - 15%) в 10,7% случаев (15 больных) в сравнении с контрольной группой (х2—9,67, р=0,002), 8 пациентов из которых относились к аллергической группе (16,7%), 5 больных - к диспепсической (8,5%) и 2 человека - к смешанной (6,1%). Инвазия аскаридами также увеличивает активность АЛаТ и АСаТ сыворотки крови. Так, индивидуальные показатели активности аминотрансфераз оказались выше средних (до 152 Ед/мл) у больных аскаридозом - АлаТ у 67,9% и АСаТ у 34,3% - в сравнении с контролем (20,0%; %2=44,83, р=0,001 и 5,0%; х2=24,97, р=0,001 соответственно). Также у пациентов с аскаридозом в 3,6% случаев наблюдалось повышение уровня общего билирубина (до 80 мкмоль/л). При сравнении средних показателей общего билирубина между общей выборкой больных аскаридозом и группой контроля, а также между клиническими группами, различия не достигли статистической значимости (р>0,05).

Исследование показателей красной крови (количество эритроцитов, уровень гемоглобина) выявило статистически значимое снижение уровня гемоглобина (менее 115 г/л у женщин и 132 г/л у мужчин) в группе больных аскаридозом - 37,0% по сравнению с контрольной группой - 1,0% (х2=39,80; р=0,001). При этом снижение гемоглобина с наибольшей частотой - 47,5% -регистрировалось в диспепсической группе, в 30,3% случаев - в смешанной и в 29,2% в аллергической группах. Различия средних показателей гемоглобина и количества эритроцитов между группами, а также при сравнении общей выборки пациентов с аскаридозом и контрольной группы, не достигли статистической значимости - р>0,05.

Таким образом, в настоящее время кишечная стадия аскаридоза может протекать в виде трех различных по клинике вариантов - аллергического, диспепсического и смешанного. У больных с кишечной стадией аскаридоза нами выявлена относительная эозинофилия (5 - 15%), повышение уровня трансаминаз (до 152 Ел/мл), редко - общего билирубина (до 80,0 мкмоль/л), снижение уровня гемоглобина, а также наличие у значительной части пациентов сопутствующих заболеваний желудочно - кишечного тракта в виде хронического гастрита, панкреатита, холецистита, гепатита, дискинезии желчевыводящих путей и железо - дефицитной анемии.

Анализ ассоциаций полиморфных вариантов генов цитокинов с аскаридозом в Республике Башкортостан

Нами проведено изучение ассоциации полиморфных вариантов генов цитокинов: интерлейкина-4 1L4 (~590С>Т), а-цепи рецептора интерлейкина-4 IL4Ra (Ile50Val), интерлейкина-10 ILIO (-627С>А), интерлейкина-13 If. 13 (Argl30Gln), гена фактора некроза опухоли а TNFA (-308G>A) и эотаксина CCL11 (~384A>G) с аскаридозом в Республике Башкортостан.

Изучение полиморфного локуса -384A>G гена CCL11 у больных

аскаридозом

Анализ полиморфных вариантов -384A>G гена CCL11 выявил статистически значимые различия в распределении частот генотипов между сравниваемыми группами больных и контроля (х2= 11,76; р=0,003). Среди больных аскаридозом и представителей контрольной группы преобладал гетерозиготный генотип CCIJ1*G/*A (49,29% и 60,00%, соответственно). Генотип CCL11*А/*А встречался реже, отмечено достоверное увеличение частоты встречаемости данного генотипа у больных аскаридозом по сравнению с контролем (30,71% и 12,00%, соответственно, х2=П,57; р=0,001). Показатель соотношения шансов (OR) развития аскаридоза для носителей генотипа CCL11*A/*A составляет 3,25 (95%С11,61 - 6,56) (рис. 1). Наиболее редко среди больных аскаридозом встречался гомозиготный генотип CCL11*G/*G, частота которого в данной группе составила 20,00% против 28,00% у представителей контрольной группы, но различия оказались статистически незначимыми (Хг=2,09; р=0,15).

Анализ распределения частот аллелей полиморфного локуса -384A>G гена эотаксина CCL11 показал, что в группе больных аскаридозом частота встречаемости аллеля CCL11*A достоверно выше, чем у индивидов контрольной группы (55,36% и 42,00% соответственно; х2=8,33; р=0,004). Показатель OR развития аскаридоза для индивидов - носителей аллеля CCL11*A, составил 1,71 (95%С11,19-2,47) (рис. 1).

с1

х4^

. *х

-CV-

vV

- C*V-

cc

iS

o

V

ff богьмюе ч> контроль

Рис. 1. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 в выборках больных аскаридозом и индивидов контрольной группы

Анализ полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 не обнаружил статистически значимых различий в распределении частот генотипов и аллелей между группами больных аскаридозом и контроля в зависимости от половой принадлежности, однако при попарном сравнении частот генотипов были обнаружены статистически достоверные различия частоты встречаемости генотипа CCL11 *А/*А как между мужчинами из группы больных аскаридозом и контроля (■£ correct =5,53; р=0,019), так и женщинами из соответствующих групп (Х" -5,07; р=0,020). У больных аскаридозом мужчин и женщин частота гомозиготного генотипа CCL11 *А/*А была значительно выше (31,37% и 30,34%, соответственно), чем у представителей контрольных групп (9,30% и 14,04%, соответственно). Показатель соотношения шансов развития аскаридоза у мужчин, носителей генотипа CCL11*A/*A, составил 4,46 (95%С1 1,36-14,60), у женщин -2,67 (95%С11,11-6,39).

При анализе распределения частот аллелей полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 выявлены статистически значимые различия в распределении частот аллелей между больными мужчинами и представителями мужского пола контрольной группы. Установлено, что у больных аскаридозом мужчин чаще встречался аллель CCLJ1*A, частота встречаемости которого составила 55,88% против 39,53% в контрольной группе (х2=4,99; р-0,025; OR=l,94; 95%С1 1,08-3,47); тогда как аллель CCL11*G чаще регистрировался у здоровых мужчин - 60,47% против 44,12% мужчин с аскаридозом OR-0,52; 95%С10,29-0,92).

При сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов данного локуса в зависимости от преобладающих клинических проявлений (доминирующего клинического синдрома) вьивлено, что во всех группах

больных преобладал генотип ССЫ1*С/*А, частота которого у пациентов в аллергической группе составила 43,75%, в диспепсической - 52,54% и в смешанной - 51,52%. Частота генотипа ССЬ11*Л/*А была достоверно выше во всех группах больных: наиболее высокая в аллергической группе - 35,42% (Х^ 11,29; р=0,001), в смешанной группе - 30,30% (х2=6,02; р=0,014) и в диспепсической - 27,12% (х2=5,85; р=0,016) по сравнению с контролем, где частота данного генотипа достигала 12,00%. Показатель СЖ развития аскаридоза у носителей генотипа ССЫ1 *А/*А с аллергическими проявлениями составил 4,02 (95%С1 1,73-9,36), со смешанными проявлениями - 3,19 (95%С1 1,23-8,30) и с диспепсическими проявлениями - 2,73 (95%С11,19-6,27) (рис. 2). Также нами установлено, что во всех группах пациентов статистически достоверно чаще встречались носители аллеля ССЬ11*А, частота которого в аллергической труппе составила 57,29% (х2=6,09; р=0,014); в смешанной -56,06% (х2=3,96; р=0,047); в диспепсической - 53,39% (/>3,87; р=0,049) против 42,00% в контрольной группе. Показатель (Ж развития аскаридоза у носителей аллеля ССЫ 1*А с аллергическими проявлениями составил 1,85 (95%С1 1,133,03), со смешанными проявлениями - 1,76 (95%С1 1,01-3,09); с диспепсическими проявлениями - 1,58 (95%С1 1,00-2,50) (рис.2.).

ф аллергичес кая к диспепсическая = смешанная в контрольная

Рис. 2. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта -384А>С гена ССЫ1 в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы

Изучение полиморфного локуса -5900Т гена 1Ь4 у больных аскаридозом

В результате изучения полиморфного варианта гена 1Ь4 (590С>Т) в группе больных аскаридозом и индивидов контрольной группы нами идентифицировано 3 генотипа - П.4*-590С/С, 1Ь4*-590С/Т и Я,4*-590Т/Т. Характеризуя частоту встречаемости генотипов, следует отметить, что в обеих группах наблюдения с большей частотой обнаруживались генотипы 114*12

590С/С и И4*-590С/Т. Так, частоты данных генотипов в группе больных аскаридозом составили 48,5% и 43,57%, в группе контроля 51,00% и 43,00%, соответственно. Статистически значимых различий между общей выборкой больных аскаридозом и представителей контрольной группы выявлено не было.

В обеих группах чаще встречался аллель И4*-590С - в 70,36% случаев у больных и в 72,50% случаев в контроле. Согласно данным литературы, в азиатских популяциях выше частота встречаемости аллеля 1Ь4*-590Т(54-83%), тогда как в европеоидных популяциях аналогично нашему исследованию чаще встречается аллель И4*-590С (70-82%) р^исЫ Е. с1 а1., 1998; Ве^е В. е1 а1., 2003; Не 1-0. е1а1, 2003].

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов данного локуса у больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями не выявил между ними статистически значимых различий (р>0,05). Во всех группах наблюдения преобладающим был гомозиготный генотип 1Ь4*~590С/С, частота встречаемости которого в аллергической группе составила 54,17%, в диспепсической - 42,37%, в смешанной - 51,51%, в группе контроля - 51,00%. Наиболее распространенный аллель 1Ь4*-590С: у больных аскаридозом с аллергическими проявлениями встречался в 75,00% случаев, с диспепсическими - в 65,25%, со смешанными - в 72,73% и в группе контроля -в 72,50% случаев.

При сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного варианта -590С>Т гена 1Ь4 у пациентов с аскаридозом и индивидов контрольной группы различной половой принадлежности не обнаружено статистически значимых различий, а также тендерных отличий между представителями контрольных групп в различающихся по полу выборках. Однако у больных аскаридозом мужчин было определено статистически значимое увеличение частоты встречаемости гомозиготного генотипа И4*-590С/С - 66,67% по сравнению с больными аскаридозом женщинами - 38,20% (х2=10,52; р=0,001) (рис. 3). Также установлено, что у пациентов мужского пола чаще встречался аллель 1Ь4*-590С, частота которого составила 83,33% против 62,92% у пациентов с аскаридозом женского пола; тогда как аллель 1Ь4*-590Т чаще выявлялся у женщин с аскаридозом и составил 37,08% против 16,67% мужчин с аскаридозом (х2=12,95; р=0,001).

il4*-590c/c il4*--590c/r и4*-590тд

N мужчины больные * мужчины контроль ™ женщины больные О женщины контроль

Рис. 3. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -5900Т гена JL4 у больных аскаридозом различной половой принадлежности

Rossenwasser L.J. и соавт., впервые выявившие в американской популяции в промоторной области гена IL4 данную транзицию цитозина на тимин (-59007), обнаружили ассоциацию этого полиморфного варианта с повышенной экспрессией данного гена in vitro [Rosenwasser L J. et al., 1995].

Таким образом, анализ полиморфного варианта -590С>Т гена IL4 не выявил ассоциации данного локуса с аскаридозом. Установлены статистически достоверные различия в частоте встречаемости генотипов и аллелей данного локуса между мужчинами и женщинами с аскаридозом. У больных мужчин статистически достоверно чаще гомозиготный генотип IL4*-590C/C. - 66,67% по сравнению с больными аскаридозом женщинами — 38,20% и аллеля IL4*-590С, 83,33% против 62,92%, соответственно, аллель IL4*-590T чаще выявлялся у женщин с аскаридозом и составил 37,08% против 16,67% мужчин с аскаридозом.

Анализ ассоциации полиморфного варианта Пе50Уа1 (148 А>С) гена /Ь4Яа

с аскаридозом

По распределению частот аллелей и генотипов данного полиморфного варианта не было обнаружено статистически достоверных отличий между выборками больных аскаридозом и контроля (р>0,05). Наиболее распространенным во всех группах оказался гетерозиготный генотип И4Ка*5011е/Уа1, выявленный у 45,00% пациентов с аскаридозом и 62,00% индивидов контрольной группы. Аллель 1Ь4Яа *50Пе встречался чаще (на 56,79% хромосом у больных и на 54,00% хромосом представителей контрольной группы), чем 11.4Ка*50Уа! (43,21% и 46,00%, соответственно, у больных и контроля).

Тендерных различий в распределении частот аллелей и генотипов полиморфного варианта Пе50Уа1 гена ВАКа не было выявлено ни у больных

аскаридозом, ни у индивидов контрольной группы, ни при сравнении групп больных аскаридозом и контроля одинаковой половой принадлежности (р>0,05).

На рис. 4 представлено распределение частот аллелей и генотипов замены Ile50Val в различных клинических группах пациентов с аскаридозом. У больных аскаридозом с диспепсическими проявлениями достоверно реже по сравнению с контрольной выборкой встречался гетерозиготный генотип IL4Ra*50Ile/Val - 38,98% и 62,00%, соответственно (-/-7,9; р=0,005; OR=ü,39; 95%С1 0,2-0,76) и чаще гомозиготный генотип IL4Ra*50 Val /Val - 28,81% против 15,00% контрольной группы (-/-2,29; р=0,036; OR=2,29; 95%С1 1,045,04).

70.00% ' OR=Q,39

| - аллергическая я диспепсическая ^смешанная х контрольная

Рис, 4. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта 11е50Уа1 (]48А>С) гена 1Ь4Ла в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы

Таким образом, проведенный анализ полиморфного варианта Пе50\га1 гена Я,411а позволил определить, что гомозиготный генотип IL4Ra*50Val/Val ассоциирован с развитием диспепсических расстройств при аскаридозе.

Анализ ассоциации промоторного полиморфного варианта -6270А гена

И 10 с аскаридозом

Сравнительный анализ распределения частот аллелей и генотипов данного локуса не выявил выраженных отличий между больными аскаридозом и индивидами контрольной группы (р>0,05). Наиболее распространенным генотипом в контрольной выборке оказался генотип 1Ь10*С/*С, определенный в 56,00% случаев; тогда как у пациентов с аскаридозом практически с одинаковой частотой регистрировались генотипы Ш0*С/*С и И10*С/*А -44,29% и 45,71%, соответственно. Частоты встречаемости атлелей 1Н0*С и

IL10*A составили у больных аскаридозом - 67,14% и 32,86%, а у представителей контрольной группы - 74,00% и 26,00%, соответственно.

Тендерных различий в распределении частот аллелей и генотипов описываемого ДНК - локуса в исследованных группах пациентов с аскаридозом и контроля не обнаружено. Среди женщин с аскаридозом и представителей контрольных групп обоих полов преобладал гомозиготный генотип IL10*C/*C - 48,31%, 59,65% и 51,16%, соответственно, тогда как в группе больных аскаридозом мужчин чаще встречался гетерозиготный генотип IL10*C/*Ä - в 52,94% случаев, но данные различия не достигли уровня статистической значимости (р>0,05).

При анализе распределения и попарном сравнении частоты встречаемости аллелей и генотипов полиморфного варианта -627С>А гена ILIO у больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями между собой статистически достоверных различий не обнаружено. Однако у пациентов со смешанными проявлениями достоверно чаще, чем в контрольной группе, встречался гетерозиготный генотип IL10*C/*A - в 57,58% случаев против 36,00% в контроле (%2=4,76; р=0,029; OR=2,41; 95%С1 1,08-5,38) и достоверно реже гомозиготный генотип IL10*C/*C - 33,33% против 56,00% контрольной группы (х2=5,1; р=0,024; OR=0,39; 95%С10,17-0,9) (рис. 5).

Рис. 5. Распределение частот генотипов и аллелей полиморфного варианта -6270А гена ILIO в выборках больных аскаридозом с различными клиническими проявлениями и индивидов контрольной группы

Таким образом, в результате проведенного анализа промоторного полиморфного локуса -627С>А гена ILIO, установлено значительное увеличение доли лиц - носителей гетерозиготного генотипа IL10*C/*A в группе больных в кишечной стадии аскаридоза со смешанными (аллергическими и диспепсическими) проявлениями (OR=2,41; 95%С1 1,08-5,38).

шо'сл: il10*c/*a il10*a/*a

il10*c

аллергическая * диспепсическая земешанная иконтрольная

Анализ ассоциации полиморфного варианта Argl30Gln (2044 G>A) гена IL13 с аскаридозом

Анализ полиморфного noKycaArgl30Gln (2044 G>Ä) гена IL13 не выявил статистически значимых различий в распределении частот генотипов и аллелей между пациентами с аскаридозом и представителями контрольной группы (3f=0,59, р~0,75 и х2=0,04, р=0,84, соответственно). В обеих группах преобладал гомозиготный генотип IL13*l30Arg/Arg (49,29% у больных аскаридозом и 53,00% в контроле), следующим по частоте встречаемости был гетерозиготный генотип IL13*130Arg/Gln (42,86% и 38,00%, соответственно). Частота гомозиготного по редкому аллелю генотипа IL13*130Gln/Gln составила у пациентов с аскаридозом 7,86%, среди индивидов контрольной группы - 9,00%.

Распределение частот аллелей IL13*130Arg и IL13*130Gln между группами больных аскаридозом и контроля существенно не отличалось. Частота встречаемости аллеля IL13 *130Arg у больных аскаридозом достигала 70,71%, в контроле - 72,00%, частота аллеля IL13*130Gln - 29,29% и 28,00%, соответственно. Согласно литературным данным, в европейской популяции данный аллель встречается в 33,00% случаев [Graves P.E. et al., 2000].

Также не обнаружено статистически значимых различий между больными аскаридозом и контролем различной половой принадлежности (р>0,05). Однако между пациентами с аскаридозом мужского и женского пола установлены статистически значимые различия в распределении частот аллелей и генотипов в целом (х2—8,01, р-0,005 и х2=9,12, р—0,01, соответственно). При попарном сравнении частоты встречаемости аллелей у больных аскаридозом мужчин достоверно чаще определялся аллель IL13*130Arg - в 81,37% по сравнению с больными аскаридозом женщинами - 64,61% (х2=8,8; р=0,003) и гомозиготный генотип IL13*130Arg/Arg - 64,71% в сравнении с 40,45% больных аскаридозом женского пола (х:=7,63; р=0,006) (рис. 6).

При анализе распределения частот аллелей и генотипов описываемого локуса у больных с различными клиническими проявлениями кишечной стадии аскаридоза и индивидами контрольной группы статистически значимых различий не выявлено (р>0,05).

Таким образом, в результате проведенного анализа промоторного полиморфного варианта Argl30G!n гена IL 13 обнаружено статистически достоверно более высокая частота встречаемости носителей генотипа ILl3*130Arg/Arg и аллеля ILI3*130Arg среди пациентов с кишечной стадией аскаридоза мужского пола по сравнению с больными аскаридозом женщинами.

90.00% у

: мужчины больные Г мужчины контроль —женщины больные а женщины контроль

Рис. 6. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса Аг^130С1п (2044 (7>/1) гена 1ЫЗ у больных аскаридозом различной половой принадлежности

Анализ ассоциации полиморфного локуса -308С>А гена фактора некроза опухоли а (ТМРа.) с аскаридозом

Проведенный нами анализ промоторного полиморфного локуса -3080>А гена ТМРа не выявил достоверных различий между группами больных аскаридозом и индивидами контрольной группы. Преобладающим в обеих выборках был гомозиготный генотип ШРа *С/*0 (77,14% и 81,00%, соответственно) и чаще встречался аллель ГЛ77а *Ст (87,86% и 90,50%, соответственно).

Анализ распределения и попарное сравнение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -308С>А гена ТМРа у больных с различными клиническими проявлениями кишечной стадии аскаридоза, а также сравнение этих групп с контролем, не выявили значимых отличий между анализируемыми выборками. Во всех группах преобладающим был гомозиготный генотип ТЫРа *(}/*0, на долю которого приходилось 77,08% пациентов с аллергической симптоматикой, 79,66% - с диспепсическими проявлениями, 72,73% - со смешанными и 81,00% индивидов контрольной группы. Частота встречаемости генотипа ШРа *С/*А у больных со смешанными (аллергическими и диспепсическими) проявлениями была выше (24,24%) в сравнении с пациентами из аллергической (20,83%), диспепсической (20,34%) и контрольной групп (19,00%), но различия не достигли статистической значимости (р>0,05).

Анализ распределения частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -3080>А гена ТЫРа не обнаружил тендерных различий ни в группе больных аскаридозом, ни в контрольных группах, также как при сравнении групп

пациентов с кишечной стадией аскаридоза с индивидами из контрольных выборок соответствующего пола. Однако при попарном сравнении частоты встречаемости генотипов выявлено, что в группе больных аскаридозом мужчин достоверно чаще встречается гетерозиготный генотип ШРа*(т/*А - в 31,37% случаев против 15,73% у больных аскаридозом женщин (х2=4,71; р—0,03) и реже гомозиготный генотип ШРа *0/*0 - 68,63% против 82,02% у пациентов женского пола (х2=4,71; р~0,03) (рис. 7).

tnfa*g/*g tnfa*g/*a

tnfa*a/*a

^ мужчины больные л мужчины контроль - женщины больные % женщины контроль

Рис. 7. Распределение частот аллелей и генотипов полиморфного локуса -308Сг>А гена TNFa у больных аскаридозом различной половой принадлежности

Таким образом, полученные нами результаты анализа полиморфного локуса -308G>A гена TNFa у больных аскаридозом и индивидов контрольной группы обнаружили более высокую, статистически достоверную частоту встречаемости гетерозиготного генотипа TNFa *G/*A у больных аскаридозом мужчин (%"=4,71; р=0,03) и гомозиготного генотипа TNFa*G/*G в группе пациентов с аскаридозом женского пола (£=4,71; р=0,03).

Анализ ассоциаций сочетаний полиморфных локусов IL4 (-5900Т), JL4Ra (Ile50Val), ILIO (-6270А), IL13 (Argl30Ghi), TNFa (-308G>A) и CCLU (-384A>G) при аскаридозе

Нами проведена оценка роли межгенных взаимодействий 6 полиморфных локусов 6 генов цитокинов в детерминации риска развития аскаридоза у индивидуумов из Республики Башкортостан.

При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов генов цитокинов (IL4 (-5900Т), IL4Ra (IleSOVal), ILIO (-627С>А), ILI3 (Argl30Gln), CCL11 (-384A>G), TNFa (-308G>A) с помощью программы GMDR была определена двухфакторная модель взаимодействия ДНК-локусов, приводящая к развитию аскаридоза: IL4Ra (Ile50Val) и CCL1I (-384Ä>G)

(рис.8). На рисунке темно-серым цветом выделены ячейки с сочетаниями генотипов повышенного риска, светло-серого - пониженного риска.

IL4R

¡1 N

Рис. 8. Комбинации генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (lL4Ra (IleSOVal), CCL11 (S84A>G)), ассоциированные с повышенным и пониженным риском развития аскаридоза

Тестируемая сбалансированная точность (Bal.Acc.) данной модели составила 0,5750, чувствительность (Se) - 0,55, специфичность (Sp) - 0,6, повторяемость результата (CV Consistency) - 9/10, р<0,05.

К сочетаниям повышенного риска развития заболевания были отнесены 4 различные комбинации генотипов: CCL11*А/*А - IL4Ra*50Ile/Ile; CCL11 *G/*A - IL4Ra *50Ile/Ile; CCL11*A/*A - IL4Ra*50Ile/Val; CCL11*A/*A -IL4Ra*5QVal/Val. К сочетаниям пониженного риска развития заболевания были отнесены 5 различных комбинаций генотипов: CCL1 l*G/*A - IL4Ra*50Ile/Val; CCL11*G/*A - IL4Ra*50Val/Val; CCL11*G/*G - IL4Ra*50Ile/Ile; CCL11*G/*G-IL4Ra*50Ile/VaI; CCL11*G/*G - !L4Ra*50VaJ/Val.

Комбинация CCLJ1*A/*A - IL4Ra*50Ile/Ile в 2 раза чаще встречалась у больных аскаридозом - в 8,6%, чем в контроле - 4,0%, однако при попарном сравнении частот комбинаций разница не достигла статистической значимости (^=1,29; р=0,26). Частота комбинации CCL11*A/*A - IL4Ra*501le/Val также была выше у пациентов с аскаридозом - ]4,3% по сравнению с группой контроля 8,0% (х2=2,24; р=0,135). Носителей комбинации CCL11*А/'*А -JL4Ra*50Val/Val среди индивидов контрольной группы не наблюдалось. Сочетания генотипов CCL11*G/*G - IL4Ra*50Ile/Va1; CCL11*G/*G -IL4Ra*50Val/Val встречались реже у больных аскаридозом (9,3% и 2,1%, соответственно), по сравнению с группой контроля, у которых частота данных комбинаций составляла 15,0% и 4,0%, соответственно, однако разница оказалась статистически недостоверной (х2=1,85; р—0,174; х2=0,21; р-0,65 ).

Частота встречаемости комбинации гетерозиготных генотипов CCLU*G/*A -IL4Ra*50Ile/Val была достоверно выше у индивидов контрольной группы 39,00% по сравнению с пациентами с аскаридозом - 21,4% (%3=8,79; рЮ,003). Показатель OR развития аскаридоза у носителей комбинации генотипов C.CL11*G/*A - IL4Ra *50Ile/Val составил 0,43 (95%CI 0,24-0,75).

При исследовании межгенных взаимодействий полиморфных локусов генов цитокинов (114 (-590С>Т'), IL4Ra (Ile50Val), ILIO (-6270А), IL13 (Argl30Gln), CCL11 (-384A>G), TNFA (-308G>A) в группах больных аскаридозом и контроля женского пола также была определена двухфакторная модель взаимодействия ДНК-локусов: IIJRa (Ile50Val) и ILIO (-627С>А) (рис.9).

1LR4

Позышенчый ом.ск

□

риск

Пониженной

Рис. 9. Комбинации генотипов полиморфных локусов генов цитокинов (IL4Ra (Ile50VaI), IL10 (-6270А)), ассоциированные с повышенным и пониженным риском развития аскаридоза у больных аскаридозом и контрольной группы женского пола

Тестируемая сбалансированная точность (Bal.Acc.) данной модели составила 0,627, чувствительность (Se) - 0,67, специфичность (Sp) - 0,58, повторяемость результата (CV Consistency) - 10/10, р<0,01.

К сочетаниям повышенного риска развития заболевания были отнесены 5 различных комбинаций генотипов: IL10*C/*A - IL4Ra*50Ile/Ile; IL10*C/*A -DARa*50Ile/Val; IL10*AJ*A - IL4Ra*50Val/Val; IL10*C/*C - IL4Ra*50Ile/Ile; IL10*C/*C - lL4Ra*50Val/Val. К сочетаниям пониженного риска развития заболевания были отнесены 4 различных комбинации генотипов: IL10*A/*A -IL4Ra*50Ile/Val; IL10*A/*A - IL4Ra*50Ile/Val; ILI0*C/*A - IL4Ra*50Val/Val; IL10*C/*C - IL4Ra*50Ile/Val.

Комбинации IL10*C/*C - IL4Ra*50Ile/Ile, IL10*C/*C - IL4Ra*50Val/Val и IL10*C/*A. - IL4Ra*50Ile/Val встречались в 2 раза чаще у больных аскаридозом женщин - в 20,2%, 10,0% и 22,5%, соответственно, чем у женщин контрольной

21

группы - 12,3%, 5,3% и 10,5%, однако разницы оказались статистически недостоверньми (хН,56; р=0,21; хМ,08; р=0,298; у?=3,39; р=0,066). Носителей комбинации IIJ0*A/*A - lL4Ra*50Val/Val среди женщин группы контроля не отмечалось. Сочетания генотипов: ILIO*А/*А - IL4Ra*50Ile/Val и IL10*C/*A - IL4Ra*50Val/Val встречались реже у больных аскаридозом женщин (5,6% и 9,0%, соответственно), по сравнению с женщинами контрольной группы, у которых частота данных комбинаций составляла 8,8% и 12,3%, соответственно, однако разницы оказались статистически недостоверными (Г~0,16; р=0,689; />0:41; р=0,523). Комбинация IL10*C/*C - IL4Ra*50Ile/Val встречалась достоверно чаще у женщин группы контроля - в 42,00% по сравнению с женщинами с аскаридозом - 18,0% (х2=10,17; р=0,001). OR развития аскаридоза у женщин -носителей комбинации генотипов IL10*C/*C -IL4Ra*501le/Val, составил 0,3 (95%С10,14-0,64).

Таким образом, на основе полученных нами результатов, обнаружено, что комбинации генотипов CCL11*G/*A - IL4Ra*50Ue/Val в общей выборке и IL10*C/*C - IL4Ra*50Ile/Val у лиц женского пола являются маркерами пониженного риска развития аскаридоза (OR= 0,43,95%С1 0,24-0,75); OR=0,3, С195% 0,14-0,64, соответственно).

ВЫВОДЫ

1. Клинические проявления кишечной стадии аскаридоза характеризуются развитием трех вариантов течения аскаридоза - аллергического, диспепсического и смешанного, относительной эозинофилией у 10,7% больных, повышением уровня трансаминаз до 4 норм (АЛаТ - в 67,9%, АСаТ - в 34,3% случаев) и снижением уровня гемоглобина у 37% пациентов.

2. Генотип CCL11*A/*A и аллель CCL1I*A полиморфного варианта -384A>G гена CCL11 являются маркерами повышенного риска развития клинических проявлений аскаридоза.

3. Генотип IL4Ra*50 Val/Val полиморфного варианта IleSOVal гена IL4Ra ассоциирован с диспепсическим вариантом течения и генотип IL10*C/*A полиморфного варианта -627С>А гена ILIO - со смешанным вариантом течения кишечной стадии аскаридоза.

4. Обнаружены статистически достоверные тендерные различия в распределении частот аллелей и генотипов полиморфных локусов генов IL4(-590C>T), IL 13 (ArgBOGln) и TNFA(-308G>A) между пациентами с аскаридозом различной половой принадлежности.

5. Выявлено межгенное взаимодействие полиморфных локусов генов эотаксина CCL11 (-384A>G) и a-цепи рецептора интерлейкина 4 IL4Ra (IleSOVal), детерминирующее развитие аскаридоза. Определены комбинации полиморфных вариантов генов a-цепи рецептора интерлейкина 4 IL4Ra (IleSOVal) и интерлейкина 10 ILIO (-627С>А), ассоциированные с развитием аскаридоза у женщин.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

У больных аскаридозом выявлены генетические маркеры, ассоциированные с аллергическим вариантом (генотип CCLI1*A/*A и аллель CCL11*A полиморфного варианта -384A>G гена CCL11), с диспепсическим вариантом (генотип IL4Ra*50 Val/Val полиморфного варианта I1e50Val гена IL4Ra ) и со смешанным вариантом (генотип IL10*C/*A полиморфного варианта -627С>А гена ILIO) течения аскаридоза.

У пациентов с аскаридозом обнаружены генетические маркеры повышенного риска развития клинических проявлений аскаридоза: генотип CCL1]*A/*A и аллель CCL11*A полиморфного варианта-384A>G гена CCL11.

Результаты проведенного исследования могут быть использованы для своевременного прогнозирования различных клинических вариантов течения кишечной стадии аскаридоза.

Список публикаций по теме диссертации

1. Мурзагалеева, Л.В. Современные особенности клинических проявлений аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Е.Р. Валинурова, Д.Н. Шокуров, Д.А. Валишин, Ф.М. Хусаинова//Материалы 72-й юбилейной Республиканской конференции студентов и молодых ученых, посвященной Году 450-летия единства Башкортостана с Россией, 75-летию БГМУ, 60-летию СНО и 40-летия СМУ. - Уфа, 2007. - С. 317-318.

2. Мурзагалеева, Л.В. Содержание гормонов щитовидной железы у больных с кишечной стадией аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Е.Р. Валинурова, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П. Мамон, Д.Н. Шокуров //Сборник трудов XII Российской научно-практической конференции «Инфекционные болезни: актуальные вопросы в клинике и эксперименте», посвященной 75-летию Дагестанской МГА. - Махачкала, 2007. - С. 221-222.

3. Мурзагалеева, Л.В. Современные особенности клиники и патогенеза аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П. Мамон, Е.Р. Валинурова//Сборник материалов Международного Евро -Азиатского Конгресса по Инфекционным заболеваниям. - Витебск. - 2008. - С. 158-159.

4. Мурзагалеева, Л.В. Современные клинико-лабораторные особенности аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, Р.Т. Мурзабаева, А.П. Мамон // Сборник научных трудов XIV Российской научно - практической конференции «Актуальные вопросы инфекционных болезней в клинике и эксперименте». - Махачкала, 2009. - С. 174-178.

5. Мурзагалеева, Л.В. Значение полиморфизма -384A>G гена эотаксина у больных с кишечной стадией аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, A.C. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Сборник научных трудов VIII областной научно - практической конференции «Актуальные проблемы инфекционной патологии», посвященной 65-летию кафедры эпидемиологии и инфекционных болезней Оренбургской ГМА. - Оренбург, 2010. - С. 87 - 88.

6. Мурзагалеева, Л.В. Роль полиморфизма -384A>G гена эотаксина при аскаридозе [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, A.C. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Материалы 2 Ежегодного Конгресса по инфекционным болезням: Инфекционные болезни. -2010. - Т.8, прил. 1. -С.215.

7. Мурзагалеева, Л.В. Ассоциация полиморфизма -384A>G гена эотаксина с клиническими вариантами течения кишечной стадии аскаридоза [Текст] / Л.В. Мурзагалеева, Д.А. Валишин, A.C. Карунас, Э.К. Хуснутдинова // Научно-практический журнал «Медицинский вестник Башкортостана». -2010. - Т. 5, №2.-С. 36-42.

Подписано в печать 28.05.10 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Тираж 100 экз. Заказ 379. Гарнитура «TimesNewRoman». Отпечатано в типографии «ПЕЧАТНЫЙ ДОМЪ» ИП ВЕРКО. Объем 1,3 н.л. Уфа, Карла Маркса 12 корп. 4, т/ф: 27-27-600, 27-29-123