Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:Клинико-биохимическая оценка эффективности местной терапии хронического рецидивирующего афтозного стоматита

На правах рукописи

АКОПОВА Люцина Вячеславовна

КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ МЕСТНОЙ ТЕРАПИИ ХРОНИЧЕСКОГО РЕЦИДИВИРУЮЩЕГО АФТОЗНОГО СТОМАТИТА

14.01.14 - стоматология 03.01.04 — биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени

кандидата медицинских наук 21 ОКТ 2015

Краснодар - 2015

005563495

005563495

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кубанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России)

Научный руководители: доктор медицинских наук, профессор

Скорикова Людмила Анатольевна

доктор медицинских наук, профессор Быков Илья Михайлович

Официальные оппоненты:

Фирсова Ирина Валерьевна, доктор медицинских наук, доцент, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО ВолгГМУ Минздрава России), кафедра терапевтической стоматологии, заведующая кафедрой;

Никулина Дина Максимовна, доктор медицинских наук, профессор, государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Астраханский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Астраханский ГМУ Минздрава России), кафедра биологической химии, заведующая кафедрой.

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение дополнительного профессионального образования «Институт повышения квалификации Федерального медико-биологического агентства России» (ФГБОУ ДПО ИПК ФМБА России).

Защита состоится_2015 г. в_часов на заседании диссертационного

совета Д 208.038.02 на базе ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (350063, г. Краснодар, ул. Седина, 4, тел. (861) 262-73-75).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке и на официальном сайте ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России http://www.ksma.ru

Автореферат разослан «_» «_» 2015 года.

Учёный секретарь диссертационного совета Д 208.038.02

доктор медицинских наук, доцент

Лапина Наталья Викторовна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В течение последнего десятилетия проблеме профилактики и лечения хронических заболеваний слизистой оболочки полости рта уделяется значительное внимание в отечественных и зарубежных исследованиях (Е.В. Боровский, 2011; О.Ф. Рабинович, 2010; Н.Ф. Данилевский, 2010; G. Gehre, 2011). В повседневной клинической практике пациенты с заболеваниями слизистой оболочки полости рта, обратившиеся за стоматологической помощью, представляют одну из наиболее сложных проблем в стоматологии из-за трудностей в диагностике, лечении и частых рецидивов (А.И. Николаев, 2008; J.F. Reenen, 2013). Проблема усложняется еще и тем, что до настоящего времени каких-либо мер коммунальной профилактики болезней слизистой оболочки полости рта не разработано.

Хронический рецидивирующий афтозный стоматит (ХРАС) - инфекционное заболевание, возникающее в результате взаимодействия трех основных факторов: микроорганизмов, макроорганизма и окружающей среды (E.H. Силантьева, 2013; O.A. Успенская, 2015). Хронический рецидивирующий афтозный стоматит характеризуется частым рецидивированием высыпаний на слизистой оболочке полости рта и обычно сопровождается нарушением целостности эпителия, местной воспалительной реакцией и выраженным болевым синдромом, ухудшающим качество жизни пациентов (М.Т. Темирбаев, 2010; Е.В. Бахрушина, 2012; R. Hofmann, 2009).

Хронический рецидивирующий афтозный стоматит считается одним из самых частых заболеваний слизистой оболочки полости рта. Так, еще по данным А.И. Рыбакова и Г.В. Банченко (1978), он составлял до 5 % от всех заболеваний слизистой оболочки полости рта. По мнению других исследователей почти у 20 % населения появляются афты в тот или иной период жизни. Установлено, что возраст большинства больных колеблется от 20 до 40 лет. До полового созревания болеют одинаково часто лица обоего пола, но среди взрослых преобладают женщины (И.М. Рабинович, И.И. Бабиченко, О.Ф. Рабинович, 2011).

Этиология и патогенез хронического рецидивирующего афтозного стоматита окончательно не выяснены. Существенная роль в патогенезе хронических воспалительных процессов принадлежит состоянию микробиоценоза слизистой оболочки полости рта (И.М. Быков, 2013, 2015; R. Amone, 2013; H. Kimura, 2014). Кроме того, по наблюдениям отечественных и зарубежных ученых рецидивы ХРАС нередко связаны с какими-то провоцирующими факторами, в том числе инфекционной природы (O.A. Успенская, 2015; C.J. Thomas, 2014). О роли желудочно-кишечной патологии и заболеваний печени в патогенезе хронического рецидивирующего афтозного стоматита свидетельствуют клинические и экспериментальные данные (J1.A. Цветкова, 2006; Е.В. Боровский, 2011).

В то же время, проблема свободнорадикальных процессов и антиоксидантной защиты в слюне при данной патологии остается малоизученной. Известно, что нарушения иммунологического и свободнорадикального статуса могут влиять на течение и прогноз хронических заболеваний слизистой оболочки полости рта (А.Ф. Гаспарян, 2010; Г.В. Банченко, 2010; И.М. Быков, 2015; Т.Е. Emmer, 2015).

Лечение хронического рецидивирующего афтозного стоматита всегда представляет трудную задачу, поскольку необходимо достижение стойкой и длительной ремиссии под контролем клинико-иммунологического и клинико-биохи-мического обследования больного. Одним из направлений в лечении дисбиоза слизистых оболочек на современном этапе развития медицинской науки ученые считают применение комплексных препаратов бактериального происхождения,

которые действуют по принципу вакцин, например, имудона (И.О. Абашидзе, 2006; О.Ф. Рабинович, 2010,2012; R.P. Feller, 2014).

Кроме этого, для эффективной терапии поражений слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите необходимо использовать препараты и вещества, разрешенные к использованию в медицинской практике с уже известными свойствами (например, адгезивными), а также разработать и предложить новые перспективные средства, обладающие универсальными свойствами.

Не лишены актуальности научные работы в области поиска новых средств местной терапии поражений слизистой оболочки полости рта, обладающих противовоспалительными, антибактериальным, ранозаживляющим, кровоостанавливающим, противоотечным, местнообезболивающим, разжижающим слюну свойствами, позволяющими эффективно использовать их в случаях сочетанной патологии тканей пародонта и слизистой оболочки полости рта в виде хронического рецидивирующего афтозного стоматита.

В связи с этим изучение патогенетических механизмов местной терапии поражений слизистой оболочки полости рта больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом и разработка дифференцированных принципов лечения данного заболевания, являются актуальной задачей современной стоматологии.

Цель исследования: повысить эффективность терапии поражений слизистой оболочки полости рта у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом на основании объективных данных местного иммунитета и состава ротовой жидкости путем разработки и клинического применения новых адгезивных лечебных средств.

Задачи исследования

1. Разработать состав и способ изготовления новых адгезивных лечебных средств для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите, с учетом их влияния на биохимические и иммунологические показатели ротовой жидкости.

2. В эксперименте на животных изучить токсическое и раздражающее воздействие разработанных адгезивных лечебных средств на организм при длительном их применении.

3. В эксперименте на животных исследовать ранозаживляющие и регенераторные свойства разработанных адгезивных лечебных средств.

4. Изучить степень дисбиоза полости рта по показателям активности уреазы и лизоцима, дать оценку состоянию антиоксидантных систем и процессов перок-сидации липидов при использовании PAJIC у больных ХРАС.

5. В клинических условиях оценить сроки эпителизации слизистой оболочки полости рта и количество рецидивов при использовании разработанных и традиционных средств терапии ХРАС.

Научная новизна полученных результатов

Впервые на основе лабораторных испытаний, токсико-гигиенических, экспериментальных и клинических исследований разработан оптимальный состав адгезивных лечебных средств для терапии пораженной слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите, с учетом их влияния на биохимические и иммунологические показатели ротовой жидкости (патент РФ на изобретение № 2542469).

Впервые установлено, что включение в план комплексного лечения больных ХРАС разработанных средств, устраняющих болевой фактор, ускоряющих процессы регенерации элементов поражения, нормализующих иммунологическую реактивность, повышающих структурную резистентность слизистой оболочки

полости рта предупреждает и уменьшает количество рецидивов и облегчает тяжесть течения заболевания.

Впервые доказано, что использование РАЛС не только нормализует метаболические нарушения, лежащие в основе появления афт при ХРАС, но и позволяет достичь хорошего гигиенического состояния полости рта и зубов.

Впервые установлены показатели ротовой жидкости и крови, которые подвержены изменениям при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите и факторы, которые способствуют ускорению эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта.

Установлено, что включение разработанных адгезивных лечебных средств в комплексное лечение больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом способствует устранению явлений гипосаливации, дисбиоза и воспаления за счет активации защитных систем ротовой жидкости, представителями которых являются лизоцим и каталаза.

Практическая значимость полученных результатов

Доказана необходимость индивидуального подхода и тщательного анализа показателей ротовой жидкости и крови больных ХРАС при определении схемы общей и местной терапии.

Показана необходимость разработки лечебно-профилактических мероприятий, направленных на стимуляцию скорости саливации, повышение структурной резистентности тканей полости рта и нормализацию микробиоценоза у больных ХРАС.

Установлено, что применение разработанных адгезивных лечебных средств в клинике патогенетически обосновано и эффективно для включения их в комплексную терапию при лечении больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом. Назначение РАЛС ускоряет процессы эпителизации афт и снижает количество рецидивов.

Результаты клинических испытаний свидетельствуют о быстрой ремиссии заболевания, уменьшении скорости образования зубного налета и улучшении гигиенического состояния полости рта сразу после начала использования РАЛС.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Уменьшение скорости саливации приводит к снижению неспецифической резистентности тканей полости рта, возрастанию обсемененности и агрессивных свойств микроорганизмов у больных хроническим афтозным стоматитом.

2. Использование разработанных адгезивных лечебных средств улучшает гигиеническое состояние полости рта у пациентов с ХРАС, как за счет прямого антимикробного действия компонентов РАЛС, так и за счет их способности стимулировать саливацию и повышать местный иммунитет.

3. Местную терапию поражений слизистой оболочки полости рта при ХРАС необходимо проводить под контролем биохимических и иммунологических показателей ротовой жидкости.

4. Использование РАЛС у больных ХРАС обеспечивает снижение уровня общего кальция, неорганического фосфора, лизоцима и 51дА, а также активности щелочной фосфатазы в составе ротовой жидкости через 5 суток после начала лечения до уровней, сопоставимых с показателями, выявленными в группе практически здоровых лиц.

5. Применение в комплексном лечении больных с ХРАС разработанных адгезивных лечебных средств позволяет сократить сроки эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта.

Личный вклад соискателя. Автором лично проанализирована научная литература и проведен патентно-информационный поиск по теме диссертации.

Определена актуальность проблемы, сформулирована цель и задачи данной работы. Самостоятельно проведены экспериментальные, биохимические, клинические и лабораторные исследования, осуществлена статистическая обработка, систематизация, анализ и обобщение полученных результатов. Сформулированы выводы и рекомендации для научного и практического использования результатов исследования. Оформлена диссертация и опубликованы научные работы по всем разделам диссертации. Результаты оригинальных исследований зафиксированы в операционных протоколах, картах больных. Диссертант принимала непосредственное участие в разработке рецептурных композиций адгезивных лечебных средств и проведении их доклинических испытаний. Статистическая обработка и анализ полученных данных выполнены автором самостоятельно. Вклад в проведенное исследование составляет 85 %.

Внедрение результатов исследований. Полученные результаты используются в ГБУЗ «Краевая клиническая стоматологическая поликлиника» министерства здравоохранения Краснодарского края (г. Краснодар); СП ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (г. Краснодар); в учебном процессе на профильных стоматологических кафедрах ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России и ГБОУ ВПО СтГМУ Минздрава России, кафедре фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России (г. Краснодар). Результаты исследования внедрены и используются в лечебной работе государственных и частных учреждений г. Краснодара и Ставрополя.

Публикации и апробация диссертационной работы. По теме диссертации опубликованы 14 печатных работ, из них 9 - в изданиях, включенных в Перечень российских рецензируемых научных журналов, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук, получен патент РФ на изобретение.

Материалы диссертации доложены на конференции «Современные проблемы амбулаторной хирургической стоматологии» (г. Ростов-на-Дону, 2010 г), VII Всероссийском научном форуме с международным участием «Стоматология 2012» (г. Москва, 2012), XV итоговой (межрегиональной) научной конференции студентов и молодых ученых (Краснодар, 2014); IV Открытой межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых и студентов «Актуальные проблемы экспериментальной и клинической медицины» (Краснодар, 2015), а также на XXI Всемирном конгрессе по реабилитации в медицине и иммунореа-билитации (Сингапур, 2015).

Апробация диссертации проведена на расширенном заседании сотрудников стоматологических кафедр, кафедры фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 178 страницах компьютерного текста и состоит из введения, обзора литературы, главы материалы и методы исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Список использованной литературы включает 295 источников, из них 179 отечественных и 116 иностранных автора. Диссертация иллюстрирована 49 рисунками, содержит 20 таблиц. Диссертационное исследование выполнено на кафедрах пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний и фундаментальной и клинической биохимии ГБОУ ВПО КубГМУ Минздрава России в рамках отраслевой научно-исследовательской программы № 22 «Стоматология». Номер государственной регистрации: 01206861421.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Общая характеристика проведенных исследований. Решение поставленных в диссертационной работе задач осуществлялось в условиях эксперимента и в клинике. Использовался комплекс клинических и лабораторных методов исследования, а также методы экспериментального моделирования, которые позволили получить необходимый материал для соответствующих теоретических выводов, обосновать и разработать рецептуру адгезивных лечебных средств для профилактики и лечения поражений слизистой оболочки полос™ рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите и предложить практические рекомендации.

Экспериментальные исследования in vivo проведены для оценки токсичности, ранозаживляющей активности, лечебно-профилактической эффективности РАЛС. Проведено несколько серий экспериментальных исследований на 250 белых крысах стадного разведения линии Вистар.

В клинических исследованиях приняли участие 54 больных (42 - основная группа и 12 - контрольная), страдающих хроническим рецидивирующим афтоз-ным стоматитом и 30 практически здоровых лиц. Общий объем клинико-экспериментальных исследований проведенный в рамках данной диссертационной работы представлен в таблице 1.

Таблица 1

Объем экспериментальных и клинических исследований

Объекты исследования Наименования проведенных исследований Кол-во

Экспериментальные исследования

Крысы Исследование общей токсичности, ранозаживляющей активности, лечебно-профилактической эффективности РАЛС 250

Клинические исследования

Практически здоровые лица Биохимическое исследование ротовой жидкости и крови 30

Больные с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом (контрольная группа) Биохимическое исследование ротовой жидкости и крови до и после лечения 12

Больные с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом (основная группа) Биохимическое исследование ротовой жидкости и крови до и после лечения 42

Материалы и методы экспериментальной части исследования. Для исследования острой и хронической токсичности, наличия или отсутствия раздражающего действия, влияния на скорость эпителизации раны при остром воспалительном процессе, влияния на развитие и инволюцию венозного застоя при травматическом отеке разработанные адгезивные лечебные средства испытаны в условиях эксперимента на животных по общепринятым методикам с созданием типичных для данного рода исследований экспериментальным моделям.

Токсикологические исследования РАЛС проводились согласно требованиям «Методических указаний по экспериментальному (фармакологическому) и клиническому испытанию гигиенических и лечебно-профилактических средств для ухода за полостью рта» Фармкомитета Минздрава России, 2004 г. и «Государ-

ственных санитарных правилам и норм безопасности продукции парфюмерно-косметической промышленности», СанПиН 2.2.9.027-99 и включали изучение следующих токсико-гигиенических показателей: «острой» и «хронической» токсичности средств при нанесении на кожу, «острой» и «хронической» токсичности при введении в желудок, кожно-раздражающего действия, раздражающего действия на слизистую оболочку полости рта, сенсибилизирующего действия, а также микробной обсемененности.

На 3, 6 и 9 день после операции экспериментальных животных путем эвтаназии выводили из эксперимента в соответствии с Директивой 2010/63/EU ЕВРОПЕЙСКОГО ПАРЛАМЕНТА И СОВЕТА ЕВРОПЕЙСКОГО СОЮЗА по охране животных с отбором проб тканей для гистологических исследований.

Материал, взятый для гистологических исследований фиксировали в 10 %-ном водном растворе нейтрального формалина, проводили через спирты возрастающей крепости и ксилол, а затем заливали в гистологическую среду «Ги-стомикс» с использованием гистологического процессора замкнутого типа Tissue-Tek VIP™ 5 Jr. производства Sakura (Япония).

После заливки кусочки органов фиксировали на стандартные гистологические кассеты, затем делали гистосрезы толщиной 3-5 мкм.

Для обзорных целей гистосрезы окрашивали гематоксилином и эозином согласно рекомендациям, изложенным в руководстве В.В. Семченко с соавт. (2006). С каждого препарата окрашенного гематоксилином и эозином, выполняли цифровые снимки (в формате .jpg, размером 3136 х 2352 пикселей в палитре 24 бит) в области раневых дефектов при увеличении х40, хЮО, х200, х400, хЮОО. В гистологических срезах исследовали эпидермис, дерму, гиподерму и поверхностные скелетные мышцы правого и левого бедра.

Полученные материалы исследований анализировали, а статистическую обработку числовых данных проводили с помощью однофакторного дисперсионного анализа и множественного сравнения Ньюмена-Кейлса в программе Primer of Biostatistics 4.03 для Windows. Достоверными считали различия при р < 0,05.

Материалы и методы клинической части исследования. Лечение и обследование больных проводилось в течение 2010-2015 гг. на кафедре пропедевтики и профилактики стоматологических заболеваний и фундаментальной и клинической биохимии КубГМУ. Для клинических исследований сформировано 2 группы больных ХРАС - основная и контрольная.

В клинических исследованиях приняли участие 42 пациента основной группы (22 женщины и 20 мужчин) с диагнозом хронический рецидивирующий афтозный стоматит (ХРАС).

В зависимости от степени выраженности клинических проявлений заболевания, у больных ХРАС для местной терапии использовали РАЛС № 1 (единичные поражения, 28 больных) или РАЛС № 2 (множественные поражения, 14 больных).

В контрольной группе (12 пациентов) использовали для местной терапии препараты «Асепта» и «Холисал».

Кроме этого, для получения объективных данных биохимических исследований ротовой жидкости и крови, обследована группа из 30 практически здоровых лиц.

Состав разработанных адгезивных лечебных средств (РАЛС № 1 и РАЛС № 2) (на 100 мг): глицерин, эфирные масла лаванды колосовой, тимьяна обыкновенного, шалфея лекарственного, мяты перечной, цветков липы, сок коланхоэ, крапивы двудомной, глюкозамина гидрохлорид, Полисорб-МП, пектин и диметилсуль-фоксида, при определенном следующем соотношении компонентов (патент РФ на изобретение № 2542469).

РАЛС представляет собой однородный прозрачный гель, от светло-желтого до коричневого цвета с приятным травяным, освежающим мятным, пряным запахом. РАЛС применяли следующим образом: наносили тонким слоем на пораженную слизистую оболочку полости рта после каждого приема пищи, чистки зубов утром и вечером. Инструментальный контроль процессов заживления поражений слизистой оболочки полости рта при лечении ХРАС проводили каждые сутки.

Объективную оценку клинической эффективности указанных методов местного лечения проводили путем ежедневного измерения площади поражения слизистой оболочки полости рта (афты и эрозии) с использованием миллиметровой сетки (по методу О.С. Гилевой) по формуле: S = m2l + m22 + т23 + т24 / п, где т21, т22, т23, т24 - сумма площадей всех эрозии на внутренней поверхности щек (1), неба (2), десен (3) и губ (4), п - количество измерений.

Эффективность лечения также оценивали по исчезновению жалоб больных, скорости эпителизации афт, продолжительности периода ремиссии, определению некоторых показателей ротовой жидкости.

Общее лечение во всех группах было одинаковым и заключалось в лечении сопутствующих заболеваний, санации полости рта, устранении факторов, вызывающих появление афт, десенсибилизирующей терапии («Лоратадин», «Цетрин» по 1 табл. 3 раза в день).

Индекс гигиены полости рта (индекс Грина-Вермильона) определяли в соответствии с указаниями B.C. Иванова. Индекс основан на определении площади окрашивания зубных отложений красящими растворами щечной и губной поверхности зубов 16, 11, 24 верхней челюсти и язычной поверхности зубов 44, 31 и 36 нижней челюсти и оценивается в баллах: 0 — отсутствие окрашивания зубного налета; 1 — на 1/3 поверхности коронки окрашен зубной налет; 2 — зубной налет окрашен и покрывает от 1/3 до 2/3 поверхности коронок зубов; 3 — окрашенный зубной налет покрывает более 2/3 площади коронок зубов. При этом считали, что при значении индекса 0—1 — гигиеническое состояние полости рта хорошее; при значениях 1-2 удовлетворительное и при значениях 2—3 — плохое.

Для оценки степени активности воспалительного процесса проводили пробу Шиллера-Писарева.

Функциональную активность слюнных желез определяли на основании изучения скорости стимулированного и нестимулированного слюноотделения. Скорость слюноотделения выражали объемом выделенной слюны за единицу времени (мл/мин). Сбор ротовой жидкости осуществляли утром натощак. После центрифугирования при 2500 g в течение 10 минут при температуре +4 °С отбирали надосадочную жидкость, которую использовали для дальнейших биохимических исследований.

При поступлении больных на лечение в первый день появления афт оценивали гигиеническое состояние полости рта, собирали нестимулированную и стимулированную ротовую жидкость и рассчитывали скорость саливации в мл/мин. Сбор ротовой жидкости повторяли через каждые 7 суток, когда афты эпителизи-ровались и спустя 4 недели после их полной эпителизации.

Материалы и методы биохимических исследований. Объектами биохимических исследований были ротовая жидкость людей, сыворотка крови, слизистая оболочка полости рта и твердые ткани зубов экспериментальных животных. Из ткани слизистой оболочки полости рта готовили гомогенаты путем растирания навески с толченым стеклом и суспендирования в 0,85 %-ном растворе NaCl. После центрифугирования при 2500 об/мин в течение 15 мин при +4 °С для исследования активности ферментов отбирали надосадочную жидкость.

Активность фосфатаз определяли по методу Bessey O.A. в модификации Левицкого с соавт. по гидролизу р-нитрофенилфосфата.

Общую протеолитическую активность (ОПА) определяли по гидролизу казеина при pH 7,6 методом Кунитца в модификации А.П.Левицкого. Активность лизоцима определяли спектрофотометрическим методом Горина в модификации A.C. Брайловской (2005) по скорости просветления суспензии M. Lysodeikticus. Активность каталазы определяли по методу C.B. Гирина, концентрацию малонового диальдегида (МДА) по методу И.Д. Стальной, Т.Г. Гаришвили. Активность уреазы определяли по гидролизу карбамида путем измерения концентрации аммиака реактивом Несслера. По соотношению относительных активностей уреазы и лизоцима рассчитывали степень дисбиоза по методу А.П. Левицкого. По соотношению активности каталазы и концентрации МДА рассчитывали антиокси-дантно-прооксидантный индекс АПИ.

Биохимические методы исследования крови. Исследовали биохимические показатели, которые максимально объективно отражали изменения, происходящие при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите

Глюкозооксидазный метод применялся для определения содержания глюкозы в сыворотке крови. При проведении данного исследования применяли наборы жидких реагентов фирмы «Diasys». Норма составляла 3,3-6,1 ммоль/л.

Унифицированный метод по биуретовой реакции использовали для определения концентрации общего белка в сыворотке крови. Для этой цели применяли набор химических реактивов для определения общего белка в сыворотке крови по биуретовой реакции. Норма составляла 65—85 г/л.

Метод электрофоретического фракционирования на ацетатцеллюлозных пленках использовали для выявления концентрации белковых фракций в сыворотке крови. В качестве нормы считали следующие показатели: альбумины -58,8-69,6 %; а-глобулины 1-1,8-3,8 %; ß-глобулины - 8,9-13,6 %; у-глобулины -8,4-18,3 %.

Унифицированный метод по гидролизу п-нитрофенилфосфата применяли для определения активности кислой фосфатазы в сыворотке крови. Использовали наборы реагентов фирмы «Витал-Групп Диагностике». Норма составляла 0-250 нкат/л.

Унифицированные методы Лоури-Брока по гидролизу п-нитрофенилфосфата использовали для определения активности щелочной фосфатазы. Использовали наборы реагентов «Рус-ЩФ» ф. «МЕДИ-Диаком». В качестве нормы принимали 0,5-1,3 ммоль/(чхл).

Диацетиллюнооксштый методом исследовали содержание мочевины в сыворотке крови. Использовали наборы реагентов фирмы «Rocksuss». В качестве нормы принимали значение 3,33-8,30 ммоль/л.

Метод Триведи, модифицированный Триндером применяли для определения содержания мочевой кислоты в сыворотке крови. Использовали наборы фирмы «Доприма». В качестве нормы принимали значение 0,16-0,46 ммоль/л.

Для определения содержания общего кальция в сыворотке крови фотометрический метод. Использовали наборы реагентов фирмы «Доприма». В качестве нормы принимали значение 2,3-3,0 ммоль/л.

Для определения содержания неорганического фосфора в сыворотке крови применяли метод С.Н. Fiske. Использовали химические наборы реактивов фирмы «Over Dragon». В качестве нормы принимали значение 1-2 ммоль/л.

Биохимические методы исследования ротовой жидкости. В ходе реализации настоящего исследования изучено 4 биохимических показателя ротовой жидкости:

- уровень сиаловых кислот по методу E.L. Hess с соавт. В основе метода -цветная реакция, воспроизводимая в кипящей водяной бане с раствором кислот в результате гидролиза при выделении из состава сиалогликопротеинов сиаловых кислот. Проводили фотометрирование в ФЭКе (КФК-2МП) после охлаждения с зеленым светофильтром в кювете с шириной слоя 10 мм. В качестве нормы принимали значение 4,4-8,2 мг%;

- активность щелочной фосфатазы (ЩФ) исследовали аналогичным методом, что и активность щелочной фосфатазы крови. В качестве нормы принимали значение 0,97-1,32 нмоль/минхмл;

- количество общего кальция в ротовой жидкости измеряли по цветной реакции с о-креозолфталеинкомплексоном (о-КФК). В качестве нормы принимали значение 0,6-2,8 ммоль/л;

- концентрацию неорганического фосфора в ротовой жидкости определяли тем же методом, что и концентрацию неорганического фосфора крови. В качестве нормы принимали значение 2,9-6,4 ммоль/л.

Методы статистического анализа. Материалы исследования подвергнуты математической обработке на персональном компьютере с помощью пакетов статистических программ Exel 2007, Statistica for Windous 5.0. Результаты представлены в виде средней арифметической и ее стандартной ошибки (М ± т). Достоверность различий (р) между значениями в разные периоды времени внутри каждой из групп оценивалась с помощью Т-критерия Вилкоксона (для сопоставления показателей, измеренных в двух разных условиях на одной и той же выборке испытуемых). Для сопоставления двух, трех или более эмпирических распределений одного и того же признака использовали х2-критерий Пирсона.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

На сегодняшний день остается еще много нерешенных вопросов в лечении такого распространенного заболевания полости рта, как хронический рецидивирующий афтозный стоматит. Ряд авторов считает, что наилучших результатов можно достигнуть путем комбинированного лечения, направленного одновременно на различные патогенетические звенья заболевания. Экспериментальные исследования, проведенные в ЦНИИС под руководством профессора О.Ф. Рабиновича (2010, 2014), выявили значительные изменения в ротовой жидкости и в тканях слизистой оболочки полости рта при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите (ХРАС), причем эти нарушения были наиболее выражены в начальных стадиях развития патологического процесса.

Одновременно отмечен терапевтический эффект местных ранозаживляющих и кератопластических препаратов при экспериментальном стоматите, что проявлялось в предупреждении изменений содержания изученных медиаторов воспаления и предотвращении развития афтозных элементов. Указанные исследования, а также работы профессора И.М. Быкова с соавторами (2010, 2015), O.A. Успенской (2015) послужили экспериментальным обоснованием для разработки принципиально новых методов терапии и профилактики ХРАС с помощью разработанных адгезивных лечебных средств (РАЛС), действующих в широком терапевтическом спектре.

Самостоятельной разработке таких средств предшествовал патентный поиск, результатом которого стало создание оригинальной рецептуры в виде «Средства для местной терапии рецидивирующих афт полости рта при стоматите зубных рядов и пародонтите» (патент РФ на изобретение 2542469).

Аналогов разработанному и запатентованному средству, которое можно было бы использовать местно на слизистой оболочке полости рта при ХРАС, в настоящее время отечественная фармацевтическая промышленность не предлагает, поэтому прежде чем использовать PAJIC в клинике, нами проведен полный спектр экспериментальных и лабораторных исследований по изучению возможного его негативного влияния на in vivo.

Проведенные экспериментальные исследования показали отсутствие негативного воздействия разработанных адгезивных лечебных средств (PAJ1C) на организм при длительном их применении.

Результаты исследования «острой» токсичности PAJ1C при нанесении на кожу указали на отсутствие токсического действия разработанных адгезивных лечебных средств.

При оценке результаты изучения «острой» токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок, установлено, что внутрижелу-дочное введение в предельной дозе разработанных экспериментальных составов адгезивных композиций не вызывало признаков отравления ни у одного животного, а также заметных отклонений от состояния нормы.

Результаты изучения «хронической» токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при нанесении на кожу показали, что при длительном втирании PAJ1C в кожу лабораторных животных кумуляция и токсический эффект испытываемых средств отсутствует.

Результаты изучения хронической токсичности разработанных адгезивных лечебных средств при введении в желудок оценивали по двум группам показателей.

Первая группа - показатели прироста массы животных, относительной массы слюнных желез, содержания лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в крови животных после применения PAJ1C.

Статистический анализ полученных данных показал, что отмеченные изменения показателей прироста массы животных, относительной массы слюнных желез, содержания лейкоцитов, эритроцитов и гемоглобина в крови животных после применения адгезивов при введении в желудок в группах с PAJ1C по сравнению с контрольными опытами статистически достоверны (р < 0,05), критическое значение х2эмп достигает максимума в первой группе (PAJ1C № 1), где Х2эмп= 36.304, во второй группе опыта (РАЛС № 2) критическое значение х2эмп составляет х2эмп = 29.806 (данные статистически достоверны).

Вторая группа - показатели активности ферментов и содержания белка в сыворотке крови у экспериментальных животных под влиянием PAJIC.

Статистический анализ полученных данных показал, что отмеченные изменения показателей активности ферментов и содержания белка в сыворотке крови у экспериментальных животных под влиянием PAJIC при введении в желудок в группах с РАЛС по сравнению с контрольными опытами статистически достоверны (р < 0,05), критическое значение х2эмп достигает максимума в первой группе (PAJIC № 1), где х2эмп= 23.346, во второй группе опыта (РАЛС № 2) критическое значение х эмп составляет х2эмп = 14.421 (данные статистически недостоверны).

Результаты исследования локального раздражающего действия разработанных адгезивных лечебных средств при втирании в кожу (индекс кожно-раздражающего действия) показали, что по большинству показателей, достоверных отличий между контрольной и опытными группами нет. Следовательно, индекс кожно-раздражающего действия РАЛС № 1 и № 2 составил 0 баллов, что указывает на отсутствие кожно-раздражающего действия.

Результаты исследования локального раздражающего действия РАЛС при втирании в слизистую оболочку полости рта подтвердили отсутствие раздражающего действия у РАЛС.

Результаты исследования микробиологических показателей разработанных адгезивных лечебных средств показали, что РАЛС № 1 и № 2 не содержат патогенных микроорганизмов, что свидетельствует об их относительной микробной чистоте, которая обеспечивается содержанием в их составе бензоата натрия -средства, обладающего бактерицидным свойством.

Исследование специфической активности РАЛС № 1 при остром воспалительном процессе на модели открытой раны позволило установить, что использование РАЛС № 1 приводит к полной регенерации эпидермиса и производных кожи к 6-м суткам эксперимента, что характеризуется наличием активного роста волос и секрецией желез. В дерме наблюдаются сохранение в сосочковом слое гипертрофической рубцовой ткани и перерождение ее в сетчатом слое в нормот-рофическую рубцовую ткань. Последняя характеризуется компартментацией своих структур - упорядоченным расположением клеточного и волокнистого компонента относительно друг друга и параллельно базальной мембране эпидермиса.

В контрольной группе, в отличие от основной, к данному сроку продолжаются процессы альтеративного воспаления, наряду с сосудистыми проявлениями. В эпидермисе наблюдаются процессы начала восстановления слоистости эпителия и его функциональной активности. В дерме грануляционная ткань заканчивает свое формирование и происходит ее перестройка в сторону гипертрофической рубцовой ткани, в частности сетчатого слоя дермы.

В контрольной группе по сравнению с основной группой, патогистологиче-ские процессы на 6 сутки после формирования модели открытой раны характеризуются процессами более выраженного альтеративного воспаления всех структур кожи, что проявляется некробиозом и некрозом. Отмечается выраженная сосудистая реакция, проявляющаяся экссудативными процессами и процессами нарушения реологических свойств крови. Процессы репарации выражены слабо, что характеризуется отсутствием в дерме грануляционной ткани.

Изучение ранозаживляющей активности РАЛС № 2 на модели химического ожога показало, что применение данного средства способствует более активному заживлению и функционированию тканей эпидермиса и, производных кожи (волос, сальные и потовые железы) уже на 3-й сутки без выраженных патологических процессов, которые регистрировали в контрольной группе.

На 6 сутки использования РАЛС № 2 в основной группе отмечено практически полное восстановление дефекта кожи и ее производных. В дерме процесс перерождения грануляционной ткани происходит в сторону гипертрофической рубцовой ткани. Данное явление, по нашему мнению, может быть связано с компонентами, входящими в состав исследуемого средства, за счет действия которых происходит срыв ауторегуляторного процесса, либо его пролонгация. Данный процесс, как известно, не имеет тенденцию к инволюции и со временем не приводит к перерождению в нормотрофическую рубцовую ткань.

Совокупность вышеизложенных позиций позволяют считать разработанные адгезивные лечебные средства пригодными для использования в полости рта, в том числе для лечения повреждений слизистой оболочки полости рта при различных заболеваниях, сопровождающихся гиперемией, отеком, изъязвлением.

Проведенные ранее исследования по изучению патогенеза хронического рецидивирующего афтозного стоматита позволили установить, что одним из главных инициирующих факторов, запускающих патологический процесс в слизистой оболочке полости рта, является усиление процессов свободно радикального

окисления липидов. Данный патологический процесс во многом обусловлен снижением уровня антиоксидантной защиты и адаптивных свойств организма и тканей полости рта.

Между тем, как свидетельствуют результаты проведенных нами исследований, у больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом даже при наличии единичных афт на слизистой оболочке полости рта, отмечаются глубокие структурно-метаболические нарушения практически во всех зонах слизистой.

Следовательно, лечебно-профилактические мероприятия при этом должны быть направлены как на сами элементы поражения, так и на всю слизистую полости рта. Несмотря на наличие большого числа препаратов, применяемых для лечения хронического рецидивирующего афтозного стоматита, подавляющее число из них направлены на ускорение процессов эпителизации афт, тогда как другие участки слизистой оболочки полости рта оказываются вне лечебного воздействия.

В связи с этим, в план комплексного лечения таких больных необходимо включать препараты, устраняющие болевой фактор, ускоряющие процессы регенерации элементов поражения, нормализующие иммунологическую реактивность, повышающие адаптивные возможности организма, повышающие структурную резистентность слизистой оболочки полости рта.

Проведенные клинические наблюдения также убедительно доказывают тот факт, что с помощью специально подобранных средств можно повышать структурную резистентность слизистой оболочки полости рта и тем самым предупреждать или уменьшать количество рецидивов, облегчать тяжесть течения заболевания.

В эксперименте установлено, что разработанные адгезивные лечебные средства (РАЛС № 1 и РАЛС № 2), обладают противовоспалительным, антимикробным, антиоксидантным и мембранотропным действием, что послужило обоснованием для их применения в клинике больными с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом.

Использование РАЛС позволило не только нормализовать метаболические нарушения, лежащие в основе появления афт за счет введения в состав средства компонентов-ингибиторов процессов свободно радикального окисления липидов, играющих ключевую роль в патогенезе развития стоматита, но и достичь хорошего гигиенического состояния полости рта и зубов.

Основной жалобой больных с хроническим рецидивирующим стоматитом являлась болезненность в зоне локализации афт, причем степень выраженности боли варьировала в зависимости от количества афт и их расположения.

Наиболее сильные болевые ощущения отмечались в первые 2 суток с момента их появления, особенно в тех случаях, когда афты располагались на языке и слизистой оболочке щек. В связи с тем, что эти больные болеют в течение длительного времени, каждый из них знал количество рецидивов в году и сроки эпителизации афт, что позволяло достаточно быстро определять эффективность проводимого лечения.

Анализ результатов клинических наблюдений показал, что все больные при наличии в полости рта афт не осуществляли ухода за полостью рта, так как боялись травмировать слизистую оболочку и из-за болезненности афт, что затрудняло гигиенический уход. Использование РАЛС несколько улучшило гигиеническое состояние полости рта у пациентов с ХРАС, что можно объяснить как прямым антимикробным действием компонентов разработанного адгезивного лечебного средства, так и их способностью стимулировать саливацию и повышать местный иммунитет.

Известно, что гомеостаз слизистой оболочки полости рта в существенной мере зависит от состава, количества и свойств омывающей ее ротовой жидко-

стью, функциональной активности больших и мелких слюнных желез. Ротовая жидкость содержит ряд факторов, обладающих антимикробным действием, а содержащиеся в ней протеолитические и вазоактивные ферменты могут оказывать как повреждающее, так и трофическое влияние на слизистую оболочку полости рта. Есть обоснованные предположения, что постоянное проникновение ферментов ротовой жидкости в ткани слизистой оболочки полости рта могут оказывать регулирующее влияние на нее, запускать или поддерживать в ней воспалительно-дистрофические процессы.

Слюнные железы очень чутко реагируют на патологические процессы, отмечающиеся в полости рта, и в последнее время по изменениям биохимических показателей ротовой жидкости судят о течении заболеваний слизистой оболочки полости рта, а также об эффективности лечения.

При определении результатов измерения скорости саливации у больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом до и после лечения установлено, что достоверно снижена как нестимулированная, так и стимулированная саливация, что может свидетельствовать о важной роли гипосаливации в развитии ХРАС (табл. 2).

Таблица 2

Показатели саливации (мл/мин) у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом до и после проведенного лечения

Группы Кол-во, п Нестимулированная саливация Стимулированная саливация

ПЗЛ 30 0,59 ± 0,04 1,64 ±0,13

Больные ХРАС (РАЛС № 1), п = 28

1 -й день 28 0,44 ±0 ,05; р< 0,05 0,89 ±0,10;р< 0,001

14-й день 20 0,49 ± 0,04; р > 0,05 0,98 ± 0,11; р < 0,01

28-й день 8 0,50 ± 0,04; р > 0,05 1,07 ± 0,12; р< 0,05

Больные ХРАС (РАЛС № 2), п = 14

1-й день 14 0,43 ± 0,04: р < 0,05 0,87 ± 0,11; р< 0,001

14-й день 4 0,56 ± 0,05; р > 0,3 1,22 ± 0,12; р< 0,05

28-й день 10 0,62 ± 0,04 р > 0,5; р, < 0,05 1,38 ±0,13 р > 0,05; р, > 0,05

Примечание, р - показатель достоверности различий с группой практически здО' ровых лиц; р] - показатель достоверности различий с группой РАЛС № 1.

Снижение скорости саливации может приводить к снижению неспецифической резистентности тканей полости рта, возрастанию обсемененности и агрессивных свойств микроорганизмов. Проведенные рядом ученых исследования свидетельствуют о важной роли микрофлоры полости рта в механизме возникновения хронического рецидивирующего афтозного стоматита и доказали необходимость разработки с учетом сказанного соответствующих лечебно-профилактических мероприятий направленных на стимуляцию скорости саливации и повышение структурной резистентности тканей полости рта и нормализацию микробиоценоза полости рта.

Включение в комплексную терапию разработанного адгезивного лечебного средства, приводило к снижению общей протеолитической активности на 14 сутки, а к 28 суткам активность ее приближалась к показателям у здоровых людей. Эти результаты подтверждают полученные данные экспериментальных исследо-

ваний, в которых показано сочетанное терапевтическое действие разработанных адгезивных лечебных средств: устраняющее болевой фактор, ускоряющее процессы регенерации, нормализующее иммунологическую реактивность, повышающее адаптивные возможности организма.

В первый день обследования больных в ротовой жидкости отмечалось почти 3-х кратное увеличение количества малонового диальдегида, конечного продукта перекисного окисления липидов. У больных в группе, где использовали РАЛС № 1 в ротовой жидкости на протяжении 14 и 28 суток количество малонового диальдегида оставалось достоверно повышено (р < 0,05). В ротовой жидкости больных, у которых использовали РАЛС № 2, на 14 сутки обследования количество малонового диальдегида достоверно снижалось, однако оставалось повышенным, а к 28 суткам приближалось к показателям, установленным в группе практически здоровых лиц.

При определении активности уреазы и лизоцима в ротовой жидкости больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом до и после лечения с применением РАЛС № 1 и РАЛС № 2. установлено, что у больных ХРАС после появления афт активность уреазы - фермента, продуцирующегося патогенными и условно патогенными микроорганизмами, увеличивалась более чем в 2 раза. Активность антимикробного фермента лизоцима, наоборот, снижалась более, чем в 3 раза, что свидетельствовало снижении неспецифического иммунитет полости рта. У больных в группе, где использовали РАЛС № 1 активность уреазы оставалась достоверно повышенной как на 14 день, так и на 28 день после появления афт. В то же время у больных с ХРАС, которым назначали РАЛС № 2 активность уреазы на 14 день достоверно снижалась, а к 28 дню активность фермента возвращалась к показателям практически здоровых лиц.

У больных, страдающих хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом, в первый день после высыпания афт в ротовой жидкости отмечалось трехкратное снижение активности лизоцима. В контрольной группе назначаемое больным лечение приводило к незначительному увеличению активности фермента лизоцима, но и к 28 дню показатели его еще не соответствовали данным у здоровых людей. В то же время включение в комплексную терапию разработанного адгезивного лечебного средства уже к 14 дню повышало активность лизоцима почти в 3 раза, а к 28 дню активность лизоцима возвращалась к показателям, установленным в группе практически здоровых лиц, что можно охарактеризовать как восстановление орального иммунитета.

Особо ценным в лечебно-профилактическом действии РАЛС № 1 и РАЛС № 2 явилось их стимулирующее действие на активность лизоцима, который играет важную роль в антимикробной защите организма и полости рта. Известно, что при сниженной местной и общей резистентности организма может происходить изменение микрофлоры и, как следствие этого, возникновение заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами, нередко являющихся представителями резидентной флоры. Повышение неспецифического местного иммунитета при хроническом рецидивирующем афтозном стоматите имеет особое значение. Как показывают клинические наблюдения, в условиях затрудненного ухода за полостью рта в связи с болезненностью афт, увеличивается скорость образования зубного налета, возрастает обсемененность ротовой полости микроорганизмами, отмечается рост патогенных форм. Об этом свидетельствуют и данные, полученные при изучении микробиоценоза полости рта.

Относительные активности уреазы и лизоцима позволили определить степень дисбиоза полости рта: назначение лечения в контрольной группе на 14 день снижало почти в 2 раза этот показатель, однако он оставался высоким и через

28 суток. При использовании РАЛС удалось снизить степень дисбиоза до уровня здоровых лиц уже на 14 день наблюдений.

Таким образом, установлено, что уровень обсемененности полости рта микроорганизмами у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом в 8 раз выше, чем в группе практически здоровых лиц, а разработанные адгезивные лечебные средства способствуют нормализации микробиоценоза полости рта к 14-28 суткам (рис. 1).

В РАЛС №1 В РАЛС №1

0 14 6 8

Степень йиебибза

Рис. 1. Влияние РАЛС №1 и РАЛС №2 на степень дисбиоза полости рта у больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом

Результаты определения активности каталазы и рассчитанный по соотношению каталазы и малонового диальдегида антиоксидантно-прооксидантный индекс показали, что у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом в первые сутки достоверно снижалась активность каталазы (в среднем, 2,3 раза) и еще более значительно - антиоксидантно-прооксидантный индекс (в среднем, 5,2 раза). Восстановление активности антиоксидантного фермента каталазы в контрольной группе больных отмечено на 14-28 сутки, когда афты уже эпителизировались. В группе больных, где использовали РАЛС (№ 1 и № 2), восстановление активности каталазы отмечали также на 14 сутки и эти показатели оставались высокими и на 28 сутки.

Антиоксидантно-прооксидантный индекс, который отражает состояние ан-тиоксидантных систем и процессов пероксидации липидов у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом в момент появления афт снижался более, чем в 4 раза и оставался низким на момент эпителизации элементов поражения. При включении в комплекс общей терапии местного разработанного адгезивного лечебного средства этот индекс увеличивался в 2 раза по отношению к 1 дню обследования.

К 28 суткам индекс АПИ возвращался к норме, как в группе с РАЛС № 1, так и в группе с РАЛС № 2, где этот показатель не отличался от соответствующего показателя группы практически здоровых лиц (табл. 3).

Таблица 3

Активность каталазы и антиоксидантно-прооксидантного индекса в слюне больных хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом

до и после лечения

Группы Каталаза, мкат/л АПИ

ПЗЛ 0,41 ±0,02 8,5 ± 0,6

Больные ХРАС (РАЛС № 1), п = 28

1-й день 0,22 ± 0,02; р < 0,001 1,65 ± 0,22; р< 0,001

14-й день 0,29 ± 0,02; р < 0,001 2,53 ± 0,27; р< 0,001

28-й день 0,34 ± 0,03; р > 0,05 3,74 ± 0,32; р< 0,001

Больные ХРАС (РАЛС № 2), п = 14

1-й день 0,21 ±0,02; р< 0,001 1,55 ± 0,25; р< 0,001

14-й день 0,40 ± 0,03; р> 0,5 4,52 ± 0,37; р< 0,001

28-й день 0,45 ± 0,03; р > 0,3; р,< 0,05 8,35 ± 0,49; р > 0,5; р,< 0,001

Примечание, р - показатель достоверности различий с группой практически здоровых лиц; р! - показатель достоверности различий с группой РАЛС № 1.

Клинические исследования, проведенные в отдаленные сроки наблюдения (через 1 год), показали, что количество рецидивов в год у пациентов контрольной группы, оставалось таким же, как и до лечения - в среднем 4 раза за один год. В группе, где использовали РАЛС № 1, количество рецидивов уменьшилось до 2 в год, а в группе, где использовали РАЛС № 2, количество рецидивов уменьшилось до 3 рецидивов в год (возможно, определенную роль играет тяжесть заболевания, поскольку РАЛС № 2 использовали у 14 больных, в основном, с тяжелыми формами ХРАС).

Применение в комплексном лечении больных с ХРАС разработанных адгезивных лечебных средств позволило значительно сократить сроки эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта - до 5-6 дней. Таким образом, включение разработанных адгезивных лечебных средств в комплексное лечение больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом, способствует улучшению гигиенического состояния полости рта, устранению явлений гипосаливации, дисбиоза и воспаления, за счет активации защитных систем ротовой жидкости, представителями которых являются лизоцим и каталаза (табл. 4).

Интересные данные получены при анализе повозрастной динамики основного заболевания. Анализ показателей факторов местного иммунитета полости рта, определяемый нами по Кеб. (коэффициент сбалансированности факторов местного иммунитета) позволил установить, что наибольшее снижение уровня Кеб. отмечалось к 3 и 7 суткам (р < 0,05) в возрастной группе 21-30 лет, к 14 суткам индекс Кеб. имел тенденцию к увеличению, оставаясь в среднем, 4,6 раза ниже исходного значения (р < 0,05). В возрастной группе 31—40 лет отмечалось снижение Кеб. на 54,5 % к 7 суткам по сравнению с показателями, установленными на 3-й сутки (р < 0,05), к 14 суткам Кеб. повышался, в среднем, на 32,4 %, но оставался ниже исходного уровня (р < 0,05).

В возрастной группе 41-50 лет отмечались самые высокие значения Кеб. до начала лечения, в среднем, на 18-22 % выше, чем в возрастных группах 21-30 и 31—40 лет соответственно. На третьи сутки после начала использования РАЛС показатели Кеб. снижались, в среднем, в 2,5 раза, к 7 суткам - в среднем, 8,9 раз (р < 0,05). Вместе с тем, следует отметить, что к 14 суткам Кеб. повышался более

значительно, чем в остальных возрастных группах, в среднем, на 44,8 %, что может свидетельствовать о преобладании явлений декомпенсации (р < 0,05). Таким образом, установлена равнонаправленная динамика Кеб. во всех возрастных группах, причем наибольший эффект от лечения получен на 3 и 7-е сутки после начала лечения с использованием РАЛС, вместе с этим минимальный уровень Кеб. к 12 месяцу отмечен лишь в возрастной группе 21-30 лет (самой молодой).

Таблица 4

Уровень маркеров воспаления в ротовой жидкости у больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом до и после проведенного лечения

Группы МДА, мк-моль/л ОПА, нкат/л

ПЗЛ 0,48 ± 0,04 3,12 ±0,21

Больные ХРАС (РАЛС № 1), п = 28

1-й день 1,34 ± 0,11; р < 0,001 5,87 ± 0,32; р< 0,001

14-й день 1,15 ± 0,10; р< 0,001 5,00 ± 0,30; р< 0,001

28-й день 0,91 ±0,08; р< 0,01 4,80 ± 0,25; р< 0,001

Больные ХРАС (РАЛС № 2), п = 14

1 -й день 1,39 ± 0,10; р< 0,001 5,81 ± 0,35; р< 0,001

14-й день 0,88 ± 0,08; р< 0,001 4,08 ± 0,25; р < 0,05

28-й день 0,54 ± 0,06; р>0,3; р,<0,01 3,76 ± 0,29; р > 0,05; р, < 0,05

Примечание, р - показатель достоверности различий с группой практически здоровых лиц; р! - показатель достоверности различий с группой РАЛС № 1.

Максимальный уровень Кеб. установлен в возрастной группе 41-50 (самой старшей), в свою очередь, в этой же группе отмечены и самые лучшие результаты по снижению Кеб. - в 8,9 раза к 14 суткам по сравнению с исходными значениями до лечения.

Таким образом, как показали результаты проведенного клинико-биохи-мического исследования, применение разработанных адгезивных лечебных средств в клинике патогенетически обосновано и эффективно при включении их в комплексную терапию для лечения больных с хроническим рецидивирующим афтозным стоматитом, поскольку значительно ускоряет процессы эпителизации афт и снижает количество рецидивов.

ВЫВОДЫ

1. Поставленная задача разработки средств для местной терапии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта при ХРАС с учетом их влияния на биохимические и иммунологические показатели ротовой жидкости, решена путем включения в рецептуру ряда лекарственных веществ растительного происхождения, а также глюкозамина гидрохлорида, Полисорба МП, пектина и диметилсульфоксида, при определенном соотношении компонентов (патент РФ на изобретение № 2542469).

2. В результате экспериментальных исследований доказано отсутствие токсических и раздражающих свойств у РАЛС даже при длительном их применении, о чем свидетельствует изменение показателей прироста массы животных, относительной массы слюнных желез, содержание лейкоцитов, эритроцитов, гемоглобина, активность ферментов и содержание белка в сыворотке крови у экспери-

ментальных животных при введении в желудок РАЛС № 1 (%2Эмп = 36.304) и РАЛС № 2 (х2эмп = 29.806), сопоставимое с группой контроля (данные статистически достоверны, р < 0,05).

3. В результате экспериментальных исследований установлено сочетанное терапевтическое действие разработанных адгезивных лечебных средств, включающее ускорение процессов регенерации, нормализацию иммунологической реактивности организма, что позволяют считать РАЛС пригодными для использования в полости рта, в том числе для лечения повреждений слизистой оболочки полости рта при различных заболеваниях, сопровождающихся гиперемией, отеком, изъязвлением.

4. У больных ХРАС до начала лечения (сразу после появления афт на слизистой оболочки полости рта) отмечается увеличение микробной обсемененности полости рта, более чем в 2 раза, повышение активности уреазы, падение активности лизоцима более, чем в 3 раза, что свидетельствует о снижении неспецифического иммунитет полости рта В условиях затрудненного ухода за полостью рта в связи с болезненностью афт, у больных увеличивается скорость образования зубного налета, возрастает обсемененность ротовой полости микроорганизмами, отмечается рост патогенных форм. Использование РАЛС способствует нормализации микробиоценоза полости рта к 7-14 суткам. Антиоксидантно-проокси-дантный индекс у больных с ХРАС в момент появления афт снижается более, чем в 4 раза и остается низким на момент эпителизации элементов поражения. При включении в комплекс терапии РАЛС индекс увеличивается в 2 раза, начиная уже с первых суток его применения.

5. Применение в комплексном лечении больных с ХРАС разработанных адгезивных лечебных средств позволило значительно сократить сроки эпителизации элементов поражения слизистой оболочки полости рта - до 5-6 дней. Клинические исследования в отдаленные сроки наблюдения (через 1 год), показали, что количество рецидивов у пациентов, где использовали РАЛС, уменьшилось, в среднем, до 2 раз в год.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуемый состав разработанных адгезивных лечебных средств для местной терапии включает многоатомный спирт, эфирные масла лаванды колосовой, тимьяна обыкновенного, шалфея лекарственного, мяты перечной, цветков липы и питьевую воду, сока коланхоэ, крапивы двудомной, глюкозамина гидрохлорид, Полисорб МП, пектин и диметилсульфоксид при определенном соотношении компонентов (для РАЛС № 1 и РАЛС № 2).

2. Разработанные средства рекомендуется наносить тонким слоем на пораженную слизистую оболочку полости рта после каждого приема пищи, чистки зубов утром и вечером. В зависимости от тяжести клинической ситуации возможно использование двойной дозы средства.

3. РАЛС № 1 рекомендуется применять у лиц, имеющих в полости рта единичные элементы поражения слизистой оболочки полости рта. Использование РАЛС № 2 показано при множественных афтах слизистой оболочки полости рта.

4. Для контроля эффективности терапии больным ХРАС рекомендуется проводить общий и биохимический анализы крови, общий анализ мочи, определение уровня глюкозы крови, биохимических и иммунологических показателей ротовой жидкости до и после проведенного лечения.

5. Рекомендуется учитывать динамику коэффициента сбалансированности факторов местного иммунитета для оценки степени снижения местного иммунитета полости рта и защитной функции ротовой жидкости при ХРАС, а также

определять уровень щелочной фосфатазы в ротовой жидкости для предупреждения хронизации воспаления.

6. Больным рекомендовано в период рецидивов тщательно придерживаться диеты с употреблением не раздражающей пищи и напитков, санировать полость рта и очаги хронической инфекции не реже 2 раз в год проходить обследование у стоматолога, в случае появления элементов поражения использовать разработанные адгезивные лечебные средства.

Список научных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Акопова, J1.B. Применение гигиенического средства Аргодент в лечение заболеваний полости рта / JI.B. Акопова, И.Х. Полякова // Актуальные вопросы теории и практики стоматологии (Юбилейный сб.науч.трудов.). - М.; Краснодар,

2013.-С. 274-275.

2. *Быков, И.М. Апробация нового зубного эликсира для профилактики кариеса зубов в условиях эксперимента / И.М. Быков. Л.В. Акопова, C.B. Сирак, А.Г. Сирак // Современные проблемы науки и образования. - 2013. - № 4. [Электронный ресурс]. - URL : www.sience-education.ru/110-9799

3. * Перспективы использования ротовой жидкости в клинической практике для неинвазивной лабораторной диагностики при соматической и стоматологической патологии / И.М. Быков, Э.А. Дегтярь, A.A. Басов, В.А. Акопова, Е.В. Гизей, Э.А. Дегтярь, A.C. Кочконян, А.Р. Горкунова, М.М. Совмиз, Л.В. Акопова // Кубанский научный медицинский вестник. - 2013. - № 6 (141). - С. 45-49.

4. ♦Сирак, C.B. Профилактика кариеса и воспалительных заболеваний паро-донта с использованием зубных эликсиров / C.B. Сирак, И.М. Быков, А.Г. Сирак, Л.В. Акопова // Кубанский научный медицинский вестник. - 2013. - № 6(141). -С. 166-169.

5. *Дяггярь, Э.А. Оценка гигиенического состояния полости рта при стоматите зубных рядов с помощью цитологического метода / Э.А. Дягтярь, А.Г. Сирак А.Г., И.М. Быков, Л.В. Акопова // Кубанский научный медицинский вестник. -

2014. -№ 2(144). - С. 48-54.

6. * Быков, И.М. Показатели гомеостаза и биоценоза полости рта у пациентов со стоматитом зубных рядов / И.М. Быков, Э.А. Дягтярь, А.Г. Сирак, Л.В. Акопова // Кубанский научный медицинский вестник. - 2014. - № 3(145). - С. 29-35.

7. * Динамика показателей неспецифической и иммунной резистентности на фоне изменения микробиоценоза ротовой полости у больных со съемными зубными протезами / И.М. Быков, А.Г. Сирак, Э.А. Дягтярь, Н.И. Быкова, Л.В. Акопова // Аллергология и иммунология. - 2014. - № 1 (15). - С. 27-33.

8. * Сирак, А.Г. Эффективность местной терапии при некоторых эрозивно-язвенных поражениях слизистой оболочки полости рта и тканей пародонта / А.Г. Сирак, Л.В. Акопова, О.Н. Игнатиади, М.К. Демурова // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 2. [Электронный ресурс]. - URL: www.science-education.ru/122-18800

9. Быков, И.М. Биохимические показатели гомеостаза и биоциноза полости рта у пациентов с протезным стоматитом / И.М. Быков, Л.В. Акопова, Л.А. Ско-рикова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований.-2015.-№3^1.-С. 517-523.

10. Быков, И.М. Анализ клеточного состава цитограмм больных стоматитом зубного ряда при различном уровне гигиены полости рта / И.М.Быков, Э.А. Дегтярь, А.Г. Сирак, Л.В.Акопова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015. - № 3-4. - С. 524-530.

11. Быков, И.М. Биохимическая оценка эффективности местной терапии эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки полости рта при стоматите зубного ряда / И.М. Быков, А.Г. Сирак, Э.А. Дегтярь, Л.В.Акопова // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2015. - № 3-4. -С. 535-542.

12. Патент 2542469 Российская Федерация, МПК4 А 61 К 36/28 , А 61 К 36/254 , А 61 Р 17/02. Средство для местной терапии рецидивирующих афт полости рта при стоматите зубных рядов и пародонтите / C.B. Сирак, И.М. Быков, Л.В. Акопова; заявитель и патентообладатель Ставрополь, Сирак C.B., ООО НПО Полет. - № 2014107194/15 (011376); заявл. 25.02.2014; опубл. 20.12.2014; Бюл. № 15.-8 с.

13. *Быков, И.М. Анализ клеточного состава цитограмм больных стоматитом зубного ряда при различном уровне гигиены полости рта / И.М. Быков, Э.А. Дегтярь, А.Г. Сирак, Л.В. Акопова // Аллергология и иммунология. - 2015. -Т. 16,-№3,-С. 306.

14. *Clinical and biochemical aspects of local therapy for chronic recurrent aphthous stomatitis / S. Sirak, I. Bykov, E. Shchetinin, L. Skorikova, L. Akopova; A. Si-rak, N. Bykova, E. Alexeenko, Feras Mohammed Sami Al Asfari // Medical News of the North Caucasus. - 2015. -№ 2. - P. 192-196.

* - работа, опубликована в журнале, включенном в Перечень российских рецензируемых научных журналов, в которых должны быть опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание ученых степеней доктора и кандидата наук.

Список сокращений

АПИ

МДА

ОПА

ПЗЛ

РАЛС

Кеб.

- антиоксидантно-прооксидантный индекс

- малоновый диальдегид

- общая протеолитическая активность

- практически здоровые лица

- разработанное адгезивное лечебное средство

- коэффициент сбалансированности факторов местного

ХРАС

ЩФ

SIgA

иммунитета

- хронический рецидивирующий афтозный стоматит

- щелочная фосфатаза

- секреторный иммуноглобулин А

Акопова Люцнна Вячеславовна

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Сдано в набор 24.09.2015. Подписано в печать 24.09.2015. Формат 60x84 '/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Гарнитура Times. Усл. печ. 1,0. Заказ 1454. Тираж 100 экз.

Отпечатано в ООО «Издательский Дом-Юг» 350072, г. Краснодар, ул. Московская, 2, корп. «В», оф. В-122, тел.+7(918) 41-50-571 http://id-yug.com olfomenko@yandex.ru