Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Изучение гепатопростекторного действия и фармакокинетики пента-О-никотината глицирризиновой кислоты

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И МЕДИЦДОСКОЙ ПРОМЫШЛЕННОСТИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

РГБ ОД

На правах рукописи

г <1"Э

ШМАКОВА ЛАРИСА СЕРГЕЕЕНА

ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОПРОТЕКГОРНОГО ДЕЙСТВИЯ И ФАРМАКОКШЕТИКИ ПЕНТА -О-НИКОТИНАТА ГМЦИРРИЗШ0В0Я КИСЛОТЫ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Казань - 1995

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском институте

Научный руководитель:

Официальные оппоненты:

Ведущая организация:

доктор медицинских наук, профессор Х.М.Насыров

доктор медицинских наук, профессор Р.С.Гараев доктор биологических наук, профессор В.Э.Колла

Институт фармакологии РАШ

Защита диссертации состоится " 18 н 1995

в_час. на заседании Диссертационного Совета Д 084,29.03

в Казанском государственном медицинском университете /420012 Казань, ул. Бутлерова, 49/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке университета /ул. Бутлерова, 49 б/.

Автореферат разослан "1.3" 1995 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор

Р.Х.Хафизьянова

- I -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. Заболевэния печени и билиарной системы занимают значительное место в структуре заболеваемости хшсалония, они составляют более 40% в группе нозологических форм, относящихся к патологии пищеварительной системы (Николаев G.M., 1992). Заболевания гепатобилиарной системы (исключая вирусный гепатит) составляют 6 на 1000 населения (Подаюпа С.Д.., 1984), растет число заболеваний почони алкогольной этиологии, токсических, лекарственных, аллергических поражении печени.

В качество гепатопротекторов в пашей стране применяются кар-сил (легалон), силибор, катерген, ЛИВ-52, эссенциале, Однако, терапевтическая эффективность этих гепатопротекторов оказываотся не всегда достаточной. Кроме того, все эти препараты, за исключением силибора, являются импортными. В связи с этим возрастают актуальность и необходимость noacia и изучения новых высокоэффективных и малотоксичшх лекарствэшшх препаратов, предназначенных для лечения и профилактики заболеваний печени и желчевиводшдих путей.

Сотрудники кафедры фармакологии Башкирского мединститута и лаборатории тонкого органического синтеза ИХ У1Щ РАН проводят комплексное исследование по изучению и внодрению в медицинскую практику новых соединений, синтезированных па основа глициррази-новой кислоты, выделенной из растения солодка голая (Gitycyrrhtza gLаёга L. ). Получены новые ценные для медицины биологически активные вещества (Насыров Х..М. и .др., 1980; Бзлтина Л.А. и др., 1991).

При внедрении новых лекарственных препаратов в медицинскую практику необходимым у слов а ом является изучение их фармакокянати-ческих параметров, что позволит подобрать оптимальную дозу и рз-ким введения препарата. Учитывая вышеизложенное, наш изучены ге-патопротекторныэ свойства произво.дного глицирризиноЕой кислоты -пиглизина (5 IfflO и определены ого фармзтфкинотическио параметры.

Цель работы. Изучение гепатозащитиого действия производного глицирразиновой кислоты - пента - 0 -никотипата глицирризиновой кислоты и определение его фармакокинетических параметров.

' Задачи исследования:

I.Изучить гепатозащитноэ действие производных глицирризиновой кислоты (ГК) при остром отравлении тетрахлорметаном.

2.Изучить влияние производных ГК на желчесекреторную функцию иптактных крыс и на моделях тетрахлорнетанового, алкогольного и тетрациклинового гепатита.

3.Изучить влияние производных IK на биохимические показатели ( АЛТ, ACT, БШГ, билирубина,бета-галактозидазы).

4.Изучить антирадикальную активность производных ГК,

5.Изучить спазмолитическую активность ниглизина,

6.Изучить фармакокинетику ниглизина.

Научная новизна» В рээультате проведенных исследовании получены новые сведения о гепатозащитноц активности производного гли-цирризиновой кислоты - 5 НТК. Доказательством тому является повышение желчесекреторной функции как интактных крыс, так и крыс с тетрахлорметановшл, алкогольным и тетращшшновым гепатитом при' введении им 5 НТК; снижение активности ферментов (АДГ, ACT, БШГ) под влиянием 5 НГК до уровня иптактных крыс; показана антирадикальная активность 5 НГК - угнетение им пер^кисного окисления ли-пидов в биологических мембранах (угнетение показателей хемилши-носценции, уменьшение накопления о.дного из конечных продуктов ПОЛ-малонового диальдегида, уменьшение уровня диеновых конъюгатов, увеличение активности супороксиддисмутазы). Получены ноше данные о спазмолитической актавпооти шглизипа. Разработан и апробирован спектрофотометрический метод определения ниглизина в биологических яидкоотяз. Впервые изучена фаршкокинетика ниглизина, установлены его фармакокинетнческио параметры.

Практическая значимость. Полученные данные о гепатозащитной активности ниглизина позволяют рекомендовать препарат в качестве гепзт'опротектора.

Внедрение результатов работы в практику.

Продстаплены материалы в ФК МЗШ России на препарат "нигли-3aHn - гепатозащитное средство.

Рационализаторское предложение JS 1578 от 20.04.94 "Способ определения фармакокинетических параметров производных глицирри-зиновой кислоты" используется в учебном процессе кафедры фармацевтической химии БШИ при фармацевтическом анализе лекарственных средств, содержащих производные глицирризиновой кислоты. Материалы исследований используются в учебном процессе кафедры фармакологии БШИ при изучении гепатозащитшх средств.

- 3 -

Апробашя работы. Основные результаты работы далогены на научной конференции студентов и ысшодых ученых Башгосмединститу-та /1989Г./, всесоюзной конференции "Новые лекарственные препа -para из растений Сибири и Дальнего Еостока /Томск, 1989г./, на научной конференции "Физические проблемы научно-технического прогресса" в ЕГУ /Уфа, 1990г./, на Всероссийской конференции "Научная работа на кафедре - как основа творческого роста препода -вателя" /Волгоград, 1993г./, итоговой научной сессии Ali РБ /Уфа, 1993г./, на межкафедральком заседании БГМИ /1994г./, на заседа -нии фармакологического общества Башкортостана /1994г./.

Основные положения, выносимые на защиту.

1.ниглизин - новый гепатопротектор, оказывающий гепатоза -щитное действие при тетрахлорметановом, алкогольной и тетрапи -клиновом гепатите, не уступающее,а в ряде случаев превосходящее эффект известных гепатопротекторов - сялибора и карсила.

2.Нжглизин угнетает активность ферментов цитолиза, оказывает антирадвкальное действие,повышает функциональную активность гепатоцитов, о чем свидетельствует повышение желчесекреторной функции, подавление жировой дистрофии, увеличение митотической активности гепатоцитов при экспериментальном гепатите.

3.Разработан в апробирован спектрофотометрический метод определения нмглизина в биологических жидкостях.

Публикации. По ..материалам проведенных исследований опубли -ковано 4 работы.

. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 131 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов и материалов исследования , результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включавшего 276 источников, из них 93 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 22 таблицами, 15 рисунками,3 микрофото.

Материал и методы исследований. Изучались гепатопротектор -ная активность и фармакокинетика пента-О-никотината глицирризи -новой кислоты /5 НТК/ -нетлизина в сравнении с гепатопротектор -ной активностью широко применяемых препаратов - силибора и кар-.сила.

Препарат пента-О-шкотинат глицирризиновой кислоты - З-^-Д-2,3,4-три-О-никотинЕЛГликуроношаранозил/ 1-й//. -Д-3,4-ди-О-нико-тинилглпкуронопвранозид/ глютрретовой кислоты разработан в ИХ УЩ РАН в лаборатории тонкого органического синтеза под руковод-

- 4 -

стеоы акад. Толстикова Г.А.

Эксперименты проводились на 380 белых мышах обоего пола массой 16-25 г н 480 белых крысах массой ¡¿ио-2ои г, Силибор и карсил вводили животный внутрижелудочно в виде суспензии на I % крахмальной сашзи в дозе 50 мг/кг, ниглизин в дозе 100 мг/кг /5 % раствор на крахмальной слизи/.

Гепатопротекторное действие производных глишрризиновой кислоты /ГК/ и препаратов сравнения оценивали по снижению смертности мышей после подкожного введения ЛДщ четыреххлорнстого углерода. Гибель животных учитывалась в течение 10 дней после вызывания острого гепатита.

Острую токсичность СС14 исследовали при подкожном введении белый мышам в каблюдзнииза шши s течение 14 дней. Полученные результаты обрабатывались по Литчфшшду-Уилкоксону /Беленький МЛ., 1963/.

Гепатопротекторное действие производных глишрризиновой кислоты и препаратов сравнения изучалось на моделях тетрахлорме -талового; алкогольного и тетрашклинового гепатита /Николаев СМ., 1992/. Для вызывания ССХ4 гепатита 50 % масляный раствор СС!^ вводили крысш подкожно ! раз в сутки в течете 4-х дней из расчета 0,4 мл на 100,0 г массы тела. Затем в течение 7 дней животные получали внутрижелудочно исследуемые препараты.

Тетрациклиноьое поражение печени вызывали введением крысш s желудок тетрациклина в дозе 0,5 г/кг I раз в сутки в течение 5 дней к одновременно вводили внутрижелудочно исследуемые пре -параты в течение 5 дней.

Алкогольный гепатит вызывали введением 48 %-го водного раствора этилового спирта в желудок в объеме 1,0 мл на Ю0,0 г массы I раз в сутки в течение 4 дней. Исследуемые препараты вводили внутрижелудочно, начиная со 2-го дня дачи этилового спирта , в течение 7 дней.

Контрольные животнш получали гепатотексин и эквиобъемное с гепатозащитнши средствами количество I % крахмальной слизи ; интактные животные получали только I % крахмальную слизь.

Гистологическое^ исследование печени проводили по общепринятой методике с окраской срезов 'гематоксилин-эозином,Суданом ш, методой Ьан-Гизон /Меркулов Г.А., 1961/. При микроскопическом исследовании учитывались следующие показатели - зернистая дио-

- 5 -

. Жфш гепатоцитов, степень склеротически! изменений печеночной п.ани, степень и распространенность жировой дистрофии, наличие . лшфоидной ивфильтрацпи, лейкоцитарной инфильтрации, количество двухядерных гепатоцитов как косвенный признак регенерации.

Жалче секреторную и желчевыдалительную Функции печени у крыс оценивали по общепринятой методике Н.П. Скакуна и А.Н.. Олейник /1967/, Животных наркотизировали эташшалом натрия /40 мг/кг /. О функциональном состоянии печени судили по скорости секреции желчи /в иг/мин на 100,0 г массы животного / и общему количеству выделенной желчв за каждый час и в суше за 4 ч наблюдения /в мг на 100,0 г массы/.

Б сыворотка крови спектрофотсметрически определяли активность ферментов - маркеров синдрсма цитолиза - аланинаминотранс-феразы /АЛ1/ ж аспартатаминотраноферааы /АСТ/ с помощью наборов "ЫсЬетй" /Чехословакия/; органоспепифического фермента бетаин-гомопистеинметидтрансфэразы /ЕШТ/ по H.Bonook, Г.N. Dutnoff в модификации X. N. И/i11 iamS /1947/.

Изучалась активность лизосомального фермента бета-гад акто-звдозы в гомогенатах печена. Фракцию лизосш получали с помощью дифференциального центрифугирования по методу De Dwve и соавт. /1955/. Все прапессы, связанные с получением лизосш, проводили при t 0-4° С. Активность бз т а-г ал актоз ид аз ы определяла по методу 8. Pete l, A.TappcL /1969/. Субстратом для определения активности фермента служил 4-мтрофешш-<*ета-Д-галактош1ршюзид. Активность бета-галактозидазы выражали в какроыолях субстрата, расщепленного в результате ферментативного гидролиза I г белка за I мин при 37° С. Общий белок определяли по Louri н соавт. /1951/.

Учитывая» что при токсическом гепатите активируются про -пессы перекисного оккслоиия липидов /ПОЛ/ /Голиков С.Н., 1986/, наш изучено ллияше производных ГК на процессы ПОД, о чем су -дали по изменению паршетров хемилшинесценпии гомогенатов печени и сыворотки крови в норме и при СС1^ гепатите, по изменению уровня малонового диальдегида /МДА/. диеновых коньюгатов /ДК/» активности супероксиддисмутазы /СОД/, Измерение сверх -слабого свечения проводили по методике, описанной Ю.А.Владиъш -ровым и соавт. /1976/. МДА и ДК определяли по И.Д.Стальной и Т.Г.Гаршивнли /1977/. Расчет МДА производили в шлодях на мг белка. Липиды из ткани почв ни экстрагировали по методу J. Folch и

соавт. /1957/.

Активность СОД определяли по скорости изменения оптичеокой плотности в ходе восстановления нитросинего тетразалия /НТО/ в присутствии НАДН и феназишетасульфата при длине волны 540 ш.

Спазмолитическая активность изучалась на препарате гладких мышц изолирован ной кишки крысы.

Для определения сЬараакокинетических параметров после внут-рижедудочного введения ниглизина через определенные промежутки времени собирали кровь, мочу, желчь, проводили извлечение ниг -лизина из этих биологических жидкостей по разработанной наш методике и определяли содержание ниглизина спектрофотометрическим методом. Строилась кривая зависимости "концентрашя-вре -мя", фармакокинетические параметры рассчитывались на IB.1- PS -246 по программе fi-IND /версия 4,3/ /Пиотровский В.К., 198?/.

Результаты опытов обрабатывались статистически с применением критериев t Стьюдента /Беленький M.JI., 1963/ и/2 по Ге-шсу /1964/.

РЕЗУЛЬТАТ ИССТЕЩОВАШ И ИХ ОБСУВДКШЕ

I. Гепатезащитное действие производных глишрризиновой кислоты при остром отравлении тетрахлорметапом.

Учитывая различную чувствительность животных в зависимости от популяции, хронобиопогическнх закономерностей и условий содержания, нами предварительно определялись параметры острой токсичности CCI^ у мышей.

Установлено, что ЛД^ СС14 при подкожном введении составляет 7,5 ш/кг /6,09 f 5,22/ 50 % раствора СС14 на раститель -шел масле.

Далее гепатозавдтное действие производных ГК и препаратов сравнения оценивали по снижению смертности мышей после подкож -ного введения ЯДзд СС14. Проведено 3 серии опытов. В первой серии изучалось профилактическое влияние однократного введения ГК, 5 НТК и препаратов сравнения. Во второй серии изучалось профилактическое гепатозадатноа действие препаратовпосле 5-дневного вцутрихедудочдого введения. В третьей серии опытов изучался лечебный аффект препаратов; соединения вводились через 3 дня посла вызывания острого гепатита у мышей/табя» I/.

Установлено, что при профилактическом однократном введении карсил, предшзолон, никотиновая кислота, ГК, 5 НТК не предот-

Таблица I

Выживаемость мьшей при остром отравлении

Препарат : Доза, : Выжило/число живот- : Р для мг/кг ных в группе

Профилактическое однократное введение

Глишрриз иновая кислота 100 10/20 -

5 НТК 100 13/20 -

Никотиновая кислота 10 10/20 -

Преднизалон 10 11/20 -

Карсил 50 8/20 -

Контроль диет.вода 9/20 -

Профилактическое 5-дневное введение

Глицирркзиновая кислота 100 15/20 >0,025

5 НТК 100 18/20 <0,01

Никотиновая кислота IÜ 13/20 >0,025

Преднизолон IÜ Ш/20 <o,ci

Карсил ЬО 15/20 >0,025

Контроль диет.вода 9/20 -

Лечебное действие

Глипирризиновая кислота 100 15/20 >0,025

5 НТК 100 17/20 40,01

Никотиновая кислота 10 14/20 >0,С25

Преднизолон 10* 15/20 >0,025

Карсил 50 В/20 <0,01

Контроль ' диет.вода 7/20 -

вращают гибель животных от острого гепатита. При профилактическом 5-дневном введении лишь 5 НТК и преднизалон увеличивает выживаемость мышей /Р для / 2 < 0,01/. При лечебном введении статисты -чески достоверное повышение выживаемости наблюдалось в группах животных, получавших 5 НТК и карсил /Р< 0,01/. Приведенные данные свидетельствуют о гепатозавдткеял действии преднизалона, карсила, 5 НТК, однако, эффект последнего был выше, чем у препаратов сравнения.

- 8 -

2. Изучение слияния производных ГК на желчесекреторную функцию печени крыс.

Важным синдромом, часто наблюдаемым при повреидешш печет, является холестаз, обусловленный нарушением продукции и оттока желчи /Цроговоэ С.М., 1971/. Влияние шглизипа и препаратов сравнения на секрецию желчи изучали у интактных животных и у животных о тетрахлорыетановш, алкогольным и тетрапшшшовым гепати -том. Установлено, что асе исследуемые препараты усиливают келче-выделительцую функцию гепатоцитов у интактных животных. Так, при введении глишррнзиноЕой кислоты, 5 НТК, никотиновой кислоты и силибора средняя скорость жзлчэ выделения составила 3,6 ¿0,15 ; 4,4 + 0,18; 3,7 + 0,18; 3,0 ¿0,15 мг/мин на ЮО,О г массы животного, а у контрольной группы животных '¿,4 + 0,14 мг/мин /Р<0,05/.

В экспериментальной практике СС14 используется как гепато -токсичный агент для определения эффективности гепатотропных лекарственных средств /Кудрин А.Н., 1282; Фишер А», 15В1/.

Изучение влияния Ь НТК, ГК у крыс с токсическим СС14 гепа -титом показало /табл. 2/, что при гепатите желче выделение угнетается во все сроки на&вдденкя /Р 0,05/. Введение с лечебной делыо 5 НТК, ГК, силибора способствовало статистически достоверному увеличению дебита желчи у крыс с гепатитом /Р<0,05/. Тек, средняя скорость секреции желчи за 4 ч наблюдения составила при гепатите 1,6 £ 0.2 мг/мин, посла лечения силиборсм 2,0 +0,1; ГК - 3,1 £ 0,5; 5 НТК - 2,4 £ 0,1 мг/ьшн на Ю0,0 г, т.е. при лечении 5 НТК и ГК достигала уровня интактных крыс.

Токсическое действие алкоголя на печень хорошо известно /Мирошниченко Л.Д., 1587; Р.Н. , 1581/. Нами изучалось вли-

яние 5 НТК, ГК и силибора на желчевыделительную функцию печени крыс при алкогольном гепатите. Результаты опытов представлены на рис« I.

Установлено, что при алкогольном гепатите статистически достоверно уменьшается продукция желчи по сравнению с интактной группой животных /Р< 0,05/ - общее количество желчи за 4 ч состаг-вило лишь ь5,6 % по сравнению с интактньш крысами. При дечебш-профилактическш введении 6 НТК, ГК и силибора на -блюдается увеличение скорости секреции желчи соответственно на 72 %, 55 % и 28 % по сравнению с излеченными крысами; статиста -чески достоверный результат наблюдался при введении ГК и 5 НТК /Р< 0.05/.

желчи за' 4ч. 800 мг/ЮОг

700

600 500 400 300 200 100

I 2 3 4 5

Рис. I. Влияние препаратов на аселчесекреторную функцию крыс с алкогольным гепатитом. I - интакткыэ; 2 - контроль /гепатит/; 3 - ГК ; 4 - 5 НТК ; 5 - силибор

Тетрациклиновое поражение печени у киеотных ¡шроко испсшь -■ зуется в последнее время в фармакологических экспериментах при изучении особенностей действия лекарственных препаратов гепа, -топротекторного профиля /Николаев С.М., 1992/. На фоне введе -ния больших доз.этого антибиотика происходят процессы ингиби -роЕания синтеаа белка в печени за счет подавления трансляции, блокады цикла Кребса и обмена АТФ /Голиков С.Н., 198В; Николаев С.М., 1992/.

Результаты проведенного исследования показали, что исполь -зование с лечебной целью ниглизина и силибора при тетрацикли -ноеом гепатите сопровождается предотвращением синдрома холе -стаза» о чем свидетельствует увеличение скорости секрешш и количества выделенной за 4 часа нелчи /табл. 3/.

Таблица 2

Влияние препаратов на желчесекреторную функцию крыс с СС1-4 гепатитом

Препарат..: Число ;Доаа, :живот. :.мг/кг

Скорость секреции желчи, мг/мин на 100 г.:Ср.скорость 1ч. : ! 2ч. : 3 ч. : 4 Ч. :мг/мин на : : : :100 Г.

Обпдей вес желчи за 4 ч.,мг/100г

Кнтактные ГК

Б НТК Силибор Контроль (гепатит)

Ü

с. ■

крахмал 100 100 50

2,5 ± 0,2-. 3,4 ± 0,6* 2,4 г 0,1* 2,4 ± 0,2*

2.3 ± 0,1

2.7 + 0,6*

2.4 ± 0,2*

1.8 ± 0,3

2,1 i 0,1

3.3 ± 0,5

2.4 ± 0,1* 1,8 ± 0,3

2,2 ± 0,1

2.2 ± 0,3

2.3 + 0,1* 1,8 ± 0,3

2,4 + 0,1 3,1 ± 0,5* 2,4 ± 0,1* 2,0 ± 0,1*

790 ± 80 796 ± 110* 580 + 45* 500 ± 55

1,7 ± 0,2** 1,5 ± 0,2** 1,5 ± 0,2** 1,7 ± 0,2** 1,5 ± 0,2** 450 ± 33**

5

Препарг

Таблица 5

Влияние препаратов нз скорость секреции яелчи при экспериментальном тетрациклиновом

гепатите у белых крыс

Скорость секреции желчи, .мг/мин ка 100 г.:Ср.скорость:Общий Еес 1ч.: 2ч. : 3 ч. : 4 ч. :мг/мин на :желчи ва

: : : :100 г. :4ч. ,).:г/100г

Лнтактнке Я VfK

крахмал 3,8 ± 0,6 3,4 + 0,6

nrr. 100 4,7 ± 0,6* 4,9 ± 0,5*

Сшшбср , • 50 3,7 ± 0,3 4,9 ± 0,6*

Контроль(гепатит)крахмал 2,6 + 0,4 2,7 ± 0,4

2,8 + 0,2 3,2 + 0,4 4,6 ± 0,3* 4,6 ± 0,4* 4,3 ± 0,4* 4,2 ± 0,6* 2,2 ± 0,1** 2,0 ± 0,3**

3,3+0,3 787 1110 4,7 ± 0,4* 1128 ± 120* 4,3+0,4* 1022 ± 48* 2,3 ± 0,2** 651 ± 80 ,

мечание: здесь и далее знаком * обозначены статически достоверные результаты

по сравнена с контролем; знаком ** - по сравнению с интзктными животными

3, Влияние производных ГК на уровень ферментов /АЛТ, ACT, БГМТ/, билирубина в сыворотке крови и активность /-галактозид азы в лизосомах печени крыс при экспери -ментальном гепатите.

Одним из показателей функциональной активности печени яв->-ляетсл активность трзысашшаз АЛТ, ACT и органоспепифичвского фермента БШТ, имеющего первостепенное значение в ресинтезе серу-содержащей аминокислота метионина в печени, БГТ«1Т освобождается из печени и поступает в кровь при патологических поражениях печени или при воздействии на печень токсических продуктов. Ферменты АЯТ» ACT являются маркерами цитолиза гепатопитов, характеризующими тяжесть патологического процесса в печени.

Активность ферментов АЛТ, ACT, ЕГМТ, содержание билирубина в сыворотке крови изучали на тетрахлоркстановой, алкогольной и тетрапшшшовой моделях экспериментального гепатита.

Результаты прояздзнных опытов свидетельствуют, что 'гепато -токсины, вызывающие острый гепатит - СС14, этанол, тетрациклин приводят к развитию гшерфериентемия с поступлением в кровь из паренхимы печзш индикаторных йешеитов - трансаыиназ, поченоч -ного фермента БШТ. Наиболее значительную пшерферкентемш вы -зывал чотыреххлористый углерод - активность AST возрастала по сравнению с интактниди крысами в 7 раз, ACT - в 4,5 раза, БГМТ -в 1,8 раза, содеряаше билирубина в сыворотке крови увеличива лось в 5,8 раз /табл. 4/. . -

Введение с лечебной целью 5 НТК, ГК, салибора при СС14 гепатите приводит к сшжешш активности указанных ферментов до, уровня показателей ннтактных животных. Введение 5-НТК и силибо-ра при алкогольшц гепатите приводит к статистически достоверному снижению актив но ста ACT в обеих группах; содеряание общего билирубина достоверно снижалось в группе животных, получавших ни-глнзин. Введение 5 НТК и сплибора при тетрациклин о етл гепатите сопровождается статистически достоверным снижением общего билирубина в сыворотке крови и уменьшением активности ACT; АЛТ оказа -лась статистически достоверно сниженной в группе животных,получавших нигдизии. Таким образом, ниглизин оказывал более выраженное гепатопротекторное действие, чем еялибор. В следующей серии опытов определяли активность f -галактозидаэы,лизосомальшго фармен-та,имзющего огромное значение для нормального Функционирования

Таблица 4

Изшнвнжз основных биохимических показателей при экспериментальном СС14 гепатите

Препарат

Доза иг/кг

1АЛТ, мккат/л !АСГ, иккат/л

1Общий билирубин ! . 1шд/л

!БШГ, ш гатаоиана II г пвч.

ИнтактЕыв ГК

б НТК

Силибор

Контроль (гепатит)

! крахмал ! 0Д9 ± 0,04 ! 0,37 ± 0,12

! 100 ! 0,16 ± 0,05х 1 0,46 ± 0,05х ■

! 100 ! ОДЗ ± 0,02х ! 0,14 ± 0,02х

! 50 1 0,19 ± 0,02х * 0,16 ± 0,07х

! крахмал ! 1,33 ± О.О?*1! 1,68 ¿'г\),12хх

! 3,24 ± 1,80 % 2,33 ± 1,40х ! 2,92 ± 1,30х ! 6,20 ^ 2,6^ 118,83 ± Х.Эб^

! 2,8 * 0,31 !

! 3,6 ± 0,19х ! 3,3 ± 0,23х ! 5,0 ^ 0,43х1

Влияние производных ГК на хомилшинасцанцию сыворотка крови, уровень ВДА в ДК в гомогвватах печени крыс при СС14 гепатите

Таблица 5

.8

Препарат

% Доза » .Щ/РХ

! Сватосумма } свечения

ВДА:нм/иг белка !ДК, Дро? аа

j 0,18 ± 0,03

0,67 ± 0,13х ! 0,16 ± 0,33х

0,59 * 0,19х ! 0,10 ± 0,03х 0,66 * 0,11х ! 0,23 ± 0,04х

1,78 $ 0,25 ! 0,75 * О,!!3®

I мг лапддов | Исходи.

Интактнна 5 НТК

Преднизалон

Карсил

Контроль (гепатит)

!дистил. ! вода

! 100

! 10

! 30

!дистнл. !вода

! 24,8 i 1,0

! 15,5 ± 1,2х ! 14,6 ± 1,1х ! 16,8 ± 1,6х I 39,2 ± 2,6**

! ОДЗ ± 0,03

! 0,14 ± 0,03

! ОДЗ i 0,03

! ОДЗ ± 0,02 !

- 13 -

организма, участвующего в растеплеют потерявши функциональное значение внутриклеточных структур я бяоноягавров, в гидролизе чужеродных гликопротеидов а гликолшшдов, Наш' определялась активность jf-галактозидазы при экспериментальном СС14 гепатите на фоне введения. 5 НТК и силибора/рис. 2/.

Установлено, что шглизии а силибор повшают активность f> -галактозидазы, подавленную вследствие экспериментального гепатита« Так, общая активность /-галактозидазы у интактных животных составила 2,62 % 0,3 мкмоль субстрата на I г белка, при ге. -патите ее активность уменьшалась до 1,21 + 0,1 мкМоль. Введение ниглизина увеличивало активность/-галактозидазы до 2,86 + 0,4, а салибора - до 5,04 _> 1,2 мгалоль'. Так как лизосомальный фермент /-галактозидаза играет значительную роль в регенерации вече ни , повышение ее активности силибором и ниглизинш, по-видимому, является положительным фактором, способствующим более быстрому восстановлению функции печени, пораженной чзтврвххлористш углероден,

. В опытах с CCI^ гепатитом изучались гистологические срезы печени, анализ которых показал, что ниглизин и енлибор уменьивют жировую дистрофию, печени, возникшую в ответ на введение четырех-хлористого углерода, повышают митотическую активность х-епатпци -тов, что является косьеннш признаком повышения регенерапионной способности печени,

4. Изучение влияния производных ГК на процессы перекисного окисления липидов.

Нами изучено влияние исследуемых препаратов на процессы ПОЛ. В первой серии опытов HUE в митохоадриях печени оценивали по данным спонтанной и индуцированной сернокислым железом хемшгоминео-пенцаи in vitro, рассчитывая в условных единицах спонтанное свечение, максимальную амплитуду вспышка, индукцию ,и общую светоодо-иу. Установлено, что 5 НТК и его исходные продукты /глииирризино-вая кислота, никотиновая кислота/ в концентрации IxHT2 моль по-' добго преднизалону угнетают процессы перекисного окисления липидов, о. чем свидетельствуют уменьшение спонтанного свечения, угнетение быстрой вспышки, удлиненно индукшш и уменьшение светосумиы свечэния.

Во второй серии изучалось влияние производных ГК на уровень хемилрмивасценши сыворотки крови интактных крыс. Результаты исследований показали, что введение крысам ГК, 5 НТК, никотиновой

глк моль субстр. на I г балка

3 ••

ж

Л

%

12 3 4

Рис. 2. Активность /-галактозидазы з лизосомах печени крыс

при СС14 гепатите.

-свободная актмность Ц -общая активность

Активи СОД, 1 усл.ед. на I ш эритроп

200 •■ юо ••

Рис. 3. Влияние препаратов на активность супероксидцисмутазы.

I - интактные; 2,- контроль /гепатит/ ■ " 3 - ниглиэин; 4 - силибор

- 15 -

кислоты, преднизалона, карсила приводит к угнетению параметров хемилюминв спенши.

В следующей серии опытов изучалось влияние b КГК и препаратов сравнения на показатели хемилюминеспенпии сыворотки крови крыс и уровень МДА и ДК в гомогенатах печени при СС14 гепатите. Проведенные исследования показали, что 5 НТК, подобно преднизо-лону и карсилу, угнетает хеыилшинесшншю сыворотки крови , уменьшает уровень МДА, ДК в гомогенатах печени, повышенные при СС14 гепатите /табл. 5/,

Антирадикальную активность препаратов оценивали таклсе по степени ингибирования реакции образования супероксидного анион-радикала. Нами установлено, что при гепатите активность СОД в эритроцитах крысы уменьшается по сравнению с интактнши животными на 40,5 Исследуемые препараты - Ь НТК, силибор статистически достоверно увеличивают сниженный уровень ферментативной активности СОД /рис. 3/.

Таким образом, проведенные исследования позволили устано -вить наличие антиоксидантного действия у изучаемых препаратов.

5. Спазмолитическая активность производных ГК.

Изучалась спазмолитическая активность производных ГК. Установлено, что ГК, 5 НТК оказывают выраженное спазмолитическое действие при спазмах гладких мышц, вызванных карбахолином и хлоридом бария, что является важным при применения ниглизина при патологии гепатобилиарной систему он будет оказывать положительное влияние при спазмах желчевыЕОДвдих путей. Карбахолин на фою ниглизина вновь повышал тонус кишечника, следовательно, ниглизин не обладает холиналитическим действием. Спазмолитическое дейст -Еие ниглизина обусловлено миотропным действием.

6. Изучение фарлакокинатшш ниглизина.

Для изучения фармакокииетических параметров ниглизина /5 НТК/ нами разработан простой и экономичный спектрофотометрический ме -тод определения препарата в биологических жидкостях. Предварительно был построен калибровочный график зависимости оптической плотности растворов виглизида от их концентрации. Полученный калибровочный график дает прямую линейную зависимость "конце нтрашш-оп -тическая плотность" в границах 0,5 - 5 мг# /выполнение закона Бугера-Ламберта/ /Холодов Л.Е, с соавт., 1985/.

КРОВЬ

Рис. 4. Конпентрашя ниглизина ,в крови пос^е вероралъного введения /Д=Ю0 мг/вх /

Пробы крови крыс браки в дискретные интервалы времена /15 мин, 30 мин, I ч, 3 ч, 4 ч, 6 ч, 8 ч, 12 ч/ весле перораяь-нвго введе!Шя ниглизина. фармакокинатичеекую кривую усредненной крысы поручали вычислением М ^ ы значений концентраций для каж-дей временной течки /рис. 4/.

Параметры фармакекинатики ниглизина в ндазиекровв крыс после; яераральдаго введения представлены в таблице 6;

Нигдизин интенсивно всасывается кз ж&яудочно-хжшечнвго тракта /Кд^ = 0,462 ч~/, препарат ебнаруживается в крови уже через 15 мин весле перорального введения /28 ± 8 ыкг/ш /. Однака, наступление препарата из гедудочнв-кшечног® тракта в кровь продолжается в течение} длительного времени Ада ? время достижения максимальной концентрации препарата в крови Тшко = 4 ч. В удлинение периода абсорбции вносит свой вклад , по-видимому, энтерагенатическаа циркуляция. Константа скорости элиминации ниглизина из крови К^, = 0,295 ч~. Среднее время удержания ниглизина в организме//ИЯТ/ после однократшг» пер-оральнох» введения 5,29 ч.

Таблица 6

Паршзтры 'Тярмакотскнетвки ниглизина в шгозке' крови крыс после перорашюга введения

Параметры : Размерность :Суспешия ниглизина в 15ъ щяхмаль-: :ноя слизи /Д = ЮО-мг/кг /

Смекс мкг/мл 298 ± 40

ч 1.5

ч 2,34

Т макс ч 4.0

кабс ч~ 0,462

кэл ч~ 0,296

а л/ч 0,0122

мят ч 5,295

вис МКГ'Ч л 1837,051

V л 0,0414

В мочэ шглизин после внутряжелудочиого введения обнаруживается через 3 ч, концентрация его постепенно.:: увеличивается, максимальное количество в моче определяется через 12 часов.

Ниглизан интенсивно зкскретируется с желчь». Коэффициент распределения желчь/плазма крови в течение всего периода наблюдения выше единицы. Максимальная концентрация ниглизина в желчи достигается через 4 ч после перорального введения. Клиренс желчи для ниглизина 0,0028 л/ч. Скорость алиминации ниглизина из желчи значительно ниже скорости элиминации из крови. Экскреция ниглизина с желчью занимает значительно больший уделышй вес в общей элиминации, чем экскрепил с мочой, что, по-видимому , является одним из возмояных механизмов реализации спенифическо-го фармакологического /гепатопротекториого/ действия ниглизина.

ВЫВОДЫ

I, Ниглизин обладает гепатозаштнш действием, о чем свиде -тельствуют:

- снижение смертности.мышей, отравленных четнреххлористым углеродом, как при профилактическом, так и при лечебном

введении препарата;

- нормализация желчевыделительной фуйкцки печени у крыс с алкогольный, тетрашишшовым и тетрахлориетаношм гепатитом;

- снижение активности ферментов AIT» ACT, ШИТ, /-галактоза -дазы, уровня общего билирубина, повышенных при экспериментальном гепатите;

- уменьшение жирового гепатоза.

2. Ниглизии угнетает хемилюшшеспеншш, сникает уровень диеновых конъюгатов, уменьшает количество малопового диальдегида при СС14 гепатите и увеличивает активность супероксиддасмутазы.

3. Ниглизен обладает спазмолитической активностью,

4. Установлены следующие фармакокинетические параметры ниглизина: константа скорости элиминации K^ g 0,296 ч", период полуади-шшапии Тзу2 = 2,34 ч, площадь под фармакокинетической кривой /)UC = 1837 мкг. ч/л, Нкгдизин экс1фетируется,в основном,с желчью.

Практические рекомендации:

Полученные результаты позволяют рекомендовать ниглизин для профилактики и лечения острых и хронических гепатитов, а также циррозов печени.

Список работ, опубликованных по теме дассзрташж: I.Тонкослойная хроматография препаратов из солодкового корня -глицирразвновой кислоты и ее производных //Ноше лекарственные препараты из растений Сибири s Дальнего Востока; Тез .докл.Всесоюзной конфер.~'Томск,1989.- T.2.-C.I4-I5 /совместно с Л.А.Баг-лтиной, Х.М.Наоыровым, Г.А.Толстиковым/. ' 2. Новые противовоспалительные средства производных глипирризино-вой кислоты, механизм их действия а фармаксшщетика //Состояние здоровья детей сельской местности и совершенствование принципов организации медапинской пдаощи.-Уфа, 1990.- С.67-71. 3.Образование водородной связи глипирризановай кислоты с фосфоли-1дм клеток //Физические проблемы научно-технического прогресса: Тез.докл.науч.конрер.- Уфа,В90,- 0,53-64 /совместно с В.Х. Зайнутдииовш, Н.Х.Шзеиовой/. 4.Изучешю фардакокинетики пента-О-никотавата глипирризиновой кио-лоты //Научная работа на кафедро-ткак основа творческого роста преподавателя; Tea.докл. 13серос,конфер,-Бсшгоград, I993.-C. 52, /совместно о ¿.М.Насыровыы, Я.Г.Тимошенко, И.В.Першуковым/.