Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Измерения эффекторных функций альвеолярных макрофагов и их коррекция пептидами из слизистой оболочки трахеи при экспериментальной патологии органов дыхания

ВОЕННО-МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

На правах рукописи

г

ЛЕТУ НОВА 1С/

Анна Владимировна

ИЗМЕНЕНИЯ ЭФФЕКТОРНЫХ ФУНКЦИЙ АЛЬВЕОЛЯРНЫХ МАКРОФАГОВ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ПЕПТИДАМИ ИЗ СЛИЗИСТОЙ ОБОЛОЧКИ ТРАХЕИ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИИ ОРГАНОВ ДЫХАНИЯ

14.00.16 — патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ 1994

Работа выполнена в Военяо-медицинской академии.

Научный руководитель: доктор медицинских наук профессор В. X. Хавинсон.

Научный консультант:

доктор медицинских наук профессор О. С. Насонкин.

Официальные оппоненты:

заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук профессор Н. И. Кочетыгов,

доктор медицинских наук профессор В. В. Давыдов.

Ведущая организация: Санкт-Петербургский медицинский институт им. акад. И. П. Павлова.

в шин специализированного совета Д 106.03.06 при

Военно-медицинской академии (194175, Санкт-Петербург, ул. Лебедева, 6).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

состоится

1994 года

1994 года.

У " ;иализи;рованного совета

рр 'медицинских наук 3. Н. Александров

- 1 -

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актаяьность пробдемы. В настоящей время в промышлешю pa:ii:i<-гых странах неспецифические заболевания легких ПШ) з&ким'ш-'г f "-ггтье место после сердечно-сосудистых н злокачественных эабод-к»-¡:г1 по значимости в общей заболеваемости и смертности населени.1, Быстрый рост удельного веса легочной патологии приобретает хлрлк-тер медико-социальной проблемы (Feinleib М. el al. ; Thorn Т. J. , 1909).

Одними из основных элементов запиты легких в норме и патологии являются альвеолярные макрофаги (AM), роль которых детально изучена в здоровом легком (Dußois R. М. , 1985; Holt. P. G. , Slbille Y. , Reynolds Н. Y. , 1990; Valcurone G. , 1937). В то *е L>pv • мя сведения об AM при патологии носят фрагментарный характер. Исследования, как правило, не содержат комплексной характеристики /М, в них изучается какая-либо отдельная сторона функциональной активности этих клеток, при этом без учета динамики патологическо!о процесса ' .

Между тем, комплексная оценка изменения количества AM и их фушсционального состояния в динамике патологического процесса представляет большой интерес, поскольку изменения данных параметров могут огазылать существенное влияние на течение и исход патологии (Маянский A. IL , Маянский Л. Н. , 1989; Ярейдлин И.О., Таким образом, комплексное изучение состояния системы мзнонук.'ечр ных фагоцитов легких в динамике патологических процессов, в ссног» которых ле;яат различные патогенетические механизмы, представляется весьма актуальным.

Лечение и профилактика болезней органов дыхания, включает ряд комплексных мероприятий. Однако, в настоящее время практически не существует активной патогенетической терапии ГОЛ. Медикаментозное лечение болезней лег'ких во многих случаях не приводит к положительным результатам, поскольку проводится с помощью лекарственных средств, не обладающих специфическим действием на функциональнее состояние легких и вызывающих различные побочные эффекты, что характерно для большинства химиопрепаратоз - ксенобиотиков. Поэтому особо актуальна разработка новых лекарственных препаратов для лечения НЗЛ. не имеющих побочных эффектов, не являющихся чужероднгмп для организма и в то же время обладающих специфическим воздействием на дыхательную систему и, в частности, на местные механизмы з i щиты легких.

Многоуровневая регуляция деятельности дыхательной оитчи. изучена достаточно детально (Бреслав И. С. , Глебовский В. Д., 1¡-. Чучалин А. Г. . 1968; Coburn R. F. , 1937). На всех уровнях peiy.n-h ..с ных процессов особая роль в осуществлении контроля ivрм м. ;■•■ Функционирования неточных популяций и моханис'моп гюгчгп ч- .,.

принадлежит биологически активным пептидам (Church М. К. et al. , iiJcVii; Horscovutz H. В. , MsKillop J. М. et al. , 1990). Данные регуля-торные молекулы оказывают значительное влияние и на функциональное ссстоиние системы мононуклеарных фагоцитов легких (Barnes P. J. , 1№7; Libbly Р. , Friedman G. В. ,. Solomon R.N. ,1989; Me leal f D. . lußo; Said 3. 1. , Foda H. D., 1989). В последнее время предпринимался многочисленные попытки применения биологически активных пептидов в качестве терапевтических средств при различных патологических состояниях (Довнар Т.Е. и соавт. , 1989; Nienhuis А. V. et al. , 1987; Yasuda Н. et al. , 1990). Между тем, различными методами исследований установлено, что слизистая■и подслизистая'оболочки воздухоносных путей млекопитающих является зоной, где 'элементы пептидергической системы регуляции представлены очень широко и функционируют исключительно активно (Barnes P. J., 1986, 1987, 1991; Casale Т. В.. 1991; Polak J. М. , Bloom S. R. , 1986). Учитывая важное значение AM для процессов патологии в легких, роль биологически активных иептидов в контроле механизмов зашиты данного органа, положительные результаты их применения в патологии, представлялось актуальным исследовать действие комплекса пептидов, присутствующих в слизистой оболочке воздухоносных путей на систему моно-нуклеарных фагоцитов легких при экспериментальной патологии легких. Не• меньший интерес представляло оценить терапевтический потенциал комплекса пептидов слизистой оболочки воздухоносных путей в отношении экспериментальных неспецифических патологических процессов органов дыхания различного генеза. .

Цель исследования. Исследовать изменения количества AM в бронхоакьвеолярной жидкости (БАМ) и их функциональное состояние в динамике экспериментальных патологических процессов органов дыхания различного генеза. Изучить влияние комплекса пептидов слизистой оболочки трахеи на количество AM в БАЛЖ, а также их функциональную активность в процессе развития экспериментальных патологических процессов легких. Оценить возможный терапевтический потенциал комплекса пептидов слизистой оболочки трахеи при патологии органов дыхания.

Задачи исследования. 1. Исследовать изменения количества AM в БАЛЖ., их фагоцитарную активность и окислительный метаболизм в ходе развития экспериментальных процессов органов дыхания различного генеза; острого бактериального повреждения, сублетаяыгого гиперок-сического повреждения и блеомицинового фиброза легких.

2. Провести оценку влияния комплекса пептидов слизистой оболочки трахеи на количество AM в БАЛЖ и их функциональную активность у вдоровых животных.

■3. Изучить влияние комплекса пептидов слизистой оболочки трахеи на количество AM в БАМ, их фагоцитарную активность и окисли-

тельный метаболизм в динамике экспериментальных патологических процессов органов дыхания различного генеяа: острого бактериального повреждения, сублетального гипероксического повреждения и блео-мидинорого фиброза легких.

4. Оценить возможную терапевтическую эффективность комплекс« пептидов слизистой .оболочки трахеи в лечении заболеваний органов дыхания.

Научная новизна работы. Впервые на моделях патологических процессов органов дыхания различного генеза - острого бактериального повреждения, сублетального гилероксическогс повреждения и экспериментального фиброза легких - проведено комплексное исследование системы мононуклеарных фагоцитов легких: изменений количественного содержания АМ в БАЛЖ и их функционального состояния. Покарано. что, независимо от вида патологического процесса, происходит резкое изменение »щеточного состава БАЛЖ в полшу нейтроофилов и в меньшей степени лимфоцитов, причем, относительное число ЛМ снижается. . Изменения абсолютного количества АМ в БАЛЖ зависят от модели ' патологии органов дыхания. Выявлено, что сдвиги клеточного состава БАЛЖ на фоке развития патологических процессов органов дыхания различного генеза сопровождались значительными изменениями поглотительной активности АМ. Произведено исследование динамики основных параметров кислородного метаболизма АМ при остром бактериальном повреждении и блеомишшовом фиброзе.

Установлены независящие от использованных моделей патологии органов дыхания обшие закономерности изменений баэального ' уровня окислительного метаболизма этих клеток, а тага« способности АМ отвечать на индукторы респираторного взрыва.

Впервые в опытах in vi tro и in vivo изучено действие препарата, представляющего комплекс пептидов слизистой оболочки трахеи (ПСТ) на клеточные элементы системы местного и общего иммунитета здоровых животных. Выявлено специфическое действие данного препарата на количество АМ в БАЛЖ и их функциональное состояние, определена зависимость доза-эффе1СТ.

Показано, что при всех использованных моделях патологии органов дыхания, независимо от причин их вызывавших и длительности течения процесса, ПСТ способствует ускорению нормализации клеточного состава БАЛЖ. Выявлен эффект дат, направленный на увеличение абсолютного количества АМ в БАЛЖ и их поглотительной активности. Показано оптимизирующее действие данного препарата на реакции кислородного метаболизма АМ. Продемонстрирована терапевтическая эффективность данного препарата. Установлено, что ПОТ ускоряет процессы репарации легочной ткани, способствуя ограничению очагов воспаления, эмфиземы и Фиброзирования ткани легких, замедляет развитие гемодикамических нарушений в малом круге кровообращения и гиперт-

2 заг.М

¡¡офни правого желудочка сердца у экспериментальных животных. Полученные данные позволили сформулировать представление о возможных механизмах действия данного препарата

Практическое значение работы. Данные 'настоящего исследования позволили прийти к заключению о существенной терапевтической эффективности пептидного препарата из слизистой оболочки трахеи (I ЕСТ) при таких моделях патологии органов дыхания как острое бактериальное повреждение, сублетальное гипероксическое повреждение, блеомициновый фиброз легких. Полученные в ходе исследования результаты составили основу "Отчета об экспериментальном изучении специфической и общей фармакологической активности пептидного препарата из слизистой оболочки трахеи", представленного в'в & .^экологический комитет МЗ СССР для рассмотрения вопроса о проведении клинического изучения данного препарата в качестве биорегулятора и иммуномодулятора местного действия. . С использованием полученных данных были разработаны рекомендации по клиническому изучению препарата при неспецифических заболеваниях легких. Документация на новый лекарственный препарат из слизистой оболочки трахеи, программа и инструкция его клинического изучения были представлены в Фармакологический комитет МЗ СССР решением Ученого Совета Военно-медицинской академии (выписка из протокола N Б заседания совета 0X 24.12.90).

На основании анализа материалов по доклиническому изучении препарата, программы и инструкции его клинического изучения, Фармакологический комитет МЗ Российской Федерации принял решение о целесообразности проведения 1-ой фазы клинических испытаний нового щл'парата из слизистой оболочки трахеи в качества биорегулятора и иммуномодулятора местного действия (выписка из протокола М 40 засе Дания от 18. 12,92).

С использованием полученных в данном исследовании результатов разработан способ контроля стандартности ироизводетвенных серий пептидного препарата слизистой оболочки трахеи, технология производства которого внедрена на заводе медицинских препаратов' акционерного общества "Самсон". Принцип способа состоит з оценке биологической активности разных производственных серий препарата по их сп.осбности стимулировать фагоцитарную активность альвеолярных Макрофагов.

Основные положения, выносимые на защиту. 1. Развитие экспериментальных патологических процессов органов дыхания (острого бактериального повреждения, сублетального гипероксического повреждения и блеомицинового фиброза, легких) сопровождается существенными изменениями клеточного состава брокхоальвеолярной жидкости с увеличением содержания нейтрофидов и в меньшей степени лимфоцитов. Опюсителоное количество альвеолярных -макрофагов при этом уыеньша-

- о -

ется, а изменения их абсолютного количества зависят от вида моделируемой патологии органов дыхания.

2. В исследованных моделях патологии органов дыхания измен-нин количественного состава бронхоальвеолярной жидкости сопровождаются изменениями функционального состояния альвеолярных макрофагов. Так, поглотительная активность этих клеток в случае острого бактериального повреждения транзиторно подавляется, более длительное угнетение этого показателя происходит при сублетальном гнп<-рокеическом повреждении. При блеомшшновом фиброзе происходит умеренное увеличение поглотительной активности альвеолярных ма1т.с(л-гов. Независимо от вида патологического процесса происходит пшо-рактивация окислительного метаболизма альвеолярных макросов ш и снижении способности этих клеток усиливать выработку сул^рок-сид-аниона в • ответ на индукторы респираторного взрнг-а, в особенности - на индуктор корпускулярной природы - опсониэмрованный . зи-мозан.

3. Препарат, представляющий комплекс пептидов слизистой оболочки трахеи (ИСТ) оказывает стимулирующее воздействие на систему мононуклеарных фагоцитов лэгких здоровых животных, обеспечт.м увеличение абсолютного количества данного вида клеток в брон^Альвеолярной жидкости, повышая'их поглотительную способность и активизируя процессы окислительного метаболизма, индуцированные опсо-низнрованным зимозаном.

4. Применение ПСГ при использованных моделях патология органов дыхания различного генеза (остром бактериальном повреждении, сублетальном гипероксическом повреждении и блеомициног.ом ^иороао легких) вызывает увеличение абсолютного количества альвеолярных макрофагов в бронхоальвеолярной жидкости, усиление поглотительной активности независимо от исходного уровня данного показателя н вида патологического процесса, а также оптимизацию окислительного метаболизма этих клеток, что заключается в снижении базазыюго уровня продукции супероксид-аниона и суммарной свободнорадикнльнон продукции и стимуляции ответа на индукторы респираторного взрыва.

5. Результаты проведенных исследований свидетельствуют также о существенной терапевтической эффективности ПОТ в использованных моделях. Применение ПСТ ускоряет процессы репарации легочной танк, способствуя ограничению очагов воспаления, уменьшению зон эмфиземы и фиброза Происходит замедление развития гемодинамичеешм нарушений в малом круге кровообращения и компенсаторной гипертрофии миокарда, наблюдается восстановление темпов набора массы тела у экспериментальных животных.

Апробация работы и публикации материалов исследования. Результаты исследования доложены на конференции "Применение современных лекарственных препаратов и медицинской техники на крупных

¡Г'

промышленных предприятиях" (Ленинград - Тольятти, 1991), на конференции "Регуляторнце пептиды в норме и патологии (цитомедины)" (Чита. 1991), на 2-м и 3-м Национальных конгрессах по болезням органов дыхания (Челябинск, 1991; Санкт-Петербург, 1992), на симпозиума "Пептидные биорегуляторы - цитомедины" (Санкт-Петербург, 1992), на XII научной конференции молодых ученых и специалистов ВЬдА (Санкт-Петербург. 1992).

По теме пнссертации '■ опубликовано 8 научных работ, подано и внедрено 4 рационализаторских предложения. Материалы диссертации составили основу "Отчета об экспериментальном изучении специфической и общей фармакологической активности пептидного препарата из слизистой оболочки трахеи" в составе документации представленной в йармакологический комитет МЗ СССР для рассмотрения вопроса о проведении клинического изучения препарата в качестве биорегулятора и иммунэмодулятора местного действия.

Объем и сгруктра диссертации. Диссертация изложена на 163 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, включающих материалы и методы, результаты и их обсуждение, выводов м списка литературы (46 отечественных и 172 зарубежных источника). Диссертация содержит 19 таблиц и 8 рисунков. Работа выполнена в лаборатории биорегуляторов 1ЮОИНО-медицинской академии (Санкт-Петербург).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на крысах-самцах породы "Wistar", всего использовано 980 крыс. Изучение клеточного состава бронхоальве-олнрной жидкости (БАЛЖ) и функционального состояния альвеолярных микрофагов (AM) были проведены на моделях патологических процессов органов дыхания различного генеза: экспериментального острого бактериального повреждения легких - по методике, предложенной Т. Б. Толнегиной и Н. А. Горст (1987) и адаптированной применительно к белым крысам 0. JL Молчановым (1992); экспериментального сублетального гипероксического повреждения легких - по методике, использованной Ri 1 ley D.J. et al. (1987); экспериментального блеомициново-го Фиброза легких - по методике, описанной J. D. Catravas et al, (198V).

Вывод животных из опыта в случае острого бактериального повреждения осуществляли на 1-е, 3-й, 6-е, 10-е, 15-е и 20-е сутки после заражения; в случае сублетапьного гипероксического повреждения - на 1-е, 10-е, 30-е, 40-е и S50-e сутки после гипероксического воздействия; в случае блеомициновсго фиброза легких интратрахеаль-ные инсталляции блеомицина осуществляли ь 1-е, 16-е и 31-е сутки

опыта, а шлюлн животных - на 15-е, 30-*, 45-е и f.0--- сугки от tiч чапп ."кспоримента (первой затравки блеомишшом). Алекрнтность щюиаведении соответствующих видов экспериментальной пчгл.к nsn контролировали с ломощмо биометрических. патоморфологическнх, блч-териологических и иммунологических показателей.

Для получения БАЛЖ использовали 1/етс/;ику G. О. Mvrvik с ооаиг, (1961). Рассчитывали цнтограмму БАЛИ, определяя относительное и »бсолютное количество различных Ридов клеток, в маэках. окрчикзяне^ч по методу Романовского--Гимза. Оценивали след/миле эф^кторшм функции дм.

1. Поглотительную активность: по способности Фагоцитировать частицы латекса с определением фагоцитарного числа (ФЧ) и фагоцитарного индекса (ФИ) (И.О. й'рейдлин, 1900).

2. Состояние кислородного метаболизма путем количественного определения Оазалыюй и стимулированной продукции супероксид-аниона (СЛ) по методу R. G.0. Leslie (1987), с применением спектрофотометра с вертикальным ходом лучей 5unia)-2 (Саг) Ceisy, ГДР). В качестве стимуляторов использовали опсонизированный зимозан (03) и форболмиристатацетат (ФМА) с расчетом индекса стимуляции (»10 - отношение стимулированной продукции к базальчой) и абсолкяного прироста СА-продукции (АП - разность между стимулированной и банальной продукцией).

3. Суммарную свободнорадикальную продукцию (люминол-зависимую хемилюмш/есценцию, XI) с помощью автоматического хемилюминометра LKB-1250 (Швеция) в соответствии с методическими рекомендациями фирмы производителя. Учитывали светосумму ХЛ (суммарную интенсивность свечения за 60 минут, V/час); пик (максимум свечения, tnV); скорость достижения полупика (mV/мин).

На 80 здороьнх крысах линии Wibta^ и 60 мышах линии СВА проводили исследование влияния комплексного пептидного препарата, выделенного из слизистой оболочки трахеи (ПСТ) и препарата сравнении - тималмна - на ряд показателей местного и системного иммунитета. В системе in v^tro оценивали влияние препаратов в десятикратных концентрациях (от 100 до 0,001 мкг/мл) на поглотительную'активность альвеолярных и перитонеалышх макрофагов, а также на реакцию Оласттринсформации (РБТЛ) лимфоцитов, лргких, тимуса и селезенки. РВГЛ проводили по методу, предложенному Л йегером (1990).

В системе in vivo у 160 здоровых крыс изучали влияние ПОТ и тималина (в течение 7 суток, ежедневно, внутрибрюшиннб, в дозе 1 ыг/кг) на клеточный состав БАЛЖ. поглотительную активность AM. и продукцию СА альвеолярными макрофагами. Животных выводили из оныга на 1-е, 3-й, 6-е, 10-е, 15-е и 20-е сутки от начала эксперимента.

В отдельном эксперименте исследовали дозсзависимость (шесть доз с пятикратным шагом, от 25,0 до 0,008 мг/кг массы тела)

3 зш. Л

тоь 1ГТ с выводом животных толысо на 6-е сутки от начала доаирова-ни>1, поскольку в предыдущих исследованиях именно на данный срок отменились наиболее выраженные изменения. Для дальнейших исследований активности ПОТ в моделях патологии органоь дыхания была выбрана доза 1 мг/кг массы тела.

ПОТ и тшашш, представлявший комплекс пептидов тимуса, были получены из соответствующих' тканей путем уксуснокислой экстракции по методу В Г. Морозова и В, X. Хавинсона (1931). Пептидные препараты были стандартизированы по молекулярной массе с помощью градиентного дискэлектрофореза в полиакриламидном геле и гель-фильтрации на еефадекее 6- 25 ("РЬагшаст", Швеция), а такие с помощью пептидного картирог -.И!л методом тонкослойной хроматографии, двумерного ?лектрофореаа и изоэлектрофокусирования.

Статистическую обработку результатов проводили с использованием .чараметрнчеекого критерия Стьюдента и непараметрического -Уилкпкоона-Ыамна-Уитни. При расчетах был использован программируе мый микрокалькулятор "Т1-59".

РЕЗУЛЬТАТЫ И ЮС ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование клеточного состава БАЛЖ в динамике при различных видах патологии органов дыхания позволило выявить направленность изменений цктограммы лаважной жидкости и, ь том числе, количества АМ. При этом, характер изменений существенно зависел от характера патологического процесса (см. таол. 1, 2, 3). Патологические состояния, независимо от причин их вызвавших, сопровождались существенным изменением относительного неточного состава ВАЛЖ в сторону нейтрофилои и в меньшей степени лимфоцитов, относительное количество АМ при этом значительно уменьшалось. Изменение абсолютного количества АМ в БАЛЖ во многом зависело от модели патологии органов дыхания. При'остром бактериальном повреждении число АМ транзиторно увеличивалось (табл. 1), при сублетальном гипероксическом повреждении (табл. 2) - не претерпевало достоверных изменений на всех сроках наблюдения, при фиброзе (табл. 3) - увеличивалось более длительно, с последующей нормализацией.

Поглотительная активность АМ в случае острого бактериального повреждения претерпевала транзиторное снижение на 10-е сутки (см. табл. 1). Более длительное угнетение данного показателя (с 10-х по 20-е сутки1 происходило при сублетальнон гипероксическом повреждении (табл. 2). При блеочициновом фиброзе имело место увеличение поглотительной гитгивнооти практически на всех сроках наблюдения (табл. 5).

Исследование динамик« параметров окислительного метаболизма

Влияние ШТ'и тиыалина на динамику цитограыш БАЛН и фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов крыс при остром бактериальном повреждении легких

Сутки Груша К/толмима ВАЛЯ Сх10°кл/легкие) ¿агсцитарный Фагоцитарное число

опыта животных 1аакрофьги Нейтрсфилы ¿ш|оцить: индекс

- йнтакгные 22 12,34,2 0,2710,09 ü,öt£0,2I 39,612,5 3,12-0,21

1-е Конттоль 14 15,412,1 2I,2I±4,7&; 3,ЭИ0,7сх 59,412,9х 4. с210,32тс

Контроль 19 19,5±2,2Х П,43Л,31х 2,30Ю,20х 36,713,7 2,5с-0.5?

3-й пет 12 28,212,94х 6,2lH,42ix 1,5610.23¿х 51,613.4x9 5,72Ю,51хг>

Тииал'.гн 9 16,912,0+Х 12.2011.51 5,12Ю,51+4х 31.413.d+ 2.01Ю.2^ :с +

Контроль 18 18,7X1,9* I,37l0.3Ix I,44l0,29x 22,¿12,ох I,48lö,29x

5-е ИСТ II 23,9H,3i* 0,6210,22 0,Эо10,2о 43.6-3.3^ 4,6310.3ох^

Тималин 10 1в,211,7х 2,05l0,4Ivx 4,11Ю,21-ь?х 20,ll2,Ix+ I,35l0,2Ix+

Контроль 12 13,412,5 0,7910,33 1,19±0,44 16.512,2 0,97Ю, 15х

10-е 1ICT 10 Iä.7l2,49X 0,3610,2:. Ü,öd±0,3I 25, 7l3. 2х $ 2.66Ю,32£

Тималин в 12,912,4 С. 82Ю,34 2,9110,25-- 16,012. От. 0,ЗП0,+

Контроль Q I4,H2,0 0,3olG,I5 Г.ОсХО.З? 44,3+4,0 3,2И0,4С

15-е :;ст О I7.4t3,I 0,2410,20 0,й31С.2в ZA т с—0, ¿у 3,6110,37

1. -малин d 13,112,I 0,3510,30 3.7210,27 +$»с 57,H<i,6xi>-»- 6.9110,25>;у+

К нтполь ? 12,9±г,б 0,19-0,16 0,7410.2: 42,615,3 3,4010.42

20-е лет 9 I5,4l2,ci 0,2210,14 0,61-0,23 4d, с~4, 4 4,1510,44

Тиыалин 7 13,ь12,Б 0,I71Q,16 1,431С,2э 4,26-10,30

Отлитая статис (.А ) - с контр тгчес* олеа; et; достовергс. \ ^ J V . yj (P^0,C5) як с тшоЯ эти^х , г са-ьени;:: :.х' - с * . i^ группоЗ ш-гакты-тс жлйстнз^С;

Таблица 2

Влияние ЯСТ и тшалина на динамику цитограмьщ БАЖ и фагоцитарной ахтиЕнооти альвеолярных макрофагов крыс после суб летального гипероксического повреждения легких

Сутки Группа Цитограыма БАЛЖ СхЮ кл/легкие? *агоцитаркы£ &агоцитапное

опыта анзетных Макрофаги йейтрофилы Лимфоциты индекс число

_ йггактные п 13,211,1 0,5210,19 0,62-0,20 33,612.5 3,1210,21

1-е Ки;гфоль 23 15,4-1,7 9,3110,72х 4,21-0,71х 52,1-2,1х 4,41Ю,ЗЗх

Контроль 20 16,112,1 4,71±0,75х 2,81-0,42х 25,713,ох 2.6910,35

10-е ПСТ 21 23,9^2,2х$ 1,02±0,67£ 3.1010,31х 53,213, 5,6410,43x441

Тггизлкн 15 17,311,7+ 5,6110;Э1х + 5,0110,23x4+ 2а,912,2х+ 2,8710,25+

Контроль 1Ь 14,2-2,1 2,97Ю,ь2х 1,32Ю,21х 27,413.Ох 1,9210,21х

20-е ПОТ I? 25,212.2х£ 0,бИ0,25£ 1,4б10,36х 46,912,1x4 3,11*0^27$

Тикзлин IV 12,311,9+ 2,7о10,51х+ й,8210,27х^-* 24,512,1х+- 2,7410,31

Контиоль 16 11,911,8 Х.ОЭЮ.Зб 1,96-0,43х 32,913,4 2,41±0,19х

30-е дет 17 15,611,4 0,9710,21 1,37=0,26 за,213,0 2,7310,34

Тиьжлта 1о 1С,1И,3 + 1,2710,34 6,4в10,23х^+ 37,012,1 2,оо10.32

Контроль 15 11,6-2,1 2,57-0,26х 3,5210,31х 38,412,2 3,52Ю,18

чС-е ИСТ 14 14,1-2,0 2,07'10,31х 2,91-0,23х 43,113,4 3.69Ю,25

Хиыйскн 13 6,6-1,8 2,18-0,53х 5,01±0,£5хф+ 40.213,8 3.4510,21

Контроль 10 11,312,3 3,01-0,12х 3,41±0,2Ьс 35,214,1 ' 2,9110,24

ЬО-е ПСТ 15 12,112.0 2,а7Ю,22х 3,5Э-0,19х 41,313,8 3,0810,21

13 7,312,1 3,1210,37х 5,9И0,2ох£+ 35Л12Л 3,1710,32

Сличая статистически достоверны (Р"=0,05) при сравнении: (х) - с группой интакткых е^отных:; I $ ) - с контролем;" С + ) - с группой жлзотных, получавпих ПСТ.

Ьлшмиз -ГК/Г, преднизолона и тималина на динамику цктограьмы БАШ и фагоцитарной активности зльзеолзрнк.-: ка'люфагов крыс на фоне трехкратного интратрзхеального введения блеоиицина

Сутгк 1 ру:1"з Цитограмыа БАЛЖ (х!0°кл/легкие) ¿агоцитаоный Фагоцитарное

КМ50ТЯЫХ Макрофаги Нейтрэфилы Лиироцлтк индекс число

_ ^«тактике г.Л 12,321,2 0,2720,09 0,5020,21 39,622,5 3,1220,21

Ионтпзль II 13, г~4,5 17,524,4х 2,1120.33х 4^,524,2 5, ¿0-1,12х

ИСТ д 37,3-7, 20,723,8х 3,1220,45х 52,6-4.3х 5,5320,37х

9 14,1-2,I 15,933,1х 2,59-0,51х 50,121,9,: 5,020,41х

ТчГиМ'-Я» 9 3,7-2 14,922,7х 2,3120,31х 4а,221,ох ' 5,5720,35х

8 27,523,1х 5,821,0х 5,0620,41х 54.625, ох 5,9120,37х

50-е лет о 21,314,9Х 6,621,1х 53,ь23,ох 6,17-0,50х

П£_ещз!золо:-' Тиыалин 7 9 30,6±2,5х 13,1±2,1ф + 4,920,8х 19,222,1х£+ 2,2920,42x^1 6,3620,22x4-»- 56,122,0х 56.222.5x 5,5820,31х ' 5,7420,42х

КСИ'ТСЛЬ 10 гз.^а/ох 3,621,0х 4,1320,33х 47,224,3 4,7б20,29х

40-е пСТ 7 4.3±1.9х 3.2220.39х 74,925', Охр 6.а420,65х

¡Ьепк/^олоь а 25,9±1,2х + 5.в21,2х 2,4920.1о>; 52,322.1х 5,6220,43х

Кгнгсоль 14 15.7-4,1 3,ЭП,1х 2.4320,26х 5б,024,бх 4.5020,4«

сО-е иСЛ 13 29.421,2х 6 2,020,7Х :,0о20,Г?£> 7о,225,7х?= 9,7620,бЭх£

6 21,4±1,5х 2,1-0,Зх 1,Й?20,25Х 57,623, 2г. 5.4320,50х +

Огл-г-пу. сп-таег/чесхи доссовеэна: (Р-=0,05) при сравиенка: (х) - с гругщой интакткьх Зч«.«Гй».ч-: ) - с ¿онгролеи;' (+ ) - с группой яяйотнък, пслучсзвик"ЬС!Т.

клеток \ЛШ в процессе развития экспериментального острого бактериального повреждения и блеомишшового фиброза, проведенное с применением методов количественного определения СА-продукции и ХЛ -о пенни суммарной саободнорадикальной продукции, показало, что независимо от вида патологического процесса происходит значительное увеличение базальной продукции СА при сниженной способности этих клеток вырабатывать СА в ответ на индукторы респираторного взрыва, прячем в большей степени на 03. Так, в случае острого бактериального повреждения базальная продукция СА была достоверно повышена е 1-х по 10-е сутки эксперимента (в 2 раза и более). При этом, ИС продукции '.у/пероксид-аниона в ответ на ФМА и зимозан в эти же сроки был достоверно снижен (в 1.Б - С раза). АП продукции суперок-сид-аниопа в ответ на (ШЛ изменялся не достоверно, за исключением 1-х суток, ь то время как АП в ответ на 03 был достоверно снижен с I X по 1.5-е сутки опыта. При этом, на 3-й, G-e и 10-е сутки отмечалось 2 - 4- х-кратное снижение данного показателя. Параметры ХЛ (свеюоумма, ник) были достоверно повышены с 1-х по б-е сутки опыта, в то время как скорость достижения полупика была достоверно понижена на 6-е 10-е сутки.

В случае блеомицииового фиброза бааальнан продукция ОА была достоверно увеличена в несколько раз на всех сроках наблюдения (15-е - 60-е сутки). В эти т сроки ИО и АН в ответ на ФМА или 03 Или не отличались, или были достоверно нкя- нормальных значений. Показателя ХЛ (свсгосумма, пик) достоверно возрастали на всех сроках наблюдения, в то время как скорость достижения полупика была достоверно снижена. Полученные данные указывают на исходную гипе-ра^гивацим окислительною метаболизма клеток ЕАЛЖ при сниженной способности этих клеток реагировать на индукторы респираторного взрыва и особенно на индуктор корпускулярной природы - 03.

Оценка влияния ПОТ на клеточные элементы системы местного и общего иммунитета органов дыхания здоровых животных показало, что в системе in vi tro данный препарат в отличие от препарата сравнения, тикэлина, не оказывал влияния на спонтанную и митоген-стимулированную пролиферацию лим'1юцитов легких, тимуса и селезенки. Действие ПСТ не влияло на фагоцитарную активность перитонеальньк макрофагов, однако,' вызывало усиление фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов САМ) с наибольшим эффектом в концентрациях 1 и 0.1 мкг/мл. 'Гак, при концентрации 1 мкг/мл значения ФИ и ФЧ составили соответственно - 149±9Z, ФЧ - 153±11% к. контролю (Р<0,05).

В системе in vivo применение ПСТ у здоровых крыс (в течение г' суток, ежедневно, внутрибрюшинно, в дозе 1 мг/кг) приводило к достоверному увеличению числа АМ в БАЛЖ на 3-й. 6-е, 10-е и 15-е сутки на'аеденин с максимумом на б-е сутки (20,1±1,2 против

12..Mi,t:xlO кд/легкие в контроле, P<'0,Ctói. Принтом, количестве ненгрофилоо и лимфоцитов существенно не изменялось. Достоверное повышение Фагоцитарной активности отмечалось на 3-й, 6-е и 10-е суши эксперимента с максимумом на 6-е сутки (г1Ч 59,?±2, нротир 35,1>.3,6 в контроле, P<0,0ñ). При этом, не отмечалось достоверных изменений базальной, а Tárate ФМЛиндуцированной продукции 0Л клетками ВАМ. Г) то же время, ОЗ-индуцированнад продукция достоверно возрастала на 6-е и 10-е сутки и составляла соответственно 39,6±0,2 и 42,3±0, 3 Против 24.8i0,2 нмоль Q¡, /10& кл./10 минут » контроле (.Р< 0,05). Изучение доьозависпмоети эффекта ПОТ показало, что наиболее активными дозами были 1,0 и 0,8 мг/кг. 'Гималин способствовал умеренному увеличению количества лимфоцитов в БАЛЖ i при этом не оказывал действия на количество и функции АН.

Применение ПОТ при использованных моделях патологии органов дыхания способствовало ограничению процессов воспаления в ткали легких и ускоряло протекание процессов репарации. Так, в случае острого бактериального повреждения применение ПОТ способствовало более раннему ограничению воспалительной реакции, более быстрому рассасыванию экссудата и восстановлению структурной целостности легких по сравнению с нелеченными животными. В случае сублетадыю-1 о гипероксичеекого повреждения легких применение ПСТ не предотвращало развития очагов склероза и эмфиземы, однако, степень выраженности морфологических изменений была существенно ниже по сравнению с контрольными животными. В случае блеомининового фиброзу легких применение ПСТ также приводило к снижению степени выраженности морфологических изменений. Очаги Фиброза имели меньшую распространенность, при этом, соединительная ткань была более рыхлой ц содержала меньшее количество коллзгеновых волокон.

При сублетальном гилероксическом повреждении на 4юие применения ПСТ к окончанию эксперимента (50-е сутки) было отмечено достоверное торможение нарастания легочного коэффициента, являющегося отношением массы легких (в мг) к массе тела (в г), и массы сердш. При блеомициновом фиброзе, начиная с 45-х суток наблюдения, применение ПСТ обеспечивало достоверное увеличение массы тела яиьотпы» по сравнению с контролем. Так, на 60-е сутки вес т«ла крыс составил: 231,4114.6 против 1б5,9±9,5 г в'контроле (Р-'0,05; интакгньк, животные - 250,016,7 г), определение легочного коэффициента позво-пило выявить достоверный эффет' применения ПОТ, начиная уже с 15-х чуток наблюдения и на Есех последующих сроках. Наиболее, существенные различия были выявлены на 45-е сутки: 12,0±0,2 против 13,9i0,2 в контроле (Р<0,05; интактние животные - 6,4±0,3). Не менее ярки* различия наблюдались при оценке желудочкового индекса (та - массг, прав, же луд. /масса лев. же луд. х 100%), На всех сроках на^лкт.енич применение ПОТ обеспечивало достоверно боге* т:ат«.' vvwjijw лзд-

ного показатели в сравнении о контролем. В частности, на 60-е сутки ЖИ в случае применения ИСТ был равен 51.1±3,6 против 64,3±2,2 в контроле (Р1'0,05; здоровие животные - 31.0±1,2). Применение ИСТ яри Слчомициновом фиброзе легких отражалось так*»? на напряженности иммунопатологических процессов. Уровень иммунных комплексов ( МК), циркулирующих в крови или выявляемых в БА.ПЖ, как правило, был доо-товерно ниже в сравнении с показателями контрольной группы практически на всех сроках наблюдения. Таким образом, применение ПОТ оказывало отчетливый терапевтический эффект при всех используемых моделях патологии, что демонстрируется данными гттоморфологии. биометрическими и иммунологическими исследованиями.

При всех используемых моделях патологических процессов органов дыхания применение ПСТ способствовало ускорению нормализации относительного клеточного состава БДЛЖ и увеличению абсолютного количества АН в БАЛЖ независимо от исходного уровня данного показателя (см. табл. I, 2, 3). ПСТ оказывал также существенное влияние на функциональное состояние АМ. Независимо от длительности процесса и причин его вызвавших, а также от исходного уровня поглотительной активности АМ, происходило возрастание этого показателя под воэдейс: зием ПСТ: при остром бактериальном повреждении и сублетальном гипероксическом повреждении происходило восстановление поглотительной активности АМ (см. табл. 1, 2), при блеомицино-вом фиброзе было выявлено дальнейшее увеличение исходно повышенных показателей фагоцитоза (табл. 3).

Изучение эффекта ПСТ на окислительный метаболизм АМ при экспериментальном остром бактериальном повреждении и блеомициновом Фиброзе легких выявило, что независимо от вида используемой патологии. применение ПСТ приводило к снижению базального уровня продукции СА при одновременном увеличении продукции СА в ответ на индукторы респираторного взрыва и в большей степени на индуктор корпускулярной природы - 03. Так, в случае острого бактериального повреддения применение ПСТ обеспечивало достоверное угнетение ба-зальной СА продукции с 6-х по 10-е сутки. В частности, на 10-е сут ки в '¿л/чае применения ПСТ базальная продукция СА составляла 6,8±1,1 против 11,9±1,2 нмоль 01 /106 кл./3 0 минут в контроле (Р<0,05; иитактнке животные - 5,7*1,0). ИС продукции супероксид- аниона в ответ На йМА не претерпевал закономерных изменений на Фоне прим-'пения ПСТ. Б то же время, АП достоверно превышал контрольные ^,-!-.1чгиия на 10-е сутки: 47,Я±3,9 против 31,8±3,2 нмоль 0£ /10 кл. /10 минут в контроле (Р<0,05; интактные животные -47,8*5.6). В случае 03-индуцированной продукции значения ИС на фоне применения ПСТ достоверно превышали контрольные показатели на 3-й б-е ¡1 10-е сутки. Наиболее яркие различия были выявлены на 10-^ гутки: 3.0110 37 против 1,13*0,19 в контроле (Р<0,05; интакт-

ные животные - 3,28x0,23). Абсолютный прирост СА-продукции Г АН) в случае применения ПОТ достоверно превышал контрольные значения тшсже на З-ч, 6-е и 10-е сутки опыта. Наиболее яргаге отличия выявлялись на 3-й сутки: 26,914,3 против 6,Ш,8 нмоль 0£ /106 кл./10 минут в контроле (Р<0,05; интактные животные - 24,3x4,2).

В случае блеомицинового фиброза легких на фоне ПОТ происходило достоверное снижение базальной СА-продукции с 15-х по 60-е сутки эксперимента. В частности, на 30-е сутки базальная продукция СА составляла 12,9x1,2 против 28,3±1,4 нмоль 01 /106 кп. /10 минут В контроле (Р<0,05; здоровые животные - 6,0±1,1). Применение ПСТле приводило 1С нормализации значений индекса стимуляции СА-продукции в ответ на 1МА. Однако, на 45-е и 60-е сутки данный показатель достоверно превышал контрольные значения, составляя, в частности, на 60-е сутки 3,78x0,40 против 1,97x0,37 в контроле, (Р<0,05; интактные животные - 5,3410,21). На этот же срок АП супероксид-анионной продукции в ответ на ФМА также достоверно превышал контрольные значения и составлял 92,7x3,3 против 50,416,5 (Р<0,05; интакт-ные животные - 68,316,5). В случае ИО продукции супероксид-аниона в ответ на 03 достоверные отличия при применении ПСТ отмечались на 30-е, 45-е и 60-е сутки эксперимента. В частности, на 60-е сутки среднее значение ИС составило 2,3410,28 против 1,1310,13 в контроле (Р<0,05; интактные животные - 2,91x0,24). АП оуперокспд-анион-ной продукщш в ответ на 03 достоверно превышал контрольные значения на всех сроках наблюдения. Наиболее яркие различия наблюдались на 30-е сутки: 43,5x7,2 против 5,9131 в контроле (Р<0.05; интактные животные - 31,1±4,0).

На фоне применения ПСТ происходило также снижение и показателей хемилюминесценции (светосуммы и'пика) при увеличении скорости достижения полупика. В случае острого бактериального повреждения применение ПСТ приводило к достоверному снижению светосуммы на 6-е и 10-е сутки опыта: соответственно 0,6410,14 против 1,27Ю, 22 У/час в контроле на 6-е сутки (Р<0,05) и 0,5610,17 против 1,06Ю,?3 в контроле на 10-е сутки (Р<0,05; интактные животные -О,7210,21) Значения пика хемилюминесценции в случае применения ПСТ достоверно снижалось на 6-е сутки и составило 15,9±2,7 против 24,613,3 тУ в контроле (Р-:0,05; интактные животные - 13,2±1,9), В то же время, применение ПСТ обеспечило достоверное повышение скорости достижения полупика на 6-е и 10-е сутки: соответственно 13,213,1 против 4,910,8 тУ/мин в контроле (Р<0,05) и 10.612,0 против 4,010,9 тУ/мин в контроле (Р<0,05; интактные животные 7,9x1,1).

В случае блеомицинового фиброза легких примелм.пр ПОТ обусловило достоверное снижение светосуммы хемилюминесценции на 30-е и 45-е сутки опыта. В частности, на 30-е сутки - 0.7710,11 против

I,tí3±0,24 V/час в контроле, Р<0,С5 (интактные животные 0,69±0,19). При анализе значений пика, хемклюминесцечции был выявлен достоверный тормозящий эффект НОТ на всех сроках наблюдения - с 15-х по 60-е сутки эксперимента. В частности, на 60-е сутки: 10,8t3,2 против Я0,8±2,5 mV в контроле (Р<0,05; интактные ж вотные -

II,8*0,2). Между тем, значения скорости достижения полупика на фоне применения ПСТ претерпевали достоверное увеличение в сравнении с контролем на всех сроках наблюдения аа исключением 60-х суток. В частности, на 15-е сутки: 9,7±1,2 против 5,4±1,1 в контроле (Р<.0,05; интактные животные - 8,1±1,2). Полученные данные указывают на оптимизацию окислительного метаболизма АМ под воздействием ПСТ.

Все оказанное свидетельствует о том, что ПСТ обладает высокой терапевтической эффективностью. Можно полагать, что одним из механизмов реализации эффекта ПСТ является его избирательное действие На важнейший элемент репарации легких - систему мононуклеарных фагоцитов; усиление притока этих клеток в респираторный отдел легких, увеличение их поглотительной активности и оптимизация процессов окислительного метаболизма АМ, что способствует ускорению процессов репарации легких.

ВЫВОДЫ

1. Моделирование патологических процессов органов дыхания (острое бактериальное повреждение, сублетальное пшерокеическое повреждение и блеомициновый фиброз) приводит к формированию патофизиологических, патоморфологических, бактериологических и иммунологических изменений, свидетельствующих об адекватном воспроизведении соответствующих видов экспериментальной патологии.

2. Воспроизведение использованных в данной работе патологи' чесКих моделей, приводит к значительным изменениям клеточного состава брокхоальверлярной лаважной жидкости (БАЛЯ). Независимо от вида патологии, происходит существенное увеличение количества нейт-рофилов и § меньшей степени лимфоцитов, относительное количество альвеолярных макрофагов при этом уменьшается. Абсолютное число альвеолярных макрофагов при остром бактериальном повреждении тран-виторно ьо;.фастает, при блеомициновом фиброзе происходит более длительное увеличение этого показателя, с последующей нормализацией, тогда как при сублетальном гипероксическом повреждении - не претерпевает закономерных изменений на всех сроках наблюдения.

3. изменения ¿. клеточном составе бронхсальвеслярной лаважной

жидкости сопровождаются изменениями поглотительной функции альвеолярных макрофагов. Фагоцитарная активность этих клеток транзиторно подавляется в случае острого бактериального повреждения. Более длительное угнетение данного параметра происходит после сублетального гипероксического повреждения, Умеренное увеличение поглотительной активности происходит при блеомициновом фиброзе.

4. Оценка окислительного метаболизма клеток бронхоальвеоляр-ной лаважной жидкости (продукция супероксид-аниона и люминол-зависимая хемилюминесценция) в динамике развития острого бактериального повреждения и блеомицинового фиброза легких выявила, что независима ■ от модели исследованной патологии, происходит существенное повышение продукции активных метаболитов кислорода при снижении способности клеток отвечать на стимуляторы респираторного взрыва.

Б. Исследование действия препарата, представляющего ксмпдега пептидов слизистой оболочки трахеи (ИСТ), на клеточные элементы местного иммунитета органов дыхания и системного иммунитета здоровых животных показало, что в системе in vitro ПОТ в отличие от препарата сравнения, тималина, не оказывает влияния на спонтанную и митогенстимулированную пролиферацию мононуклеарных лейкоцитов легких, тимуса и селезенки. В то же время, действие ПСТ вызывает стимуляцию фагоцитарной активности альвеолярных (но не перитоне- ■ алышх) макрофагов с наибольшим эффектом в концентрациях 1' и 0,1 мкг/мл. В системе in vivo ПСТ вызывает увеличение количества альвеолярных макрофагов в лаважной жидкости и усиление их фагоцитарной активности,. а также етиму пирует продутою супероксид-аниона в ответ на индуктор респираторного взрыва корпускулярной природы. Наиболее выраженный эффект наблюдается в дозах 1,0 - 0,2 кг/кг.

6. Применение ПСТ при все:: видах исследованных патологических процессов приводит к ускорению нормализации клеточного состапа бронхоальвеолярной лаважной жидкости и сопровождается увеличением абсолютного количества альвеолярных макрофагов независимо от исходного уровня данного показателя.

7. Использование ПСТ сопровождается усилением ' поглотительной , активности альвеолярных макрофагов, что происходит независимо от ее исходного уровня, а также от вида патологии:' при остром бакте-, риалыюм повреждении и сублетальном гипероксическом повреждении происходит восстановление поглотительной активности этих клеток,' при блеомициновом фибре :_>■_. исходно повышенные показатели фагоцитоза претерпевают дальнейшее увеличение.

8. Под действием ПСТ происходит снижение базапыюго уровня продукции супероксид-аниона при увеличении его стимулировешной продукции в ответ на индукторы респираторного взрыва. Происходит снижение показателей хемилюмиьесценцчи (светосуммы и пика), характеризующих суммарную свободнорадикальную продукцию, при увеличен]»! скорости достижения полупика в ответ на стимуляцию. Полученные данные указывают на оптимизацию кислородного метаболизма альвеолярных макрофагов под воздействием ШТ.

9. Применение ПСТ ускоряет процессы репарации легких, тормозит развитие гемодинамических нарушений в малом круге кровообращения и компенсаторпой гипертрофии миокарда, восстанавливает темпы набора веса у экспериментальных животных.

СПИСОК. ГАЕОТ, ОПУБЛИКОВАНШХ ПО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ

1. Перспективы применения новы;; пептидных биорегуляторов для профилактики и лечения профессиональных заболеваний органов дыхания // Тез. докл. конф.: Применение современных лекарственных препаратов и медицинской техники на крупных промышленных предприятиях. - Л, Тольятти, 1991. - С. 23 - 24 (соавт. Кожемякин А. Л. , Фо-мичев С. Е). _

2. Эффективность нового пептидного биорегулятора из слизистой трахеи при диффузном фиброзирующем процессе легких // Тез. докл. конф.: Применение современных лекарственных препаратов и медицинской техники на крупных промышленных предприятиях. - Л, Тольятти, 1991. - С. 30 - 31 (соавт. Кожемякин А. Л. , Молчанов О. Л).

3. Влияние пептидов из слизистой оболочки трахеи на функциональную активность альвеолярных макрофагов при экспериментальном стафилококковом поражении легких у крыс // Регуляторные пептиды в норме и патологии (цитомедины): Сб. научи, тр. -'Чита. 1991 - С. 30'- 31.

4. Влияние пептидов, полученных из слизистой трахеи, функциональную активность альвеолярных макрофагов при экспериментальном Фиброзиругщем . альвеолите у крыс // Тез. докл. I1 национального конгресса по-болезням органов дыхания. -■ Челябинск, 1991. - С. 354 (соавт. Ко.кемякин А. Л., Данилов Л. Н. , Валеев Р. И., ).

5. До";стьие препарата, выделенного из слизистой оболочш! трахеи, на альвеолярные макрофаги при воспалительных процессах в легких различной этиологии // Тез. докл. II1 национального конгресса по болезням органов дыхания, - СПб., 1992. - С. 487 (соавт. Кожемякин А. Л).

6 Альвеолярные макрофаги при экспериментальном фиброзирующем

альвеолите у крыс: влияние дептндов, выделенных иа слизистой трахеи // Tes. докл. XI î-й научн. конф. молодых ученых ЕА1едА км. 0. М. Кирову. - СПб. , 1992. - С. 79.

7, Влияние препарата, выделенного из слизистой оболочки трахеи, на альвеолярные макрофаги при остром стафилококковом поражении легких у крыс // Пептидные биорегуляторы - цитомедшш: Тез. докл. симпоЭ. - СПб., 1992. - С. 69. (соавт. Валеев Р. И.).

8. Альвеолярные макрофаги при остром стафилококковом повреждении легких у крыс. Влияние пептидов-выделенных из слизистой трахеи // Иммунология. 1993. - б -• 0, 41 - 43 (соавт. Хавинсон В. X. , Кожемякин А. Л.. Более в Р. И. , Молчанов 0. Л. ).