Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Изменения резистентности организма при стрессе и их коррекция фитопрепаратами

РГБ ОД

. _ На правах рукописи

1 7 ОКТ №о

ШАНИН Сергей Николаевич

ИЗМЕНЕНИЯ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ОРГАНИЗМА ПРИ СТРЕССЕ И ИХ КОРРЕКЦИЯ ФИТОПРЕПАРАТАМИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 1996

Работа выполнена в Отделе общей патологии и патологическо! Физиологии Научно-исследовательского института экспериментально! медицины РАМН.

Научный руководитель:

член-корреспондент РАМН, профессор Е.А.Корнева

Научный консультант:

доктор медицинских наук О.Д.Барнаулов

профессор С.А.Шестакова Б.И.Клементьев

Ведущее учреадение: Военно-медицинская академия им. С.Н.Кирова (Санкт-Петербург)

Защита состоится 1996 г. в "/Р." часов на

заседании специализированного совета Д.001.23.03 при Научно-исследовательском институте экспериментальной медицины РАМН (197376. Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова. 12).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке НИН экспериментальной медицины РАМН по адресу: 197376. Санкт-Петербург, ул. Акад. Павлова. 12.

Автореферат разослан "¿к . 1996 г.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, доктор медицинских наук

Учений секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Е!С.Петрова

Актуальность тени. В настоящее время проблему стресса рассматривают по крайней мере с трех позиций: стресс, как звено в механизме адаптации; стресс, как звено в патогенезе болезней; адаптация к стрессу и профилактика стрессорных заболеваний. Ставшая классической теория стресса постулирует вовлечение в ответную реакцию организма на любое стрессорное воздействие симпато-адренало-вой (САС), гипоталамо-гипофизарно-адренокортикальной (ГГАКС) (Селье. 1936), а по современным представлениям, также опиоидной систем (Науменко и др., 1990; Зозуля. 1993). Иммунная система вовлекается в эти реакциии уже на ранних стадиях развития стресса, происходит падение массы тимуса, селезенки, развиваются лимфопе-кия, нейтрофилез и моноцитоз (Селье, 1936; Зимин. 1983).

Данные последних лет свидетельствуют о тесной взаимосвязи иммунной и нейрозндокринной систем организма. Основой этого взаимодействия является наличие общих рецепторов на нервных и иммуноком-петентных клетках и способность этих клеток продуцировать сходные лиганды (BlalocK, Smith, 1985; Blalock. 1989; Cunnlpgham. De Sou-za. 1993). ГГАКС и САС регулируют пролиферацию и секреторную активность практически всех типов клеточных элементов иммунной системы, обладают широким спектром регулирующих воздействий на иммунные реакций (Bulloch, 1985; Bateman et al, 1989; Khansarl et al, 1990), оказывают Модулирующее влияние на синтез интерлейкинов (ИЛ), а также экспрессию рецепторов к ним (Snyder et al. 1990; Berkenbosch et al, 1991). С другой стороны, • интерлейкины (ИЛ-1, rl/I-2, ИЛ-6), интерферон«, гормоны тимуса существенно влияют на функцию эндокринных желез (Blalock, 1987; Bateman et al., 1989; ounn. 1990; Spangelo et al 1995). Эти данные позволили выдвинуть предположение о существований единого иммунойейроэндокринного комплекса для Поддержания ГоМеостаза в организме (Корнева И др., 1988; Bateman et al.. 1989; Ëlalock, 1989).

Согласно современным представлениям, одним из главных клеточ-atx эффекторов обеспечения резистентности являются клетки системы •юнонуклеарных фагоцитов (СМФ) (Фрейдлин. 1984; МаяНскиЙ А., Маян-зкий Д.. 1989). Эти клетки одними Из первых Взаимодействуют с чужеродным объектом, появившемся в организме в результате Инвазии микроорганизма или соматической мутаций, осуществляют контроль за 1ролиферацией и дйфференцировКой гемопоэтических клеток (Ломакин. 1990). Являясь основным Источником ИЛ-1 и других щтокйнов в орга-тзме, эти клетки осуществляют взаимодействие неспецифических и ;пецифических звеньев резистентности'организма. Обнаружение спо-

- г -

собности цитокинов работать в качестве коммуникационного сигнал! между различными популяциями клеток, проникать внутрь клетки, изменяя ее метаболизм, оказывать дистантное действие на ЦНС открывает реальную перспективу расширения представления о механизма: обеспечения резистентности организма при стрессе.

Известно, что хронический стресс является одной из основньс причин повышения заболеваемости, потери трудоспособности, смертности населения. Современная медицина не располагает эффективным средствами для профилактики хронического стрёсса у больших контин-гентов людей. Такими средствами могут стать препараты из лекарственных растений (Барнаулов. 1989; Брехман. 1993).

Специальный интерес в плане изучения механизмов реализащн стресс-протективных эффектов фитопрепаратов (ФП) представляют тш называемые растения-адаптогены, вызывающие повышение сопротивляемости к действию вредс/Иосных воздействий, которая достигается преимущественно посредством активации естественных кеханизмов резистентности организма (Лазарев 1959, 1962).

Цель исследования состояла в изучении изменений некоторых показателей резистентности, в том числе функций иммунной системы, при стрессорных воздействиях различной интенсивности И продолжительности. а также в исследовании стресс-протективных эффекто£ действия ФП. В соответствии с поставленной целью были определен! следующие задачи:

1. Изучить изменения определенных показателей уровней резистентности организма (величины гуморального иммунного.ответа, уровня кортикостерона (Кс) в сыворотке крови, состояния секреторноР части слизистой желудка и органов тимикоглимфатической системы) нг различных моделях экспериментального стресса.

2. Провести анализ продукции лимфоцитактивйрующего факторе (ЛАФ) перитонеальными макрофагами. Изменения концентрации ИЛ-1 е плазме крови и реакции бласттрансформации лимфоцитов (РБТЛ) не действие ИЛ-1 после стрессорных воздействий различной длительности и интенсивности.

3. Оценить эффекты действия ФП-адаптогенов в различных доза> на некоторые показатели специфической и неспецифической резистентности организма нестрессированных животных. у

4. Изучить влияние ФП на уровень гуморального иммунного ответа, продукцию ЛАФ и чувствительность лимфоцитов к ИЛ-1 при различ-

ных видах стресса.

Научная новизна. В результате проведенных исследований установлено. что стрессорные воздействия различной длительности и интенсивности. вызывающие разнонаправленные изменения величины гуморального иммунного ответа, приводят к стимуляции продукции ЛАФ пе-ритонеальными макрофагами мышей и крыс, повышению уровня 11Л-1 в плазме крови животных, снижению чувствительности лимфоцитов к комитогенному действию ИЛ-1 в РБТЛ.

Получены приоритетные данные о дозозависимом характере эффектов ФП-адаптогенов на функциональное состояние мононукпеарных фагоцитов и лимфоцитов. Впервые исследована роль ИЛ-1 в реализации иммунопротективного действия ФП-адаптогенов при стрессе. Получены новые данные о способности ИЛ-1 предотвращать вызванную стрессом иммуносупрессию. Впервые установлено, что введение ФП модулирует интенсивность продукции ЛАФ клет^сами системы мононукпеарных фагоцитов при различных видах стресса и препятствует стресс-индуциро-ванному угнетению РБТЛ на действие ИЛ-Г..

Теоретическое и практическое значение работы. Работа посвящена изучению влияния различных видов экспериментального стресса на определенные показатели специфической и неспецифической резистентности организма, анализу патофизиологических механизмов их реализации, а также изучению влияния ФП-адаптогенов на развитие стрес-сорНоЙ реакции и носит фундаментальный характер. Теоретическое значение работы состоит в создании Новых представлений о роли ИЛ-1 в механизмах иммунопротективного действия ФП при стрессе.

Прикладной аспект работы обусловлен обоснованием возможности применения ряда лекарственных растений для Получения препаратов с широким спектром Действия, повышающих резистентность организма к экстремальным воздействиям..

Результаты исследования позволяют использовать показатели ци-токиновой регуляции: интенсивность Продукции ЛАФ перйтонеальными макрофагами, уровнь • ИЛ-1 в плазме крови И реакцию лимфоцитов на ИЛ-1 .(его коМИТогеНйое Действие) для характеристики тяжести стресс-ЙндуцироваНнЫХ дисфункций иммуННой системы, эффективности профилактики'И последствий стресса.

Основные положения выносимые на запштУ:

1. Стрессорные воздействия различной интенсивности (кратковременная ротация,- длительное комбинированное воздействие, острое

охлаждение), помимо повышения уровня Кс в сыворотке крови крыс 1 мыш^й, индуцируют продукцию ЛАФ макрофагами и вызывают повышение уровня ИЛ-1 в плазме крови животных.

2. Острое холодовое воздействие на крыс вызывает угнетение гуморального иммунного ответа и реакции лимфоцитов периферическоР крови на комитогенное действие ИЛ-1.

3. Действие ФП-алаптогенов (аралии маньчжурской, элеутерококка колючего, родиолы розовой, левзеи сафлоровидной. копеечник« альпийского) на определенные показатели специфической и неспецифической резистентности организма нестрессированных животных носит дозозависимый характер.

4. Предварительное введение ФП при комбинированном стрессе > мышрй и холодовом стрессе у крыс препятствует развитию супрессии гуморального иммунного ответа; парентеральное введение ИЛ-1 крыса» т^кже предотвращает развитие стресс-ищрцированной иммуносупресси» Введение ФП ограничивает вызванную различными вилами стресса продукцию ЛАФ клетками системы мононуклеарных фагоцитов и препятствует угнетению чувствительности лимфоцитов к действию ИЛ-1 в РБТЛ.

Апробация диссертационного материала. Материалы работы докладывались и обсуждались на: IV Всесоюзной конференции "Эндокринная система организма и вредные факторы окружающей среды". Ленинград, 1991; Научно-практической конференции "Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и на Дальнем Востоке", Томск. 1991; 1 Международной конференции по психосоматике и психотерапии стран Балтийского моря. Киль. Германия. 1992; 2-ом Международном конгрессе по нейроиммуномодуляции, Салерно, Италия. 1993; 12 Международном фармакологическом конгрессе. Монреаль. Канада. 1994; 1-ом Международном Конгрессе по иммунореабилитации, Сочи. 1994; 1-ом Международном Конгрессе по стрессу, Бесезда. США. 1994; Международной Конференции "Взаимодействие нервной и иммунной систем и факторы окружающей среды", Санкт-Петербург, 1995.

Материалы диссертации опубликованы в 17 работах.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на страниц машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы (три подглавы) , материалов и методов. 7 подглав собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов. В диссертации 8 таблиц и 25 рисунков. Прилагаемый список литературы содержит наименований.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Эксперименты выполнены на 340 крысах-самцах гетерозиготного атаыма линии "Viatar" массой 160-180 г. на 900 мышах-самцах линии (CBAxCSTBL6 )Fj массой 18-22 г.

В работе использованы три модели стресса: ротационный стресс на мышах (вращение животных со скоростью 78 об/нин в течение 1 часа, 10 мин вращения чередовались с 5 мин перерыва); комбинированный стресс на мышах (охлаждение животных после 12-часового голодания при 5° С в течение 2-х часов в металлических контейнерах с последующей их иммобилизацией при комнатной температуре в течение 18 часов по методу О.Д.Барнаулова (1983): холодовой стресс на крысах (охлаждение животных в металлических контейнерах, в течение 20 мин при -20V С).

Интенсивность стрессорной реакции оценивали путем определения уровня глюкокортикоидных гормонов в сыворотке крови животных радиоиммунологическим методом (Гончаров и др.. 1977), регистрацией эрозий слизистой секреторной Части желудка и изменения, массы тимуса И селезенки стрессйрованных животных.

Иммунизацию производили эритроцитами барана (ЭБ) в дозе 1 -млрд. клеток (на крысу) и 0,2 млрд клеток (на мышь), в/бр. Уровень антител в сыворотке крови определяли на пятый день после иммунизации методом прямой гемагглйтйнацйй в мйкротитраторе, количество антителообразующих клеток в селезенке - Методом локального гемолиза в геле агарозы (Ёгпе, Nordln. 1963).

Лимфоциты выделили Из Периферической крови крыс методом Boyum (1968). Резидентные макрофаги смывали из перитонеальной полости декапитированных крыс и мышей. Жизнеспособность клеток определяли их прокрашиванием в 0,25* растворе трипанового синего по методу King. Wood (1962).

Для индукций образования ЛАФ использовали Staphylococcus aureus из расчета 20-30 убитых нагреванием микробных тел на 1 фагоцит. Лимфоцитактивирующее действие инкубатов мононуклеарных Фагоцитов оценивали по их способности оказывать комитогенное действие на пролиферацию тимоцитов . стимулированных субоптимальными дозами лектинов (Rosenwasser, Dlnarello,. 1981).

Для.постановки РБТЛ периферической крови крыс клетки культи-

вировали с Con А (0.75 мкг/мл) и нативным препаратом ИЛ-10 крол1 ica. приготовленным и очищенным в Отделе общей патологии и пата!» зиологни НИИЭМ РАМН этаноловым методом (Сорокин и др.. 1978) в дс зе 0,06 мкг/мл. Реакцию учитывали количественно по включению мет ки в ЛНК лимфоцитов в течение 1 минуты.

Прямое определение концентрации Ил-la в плазме крови мыше осуществляли стандартным радиоиммунологическим методом с использо ванием Interleukln-la С"J] RIA kit (Amersham. UK).

При изучении влияния ИЛ-1 на изменение уровня гуморальног иммунного ответа при развитии стрессорных реакций, крысам вводил в/бр препарат рекомбинантного ИЛ-ip (рИЛ-ip. Стокгольм, Швеция).

В работе использованы ФП. приготовленные из подземных чаете лекарственных растений семейства Аралиевых (Arallacea): арали маньчжурская (Aralla mandshurlca Rupr. et Maxim.). элеутерокок колючий (Eleutherçococcus sentlcosus Rupr. et Maxim. ); семейств Толстянковых (Crassulaceae): родиола розовая (Rhodlola rosea L. ) семейства Сложноцветных (Composltae): рапонтикум (левзея) сафлоро 'видный (Rhapontlcum carthamoldes (Wllld.) Iljln - Leuzea cartharao Idea DC.); семейства Бобовых (Fabaceae): копеечник альпийский (Не dysarum alplnum L. ). Сырье собрано в 1990-1992 гг. на Дальнем Востоке и Алтае. Приготовление отваров регламентировано Государственной фармакопеей X (1986). ФП вводили в желудок животным через зон) в течение 7 дней ежедневно в 10-11 часов утра. Контрольным животным вводили равный объем кипяченой воды.

Достоверность различий между группами оценивали по t-критери! Стьюдента (Плохинский, 1980). Во всех расчетах за достоверный принимали 95Я уровень значимости (р<0.05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

1. Изменения показателей резистентности организма при' различных видах стрессорных воздействий.

Поскольку одним из показателей развития стрессорноП реакции является изменение уровня глккокортиксидов в крови, а на стадии истощения общего адаптационного синдрома она проявляется классической триадой Селье, при выполнении этих исследований проводились определение уровня Кс в крови, измерение массы тимуса, селезенки и

яадпочечников, подсчет количества и размеров деструкций слизистой секреторной части желудка.

В работе изучена динамика продукции ЛАФ и изменения уровня М-la в различные сроки (0-72 часа) после стрессорного воздействия , а также исследованы показатели, характеризующие выраженность иммунных реакций при стрессе - первичный иммунный ответ на Т-зависи-иый антиген (ЭБ) и чувствительность лимфоцитов в реакции бласт-грансформации к комитогенному действию ИЛ-1.

Первая модель экспериментального стресса - ротация - интересна тем, что позволяет оценить эффекты относительно мягкого, нет-равмирующего воздействия на показатели резистентности организма животных и сравнить эти данные с изменениями, возникающими в организме при интенсивном и длительном стрессорном воздействии.

После ротационного воздействия не отмечалось появления деструкция секреторного отдела -слизистой желудка, практически не изменялась масса тимуса и селезенки.Уровень Кс в сыворотке крови существенно повышался через 0 и 0,5 часов после прекращения стресси-рования животных, свидетельствуя о развертывании стрессорной реакции, после чего через 1 час концентрация гормона возвращалась к норме. Ротационный стресс вызывал также существенное возрастание содержания ИЛ-1а в плазме крови мышей, которое было максимальным через 0,5 часов после прекращения действия стресса и оставалось достоверно повышенным вплоть до 48 часов.

В соответствии с данными литературы (Dlnarello. 1984) в проведенных эксперйМетах супернатанты резидентных перитонеальных макрофагов интактных Мышей не обладали ЛАФ-актйвностью, стимуляция клеток стафилококками вызывала выделение ими ЛАФ. Макрофаги стрессировайных мышей непосредственно после ротации, а также в течение последующих 48 Часов вплоть дс1 конца исследования продуцировали ЛАФ без дополнительной стимуляции. Стимуляция клеток, полученных от стрессироВанных животных, стафилококками не вызывала достоверного усиления выделения ИМИ ЛАФ по сравнению с нестимули-рованными In vitro клетками (рис. 1).

При использованном виде стрессорного воздействия не происходило торможения гуморального иммунного ответа: достоверно повышались титры агглютининов в крови к ЭБ, сохранялась тенденция к росту АОК селезенки.

Применение комбинированного стресса на мышах дает возможность

1 • 6 -5 4 3

г -i -

ЛАФ - активность ея. х10 '3

L

А

*| л

*1

".к!,

i\

0 12 24 4В 72

ВДЗЛЛЬНЫИ

УРОВЕНЬ время после стрессорного воздействия (часы) ,

Рис. 1 Продукция ЛАФ лермтонеаяышим макрофагами мышей после ротацш

Б ■ Б-4

3

г 1

ЛАФ - активность сп. х10 3

jd

bL

uA

*г

&

1

БАЗАЛЬНЫЙ 0 24 48

УРОВЕНЬ вреия пасае стрессорною воздействия

Рис. г Продукция ЛАФ периюиеакьными макрофагами посяе комбинированною воздействия

72 (часы)

мышей

Примечания к рис. 1, 2: | | - без дополнительной стимуяяции

- t I - посяс стммуяяции макрофатов

Staph auiriis * - р < 0,05 по сраимснии с Каэаяьиым уровнем

изучить характер и динамику изменений Функционирования клеток системы мононуклеарных фагоцитов (СМФ) при стрессе большей длительности и Интенсивности, чем ротационный. Комбинированный стресс вызывал появление деструкция слизистой секреторной части желудка (11,3 ± 2.6 на мышь), падение массы тимуса и селезенки (в 1.4 -1.9 раз), угнетение гуморального иммунного ответа, приводил к более длительному, чем при ротационном стрессе, повышению уровня плюкокортикоидных гормонов в течение 24 часов после окончания возДействия. Повышенный уровень ИЛ-la сохранялся в течение двух часов постстрессорного периода.

Исследование влияния комбинированного стресса на продукцию ЛАФ позволило установить, что стрессорное воздействие приводит к активации перитонеальных макрофагов и длительной (до 72 часов) продукции ЛАФ без дополнительной стимуляции (менее выраженной, чем при ротационном воздействии). Та1сже, как при ротационном стрессе, под влиянием комбинированного стресса в течение первых 48 часов Постстрессорного периода перитонеальные макрофаги практически не отвечали повышением продукции ЛАФ на дополнительную стимуляцию клеток стафилококками in vitro.

Следует подчеркнуть, что стресс-индуцированная продукция ЛАФ перитонеальными Макрофагами после стимуляции клеток стафилококками была на 35-40 % меньше, чем у клеток нестрессированных животных в течение Первых 48 Часов наблюдения (рис. 2).

Установлено, что холодовой стресс у крыс, так же как И комбинированный стресс у мышей, приводит к развитию выраженной иммуно-супрессии и повышении уровня Кс в сыворотке крови животных в течение двух часов постстрессорного периода. Такой ВИД стресса вызывал продукций ЛАФ Перитонеальными макрофагами без дополнительной сти-Муляцйи вплоть до 24 часов после окончания действия стресса, но не Изменяя их отйета на действие стафилококков (рис. 3). Перитонеаль-НЫё макрофагами нестрессйровашшх АИйотных через 1-24 часа после виутрибрюшинНоГо введения им лйпополисахарида. (ЛПС) пирогенала (НИИ эпидемиологии И мИкробноЛогйИ ИМ. Н.Ф.ГаМаЛеи) В Дозе 2,5 МПД/100 г массы также продуцировали ЛАФ (рис. 3). Однако в случае введения животнШ ЛПС за 30 мйн До Начала аппликации стресса, освобождение ЛАФ макрофагами, как стимулироёаннымй, так и нестимули-рованНыМи, было Достоверно сниженным по сравнению с теми же показателями у нестрессИропанных крыс после введения им ЛПС (рис. 3).

7 Б

5 3

г-

ЛЛФ - активность еп. х10 э

Л

1М

г

I I - Без пополнительной стимуляции Ы ' после стимуляции Б1»рЬ.вигеиа

^ I 1

и

Бвзалышй 1 2 24 1 2 24 1 2 24

уровень время после стрессорного воздействия м введения ЛПС (часы)

ЛПС СТРЕСС СТРЕСС ♦ ЛПС

Рнг-3 Пр опунция ЛАФ перитоиеалышии макрофагаий крыс после

введения ЛПС. охлаждения (20°С. 20 нин) и сочетаииого воздействия

* - р < 0.05 - по сравнении с ЛПС-группой

* ■ р < 0.05 ; ** ■ р < 0.01 - по сравнении с Баэаяьмыи уровней

- И -

Для исследования механизмов иммуносупрессирующего действия холодового стресса были поставлены эксперименты с целью оценки влияния рИЛ-ip на развитие гуморального иммунного ответа и на про-лиферативную активность лимфоцитов периферической крови стрессиро-ванных крыс. Установлено, что однократное парентеральное введение рИЛ-10 (50 пг/100 г) животным за 30 мин до иммунизации и 10 мин до охлаздения предотвращало падение титров антител по сравнению с теми' зе показателями у животных, подвергнутых стрессу, но не получавших рШ1-1р.

В экспериментах In vitro нативный препарат ИЛ-lfi оказывал ко-митогенное действие на пролиферацию лимфоцитов периферической крови крыс в дозе 0.06 мкг/мл в присутствии субоптимальной дозы Сон А. Однако сразу же после окончания холодового воздействия клетки теряли эту способность, восстанавливая ее через 24 часа после окончания стрессирущего воздействия. • •

2. Влияние фитопрепаратов на показатели

резистентности нестрессированных животных.

Вопрос о влиянии ФП на продукцию ЛАФ клетками СМФ и уровень ИЛ-1 в крови до настоящего времени практически не изучался. Поэтому. перед экспериментальным изучением эффектов ФП при стресс-инду-цированных нарушениях механизмов резистентности, в качестве первого этапа исследовано их влияние На эти показатели у нестрессированных яивотных.

Ежедневное введение ФП в дозе 2.5 г/кг массы мышам в течение 7 дней вызывало увеличение в сыворотке крови мышей и крыс уровня Кс И в плазме крови мышей уровня ШМа (3 из 5 ФП, кроме родиолы розовой и элеутерококка КолюЧего) По сравнению с теми же показателями в интактной и контрольной группах животных (табл. 1).

Введение ФП в дозе 0.75 Г/КГ массы в тех же условиях не вызывало статистически достоверных Изменений Кс в сыворотке и ИЛ-1а в плазме крови мышей (табл. 1).

Введение ФП (аралии Маньчжурской, копеечника альпийского и левзеи сафлоровидной) в дозе 2,5 Г/кг оказывало выраженное стимулирующее влияние на гуморальный иммунный ответ, приводило к увеличению массы надпочечников.

Перитонеальные макрофаги мышей и крыс, получавших ФП в лозе

2,5 г/кг массы, в отличие от клеток животных, получавших ФП в дозе 0.75 г/кг, продуцировали ЛАФ без дополнительной стимуляции. Несмотря на то. что ФП в дозе 0.75 г/кг не вызывают спонтанной продукции ЛАФ, уровень продукции ЛАФ после дополнительной стимуляции макрофагов стафилококками под действием ФП в этой дозе достоверно выше уровня продукции ЛАФ клетками контрольных животных, получавших воду (рис.4).

Таблица 1.

Уровень Кортикостерона (Кс) и Интерлейкина 1а (ИЛ-1а) в крови мышей и крыс после 7-дневного введения фитопрепаратов.

г--1-1-;-1

I II Уровень I

1 Группы Доза -

1 ФП ИЛ-Ю в плаз- Кс в сыворотке. нг/мл

1 живоп^ст Г/КГ ме крови мы- _ ,------

1 1 шей. пг/мл мышей 1 крыс 1

г , и. Интактные (10) 62+11 (14) 76±15 1 1(6) 69+11

12. Контрольные 1

1 (Нг0) (10) 84+24 (15) 88+21 1(8) 90+22

13. Элеутеро-

1 кокк 0.75 (13) 107+32 (14) 82+16 1(8) 65+10

14. Аралия _ м _ (12) 104+30 (13) 98+18 1(8) 83+10

15. Левзея (14) 121+49 (14) 102+25 1(8) 94+23

16, Копеечник — И» (12) 98+25 (14) 90+21 1(8) 102+28

17. Родиола (12) 109+29 (14) 106+33 1(8) 99+18

18. Элеутеро- 1

1 кокк 2.5 (12) 132+33 (12) 169+20 •1(8) 179+31 *

19. Аралия _ « _ (12) 198+29 * (12) 201+32 •1(8) 250+41 *

110 Левзея _ И _ (12) 166+19 * (13) 218+28 ♦1(8) 188+29 •

1И.Копеечник — " — (Ш 162+21 * (12) 162+20 •1(8) 197+43 «

112.Годнола _ и _ (12) 116+35 (12) 162123 •1(8) 178+28 •

I_____I_I_I_______I_I

Примечания: в скобках указано количество животных в группе.

* - р < 0.05 по сравнению с контрольной группой

Введение крысам ФП в дозе 2,5 г/кг резко увеличивало (в 1,6 -1,9 раза) включение меченого тимидина в ДНК делятся лимфоцитов

активность en. х 10 "3

9

7

5

3

О 7 S 3

О

ЛАФ | I " без пополнительной стимуляции

l__J " после стимуляции макрофагов Staph.aureua

Доз» ФП: г.Бфсг

J__

1_

Поза ФП: 6,75 г/кг

1 *1

;t . 1 ц Г г -ц .г

интактные

н2о

аралия злеуте- левэея копееч- радиола маньчж. рококк сафлор, ник розовая количий альл.

Рис. 4 Активность ЛАФ ■ Супериагантах перитонеальных макрофагов мышей после 7-Анеаного введения ФП в различных позах

импульсов

в сек.

5000 зооа-

10ОО 0.

1

ИНТАКТНЫЕ "ЗАВЕДЕНИЯ ФГ1

.. - АРМИЯ ЗПЕУ- ^a^rt КОПЕ- РОДИО-2 МАНЬЧ. ТЕРО- сДф(1 ЕЧНИК ЛА кокк АЛЬП. РОЗ.

0 ЧАСОВ ПОСЛЕ ХОЛОДОВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ

Рис.5 Влияние ФП на индуцированное ИгИ/J включение Н^1Нмидииа

в ДНК лийфоцитов периферической крови стресснрованных крыс

Примечание к рис.4. 5:

*- р < 0.05 по сравнении с контрольной (НгО| группой

*

периферической крови при их инкубации с нативным препаратом ИЛ-lfJ. Введение ФП в дозе 0,75 г/кг такого эффекта не вызывало.

Поскольку введение ФП в дозе 2,5 г/кг приводит к изменениям показателей резистентности у нестрессированных животных, а в дозе 0,75 г/кг практически не влияет на эти показатели, в последующих исследованиях Влияния ФП на развитие защитных реакций организма при стрессе эти препараты использовались в дозе 0.75 г/кг.

3. Действие фитопрепаратов на развитие защитных реакций организма при различных видах стресса.

Установлено, что перитонеальные макрофаги мышей, которым до ротации вводили ФП в дозе 0.75 г/кг. сразу же после окончания стрессорного воздействия секретировали ЛАФ интенсивнее (кроме элеутерококка колючего}, чем макрофаги животных контрольной/-группы. но прекращали эту секрецию к 48 часам после окончания действия стресса, в то время как клетки животных, которым вместо ФП вводили воду, продолжали выделять ЛАФ. Макрофаги животных, которым до аппликации стресса вводили ФП. отвечали на стимуляцию стафилококками усиленной продукцией :ЛАФ во все сроки наблюдения (табл. 2).

" Предварительное 7-дневное введение ФП мышам до аппликации комбинированного стресса препятствовало стресс-индуцированному развитию иммуносупрессии, инволюции тимуса, падению Массы селезенки И достоверно снижало количество Деструкции секреторного отдела слизистой желудка. У мышей, получавших ФП. индуцированная стрессом продукция ЛАФ перитонеальными макрофагами Повышалась сразу же после стрессорного.воздействия. Клетки прекращали продуцировать ЛАФ без дополнительной стимуляции к 48 часам Постстрессорного периода в отличие от клеток животных контрольной группы, продолжавших освобождать ЛАФ (табл. 2). стимулированная ln.vi tro продукция "ЛАФ макрофагами животных,. Получавших ФП, была достоверно выше, чем у клеток Контрольной Группы в течение 48 Часов после завершения стрессорного воздействия (табл. 2).

■ . Введение ФП; крысам также предотвращало развитие ИММуносупрер-сии. вызванной действием холодовоГо стресса. ФП не препятствовали подъему Кс в крови стрессйрованных животных, но ускоряли снижение его уровня к первому часу после стрессорного воздействия до исходного уровня.

Экспериментальные группы ЛАФ-актнвность х 0.01 ед/мл

Б сJ Ф11 Н :0 Аралия | Элеутерококк Левзея Копеечник Родиола

Без стресса (мыши. крысы) 0 0 0 0 0 0 0

Ротационным стрссс (мыши) 0 24 48 3.8 + 0.4 4.2 + 0.6 3.2 + 0.6 3,9 +0.4 4,6 + Г 6 3.6 +0,5 5.8 +0.4 • 5.0 +0.4 1.0 +0.4 * 5.2 + 0.6 4.8 + 0,3 0,9 + 0.4 * 6.1 + 0,5 * 5,0 + 0,3 1.2 + 0.4 • 5,6 + 0,6 * 5,1 + 0.2 0.5 + 0.3 • 5.9 + 0,8 * 4,6 + 0,4 1.2 + 0.4 •

KonOimifpo-взнный стресс (МЫШи) 0 24 48 2.8 + 0.3 3.0 + 0,5 2.9 + 0,4 2.6 +0.3 3.0 +0.5 2.8 +0.5 5.0 +0.4 • 4.0 +0.6 0.6 + 0.5 * 4,9 + 0.4 • 4.1 + 0,5 0.7 + 0.6 • 5.0 + 0,6 • 4,0 + 0,5 1.0 + 0.5 * 5,1 +0,4 * ' 4,0 + 0,4 0.5 + 0.3 * 4,9 + 0,6 • 3,9 + 0,5 1,1 + 0,4 *

Холодовой стрссс (крысы) 0 24 48 3.8 + 0.2 3.4 +0,5 2.6 + 0.6 3.6 +0.4 3.6 +0.5 2.8 +0,6 6.8 +0.6 • 4.0 + 0.7 0 • 5.8 +• 0.4 • 3.9 + 0.4 0.3 + 0.2 * 6,9 + 0.6 • 4.0 + 0,4 0.5 + 0.2 • 6.7 +0.5 * 4,2 +0.6 0 * 6,5 + 0,5 ♦ 3,8 + 0,5 0.7 + 0.2 *

ЛАФ-активность * 0.01 ед/мл (после дополнительном стимуляции Staphylococcus aureus)

Без ФП Н :0 Аралия Элеутерококк Левзея Копеечннк Родиола

Без стресса (мьпии) 4.2 + 0.4 4.4 + 0.4 6.5 + 0.5 • 6.1 + 0.4 * 6,0 + 0.4 • 7.0 + 0.6 • 5.8 + 0.4 *

Ротационньш страх (мыши) 0 24 48 4.0 + 0.4 4.8 + 0.3 3.9 + 0.5 4.2 + 0.6 4.8 + 0,4 3,8 + 0.3 7.2 + 0,6 • 6.3 + 0.4 • 6.3 + 0.3 * 7,6 + 0.7 • 6.4 + 0.3 • Ь,9 + 0,4 * 7.5 + 0.6 • 6,8 + 0.4 • 6.8 + 0,4 » 8.0 + 0.8 « 7.1 + 0.5 • 7,0 + 0,6 • 7,0 + 0.5 * 6.9 + 0.5 * 6.5 + 0.6 *

Комбинированный стресс (мыши) 0 24 48 2.6 + 0,4 3.1 + 0,5 2.8 + 0.4 2.6 + 0,3 2.9 + 0.4 3.0 + 0,5 5.2 + 0.4 ♦ 5.3 + 0.3 • 6,3 + 0.3 • 5,9 + 0.5 • 5.4 + 0.4 • 6.1 ± 0.7 • 5.0 + 0.4 • 5.3 + 0,4 * 6.0 + 0.7 • 6.1 + 0.6 • 6.1 + 0.6 • 6.2 + 0.8 * 4.8 + 0.4 * 4.9 + 0.4 * 6.3 + 0.8 *

Без стресса (крысы > 3.5 + 0.5 3.8 + 0,4 6.3 + 0.5 • 5.9 + 0.4 • 5.9 + 0.3 ♦ 7.2 + 0.5 • 6.5 + 0.4 •

Холодовой стресс (крысы) 0 24 48 3.8 + 0.2 3,4 + 0.5 3,2 + 0.6 3.6 + 0.4 3.6 + 0.5 3.8 + 0.6 7.8 + 0.6 • 6,8 + 0.5 • 6.5 + 0.4 • 7,0 + 0.8 • 6.9 + 0.7 • 6.5 + 0.5 • 7.9 + 0.8 • 7.2 + 0.5 * 6.2 + 0.4 • 7,1 + 0.5 • 7.4 + 0.3 • 6.8 + 0.9 • 6.8 + 0.8 • 7.6 + 0.6 * 7.3 + 0.9 •

Врем после стресса .час • - Р < 0.05 по сравнению с контрольной (Н ; 0 ) группой

Таблица 2. Влияние фитопрепаратов на продукцию Л АФ перитонеальными макрофагами мышей и крыс после различных стреесорных в воздействий.

Продолжительность стресс-индуцированной продукции ЛАФ без дополнительной стимуляции во всех группах животных, получавших ФП, была одинаковой - первые 24 часа после охлаждения (табл. 2). К 48 часам после холодового воздействия макрофаги крыс, получавших ФП. прекращали продукцию ЛАФ в отличие от клеток контрольной (НгО) группы животных (табл. 2).

Лимфоциты периферической крови стрессированных животных, которым до аппликации стресса вводились ФП. сохраняли способность отвечать реакцией бласттрансформации на действие ИЛ-10 в присутствии субоптимальной дозы Con А в условиях in vitro сразу же после охлаждения в отличие от лимфоцитов стрессированных Крыс, получавших не ФП. а воду (рис. 5).

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

t

Как было Известно ранее и показано нами, стресс может не влиять на гуморальный иммунный ответ." стимулировать его или угнетать (Зимин, 1979, 1983; Boranlc et al. 1984; Корнева . Шхинек .1988; Khansarl et al.. 1990; Berkenbosch et al., 1991; Kusnecov, fiabln. 1994). Так, в наших исследованиях ротационный стресс приводит к повышали» титров агглютининов к ЭБ в Кровй. определяется тенденция к росту Количества АОК селезенки. Комбинированный стресс у мышей и острое охлаждение у крыс вызывает угнетение гуморального Иммунного ответа. Эти изменения развертываются на фоне Повышения уровня Кс в Крови мышей и крыс, уровня ИЛ-1а в крови мышей.

В проведенном сравнительном исследовании впервые Показано, что различные по интенсивности и длительности стрессорные воздействия стимулируют перитонеальные Макрофаги животных к продукций ЛАФ. При этом иммуносупрессйрующие бездействия характеризуются пониженным функциональным резервом Продукций ЛАФ клетками СМФ при их дополнительной стимуляций ЛПС in vivo й стафилококками in Vitro.

Как известно, способность Макрофагов выделять ЛАФ отражает продукций ряда ЦИТоКййоВ этими клетками, а йМеННо: ЙЛ-1, ЙЛ-6, факторов некроза ОПухоЛей (ФНО) (Dinaí-ello, 1990). то есть является прямым свидетельством активного синтеза иммунорегулирующих пептидов в ответ Па стрессорное воздействие.

Наиболее вероятным механизмом снижения продукции ЛАФ in vitro. возможно, является депрессия поглотительной функции клеток

системы мононуклеарных фагоцитов при действии высокой концентрации Кс. выступающего как стабилизатор мембран фагоцитов и ингибирующий поглотительную функцию макрофагов (Solomon. 1974; Dunkan et al.,1982).

Возможно, повышенный уровень ИЛ-la в плазме крови в пост-стрессорном периоде, а также стресс-индуцированная продукция ЛАФ перитонеалъными макрофагами компенсируют эффекты действия глюко-кортикоидных гормонов на иммунокомпетентные клетки при стрессе, вызывают мобилизацию специфических защитных механизмов. В представленной работе показано, что однократное предварительное введение нативного препарата ИЛ-lß крысам предотвращает падение титров антител при холодовом стрессе.

Известно, что эффективность процесса регуляции зависит не только от количества регулирующего фактора-медиатора иммуного ответа. но и от чувствительности клетвк-мишеней к его модулирующему действию. В настоящем исследовании показано, что лимфоциты перефе-рической крови стрессированных животных теряют способность отвечать реакцией бласттрансформации на действие ИЛ-lß In vitro в начале постстрессорного периода.

В патогенезе пострессорного угнетения иммунологических процессов большую роль играет нарушение образования цитокинов-иммуно-медиаторов. в частности. ИЛ-1 и ИЛ-2. Как показали исследования Г.Т.Сухих с соавторами (1984). иммобилизация мышей сопровождается выраженным (30-50% от исходного уровня) и длительным (в течение 5-7 дней пострессорного периода) снижением продукции ИЛ-2 сплено-цитами животных, стимулированных Con А, и приводит к угнетению экспрессии гена ИЛ-2 Т-клеткамИ (Казакова. Головко, 1996). Известно. что ИЛ-1 необходим для индукции синтеза ИЛ-2 хелперными Т-лим-фоцитами и для экспрессии рецептора к ИЛ-2 на Т-клетках (Dlnarel-1о. 1988).

Полученные результаты раскрывают ранее неизвестные механизмы развития стрессорной реакции при действии раздражителей различной силы, а именно, различный уровнь продукции ЛАФ перитонеальными макрофагам», снижение комитогенного действия входящего в состав ЛАФ ИЛ-1 при интенсивном стрессе, что. по-видимому, влечет за собой изменение функциональных возможностей Иммунной системы.

В представленной работе было впервые проанализировано влияние ФП-адаптогенов на комплекс показателей: продукцию ЛАФ. уровень

ИЛ-la в крови, реакцию лимфоидных клеток на действие ИЛ-10 и состояние гуморального иммунного ответа. Показан дозозависимый характер влияния этих средств. Введение ФП в дозе 2.5 г/кг, в основном, оказывает стимулирующее действие на эти показатели. Напротив, введение ФП в дозе 0,75 г/кг заметно не влияет на.функциональную активность макрофагов и лимфоцитов, величину гуморального иммунного ответа. Следуя классическому определению фитоадаптогенов как препаратов, не влияющих на нормально протекающие процессы в здоровом организме, в дальнейшие исследованиях ФП использовались в дозе 0,75 г/кг, при которой изменения продукции ЛАФ. уровня в крови Кс и ИЛ-1, интенсивности пролиферации лимфоцитов, а также величины гуморального иммунного ответа наименее выражены. Применение ФП в этой дозе в течение 7-и дней до стрессорного воздействия характеризовалось следующими особенностями продукции ЛАФ в постстрессор-ном периоде: 1) увеличением продукции ЛАФ перитонеальными макрофагами сразу же после окончания стрессорного воздействия; 2) ограничением длительности стресс-индуцированной продукции ЛАФ перитонеальными макрофагами; 3) большей интенсивностью реакции перитоне-альных макрофагов На их Дополнительную стимуляцию Staphylococcus aureus in vitro, чем при стимуляция клеток животных. Не получавших ФЛ. -

Хотя ЛАФ. в том числе ИЛ-1. являются важнейшими модуляторами защитных реакций организма, характер их влияния на развитие этих реакций не является однозначным: избыточная Или длительная продукция оказывает повреждающее действие на ряд.систем и функций организма (Dlnarello, 1993; Dlnarello, Wolff, 1993). Поэтому ограничение длительной продукции ЛАФ. вызванной стрессом. Под действием ФП, очевидно, являеЧ'ся одним из проявлений их стресс-протективного действия.

Лимфоциты Периферической кройи стрессйрованных охлаждением крыс, которым до аппликации стресса вводили ФП, сохраняли способность отвечать реакцией бЛасттрансфорМаЦии На Действие МЛ-1(5 сразу же после охлаждения, в отличие от лимфоцитов стрессйрованных крыс, получавших не ФП,- а Воду. Несмотря на то, что конкретные Механизмы защитного действия этих препаратов на лимфоциты требует дальнейшего анализа, результаты уже проведенных исследований экспериментально обосновывают перспективность использования ФП в качестве иммуномодуляторов - лекарственных средств, Предотвращающих стрес-

синдуцированную иммуносупрессию.

Таким образом, на патофизиологических моделях стресс-индуци-рованной супрессии гуморального иммунного ответа показано, что им-мунопротективный эффект выбранных для экспериментального изучения ФП-адаптогенов связан, с одной стороны, с их модулирующим действием на продукцию ЛАФ перитонеальными макрофагами, с другой - с сохранением чувствительности лимфоцитов периферической крови к ре-гуляторным влияниям ИЛ-1 - ключевого медиатора защитных реакций организма и нейроиммунных взаимодействий.

В Ы В О Д Ы.

1. Ротационный стресс приводит к значительному (в 4,5 раза) повышению уровня Кс в сыворотке крови мышей, индуцирует продукцию ЛАФ макрофагами, повышение уровня ИЛ-1а в плазме к(рви , но не вызывает падения массы тимуса и селезенки, - деструктивных изменений в слизистой секреторной части желудка, угнетения гуморального иммунного ответа.

2. Комбинированный стресс приводит к деструктивным изменениям в слизистой секреторной части желудка, падению массы тимуса и селезенки на фоне длительного (в течение 24 часов) и повышения (в 3.6-4.1 раза) уровня Кс в сыворотке крови мышей, снижения числа АОК селезенки и титров антител в крови мышей, повышения уровня ИЛ-1а в плазме крови. Индуцируя продукцию ЛАФ перитонеальными макрофагами, комбинированный стресс снижает реакцию этих клеток на стимуляцию стафилококками (на 35-40 %) по сравнению с реакцией клеток нестрессированных животных.

3. Острое охлаждение крыс сопровождается повышением уровня Кс в сыворотке крови, снижением титров антител к ЭБ: инициирует освобождение ЛАФ перитонеальными макрофагами, но снижает продукцию ЛАФ этими клетками в ответ на системное введение ЛПС. В условиях холо-дового стресса снижается чувствительность лимфоцитов к комитоген-ному действию ИЛ-10 в реакции бласттрансформации. Стресс-индуциро-ванная супрессия гуморального иммунного ответа предотвращается парентеральным введением рИЛ-10.

4. Введение ФП (аралии маньчжурской, элеутерококка колючего, родиолы розовой, левзеи сафлоровидной, копеечника альпийского), в дозе 2,5 г/кг массы вызывает увеличение массы надпочечников у

крыс, повышение уровня Кс в сыворотке и ИЛ-la в плазме крови мышей, стимулирует продукцию ЛАФ перитонеальными макрофагами и гуморальный иммунный ответ на ЭБ у мышей и крыс, увеличивает включение меченого тимидина в ДНК лимфоцитов периферической крови крыс при их инкубации с ИЛ-ip. Введение ФП в дозе 0.75 г/кг не оказывает выраженного влияния на эти показатели.

5. Предварительное введение ФП (0,75 г/кг) усилиливает индуцированную ротационным стрессом продукцию ЛАФ перитонеальными макрофагами в начале постстрессорного периода, но ограничивает ее продолжительность, повышает функциональный резерв клеток, выделяющих ЛАФ, при стимуляции их стафилококками in vitro.

6. Предварительное введение ФП (0,75 г/кг) модулирует реакцию на комбинированный стресс у мышей: ограничивает падение массы тимуса, и селезенки, нормализует величину гуморального иммунного ответа, усиливает стресс-индуцированное освобождение ЛАФ перитонеальными макрофагами, но ограничивает ее продолжительности увеличивает продукцию ЛАФ клетками при их стимуляции стафилококками..

7. Предварительное введение ФП (0,75 г/кг) у крыс ускоряет процесс возвращения повышенного уровня Кс к исходному при холодо-вом стрессе. Повышает стресс-индуцированную продукцию ЛАФ перитонеальными Макрофагами, но ограничивает ее продолжительность, увеличивает продукцию ЛАФ в ответ На действие стафилококков In vitro: повышает чувствительность лимфоцитов периферической крови к коми-тогенному действию ИЛ-ip в РБТЛ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Барнаулов 0.Д., Шанин С.И. Сравнительная оценка влияния некоторых лекарственных растений на образование экспериментальных деструкции желудка // Состояние и перспективы развития фармации в Сибири и На Дальнем Востоке: Тез. докл. конференции. Томск, 1991. С.34-35.

2. Барнаулов О.Д., Шанин С.Н. Стресс-лимитирующее действие фитопрепаратов // Тез. докл. IV Всесоюзной конференции: "Эндокрин7 ная система организма и вредные факторы окружающей среды". Л.. 1991. С: 27.

3. Rybaklna E.G.. Fomlcheva Е.Е.,. Shanln S. N., Kozlnets I. A. Stress, Interleukln-1 and host defense-reactions // First Baltic

Sea Conference on Psychosomatlcs and Psychotherapy. Kiel (Germany). 1992. Abstracts, p. 131.

4. Rybaklna E.G., Fomlcheva E.E., Shanln S.N.. Kozlnets I.A. Stress. Immunocompetent Cells and Phytoprotectors.//In: 2nd International Congress ISNIM, Paestum (Salerno), Italy. Abstracts, p.152. September 12-17. 1993.

5. Shanln S.N. The role of Interleukln 1 and glucocorticoid hormones In the realization of stress-protectlv effects of phytop-reparatlons.// The Congress on Immunoneuroendocrlne Interactions In Autoimmune and Infections Diseases. Rio De Janeiro. Abstracts, p.71. April 24-28, 1994.

6. Rybaklna E. G., Fomlcheva E. E., Shanln S. N., Kozlnets I. A. Interleukln 1 and glucocorticoid hormones relationships In stress reaction.// In: Congress on Immunoneuroendocrlne Interaction In Autoimmune and Infections Diseases, Rio De Janeiro. Abstracts, p.59. April 24-28, 1994.

7. Shanln S.N., Rybaklna E.G.., Fomlcheva E.E., Kozlnets I. A. Possible mechanisms of lmmunoprotectlve effects of phytopreparatl-ons under stressful conditions. // Int. J. of Immunorehabllltatl-on. 1994, N1 Supplement, p. 315.

8. Komeva E.A., Kokryakov V.N.. Rybaklna E.G.. Fomlcheva E.E.-, Shamova O.V.. Shanln S.N. Interleukln 1 and deienslns in the realization of stress and stresslnduced lmmunodlsorders.// In: First World Congress on Stress. Bethesda, Maryland, USA. Program and Abstracts, p.56. Oct.4-7. 1994.

9. Rybaklna E.G., Fomlcheva E.E.. Kozlnets I.A.. Shanln S.N., Plvanovlch I.Yu. Interleukln 1 and glucocorticoid hortnones interactions In mobilization of host defence reactions under stressful conditions. In: Second Baltic Sea Conference on Psychosomatic medicine. June 11-14. 1995, Ronneby, Sweden. Abstr.G. 9.

10. Shanln S.N., Kozlnets I.A., Rybaklna E.G. The role of Interleukln 1 and Lymphocyte-activating factors in the mechanisms of stress- protective action of certain phytopreparations. // In: Second Baltic Sea Conference on Psychosomatic medicine. June 11-14, 1995. Ronneby, Sweden. Abstr.G.5.

11. Korneva E. A..' Kokryakov V.N.. Rybaklna E.G.. Fomlcheva E.E.. Shamova O.V., Shanln S.N. Stress-induced disfunction of the Immune system and their rehabilitation. // Int. J. of Immunoreha-

billtation. 1994. HI Supplement, p.181.

12. Orlov D.S., Shamova O.V., Lesnlkova M.P.. Shanin'S.N.. KokryaKov V.H.. Rybaklna E.G. Stress-protective effects of Inter-leukln 1 beta and defenslns.// Cytokine. 1994, v.6. N5. p.A-135,

13. Rybaklna E.G.. ShanlnS.N., Fomlcheva E.E.. Kozlnets I.A. The role of Interleukln 1 In stress reaction and the action of phytopreparations. // Canadian J. Physiology and Pharmacology.

1994. Supplement 1. v.72, p. 262.

14. Shanin S.N.. Kozlnets I.A.. Rybaklna E.G. Immunoprotectl-ve effects of certain phytopreparations under extremal conditions.// In: The 1995 International Co-Conference on Environmental Pollution.and Neurolmnuno Interactions and Environment. 17-24 July

1995, St. Petersburg. Russia. 1995. P. 171.

' .15. Rybakina E.G.. Fomlcheva E.E.. Kozlnets I.A.. Shanin S.N.. Orlov D.S.. Pivanovlch i.Ytr. The physiological role of ln-terleukln-1 in stress reactions.// In: .The 1995 International Co-CJnference on Environmental Pollution and Neurolmmuno Interactions and Environment. 17-24 July 1995. St. Petersburg. Russia. 1995. P. 164.

16. ШаНин C.H.,4 Козинец И.А.. Фомичева E.E.. Рыбакина Е.Г. Влияние некоторых фитопрепаратов На продукцию лимфоцитактивирующе-го фактора при ротационном стрессе у Мышей // Билл.эксперим.биолог. И Мед. 1996. N2. С. 135-138.

17. Шанин С.Н. К ёопросу о механизмах адаптационного действия комплексных природных соединений - фитопрепаратов. // В кн.: "Концепции развития Санкт-Петербурга на ближайший И отдаленный периоды с расстановкой приорететов, основанных на общественном согласии". СПб.. 1996 г. С. 40-41.

Пл. Bnuulfittifit. Zyj. т- 10. •¿oJ/i-SCi.