Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Исследование противовоспалительных свойств мексидола при экспериментальном остром и хроническом воспалении

На правах рукописи

□ОЗОВ7Б29

Мосесова Нино Сергеевна

Исследование противовоспалительных свойств мексидола при экспериментальном остром и хроническом воспалении

14.00.25—Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Купавна - 2006

003067629

Работа выполнена в ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Ковалева Виолетта Леонидовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Утешев Даниил Борисович доктор медицинских наук, профессор Козлов Иван Генрихович

Ведущая организация: Московский государственный медицинский стоматологический университет им. Н.А.Семашко

Защита состоится 2007 _г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (142450, Московская область, пос. Старая Купавна, ул. Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке и на сайте ВНЦ БАВ

Автореферат разослан ^в&С^ЯД' 2006 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Корольченко Л. В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность исследования. Воспаление, как известно, является сложнейшей многокомпонентной реакций организма на повреждение и относится к типовым патологическим процессам, описывающим общие закономерности ряда заболеваний различной этиологии и локализации: артриты, пневмонии, гепатиты, перитониты и др. Современная концепция воспаления рассматривает этот патофизиологический феномен с позиции решающего участия в нем окислительного стресса (Сгаро Л). 2003). К настоящему времени накоплено множество клинических и экспериментальных данных, доказывающих решающую роль активированных метаболитов кислорода (АМК) и других радикалов в патогенезе воспаления, в возникновении и развитии всех его основных стадий (Н.К Зенков, и др, 2001)

В частности, установлено, что усиление процессов перекисного окисления липидов является универсальным ответом клеток и тканей на начальной стадии воспаления. Существует точка зрения, что процессы ПОЛ являются обязательным компонентом и первичным медиатором стресс-реакции по Селье. В эволюционном плане процессы ПОЛ, по-видимому, предшествовали эйкозаноидной регуляции (Н.К Зенков, В.З.Ланкин, Е.Б.Меныцикова, 2001), и поэтому продукты радикального окисления липидов мембран могут индуцировать нейрогуморальные изменения на уровне целого организма.

Показана роль АМК в процессах фагоцитоза, в активации макрофагов и гранулоцитов, в реализации их микробицидного, антипролиферативного действия, в высвобождении этими клетками провоспалительных и антивоспалительных цитокинов, в процессах апоптоза и пролиферации, происходящих в воспалительном очаге (Н.К Зенков, В.З.Ланкин, Е.Б.Меныцикова, 2001)

В связи с этим представляет большой интерес исследование противовоспалительных свойств лекарственных препаратов из группы антиоксидантов. Это тем более оправдано, если принять во внимание весь спектр побочных эффектов, который является неотъемлемой частью фармакологической активности нестероидных противовоспалительных препаратов. Область клинического использования НПВС остается по-прежнему весьма обширной и включает самые разнообразные заболевания - не только опорно-двигательного аппарата (в первую очередь, ревматоидный артрит), но и острые респираторные вирусные инфекции (О.И.Карпов, 2005) острое катаральное воспаление среднего уха (А.В.Божко, 2005), воспалительные офтальмологические и стоматологические

заболевания, спортивные травмы, осложнения химиотерапии злокачественных новообразований (Насонов, 2005) и даже такую тяжелую патологию респираторной системы, как муковисцидоз (А.Л.Пухальский, А.А.Шабалова и др., 2001).

В центре внимания российских фармакологов и клиницистов в течение ряда лет находится отечественный антиоксидант мексидол, обладающий широким спектром активности и оригинальными механизмами действия (Воронина Т.А. 1998, 2001; К.МДюмаев, Л.Д.Смирнов и соавт. 1995). Несмотря на интенсивное изучение различных фармакологических свойств этого препарата, его противовоспалительное действие исследовано недостаточно.

Цель и задачи исследования

Целью нашей работы явилось экспериментальное изучение влияния мексидола на острое и хроническое воспаление.

Для выполнения указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать влияние мексидола при разных способах и режимах ведения на острое экссудативное воспаление, используя для этого модели каррагенин-, гистамин-индуцированные отеки лап у крыс, и отек, вызываемый адъювантом Фрейнда.

2. Исследовать возможность влияния мексидола при парентеральном и внутрижелудочном введении на слизистую желудочно-кишечного тракта

3. Исследовать влияние мексидола на альтеративное воспаление у крыс, используя модель ватной гранулемы.

4. Изучить анальгетические свойства мексидола на моделях ноцицепции с периферическим и центральным механизмом действия.

5. Исследовать влияние мексидола на хроническое воспаление с помощью модели адъювантного артрита у крыс.

6. Оценить антистрессорное, анксиолитическое действие мексидола в условиях модели адъювантного артрита.

Научная новизна и теоретическая ценность. В представленной работе впервые продемонстрирована противовоспалительная активность мексидола как на моделях острого, так и хронического воспаления. Показано, что мексидол особенно эффективен при курсовом парентеральном и внутрижелудочном введении в отношении острого экссудативного воспаления, вызываемого каррагенином и ПАФ.

Впервые установлено, что мексидол способен в умеренной степени подавлять не только экссудативную, но и альтеративную фазу воспаления. Нами впервые установлено, что мексидол при профилактически- лечебном режиме введения ингибирует развитие адъювантного артрита у крыс, причем мексидол способен потенцировать противовоспалительное действие индометацина.

Установлено, что в отличие от НПВП мексидол в больших дозах не повреждает слизистую желудка и 12-перстной кишки. Показано, что мексидол оказывает анальгетическое действие как в тесте «горячая пластинка», так и в тесте «уксусные корчи», что свидетельствует о простагландиновом и центральном механизмах антиноцицептивного действия. При стрессе ожидания боли в условиях моделирования артрита мексидол проявляет антистрессорное и анксиолитическое действие.

Научно-практическая значимость работы. Проведенные исследования выявили у оригинального отечественного антиоксиданта мексидол противовоспалительные и

анальгезирующие свойства на моделях острого и хронического воспаления. Сочетание этих свойств у мексидола и его способность потенцировать действие НПВП дает основание рассматривать возможность использования мексидола (в составе комплексной терапии) в новой для этого препарата области клинической медицины - в артрологии. Кроме того, полученные данные позволяют рассчитывать на эффективность мексидола в комплексной терапии различных заболеваний воспалительной природы - в офтальмологии, отолярингологии, гинекологии и др.

Апробация работы

Материалы диссертационной работы были представлены на III Всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» - Москва. - 2006.; Втором Международном Междисциплинарном Конгрессе «Нейронаука для медицины и психологии» - Судак. - Крым, - 2006г; III Международном конгрессе «Экология и дети». - 2006; 2-nd RUSSIAN- CHINESE INTERNATIONAL SCIENTIFIC CONFERENCE ON PHARMACOLOGY AND PHARMACY -CLINICAL PRACTICE -2006. - PERM. -25-27; докладывались и обсуждались на межлабораторных конференциях отдела фармакологии ВНЦ БАВ 2005-2006 г.

Публикация результатов исследования

По материалам исследования опубликовано 6 печатных работ. Основные положения, выносимые на защиту:

• Мексидол проявляет существенную противовоспалительную активность как при остром экссудативном, так и альтеративном воспалении.

• мексидол в условиях профилактически- лечебного режима введения ингибирует развитие адъювантного артрита у крыс.

• мексидол оказывает анальгетическое действие как в тесте «горячая пластинка», так и в тесте «уксусные корчи».

• При стрессе ожидания боли в условиях моделирования артрита мексидол проявляет антистрессорное и анксиолитическое действие.

Объем и структура работы.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы, излагающей методические аспекты исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы, изложена на ... страницах машинописи, иллюстрирована 12 рисунками и 30 таблицами. Библиографический указатель содержит 204 источника, из них 133 отечественных и 71 зарубежных.

Материалы и методы исследования

В экспериментах были использованы 430 аутбредные белые крысы и 140 крыс породы Вистар самцы массой 250 -350 г., 256 аутбредные белые мыший самцы массой 20 - 25 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария ВНЦ Б AB при 12-часовом режиме освещения и свободном доступе к воде и корму.

Все модели и методы, использованные в работе, были выполнены в соответствии с соответствующими Методическими указаниями по изучению фармакологических веществ (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, ФК РФ, Москва, 2005).

В работе были использованы следующие лекарственные препараты и вещества : мексидол - субстанция, индометацин -субстанция и таблетки (Берлин-Хеми); Кеторолак - таблетка 150 мг (Лек), Нимесулид - таблетки, Санофи (Sanofi - Synthelabo), Мелоксикам - (Берингер Ингельхайм);Вакцинный штамм БЦЖ-1, лиофилизированный в 1,5% растворе глутамината натрия (Предприятие по производству бакпрепаратов НИИЭМ им.

Н.Ф.Гамалеи); полный адъювант Фрейнда (Sigma); каррагенин (Sigma); гистамин гидрохлорид (Sigma).

Влияние мексидола на острое экссудативное воспаление изучали с помощью моделей отеков лапы крыс, индуцированных каррагенином [ Winter et al., 1962], полным адъювантом Фрейнда и гистамином [Ezeamuzie a. Umezurike, 1989]. Измерение объема правой и левой (интактной) лап проводили с помощью плетизмометра (Ugo Basile) через 4 ч после введения каррагенина, через 24 часа после введения ПАФ и через 30 минут после введения гистамина.

Влияние мексидола на альтеративное воспаление изучали, используя модель ватной гранулемы [Ucelay et al. 1991]. Мексидол вводили на протяжении 7 суток локально непосредственно в область гранулемы по 0,1 мл Хроническое воспаление голеностопных суставов у крыс Вистар моделировали по методу Pearson (1956) в нашей модификации с помощью комбинации живых микобактерий вакцинного штамма БЦЖ-1, лиофилизированных в 1,5% растворе глутамината натрия и полного адъюванта Фрейнда (Sigma) в соотношении 1:1. Ьля оценки эффективности препаратов применяли гистологические, морфометрические и цитологические методы.

Ульцерогенное действие препаратов оценивали при однократном или 4-кратном парентеральном или внутрижелудочном введении по площади поражения слизистой ЖКТ. Анальгезирующую активность препаратов оценивали в тесте «горячая пластина» у мышей [Woolfe G., McDonald A.D., 1944] и в тесте "уксусные корчи" у мышей и крыс [Koster R., Anderson M., de Beer E., 1959]. В первом случае регистрировали фоновые показатели и время первых проявлений болевой реакции (облизывание лап, подпрыгивание) и через 30, 60 и 120 мин после введения вещества. Вычисляли среднее латентное время порога болевой чувствительности (ПБЧ, сек) в каждой группе животных. Во втором случае анальгетическое действие препаратов оценивали по уменьшению числа корчей у животных (в % к контролю) в течение 15 мин после инъекции уксусной кислоты.

Эмоциональный стресс, связанный с ожиданием боли, вызывали у крыс с помощью метода конфликтной ситуации, основанного на столкновении питьевой мотивации и электроболевого раздражения [Vogel J.R., Beer D., Clody D.E., 1971;Молодавкин Г.М., Воронина T.A.,1995].). Стрессорное состояние крыс оценивали, регистрируя моторные, вегетативные и сердечно-сосудистые показатели.

Статистическую обработку данных проводили с использованием методов вариационной статистики, достоверность результатов оценивали с помощью ^критерия Стьюдента при 5% уровне значимости. Статистическая обработка данных осуществлялась с помощью программы 81а1§га£

Результаты собственных исследований и их обсуждение 1. Влияние мексидола на острое экссудативное воспаление

Поскольку экссудация является обязательной составной частью воспалительного процесса, то на 1 этапе работы нам представлялось важным выяснить, может ли антиоксидант мексидол влиять на острое экссудативное воспаление. С этой целью нами были выбраны традиционные модели острого воспаления - модели отеков, индуцируемых каррагенином, гистамином и ПАФ. Так как одним из основных недостатков применяемых в настоящее время противовоспалительных препаратов стероидного и нестероидного типа являются их побочные эффекты, проявляющиеся, в первую очередь, на уровне желудочно-кишечного тракта, то представлялось важным оценить противовоспалительную эффективность мексидола не только при парентеральном, но и внутрижелудочном введении.

Были применены различные схемы введения мексидола: 1. Внутримышечное или подкожное однократное введение (5, 20, 80 мг/кг) за 30 минут до каррагенина; 2. . Внутримышечное курсовое введение (в течение 4 суток в тех же дозах) за 30 минут до каррагенина; 3. Внутрижелудочное введение (10, 50 и 150 мг/кг) однократное за 1 час до введения каррагенина 4. Внутрижелудочное четырехкратное введение в течение 4 суток, последнее введение за 1 час до введения каррагенина. В качестве препаратов сравнения были использованы индометацин, пироксикам, кетопрофен, диклофенак (неселективные ингибиторы ЦОГ).

Таблица 1. Торможение мексидолом каррагенинового отека лапы

крыс при курсовом внутримышечном введении препарата

Группы Доза Объем лапы (М+ш) Прирос Торможение

животных мг/кг Прав.. Лев. т объема (%) воспаления (%)

Контроль (п=6) 1,84±0,09 0,82±0,0 4 124 0

Мексидол (п=8) 5 1,57±0,04 0,79+0,0 3 79,6* 20,4

Мексидол (п=8) 20 1,30±0,02 0,84±0,0 2 44* 56

Мексидол (п=8) 80 1,21 ±0,05 0,83±0,1 5 36,9* 63,1

Пироксикам (п=6) 20 1,19±0,03 0,83±0,1 4 32,2* 67,05

* - р<0,01 по отношению к контролю

Таблица 2. Торможение мексидолом каррагенинового отека лапы крыс при курсовом пероральном введении препарата

Группы Доза Объем лапы (М+т) Прирос Торможение

животных мг/кг Прав.. Лев. Т объема (%) воспаления (%)

Контроль (п=6) 1,88±0,06 0,98±0,0 4 92 0

Мексидол (п=7) 10 1,62+0,12 1,14±0,0 5 42*** 54

Мексидол (п=7) 50 1,39±0,03 1,05+0,0 4 32*** 65

Мексидол (п=8) 100 1,49±0,05 1,19+0,0 3 25*** 73

- р<0,01 по отношению к контролю

Мексидол при однократном парентеральном и

внутрижелудочном введении в отличие от индометацина и пироксикама не проявил существенного противовоспалительного действия. Однако курсовое внутримышечное введение мексидола в течение 4 дней оказывает статистически значимый эффект, значительно выраженный при использовании дозы препарата 80 мг/кг (табл. 1). Наиболее существенный эффект был получен при курсовом внутрижелудочном введении: торможение отека в дозе 100 мг/кг составил 73% (р< 0,01) (таблица 2). ЭД5о составил 67,5 мг/кг.

Задачей следующего раздела работы явилось исследование терапевтических эффектов комбинации мексидола и некоторых препаратов из группы НПВС на модели отека, индуцированного каррагенином. Были использованы широко применяющиеся в клинике препараты - кетопрофен, индометацин, диклофенак в средних терапевтических дозах, тормозящих данный вид отека. Результаты исследования показали, что мексидол потенцирует действие нестероидных противовоспалительных препаратов, поскольку эффект препаратов из группы НПВС проявлялся в дозе,

составляющей Ш от ЭД;и, на том же уровне, что и при самостоятельном использовании препарата (рис ]).

0 Кет о про фен 5 мт/кг □ мексидол 100 мг/кг ■ кетопрофен+мексидол

12 3 5

часы после введения препаратов

Рис. 1. Динамика торможения карраген и нового отека лапы к pi.it пол воздействием раздельного и комбинированного введения кетопрофена и мскскдода

В настоящее время хорошо известно, что в патогенезе экссудата вной фазы воспаления большую роль играют не только простагландины, но и лейкотриены. В связи с этим представляло интерес исследовать активность мекс идола на модели отека, индуцированною полным адъювантом Фрейнда, активирующего синтез лейкотриенов. Как и в предыдущем случае, мы применили 2 способа введения препарата - внутримышечные инъекции И вну грижелудОчное введение.

Таблица 3. Торможение мексидолом ПАФ-индуцирова много отека лапы крыс при курсовом пероральном введении препарата

Группы животных Доза мг/кг Объем лапы (М+ш) Прирос Прав. . ' Лев, | т ■ объема 1 ! (%) Торможение воспаления (%)

Контроль (п=6) 2,0±0.! 5 1, !±0,12 1 82 4 J

и

Мексидол (п=7) 10 1,62±0,12 1,14±0,0 5 42* 49

Мексидол (п=7) 50 1,39±0,03 1,05+0,0 4 32* 61

Мексидол (п=7) 100 1,30±0,03 1,03±0,0 4 31 62

* - различие с контролем статистически существенно (р<0,001)

Таблица 4. Раздельное и сочетанное действие мексидола и кетопрофена на развитие ПАФ-индуцированного отека лапы крыс при внутримышечном введении препарата

Группа Доза Объем лапы (М+ш) Прирос Торможение

животных мг/кг Прав.. Лев. т объема (%) воспаления (%)

Контроль (п=6) 1,37±0,03 0,76±0,0 24 88,2

Мексидол (п=7) 100 1,20±0,12 0,74+0,0 5 62,0** 30,5

Кетопрофен (п=7) 10 0,96±0,03 0,76±0,0 1 26** 71,5

Кетопроф +мексидол (п=7) 5 100 0,90±0,04 0,75±0,0 3 20** 77

Как видно из данных, представленных в таблицах 3 и 4, мексидол в диапазоне использованных доз при курсовом (в течение 4 дней) внутримышечном и пероральном введении вызывал отчетливое дозозависимое торможение ПАФ-индуцированного отека лапы крыс: в первом случае торможение отека составляло 30 -77%, во втором - 49 - 62% (ЭД50 = 59,6 мг/кг). Причем ингибирование экссудативого воспаления при парентеральном введении было более существенным, чем при пероральном введении. При сопоставлении средних терапевтических доз НПВП и мексидола обращает на себя внимание тот факт, что для достижения равных ингибирующих эффектов доза мексидола должна была быть выше на порядок дозы использованного референтного препарата (индометацина, кетопрофена, пироксикама).

На модели гистаминового отека мексидол проявил незначительный эффект.

Как и в случае отека, индуцированного каррагенином, совместное применение мексидола и кетопрофена в дозе в 2 раза

меньшей (5 мг/кг) вызывало такой же по степени выраженности эффект, какой был достигнут в дозе 10 мг/кг, что может быть расценено как потенцирование действия нестероидного противовоспалительного препарата (табл.4, рис 1).

Таким образом, мексидол уступал по среднеэффективной дозе препаратам из группы НПВП, но превосходил по широте терапевтического действия индометацин.

2. Исследование влияния действия мексидола и его комбинации с НПВС на слизистую желудка крыс Среди неблагоприятных эффектов, вызываемых НПВС, на первом месте, безусловно, стоит гастротоксическое действие, которое проявляется в возникновении или обострении уже существующей язвенной болезни желудка и кишечника. В связи с этим было важно выяснить, оказывает ли мексидол повреждающее действие на слизистую ЖКТ. Согласно полученным результатам, мексидол в широком диапазоне доз (50-400 мг/кг) как при однократном, так и курсовом введении не вызывал повреждения слизистой желудка у крыс. Индометацин вызывал повреждение слизистой в виде гиперемии, эрозий и язв. Это эффект был дозозависим. С увеличением дозы до 50 мг/кг количество дефектов слизистой достигало 260 мм2 .

Последние данные литературы показывают, что в механизме ульцерогенного действия НПВП определенную роль играет и повышение интенсивности перекисного окисления липидов. [1л£итзку ег а1, 1993; Ьаис1аппо е1 а1., 2001]. Получены доказательства в отношении возможности снижения повреждающего действия НПВП с помощью антиоксидантов [Бондарев А.И и Зарудий Ф.С.,1994]. Наши результаты подтверждают эту точку зрения, так как мексидол, применяемый вместе с индометацином, при обоих путях введения значимо уменьшал количество дефектов слизистой желудка крыс (рис.2).

0 мексидол 100

мг/кг Ш индометацин 5 мг/кг

■ индометацин 10мг/кг

■ индометацин 20 мг/кг

□ инд+мексидол

Рис.2. Площадь язвенных поражений слизистой желудка крыс при подкожном сведении индометацина (5, ! 0 и 20 мг/кг), мексидола (! 00 мг/кг) и индометацина 20мг/кг+мекевдола 100 мг/кг

3. Изучение влияния мексидол а на альтеративное воспаление

Как уже упоминалось выше, фаза альтерация определяется преимущественно состоянием общего и местного иммунитета, степенью активности окислительных факторов (прежде всего, активностью индуцибельной МО-синтазы) и антиоксидантной системы. В связи с описанными механизмами представлялось целесообразным исследовать действие мексидола на альтеративное воспаление. В качестве модели использовали «ватную гранулему» (стерильный ватный шарик), которую вшивали подкожно в область медиальной части спины крысы. Субстанцию мексидола по 0,1 мл вводили локально а дозах 1, 5, 10 мг/кг в область гранулемы ежедневно в течение 7 дней.

Таблица 5. Торможение имплантированной ватной гранулемы у

крыс при локальном воздействии мексидола

Группы Доза мексидола Масса ватной Торможение

животных мг/кг гранулемы развития

(11=6) (мг/100г массы гранулемы (%

крысы) М±ш к контролю)

1. Контроль 47,09 ±4,97

(физ.р-р)

2 . Мексидол 1 36,12 ± 2,27* 23

3, Мексидол 5 32,79 ± 2,72* 30

4, Мексидол 10 34,89 ± 2,4* 26

* - различие с контролем статистически существенно (р<0,05)

Данные, представленные в таблице 5, показывают, что мексидол умеренно тормозил при локальном воздействии воспалительную реакцию подкожной клетчатки, вызванную ватной гранулемой. Следовательно, препарат способен ингибировать не только экссудативное, но и альтеративное воспаление.

Исследование влияния мексидола на хроническое воспаление

Для исследования влияния мексидола на хроническое воспаление была использована классическая модель адъювантного артрита у крыс. Установлено, что в условиях этой модели происходит системное увеличение простагландинов, в частности, увеличение продукции PGE 2 в воспаленных тканях различных суставов крысы как следствие гиперпродукции СОХ-2 mRNA и белка в конечностях крыс, в которые инъецировали ПАФ [Melli М., 1998; Stichtenoth et al., 1995; Anderson et al., 1996].

Лечение крыс проводили в лечебно-профилактическом режиме, то есть начинали лечение сразу после введения адъюванта. Мексидол применяли в дозах, в которых он был максимально эффективен при лечении острых отеков и альгезии. В качестве препарата сравнения использовали стандартные препараты-индометацин и метотрексат.

Таблица 6. Динамика воспалительной реакции левой интактной

лапы крыс в процессе лечения мексидолом и индометацином

Сутки после инъекции БЦЖ

N=10 0 7 14 21 30

Контроль Левая лапа 0,87±0,016 0,9 ±0,011 1,21±0,06 1,69±0,053 2.27 ±0,03

Индометац ин 0,89±0,02 0,91 ±0,08 1.1±0.05* 1.19+0,03* * 1,20+0,022 **

Мексидол 200мг/кг 0,91±0,03 1,12±0,05 1,24±0,04 1.35±0,05* * 1.46±0,07* *

Мексидол 100мг/кг 0,88±0,03 1.10+0,014 1,28±0,3 1.33±0,2** 1,35±0,06* *

** - р<0,001 к Контролю

контроль(модель) индометацин —А— мексидол400мг/кг_—мексидол 200 мг/кг

Рис 3 Динамика развития отека правой лапы крыс с индуцированным адъювантным артритом после лечения мексидолом 400 и 200 мг/кг в/м и индометацином 10 мг/кг р о.

Как показано в таблице 6 и на рис.3, внутримышечное введение мексидола в дозах 200 мг/кг и 100 мг/кг (через сутки) в течение 21 дня оказывает значительное подавление воспалительной реакции голеностопных суставов крыс, которая проявлялась гиперемией, резко выраженной отечностью, повышением температуры в суставе и у некоторых крыс - значительной болезненностью (характерная поза). Мексидол начинали вводить через час после индукции артрита. В последующий период наблюдения (14-30 сутки) под действием препарата происходило заметное улучшение патологически измененных голеностопных суставов. Противовоспалительный эффект мексидола был выявлен в обеих использованных дозах, но наиболее отчетливо он выражен при использовании дозы 200 мг/кг.: воспалительная реакция сустава уменьшалась более чем на 40-45%. Индометацин вызывал более значительный ингибирующий эффект, чем мексидол: заметное уменьшение отечности правой конечности наблюдалось уже к 7-14 суткам от начала эксперимента и максимально проявилось к 28 суткам.

Терапевтическое действие препаратов подтверждалось и динамикой уменьшения отека левой интактной конечности крыс. Данные, представленные в таблице 6 и рис.3, свидетельствуют о положительной динамике воспаления конечности (как результат вторичной реакции на адъювант) как в группах крыс, получавших мексидол, так и крыс, леченых индометацином. Кроме того, доказательством терапевтического действия препаратов является динамика массы крыс: здоровые крысы за месяц наблюдения существенно прибавили в весе: их прибавка составляла 33 ± 2,53 %. Крысы, леченые мексидолом, также имели существенную прибавку в весе 24 ± 3,6 (1 гр) и 25± 2.2% (2 гр). Крысы, получавшие индометацин, отставали в весе от групп, леченых мексидолом. Практически отсутствовала прибавка в весе у нелеченых крыс с артритом. Наши данные полностью согласуются с наблюдениями других исследователей, отметивших аналогичный факт в связи с применением других препаратов из группы НПВП.

Наиболее надежным критерием терапевтического действия препаратов является морфологическая оценка изменений голеностопных суставов крыс. В контрольной группе исследование выявило морфологическую картину хронического синовиита с выраженной активностью воспалительного процесса и значительными дистрофическими изменениями хряща. В группах крыс, получавших мексидол в обеих дозах, морфологические изменения по характеру и выраженности на качественном уровне не различались. Морфологическая картина подтверждает хронический синовиит с незначительно выраженной активностью

воспалительного процесса и незначительными дистрофическими изменениями хряща. Минимально выраженная активность воспалительного процесса была выявлена у крыс, леченых индометацином.

Нами исследовано также влияние мексидола на второй важный системный показатель артрита - общее количество клеток периферической крови и количество гранулоцитов. Известно, что происходит увеличение этих показателей при артрите, которое интерпретируется как свидетельство системности воспалительного процесса [ЖГее е1 а1, 1989]. У нелеченых крыс с артритом значительно увеличивались и общее количество клеток крови и количество гранулоцитов. Мексидол в обеих испытанных дозах мало влиял на указанные показатели. Индометацин в небольшой степени, но статистически достоверно снижал эти показатели.

Таким образом, изучение в условиях моделирования адъювантного артрита у крыс показало эффективность мексидола в

отношении воспалительных изменений голеностопных суставов, индуцированных введением адъюванта.

Исследование анапъгетических эффектов мексидола

Анальгетическая активность мексидола изучена недостаточно, поэтому задачей настоящего раздела работы явилась оценка обезболивающего действия мексидола с помощью основных моделей анальгезии - теста «горячей пластинки» и «уксусных корчей».

Исследование латентного периода болевой чувствительности у мышей, которым внутримышечно вводили мексидол в дозе 100 мг/кг, показало, что антиоксидант существенно удлиняет латентный период порога болевой чувствительности в течение 30-60 минут. При более длительном наблюдении в течение 2 часов латентный период укорачивается, что свидетельствует о снижении анальгетического эффекта. В отличие от мексидола анальгин сохранял свое антиноцицептивное действие в течение всего периода наблюдения. Тот же результат был выявлен при сравнении продолжительности анальгетического эффекта у мексидола и индометацина в тесте горячая пластина: у индометацина обезболивающее действие сохранялось в течение 90 минут, тогда как у мексидола этот эффект снижался после 60 минут.

Показано, что эффект мексидола на болевую чувствительность крыс в значительной степени зависел от дозы и способа введения препарата. Так, в дозе 100 мг/кг мексидол незначительно повышал порог болевой чувствительности животных. Однако при увеличении вводимой дозы препарата до 200 мг/кг наблюдалось статистически достоверное повышение порога болевой чувствительности на 35% (Р<0,05). При повышении дозы препарата до 400 мг/кг (сопоставимой с дозой препарата сравнения -Пенталгина) анальгетический эффект усиливался, и порог болевой чувствительности составлял в среднем 13,7 сек., тогда как в контрольной группе латентный период первой реакции на болевое раздражение составлял 8,3 секунды. Таким образом, под влиянием мексидола в этой дозе порог болевой чувствительности увеличивался на 65%. При внутримышечном введении в дозе 400 мг/кг мексидол не уступает анальгину в аналогичной дозе, вводимому также внутримышечно, который, как и мексидол, значительно (на 55%) и статистически достоверно повышает пороги болевой чувствительности. Несколько большую анальгетическую активность, чем мексидол, проявил в данном тесте пенталгин,

который в дозе 400 мг/кг внутрь повышал порог болевой чувствительности на 78%.

Исследование анальгетического действия комбинации мексидола и анальгина в дозах равных 50 мг/кг, показало, что она более эффективна, чем один мексидол в дозе 100 мг/кг, однако через 2 часа анальгетический эффект препаратов практически не определялся, что свидетельствует о доминировании действия анальгина в указанной комбинации.

Изучение анальгетической активности мексидола в тесте «уксусные корчи» позволило установить, что мексидол при внутримышечном введении в зависимости от использованной дозы существенно снижает количество корчей, вызванных уксусной кислотой. При использовании самой низкой дозы этот эффект практически не был выражен, однако с увеличением дозы до 50 и 100 мг/кг количество корчей значимо снижалось и составило 75 и 50%, соответственно, от контрольных значений, то есть анальгетический эффект составлял 25 и 50%. В качестве препаратов сравнения были использованы индометацин и диклофенак, анальгетическая активность которых в тесте уксусные корчи хорошо изучена. Полученные данные в отношении указанных препаратов вполне соответствуют данным литературы: анальгетический эффект индометацина составил 45%, а диклофенака - 50%. Таким образом, мексидол при парентеральным введении в дозе 100 мг/кг проявляет эффект на уровне низких доз традиционных противовоспалительных препаратов.

Таблица 7. Анальгетическая активность мексидола и НПВС диклофенака тесте «уксусные корчи» при внутрижелудочном введении__

Группы животных N= 12 Количество корчей за 15 мин (М ± ш)

Абс. значения Анальгетический эффект %

Контроль 35,2±2,5

Мексидол 10 мг/кг 29,1±1,5 18%

Мексидол 100 мг/кг 25,1±1,7* 28,7 %

Мексидол 200 мг/кг 16,4±1,5** 43.4%

Индометацин 10 мг/кг 15,2±0,95** 56,6%

Диклофенак 8 мг/кг 14, 51±0,84** 58,6 %

Индометацин 5 мг/кг+мексидол 100 мг/кг 17,7±1,8* 49,7 %

Внутрижелудочное введение мексидола также уменьшало количество корчей, вызванных уксусной кислотой. Этот эффект зависел от дозы: мало проявлялся в низкой дозе препарата, равной 10 мг/кг, но при использовании дозы 200 мг/кг практически не уступал индометацину и диклофенаку, составляя 43,4%, тогда как анальгетический эффект индометацина был равен 57%, диклофенака -58,6% . ЭД50 составил для мексидола 71 мг/кг. Следует отметить, что комбинированный эффект мексидола в дозе 100 мг/кг и индометацина в 2 раза меньшей дозе по сравнению со стандартной не уступал по своей выраженности эффекту раздельного применения препаратов, что свидетельствует о потенцировании антипростагландинового действия индометацина.

Таким образом, мексидол оказывает существенное обезболивающее действие, скорее всего, через периферические нерецепторные механизмы метаболического типа (угнетение синтеза простагландинов, простациклинов, тромбоксана и др.). С другой стороны, известно, что свободнорадикальные механизмы играют важную роль в генезе боли. В этой точки зрения вторым по значимости механизмом антиноцицептивного эффекта мексидола может быть модулирующее действие на свойства клеточных мембран и микроциркуляцию. Наконец, мексидол может усиливать эффекты многих веществ, оказывающих центральное действие

(ненаркотические анальгетики). Важно то, что мексидол усиливает действие ненаркотических анальгетиков и анальгезирующее действие нестероидных противовоспалительных препаратов. Возможно, это явится предпосылкой разработки новых комбинированных лекарственных форм ненаркотических анальгетиков.

Изучение влияния мексидола на на эмоциональный стресс, связанный с ожиданием болевого воздействия у крыс с адъювантным артритом

В связи с тем, что воспалительные заболевания опорно-двигательного аппарата сопровождаются сильной болью, вызывающей развитие неврозов и депрессивных состояний, представляло интерес исследовать влияние мексидола на эмоциональную деятельность крыс с индуцированным адъювантным артритом.

В данном разделе работы мы использовали методику конфликтной ситуации (вариант Vogel),, которая создавалась путем столкновения двух значимых для животного мотиваций - сильного чувства жажды и невозможностью его удовлетворения. Мексидол в зависимости от дозы (50, 100, 150, 200 мг/кг) статистически достоверно увеличивал основной показатель поведения в конфликте - число наказуемых взятий воды соответственно в 1,2; 2,1; 3,1; 3,4; 3,5 раз по сравнению с контролем. Таким образом, отмечалась прямая зависимость эффекта препарата от величины используемой дозы: с повышением дозы мексидола увеличивался и его эффект. Наряду с повышением числа наказуемых взятий воды, что свидетельствует об уменьшении тревоги и страха, под влиянием мексидола отмечалось уменьшение другого показателя невротичности - числа подходов к поилке без взятия воды. Традиционные транквилизаторы - феназепам (1 и 2 мг/кг) и седуксен (2 и 5 мг/кг) также обладают выраженным антистрессорным эффектом в условиях методики конфликтной ситуации. Однако в отличие от них мексидол не оказывал седативного эффекта на крыс.

Эмоциональный стресс в конфликтной ситуации вызывает у контрольных животных тахикардию. Внутримышечное введение мексидола в дозе 100 мг/кг, седуксена в дозе 2 мг/кг или феназепама в дозе 1 мг/кг способствовало возвращению этих показателей к нормальному уровню. Существенно и статистически достоверно под влиянием мексидола снижалось число дефекаций и уринаций, что свидетельствует о нормализующем влиянии препарата на вегетативные показатели проявления стресса. Важно

отметить, что у мексидола отсутствуют побочные эффекты, характерные для седуксена и фенозепама, что обеспечивает преимущество мексидола в этом отношении перед традиционными транквилизаторами.

Итак, в настоящем экспериментальном исследовании выявлено противовоспалительное и анальгетическое действие мексидола в сочетании с антистрессорными, анксиолитическими свойствами Важно подчеркнуть, что хотя мексидол уступает препаратам сравнения по величине среднеэффективной дозы, он обладает одним неоспоримым преимуществом - отсутствием побочных эффектов, характерных для НПВН, с одной стороны, и традиционных ненаркотических анальгетиков и транквилизаторов , с другой стороны. Выявление указанных фармакологических свойств мексидола, а также данные литературы, свидетельствующие о возможности препарата влиять на ключевые звенья патогенеза стрессорных состояний, обосновывают целесообразность использования мексидола в комплексной терапии в качестве лечебного и профилактического средства при воспалительных заболеваниях различного генеза, в первую очередь, опорно-двигательного аппарата (артритах, артрозах, ревматоидном артрите и др.). Опираясь на новые данные в отношении молекулярных механизмов развития окислительного стресса и редокс- регуляции, можно предположить, что одним из решающих механизмов противовоспалительного действия мексидола может быть способность препарата подавлять воспаление через ингибицию сгресс-киназных факторов и редокс-чувствительных факторов транскрипции (нуклеарный фактор NF-кВ и активатор протеина-1), увеличивающих, как известно, экспрессию провоспалительных медиаторов [Rahman and Adcock, 2006].

ВЫВОДЫ

1. Впервые показано, что отечественный антиоксидант мексидол проявляет существенную противовоспалительную активность как при парентеральном, так и внутрижелудочном введении в условиях моделирования острого экссудативного воспаления. Хотя мексидол уступает препаратам сравнения по величине среднеэффективной дозы, он превосходит их по широте терапевтического действия.

2. Установлено, что мексидол при локальном воздействии виде подкожных иньекций в диапазоне доз 1-10 мг/кг ингибирует альтеративное воспаление.

3. Показано, что мексидол потенцирует противовоспалительное действие препаратов из группы НПВП (индометацина и кетопрофена и др) и в отличие от них даже в больших дозах (400 мг/кг) не вызывает повреждения слизистой желудочно-кишечного тракта у крыс.

4. Мексидол проявляет анальгетическую активность как в тесте горячая пластина», так и в тесте уксусные корчи. Комбинация мексидола с НПВН в дозе 100 мг/кг и индометацина в 2 раза меньшей дозе по сравнению со стандартной не уступает по своей выраженности эффекту раздельного применения препаратов, что свидетельствует о потенцировании антипростагландинового действия индометацина.

5. Мексидол при курсовом внутрижелудочном введении в дозах 100 и 200 мг/кг оказывает существенное ингибирующее действие на модели адъювантного артрита у крыс, что является доказательством его эффективности в отношении хронического воспаления суставов.

6. В условиях моделирования хронического артрита у крыс мексидол проявляет, кроме противовоспалительного, сочетанное анальгетическое, анксиолитическое и стресс-протектороное действие, что является дополнительным позитивным качеством препарата.

7. Проведенные исследования позволяют расценивать мексидол как потенциальное лекарственное средство для комплексной терапии артритов, остеоартрозов и другой патологии воспалительного генеза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Экспериментальное исследование противовоспалительных свойств Мексидола (Н.С. Мосесова., соавт.:В.Л. Ковалева, Л.И. Ларенцова ) // Сборник трудов III Всероссийской научно-практической конференции «Образование, наука и практика в стоматологии» - Москва. - 2006,- С. 108-110.

2. Мексидол как потенциальное противовоспалительное средство (Н.С.Мосесова, соавт. В.Л.Ковалева, И.А.Крылов, Л.Д.Смирнов)// Экология - 2006. - № 12 - Приложение 4/2- С. 138-141.

3. Стресспротекторная и противовоспалительная эффективность оригинального отечественного препарата мексидол в эксперименте (Н.С. Мосесова, соавт. В.Л Ковалева, Л.И Ларенцова, Л.Д.Смирнов.) Сборник трудов. Второй Международный Междисциплинарный Конгресс «Нейронаука для медицины и психологии» - Судак. - Крым - Украина-2006.-С.106-107.

4. Влияние оригинальных производных азометинового ряда, пиридина и тиазола на острое и хроническое воспаление (Н.С. Мосесова, соавт.: В. П. Галенко-Ярошевский, В.Л. Ковалева, З.У.Садикова)//Медико-экологические и социально-экономические проблемы. Пути их решения. Сборник материалов III международного постоянно действующего конгресса «Экология и дети». - 2006. - Анапа. - С. 180 - 181.

5. Сравнительное изучение противовоспалительной и анальгетической активности новых производных 2-аминотиазолов и тиадиазолов (Н .С. Мосесова, соавт.:, В. П. Галенко-Ярошевский, В.Л. Ковалева, З.У. Садикова С.Я Скачилова, Л.Д. Смирнов)//Медико-экологические и социально-экономические проблемы. Пути их решения. Сборник материалов III международного постоянно действующего конгресса «Экология и дети». - 2006. - Анапа. -С.182- 183.

6. Effects of the multifunction influence domestic antioxidant meksidol and nonsteroidal anti-inflammatory drugs on amodelof the acute inflammation. (N.S. Mosesova, V.L.Kovaleva, L.D. Smirnov, L.I.Larenzova)//2-nd RUSSIAN- CHINESE INTERNATIONAL SCIENTIFIC CONFERENCE ON PHARMACOLOGY AND PHARMACY - CLINICAL PRACTICE -2006. - PERM -P. 119-120.

Заказ № 635. Объем 1п л. Тираж ЮОэкз. Отпечатано в ООО «Петроруш» г.Москва,ул.Палиха 2а.тел.250-92-06 www.postator.ru

Воашленме, как кякстпо, является сложнейикй многокомпонентной реакций оргатпчп на повреждение н относится к типовым патологическим процессам, описывающим общие МПЮМртОСП ряда «болсваииЙ различной ЭПЮЛОГМН Й локализации- лртрагты, пневмонии, гашиш» ПфЖННшт н г д. Ctflpeuenitu концепция воспалении россмотрнвост îtot паггофн-июлогичсскнП феномен с позиции решающего участка в »см окислительного стресса (Старо J.P 2003). К настоящему времени накоплено множество клинически* и экспериментальных данных, доказывающих решающую роль актнвирейншных метаболию» кислорода н других радикалов ■ патогенезе воспаления, в no"HtHk3wiu.*i util n ртнгщи веек ею основных стадий (HJÍ Зе»скоя, В1 Лднкинч С Б МвШЩМКОД 200J, Rahnwrta Adcocfc, 2006)

В частности, усганивлеио. что усиление процессов Перскпсного окисления лнпндов является универсальным ответом клеток и тканей на начальной стадии воспаления- Существует тока зрения. что процессы ПОЛ явчшютс* о&патедьнмм компонентом [Бобырев В H 1989) к первичным медиатором çtpccc-реакинн по Сел« IGapaûoft В А., Брсхман ИИ и лр 1983[ В мюлкшионном плане процессы ПОЛ. по-видимому. предшествовали зйкозанокдной регуляции (Мстшнком ЕБ-, Зет» Н К„ 19WJ, я лютому лродухта радикального окисления линидоп «ембраи могут индуцировать иейрогумора. i ьиые изменения на уровне целого организма Показана роли Л M К в процессах фагоцитоза, и активации макрофаг™ и траиупоцитов, в решншщии и* иикробнцидного, антноролифератмвного действия. ивысвобождении этими клетками протюспалцтельнм* и}ршнюсиалнтсльныч пито: июв, о процессах анощсми н прыиф^АШ, прожгхо&мднх 41 восяалнтсдыюы очаге ГНК Scnkps, В ЗЛвипт. ЕЯМеншикот. 2001)В связи с мин представляет большой интерес исследование противовоспалительных cuoiitm лекарственных препаратов из группы а1гги0ксил!1»то-в Это км боли* оирацдаио, если принять но вникание весь спектр побочных тффепов. который является неотъемлемой частью фармакологической активности иестсроидных противовоспалительных препаратов. Область клиническою использовали* НПВС МТК'Сл да-преж)иму псеьма обширной и включает самые ргеигообразнйе заболевания - не только о*горно» двигакльиото аппарата (в первую очередь, ревматоидный артрит)» но и острые респираторные вирусные инфекции (О.И.Карпов, 2005) острое кптирпдыюе воспаление среднего уха (Л ВЬожко. 2005), воспалительные офтальмологические и стоматологические заболевания, спортивные травмы, осложнения Химиотерапии злокачественных новообразований (Насонов, 2005) н даже такую тяжелую питмопво респираторной системы, клх муношкикда (АЛ.ПухалккнЛ, Л.Л.иЬбл.?вл нлр„ 200)),В центре внимания российских фармакологов и клиницистов в течение ряда л« находится отечествен imi) аитиоксидцнт ысксидал, обладающий широким спектром активности и оригинальными МепНняпМИ действия (Воронина Т А 1998. 2001; К М Дюмасв н соавт, 1995), Несмотря но интенсивное изучение сто CWflCT« и рпиых направлениях, противовоспалительное действие препарата мало ИШЦЮМЮ.

Цель к» манй [»Хоти мылось экспериментальное «учение влияния мексидола на остро■ и хроническое eoefnuremte.

Дм выполнении укатанной цели били постаилсны следующие задачи;I Исследовать влияние метсидола при ратных способах и режимах леденил ли острое экссудатнвное воспаление, ннюлцул дм йог» модели мррвпчм»., гнетл.чин-иилуиирстилиьк отеки ЛИН у крыс, и отек. ВЬЛЫВасМЫЙ адъкжнгтом Фрейнлз,2. Исследовать цо1можность алии нм мекендола при парентеральном и цнутрижсяудочиом введении на слизистую желудка « 12-нерстной кишки3. Исследовать влияние мсксилола ил альтсротивнос воспаление у крыс, используя модель ватной гранулемы,4 Мчучип, аиалъгети11,ские свойства мекендолл на моде,ms иоиииепцни с периферическим и иентрадьным чехаиитмом действия5 Исследовать влияние мсксилола на хроническое йюепп-чдп» с помои»*» модели JtKJOiMiffNora артрите у крыс,6. Оцстггь антистрессорное, анксиол1ггичсекое действие ыскеидола в условиях модели лдыовантного артритаНаучная новизна И тспр» тчгскли ценность. В представленной районе впервые продемонстрирован» противовоспалительная активность мсксилола как на моделях острого, так и хронического воспаления Показано, что мсксидол особенно эффективен при курсовом парентеральном и виутрнжелудочцом введении и отношении острого экосудатиююго воспаления. высыпаемого карраген ином и ПАФ.

Впервые установлено, что мексидол способен в умеренной степени подавлять не юлш эккудативную, но и аяьтсрятипиу» фалу воспаления. Нами икрвые установлено, что мскндол при Йртфшютмческм- лечебном режиме введения ннп<бнр>ег развитие адыовантното артрита у крыс, причем мекендол способен потенцировать противовоспалительное лейепщеnUMHUunm.

Установлено, что в отличие от НПВП мекендол в больших ¡к повреждает слшистую желудка м J 2-лсрстиоЛ кншкп Поийно. что мекендол окашиаст яидыетическое действие как в тесте "горячей пластиннн», та* н в тесте «уксусные корчи», что свидетельствует о простаглаилнновом и центральном механнгмач литммицицеитниного действия. При стрессе ожидания боли в условиях моделирования артрита иске идол проявляет антнстрессориое и аиксиолнтическое действие,Научио-практическав шчнщкп работ. Проведенные исследования выявили у оригинального отечественного антноксиданта мекендол противовоспалительные наиадьпинруинцие свойства на моделях острого и хронического воспаления. Сочетание ЭТИХ свойств у мексидола и его способность потенцировать ДСЙСШНс НПВП дает иоааюияюстъ рассматривать использование мексидола (а составе комплексной терапии) а новой для него области клинической медицины н артрологии Кроме того. полученные данные позволяют рассчитывать на эффективность мексидола в комплексной терапии различных заболеваний воспалительной природы - в офтальмологии, отоларингологии, гинекологии и др1

выводы

J Впервые показано, что отечественный антнокендант шнендол проявляет существенную противовоспалительную активность как при парентеральном, так и внутрижелудочном адедеини в усади«** моделирования острого зкссулвтиаиого воспаления Хотя мекендол уступает препаратам сравнения по величине сред»эффективной дозы, ои превосходит и* по широте терапевтического действия,

2, Установлено, что мексило.1 при локндьиом воздействии виде подкожных иньекпий в диапазоне доз I—10 мг/кг ннгнбирует мьтератнвадае воспаление

Показано, что мкешпт потенцирует противовоспалительное действие препаратов из группы НПВП (нидометацина н кетопрофеиа и др) и в отличие от № лаже в больших дозах (400 мг'кт) не вызывает повреждения слизистой желудочно-кишечного тракта у крыс

4 Мекендол проявляет анальтетнческую активность как в тесте горяча* пластина», так м а тесте уксусные корчи, Комбинации мекендола с НПВН в дозе 100 мп'кг и ннломегацинз в 2 раза меньшей дозе по сравнению со стандартной не уступает по своей выраженности эффекту раздельного применении препаратов, что свидетельствует о потенцировании антнпроствгланди нового действия инлометапн1и

5. Мексидол при курсовом виутрижслудочном введении в дозах 100 и 2<Ю мгУкг оказывает существенное инщбирующсе действие на модели адьювянтного артрита у крыс, что является доказательством его эффективности в отношении хронического воспаления суставов.

6. В условиях моделирования хронического артрита у крыс мексидол проявляет, кроме протиьовосналнтельнми, сочетаншк анальгегнческое, анксио.титическое и стресс-протекторомое действие, что является дополнительным позитивным качеством препарата

7, Проведенные исследований позволяют расценивать мексидол как потенциальное лекарственное средство для комплексной терапии артр(гтов. остсоортрозов и другой патологии воспалительного геиеи.