Автореферат и диссертация по медицине (14.03.08) на тему:Исследование клеточных факторов естественной резистентности при воздействии на организм человека экстремальных факторов, связанных с космическим полетом.
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.03.08
Автореферат диссертации по медицине на тему Исследование клеточных факторов естественной резистентности при воздействии на организм человека экстремальных факторов, связанных с космическим полетом.
11-5 493
На правах рукописи
ПОНОМАРЁВ СЕРГЕЙ АЛЕКСЕЕВИЧ
ИССЛЕДОВАНИЕ КЛЕТОЧНЫХ ФАКТОРОВ ЕСТЕСТВЕННОЙ РЕЗИСТЕНТНОСТИ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ НА ОРГАНИЗМ ЧЕЛОВЕКА ЭКСТРЕМАЛЬНЫХ ФАКТОРОВ, СВЯЗАННЫХ С КОСМИЧЕСКИМ ПОЛЕТОМ
14.03.08 - авиационная, космическая и морская медицина
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва-2011
Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Государственном научном центре Российской Федерации-Институте медико-биологических проблем РАН
Научный руководитель:
доктор медицинских наук, Моруков Борис Владимирович
Официальные оппонепты:
доктор медицинских наук, профессор Ильин Вячеслав Константинович доктор медицинских наук Белопольский Александр Александрович
Ведущая организация:
Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский испытательный центр подготовки космонавтов имени Ю.А. Гагарина"
Защита диссертации состоится ^^Цд 2011 г. в часов на
заседании диссертационного совета Д 002.111.01 в Учреждении Российской академии наук Государственном научном центре Российской Федерации-Институте медико-биологических проблем РАН по адресу 123007, Москва, Хорошевское шоссе, д. 76-а.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГНЦ РФ-ИМБП РАН.
Автореферат разослан_2011 г.
Учёный секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук
М.А. Левинских
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
За последние четыре десятилетия накоплен большой фактический материал о состоянии адаптивного иммунитета человека при воздействии на организм неблагоприятных факторов космического полета, таких как микрогравигацня, космическое излучение, нервно-эмоциональное напряжение, изоляция в герметичном помещении ограниченного объема и др. Исследования иммунного статуса космонавтов и астронавтов, совершивших космические полеты различной продолжительности на космических кораблях типа Салют, Аполлон, Союз и Спейс Шаттл и на орбитальных станциях Скайлэб, Салют-6, 7, Мир и МКС позволили установить в раннем послеполетном периоде ряд негативных сдвигов, включающих изменения количественного содержания и функциональной активности Т- и В-лимфоцитов [Константинова И.В.,1988; Crucian В.Е. et а]., 2008; Morukov В. et al„ 2011]. Однако очевидные успехи в изучении адаптивного иммунитета космонавтов, а также добровольцев, участвовавших в экспериментах, моделирующих воздействие на организм условий пребывания на борту орбитальных космических станций, практически исключили из интересов космической иммунологии исследования важнейших клеточных факторов естественной резистентности - моноцитов и нейтрофилов.
В последние десятилетия были получены новые экспериментальные данные, убедительно продемонстрировавшие ключевую роль врожденной иммунной системы как в борьбе с патогенными микроорганизмами, так и в активации и регуляции системы приобретенного иммунитета [Ковальчук Л.В. и др., 2005; Лебедев К.А. и др., 2009; Medzhitov R. et al., 1997; Iwasaki A. et al., 2004]. Возрождение концепции естественного иммунитета на качественно новом уровне было связано, в первую очередь, с открытием паттерн-распознаюших рецепторов (pattern-recognition receptors, PRR), которые узнают стереотипные и консервативные в эволюции молекулы микроорганизмов, присущие одновременно большим систематическим группам микробов (pathogen-associated molecular patterns, PAMP) [Janeway C.A., 1989]. Сложность и разнообразие строения этих рецепторов позволяют им распознавать не только самые различные экзогенные лнганды -липополисахарид (ЛПС) бактерий, маннонов грибов, нуклеиновых кислот вирусов, по и эндогенные лиганды, появляющиеся в результате развития воспаления и (или) повреждения тканей, такие как белки теплового шока [Wendling U. et al., 2000].
По своей функции PRR разделяются на три класса: секреторные PRR, играющие роль опсоиинов, эндоцитозные PRR, опосредующие немедленный фагоцитоз, и сигнальные PRR, опосредующие активацию клеток врожденной системы [Хаитов P.M. и др., 2009]. При взаимодействии этих рецепторов с лигандами происходит активация сигнальных путей клетки, секреция эффекторных молекул, таких, как цитокины, противомикробные пептиды и др., изменение экспрессии других рецепторов и далее развитие адаптивного иммунного ответа [Ковальчук Л.В. и др., 2005]. Открытие PRR не только позволило по-новому взглянуть на фундаментальные аспекты развития хронических воспалительных заболеваний, но и создало основу для разработки дополнительных диагностических критериев этих патологических состояний [Чередеев A.M. и др., 1999]. В последние годы накапливается все больше сведений, свидетельствующих о том, что снижение экспрессии и функции PRR в силу мугашш/полиморфизмов или эпигенетических нарушений регуляции PRR, лежит в основе развития иммунодефицитиых состояний, которые проявляются инфекционно-воспалительнымп заболеваниями. В то же время избыточная экспрессия и активация PRR, как правило, приводит к хроническим аутовоспалительным, аутоиммунным и агоническим заболеваниям с подключением адаптивного иммунитета и нарастающей агрессией против собственных клеток и тканей [Хаитов P.M. и др., 2007; Abreu М. et al., 2002].
Несмотря на то, что к сегодняшнему дню опубликованы многочисленные исследования, посвященные системе PRR клетки, остаются малоизученными важные вопросы, в частности, касающиеся функционирования системы PRR при воздействии на организм неблагоприятных факторов космического полета.
Цель работы
Комплексное изучение ответа клеточного звена врожденного иммунитета у здорового человека при воздействии на организм факторов космического полета и их наземном моделировании.
Задачи исследования
1. Исследовать влияние условий длительных космических полетов на систему PRR врожденного иммунитета космонавтов.
2. Оценить характер изменений экспрессии РЯЯ врожденного иммунитета человека при моделировании некоторых эффектов микрогравитации в 5-суточиой "сухой" иммерсии без применения средств профилактики.
3. Изучить процесс адаптации РЯЯ врожденного иммунитета человека к условиям длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитаиия.
4. Исследовать фенотипические свойства антигенпрезентирующих клеток (дендритных клеток) у добровольцев-испытателей, находившихся в условиях длительной изоляции н гермообъекте с искусственной средой обитания.
Научная новизна работы
В проведенных исследованиях впервые был использован комплексный подход к оценке клеточных факторов естественной резистентности, который включал определение фенотипических и функциональных характеристик системы РКЯ, при воздействии па организм здорового человека факторов космического полета.
Впервые установлено, что после завершения длительных космических полетов изменение характера ответа, опосредуемого сигнальными образраспознающпми рецепторами - ТЬЯ, определяется несколькими компонентами: увеличением сывороточного уровня эндогенного лиганда ТЬК - белка теплового шока Н8Р70; повышением экспрессии ТЬЯ2, ТЬЯ4 и ТЬЯб на моноцитах и граиулонитах периферической крови; снижением индуцированного экзогенным лнгандом ТЬЯ4 - ЛГ1С синтеза эффекторных молекул - цитокинов ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10. функциональных резервов.
Впервые показано, что длительное пребывание здорового человека в условиях изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания приводит к снижению уровня в периферической крови клеточных факторов естественной резистентности, экспрессирующих То11-подобные рецепторы, и угнетению синтеза эффекторных молекул
Впервые показано, что при моделировании физиологических эффектов микрогравитации в наземном эксперименте с 5-ти суточной «сухой» иммерсией изменения системы РЕ^Я характеризовались значительной индивидуальной вариабельностью и разнонаправленностыо, связанной с существенными различиями адаптационных возможностей системы врожденного иммунитета.
Практическая и научная значимость работы
Результаты исследования изменений рецепторного аппарата и функциональной активности клеток моноцитарного и гранулоцитарного ростков крови, происходящих под действием факторов космического полета, существенно расширили представление о месте и роли врожденного иммунитета в физиологических реакциях организма, направленных на поддержание иммунного гомеостаза в неблагоприятных условиях среды обитания.
Практическая значимость результатов работы, продемонстрировавших депрессию функционирования клеток, экспрессирующих сигнальные образраспознающие рецепторы, на фоне увеличения их количества в периферической крови космонавтов после завершения длительных космических полетов, заключается в обосновании необходимости комплексного подхода к оценке основных звеньев системы То11-подобных рецепторов, включающей анализ лигандов ТЬЯ, определение экспрессии ТЬЯ и функциональной активности ТЬЯ. Этот подход может быть использован при мониторинге состояния системы врожденного иммунитета, а также при выработке стратегии профилактики и коррекции нарушений иммунореактивности при воздействии на организм неблагоприятных факторов окружающей среды.
Полученные в работе данные о том, что в периоде ранней адаптации к условиям моделируемой гипогравитации существенную роль в развитии реакции клеточных факторов врожденного иммунитета играют индивидуальные особенности реагирования, могут послужить основой для обоснования новой концепции иммунологического обследования при формировании экипажей сверх длительных космических экспедиций. В соответствии с этой концепцией иммунологический контроль наряду с традиционными методами должен включать и методы для оценки функциональных резервов системы врожденного иммунитета.
Положении, выносимые на защиту
Кратковременное пребывание в условиях моделируемой микрогравитации сопровождается изменениями экспрессии То11-подобных рецепторов клеточными факторами естественной резистентности, отличающимися значительной индивидуальной вариабельностью и разнонаправленностью.
Длительная изоляция в гермообъекте с искусственной средой обитания приводит к снижению уровня клеточных факторов естественной резистентности в периферической
крови, экспрессирующих ТоП-подобные рецепторы, и синтеза ими эффекторных молекул.
После длительных космических полетов в системе PRR происходят многофакторные изменения, которые включают повышение сывороточного уровня эндогенного лиганда TLR - белка теплового шока HSP70; повышение экспрессии Toll-подобных рецепторов на клетках врожденного иммунитета при снижении их функциональной активности.
Апробация работы
Диссертация прошла апробацию на заседании секции Ученого совета ГНЦ РФ-ИМБП РАН "Космическая физиология и биология" (протокол №4 от 08 июля 2011 г.).
Основные результаты были доложены на VIII, IX, X Конференциях молодых ученых, специалистов и студентов, посвященных дню космонавтики (Москва, 2009, 2010, 2011), XXI Съезде Физиологического общества им. И.П.Павлова (Калуга, 2010), 38 Assembly COSPAR (Bremen, 2010).
Публикации
Результаты диссертации изложены в 10 публикациях в научных журналах и сборниках конференций, из них 3 - в ведущих российских рецензируемых журналах, входящих в перечень ВАК.
Работа выполнена при поддержке гранта Президента РФ "Поддержка ведущих научных школ НШ-3402-2008.4" по теме "Молекулярно-клеточные механизмы влияния факторов космического полета" и программы Фундаментальных исследований ГНЦ РФ-ИМБП РАН.
Структура и объём диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов исследования, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Текст диссертации изложен на 161 страницах, иллюстрирован 15 рисунками и 25 таблицами. Список литературы содержит 263 цитируемых источника, из которых 53 - отечественных и 210 - зарубежных.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы II методы исследования.
Основные направления и объем проведенных исследований представлены в
таблице.
Таблица. Объем и структура исследований
Направления исследований Продолжительность, сутки Количество обследованных Количество тестов
1. Длительные космические полеты на МКС 170- 199 10 540
2. Модельные наземные эксперименты
2.1. Модельный эксперимент с «сухой» иммерсией 5 12 396
2.2. Модельные эксперименты с длительной изоляцией в гермообъеме 105 360 6 6 540 612
ИТОГО 34 2088
Исследования проводились в соответствии с программой, одобренной Комиссией ГНЦ РФ-ИМБП РАН по биомедицинской этике, и информированным согласием испытуемых.
Материалом для исследования являлась периферическая кровь космонавтов и испытателей-добровольцев, участвовавших в наземных модельных экспериментах. Взятие проб крови у космонавтов проводилось за 60 суток до старта и на 1-7-е сутки после приземления, у испытателей-добровольцев - в фоновом периоде, во время воздействия и после его завершения.
Исследованные параметры:
1) Содержание лейкоцитов, моноцитов, гранулоцитов в периферической крови;
2) Фенотип поверхностных рецепторов моноцитов и гранулоцитов периферической крови;
3) Фагоцитарная активность моноцитов и гранулоцитов периферической крови ;
4) Митогенпндуцируемый синтез цитокинов иммунокомпетентными клетками периферической кропи;
5) Содержание белка теплового шока HSP70 в сыворотке крови;
6) Фенотип дендритных клеток, полученных из моноцитов периферической крови in vitro Определение содержания лейкоцитов, а также абсолютного и относительного
количества моноцитов и гранулоцитов в периферической крови проводили на автоматическом гематологическом анализаторе Celltac-alfa МЕК 63I8K (Nihon Kohden, Япония).
Рецепторный аппарат моноцитов и граиулоцитов периферической крови исследовали мультипараметрическим методом иммунофлюоресцентного анализа с использованием панели моноклональных антител: TLR1, TLR2, TLR4 и TLR6 (Hycult biotechnology, Голландия), CD! lb, CD14, CD16, CD18, CD24, CD36, CD54, CD206 (Beckman Coulter, США). Исследование проводились на проточном цитофлуориметре FacsCalibur (Becton Dickinson, США).
Оценку поглотительной активности фагоцитов периферической крови определяли с помощью проточной лазерной цитометрии с использованием системы PHAGOTEST (Becton Dickinson, США)
Способность моноцитов секретировать цитокины в системе in vitro изучали п 24-часовых клеточных культурах, стимулированных липополисахаридом Escherichia coli 0127 (ЛПС; Sigma, США) в концентрации 1 мкг/мл. В надосадочных жидкостях измеряли содержание цитокинов - ИЛ-10, ИЛ-8, ИЛ-6, ИЛ-Iß и ФНО-а, с использованием коммерческого набора Flow Cytomix (Bender MedSystems, Австрия) для определения цитокинов методом проточной цитометрии. Анализ содержания цитокинов в исследуемых образцах проводили на цитофлюориметре FACSCalibur (Becton Dickinson, США). Концентрация каждого цитокина вычислялась с помощью программы FlowCytomix Pro и являлась функцией интенсивности флюоресценции.
Уровень HSP70 определяли в сыворотке крови обследуемых методом ИФА с использованием коммерческого набора «HSP70 high sensitivity EIA kit» (Enzo Life Sciences, Дания) на автоматическом анализаторе MINILYSER (Тесап, Австрия).
Дендритные клетки (ДК) получали путём поэтапного культивирования из моноцитов периферической крови [Ariizumi К, Et а)., 2000, Banchereau J. et al., 2000; Fritz J. H. Et al., 2005]. Определение маркёров на поверхности дендритных клеток проводили методом проточной цитофлуориметрии с использованием антител к CD 14, CD83, CD85, CD86, CD123, HLA-DR и соответствующих изотипических контролей (Beckman Coulter, США).
Статистическая обработка результатов.
Статистическую обработку полученных данных выполняли с использованием пакета прикладных программ «Statistica 6.0» для Microsoft Windows. Достоверность уровня различия сравниваемых величин оценивали, используя непараметрическнП метод Уилкоксона. Данные представлены в виде медианы и имтерквартилыюй широты (0,250,75).
ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
I. Состояние системы естественной резистентности у испытателей-добровольцев в условиях 5-суточной "сухой" иммерсии.
Анализ изменений экспрессии Т1Л выявил два типа реагирования клеток врожденного иммунитета на моделируемые условия (рис. 1). Так, у части обследованных было отмечено повышение относительного содержания в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих на своей поверхности ТЬЯ (рис. 1, группа А). В то же время у некоторых из обследованных пребывание в условиях "сухой" иммерсии (СИ), напротив, привело к существенному снижению содержания в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих ТЬИ. (рис. 1, группа Б).
TLR2 TLR4 TLR6
TLR2 TLR4 TLR6
ФОН5 сут.им ;R+7
TLR2 TLR4 TLR6
Фон ^¡5 сутим' R+7 j
TLR2 TLR4 TLR6
Рис. I. Процентное содержание моноцитов (А) и гранулоцитов (Б), экспрессирующих на своей мембране сигнальные образраспознающие рецепторы ТЫ*2, ТЬЯ4, ТЬЯб, в периферической крови испытателей-добровольцев в условиях 5-суточной «сухой» иммерсии. * - достоверное различие с фоном (р<0,05).
Примечательно, что в отличие от сигнальных PRR, таких как TLR2, TLR4, TLR6, достоверных изменений со стороны эндоцитозных PRR (CD206, CD36), равно как и со стороны молекул межклеточной адгезии (CD24 CD54, CD11 CD18), а также Fc-рецептора (CD 16) отмечено не было (рис. 2).
А
Б
Фон||5 сут.им: RW
Рис. 2. Процентное содержание моноцитов (А) и гранулоцитов (Б), экспрессиругощих эндоцитозные образраспознающие рецепторы (CD206, CD36), молекулы межклеточной адгезии (CD24 CD54, CDU CDI8), а также Fc-рецептор (CD16) в периферической крови испытателей-добровольцев в условиях 5-суточной «сухой» иммерсии.
Таким образом, проведенные исследования продемонстрировали, что практически здоровые люди, при воздействии на их организм условий СИ, проявляют разнонаправленную реакцию системы врожденного иммунитета па утяжеленные условия среды обитания. Изучение двух основных групп мембранных PRR - эндоцитозных и сигнальных, позволило установить, что наименьшие изменения претерпевали эндоцитозные рецепторы, опосредующие немедленный фагоцитоз. В то же время весьма кратковременное пребывание в условиях моделирования некоторых эффектов микрогравитации, связанных с устранением опоры, изменениями афферентации [Козловская И.Б., 2008], острыми реакциями адаптации системы водно-электролитного обмена и объёмов жидкостных сред организма [Ларина И.М., 2000], увеличением антигенной нагрузки [Ильин В.К., и др., 2008] является достаточным для проявления ответной реакции системы TLR. При нормальном функционировании системы PRR увеличение экспрессии TLR клетками врожденного иммунитета, отмеченное на заключительном этапе пребывания в условиях СИ, возможно, следует считать признаком
адаптационной перестройки организма в ответ на комплексное воздействие неблагоприятных факторов. Однако в ряде случаев выявленное снижение содержания в периферической крови моноцитов и нейтрофильных гранулоцитов, экспрессирующих на своей поверхности TLR 2, TLR 4 и TLR 6, может быть расценено не только как один из признаков нарушения адаптации организма, но и признаком состояния «риска» развития вторичного иммунодефицита.
2. Состояние системы естественной резистентности у испытателей-добровольцев в условиях длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания.
В эксперименте со 105-суточной изоляцией по моделированию начального этапа пилотируемого полёта к Марсу (проект "Марс-105"), исследования экспрессии PRR на поверхности моноцитов, проведенные в фоновом периоде, на 70, 105 сутки изоляции, а также на 7 и 14 сутки после выхода из гермообъекта (рис.3), показали, что в условиях длительной изоляции в гермообъёме практически не наблюдались изменения уровня моноцитов, экспрессирующих на своей поверхности TLR1, однако на 70 сутки пребывания в гермообъекте и на 7 сутки после выхода из него были обнаружены статистически значимые изменения количества CD14+TLR2+- и CDI4+TLR4+-mieTOK в периферической крови. На 70 сутки после начала воздействия также было отмечено и снижение количества TLR6+mohouhtob.
Фон 70сут 105СУТ R+7 R+14
[и Тит 1пр4 &тгнб[
Рис. 3. Процентное содержание моноцитов, экспрессирующих на своей мембране сигнальные образраспознающие рецепторы ТЫ12, Т1^4, Т1Л6, в периферической крови испытателей-добровольцев в эксперименте со 105-суточной изоляцией в гермообъекте. * - достоверное различие с фоном (р<0,05).
Финальным аккордом активации ТЬЯ является выработка цитокинов. В данном исследовании обнаружено снижение способности к синтезу цитокинов в ответ на
стимуляцию TLR4 ЛПС in vitro на 105 сутки изоляции, которое наблюдалось также и на 7 сутки после выхода экипажа из гермообъекта (рис. 4).
1 1 1 П 1
гшп ггг
■
tv/.w _____ --¿.-"'.its:'.
Фо н 105 сутки R+7
О ил-ю i_I wi-a ¡а ИП-6 щ.,,1 |[|[¡[|¡ ФИО-..
Рис. 4. Продукция цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови испытателей-добровольцев в ответ на стимуляцию ЛПС в 24-часовых культурах клеток ¡п уИго в эксперименте со 105-суточной изоляцией.
Результаты проведенных исследований также показали, что у всех обследуемых членов экипажа к 105 суткам изоляции и к 7 и 14 суткам выхода из гермообъекта наблюдалось снижение содержания моноцитов, экспрессирующих на клеточной мембране маннозный рецептор СЭ206 и Рс-рецептор СО 16. Изменения экспрессии другого эндоцитозного рецептора - рецептора-мусорщика С036 на моноцитах периферической крови практически отсутствовали (рис. 5).
Фом 70сут 105сут R+7 R+14
□ CD206 S CD36 Ш CD16
Рис.5. Процентное содержание моноцитов, экспрессирующих на своей мембране эндоцитозпые образраспознающие рецепторы (С0206, С036), а также Рс-рецептор (СО 16) в периферической крови испытателей-добровольцев в эксперименте со ]05-суточной изоляцией в гермообъектс *-достоверное различие с фоном (р<0,05).
Анализ поглотительной способности фагоцитов периферической крови выявил достоверное повышение фагоцитарной активности моноцитов и гранулоцитов у всех членов экипажа по сравнению с фоновыми значениями (рис. 6)
* * +
Фо н 70сут 105сут Я+1 И+7
Рис, 6. Фагоцитарная активность моноцитов периферической крови испытателей-добровольцев в эксперименте со 105-суточноЛ изоляцией в гермообъекте. '-достоверное различие с фоном
(р<0,05).
Таким образом, результаты анализа данных, полученных в ходе проведения исследований системы врожденного иммунитета в эксперименте со 105-суточной изоляцией в замкнутом гермообъекте с участием 6 добровольцев, показали, что на заключительном этапе пребывания в экспериментальных условиях наблюдалось снижение уровня в периферической крови моноцитов, экспрессирующих сигнальные (ТЬЯ2, ТЫ14 и П.К6) и эндоцитозные (СЭ206) образраспознающие рецепторы, угнетение способности к синтезу эффекторнмх молекул (ИЛ-1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10) мононуклеарами периферической крови в ответ на лиганд ТЬЯ4 - ЛПС и повышение поглотительной способности фагоцитов периферической крови.
Результаты исследования фенотипа поверхностных рецепторов клеток врожденного иммунитета в наземном эксперименте (проект "Марс-500") позволили установить, что дальнейшее увеличение срока пребывания членов экипажа в гермообъекте привело к еще более выраженному снижению содержания моноцитов, экспрессирующих TL.ll (рис. 7.А), а также к снижению экспрессии этих рецепторов на гранулоцитах в периферической крови (рис. 7.Б).
Фон 120 180 250 Выход 300 360
Фон 120 180 250 Выход 300 360
•TLR2 - TLR4 —TLR6
•TLR2 - TLR4 —TLR6
Рис. 7. Процентное содержание моноцитов (А) и гранулоцитов (Б), экспрессирующих на своей мембране сигнальные образраспознающие рецепторы ТЬЯ2, ТЬЯ4, ТЬЯб, в периферической крови исиытателеП-добровольцев в эксперименте с длительной изоляцией в гермообъекте (проект «Марс-500). * - достоверное различие с фоном (р<0,05).
Содержание цитокинов в супернатантах культур мононуклеарных клеток периферической крови, стимулированных лнгандом ТЬЯ4 - ЛПС, незначительно повышалось по сравнению с фоновыми значениями на 120 сутки изоляции (рис. 8). Однако уже к 250 сугкам происходило уменьшение их ЛПС-индуцированной продукции, что, наряду со снижением экспрессии ТЬЯ может свидетельствовать о генерализованном угнетении системы ТЬЯ при воздействии на организм комплекса факторов длительной изоляции в гермообъекте.
1111111=
1111111
МММ
Фон 120 сутки 250сутки
L13 пне I' '|игм Ж им I—I ни» |Щ«но-«
Рис. 8. Продукция цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови испытателеП-добровольцев в ответ на стимуляцию ЛПС в 24-часовых культурах клеток in vitro в эксперименте с длительной изоляцией в гермообъекте (проект "Марс-500"),
Изменения экспрессии рецепторов цнтоплазматической мембраны моноцитов и гранулоцитов - CDllb, CD18, CD16, CD24, CD36, CD54, CD206, на протяжении эксперимента были статистически недостоверными.
Анализ фагоцитарной активности моноцитов выявил тенденцию к повышению этого показателя на 180 сутки изоляции (рис. 9.А). Однако в дальнейшем происходило ее постепенное уменьшение. Динамика фагоцитарной активности гранулоцитов несколько отличалась от моноцитарной и имела статистически значимое повышение на 180, 250 и 360 сутки изоляции (рис.9.Б).
I
S 5
2Р 40
Фо н 180 250 Выход 300 360
2Б0 Выход 300 360
Рис. 9. Фагоцитарная активность моноцитов (А) и гранулоцитов (Б) периферической крови испытателей-добровольцев в эксперименте с длительной изоляцией в гермообъекте (проект «Марс-500»), "-достоверное различие с фоном (р<0,05).
Обобщая результаты изучения поверхностных рецепторов и функциональной активности клеточных факторов врожденного иммунитета - моноцитов и гранулоцитов, следует подчеркнуть, что при воздействии на организм моделируемых на Земле отдельных факторов и условий марсианского полета происходят изменения в системе естественной резистеитности, прежде всего в системе TLR - ключевых PRR. Так, установлено, что при длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания происходят изменения важных компонентов этой системы - рецепторов и синтеза цитокинов при взаимодействии со специфическим лигандом.
В ходе эксперимента с длительной изоляцией в гермообъекте ("проект Марс-500"), было обнаружено незначительное повышение способности моноцитов трансформироваться в незрелые дендритные клетки с фенотипом CDl4+CD86 и CD14+CD831' к 180 суткам эксперимента по сравнению со способностью к
дифференцировке в фоновом периоде. Однако зрелые ДК С014"СЭ83+ и С014"С086\ которые образовываются в ходе дифференцировки, несут пониженное количество молекул С083 и СЭ86 на своей мембране по сравнению с фоновыми значениями, что говорит об уменьшении способности незрелых ДК становиться зрелыми профессиональными антиген-представляющими клетками и, как следствие, полноценно участвовать в формировании иммунного ответа (рис. 10).
■ СОВЗ-К:В14- —■ СВВЗ+СВ14+ I С086+СВ14- —* С086+С014+
Рис. 10. Фенотипическая характеристика дендритных клеток, генерированных из моноцитов периферической крови испытателей-добровольцев в эксперименте с длительной изоляцией в гермообьекте (проект «Марс-500»),
Полученные данные наглядно демонстрируют, что негативные изменения в адаптивном иммунитете, отмечаемые при длительной изоляции в гермообьекте [Моруков Б.В. и др., 2011], могут начинаться уже с нарушения передачи сигнала от дендритных клеток к Т-лимфоцитам.
3. Состояние системы врождённого иммунитета у космонавтов до и после длительных космических экспедиций на МКС.
Содержание Т[Л, таких как Т(,Я2, ТЬЯ4 и ТЬЯб на моноцитах и нептрофильных гранулоцитах периферической крови у космонавтов после завершения длительных космических полетов достоверно повышалось на первые сутки при этом на седьмые сутки после завершения космической экспедиции количество сигнальных РГШ приближалась к фоновым значениям (рис. 11).
£
1
ПФон ШК+7
БО
* 20
ий2
ПК4 Т1_Р6
П Фон
Ш + 1 " Ж+7
Рис. 11. Процентное содержание моноцитов (А) и гранулоцитов (Б) в периферической крови, экспрессирующих на своей мембране сигнальные образраспознающие рецепторы ТЬЯЗ, ТЬ114, Т1_Я6 у космонавтов до и после завершения длительных полетов на МКС. '-достоверное различие с фоном (р<0,05).
Параллельно с изучением динамики экспрессии РЯЯ, проводилось измерение белка теплового шока Н8Р70, являющегося одним из основных эндогенных лигандов ТЬЯ2 и ТЫМ в сыворотке космонавтов в фоновом периоде, а так же на первые и на седьмые сутки после посадки (рис. 12).
Рис. 12. Динамика значений Н5Р70 и ТЬЯ4 на моноцитах у космонавтов до и после завершения длительных полетов на МКС. '-достоверное различие с фоном (р<0,05).
Выявленная взаимосвязь между содержанием HSP70 и TLR4 может указывать на то, что в раннем послеполетном периоде TLR активируются не только экзогенными лигандами, но и эндогенными, что, в свою очередь, может свидетельствовать о наличии иной, неинфекционной опасности, в частности, развитие аллергических и аутоиммунных заболеваний, угрожающих организму человека во время длительного полёта на МКС.
Анализ функциональной активности клеток врожденного иммунитета, экспрессирующих TLR показал, что у всех обследованных космонавтов отмечалось снижение способности к синтезу провоспапительных цитокинов - ИЛ-lß, ИЛ-6, ИЛ-8 и ФНО-а , а также противовоспалительного цитокина - ИЛ-10 (рис. 13.), что может отражаться на способности иммунной системы отвечать на антигены.
25000 |
20000 ;
с 15000 |
С
10000 5000 I О
Ш ип-10 ED ип-0 Ш ил-6 ¡¡Щ или/* [ЩЩ] ®но-«
Рис. 13. Продукция цитокинов мононуклеарными клетками периферической крови космонавтов до и после длительных космических полетов на МКС в ответ на стимуляцию ЛПС TLR4 в 24-часовых культурах клеток in vitro (пг/мл). * -достоверное различие с фоном (р<0,05).
Результаты проведенных исследований также показали, что у некоторых из обследуемых космонавтов на 1-е сутки после окончания КП наблюдалось повышение содержания моноцитов, экспрессирующих на клеточной мембране эндоцитозный рецептор - маннозный рецептор CD206. Однако на 7-е сутки этот показатель приближался к фоновым значениям. Изменения экспрессии другого эндоцитозного рецептора -рецептора-мусорщика CD36 на моноцитах периферической крови практически отсутствовали: только на 7-е сутки после КП наблюдалось их незначительное снижение. Следует отметить, что у большинства обследованных космонавтов происходило увеличение содержания в периферической крови CD16+ и CD54+ моноцитов, свидетельствующее о повышении миграционной и адгезивной способности моноцитов
(рис. 14.А). Исследование фенотипа поверхностных рецепторов гранулоцитов не выявило существенных изменений уровня в периферической крови CDllb+, CD18+, CD16+ и CD24+ клеток, играющих важную роль в процессах распознавания патогена, адгезии и фагоцитоза (рис. 14.Б).
§ « н
4)
g .1»
ccse COtUCmV com Cll'JS си:
□ фон 1R+1 1R+7
□ Фон ¡¡R+1 lR+7
Рис. 14. Процентное содержание моноцитов (А) и гранулоцитов (Б) в периферической крови, экспрессирующих эндоцитозные образраспознающие рецепторы (CD206, CD36), молекулы межклеточной адгезии (CD24 CD54, CD11 CD18), а также Fc-рецептор (CD16) у космонавтов до и после длительных полётов на МКС.
Одновременно с изучением экспрессии адгезионных молекул, паттерн распознающих рецепторов и эндогенного лиганда ТЬК2 и ТЬК4- Н5Р70 изучалась фагоцитарная активность моноцитов и нейтрофильных гранулоцитов в фоновом периоде, а так же на первые и седьмые сутки после длительных космических полётов (рис. 15.)
S 60
I
* 40
*
R+1 R+7
Рис. 15. Фагоцитарная активность моноцитов (А) и гранулоцитов (Б) периферической крови у космонавтов до и после длительных космических полетов на МКС '-Достоверное различие с фоном (р<0,05).
Как видно из рис. 15, на первые сутки после завершения длительных космических полетов на МКС наблюдалось достоверное повышение фагоцитариой активности как моноцитов, так и нейтрофильпых гранулоцитов, сохраняющееся и на седьмые сугкн после приземления. Подобные изменения, по-видимому, обусловлены увеличением экспрессии Р1Ш на моноцитах н нейтрофильпых грапулоцнтах, ответственных за раннее распознавание антигена.
Таким образом, проведенное исследование наглядно демонстрирует значимые изменения в системе врожденного иммунитета при длительных космических полетах Обратимость изменений изученных показателей даёт основание предположить, что происходящие процессы играют роль физиологической компенсации и направлены па адаптацию организма к условиям длительного космического полёта.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Результаты проведенных исследований показали, что при воздействии на организм экстремальных факторов космического полета система PR.il претерпевает значительные изменения. Это относится и к лпгандам PRR, и к самим рецепторам, а также к эффекторным молекулам, которые вырабатываются в результате активации PRR.
Наиболее выраженными и закономерно наблюдающимися после
продолжительных космических полетов являются изменения в системе сигнальных PRR -Т1Л, которые связаны с увеличением содержания в периферической крови клеток, экспрессирующнх на своей поверхности Т1^2, Т1^4 и Т1^6. Кроме того, на первые сутки после приземления в сыворотке крови космонавтов наблюдалось значительное увеличение содержания одного из эндогенных лигапдов системы PRR - белка теплового шока Н8Р70. Учитывая тот факт, что массивная экспрессия и возрастание уровня МБР. в частности, Н8Р70, происходит при воздействии на организм различных стрессовых факторов, включая физические, психологические, инфекционные н токсические, то можно предположить, что выявленные изменения количества клеток, экспрессирующнх по-видимому, являются ответной реакцией системы врожденного иммунитета на комплекс неблагоприятных факторов космического полета. В то же время анализ одного из показателей, характеризующих функциональное состояние системы ТЬР -способности к продукции цитокинов ¡п уйго в ответ на лиганд Т1^4 ЛПС, выявил в раннем периоде реадаптации снижение синтеза противовоспалительных цитокинов (ИЛ-1Р, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а), несмотря на высокий уровень мононуклеарных клеток.
экспрессирующих на своей поверхности этот рецептор. Это свидетельствует об уменьшении функциональной потенции клеток врожденного иммунитета адеквактно отвечать на эндотоксины граммотрицательных патогенных микроорганизмов при длительном воздействии на организм человека экстремальных факторов среды обитания.
Исследования раннего периода адаптации системы врожденного иммунитета при моделировании эффектов микрогравитации в эксперименте с 5-суточной «сухой» иммерсией показали, что практически здоровые люди представляли собой весьма гетерогенную популяцию по реакции системы врожденного иммунитета на утяжеленные условия среды обитания, причем глубина и направленность отмеченных сдвигов зависели не только от исходного уровня этих показателей, но и от функциональных резервов системы TLR.
В двух наземных исследованиях, моделирующих элементы межпланетной экспедиции к Марсу, получен ряд фактов, указывающих на то, что длительное воздействие, формирующейся в гермообъекте ограниченного объема среды обитания, привело к снижению относительного и абсолютного содержания в периферической крови испытателей-добровольцев моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих на цитоплазматической мембране сигнальные (TLR) и эндоцитозные (маннозный рецептор -CD206, скавенджер рецептор - CD36, интегрины - CD1 lb/CDl 8) PRR, а также рецептор цитотоксичности (CD16) и активационные молекулы (CD24 и CD54). Следует подчеркнуть, что в различные сроки пребывания в условиях изоляции был выявлен волнообразный характер колебаний количества моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих PRR. По-видимому, одной из причин, объясняющих отмеченные волнообразные колебания в системе PRR, являются изменения во время изоляции в гермообъектах уровня потенциально патогенных микроорганизмов в составе основных микробиотопов, характеризующееся периодами активации и стагнации [Ильин В.К. и др., 2010].
Анализ особенностей фенотипа дендритных клеток в эксперименте по программе «Марс-500» показал, что уже на 180-250 сутки пребывания в условиях изоляции отмечалось повышение способности моноцитов превращаться в незрелые дендритные клетки и снижение способности незрелых дендритных клеток становиться зрелыми антиген-представляющими клетками в системе in vitro в присутствии GM-CSF. Подобные отклонения могут свидетельствовать о возможном возникновении нарушений в цепи передачи сигнала от клеток врожденного иммунитета к клеткам адаптивного иммунитета, что может создать основу для развития вторичного иммунодефицитного состояния.
ВЫВОДЫ
1. После завершения длительных космических полетов у космонавтов наблюдались изменения в функционировании системы То11-подобных рецепторов клеток врожденного иммунитета: повышение сывороточного уровня эндогенного лиганда ТЬЯ - белка теплового шока Н8Р70; увеличение содержания в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих на своей поверхности ТЬЯ2, ТЬЯ4 и ТЬЛб; снижение синтеза цитокинов - ИЛ-1р, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10, индуцированного экзогенным лигандом ТЬЯ4 - ЛПС.
2. После завершения длительных космических полетов реорганизация экспрессии мембранных рецепторов, участвующих в процессах распознавания патогена, адгезии и фагоцитоза (С0206, СР16, СЭ54), сопровождалась повышением количества фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов периферической крови космонавтов.
3. При наземном моделировании физиологических эффектов микрогравитации в эксперименте с 5-суточной «сухой» иммерсией были выявлены две гетерогенные по типу ответа группы людей. Так, у одних преобладала активация системы естественной резистентности, проявляющаяся в увеличении экспрессии ТЬК на поверхности моноцитов и гранулоцитов, а у других преобладали процессы угнетения, проявляющиеся в снижении экспрессии сигнальных РЯЯ как на моноцитах, так и гранулоцитах.
4. Длительная изоляция в гермообъекте с искусственной средой обитания сопровождалась как снижением уровня в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих ТЬЯ2, ТЬЯ4 и ТЬЯб, так и редукцией индуцированного ЛПС синтеза эффекторных молекул - цитокинов ИЛ-1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10.
5. Жизнедеятельность в условиях длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания через 180-250 суток приводит к снижению дифференцировки и созревания дендритных клеток, индуцированных из моноцитов периферической крови, о чем свидетельствует уменьшение в культурах относительного содержания зрелых дендритных клеток (С083+С014' и С086+СЭ14"-клеток).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
Комплексный подход к оценке рецепторного аппарата и функциональной активности клеточных факторов естественной резистентности может быть внедрен в практику иммунологического обследования космонавтов на этапах предполетной
подготовки и во время восстановительного периода после завершения космических полетов различной продолжительности а гак же лиц, находившихся в неблагоприятных условиях окружающей среды, для выявления признаков развития иммунодефицитных состояний.
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
ИЛ-пнтсрлейким ЛПС-липополисахарпд КП-космическнй полет СИ-сухая иммерсия ФИО-фактор некроза опухолей PRR-pattcrn récognition receptor TLR-toll likc receptor
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕРИАЛАМ ДИССЕРТАЦИИ:
1. Показатели врожденного и адаптивного иммунитета у космонавтов после длительных космических полетов на Международной космической станции. Физиология человека, 2010, том 36, № 3. С. I — 12 (соавторы: Б.В. Моруков, М.П. Рыкова, Е.Н. Антропова, Т.А. Берендеева, И.М. Ларина).
2. Состояние системы иммунитета человека в условиях 105-суточной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания. Авиакосмическая и экологическая медицина, 2010, том 44, №4. С. 39-46 (соавторы: Б.В. Моруков, М.П. Рыкова, Е.Н. Антропова, Т А. Берендеева).
3. Состояние системы врождённого иммунитета в условиях 5-суточной "сухой" иммерсии. Авиакосмическая и экологическая медицина, 2011 №3 с. 17-23 (соавторы: Б.В. Моруков, М.П. Рыкова, Е.Н. Антропова, Т.А. Берендеева).
4. Т-сеМ ¡mmunity and cytokine production in cosmonauts after long-duration space tliglits. Acta Astronáutica, 201 l.V.68.P.739-746 (co-authors: Morukov В., Rykova M., Antropova E., Bcrcndeeva T., Larina I ).
5. Изменение показателей врожденного иммунитета у добровольцев-испытателей в эксперименте с длительной изоляцией в гермообъекте. Сб. тезисов IX Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики, Москва, 2010,с 61-62
6. Влияние условий 105-суточной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания на систему иммунитета Сб. тезисов XXI Съезда Физиологического общества им. И.П.Павлова, М. - Калуга, 2010, с. 757-758(соавтороы: Моруков Б.В., Рыкова М П., Антропова Е.Н, Берендеева Т.А).
7. Changes in natural resistance ofimmune system al volunteers-verifiers in long-term isolation // 38th Scientific Assembly of the Committee on Space Research (COSPAR), Bremen, Germany. July 18-25, 2010 (co-authors: Rykova M., Antropova E., Berendeeva Т., Morukov В.).
8. Изменение показателей врождённого иммунитета у добровольцев-испытателей в эксперименте с пятисуточнон "сухой" иммерсией Сб. тезисов X Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики, Москва, 2011, с 55
9. Выбор оптимального алгоритма оценки клеточных факторов естественной резистентности при иммунологическом обследовании космонавтов Сб. тезисов VIII Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики, Москва, 2009, с. 61-62
10. Исследование системы иммунитета российских космонавтов до п после длительных космических полётов на МКС. Российская академия наук, ИМБП РАМ, МКС, Российский сегмент, Т.2, Москва 2011, стр. 209-221. (соавторы: Б.В. Моруков, М П. Рыкова, Е.Н. Антропова, ТА. Берендеева).
Подписано в печать:
11.10.2011
Заказ № 6027 Тираж - 100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www. autoreferat. ru
у ь о
2010012442
Оглавление диссертации Пономарёв, Сергей Алексеевич :: 2011 :: Москва
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.
ВВЕДЕНИЕ.
ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Характеристика системы образраспознающих рецепторов врожденного иммунитета (РШ1).
1.2. Внутри- и межгрупповое взаимодействие образраспознающих рецепторов (РШ1).
1.3. Роль образраспознающих рецепторов (РМ1) в формировании адаптивного иммунитета.
1.4. Образраспознающие рецепторы (РЯЯ) и патология.
1.5. Влияние условий космического полета на систему врожденного иммунитета.
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.
2.1. Объем исследований.
2.2. Условия проведенных исследований.
2.2.1. Модельный эксперимент с «сухой» иммерсией на плёнке.
2.2.2. Модельные эксперименты с длительной изоляцией в гермообъекте с искусственной средой обитания (проект «Марс-105» и проект «Марс-500»).
2.2.3. Обследование космонавтов до и после длительных космических полетов.
2.3. Материал исследований.
2.4. Методы исследования.
2.4.1. Определение фенотипа поверхностных рецепторов моноцитов и гранулоцитов периферической крови методом проточной цитофлуориметрии.
2.4.2. Определение фагоцитарной активности клеток миелоидного ряда.
2.4.3. Культивирование дендритных клеток.
2.4.3. Определение продукции цитокинов лейкоцитами в супернатантах культур клеток.
2.4.4. Определение уровня белка теплового шока Н8Р-70 в сыворотке крови.
2.5. Статистическая обработка результатов.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
3.1. Состояние системы естественной резистентности в ходе 5-суточной "сухой" иммерсии.
3.2. Состояние системы естественной резистентности в ходе длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания.
3.3. Состояние системы врождённого иммунитета у космонавтов до и после длительных космических экспедиций на МКС.
3.5. Обсуждение результатов.
Введение диссертации по теме "Авиационная, космическая и морская медицина", Пономарёв, Сергей Алексеевич, автореферат
Согласно современным представлениям, иммунная система человека, состоит из двух взаимосвязанных элементов - врожденного и приобретенного (адаптивного) иммунитета.
За последние четыре десятилетия накоплен большой фактический материал о состоянии адаптивного иммунитета человека» при воздействии на организм неблагоприятных факторов космического полета, таких как микрогравитация, космическое излучение, нервно-эмоциональное напряжение, изоляция в герметичном помещении ограниченного объема и*, др. [24,33,188] Исследования иммунного статуса космонавтов и астронавтов, совершивших космические полеты различной продолжительности на космических кораблях типа Салют, Аполлон, Союз и Спейс Шаттл и на орбитальных станциях Скайлэб, Салют-6, 7, Мир и МКС позволили установить в раннем послеполетном периоде ряд негативных сдвигов, включающих изменения количественного содержания и функциональной активности Т- и В-лимфоцитов [24,222]. Однако очевидные успехи в. изучении адаптивного иммунитета космонавтов, а также добровольцев, участвовавших в экспериментах, моделирующих воздействие на организм условий пребывания на борту орбитальных космических станций, практически исключили из интересов космической иммунологии исследования важнейших клеточных факторов естественной резистентности - моноцитов и нейтрофилов.
В 90-е г.г. XX века были получены новые экспериментальные данные, убедительно продемонстрировавшие ключевую роль врожденной иммунной системы как в борьбе с патогенными микроорганизмами, так и в активации и регуляции системы приобретенного иммунитета. [19,176,263]
Возрождение концепции естественного иммунитета на качественно новом уровне связано, в первую очередь, с открытием паттерн-распознающих рецепторов (pattern-recognition receptors, PRR), которые узнают стереотипные и консервативные в эволюции молекулы микроорганизмов, присущие одновременно большим систематическим группам микробов (pathogen-associated molecular patterns, PAMP) [94,218,256]. Сложность, разнообразие строения этих рецепторов позволяют им распознавать не только самые различные экзогенные лиганды - ЛИС бактерий, маннонов грибов, нуклеиновых кислот вирусов, но и эндогенные лиганды, появляющиеся в результате, развития воспаления и (или) повреждения: тканей, такие как белки теплового шока [38,39]. По, своей функции PRR могут быть разделены на три класса: секреторные PRR, играющие роль опсонинов, эндоцитозные- PRR, опосредующие, немедленный фагоцитоз и сигнальные PRR, опосредующие активацию клеток врожденной системы [43,181,183]. При взаимодействии этих рецепторов с лигандами происходит активация сигнальных путей клетки, секреция эффекторных молекул, таких, как цитокины, противомикробные пептиды и др., изменение экспрессии других рецепторов: и далее развитие адаптивного иммунного ответа[20].
Открытие PRR не: только позволило по-новому взглянуть на. фундаментальные аспекты развития , хронических воспалительных заболеваний; но и создало; основу для разработки дополнительных диагностических критериев этих патологических состояний [49]. В последние годы накапливается все больше сведений о патологиях, связанных с PRR, свидетельствующие о том, что снижение экспрессии и функции PRR в силу мутаций/полиморфизмов или эпигенетических нарушений регуляции лежат в основе развития иммунодефицитных состояний, которые проявляются инфекционно-воспалительными заболеваниями. В то же время избыточная экспрессия; и активация PRR, как правило, приводит к хроническим аутовоспалительным, аутоиммунным и атопическим заболеваниям с подключением адаптивного иммунитета и нарастающей агрессией против собственных клеток и тканей [54,55].
Несмотря на то, что к сегодняшнему дню опубликованы многочисленные исследования, посвященные системе PRR клетки, однако остаются малоизученными важные вопросы, в частности, касающиеся функционирования системы РЫК. при воздействии на организм неблагоприятных факторов космического полета.
Целью работы являлось комплексное изучение ответа клеточного звена врожденного иммунитета у здорового человека при воздействии на организм факторов космического полета и их наземном моделировании.
Для достижения поставленной цели в ходе работы решались следующие задачи:
1) Исследовать систему РИЛ врожденного иммунитета у космонавтов до и после космических полётов.
2) Оценить уровень экспрессии РКК врожденного иммунитета у добровольцев-испытателей в 5- суточной "сухой" иммерсии без применения средств профилактики.
3) Изучить систему РШ^ врожденного иммунитета у добровольцев-испытателей в условиях длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания
4) Исследовать фенотипические свойства антигенпрезентирующих клеток (дендритных клеток) у добровольцев-испытателей, находившихся в условиях длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания.
Научная новизна работы
В проведенных исследованиях впервые был использован комплексный подход к оценке клеточных факторов естественной резистентности, который включал определение фенотипических и функциональных характеристик системы образраспознающих рецепторов, при воздействии на организм здорового человека факторов космического полета.
Впервые установлено, что в раннем периоде реадаптации к земным условиям после завершения длительных космических полетов изменения характера ответа, опосредуемого подгруппой сигнальных образраспознающих рецептов - ТЬЯ, определяется несколькими компонентами: увеличением сывороточного уровня эндогенного лиганда ТЬЫ - белка теплового шока Н8Р70; повышением экспрессии ТЫ12, ТЬЯ4 и ТЫ16 на моноцитах и гранулоцитах периферической крови; снижением синтеза эффекторных молекул - цитокинов ИЛ-1|3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10, индуцированного экзогенным лигандом ТЬЯ4 - ЛПС.
Впервые показано, что при моделировании физиологических эффектов микрогравитации в наземном эксперименте с 5-ти суточной «сухой» иммерсией изменения системы образраспознающих рецепторов характеризовались значительной индивидуальной вариабельностью и разнонаправлен ностью, связанной с существенными различиями адаптационных возможностей системы врожденного иммунитета, ее функциональных резервов.
Впервые показано, что длительное пребывание в условиях изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания приводит к снижению уровня в периферической крови клеточных факторов естественной 1 резистентности, экспрессирующих То11-подобные рецепторы, и угнетению синтеза эффекторных молекул.
Практическая и научная значимость работы
Результаты исследования изменений рецепторного аппарата и функциональной активности клеток моноцитарного и гранулоцитарного ростков крови, происходящих под действием факторов космического полета, существенно расширили представление о месте и роли врожденного иммунитета в физиологических реакциях организма, направленных на поддержание иммунного гомеостаза, в неблагоприятных условиях среды обитания.
Практическая значимость результатов работы, продемонстрировавших депрессию функционирования клеток, экспрессирующих сигнальные образраспознающие рецепторы, на фоне увеличения их количества в периферической крови космонавтов после завершения длительных космических полетов, заключается в обосновании необходимости комплексного подхода к оценке основных звеньев системы То11-подобных рецепторов, включающей анализ лигандов ТТЛ, определение экспрессии ТТЛ и функциональной активности ТТЛ. Этот подход может быть использован при мониторинге состояния системы врожденного иммунитета, а также при выработке стратегии профилактики и коррекции нарушений иммунореактивности при воздействии на организм неблагоприятных факторов окружающей среды.
Полученные в работе данные о том, что в периоде ранней адаптации к условиям моделируемой гипогравитации существенную роль в развитии реакции клеточных факторов врожденного иммунитета играют индивидуальные особенности реагирования, могут послужить основой для обоснования новой концепции иммунологического обследования при формировании экипажей сверхдлительных космических экспедиций. В соответствии с этой концепцией иммунологический контроль наряду с традиционными методами должен включать и методы для оценки функциональных резервов системы врожденного иммунитета.
Положения, выносимые на защиту
1. Кратковременное пребывание в условиях моделируемой микрогравитации сопровождается изменениями экспрессии То11-подобных рецепторов клеточными факторами естественной резистентности, отличающимися значительной индивидуальной вариабельностью и разнонаправленностью.
2. Длительная изоляция в гермообъекте с искусственной средой обитания приводит к снижению уровня в периферической крови клеточных факторов естественной резистентности, экспрессирующих То11-подобные рецепторы, и синтеза эффекторных молекул.
3. После длительных космических полетов в системе образраспознающих рецепторов происходят многофакторные изменения, которые включают повышение сывороточного уровня эндогенного лиганда Т1Л - белка теплового шока Н8Р70; повышение экспрессии То11-подобных рецепторов на клетках врожденного иммунитета при снижении их функциональной активности.
Заключение диссертационного исследования на тему "Исследование клеточных факторов естественной резистентности при воздействии на организм человека экстремальных факторов, связанных с космическим полетом."
Выводы
1. После завершения длительных космических полетов наблюдались изменения в функционировании системы^ То11-подобных рецепторов клеток врожденного иммунитета: повышение сывороточного уровня эндогенного лиганда ТТЛ - белка теплового шока Н8Р70; увеличение содержания в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих на своей поверхности ТЫ12, ТЬЯ4 и ТЬЯб; снижение синтеза цитокинов -ИЛ-1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10, индуцированного экзогенным лигандом ТЬЯ4 - ЛПС.
2. После завершения длительных космических полетов реорганизация экспрессии мембранных рецепторов, участвующих в процессах распознавания патогена, адгезии и фагоцитоза (СБ206, СБ 16, СБ54), сопровождалась повышением' количества фагоцитирующих моноцитов и гранулоцитов периферической крови космонавтов.
3. При наземном моделировании физиологических эффектов микрогравитации в эксперименте с 5-суточной «сухой» иммерсией изменения поверхностной экспрессии- ТЫ1 клетками врожденного иммунитета и сывороточного уровня эндогенного лиганда ТЬЯ - белка теплового шока Н8Р70 отличались значительной индивидуальной вариабельностью и разнонаправленностью.
4. Длительная изоляция в гермообъекте с искусственной средой обитания сопровождалась снижением уровня в периферической крови моноцитов и гранулоцитов, экспрессирующих Т1Л2, ТЬЯ4 и ТЬЯб, редукцией индуцированного ЛПС синтеза эффекторных молекул - цитокинов ИЛ-1(3, ИЛ-6, ИЛ-8, ФНО-а и ИЛ-10.
5. Пребывание в условиях длительной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания приводит к снижению дифференцировки и созревания дендритных клеток, индуцированных из моноцитов периферической крови, о чем свидетельствует снижение в культурах относительного содержания зрелых дендритных клеток (СЮ83+СВ14" и С086+С014~клеток).
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Комплексный подход к оценке рецепторного аппарата и функциональной активности клеточных факторов естественной резистентности может быть внедрен в практику иммунологического обследования космонавтов на этапах предполетной подготовки и во время восстановительного периода после завершения космических полетов различной продолжительности и лиц, находившихся в неблагоприятных условиях окружающей среды, для выявления признаков развития иммунодефицитных состояний.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Пономарёв, Сергей Алексеевич
1. Баевский P.M. Концепция физиология, нормы и критерии здоровья // Рос. физиол. журнал им. И.М. Сеченова. 2003. Т.89. №4. С.473-487.
2. Баевский P.M., Баранов В.М., Богомолов В.В. и др. Проблема оценки и прогнозирования состояния здоровья членов экипажа при полете к Марсу // Авиакосм, и эколог, мед. 2006.Т.40. № 4. С.22-30.
3. Баранов В.М. Организационно-методические проблемы модельных экспериментов с длительной изоляцией в гермообъекте // Модельный эксперимент с длительной изоляцией: проблемы и достижения / Е.П. Демин, В .А. Степанов и др. М., 2001. С.5-20.
4. Бережная Н.М. Интерлейкины и формирование иммунологического ответа при злокачественном росте // Аллергология и иммунология. 2000. Т.1. №1. С.45 61.
5. Волчек И.А. Клинико-иммунологическая характеристика ближайших и отдаленных последствий влияния на организм человека экстремальных факторов внешней среды (на примере Афганистана): Автореф. Дис. .д-ра мед. наук. М., 1999
6. Воробьёв Е.И., Газенко О.Г., Генин A.M. и др. Основные итоги медицинских исследований по программе «Салют-6»-«Союз» // Космич. биология. 1984. Т. 18. №2. С.22-25.
7. Воробьев Е.И., Газенко О.Г., Шульженко Ю.Б. и др. Предварительные результаты медицинских исследований во время 5-месячного космического полета на борту орбитального комплекса "Салют-7-Союз-Т" // Косм. биол. и авиакосм. мед. 1986. Т.20. №2. С.27-34.
8. Газенко О.Г., Григорьев А.И., Егоров А.Д. Реакции организма человека на условия космического полета // Физиологические проблемы космическихполетов / Под ред. О.Г. Газенко и И.И. Касьяна. М.: Медицина, 1990. С. 155160.
9. Григорьев А.И., Бугров С.А., Богомолов В.В. и др. Обзор основных медицинских результатов годового полета на станции "Мир" // Космич. биология и медицина. 1990. Т. 24. № 5. С. 3-10.
10. Демьянов A.B., Котов А.Ю., Симбирцев A.C. Диагностическая ценность исследования уровней цитокинов в клинической практике // Цитокины и воспаление. 2003. Т. 2. № 3. С. 20-35.
11. Ершов Ф. И'. Система интерферона в норме и при патологии. М.: Медицина, 1996. 240 с.
12. Железникова Г. Ф. Инфекция и иммунитет: Стратегии обеих сторон. // Мед. иммунол. 2006. Т.8. №5. С. 597—614.
13. Ильин В.К., Воложин А.И., Виха Г.В. Колонизационная резистентность организма в измененных условиях обитания // М.: Наука, 2004, 373 с.
14. Ильин В.К., Крюков А.И., Воложин А.И. и др. Исследование дисбиоза, развивающегося в условиях «сухой» иммерсии, и методы его коррекции // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2008. Т. 42. № 5, С. 70L74.
15. Ильин В.К., Батов А.Б., Новикова Н.Д., и др. Микрофлора человека в условиях применения аутопробиотиков на основе Enterococcus faecium при 105-суточной изоляции // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2010. № 4. С. 39-42. С. 52-57
16. Кашкин К.П. Цитокины и их место в диагностике и лечении ряда 'заболеваний // Новости прикладной иммунол. и аллергол. 2004. №8. С.1-10.
17. Ковальчук JL В. Учение о воспалении в свете новых данных: развитие идей И. И. Мечникова. // Журн. микробиол. 2008. №5 С. 10-15.
18. Ковальчук Л.В., Ганковская Л.В., Рубакова Э.И. Система цитокинов. М.: Медицина, 1999.
19. Ковальчук Л.В., Хорева М.В., Варивода A.C. Врожденные компоненты иммунной системы: То11-подобные рецепторы в норме и при иммунопатологии. ЖМЭИ, 2005, т.4, стр.96-104.
20. Козлов И.Г. Сигнальные рецепторы врожденного иммунитета: новая молекулярная мишень для диагностики и терапии воспалительных заболеваний.// Вестник Российской Академии Медицинских Наук. 2011. №1. 42-29.
21. Козловская И.Б. Фундаментальные и прикладные задачи иммерсионных исследований // Авиакосмическая и экологическая медицина.2008. Т.42. № 5. С. 3-7.
22. Коненков В.И., Ракова И.Г., Авдошина В.В., Гельфгат Е.Л. Комплексная оценка уровня спонтанной продукции цитокинов в культуре мононуклеарных клеток периферической крови здорового человека. // Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4. № 2. С. 33-37.
23. Константинова И.В. Система иммунитета в экстремальных условиях // Космическая иммунология. М.: Наука, 1988. 289с.
24. Ларина И.М. Гормональная регуляция обмена веществ организма человека в условиях микрогравитации и при моделировании ее физиологических эффектов. Авиакосмическая и экологическая медицина, 2003, 37, №2, 32-41
25. Лебедев К.А., Понякина И.Д. Иммунология образраспознающих рецепторов (интегральная иммунология). М.: Книжный дом «ЛИБЕРКОМ»,2009. -256с.
26. Мейл Д. Иммунология. М.: Логосфера, 2007. 549 с.
27. Моруков Б.В., Рыкова М.П., Антропова E.H., и др. Состояние системы иммунитета человека в условиях 105-суточной изоляции в гермообъекте с искусственной средой обитания // Авиакосмическая и экологическая медицина. 2010, том 44, №4. С. 39-46
28. Новикова H.Д., Поликарпов H.A., Брагина М.П., Зарубина К.В. Итоги микробиологических исследований среды обитания орбиталь-ного комплекса МИР // Материалы Третьего Междунар. Аэрокосмич. конгр. М., 2000. С. 262263.
29. Останин A.A., Черных Е.Р. Сравнительная оценка уровня 17 цитокинов в сыворотке и цельной крови здоровых доноров методом проточной флюориметрии. // Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4. № 2. С. 25-32.
30. Петров Р.В. // Иммунология. М., 1978. Т. 7. С. 5-11.
31. Петров Р.В., Хаитов P.M. Иммуногены и вакцины нового поколения. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010.-608 е.: (Серия «Библиотека врача-специалиста»)
32. Рыкова М.П., Антропова E.H., Мешков Д.О. Результаты иммунологического обследования космонавтов в период реадаптации после КПВ кн.: "Орбитальная станция МИР". 2001. Т. 1. С.615-619.
33. Рябова JI.B., Зурочка A.B., Хайдуков C.B., Черешнев В.А. Особенности иммунологических показателей в зависимости от фазы аллергического ринита // Аллергология и иммунология. 2009. Т. 10. № 4. С. 469-473.
34. Рязанцев С. В. Полипозные риносинуситы у больных с бронхообструктивным синдромом // Новости оторинолар. и логопатол. — 2000. — № 3 (23). — С. 46—55.
35. Сепиашвили Р.И. Функциональная система иммунного гомеостаза // Аллергология и иммунопатология. 2003. Т. 4. № 2. С. 5-14.
36. Сепиашвили Р.И., Бережная Н.М. Система иммунитета как регулятор тканевого гомеостаза (регенерация, репарация, ремоделирование) // Аллергология и иммунология. 2005. Т. 6. № 4. С.445-455.
37. Симбирцев, А. С. Толл-белки: специфические рецепторы неспецифического иммунитета. // Иммунология. 2005. - Т. 26, N 6. - С. 36837739. Симбирцев A.C. Цитокины: классификация и биологические функции // Цитокины и воспаление. 2004. Т. 3. №2. С. 16 — 22.
38. Талаев В.Ю., Цатуров М.Э., Матвеичев A.B., и др. Миелоидные дендритные клетки как объект исследований в инфекционной иммунологии. 2009. // "Медицинский альманах", № 2(7), с. 47-50.
39. Учакина О.Н., Учакин П.Н., Мезенцева М.В., и др. Цитокиновый баланс при болезнях Паркинсона и Вильсона Коновалова // Цитокины и воспаление. 2007. Т. 6. № 3. С.63-68.
40. Фрейдлин И.С. Иммунная система и ее дефекты. СПб., 1998. 110с.
41. Хаитов Р. М., Пащенков М. В., Пинегин Б. В. Роль паттернраспознающих рецепторов во врожденном и адаптивном иммунитете // Иммунология. — 2009. — № 1. — С. 66—
42. Хаитов Р. М., Пинегин Б. В., Пащенков М. В. Значение функциональной активности Толл-подобных рецепторов и других рецепторов врожденной иммунной системы в физиологии почек // Рос. физиол. журн. им. И. М. Сеченова. — 2007. — Т. 91, № 5. — С. 505—520.
43. Хаитов P.M. Физиология врожденного иммунитета // Российский физиологический журнал им. И.М.Сеченова 2006. 92. №6. С. 649-661.
44. Хаитов P.M., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. М.: ВНИРО, 1995. 219 с.
45. Халнлов Э.М., Говорун В.М., Бродский М.Ю. и др. Применение метода полимеразной цепной реакции для выявления хламидийной, микоплазменной и уреаплазменной инфекции в акушерско-гинекологической практике // Вест, акуш. и гин. 1994. №4 С.22-29.
46. Чередеев А. Н. и др. — М., 1984.Оценка иммунного статуса человека: Метод, рекомендации / Петров Р. В., Лопухин Ю. М.,
47. Чередеев А.Н., Горлина Н.К., Козлов И.Г. CD-маркеры в практике клинико-диагностических лабораторий. // Клин.лаб.диагностика 1999. №6. С.25-32.
48. Шаимова В.А. Роль провоспалительных цитокинов при заболеваниях глаз // Цитокины и воспаление. 2005. Т. 4. № 2. С. 13-15.
49. Шварц В. Регуляция метаболических процессов интерлейкином 6 // Цитокины и воспаление. 2009. Т. 8. № 3. С. 3-10.
50. Шульженко Е.Б., Виль-Вильямс И.Ф. Возможность осуществления длительной водной иммерсии методом «сухой» иммерсии // Косм. биол. и авиакосм. мед. 1976. Т. 10. №2. С.32-34.
51. Ярилин А. А. Основы иммунологии. М., 1999. 608 с.
52. Abreu МТ, Arnold ET, Thomas LS, et al. TLR4 and MD-2 expression is regulated by immune-mediated signals in human intestinal epithelial cells. J Biol Chem. 2002;277:20431-20437.
53. Agnese D.M. Calvano J.E., Hahm S.J. et al. Human Toll-like receptors 4mutations but not CD 14 polymorphis Toll-like receptorphisms are associated with an increased risk of gram-negative infections // J. Infect. Dis. — 2002. -Vol. 186.-P. 1522-1525
54. Akashi-Takamura S, Miyake K. TLR accessory molecules. Curr Opin Immunol. 2008;20:420-425.
55. Anders H. J., Banas В., Schlondorff D. Signaling danger: toll-like receptors and their potential roles in kidney disease // J. Am. Soc. Nephrol. — 2004. — Vol. 15, N4, —P. 854—867.
56. Ariizumi K., Shen G. L., Shikano S. et al. Identification of a novel, dendritic cell-associated molecule, dectin-1, by subtractive cDNA cloning // J. Biol. Chm. — 2000. — Vol. 275, N 26. — P. 20157—20167.
57. Asea, A., Rehli, M., Kabingu, E., et al. // Novel signal transduction pathway utilized by extracellular HSP70: role of toll-like receptor (TLR) 2 and TLR4 J. Biol. Chem -2002.-VO1. 277, P. 15028-15034;
58. Banchereau J., Briere F., Caux C. et al. Immunobiology of dendritic cells // Annu. Rev. Immunol. — 2000. — Vol. 18. — P. 767—811.
59. Banchereau J., Steinman R.M.,. Dendritic cells and the control of immunity. Nature-2008.-392: 245.
60. Barton G. ML, Kagan J. C., Medzhitov R. Intracellular localization of Tolllike receptor 9 prevents recognition of self DNA but facilitates access to viral DNA // Nat. Immunol. — 2006. — Vol. 7, N 1. — P. 49—56.
61. Bell J. K., Askins J., Hall P. R. et al. The dsRNA binding site of human Toll-like receptor 3 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2006. — Vol. 103, N 23. — P. 8792—8797.
62. Bell J. K., Botos I., Hall P. R. et al. The molecular structure of the Toll-like receptor 3 ligand-binding domain // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2005. — Vol. 102, N31. —P. 10976—10980.
63. Bell J. K., Mullen G. E., Leifer C. A. et al. Leucine-rich repeats and pathogen recognition in Toll-like receptors // Trends Immunol. — 2003. — Vol. 24, N 10. —P. 528—533.
64. Bender, A., Sapp, M., Schuler, G., Steinman, R.M.,Bhardwaj, N. 1996. Improved methods for the generationof dendritic cells from nonproliferating progenitors in human blood. J. Immunol.Methods 196, 121-135.
65. Beere H.M., Green D.R. Stress management — heat shock protein-70 and the regulation of apoptosis // Trends.Cell. Biol. — 2001. — 11. — P. 6—10
66. Beutler B. Inferences, questions and possibilities in Toll-like receptor signaling // Nature. — 2004. — Vol. 430, N 6996. — P. 257—263.
67. Blander J. M., Medzhitov R. Regulation of phagosome maturation by signals from toll-like receptors // Science. — 2004. — Vol. 304, N 5673. — P. 1014— 1018.
68. Bogunovic M, Dave SH, Tilstra JS. Enteroendocrine cells express functional Toll-like receptors. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2007;292:G1770-G1783.
69. Boyden E. D., Dietrich W. F. Nalplb controls mouse macrophage susceptibility to anthrax lethal toxin // Nat. Genet. — 2006. — Vol. 38, N 2. — P. 240—244.
70. Braun T, Voland P, Kunz L, Prinz C, Gratzl M. Enterochromaffin cells of the human gut: sensors for spices and odorants. Gastroenterology. 2007; 132:18901901.
71. Brinkmann M. M., Spooner E., Hoebe K. et al. The interaction between the ER membrane protein UNC93B and TLR3, 7, and 9 is crucial for TLR signaling // J. Cell Biol. — 2007. — Vol. 177, N 2. — P. 265—275.
72. Brown G. D. Dectin-1: a signaling non-TLR pattern-recognition receptor // Nat. Rev. Immunol. — 2006. — Vol. 6, N 1. — P. 33—43.
73. Brown HJ, Lock HR, Sacks SH, Robson MG:TLR2 stimulation of intrinsic renal cells in the induction of immune-mediated glomerulonephritis.
74. J Immunol 2006; 177: 1925-1931.
75. Burdelya LG, Krivokrysenko VI, Tallant TC, et al. An agonist of toll-like receptor 5 has radioprotective activity in mouse and primate models. Science. 2008;320:226-230.
76. Burgdorf S., Kurts C. Endocytosis mechanisms and the cell biology of antigen presentation // Curr. Opin. Immunol. — 2008. — Vol. 20, N 1. — P. 89— 95.
77. Cao W., Liu Y. J. Innate immune functions of plalsmacytoid dendritic cells // Curr. Opin. Immunol. — 2007. — Vol. 19, N 1. — P. 24—30.
78. Carvalho FA, Barnich N, Sauvanet P, Darcha C, Gelot A, Darfeuille-Michaud A. Crohn's disease-associated Escherichia coli LF82 aggravates colitis in injured mouse colon via signaling by flagellin. Inflamm Bowel Dis. 2008; 14:10511060.
79. Casrouge A., Zhang S. Y., Eidenschenk C. et al. Herpes simplex virus encephalitis in human UNC-93B deficiency // Science. — 2006. — Vol. 314, N 5797. —P. 308—312.
80. Cedzynski M., Szemraj J., Swierzko A.S. et al. Mannan-binding lectin insufficiency in children with recurrent infections of the respiratory system // Clin.• Exp. Immunol. 2004. - Vol. 136, №2. - P. 304 - 311
81. Chen Z. J. Ubiquitin signalling in the NF-kappaB pathway // Nat. Cell Biol. — 2005. — Vol. 7, N 8. — P. 758—765.
82. Cheng W., Zheng C., Tian J. et al. T-helper cell population and eosinophilia in nasal polyps // J. Invest. Allergol. Clin. Immunol. — 2007. — Vol. 17, N 5. — P. 297—301.
83. Cho J. H. The genetics and immunopathogenesis of inflammatory bowel disease // Nat. Rev. Immunol. — 2008. — Vol. 8, N 6. — P. 458-^66.
84. Choe J., Kelker M. S., Wilson I. A. Crystal structure of human toll-like receptor 3 (TLR3) ectodomain // Science. — 2005. — Vol. 309, N 5734. — P. 581—585.
85. Choi YJ, Im E, Chung HK, Pothoulakis C, Rhee SH. TRIF mediates Tolllike receptor 5-induced signaling in intestinal epithelial cells. J Biol Chem. 2010;285:37570-37578.
86. Cooper MA, Fehniger ТА, Caligiuri MA The biology of human natural killer-cell subsets // Trends Immunol. 2001. V. 22. P. 633- 64.
87. Covert M. W., Leung T. H., Gaston J. E., Baltimore D. Achieving stability of lipopolysaccharide-induced NF-kappaB activation // Science. — 2005. — Vol. 309, N 5742. — P. 1854—1857.
88. Dass NB, John AK, Bassil AK, et al. The relationship between the effects of short-chain fatty acids on intestinal motility in vitro and GPR43 receptor activation. Neurogastroenterol Motil. 2007;19:66-74.
89. Dybdahl B, Wahba A, Lien E, et al. Inflammatory response after open heart surgery: release of heat-shock protein 70 and signaling through toll-like receptor-4. Circulation.-2002- Feb 12;105(6):685-90.
90. Dunne A., Ejdeback M., Ludidi P. L. et al. Structural complementarity of Toll/interleukin-1 receptor domains in Toll-like receptors and the adaptors Mai and MyD88 // J. Biol. Chem. — 2003. — Vol. 278, N 42. — P. 41443—41451.
91. Dziarski R., Gupta D. Staphylococcus aureus peptidoglycan is a roll-like receptor 2 activator: a réévaluation // Infect, and Immun. — 2005. — Vol. 73, N 8. — P. 5212—5216.
92. Ewaschuk JB, Backer JE, Churchill TA, Obermeier F, Krause DO, Madsen KL. Surface expression of Toll-like receptor 9 is upregulated on intestinal epithelial cells in response to pathogenic bacterial DNA//Infect Immun. 2007;75:2572-2579.
93. Faustin B., Eartigue L., Bruey J. M. et al. Reconstituted NALP1 inflammasome reveals two-step mechanism of caspase-1 activation // Mol. Cell. — 2007. — Vol. 25, N 5. — P. 713—724.
94. Feuillet V, Medjane S, Mondor I, et al. Involvement,of Toll-like receptor 5 in the recognition of flagellated bacteria. Proc Natl Acad Sci USA. 2006;103:12487-12492.
95. Fischer H., Yamamoto M., Akira S. et al. Mechanism of pathogen-specific TLR4 activation in the mucosa: fimbriae, recognition receptors and adaptor protein selection // Eur. J. Immunol. — 2006. — Vol. 36, N 2. — P. 267—277.
96. Foster S. L., Hargreaves D. C., Medzhitov R. Gene-specific control of inflammation by TLR-induced chromatin modifications // Nature. — 2007. — Vol. 447, N 7147. — P. 972—978.
97. Fraser I.P., Koziel H., Ezekowitz R.A. The serum mannose-binding protein and the macrophage mannose receptor are pattern recognition molecules that link innate and adaptive immunity. Semin. Immunol. -1998. -Vol. 10. -P.363-372
98. Fritz J. H., Girardin S. E., Fitting C. et al. Synergistic stimulation of human monocytes and dendritic cells by Toll-like receptor 4 and NODI- and NOD2activating agonists // Eur. J. Immunol. — 2005. — Vol. 35, N 8. — P. 2459— 2470.
99. Fritz J. H., Le Bourhis L., Selige G. et al. Nodl-mediated innate immune recognition of peptidoglycan contributes to the onset of adaptive immunity // Immunity. — 2007. — Vol. 26, N 4. — P. 445^59.
100. Furrie E, Macfarlane S, Thomson G. Toll-like receptors-2, -3 and -4 expression patterns on human colon and their regulation by mucosal-associated bacteria. Immunology. 2005;115:565-574.
101. Gallucci S., Lolkema M., Matzinger P. Natural adjuvants: endogenous activators of dendritic cells // Nat. Med. — 1999. — Vol. 5, N 11. — P. 1249— 1255.
102. Garrett WS, Gallini CA, Yatsunenko T, et al. Enterobacteriaceae act in concert with the gut microbiota to induce spontaneous and maternally transmitted colitis. Cell Host Microbe. 2010;8:292-300.
103. Genth-Zotz S, Böiger AP, Kalra PR; von Haehling S, Doehner W, Coats AJ, Volk HD, Anker SD: Heat shock protein 70 in patients with chronic heart failure: relation to disease severity and survival. Int J Cardiol 2004, 96:397-401.
104. Gerold G., Ajaj K. A., Bienert M. et al. Toll-like receptor 2-integrin beta3 complex senses bacterial lipopeptides via vitronectin // Nat. Immunol. — 2008. — Vol. 9, N7. —P. 761—768.
105. Gerosa F., Baldani-Guerra B., Lyakh L. A. et al. Differential regulation of interleukin 12 and interleukin 23 production in human dendritic cells // J. Exp. Med. — 2008. — Vol. 205, N 6. — P. 1447—1461.
106. Gewirtz AT, Navas TA, Lyons S, Godowski PJ, Madara JL. Cutting edge: bacterial flagellin activates basolaterally expressed TLR5 to induce epithelial proinflammatory gene expression. J Immunol. 2001;167:1882-1885.
107. Girardin S. E., Boneca I. G., Carneiro L. A. et al Nodi detects a unique muropeptide from gram-negative bacterial peptidoglycan // Science. — 2003. — Vol. 300,N5625.—P. 1584—1587.
108. Gueguinou N., Bascove N., Tschirhart E. Could spaceflight-associated immune system weakening preclude the expansion of human presence beyond Earth's orbit?// J.of leucocyte biology 2009 Vol. 86 P. 1027-1038
109. Gordon S., Taylor P. R. Monocyte and macrophage heterogeneity // Nat. Rev. Immunol. — 2005. — Vol. 5, N 12. — P. 953—964.
110. Gribar SC, Sodhi CP, Richardson WM, et al. Reciprocal expression and signaling of TLR4 and TLR9 in the pathogenesis and treatment of necrotizing enterocolitis. J Immunol. 2009;182:636-646.
111. Grider JR, Kuemmerle JF, Jin JG. 5-HT released by mucosal stimuli initiates peristalsis by activating 5-HT4/5-HTlp receptors on sensory CGRP neurons. Am J Physiol. 1996;270(5 Pt 1):G778-G782. PubMed.
112. Guillot, L., Balloy, V., McCormack, et al. // Cutting edge: the immunostimulatory activity of the lung surfactant protein-A involves Toll-like receptor 4. J Immunol -2002- Vol. 168:P. 5989-5992.
113. Hansen MB, Witte AB. The role of serotonin in intestinal luminal sensing and secretion. Acta Physiol (Oxf) 2008; 193:311-323.
114. Heil F., Hemmi H., Hochrein H. et al. Species-specific recognition of single-stranded RNA via toll-like receptor 7 and 8 // Science. — 2004. — Vol. 303, N 5663.—P. 1526—1529.
115. Hirotani T., Yamamoto M., Kumagai Y. et al. Regulation of lipopolysaccharide-inducible genes by MyD88 and ToML-1 domain containing adaptor inducing IFN-beta // Biochem. Biophys. Res. Commun. — 2005. — Vol. 328, N2. — P. 383—392.
116. Hoebe K., Du X., Georgel P. et al. Identification of Lps2 as a key transducer of MyD88-independent TIR signaling // Nature. — 2003. — Vol. 424, N 6950. — P. 743—748.
117. Hoebe K., Georgel P., Rutschmann S. et al. CD36 is a sensor of diacylglycerides // Nature. — 2005. — Vol. 433, N 7025. — P. 523—527.
118. Hoebe K., Janssen E. M., Kim S. O. et al. Upregulation of costimulatory molecules induced by lipopolysaccharide and double-stranded RNA occurs by Trif-dependent and Trif-independent pathways // Nat. Imunol. — 2003. — Vol. 4, N 12. —P. 1223—1229.
119. Hollander D. Crohn's disease a permeability disorder of the tight junction? Gut. 1988;29:1621-1624.
120. Honda K., Yanai H., Mizutani T. et al. Role of a transductional-transcriptional processor complex involving MyD88 and IRF-7 in Toll-like receptor signaling // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. — 2004. — Vol. 101, N 43. — P. 15416—15421.
121. Honda K., Yanai H., Negishi H. et al. IRF-7 is the master regulator of type-I interferon-dependent immune responses // Nature. — 2005. — Vol. 434, N 7034. — P. 772—777.
122. Honko AN, Mizel SB. Effects of flagellin on innate and adaptive immunity. Immunol Res. 2005;33:83-101.
123. Hooper LV, Wong MH, Thelin A, Hansson L, Falk PG, Gordon JI. Molecular analysis of commensal host-microbial relationships in the intestine. Science. 2001;291:881-884.
124. Horng T., Barton G. M., Flavell R. A., Medzhitov R. The adaptor molecule TIRAP provides signaling specificity for Toll-like receptors // Nature. — 2002. — Vol. 420, N 6913. — P. 329—333.
125. Hornung V., Ellegast J., Kim S. et al. 5'-Triphosphate RNA is the ligand for RIG-I // Science. — 2006. — Vol. 314, N 5801. — P. 994—997.
126. Hubert P., Jacobs N., Caberg J.-H., The cross-talk between dendritic and regulatory Tcells: good or evil? // Journal of Leukocyte Biol., 2007. Vol. 82. № 4. P. 787-794.;
127. Intenational Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006 // Poc. pHHOJi. — 2006. — № 2. — C. 26—46.
128. Ivison SM, Himmel ME, Hardenberg G, et al. TLR5 is not required for flagellin-raediated exacerbation of DSS colitis. Inflamm Bowel Dis. 2010;16:401— 409.
129. Iwasaki A., Medzhitov R. Toll-like receptor control of the adaptive immune responses // Nat. Immunol. — 2004. — Vol. 5, N 10. — P. 987—995.
130. Janeway C. A. Jr. Aproaching the asymptyote? Evolution an revolution in immunology // Cold Spr. Harb. Symp. Quant. Biol. — 1989. — Vol. 54, Pt 1. — P. 1—13.
131. Jeannin P., Jaillon S., Delneste Y. Pattern recognition receptors in the immune response against dying cells // Curr. Opin. Immunol. — 2008.
132. Johnson, G. B., Brunn, G. J., Kodaira, Y., et al. Receptor-mediated monitoring of tissue well-being via detection of soluble heparan sulfate by Tolllike receptor 4 // J. Immunol. -2002-Vol.l68,P.5233-5239
133. Johnsen I. B., Nguyen T. T., Ringdal M. et al. Toll-like receptor 3 associates with c-Src tyrosine kinase on endosomes to initiate antiviral signaling // EMBO J. — 2006. — Vol. 25, N 14. — P. 3335—3346.
134. Jonges LE, Albertsson P, van Vlierberghe RL et al. The phenotypic heterogeneity of human natural killer cells: presence of at least 48 different subsets in the peripheral blood // Scand. J. Immunol. 2001. V. 53.103-110.
135. Kabelitz D. Expression and function of Toll-like receptors in T lymphocytes // Curr. Opin. Immunol. — 2007. — Vol. 19, N 1. — P. 39—45.
136. Kadowaki N., Ho S., Antonenko S. et al. Subsets of human dendritic cell precursors express different toll-like receptors and respond to different microbial antigens //J. Exp. Med. — 2001. — Vol. 194, N 6. — P. 863—869.
137. Kagan J. C., Medzhitov R. Phosphoinositide-mediated adaptor recruitment controls Toll-like receptor signaling // Cell. — 2006. — Vol. 125, N 5. — P. 943—955.
138. Kagan J. C., Su T., Horng T. et al. TRAM couples endocytosis of Toll-like receptor 4 to the induction of interferon-beta // Nat. Immunol. — 2008. — Vol. 9, N4.—P. 361—368.
139. Kanneganti T. D., Lamkanfi M., Kim Y. G. et al. Pannexin-1-mediated recognition of bacterial molecules activates the cryopyrin inflammasome independent of Toll-like receptor signaling // Immunity. — 2007. — Vol. 26, N 4. — P. 433—443.
140. Kanneganti T. D., Lamkanfi M., Nunez G. Intracellular NOD-like receptorsin host defense and disease // Immunity. — 2007. — Vol. 27, N 4. — P. 549—559.
141. Kato H., Sato S., Yoneyama M. et al. Cell type-specific involvement of RIG-1 in antiviral response // Immunity. — 2005. — Vol. 23, N 1. — P. 19—28.
142. Kato H., Takeuchi O., Mikamo-Satoh E. et al. Length-dependent recognition of double-stranded ribonucleic acids by retinoic acid-inducible gene-I and melanoma differentiation-associated gene 5 // J. Exp. Med. — 2008. — Vol. 207, N11.
143. Karines D., Assia E., Colette D., Distinct subsets of dendritic cells resembling dermal DCs can be generated in vitro from monocytes, in the presence of different cytokines // Nat. Immunol. — 2008. — Vol. 9, N 4. — P. 361—368.
144. Kawai T, Akira S. Toll-like receptor and RIG-I-like receptor signaling. Ann N Y Acad Sci. 2008; 1143:1-20.
145. Kawai T., Akira S. Pathogen recognition with Toll-like receptors // Curr. Opin. Immunol. — 2005. — Vol. 17, N 4. — P. 338—344.
146. Kawai T., Sato S., Ishii K. J. et al. Interferon-alpha induction through Tolllike receptors involves a direct interaction of IRF7 with MyD88 and TRAF6 // Nat. Immunol. — 2004. — Vol. 5, N 10. — P. 1061—1068.
147. Kelly P., Jack D.L., Naeem A. et al. Mannose-binding lectin is a component of innate mucosal defense against Cryptosporidium parvum in AIDS // Gastroenterology. 2000. -Vol. 119, № 5. - P. 1236 - 1242.
148. Kenny EF, O'Neill LA. Signalling adaptors used by Toll-like receptors: an update. Cytokine. 2008;43:342-349.
149. Kellar 154. Kim J. I., Lee C. J., et al. Crystal structure of CD14 and its implications for lipopolysaccharide signaling // J. Biol. Chem. — 2005. — Vol. 280, N 12. —P. 11347—11351.
150. Kim Y. M., Brinkmann M. M., Paquet M. E., Ploegh H. L. UNC93B1 delivers nucleotide-sensing toll-like receptors to endolysosomes // Nature. — 2008.
151. Vol. 452, N 7184. — P. 234—238.
152. Konstantinova I.V., Rykova M.P., Lesnyak A.T.,Antropova E.N. Immune changes during long duration missions // J. Leukoc. Biol. 1993. V. 54. P. 189.
153. Korono Y. The role of cytokine in eosinophilic infiltration into nasal polips.1.ht. no: International Consensus on Nasal Polyposis, Update 2006 // Poc. phhoji.2006. —№2. —C. 31.
154. Koyama S., Ishii K. J., Kumar H. et al. Differential role of TLR- and RLR-signaling in the immune responses to influenza A virus infection and vaccination // J. Immunol. — 2007. — Vol. 179, N 7. — P. 4711—4720.
155. Krieg A. M. CpG motifs in bacterial DNA and their immune effects // Annu. Rev. Immunol. — 2002. — Vol. 20. — P. 709—760.
156. Ku C . L., von Bernuth H., Picard C. et al. Selective predisposition to bacterial infections in IRAK-4-deficient children: IRAK-4-dependent TLRs are otherwise redundant in protective immunity // J. Exp. Med. — 2007. — Vol. 204, N 10. —P. 2407—2422.
157. Kumagai Y., Takeuchi O., Kato H. et al. Alveolar macrophages are the primary interferon-alpha producer in pulmonary infection with RNA viruses // Immunity. — 2007. — Vol. 27, N 2. — P. 240—252.
158. Latz E., Schoenemeyer A., Visintin A. et al. TLR9 signals after translocating from the ER to CpG DNA in the lysosome // Nat. Immunol. — 2004. — Vol. 5, N 2. —P. 190—198.
159. Latz E., Verma A., Visintin A. et al. Ligand-induced conformational changes allosterically activate Toll-like receptor 9 // Nat. Immunol. — 2007. — Vol. 8, N 7. —P.'772—779.
160. Lemaitre B., Nicolas E, MichautL., et al. // Cell. -1996. -Vol. 86. -P.973-983
161. Leaphart CL, Cavallo J, Gribar SC, et al. A critical role for TLR4 in the pathogenesis of necrotizing enterocolitis by modulating intestinal injury and repair. J Immunol. 2007;179:4808-4820.
162. LeBouder E, Rey-Nores JE, Raby AC, et al. Modulation of neonatal microbial recognition: TLR-mediated innate immune responses are specifically and differentially modulated by human milk. J Immunol: 2006;176:3742-3752.
163. Lee J., Chuang T. H., Redecke V. et al. Molecular basis for the immunostimulatory activity of guanine nucleoside analogs: activation of Toll-like receptor 7 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2003. — Vol. 100, N 11. — P. 6646— 6651.
164. Lee KS, Chung JH, Oh BH, Hong CH: Increased plasma levels of heat shock protein 70 in patients with vascular mild cognitive impairment.
165. Neurosci Lett 2008, 436:223-6.
166. Lorenz E. , Mira J., Cornish K. L., et al. A novel polymorphism in the toll-like receptor 2 gene and its potential association with staphylococcal infection. // Infect. Immunology-2002- Vol. 68 11., pp.6398-401
167. Malathi K., Dong B., Gale M. Jr., Silverman R. H. Small self-RNA generated by RNase L amplifies antiviral innate immunity // Nature. — 2007. — Vol. 448, N7155. —P. 816—819.
168. Malbert CH. The ileocolonic sphincter. Neurogastroenterol Motil. 2005;17(Suppl l):41-49.
169. Mariathasan S., Weiss D. S., Dixit V. M., Monack D. M. Innate immunity against Francisela tularensis is dependent on theASC/caspase-1 axis // J. Exp. Med.2005. — Vol. 202, N 8. — P! 1043—1049.
170. Martin P., Lerner A., Johnson L. et al. Inherited1 mannose-binding lectin deficiency as evidenced by genetic and immunologic analyses: association with severe recurrent nfections // Ann. Allergy Asthma Immunol. 2003. - Vol. 91, № 4.-P. 386-392
171. Martinon F., Petrilli V., Mayor A. et al. Gout-associated uric acid crystals activate the NALP3 inflammasome // Nature. — 2006. — Vol. 440, N 7081. — P. 237—241.
172. Matsushima N., Tanaka T., Enkhbayar P. et al. Comparative sequence analysis of leucine-rich repeats (LRRs) within vertebrate toll-like receptors // BMC Genomics — 2007. — Vol. 8. — P. 124.
173. McGeachy M. J., Cua D. J. Th 17 cell differentiation: the long and winding road // Immunity. — 2008. — Vol. 28, N 4. — P. 445^53.
174. McGreal E. P., Martinez-Pomares L., Gordon S. Divergent roles for C-type lectins expressed by cells of the innate immune system // Mol. Immunol. — 2004.
175. Vol. 41, N 11. —P. 1109—1121.
176. McWhirter S. M., Fitzgerald K. A., Rosains J. et al. IFN-regulatory factor 3-dependent gene expression is defective in Tbkl-deficient mouse embryonic fibroblasts // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2004. — Vol. 101, N 1. — P. 233— 238.
177. Medzhitov R, Preston-Hurlburt P, Janeway CA., Jr A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity. Nature. 1997;388:394-397.
178. Medzhitov R. Recognition of microorganisms and activation of the immune response//Nature. — 2007. — Vol. 149, N 18. —P. 819—826.
179. Medzhitov R. Toll-like receptors and innate immunity // Nat. Rev. Immunol.2001. —Vol. 1. —P. 135—145.
180. Medzhitov R., Janeway C. A. Jr. Innate immunity: the virtues of a nonclonal system of recognition // Cell. — 1997. — Vol. 91, N 3. — P. 295—298.
181. Medzhitov R., Preston-Hurlburt P., Kopp E. et al. MyD88 is an adaptor protein in the hToll/IL-1 receptor family signaling pathways // Mol. Cell. — 1998.
182. Vol. 2, N 2. — P. 253—258.
183. Meylan E., Burns K., Hofmann K. et al. RIP1 is an essential mediator of Toll-like receptor 3-induced NF-kappa B activation // Nat. Immunol. — 2004. — Vol. 5, N 5. — P. 503—507.
184. Meylan K., Tschopp J., Karin M. Intracellular pattern recognition receptors in the host response // Nature. — 2006. — Vol. 442, N 7098. — P. 39—44.
185. Meehan R., Whitson P., Sams C., The role of psychoneuroendocrine factors onspaceflight-induced immunological alterations// J.of leucocyte biology 1993 Vol. 54 P236-244.
186. Morukov B., Rykova M., Antropova E. et al. T-cell immunity and cytokine production in cosmonauts after long-duration space flights / / Acta Astronautica.201 l.Vol.68.P.739-746.
187. Muruve D. A., Petrilli V., Zaiss A. K. et al. The inflammasome recognizes cytosolic microbial and host DNA and triggers an innate immune response // Nature. — 2008. — Vol. 452, N 7183. — P. 103—107.
188. Napolitani G., Rinaldi A., Bertoni F. et al. Selected Toll-like receptor agonist combinations synergistically trigger a T helper type 1-polarizing program in dendritic cells //Nat. Immunol. — 2005. — Vol. 6, N 8. — P. 769—776.
189. Nishiya T., DeFranco A. L. Ligand-regulated chimeric receptor approach reveals distinctive subcellular localization and signaling properties of the Toll-like receptors // J. Biol. Chem.— 2004. — Vol. 279, N 18. — P. 19008—19017.
190. Njemini R, Lambert M, Demanet C, Kooijman R, Mets T: Basal andinfection-induced levels of heat shock proteins in human aging. Biogerontology 2007, 8:353-64.
191. Njemini et al.: Circulating Heat Shock Protein 70 in Health, Aging and Disease. BMC Immunology 2011 12:24.
192. O'Neill L. A., Bowie A. G. The family of five: TIR-domain-containing adaptors in Toll-like receptor signaling // Nat. Rev. Immunol. — 2007. — Vol. 7, N5. —P. 353—364.
193. Okamura Y., Watari M., Jemd E.S., et al The extra domain A of fibronectin activates Toll-like receptor 4 // J Biol Chem- 2001-; Vol:276 P. 10229-10233.
194. Orange JS, Ballas ZK. Natural' killer cells in human health and disease// Clin. Immunol. 2006. V. 118. P. 1-10.
195. Park JS, Gamboni-Robertson F, He Q, et al. // High Mobility Group Box 1 protein (HMGB1) interacts with multiple Toll like "receptors. Am J Physiol Cell Physiol -2006- 290:C917-C924
196. Pasare C., Medzhitov R. Control of B-cell responses by Toll-like receptors // Nature. — 2005. — Vol. 438, N 7066. — P. 364—368.
197. Pasare C., Medzhitov R. Toll pathway-dependent blockade of CD4+CD25+ T cell-mediated suppression by dendritic cells // Science. — 2003. — Vol. 299, N 5609. —P. 1033—1036.
198. Peterslund N.A., Koch C., Jensenius J.C., et al. Association between deficiency of mannose-binding lectin and severe infections after chemotherapy // Lancet. 2001. - Vol. 358, № 9282. - P. 637 - 638
199. Peter Brossart, Stefan Wirths, Gemot Stuhler,et al. Induction of cytotoxic T-lymphocyte responses in vivo after vaccinations with peptide-pulsed dendritic cells. Blood- 2002- Vol. 96 P. 3102-3108.
200. Petrilli V., Dostgert C., Muruve D. A., Tschopp J. The inflammasome: a danger sensing complex triggering innate immunity // Curr. Opin. Immunol. — 2007. — Vol. 19, N 6. — P. 615—622.
201. Pluddemann A., Mukhopadhyay S., Gordon S. The interaction of macrophage receptors with bacterial ligands // Expert Rev. Mol. Med. — 2006. — Vol. 8, N28.—P. 1—25.
202. Pockley AG: Heat shock proteins as regulators of the immune response.Lancet 2003, 362:469-76.
203. Rakoff-Nahoum S, Paglino J, Eslami-Varzaneh F, Edberg S, Medzhitov R. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis. Cell. 2004; 118:229-241.
204. Rakoff-Nahoum S., Paglino J., Eslami-Varzaneh F. et al. Recognition of commensal microflora by toll-like receptors is required for intestinal homeostasis // Cell. — 2004. — Vol. 118, N 2. — P. 229—241.
205. Rampey A., Lathers D., Woodworth B. et al. Immunolocalization of dendritic cells and pattern recognition receptors in chronic rhinosinusitis // Am. J. Rhinol. —2007. —Vol. 21, N 1. —P. 117—121.
206. Raybould HE. Visceral perception: sensory transduction in visceral afferents and nutrients. Gut. 2002;51(Suppl l):ill-il4.
207. Rhee SH, Hwang D. Murine TOLL-like receptor 4 confers lipopolysaccharide responsiveness as determined by activation of NF kappa B and expression of the inducible cyclooxygenase. J Biol Chem. 2000;275:34035-34040.
208. Rhee SH, Im E, Pothoulakis C. Toll-like receptor 5 engagement modulates tumor development and growth in a mouse xenograft model of human colon cancer. Gastroenterology. 2008;135:518-528.
209. Rhee SH, Im E, Riegler M, Kokkotou E, O'brien M, Pothoulakis C. Pathophysiological role of Toll-like receptor 5 engagement by bacterial flagellin in colonic inflammation. Proc Natl Acad Sci USA. 2005;102:13610-13615.
210. Rhee SH, Jones BW, Toshchakov V, Vogel SN, Fenton MJ. Toll-like receptors 2 and 4 activate STAT1 serine phosphorylation by distinct mechanisms in macrophages. J Biol Chem. 2003;278:22506-22512.
211. Rhee SH, Keates AC, Moyer MP, Pothoulakis C. MEK is a key modulator for TLR5-induced interleukin-8 and МІРЗ alpha gene expression in non-transformed human colonic epithelial cells. J Biol Chem. 2004;279:25179-25188.
212. Rhee SH, Kim H, Moyer MP, et al. Role of MyD88 in phosphatidylinositol 3-kinase activation by flagellin/toll-like receptor-5 engagement in colonic epithelial cells. // J Biol Chem. 2006; Vol.281 P. 18560-18568.
213. Roman L., Bistoni F., Puccetti P. Fungi, dendritic cells and receptors: a host perspective of fungal virulence // Trends Microbiol. — 2002. — Vol. 10, N 11. — P. 508—514.
214. Roy S., Knox K., Segal S. et al. MBL genotype and risk of invasive pneumococcal disease: a case-control study // Lancet. 2002. - Vol. 359, № 9317. -P. 1569-1573
215. Rykova M., Meshkov D., Antropova E. et al. The effects of microgravity on the immune system // Int. Symp.'Tnternational Scientific Cooperation onboard IR"LyonFrancel 9—21. march 2001. Proceedings. P. 237.
216. Sánchez-Muñoz F, Fonseca-Camarillo GC, Villeda-Ramirez MA, et al. TLR9 mRNA expression is upregulated in patients with active ulcerative colitis. Inflamm Bowel Dis. 2010; 16:1267-1268.
217. Schmitz J., Owyang A., Oldham E. et al. IL-33, an interleukin-l-like cytokine that signals via the IL-1 receptor-related protein ST2 and induces T helper type 2-associated cytokines // Immunity. — 2005. — Vol. 23, N 5. — P. 479— 490.
218. Shevach E. M. Certified professionals: CD4(+)CD25(+) suppressor T cells // J.Exp. Med.—2001, —Vol. 193, N 11.— P. F41—F46.
219. Shinohara M. L., Lu L., Bu J. et al. Osteopontin expression is essential for interferon-alpha production by plasmacytoid dendritic cells // Nat. Immunol. — 2006. — Vol. 7, N 5. — P. 498—506.
220. Simons R.E., Kaur I., Pierson D.L. et al. Effect of Spaceflight on Ability of Monocytes To Respond to Endotoxins of Gram-Negative Bacteria//Clinical and Vaccine Immunology 0ct.2008 p. 1523-1528.
221. Schaefer RM, Grone HJ: The matrix component biglycan is proinflammatory and signals // J Clin Invest 2005- Vol. 115:P. 2223- 2233
222. Smiley ST, King JA, Hancock WW Fibrinogen stimulates macrophage chemokine secretion through toll-like receptor 4 // J Immunol.- 2001- Vol. 167: P.2887-2894.
223. Smirnova, I., Poltorak, A., Chan, E.K.L., Phylogenetic variation and polymorphism at the Toll-like receptor 4 locus (TLR4). //Genome Biol. -2001-Vol.l. P.38-45.
224. Strober W., Murray P. J., Kitani A., Watanabe T. Signalling pathways and molecular interactions of NODI and NOD2 // Nat. Rev. Immunol. — 2006. — Vol. 6, N 1. — P. 9—20.
225. Sutmuller R. P., de Brok M. H., Kramer M. et al. Toll-like receptor 2 controls expansion and function of regulatory T cells // J. Clin. Invest. — 2006. — Vol. 116, N 2. — P. 485—494.
226. Tabeta K., Hoebe K., Janssen E. M. et al. The Unc93bl mutation 3d disrupts exogenous antigen presentation and signaling via Toll-like receptors 3, 7 and 9 // Nat. Immunol. — 2006. — Vol. 7, N 2. — P. 156—164.
227. Takahashi K., Kawai T., Kumar H. et al. Roles of caspase-8 and caspase-10 in innate immune responses to double-stranded RNA // J: Immunol. — 2006. — Vol. 176, N 8. — P. 4520—4524.
228. Takaoka A., Wang Z., Choi M. K. et al. DAI (DLM-1/ZBP1) is a cytosolic DNA sensor and an activator of innate immune response // Nature. — 2007. — Vol. 448, N 7152. — P. 501—505.
229. Takaoka A., Yanai H., Kondo S. et al. Integral role of IRF-5 in the gene induction programme activated by Toll-like receptors // Nature. — 2005. — Vol. 434, N 7030. — P. 243—249.
230. Takeuchi O., Akira S. Recognition of viruses by innate immunity // Immunol. Rev. — 2007. — Vol. 220. — P. 214—224
231. Taylor K.R., Trowbridge J.M., Rudisiii J.A. et al. Hyaluronan fragments stimulate endothelial recognition of injury through TLR4 // J Biol Chem 2004; 279:17:17079—17084
232. Termeer C, Benedix F, Sleeman J et al. Oligosaccharides of hyaluronan activate dendritic cells via toll-like receptor 4 // J Exp Med 2002, Vol.195 P.99-111.
233. Travassos L. H., Girardin S. E., Philpott D. J. et al. Toll-like receptor 2-dependent bacterial sensing does not occur via peptidoglycan recognition // EMBO Rep. — 2004. — Vol. 5, N 10. — P. 1000—1006.
234. Triantafilou M, Gamper FG, Haston RM, et al. Membrane sorting of toll-like receptor (TLR)-2/6 and TLR2/1 heterodimers at the cell surface determinesheterotypic associations with CD36 and intracellular targeting. J Biol Chem. 2006;281:31002-31011.
235. Trinchieri G., Sher A. Cooperation of Toll-like receptor signals in innate immune defence // Nat. Rev. Immunol. — 2007. — Vol. 7, N 3. — P. 179—190.
236. Uematsu S., Sato S., Yamamoto M. et al. Interleukin-1 receptor-associated kinanse-1 plays an essential role for' Toll-like receptor (TLR)7- and TLR9-mediated interferon-{alpha} induction // J. Exp. Med. — 2005. — Vol. 201, N 6.1. P. 915—923.
237. Vabulas Ramunas M; Ahmad-Nejad Parviz, Ghose Sanghamitra, et al: HSP70 as endogenous stimulus of the Toll/interleukin-1 receptor signal pathway. J Biol Chem. 2002 Apr 26;277(17): 15107-15112.
238. Van Eden W, Wick G, Albani S, Cohen I: Stress, heat shock proteins, and autoimmunity: how immune responses to heat shock proteins are to beused for the control of chronic inflammatory diseases. Ann N Y Acad Sci 2007,1113:217-37.
239. Vijay-Kumar M, Aitken JD, Sanders CJ, et al. Flagellin treatment protects against chemicals, bacteria, viruses, and radiation. J Immunol. 2008; 180:82808285.
240. Vij ay-Kumar M, Sanders CJ, Taylor RT, et al. Deletion of TLR5 results in spontaneous colitis in mice. J Clin Invest. 2007; 117:3909-3921.
241. Wang B, Mao YK, Diorio C, et al. Luminal administration ex vivo of a live Lactobacillus species moderates mouse jejunal motility within minutes. FASEB J. 2010;24:4078-4088.
242. Wang V., Matsukura S., Watanabe S. et al. Involvement of Toll-like receptors in the immune response of nasal polyp epithelial cells // Clin. Immunol.2007.—Vol. 124,N3. —P. 345—352.
243. Wang Z., Choi M. K., Ban T. et al. Regulation of innate immune responses by DAI (DLM-1/ZBP1) and other DNA-sensing molecules // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 2008. — Vol. 105, N 14. — P. 5477—5482.
244. Werts C., Girardin S. E., Philpott D. J. TIR, CARD and PYRIN: three domains for an antimicrobial triad // Cell Death Differ. — 2006. — Vol. 13, N 5.1. P. 798—815.
245. Willing BP, Dicksved J, HalfVarson J, et al. A pyrosequencing study in twins shows that gastrointestinal^ microbial« profiles vary with inflammatory bowel disease phenotypes. Gastroenterology. 2010;139:1844-1854.el.
246. Worthley DL, Bardy PG, Mullighan CG. Mannose-binding lectin: biology and clinical implications. Intern Med J. 2005 Sep ;35(9):548-55256. Wu L., Dakie A. Development of dendritic cell system // Cell. Mol. Immunol., -2004- Vol. 1. P. 112-118.
247. Xu J, Yang Y, Sun J, et al. Expression of Toll-like receptors and their association with cytokine responses in peripheral blood mononuclear cells of children with acute rotavirus diarrhoea. Clin Exp Immunol. 2006;144:376-381.
248. Xu Y., Tao X., Shen B. et al. Structural basis for signal transduction by the Toll/interleukin-1 receptor domains // Nature. — 2000. — Vol. 408, N 6808. — P. 111—115.
249. Yamamoto M., Sato S., Hemmi H. et al. TRAM is specifically involved in the Toll-like receptor 4-mediated MyD88-independent signaling pathway // Nat. Immunol. — 2003, — Vol. 4,N 11. —P. 1144—1150.
250. Yarovinsky F., Zhang D., Andersen J. F. et al. TLR11 activation of dendritic cells by a protozoan profilin-like protein // Science. — 2005. — Vol. 308, N 5728.1. P. 1626—1629.
251. Yasuda K., Rutz M., Schlatter B. et al. CpG motif-independent activation of TLR9 upon endosomal translocation of "natural" phosphodiester DNA // Eur. J. Immunol. — 2006. — Vol. 36, N 2. — P. 431—436.
252. Zhang D., Zhang G., Hayden M. S. et al. A toll-like receptor that prevents infection by uropathogenic bacteria // Science. —■ 2004. — Vol. 303, N 5663. — P. 1522—1526.
253. Zhu J, Quyyumi AA, Wu H, et al. Increased serum levels of heat shock protein 70 are associated with low risk of coronary artery disease. //Arterioscler Thromb Vase Biol 2003, 23:1055-9.
254. Список работ, опубликованных по материалам диссертации:
255. T-cell immunity and cytokine production in cosmonauts after long-duration space flights. Acta Astronáutica, 2011.V.68.P.739-746 (co-authors: Morukov В., Rykova M., Antropova E., Berendeeva Т., Larina I.).
256. Изменение показателей врожденного иммунитета у добровольцев-испытателей в эксперименте с длительной изоляцией в гермообъекте. Сб. тезисов IX Конференции молодых ученых, специалистов и студентов, посвященной дню космонавтики, Москва, 2010, с. 61 — 62
257. Изменение показателей врождённого иммунитета у добровольцев-испытателей в эксперименте с пятисуточной "сухой" иммерсией Сб.