Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Исследование фармакологических свойств и химического состава экстракта сухого ламинарии японской

На правах рукописи

САВЧУК Ирина Александровна

ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ И ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА ЭКСТРАКТА СУХОГО ЛАМИНАРИИ ЯПОНСКОЙ

14.03.06 — фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005050214

Смоленск — 2012

005050214

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тверская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Научный руководитель доктор медицинских наук, профессор Демидова Марина Александровна

Официальные оппоненты Зарубина Ирина Викторовна, доктор биологических наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное военное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Военно-медицинская академия им. С. М. Кирова» Министерства обороны Российской Федерации, кафедра фармакологии, старший научный сотрудник;

Кисилёва Анастасия Николаевна, кандидат фармацевтических наук, доцент, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации, кафедра фармацевтической химии и фармакогнозии, заведующая кафедрой.

Ведущая организация: ОАО «Всероссийский научный центр по безопасности биологически активных веществ».

Защита состоится 2013 г. в часов на за-

седании диссертационного совета Д /08.097.02 при Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации по адресу: 214019, г. Смоленск, ул. Крупской, 28.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Смоленской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан « » _ 2012 г.

Ученый секретарь () диссертационного совета у [/.____ Яйленко Анна Андриановна

ии^у

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

Несмотря на значительные достижения в области создания синтетических лекарственных препаратов отмечается возрастающий интерес к средствам растительного происхождения. Актуальны вопросы создания лекарственных средств на основе, как индивидуального лекарственного растительного сырья, так и его сборов (Блинова О. А., 2009). Лекарственное растительное сырье содержит набор биологически активных соединений, зачастую относящихся к нескольким химическим классам природных веществ (терпеноиды, полисахариды, фенольные соединения, алкалоиды и др.) (Куркин В. А., Авдеева Е. В., Суворова Г. Н., Дубищев А. В., 2008). Действующие вещества различных групп обладают определенным спектром биологической активности. Наряду с основными биологически активными соединениями в растительных препаратах содержатся сопутствующие вещества, которые могут обогащать, усиливать или пролонгировать фармакологическое действие и в дополнение к этому понижать токсичность используемой медикаментозной терапии (Царева А. А., 2007).

Одним из наиболее ценных сырьевых источников для получения фитопрепаратов являются морские водоросли. Из морских водорослей, в частности семейства ламинариевых, возможно получение лекарственных препаратов, биологически активных добавок, косметических средств и функциональных пищевых продуктов. Современной формой переработки лекарственного растительного сырья является получение сухих экстрактов. Эту лекарственную форму отличает точность дозирования, удобство применения, стойкость к микробной контаминации, достаточно длительный срок годности. Совершенствование технологии получения растительных экстрактов направлено на наиболее полное извлечение из растительного сырья основных биологически активных веществ. Получение сухих экстрактов обеспечивает рациональное использование лекарственного растительного сырья и представляет интерес для разработки ресурсосберегающих технологий производства лекарственных средств растительного происхождения. В связи с этим перспективным направлением является получение новой лекарственной формы — экстракта сухого ламинарии японской.

При экспериментальных и клинических исследованиях у препаратов ламинарии японской были выявлены различные фармакологические эффекты, обусловленные входящими в состав водоросли биологически активными веществами. Известно, что лекарственные препараты и биологически активные добавки из бурых водорослей используют в качестве иммуномо-дуляторов, регуляторов деятельности щитовидной железы, в качестве слабительных и послабляющих средств, в виде онкопрофилактических и радио-

протекторных добавок (Успенский Ю. П., Барышникова Н. В., Пахомо-ва И. Г., 2009; Токмалаев А. К., 2011). Кроме того, существуют сведения о наличии у препаратов ламинарии японской противовоспалительных, про-тивомикробных и антифунгальных свойств (Мартыяс Е. А., Герасименко Н. И., Бусарова Н. Г., Юрченко Е. А., Скрипцова А. В., Анисимов М. М., 2012). Наиболее широким спектром фармакологической активности обладают входящие в состав ламинарии японской альгинаты. Другим наиболее значимым компонентом ламинарии японской является йод, который находится в слоевищах водоросли преимущественно в виде йодидов и органически связанного йода. Определенное влияние на фармакологическую активность препаратов ламинарии японской может оказывать аминокислотный состав и комплекс макро- и микроэлементов.

Совершенствование технологии извлечения биологически активных веществ из ламинарии японской является основой создания из морских водорослей новых лекарственных препаратов. В связи тем, что фармакологическая эффективность фитопрепаратов зависит от содержания в них действующих веществ, необходима оценка фармакологической активности каждого нового растительного препарата.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГБОУ ВПО Тверской государственной медицинской академии Министерства здравоохранения Российской Федерации (номер государственной регистрации 01201250383).

Цель работы

Обоснование получения нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) на основании исследования его фармакологических свойств и химического состава.

Задачи исследования

1. Оценить безопасность нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого — Ех1гасШш Ьатшаги зюсит) в эксперименте на животных (при однократном и курсовом применении).

2. Исследовать влияние нового экстракционного препарата ламинарии японской на структуру щитовидной железы при курсовом применении у крыс.

3. Определить изменения содержания тироксина и трийодтиронина в крови кроликов при внутрижелудочном введении нового экстракта ламинарии японской.

4. Исследовать влияние нового экстракта ламинарии японской на содержание холестерина общего, триглицеридов, липопротеинов, лактата, С-реактивного белка и значение коэффициента атерогенности при экспериментальной гиперлипидемии у кроликов.

5. Оценить слабительную активность экстракта сухого и дробленных слоевищ ламинарии японской при остром запоре у мышей.

6. В экспериментах на мышах провести сравнительную оценку слабительной активности препаратов ламинарии японской (экстракта сухого и дробленных слоевищ) с эффектами бисакодила и макрогола.

7. Определить содержание йода, альгиновых кислот, микро- и макроэлементов, аминокислот и полисахаридов в новом экстракционном препарате ламинарии японской.

Научная новизна

Впервые в лабораторных условиях получен новый экстракционный препарат ламинарии японской (экстракт сухой), который по своим технологическим параметрам и показателям качества соответствует требованиям Государственной фармакопеи (общей фармакопейной статье «Экстракты»). Впервые экспериментально показано, что при однократном и курсовом применении экстракт сухой ламинарии японской относится к малотоксичным веществам (IV класс токсичности). Выявлено, что внутрижелудочное введение сухого экстракта ламинарии японской (750 мг/кг) уменьшает выраженность нарушений липидного спектра крови у кроликов с гиперлипидемией. Обнаружено, что слабительная активность экстракта ламинарии японской (750 мг/кг) соответствовала действию макрогола и превышала слабительный эффект измельченной водоросли. Отмечено, что применение сухого экстракта ламинарии японской (45 мг/кг и 750 мг/кг) приводит к увеличению функциональной активности щитовидной железы, что подтверждается изменениями в уровне тиреоидных гормонов и изменениями в морфологической структуре щитовидной железы.

Впервые с использованием современных физико-химических методов анализа определено качественное и количественное содержание биологически активных веществ (полисахариды, органические кислоты, аминокислоты, макро- и микроэлементы) в новом экстракционном препарате ламинарии японской (экстракте сухом).

Научно-практическая значимость

Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Показана перспективность поиска и создания новых лекарственных средств на основе морских водорослей. Результаты исследования позволяют рекомендовать сухой экстракт ламинарии японской для расширенных доклинических исследований в качестве средства для коррекции нарушений липидного спектра крови, средства, обладающего слабительной активностью, а также для профилактики йододефицитных состояний. На основании результатов исследований фармакологической

активности и химического состава нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) разработаны проект фармакопейной статьи на новую лекарственную форму — экстракт ламинарии сухой (Ех1гасШш Ьагшпагп зюсит) и проект инструкции по его применению в качестве гиполипидемического, слабительного средств и средства для профилактики йододефицитных заболеваний.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Способность сухого экстракта (750 мг/кг) при внутрижелудочном введении уменьшать выраженность нарушений липидного спектра крови кроликов с экспериментальной гиперлипидемией.

2. Более высокая слабительная активность экстракта сухого ламинарии японской по сравнению с эффектами слоевищ ламинарии японской и ламинарии сахаристой.

3. Изменение содержания тиреоидных гормонов и структуры щитовидной железы у подопытных животных при курсовом введении экстракта сухого ламинарии японской.

Внедрение результатов в практику

Результаты, полученные при исследовании фармакологической активности и химического состава сухого экстракта ламинарии японской, используются в учебном процессе: в лекционном курсе и на практических занятиях по темам «Средства для лечения атеросклероза. Гиполипи-демические препараты», «Анализ лекарственного сырья, содержащего полисахариды», а также в научных исследованиях на кафедре фармации и научно-исследовательского центра Тверской ГМА. Результаты исследований по разработке новой лекарственной формы ламинарии японской внедрены в процесс производства ООО НПО «Биомедицинские инновационные технологии» и в практику лаборатории отдела контроля качества ОАО «Тверская фармацевтическая фабрика».

Апробация работы

Основные положения и результаты диссертации были доложены и обсуждены на Международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (15-16 ноября 2011, Москва), на XIX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (23—27 апреля 2012, Москва), на расширенном заседании кафедры фармации ТГМА (22 марта 2012, Тверь).

Личное участие автора в получении результатов

Личный вклад автора состоит в непосредственном выполнении всех экспериментальных исследований по оценке токсичности, фармакологи-

ческой активности и химического состава нового экстракта сухого ламинарии японской, анализе полученных данных, их статистической обработке и интерпретации, подготовке проекта фармакопейной статьи и основных публикаций по теме исследования.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ, в том числе 7 — в рецензируемых научных изданиях.

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 122 стр. машинописного текста, документирована 15 таблицами и иллюстрирована 5 рисунками. Работа состоит из введения, литературного обзора, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов, обсуждения полученных результатов, выводов и списка литературы, включающего 195 источников, в том числе 63 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Экспериментальные исследования выполнены на 30 белых неинбрен-дных крысах обоего пола массой 234,4±4,9 г, 88 белых неинбрендных мышах обоего пола массой 26,1 ±0,9 г и 14 беспородных кроликах обоего пола массой 3,8+0,1 кг. Подопытных животных содержали в условиях вивария Тверской государственной медицинской академии (с естественным режимом освещения; при температуре 22—24°; относительной влажности воздуха 40—50 %) с использованием стандартной диеты (ГОСТ Р 50258-92). Исследования проводили в соответствии с правилами качественной лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ (ГОСТ Р 51000.3-96 и 1000.4-96), атакже правилами и Международными рекомендациями Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых при экспериментальных исследованиях (1997). Перед постановкой эксперимента животные проходили карантин в течение 10—14 дней.

В работе изучали фармакологическую активность и химический состав нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого), полученного на базе ООО НПО «Биомедицинские инновационные технологии» (Россия). При разработке технологической схемы получения экстракта сухого учитывали, что на полноту извлечения всего комплекса биологически активных веществ влияют особенности исходного сырья, вида экстрагента, условий экстрагирования биологически

активных веществ и других технологических факторов. С учетом перечисленных факторов был разработан технологический процесс производства экстракта сухого, включающий следующие операции: входной контроль и приемка сырья и материалов, подготовка сырья и экстрагента, экстрагирование сырья, гомогенизация смеси, пастеризация, сублимационная сушка, фасовка, контроль качества готовой продукции, упаковка и маркировка, контроль качества упаковки и приемка готовой продукции.

Экстрагирование действующих веществ осуществляли из сухой дробленной морской водоросли ламинарии японской методом мацерации в течение 2 часов горячей водой (1=80 °С) с добавлением №ОН до рН 8,5— 9. Предварительно сырье замачивали в воде очищенной (1=40 °С) в течение 12 часов. После окончания экстрагирования добавляли кислоту лимонную и кальция глюконат. В последующем проводили гомогенизацию, пастеризацию и сублимационную сушку полученного продукта.

Полученный экстракт представлял собой гигроскопичный, аморфный порошок серовато-зеленого цвета со специфическим запахом.

Анализ показателей качества и технологических характеристик полученного экстракта проводили в соответствии с требованиями общей фармакопейной статьи Государственной фармакопеи (ГФ XI) «Экстракты».

Присутствие биологически активных веществ основных групп в экстракте ламинарии японской устанавливали с помощью общепринятых качественных реакций в соответствии с требованиями Государственной фармакопеи.

Содержания альгиновой кислоты в сухом экстракте определяли методом обратной нейтрализации (ГОСТ 26185-84).

Определение массовой доли йода в экстракте ламинарии японской проводили титриметрическим методом (ГОСТ 26185-84).

Содержание шестиатомного спирта маннита определяли в соответствии с требованиями ГОСТа 26185-84.

Оценку содержания суммы полисахаридов и органических кислот осуществляли гравиметрическим и титриметрическим методом соответственно (ГФ XI).

Определение содержания аминокислотного состава экстракта сухого проводили на аминокислотном анализаторе фирмы «Хитачи» (модель 835) (Япония) на колонке 0,26x15 см.

Количественное содержание микро- и макроэлементов определяли после предварительной минерализации атомно-абсорбционным методом (Руководство Р 4.1.1672-03).

В качестве препаратов сравнения при оценке фармакологической активности экстракта сухого ламинарии японской использовали измельченное сырье ламинарии японской и ламинарии сахаристой, пероральные

слабительные средства бисакодил («Бисакодил-Хемофарм»; Hemofarm (Сербия), серия 2905981), макрогол 4000 («Форлакс» (порошок для приготовления раствора для приема внутрь 10 г); BEAUFOURIPSEN (Франция), серия Е 03609). Животным контрольной группы вводили изотонический раствор натрия хлорида.

Значение LDJ0 экстракта сухого ламинарии японской при внутриже-лудочном введении мышам определяли по методу В. Б. Прозоровского и М. П. Прозоровской (1980). Безопасность курсового применения нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) оценивали при ежедневном внутрижелудочном введении сухого экстракта в дозе 750 мг/кг (в пересчете на альгиновую кислоту 200 мг/кг, в пересчете на молекулярный йод 197 мкг/кг) и 45 мг/кг (в пересчете на альгиновую кислоту 12 мг/кг, в пересчете на молекулярный йод 11,92 мкг/кг) подопытным крысам в течение 30 дней.

Влияние экстракта ламинарии японской на строение щитовидной железы исследовали в эксперименте на крысах, которым ежедневно в течение месяца внутрижелудочно вводили экстракт ламинарии японской в дозах 750 мг/кг (в пересчете на молекулярный йод 197 мкг/кг) и 45 мг/кг (в пересчете на молекулярный йод 11,92 мкг/кг). Животные контрольной группы получали внутрижелудочно изотонический раствор натрия хлорида в том же объеме, что и подопытные крысы. На 31 день животных под эфирным наркозом забивали и исследовали морфологическую структуру щитовидной железы. Для световой микроскопии фиксацию объектов проводили в жидкости Буэна при комнатной температуре в течение 24 часов. После стандартной гистологической проводки материал заливали в парафин. Парафиновые срезы толщиной 5 мкм окрашивали гематоксилин-эозином. Определение объемной плотности фолликулов щитовидной железы и коллоида проводили методом «полей» (Автандилов Г. Г., 1990), также измеряли высоту тироцитов и диаметр их ядер.

Оценку влияния экстракта сухого ламинарии японской на функцию щитовидной железы проводили в эксперименте на кроликах, получавших внутрижелудочно сухой экстракт (750 мг/кг) ежедневно в течение 30 дней. Интактные животные, получавшие изотонический раствор натрия хлорида, составили группу контроля. Изменение функции щитовидной железы контролировали по уровню гормонов трийодтиронина (Т3) и тетрай-одтиронина (Т4). Биохимические исследования выполняли в начале и в конце эксперимента, забор крови осуществляли из краевой вены уха в объеме 3—4 мл.

Содержание гормонов определяли методом иммуноферментного анализа используя тест-системы (Beckman Coulter, США) с аналитической чувствительностью 0,5 мкг/л. Результаты иммуноферментного анализа

учитывали с помощью иммунохимического анализатора Access (Beckman Coulter, США).

Влияние экстракта ламинарии японской на общее количество каловых масс у интактных животных оценивали в эксперименте на мышах, которых содержали на стандартной зерновой диете. Исследуемый сухой экстракт вводили однократно внутрижелудочно в дозе 750 мг/кг (в пересчете на альгиновую кислоту 200 мг/кг). В качестве препаратов сравнения использовали бисакодил (1мг/кг), макрогол 4000 (1 г/кг) и дробленное сырье ламинарии японской в дозе 870,5 мг/кг. Животным контрольной группы внутрижелудочно вводили изотонический раствор натрия хлорида. Общая продолжительность наблюдения за животными при исследовании слабительной активности составила 24 часа. Через сутки во всех группах животных определяли общее количество кала за время эксперимента, также учитывали размер частиц и консистенцию.

Для изучения специфической слабительной активности препаратов ламинарии японской (сухой экстракт и дробленное сырье) осуществляли моделирование острого запора у мышей. Запор вызывали двукратным внутрижелудочным введением 10 % взвеси активированного угля в 1 % крахмальной слизи (по 0,3 мл через 1 час). Подопытные животные, получавшие изотонический раствор натрия хлорида, на фоне введения 10 % взвеси активированного угля служили группой контроля. Исследуемые препараты вводили животным внутрижелудочно за 30 мин. перед повторным введением взвеси активированного угля. Определение общего количества каловых масс производили через сутки у животных всех групп. На следующем этапе исследования оценивали влияние сухого экстракта ламинарии японской на течение экспериментальной гиперлипидемии у кроликов. С этой целью у подопытных животных моделировали гиперли-пидемию типа 116. Повышение уровня липидов в крови подопытных животных вызывали внутривенным введением 10 % эмульсии Липофунди-на (состав: соевое масло — 50 г, среднецепочные триглицериды — 50 г, фосфатиды яичного желтка — 12 г, глицерол — 25 г, вода для инъекций — 1 000 мл) в дозе 0,5 мл/кг ежедневно в течение 30 дней. Подопытные кролики с гиперлипидемией, получавшие изотонический раствор натрия хлорида, составили группу контроля. Экстракт ламинарии японской в дозе 750 мг/кг подопытным кроликам с гиперлипидемией вводили ежедневно в течение 30 дней. Кроме того было изучено влияние исследуемого препарата на липидный спектр крови интактных животных.

Развитие гиперлипидемии контролировали по содержанию липопроте-инов в плазме крови подопытных животных. Биохимические исследования выполняли еженедельно в течение всего эксперимента, забор крови осуществляли из краевой вены уха в объеме 3—4 мл. Липидный спектр сыворотки

крови (холестерин общий (ХС), триглицериды (ТГ), липопротеины высокой плотности (ЛПВП)) исследовали, используя реактивы производства Biocon® (Германия). Концентрацию липопротеинов низкой плотности (ЛПНП), липопротеинов очень низкой плотности (ЛПОНП) и коэффициент атерогенности определяли расчетным методом.

Биохимические исследования (анализ липидного спектра и уровня лактата) выполняли на автоматическом биохимическом анализаторе Flexor Е (Vital Scientific, Нидерланды).

Концентрацию С-реактивного белка определяли методом иммуно-ферментного анализа используя тест-системы производства ООО «Хема» (Россия) с аналитической чувствительностью 0,05 мг/л. Результаты им-муноферментного анализа учитывали с помощью микропланшетного мультидетектора Zenyth 1100 (Anthos, Австрия).

Результаты исследования обработаны статистически с применением стандартного пакета программ «Microsoft Office Excel 2007». Размер выборки для сравнительного исследования при 5 % уровне значимости рассчитывали с использованием программы «COMPARE 2 "Vfersion 2.57 WînPEPI 11.0». Для ряда выборок вычисляли среднюю арифметическую и среднюю квад-ратическую ошибку. Определение нормальности распределения переменных проводили на основании гистограмм распределения, величин асимметрии и эксцессы. Для оценки достоверности различий выборок применяли параметрические и непараметрические методы. За достоверное принимали различие при уровне вероятности 95 % и более (р <0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Исследование химического состава и оценка соответствия нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) требованиям нормативной документации

Определение для экстракта сухого ламинарии японской таких показателей качества, как влажность (4,69+0,07 %); содержание золы общей (20,33+0,30 %); золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты хлористоводородной (3,42±0,54 %); изучение технологических характеристик, таких как угол естественного откоса (36,5±0,5°), насыпная масса (0,2478+0,01 г/см3); результаты проведенного микробиологического и санитарно-гигиенического исследования подтвердили его соответствие требованиям НД (табл. 1).

Изучение растворимости сухого экстракта показало, что он растворим в горячей воде (80-90 °С), теплой воде (40-50 °С), холодной воде (1215 °С) в соотношении 1:30; кроме того сухой экстракт ламинарии японской растворим в спирте различной концентрации (95 %, 90 %, 70 %) при соотношении 1 : 30.

Таблица 1

Микробиологическая чистота экстракта сухого ламинарии японской

№ Исследуемый показатель Результаты исследования Гигиенический норматив

1. КМАФАнМ, КОЕ/г 1000 5000

2. БГКП (колиформы), в 1,0 г не обнаружено не допустимо

3. Плесени, КОЕ/г не обнаружено 100

4. Патогенные, в т.ч. сальмонеллы, в 25 г не обнаружено не допустимо

5. S. aureus, в 1,0 см3 не обнаружено не допустимо

6. L. monocytogenes, в 25 г не обнаружено не допустимо

Химический состав экстракционных препаратов во многом зависит от исходного сырья (его качество, степень измельчения), вида экстрагента, условий экстрагирования биологически активных веществ и других технологических факторов. В связи с этим для каждой новой лекарственной формы, полученной из растительного сырья, необходимо определение качественного и количественного состава биологически активных веществ. В полученном экстракте сухом определяли содержание йода и других микро- и макроэлементов, аминокислот, шестиатомного спирта маннита, органических кислот, полисахаридов, в том числе альгиновых кислот.

Было выявлено, что в отличие от других экстракционных препаратов в полученном сухом экстракте ламинарии японской маннит не обнаруживался, что вероятно, связано с особенностями используемой технологии экстрагирования.

Анализ проведенных химических исследований сухого экстракта показал, что преобладающими веществами являются полисахариды, также было установлено высокое содержание аминокислот и свободных органических кислот. Так, содержание в экстракте ламинарии японской суммы полисахаридов составило 25,40 %, надолю альгиновых кислот приходилось 26,71 %, свободных органических кислот в пересчете на яблочную — 0,84 %.

По мнению ряда авторов, наличие в составе препаратов ламинарии японской альгиновой кислоты обуславливает широкий спектр медико-биологического действия. Известно, что соли альгиновой кислоты являются сильными сорбентами холестерина и жирных кислот, что приводит к снижению концентрации атерогенных компонентов в крови. Кроме того, альгинаты стимулируют фагоцитоз, повышают функциональную активность макрофагов, сорбируют тяжелые металлы, иммунные комплексы и иммуноглобулин Е, стимулируют секрецию иммуноглобулина А.

Существуют сведения о наличии у альгиновых кислот антиатерогенной, иммуномодулирующей, противомикробной, слабительной, антацидной и кровоостанавливающей активности (Успенский Ю. П., Барышникова Н. В., Пахомова И. Г., 2009; Токмалаев А. К., 2011).

При изучении аминокислотного состава экстракта было обнаружено 18 аминокислот, из которых 8 являются незаменимыми. Из незаменимых аминокислот наиболее широко были представлены валин (7,78 мг/г) и лейцин (10,23 мг/г), среди заменимых — аспарагиновая кислота (14,56 мг/г), глутаминовая кислота (14,52 мг/г), аланин (9,13 мг/г) и глицин (7,53 мг/г). Известно, что глицин и его производные достоверно снижают уровень ли-пидов плазмы крови, аргинин обладает выраженным гиполипидемическим действием, характеризующимся снижением уровня ЛПОНП и увеличением ЛПВП в крови. Общее содержание определяемых аминокислот составило 11,10%.

Оценка качественного и количественного состава минеральных веществ, входящих в сухой экстракт, показала преобладание натрия, калия и кальция. Одним из основных микроэлементов, содержащихся в экстракте ламинарии японской, является йод (0,0263 %), имеющий особое биологическое значение для организма человека. Он участвует в функционировании щитовидной железы, обеспечивая образование и являясь составной частью молекул гормонов щитовидной железы. Минеральный йод представлен в виде йодидов и йодатов калия, органическая форма йода — в виде дийодаминокислот, а также выделяют йод в органически связанном состоянии с белками и клетчаткой водорослей. Первые две формы йода легко экстрагируются из сушёных водорослей водой, в то время как йод, связанный с белками и клетчаткой водоросли, остается в остатке после экстрагирования.

Кроме того, в составе нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) были обнаружены следующие эссенциаль-ные микроэлементы: селен (1,81 мкг/г), хром (1,86 мкг/г), молибден (1,97 мкг/г), никель (2,1 мкг/г), медь (2,31 мкг/г), цинк (0,08 мг/г), кобальт (1,25 мкг/г) и др.

Известно, что содержащийся в составе экстракта сухого ламинарии японской селен (1,81 мкг/г) выполняет каталитическую, структурную и регуля-торную функции, взаимодействует с витаминами, ферментами и биологическими мембранами, участвует в окислительно-восстановительных процессах, обмене жиров, белков и углеводов. Роль микроэлемента селена в организме определяется в первую очередь его включением в состав одного из важнейших антиоксидантных ферментов 8е-зависимой глютатионперок-сидазы, которая защищает клетки от накопления продуктов перекисного окисления, предупреждая тем самым повреждение ее ядерного и белоксин-

тезирующего аппарата. Селен является синергистом витамина Е и способствует повышению его антиоксидантной активности.

Низкое содержание тяжелых металлов, в частности свинца (0,43 мкг/г), является еще одним показателем качества полученного экстракта и свидетельствует о низкой токсичности экстракционного препарата. 2. Оценка безопасности нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) при однократном и курсовом применении у подопытных животных и исследование его влияния на структуру и функцию щитовидной железы

В эксперименте на белых неинбредных мышах обоего пола массой 24,9+2,7 г было установлено, что при однократном внутрижелудочном введении экстракта сухого ламинарии японской LDS0 превышает 1124 мг/ кг. Это позволило отнести сухой экстракт ламинарии японской, согласно принятой гигиенической классификации токсичности, к веществам не ниже IV класса токсичности (малотоксичные).

При курсовом применении сухого экстракта в дозе 750 мг/кг (что соответствовало терапевтической дозе по альгиновой кислоте) и 45 мг/кг (соответствовало рекомендованной ВОЗ дозе йода) в течение 30 дней гибели подопытных животных и проявления токсических свойств отмечено не было, что подтвердило безопасность применения нового экстракта ламинарии японской.

При межвидовом переносе доз лекарственных веществ с экспериментальных животных на человека полагаются на фармакокинетику препаратов. Так, согласно схеме пересчета (Хабриев Р. У., 2005) терапевтическая доза экстракта сухого ламинарии японской для человека (весом 70 кг) составит 134,6 мг/кг.

Оценку морфологических изменений структуры щитовидной железы осуществляли в эксперименте на крысах при внутрижелудочном введении сухого экстракта в дозах 750 мг/кг и 45 мг/кг в течение 30 дней. Так, было отмечено увеличение объемной плотности фолликулов и плотности коллоида щитовидных желез у подопытных животных по сравнению с контролем (табл. 2). Выявлено выраженное уменьшение высоты тироцитов, тогда как достоверного изменения диаметра их ядер обнаружено не было (рис. 1).

При ежедневном внутрижелудочном введении экстракта сухого ламинарии японской в дозах 45 мг/кг и 750 мг/кг у подопытных крыс развивались выраженные изменения морфологической структуры щитовидной железы, которые характеризовались увеличением объемной плотности фолликулов соответственно в 1,6 раза (р<0,05) и в 2 раза (р<0,05) по сравнению с контролем. Одновременно с изменениями объемной плотности фолликулов щитовидных желез подопытных животных, получавших экстракт сухой ламинарии японской в дозе 750 мг/кг, было выявлено уве-

личение объемной плотности коллоида фолликулов щитовидных желез в среднем в 1,5 раза (р<0,05).

Рис. 1. Морфологическая структура щитовидной железы: слева — контроль, в центре — экстракт ламинарии 45 мг/кг, справа — экстракт ламинарии 750 мг/кг; увеличение — 40*15; окраска — гематоксилин-эозин

Таблица 2

Влияние экстракта ламинарии японской на структуру щитовидной железы

Исследуемый показатель Серия опытов

Изотонический раствор натрия хлорида Экстракт ламинарии

45 мг/кг 750 мг/кг

Характеристика фолликулов

Форма Округлая и неправильной многоугольной формы

Объемная плотность, % фолликулов 25,6 41,0* 55,0*

коллоида 39,5 44,8 59,1*

Характеристика тироцитов

Высота, мкм 4,26±0,34 3,05±0,28* 2,13±0,30*#

Диаметр ядер, мкм 1,78±0,27 1,85±0,23 1,55±027

Форма Кубическая Кубическая Кубическая

Примечание: * — различия с контролем (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05); # — различия с сухим экстрактом ламинарии японской (45 мг/кг) достоверны (р<0,05).

Кроме изменений объемной плотности коллоида и фолликулов было выявлено достоверное уменьшение высоты тироцитов при введении сухого экстракта в дозах 45 мг/кг и 750 мг/кг соответственно в 1,4 раза (р<0,05) и в 2 раза (р<0,05) по сравнению с контролем.

Обращает на себя внимание тот факт, что объемные плотности коллоида и фолликулов щитовидных желез подопытных животных, получав-

ших экстракт ламинарии японской в дозах 45 мг/кг и 750 мг/кг, достоверно не отличались.

При внутрижелудочном введении экстракта сухого ламинарии японской (750 мг/кг) в течение 30 дней у подопытных кроликов развивались выраженные изменения уровня гормонов щитовидной железы, которые характеризовались повышением содержания трийодтиронина общего, тетрайодтиронина общего и свободного (табл. 3).

Таблица 3

Влияние экстракта ламинарии японской на уровень гормонов щитовидной железы

№ Исследуемый Единицы Серия опытов

показатель измерения до опыта через 1 месяц

1. т3 Общий нг/мл 0,71 ±0,07 0,95±0,05*

Свободный пг/мл 2,79±0,35 2,85±0,19

2. т4 Общий нмоль/л 27,76+4,1 40,63+2,14*

Свободный пмоль/л 9,37+0,97 12,18+1,81*

Примечание: * — различия с контролем (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05).

Было выявлено, что уровень трийодтиронина общего в крови кроликов постепенно увеличивался и через 4 недели наблюдения составил 0,95+0,05 нг/мл, что в среднем было в 1,3 раза (р<0,05) выше, чем у ин-тактных животных. Содержание тетрайодтиронина общего и свободного через 4 недели исследования возросло соответственно в 1,5 раза (р<0,05) и в 1,3 раза (р<0,05) по сравнению с исходным уровнем. Достоверных изменений содержания трийодтиронина свободного в крови кроликов, получавших экстракт сухой ламинарии японской, в течение всего срока наблюдения обнаружено не было.

Таким образом, результаты экспериментального исследования показали, что применение экстракта ламинарии приводит к увеличению функциональной активности щитовидной железы, что подтверждается изменениями в уровне тиреоидных гормонов и изменениями в морфологической структуре щитовидной железы. Обращает на себя внимание тот факт, что применение экстракта ламинарии в дозе, на порядок превышающей суточную потребность в йоде (750 мг/кг, в пересчете на молекулярный йод 197 мкг/кг), не вызывает проявлений йодизма. Морфологические изменения в структуре щитовидной железы носят тот же характер, что и при применении экстракта ламинарии в терапевтической дозе (по йоду). Приведенные данные свидетельствуют о безопасности использования препаратов ламинарии, содержащих органически связанный йод, в широком

диапазоне доз. Возможно, это связано с тем, что органически связанный йод не кумулирует в организме, а при повышенном его поступлении выводится с мочой. Это уменьшает риск развития побочных эффектов, вызываемых препаратами неорганического йода, среди которых такие проявления йодизма как отек слизистой оболочки носа, крапивница, лихорадка, угри, отек слюнных желез, отек Квинке, эозинофилия, шок. Возможны также тахикардия, раздражительность, нарушения сна, повышенное потоотделение, диарея.

3. Оценка слабительной активности нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) у интактных животных и при остром запоре

В результате проведенного исследования по оценке слабительной активности было обнаружено, что при однократном внутрижелудочном введении экстракта ламинарии (750 мг/кг) у подопытных мышей наблюдалось выраженное увеличение общего количества и размягчение консистенции каловых масс (табл. 4).

Таблица 4

Влияние экстракта ламинарии японской, бисакодила, макрогола, слоевищ ламинарии японской на общее количество кала за сутки

№ Исследуемый препарат Масса кала, г

1. Контроль (изотонический раствор натрия хлорида) 0,4235±0,0794

2. Экстракт ламинарии сухой (750 мг/кг) 0,5949±0,1239*

3. Бисакодил (1мг/кг) 0,7935+0,1349**

4. Макрогол 4000 (1г/кг) 0,5256±0,0799*

5. Слоевище ламинарии (870,5 мг/кг) 0,4049±0,0574*

Примечание: * — различия с контролем (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05); # — различия с сухим экстрактом ламинарии японской достоверны (р<0,05).

Было отмечено, что общее количество каловых масс при однократном внутрижелудочном введении сухого экстракта ламинарии японской через 24 часа увеличилось в 1,4 раза (р<0,05) по сравнению с контролем. Выявлено, что наибольшей слабительной активностью среди исследованных слабительных средств обладал бисакодил (1 мг/кг). Слабительная активность экстракта ламинарии японской была в среднем в 1,3 раза (р<0,05) ниже, чем у бисакодила (1 мг/кг) и соответствовала действию макрогола (1 г/кг). Дробленное сырье ламинарии японской (870,5 мг/кг) подобного эффекта не оказывало.

Сравнительную оценку специфической слабительной активности препаратов ламинарии японской (слоевище и экстракт сухой) и ламина-

рии сахаристой (слоевище) проводили в опытах на мышах (п=40) с использованием модели острого запора.

В результате проведенного исследования было отмечено, что при двукратном внутрижелудочном введении 10 % взвеси активированного угля в 1% крахмальной слизи у подопытных животных наблюдалось снижение количества каловых масс в среднем в 1,6 раза (р<0,05) по сравнению с интактными мышами, получавшими изотонический раствор натрия хлорида. При однократном внутрижелудочном введении экстракта ламинарии (750 мг/кг) у подопытных мышей с острым запором наблюдалось выраженное размягчение консистенции каловых масс и увеличение их общего количества в среднем в 1,7 раза (р<0,05) по сравнению с контролем (взвесь активированного угля + изотонический раствор натрия хлорида). Достоверных изменений общего количества каловых масс при применении слоевищ ламинарии японской и ламинарии сахаристой при остром запоре у мышей отмечено не было (табл. 5).

Таблица 5

Влияние препаратов ламинарии японской на общее количество

каловых масс у мышей с острым запором

№ Серия опыта Масса кала, г

1. Взвесь активированного угля + Экстракт ламинарии сухой (750 мг/кг) 0,8828 ±0,1343°

2. Взвесь активированного угля + Слоевище ламинарии японской (870,5 мг/кг) 0,5422+0,0768*

3. Взвесь активированного угля + Слоевище ламинарии сахаристой (870,5 мг/кг) 0,5051 ±0,1084*

4. Контроль (взвесь активированного угля + изотонический раствор натрия хлорида) 0,5115±0,0383*

5. Контроль (изотонический раствор натрия хлорида) 0,8430±0,1932

Примечание: * — различия с контролем (изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05); # — различия с контролем (взвесь активированного угля + изотонический раствор натрия хлорида) достоверны (р<0,05).

Обращает на себя внимание тот факт, что общее количество каловых масс при внутрижелудочном введении экстракта сухого ламинарии японской (750 мг/кг) мышам с острым запором достоверно не отличалось от значения данного показателя у интактных животных и было соответственно в 1,6 раза (р<0,05) и 1,7 раза (р<0,05) больше, чем при применении при остром запоре у мышей дробленных слоевищ ламинарии японской и ламинарии сахаристой.

Полученные данные свидетельствуют о наличии у нового экстракта ламинарии выраженной слабительной активности. Возможно, что слаби-

тельный эффект исследуемого экстракта обусловлен способностью аль-гинатов удерживать воду, влияя тем самым на осмотическое давление в просвете желудочно-кишечного тракта, электролитный состав кишечного содержимого и массу фекалий, увеличивая их объем и вес, стимулируя в конечном итоге моторику желудочно-кишечного тракта. Применение препаратов ламинарии японской не приводит к снижению тонуса кишечной мускулатуры и к привыканию рецепторного аппарата кишечника с последующим увеличением дозы слабительного средства. 4. Исследование влияния нового экстракционного препарата ламинарии японской (экстракта сухого) на липидный спектр крови кроликов при дислипопротеинемии

В результате проведенного исследования по оценке влияния экстракта сухого на течение экспериментальной гиперлипидемии было обнаружено, что при внутрижелудочном введении экстракта ламинарии японской (750 мг/кг) в течение 30 дней интактным кроликам достоверных изменений ли-пидного спектра крови не отмечалось. Так, было выявлено, что содержание холестерина, триглицеридов, липопротеинов высокой, низкой и очень низкой плотности через 4 недели после начала введения экстракта ламинарии достоверно не отличалось от их уровня до начала эксперимента (табл. 6).

Таблица 6

Влияние экстракта ламинарии японской на содержание холестерина общего,

триглицеридов, липопротеинов в крови интактных кроликов

№ Исследуемый показатель до начала введения через 4 недели

1. Холестерин общий 1,89±0,27 1,86±0,49

2. Триглицериды 0,65±0,09 0,69±0,09

3. ЛПВП 0,71 ±0,09 0,53±0,09

4. ЛПНП 0,88+0,17 0,72±0,22

5. ЛПОНП 0,29±0,04 0,32±0,05

Примечание: различия с контролем (до начала введения экстракта ламинарии японской) не достоверны (р>0,05).

При внутривенном введении 10% эмульсии Липофундина (0,5 мл/кг) у подопытных кроликов развивались выраженные изменения липидного спектра крови, которые характеризовались увеличением уровня триглицеридов и ЛПОНП в 1,4 раза (р<0,05), ЛПНП в 1,2 раза (р<0,05), снижением содержания ЛПВП в 1,4 раза (р<0,05). Достоверных изменений содержания общего холестерина в крови кроликов, получавших Липофун-дин, в течение всего срока наблюдения обнаружено не было (табл. 7).

Таблица 7

Изменения содержания холестерина, триглицеридов и липопротеинов в плазме крови кроликов при внутривенном введении Липофундина <0,5 мл/кг)

№ Исследуемые показатели Содержание в плазме крови, ммоль/л

до опыта через 1 неделю через 2 недели через 3 недели через 4 недели

1. Холестерин общий 2,21 ±0,62 1,93+0,44 1,31+0,33 2,11+0,60 2,24±0,57

2. Триглицериды 0,76+0,10 0,94+0,27 0,95+0,24 1,01+0,28 1,08+0,15*

3. ЛПВП 0,77+0,17 0,62+0,15 0,55+0,14 0,57+0,17 0,54+0,14*

4. лпнп 1,09+0,53 0,92±0,56 0,41+0,19 1,01+0,57 1,22+0,39*

5. ЛПОНП 0,35±0,02 0,41±0,17 0,43+0,11 0,45±0,14 0,48±0,14*

Примечание: * — различия с контролем (до опыта) достоверны (р<0,05).

Кроме изменений липидного спектра крови было выявлено достоверное увеличение уровня лактата и С-реактивного белка соответственно в 2,1 раза (р<0,05) (от 7,77+0,55 Е/лдо 16,64+2,69 Е/л) и в 13,4 раза (р<0,05) (от 0,08±0,04 мг/л до 1,07+0,31 мг/л) по сравнению с их содержанием у интактных животных, что, вероятно, свидетельствует о развитии тканевой гипоксии и является отражением повреждения сосудистой стенки у подопытных животных. Следует отметить, что развившаяся под влиянием Липофундина дислипопротеинемия, имела атерогенный характер, о чем свидетельствовало увеличение коэффициента атерогенности в сред-немв 1,8 раза (р<0,05) от 1,89+0,4 у интактных животных до 3,47±0,69 при введении Липофундина.

Таким образом, под влиянием Липофундина у подопытных животных развилась атерогенная гиперлипидемия, которая по фенотипической систематизации соответствовала типу Пб.

Обращает на себя внимание тот факт, что при внутрижелудочном введении сухого экстракта ламинарии японской подопытным кроликам с экспериментальной гиперлипидемией выраженность нарушений липидного спектра крови существенно уменьшалась. При внутрижелудочном введении экстракта ламинарии японской кроликам с экспериментальной гиперлипидемией наблюдалось снижение уровня общего холестерина в 1,4 раза (р<0,05) и липопротеинов низкой плотности в 2 раза (р<0,05). Достоверных различий в содержании триглицеридов, ЛПВП и ЛПОНП у кроликов с гиперлипидемией получавших и не получавших экстракт ламинарии отмечено не было. Изменения содержания липопротеинов под влиянием экстракта ламинарии сопровождались снижением коэффициента атерогенности в сред-

нем в 1,8 раза (р<0,05) по сравнению с контролем (кролики с гиперлипиде-мией, получавшие изотонический раствор натрия хлорида) (табл. 8). Кроме того отмечено снижение уровня лакгата и С-реактивного белка соответственно в 1,9 раза (р<0,05) и 15,3 раза (р<0,05).

Таблица 8

Изменения содержания холестерина, триглицеридов и липопротеинов

в плазме крови кроликов с гиперлипидемией при внутрижелудочном введении экстракта ламинарии японской (750 мг/кг)

Серия опытов Содержание в плазме крови (ммоль/л) через 4 недели от начала введения липофундина

ХС ТГ ЛПВП ЛПНП ЛПОНП

Экстракт ламинарии 750 мг/кг + липофундин 0,5 мл/кг 1,57+0,17* 0,97±0,05 0,49+0,04 0,62+0,22* 0,47±0,05

Липофундин 0,5 мл/кг 2,24±0,57 1,08+0,15 0,54+0,14 1,22+0,39 0,48±0,14

Примечание: * — различия с контролем (Липофундин) достоверны (р<0,05).

Таким образом, результаты экспериментального исследования показали, что применение экстракта ламинарии при экспериментальной гипер-липидемии уменьшает выраженность нарушений липидного спектра крови и способствует снижению атерогенности этих нарушений. Возможно, что гиполипидемический эффект экстракта ламинарии японской связан с эффектами входящей в его состав альгиновой кислоты. Известно, что в кишечнике альгинаты образуют не всасывающиеся комплексы с желчными кислотами, что приводит к усилению выведения желчных кислот из организма (в обычных условиях желчные кислоты включены в энтерогепатическую циркуляцию). В результате увеличивается синтез желчных кислот из эндогенного холестерина, истощая запасы его в клетках печени. Для восстановления содержания холестерина в геггатоцитах компенсаторно увеличивается количество ЛПНП-рецепторов на мембране гепатоцитов. За счет этого возрастает эндоцитоз ЛПНП, что приводит к снижению содержания ЛПНП в плазме крови. Вместе с тем существуют сведения, что для реализации ги-полипидемического действия препаратов ламинарии имеет значение высокое содержание йода, который оказывает значительное влияние на обмен веществ, особенно в щитовидной железе.

Таким образом, экстракт ламинарии японской сухой показал высокую фармакологическую активность, что создает предпосылки для его дальнейшего доклинического изучения.

выводы

1. При однократном внутрижелудочном введении мышам значение 1Х>50 экстракта сухого ламинарии японской превышает 1124 мг/кг; при курсовом применении экстракта в дозах 750 мг/кг и 45 мг/кг токсического действия выявлено не было.

2. При ежедневном внутрижелудочном введении экстракта сухого ламинарии японской в дозах 45 мг/кг и 750 мг/кг у подопытных крыс отмечались изменения морфологической структуры щитовидной железы, которые характеризовались увеличением объемной плотности фолликулов соответственно в 1,6 и в 2 раза; плотности коллоида фолликулов в среднем в 1,5 раза и уменьшением высоты тироцитов соответственно в 1,4 и в 2 раза.

3. Под влиянием экстракта ламинарии (750 мг/кг) уровень общего трийодтиронина в крови кроликов увеличивался в среднем в 1,3 раза, а тетрайодтиронина общего и свободного в 1,5 и 1,3 раза соответственно.

4. При внутрижелудочном введении экстракта ламинарии японской кроликам с экспериментальной гиперлипидемией наблюдалось снижение уровня общего холестерина в 1,4 раза и липопротеинов низкой плотности в 2 раза. Значение коэффициента атерогенности снизилось в 1,8 раза. Также было отмечено снижение уровня лактата и С-реак-тивного белка соответственно в 1,9 раза и 15,3 раза.

5. При однократном внутрижелудочном введении подопытным мышам с острым запором экстракта ламинарии японской (750 мг/кг) наблюдалось увеличение общего количества каловых масс в 1,7 раза, тогда как дробленные слоевища ламинарии японской при остром запоре подобного эффекта не оказывали.

6. Слабительная активность экстракта сухого ламинарии японской была в среднем в 1,3 раза ниже, чем у бисакодила (1 мг/кг) и соответствовала действию макрогола (1 г/кг).

7. Основными биологически активными веществами нового экстракта сухого ламинарии японской являются альгиновые кислоты (26,71%), полисахариды (25,40%), йод (0,0263%) и аминокислоты (11,1%). В экстракте обнаружено 18 аминокислот, из которых преобладали ас-парагиновая кислота (13,07 %), глутаминовая кислота (13,03 %), ала-нин (8,19 %), глицин (6,76 %), валин (6,99 %) илейцин (9,18 %).

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Фармакологически доказана возможность применения экстракта сухого

ламинарии японской при йододефицитных заболеваниях. Показана возмож-

ность коррекции нарушений липидного спектра крови при экспериментальной гиперлипидемии типа 116 у кроликов с помощью сухого экстракта. В ходе исследования был отмечен выраженный слабительный эффект экстракта ламинарии японской, позволяющий рекомендовать данную лекарственную форму для применения в качестве слабительного средства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Савчук И. А. Моделирование атерогенной гиперлипидемии у кроликов [Электронный ресурс] / М. А. Демидова, О. В. Волкова, Е. Н. Егорова, И. А. Савчук // Современные проблемы науки и образования. — 2011. — № 3; URL: www.science-education.ru/97-4689 (дата обращения: 17.09.2012).

2. Савчук И. А. Влияние экстракта ламинарии японской на течение экспериментальной гиперлипидемии у кроликов / М. А. Демидова, О. В. Волкова, И. А. Савчук, С. Я. Шнеур // Врач-аспирант. — 2011. — № 5.4(48). — С.560—565.

3. Савчук И. А. Влияние экстракта ламинарии японской на липидпый спектр крови кроликов при дислипопротеинемии / М. А. Демидова, О. В. Волкова, И. А. Савчук // Традиционная медицина. — 2011. №5. — С.338—343.

4. Савчук И. А. Оценка слабительной активности экстракта ламинарии японской сухого [Электронный ресурс] / М. А. Демидова, И. А. Савчук, С. Я. Шнеур // Современные проблемы науки и образования. — 2011. — № 6; URL: www.science-education.ru/100-5110 (датаобращения:17.09.2012).

5. Савчук И.А. Влияние экстракта ламинарии японской сухого на структуру и функцию щитовидной железы [Электронный ресурс] / М.А. Демидова, М.Б. Петрова, И.А. Савчук // Современные проблемы науки и образования. — 2012. — № 2; URL: www.science-education.ru/102-5910 (дата обращения: 17.09.2012).

6. Савчук И.А. Иммунные и биохимические сдвиги при экспериментальной гиперлипидемии / Е. Н. Егорова, М. Н. Калинкин, О. В. Волкова, М. А. Демидова, И. А. Савчук // Вестник ТвГУ. Серия: Биология и экология. - 2012. — №16. — С. 53-57.

7. Савчук И.А. Влияние режима экстракции на химический состав экстракта ламинарии японской сухого / И. А. Савчук //Современные проблемы науки и образования. — 2012. — № 4; URL: http://www.science-education.ru/104-6805 (дата обращения: 31.07.2012).

8. Савчук И. А. Разработка технологической схемы получения экстракта ламинарии японской сухого / М. А. Демидова, И. А. Савчук // Человек и лекарство: сборник материалов XIX Российского национального конгресса (23-27 апр. 2012г.). — М., — 2012. — С. 370.

Подписано в печать 24.11.2012 г. Формат 60x90 '/, Усл.-печ. л. 1,0. Тираж 100. Заказ 20.

Отпечатано в ГОУ НПО ПЛ № 12 170023, г. Тверь, пр-д Ремесленный, 5

Результаты работы имеют как теоретическое, так и практическое значение. Фармакологически доказана возможность применения экстракта сухого ламинарии японской при йододефицитных заболеваниях. Показана возможность коррекции нарушений липидного спектра крови при экспериментальной гиперлипидемии типа Пб у кроликов с помощью сухого экстракта. В ходе исследования был отмечен выраженный слабительный эффект экстракта ламинарии японской, позволяющий рекомендовать данную лекарственную форму для применения в качестве слабительного средства.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ