Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Использование показателей свободнорадикального окисления для оценки распространенности злокачественного процесса и эффективности противоопухолевого воздействия при раке молочной железы

На правах рукописи

Шалашиая Елена Владимировна

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ СВОБОДНОРАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ ДЛЯ ОЦЕНКИ РАСПРОСТРАНЕННОСТИ ЗЛОКАЧЕСТВЕННОГО ПРОЦЕССА И ЭФФЕКТИВНОСТИ ПРОТИВООПУХОЛЕВОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

14.00.14. - онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

г. Ростов-на-Дону, 2004

РАБОТА ВЫПОЛНЕНА В РОСТОВСКОМ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКОМ ОНКОЛОГИЧЕСКОМ ИНСТИТУТЕ МЗиСР РФ, (директор института - академик РАМН, профессор Ю.С. Сидоренко)

Научный руководитель:

Научный консультант:

Официальные оппоненты:

- доктор биологических наук, профессор И.А. Горошинская

- доктор медицинских наук

Л.Н. Ващенко

- доктор биологических наук, профессор Т.И. Бондаренко

- кандидат биологических наук

Г.И.Жукова

Ведущая организация:

Волгоградский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится « 2005 г. в часов на за-

седании Диссертационного совета Д 208.083.01 при Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте МЗиСР РФ (344037, г. Ростов-на-Дону, 14 линия, 63).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского научно-исследовательского онкологического института.

Автореферат разослан « /¿?» /л? 2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Г. А. Неродо

3>6SO

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Заболеваемость и смертность от рака молочной железы (РМЖ) среди женского населения продолжают неуклонно расти как в нашей стране, так и за рубежом. В структуре заболеваемости злокачественными опухолями в мире РМЖ занимает третье место после рака легкого и рака желудка и составляет 10% от всех случаев онкопатологии. В России доля РМЖ среди злокачественных новообразований составляет 23% и имеет устойчивую тенденцию к увеличению, причем у 40-56% впервые зарегистрированных больных выявляются III-IV стадии опухолевого процесса. В структуре смертности от онкозаболеваний у женщин РМЖ составляет 13,7% (Заридзе Д.Г., 2002; Ушакова Т.И. и соавт., 2002; Алясова A.B., 2004).

Среди факторов, ведущих к возникновению РМЖ, нередко называют окислительный стресс, протекающий на организменном уровне. Активированные кислородные метаболиты принимают участие в прогрессии опухолевых клеток, поддерживая рост опухоли, ее инвазивность и метастатический потенциал (Das U.N., 2002; Ray G., Husain S.A., 2002). В многочисленных экспериментальных и клинических работах показано, что развитие злокачественных новообразований приводит к значительным изменениям в липидном составе и интенсивности процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в опухоли и на уровне организма в целом. Отмечено, что такие изменения в процессе злокачественного роста носят фазный характер и зависят от характеристик опухоли и состояния организма (Зенков Н.К. и соавт., 2001; Сафиулина А.Ф., 2002; Смирнова Л.П. и соавт., 2002; Целебровская О.Н., 2003), что имеет важное патогенетическое значение.

Необходимость химиотерапии, как одного из компонентов лечения больных РМЖ, на сегодняшний день не вызывает сомнений. С этих позиций большой интерес представляют предложенные академиком РАМН Ю.С. Сидоренко методы аутобиотерапии с использованием естественных сред организма и, в частности, методики аутоплазмо- и аутомиелохимиотерапии. Опыт применения и дальнейшая разработка этих методов в лечении больных РМЖ дока-

зывает их высокую эффективность, снижение токсичности, возможность преодоления множественной лекарственной резистентности, иммуномодулирую-щий эффект (Владимирова Л.Ю., 2000; Николаева Н.В., 2003). Однако, как и любая злокачественная опухоль, РМЖ представляет собой биологически гетерогенное заболевание (Моисеенко В.М., Орлова Р.В., 2002), в связи с чем невозможно добиться одинакового эффекта у всех больных от проводимого лечения. Трудности лечения рака молочной железы также связаны с тем, что даже при ранних стадиях в 25% случаев при Пив 65% при Т2 имеются субклинические метастазы, а средняя продолжительность жизни зависит от реализации этих очагов (Высоцкая И.В. и соавт., 2000). Рак молочной железы является уникальной опухолью и в том отношении, что отдаленное метастазирование может протекать в течение десятилетий скрытно до клинического проявления (Badwe R.A. et al., 1992; Wood W.C., 1994). Поэтому актуальным остается поиск, разработка и внедрение различных методов диагностики и прогноза, в том числе и биохимических, способных выявлять прогрессию опухолевого процесса и адекватно оценивать эффективность проведенной химиотерапии.

Цель исследования

Определить биохимические показатели в крови больных раком молочной железы, отражающие степень распространенности опухолевого процесса и позволяющие объективно оценить эффективность проводимого химиотерапев-тического воздействия.

Задачи исследования:

1. изучить особенности протекания свободнорадикального окисления, функционирования антиоксидантной системы и состояния клеточных мембран в крови больных с местнораспространенным и генерализованным раком молочной железы;

2. изучить интенсивность хемилюминесценции плазмы крови, активность церулоплазмина и показатели структурно-функционального состояния мембран лимфоцитов и эритроцитов у больных раком молочной железы с раз-

личной эффективностью химиотерапии на аутосредах (аутоплазмохимиотера-пия, аутомиелохимиотерапия);

3. разработать биохимический способ определения распространенности опухолевого процесса;

4. разработать биохимический способ оценки эффективности противоопухолевого лечения в клинике.

Научная новизна работы. Впервые на большом клиническом материале проведено комплексное исследование ряда показателей свободнорадикаль-ного окисления, антиоксидантного статуса и структурного состояния клеточных мембран в крови больных раком молочной железы с различной распространенностью опухолевого процесса и эффективностью проведенной химиотерапии. Показано, что прогрессирование злокачественного процесса у больных раком молочной железы характеризуется снижением уровня свободных радикалов на фоне увеличения оксидазной активности церулоплазмина и нарастанием мембранотоксических эффектов, проявляющихся в снижении текучести клеточных мембран. Впервые при применяемых в Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте методах химиотерапии - ауто-плазмо- и аутомиелохимиотерапии установлены закономерности изменения уровня свободных радикалов и активности церулоплазмина в плазме крови, а также погруженности белков в липидный матрикс плазматических мембран лимфоцитов и эритроцитов и их текучести у больных раком молочной железы в зависимости от эффективности проведенного лечения. Показана прогностическая значимость исходного состояния процессов перекисного окисления липи-дов и структурной организации мембран клеток крови в плане оценки распространенности опухолевого процесса и результатов химиотерапии.

Практическая значимость работы. Выявленные на основе биохимических исследований в крови больных раком молочной железы прогностически значимые параметры состояния свободнорадикального окисления и структурно-метаболического статуса клеточных мембран позволяют разработать критерии для определения распространенности злокачественного процесса, способст-

вующие индивидуализации лечения данной категории больных. На основании полученных данных предложены "Способ определения распространенности патологического процесса при онкологических заболеваниях" (патент РФ № 2241987 от 10.12.2004г.) и "Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы Ш-1У стадий" (заявка на изобретение № 2003106114/14 (006353), приоритетная справка от 3.03.2003г.). Использование данных способов будет способствовать раннему выявлению генерализации опухолевого процесса, улучшению контроля за проводимой химиотерапией, что позволит планировать необходимую тактику лечения больным РМЖ.

Внедрение результатов исследования в практику здравоохранения

Методы "Способ определения распространенности патологического процесса при онкологических заболеваниях" и "Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы Ш-ГУ стадий" внедрены и применяются в отделении химиогормонотерапии Ростовского научно-исследовательского онкологического института. Данным методам обучены 2 специалиста на рабочем месте.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Увеличение распространенности опухолевого процесса при раке молочной железы сопровождается снижением интенсивности свободнорадикаль-ных процессов на фоне увеличения активности изученных компонентов анти-оксидантной системы и нарушением структурно-функционального состояния клеточных мембран.

2. Нормализация показателей структурно-функциональной целостности мембран форменных элементов крови и значительная коррекция соотношения свободнорадикальных процессов и антиоксидантной активности в крови больных раком молочной железы являются одним из механизмов реализации клинического эффекта при проведении химиотерапии на аутосредах - аутоплазмо-и аутомиелохимиотерапии.

Апробация диссертации. Материалы диссертации были представлены на VI Международной конференции «Биоантиоксидант» (Москва 2002), на кон-

ференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2003). Апробация диссертации состоялась 25 ноября 2004 г. на заседании Ученого Совета Ростовского научно-исследовательского онкологического института.

Публикации. Материалы диссертации опубликованы в 11 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 145 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций. Список литературы включает 149 отечественных и 107 зарубежных источника, работа иллюстрирована 15 таблицами и 11 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования

В работе представлены результаты исследования ряда показателей сво-боднорадикального окисления, компонентов антиоксидантной системы и структурно-функционального состояния мембран в крови 122 больных с морфологически верифицированным раком молочной железы Ш-ГУ стадий заболевания в возрасте от 30 до 70 лет (средний возраст больных - 51,8+6,7). У 85 пациенток были признаки местнораспространенного процесса, у 37 - генерализованного. Больные находились на стационарном лечении в Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте в период с 2000 по 2003 г.г.

У 85% обследованных больных отмечался инфильтрирующий протоко-вый рак, в незначительном количестве наблюдений имел место инфильтрирующий дольковый рак и слизистый рак.

Реакции свободнорадикального окисления, компоненты антиоксидантной системы и структурно-функционального состояния мембран изучали перед началом проведения неоадъювантной химиотерапии и через 3 недели после окончания первого курса химиотерапии (при поступлении больной на второй

курс химиотерапии), 48 больным проводилась аутоплазмохимиотерапия (АПХТ), 18 больным - аутомиелохимиотерапия (АМХТ).

В качестве контроля были исследованы биохимические показатели 35 здоровых женщин, сопоставимых по возрасту и состоянию менструально-овариальной функции с обследованными больными.

Материалом исследования служили лимфоциты, эритроциты и плазма крови больных раком молочной железы до и после химиотерапии, а также здоровых лиц. Взятие крови осуществляли пункцией локтевой вены. Лимфоциты выделяли в градиенте плотности фикол - верографин с последующим микроскопическим контролем в камере Горяева.

О реакциях свободнорадикального окисления в плазме крови судили по светосумме перекись-индуцированной люминолзависимой хемилюминесценции (XJI) по методу В.А. Шестакова (1979). Содержание малонового диальдегида (МДА) в плазме и эритроцитах определяли по методу Н.Д. Стальной и соавт. (1977). Активность супероксиддисмутазы (СОД) изучали по методу С.С. Winterbern et al. (1975), активность каталазы по методу М.Э. Королюка (1988), оксидазную активность церулоплазмина (ЦП) по В.Г. Колбу, B.C. Камышникову (1982). Структурно-функциональные характеристики мембран (текучесть, полярность микроокружения и погруженность белков в липидный матрикс) изучали по методу В.А. Владимирова, Г.Е. Добрецова (1980) с использованием флуоресцентного зонда пирена. Количество белка определяли модифицированным методом Лоури.

Статистическую обработку данных проводили согласно общепринятым методикам с использованием параметрических (критерий Стъюдента для независимых и зависимых выборок) и непараметрических (точный метод Фишера; критерий Вилкоксона-Манна-Уитни; парный критерий Вилкоксона) методов.

Результаты исследования

Для выявления возможной зависимости показателей, характеризующих уровень свободнорадикальных процессов, активность антиоксидантной систе-

мы и состояние плазматических мембран от степени распространенности злокачественного процесса нами была исследована кровь 24 больных местно-распространенным РМЖ (Т2_4 М^Мо-ь где М| - метастазы в надключичные лимфоузлы на стороне поражения) и 15 больных генерализованным РМЖ (Т любое N любое М]), где М] -метастазы в кости, печень, легкие, плевру, мягкие ткани с массивным поражением отдаленных лимфоузлов.

Изучение интенсивности свободнорадикальных процессов в крови больных местнораспространенным и генерализованным РМЖ по изменению светосуммы хемилюминесценции плазмы крови в системе перекись водорода -люминол и накоплению молекулярного продукта ПОЛ - МДА в плазме и эритроцитах периферической крови выявило снижение уровня свободных радикалов при прогрессировании опухолевого процесса (рис. 1). Сниженная интенсивность хемилюминесценции по сравнению со значениями у здоровых женщин имела место в обеих группах больных, при этом уровень хемилюминесценции в группе с генерализованным РМЖ был достоверно ниже (на 37,7%), чем в группе с местнораспространеняой формой заболевания. Содержание МДА в плазме крови больных генерализованным РМЖ было на 11,6% (р<0,05) ниже, чем у больных местнораспространенным РМЖ и достоверно не отличалось от уровня у здоровых женщин, тогда как при местнораспространенном процессе этот показатель превышал норму на 23,4%.

Обнаруженное нами снижение уровня ПОЛ по мере возрастания распространенности опухолевого процесса, возможно, связано с увеличением активности компонентов антиоксидантной системы (рис. 2). Так, при генерализованном РМЖ уровень СОД в эритроцитах превышал значение соответствующего показателя при местнораспространенном процессе на 160,7%, активность каталазы в эритроцитах - на 38,8%, в лимфоцитах - на 45,8%, в плазме крови - на 34,9%, уровень церулоплазмина - на 28,6% соответственно, при чем все изменения были статистически достоверными (р<0,05-0,001).

120 % 80 40 0

интенсивность содержание МДА

хемилюминесценции ■ доноры

@ больные местнораспространенным РМЖ □ больные генерализованным РМЖ

* - достоверно по сравнению с донорами; ** - достоверно по сравнению с местнораспространенным РМЖ

Рис 1 Интенсивность хемилюминесценции и содержание МДА в плазме крови больных местнораспространенным и генерализованным РМЖ.

**

эритроциты эритроциты лимфоциты плазма плазма

СОД каталаза церулоплазмин

□ больные местнораспространенным РМЖ ■ больные генерализованным РМЖ

* - достоверно по сравнению с донорами; ** - достоверно по сравнению с местнораспространенным РМЖ

Рис. 2. Активность СОД, каталазы и церулоплазмина в крови больных местнораспространенным и генерализованным РМЖ (в процентах от значений у доноров, принятых за 100%).

С интенсивностью ПОЛ и активностью антиоксидантных ферментов тесно связано состояние клеточных мембран. Пероксидация мембранных фос-фолипидов приводит к образованию гидропероксидов, которые могут не только инактивировать белки, но и изменять физические свойства мембран, такие как текучесть (Дубинина Е.Е., 2001). При исследовании текучести мембран лимфо-

цитов и эритроцитов более выраженные изменения данного показателя были выявлены у больных генерализованным РМЖ (рис. 3). При генерализации злокачественного процесса текучесть лимфоцитов в липидном бислое снизилась на 18,3% и достоверно отличалась от нормы и уровня у больных с местнораспро-страненным РМЖ. В эритроцитах снижение данного показателя достигало 33,4% в зоне белок-липидных контактов и 35,7% в липидном бислое по сравнению с донорами. При этом наблюдалась тенденция к достоверности различий между текучестью эритроцитарных мембран у больных с местнораспростра-ненным и генерализованным процессами.

белок-липидный липидный бислой белок-липидный липидный бислой контакт лимфоцитов лимфоцитов контакт эритроцитов эритроцитов

■доноры ■ больные местнораспространенным РМЖ □больные генерализованным РМЖ

* - достоверно по сравнению с донорами; ** - достоверно по сравнению с местнораспространенным РМЖ

Рис. 3. Текучесть мембран клеток крови у больных местнораспространенным и генерализованным РМЖ.

Таким образом, нами показано, что при увеличении распространенности опухолевого процесса у больных РМЖ (наличие генерализации) наблюдается снижение интенсивности свободнорадикальных процессов на фоне увеличения активности изученных компонентов антиоксидантной системы и нарушение структурно-функционального состояния клеточных мембран, что отражает характер взаимоотношений опухоли и организма в процессе опухолевого роста. Это позволило предположить, что отдельные из изученных нами показателей могут представить интерес для оценки распространенности процесса, а также служить прогностическими критериями эффективности проводимого лечения и дальнейшего течения заболевания.

В связи с этим, нами были исследованы интенсивность хемилюминесценции, уровень церулоплазмина и ряд структурных характеристик мембран лимфоцитов и эритроцитов (текучесть, полярность микроокружения, а также погруженность белков в липидный матрикс) в крови 65 больных РМЖ. В зависимости от степени распространенности процесса было выделено три группы. В первую группу вошли 32 женщины с местнораспространенным процессом, III стадия (Т3 N1.2 М0). Во вторую промежуточную группу вошли 16 больных с -IV стадией процесса Т4 N1.2 Мь где М, - метастазы в надключичные лимфоузлы на стороне поражения. Третью группу составили 17 женщин с IV стадией заболевания и наличием отдаленных метастазов в кости, печень, легкие, плевру, мягкие ткани и массивным поражением отдаленных лимфоузлов (Т4 N^2 М1).

Изучение показателей структурно-метаболического статуса клеток крови больных РМЖ показало, что достоверные изменения между группами были характерны только для текучести мембран лимфоцитов в области белок-липидных контактов: в группе больных с отдаленными метастазами она была снижена на 33,3% по сравнению с показателями у здоровых женщин и на 17,2% по сравнению со значениями у пациентов первой группы (рис.4). Таким образом, нами была выявлена обратная зависимость между распространенностью опухолевого процесса и текучестью мембран лимфоцитов в зоне белок-липидных контактов. В связи с этим, значения текучести мембран лимфоцитов в области белок-липидных контактов, по нашему мнению, могут быть использованы для оценки распространенности злокачественного процесса при РМЖ.

При изучении интенсивности хемилюминесценции было обнаружено, что в первой группе она не отличалась от значений у здоровых доноров, а в двух других была снижена по сравнению с нормой - во второй группе на 42,0%, в третьей на 75,7% соответственно (рис. 4). Следует отметить, что значения данного показателя в исследуемых группах достоверно отличались друг от друга: во второй группе уровень хемилюминесценции был на 30,2% ниже, чем в первой (р<0,05); а в третьей - на 70,7% и 58,0% ниже, чем в двух других группах (р<0,001). Приведенные данные свидетельствуют о наличии типичных

изменений свечения сыворотки крови у больных РМЖ, зависящие от распространенности опухолевого процесса и состояния организма-опухоленосителя в целом. Мы полагаем, что регистрация перекись-индуцированной люминолзави-симой ХЛ плазмы крови оказалась весьма чувствительным тестом и может быть использована в качестве диагностического критерия.

Исследование активности церулоплазмина выявило достоверное ее увеличение во всех исследованных группах по сравнению с женщинами без онко-патологии: на 39,0% в первой, на 80,3% во второй и на 66,2% в третьей (рис. 4)

200

**

**

т

* **

*

Ш2 ,

Е-

й-

¿а,—

интенсивность ХЛ активность ЦП коэффициент ХЛ/ЦП белок-липидный

контакт лимфоцитов

■ доноры Ш\ группа

- достоверно по сравнению с донорами;

□ II группа ШIII группа

- достоверно между группами

Рис. 4. Некоторые показатели свободнорадикального окисления и структурного состояния мембран в крови больных РМЖ с различной распространенностью опухолевого процесса.

В исследованиях, проведенных ранее в РНИОИ (Ровда Т.А., 2001, Городинская И.А. и соавт., 2002), была установлена достоверная корреляционная зависимость между светосуммой хемилюминесценции и оксидазной активностью церулоплазмина (г=-0,635). В связи с этим мы посчитали возможным ввести коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к уровню церулоплазмина (Кхл/цп), отражающий изменения в системе прооксидан-ты-антиоксиданты. Значения этого показателя оказались сниженными во всех группах (рис. 4). У больных с местнораспространенным процессом (первая

группа) Кхл/цп был ниже нормы лишь на 37,9%, в промежуточной второй группе снижение составляло 66,3%, в то время как у больных с отдаленными метастазами (третья группа) оно дЬстигало 85,0%. При этом, изменения данного параметра между группами носили достоверный характер. Предложенный коэффициент, н"а наш взгляд, отражает наличие взаимосвязи между особенностями проявления и течения опухолевого процесса, уровнем свободноради-кального ПОЛ и активностью антиоксидантов сыворотки крови и может быть предложен в качестве дополнительного критерия при постановке диагноза.

Выявленные закономерности позволили разработать способ определения распространенности патологического процесса при РМЖ (патент РФ № 2241987 от 10.12.2004г.), основанный на определении отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина, а именно: при снижении по сравнению со здорбвыми женщинами отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина более чем в 8 раз прогнозируют генерализацию опухолевого процесса при отсутствии клинической манифестации. Использование способа может способствовать раннему выявлению генерализации злокачественного процесса, определять наличие метастазов в отдаленные органы до их клинической манифестации, что позволит планировать необходимую тактику лечения больных.

Информативность биохимических показателей у больных РМЖ оценивали также в процессе аутоплазмо- и аутомиелохимиотерапии.

До начала и спустя 3 недели после 1 курса аутоплазмохимиотерапии было обследовано 48 больных РМЖ. У 36 женщин был местнораспространенный процесс (Т2-4 N,.2 Мо), а у 12 - РМЖ с отдаленными метастазами в большинстве случаев в кости и печень (Т4 N,.2 М|). По результатам оценки эффективности лечения согласно критериям ВОЗ больные были разделены на три группы. В первую вошли 13 пациенток с полной регрессией опухолевых проявлений, во вторую 23 больные с частичной регрессией опухоли, в третью - 12 пациенток со стабилизацией процесса.

До лечения в группе больных с достигнутой впоследствии полной регрессией опухоли активность церулоплазмина превышала донорские значения на 52,8%, а интенсивность хемилюминесценции и коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к уровню церулоплазмина снижены на 65,3% и 74,0% соответственно (табл. 1).. Текучесть мембран лимфоцитов была снижена по сравнению со значениями у здоровых женщин как в липидном бислое, так и в зоне белок-липидных контактов на 16,1% и 36,2% соответственно (табл. 2). В эритроцитах текучесть в липидном бислое не отличалась от нормы, а в зоне бе-лок-липидных контактов наблюдалась тенденция к снижению (на 21,8%). Погруженность белков в липидный матрикс лимфоцитов была увеличена на 82,6%, а эритроцитов - на 102,9% по сравнению с лицами без онкопатологии. Полярность мембран лимфоцитов не отличалась от контрольных величин, а в эритроцитах была достоверно сниженной на 8,99% (табл. 2).

Таблица 1

Интенсивность хемилюминесценции и активность церулоплазмина в плазме крови больных РМЖ с различной эффективностью аутоплазмохимиотерапии

Группы Церулоплазмин МкМ/л Хемилюминесцевция имп./6 сек. Кхл/цп

Доноры (п=20) 0,710±0,035 3054±368 43011417

I группа (п=13) до АПХТ после АПХТ (полная регрессия) 1,085±0,101 р<0,01 1,08110,107 р<0,01 Р1>0,1 10591124 р<0,001 30401224 Р>0,1 рг<0,001 11201163 р<0,001 30901249 р<0,05 Р1<0,001

II группа (п=23) до АПХТ после АПХТ (частичная регрессия) 1,201 ±0,081 р<0,001 1,330±0,071 р<0,001 Р>>0,1 22201315 0,05<р<0,1 28501239 р>0,1 Р1>0,1 20501279 р<0,001 19601212 р<0,001 Р1>0,1

1П группа (п=12) до АПХТ после АПХТ (стабилизация) 1,2±0,146 р<0,01 1,56±0,208 р<0,01 Р1>0,1 20501262 р<0,05 18401146 р<0,05 Р1>0,1 1720+288 р<0,001 13301199 р<0,001 Р1>0,1

Примечание: р - достоверность различий по сравнению с донорами;

Р1- достоверность различий по сравнению с фоном до лечения.

Таблица 2

Показатели состояния клеточных мембран в крови больных раком молочной железы с различной эффективностью аутоплазмохимиотерапии

Группы Лимфоциты Эритроциты

Б/липидный контакт Липидный бислой Полярность Погруженность Б/липидный контакт Липидный бислой Полярность Погруженность

Доноры (п=20) 0,994±0,043 0,752±0,025 0,855±0,017 0,109±0,012 1,093±0,112 0,614±0,018 1,196±0,011 0,034±0,004

I группа доАПХТ (и-13) после АПХТ (полная регрессия) 0,634±0,038 р<0,001 0,934+0,117 р>0,1 Р1<0,05 0,631±0,041 р<0,05 0,688±0,051 р>0,1 Р1>0,1 0,873±0,027 р>0,1 0,909+0,018 р<0,05 Р1>0,1 0,199±0,021 р<0,001 0,102±0,010 р>0,1 Р1<0,001 0,855±0,084 0,1>р>0,05 1,060±0,142 р>0,1 Р1>0,1 0,583±0,038 р>0,1 0,680±0,053 р>0,1 Р1>0,1 1,090±0,029 р<0,01 1,103±0,012 р<0,001 Р1>0,1 0,069±0,007 р<0,001 0,047±0,007 р>0,1 рк0,05

II группа до АПХТ (п=23) после АПХТ (частичная регрессия) 0,769±0,071 р<0,05 0,694±0,041 р<0,001 Р1>0,1 0,574±0,035 р<0,001 0,527±0,026 р<0,001 Р1>0,1 0,934±0,032 р<0,05 0,927±0,014 р<0,01 Р1>0,1 0,092+0,011 р>0,1 0,104+0,0 1 р>0,1 Р1>0,1 0,741±0,048 р<0,01 0,694±0,041 р<0,001 Р1>0,1 0,560±0,020 0,05<р<0,1 0,540±0,030 р<0,05 Р1>0,1 1,070±0,018 р<0,001 1,121±0,014 р<0,001 р,<0,05 0,065±0,005 р<0,001 0,068±0,007 р<0,001 Р1>0Д

III группа до АПХТ (п=12) после АПХТ (стабилизация) 0,995±0,130 р>0,1 0,632±0,061 р<0,001 Р1<0,05 0,631±0,063 р>0,1 0,581±0,043 р<0,01 Р1>0,1 0,917±0,021 р<0,05 0,898±0,027 Р>0,1 Р1>0,1 0,129±0,019 р>0,1 0,136±0,032 р>0,1 Р1>0,1 0,956+0,140 Р>0,1 0,831±0,052 0,05<р<0,1 Р1>0,1 0,642±0,056 Р1>0,1 0,543±0,057 Р1>0,1 Р1>0,1 1,000±0,053 р<0,01 1,130+0,027 р<0,05 Р1<0,05 0,068±0,014 р<0,05 0,070±0,016 р<0,05 Р1>0,1

Примечание: р - достоверность различий по сравнению с донорами;

Р1- достоверность различий по сравнению с фоном до лечения.

Через 3 недели после проведения первого курса аутоплазмохимиотерапии в группе больных с полной регрессией опухолевых проявлений отмечалась нормализация большинства исследованных параметров. Все показатели текучести ) мембран лимфоцитов и эритроцитов, погруженности белков в липидный матрикс

клеток крови, интенсивность хемилюминесценции достигли донорских величин. ' Активность церулоплазмина осталась на прежнем уровне. Коэффициент отно-

шения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина возрос по сравнению с фоном до лечения на 175,8% и оказался лишь на 28,2% ниже нормы (табл. 1, 2).

У больных с последующей частичной регрессией опухоли до начала аутоплазмохимиотерапии также отмечались сниженные значения текучести клеточных мембран (табл. 2). В лимфоцитах они были ниже контрольных величин на 22,6% в зоне белок липидных контактов и на 23,7% в липидном бислое, в эритроцитах - на 32,2% и 8,8% соответственно. Увеличение погруженности белков в липидный матрикс наблюдалось только в эритроцитах - на 91,2%. Полярность мембран эритроцитов была снижена на 10,5%, а лимфоцитов увеличена на 9,2% по сравнению с нормой. Уровень церулоплазмина превышал значения у женщин без онкопатологии на 69,2%, наблюдалась тенденция к снижению значений светосуммы хемилюминесценции (на 27,3%), а коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина был ниже контрольных величин на 52,3% (табл. 1). После химиотерапии у больных с частичной регрессией опухоли практически все исследованные показатели не отличались от фоновых величин, только полярность мембран эритроцитов достоверно увеличилась на 4,8%, но оставалась ниже нормы (табл. 1, 2).

У больных с последующей стабилизацией процесса до проведения ауто-^ плазмохимиотерапии текучесть мембран как лимфоцитов, так и эритроцитов не

отличалась от нормы, а изменения полярности и погруженности белков в ли* пидный матрикс клеточных мембран имели ту же направленность, что и у больных с частичной регрессией опухоли. Активность церулоплазмина была повышена на 69,0%, а интенсивность хемилюминесценции и коэффициент отноше

ния интенсивности хемилюминесценции к уровню церулоплазмина были сниженными на 32,9% и 60,0% соответственно по сравнению с женщинами без он-копатологии (табл. 1, 2). Через 3 недели после окончания первого курса ауто-плазмохимиотерапии в этой группе больных было отмечено снижение текучести мембран лимфоцитов. В области белок-липидных контактов снижение данного показателя было достоверным как по отношению к фону до лечения, так и по сравнению с нормой, приблизительно на 36% в обоих случаях. В липидном би-слое текучесть оказалась достоверно сниженной на 22,7% по сравнению с контрольными величинами, но достоверно не отличалась от исходных значений. В эритроцитах снижение текучести было статистически недостоверным по сравнению с фоном, но значимым по сравнению с женщинами без онкопатологии. Погруженность белков в липидный матрикс клеточных мембран осталась на исходном уровне. Активность церулоплазмина возросла у большинства обследованных больных по сравнению с исходными данными (р<0,05 по критерию Вилкоксона), превосходя норму на 119,7%. Остались сниженными уровень хемилюминесценции и коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина - на 39,8% и 69,1% соответственно по сравнению со значениями у здоровых женщин (табл. 1,2).

Таким образом, нами было выявлено, что для больных с высокой эффективностью лечения - полной регрессией опухоли (которую, по нашим данным, можно прогнозировать по фоновому уровню изученных показателей) после проведения химиотерапии характерна значительная коррекция соотношения сво-боднорадикальных процессов и антиоксидантной активности плазмы крови и, как следствие этого, нормализация текучести и погруженности белков в липидный матрикс клеточных мембран, в то время как у больных со стабилизацией процесса после проведенной химиотерапии наблюдается снижение текучести мембран при отсутствии нормализации других показателей.

Полученные результаты позволили разработать "Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы Ш-ГУ стадий" (Заявка на изобретение № 2003106114/14 (006353), приоритетная справка от

3.03.2003г.), основанный на определении текучести мембран лимфоцитов, погруженности белков в липидный матрикс лимфоцитов и расчете коэффициента отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина до и после проведения первого курса аутоплазмохимиотерапии. Предложенная в способе комплексная оценка состояния свободнорадикальных процессов и клеточных мембран позволит повысить точность прогноза эффективности химиотерапии и вносить необходимую коррекцию в тактику лечения больных РМЖ.

До и после проведения первого курса аутомиелохимиотерапии были исследованы биохимические показатели 18 больных РМЖ, из которых у 13 женщин был местнораспространенный процесс (Т2.4 Ы|.2 М0), у 5 - РМЖ с отдаленными метастазами в большинстве случаев в кости и печень (Т4 N1.2 М|).

Согласно полученным данным, до проведения аутомиелохимиотерапии значения светосуммы хемилюминесценции были снижены по сравнению с нормой как у больных с местнораспространенным процессом, так и у больных с отдаленными метастазами, при этом снижение в группе с местнораспространенным РМЖ составляло 24,4%, а в группе с генерализованным РМЖ - 46,1%. Активность церулоплазмина у больных с местнораспространенным процессом не отличалась от значений у здоровых женщин, а у пациенток с отдаленными метастазами была повышена на 85,9%. Коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина в группе больных с местнораспространенным РМЖ был снижен по сравнению с донорами в 2,1 раза, а в группе с генерализацией процесса - в 3,5 раза. Анализ показателей структурного состояния мембран клеток крови выявил достоверное снижение текучести мембран лимфоцитов в зоне белок-липидных контактов в обеих группах больных по сравнению с контрольными величинами - на 20,2% и 47,5% соответственно, а у пациенток с генерализованным РМЖ отмечалось снижение текучести мембран лимфоцитов и в липидном бислое на 48,7% (рис. 5). Таким образом, более выраженные изменения изученных показателей, наблюдались у пациенток РМЖ с отдаленными метастазами, что подтверждает информативность вы-

бранных параметров свободнораднкального окисления и состояния плазматических мембран для оценки степени распространенности опухолевого процесса.

200

160

120

%

80 40 0

* - достоверно по сравнению с донорами; ** - достоверно по сравнению с местнораспростра-ненным РМЖ

Рис. 5 Некоторые показатели свободнораднкального окисления и структурного состояния клеточных мембран в крови больных раком молочной железы до аутомиелохимиотерапии.

После проведения аутомиелохимиотерапии в зависимости от ее эффективности больные с местнораспространенным процессом были разделены на две группы. В первую группу вошли 7 больных с наиболее высокой эффективностью лечения, у которых регрессия опухоли достигала 80-100%. Во второй группе из б больных регрессия опухоли составляла 50-60%. У больных РМЖ с отдаленными метастазами регрессии опухоли не отмечалось и результаты расценены как стабилизация процесса (рис. 6).

Как и в случае аутоплазмохимиотерапии после проведения аутомиелохимиотерапии у больных с наиболее высокой эффективностью от проведенного лечения наблюдалась нормализация большинства изученных показателей. Все исследованные структурные характеристики мембран клеток крови оказались в пределах нормы, интенсивность хемилюминесценции достигла контрольных величин, коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к уровню церулоплазмина возрос на 26,1%, хотя и не достиг значений у здоровых женщин за счет увеличения активности церулоплазмина.

**

■доноры

■ больные местнораспространенным РМЖ □ больные генерализованным РМЖ

Яш** НН Н ^

I I Ь I I

хл

ЦП

Кхп'цп белок/лип. пипидный

контакт бислой

лимфоцитов лимфоцитов

350 300 250

/

200

%

1 150

100 50 0

* - достоверно по сравнению с донорами; ** - достоверно по сравнению с фоном до лечения

Рис. 6. Некоторые показатели свободнорадикального окисления и структурного состояния мембран лимфоцитов в крови больных раком молочной железы с различной эффективностью аутомиелохимиотерапии (в процентах по отношению к значениям у доноров, принятых за 100%).

В группе больных со стабилизацией процесса текучесть в зоне белок-липидных контактов лимфоцитов осталась на низком уровне, а в эритроцитах значения данного показателя достоверно снизились по сравнению с нормой. Отмечалось достоверное увеличение погруженности белков в липидный мат-рикс мембран клеток крови как по сравнению со значениями у доноров, так и с фоном до лечения. Активность церулоплазмина резко увеличилась - на 233,5% по сравнению с контрольными величинами и на 79,4% по сравнению с исходными данными, что привело к дальнейшему снижению интенсивности хеми-люминесценции и коэффициента отношения интенсивности хемилюминесцен-ции к уровню церулоплазмина.

Больные с регрессией опухоли 50-60% после проведения аутомиелохимиотерапии занимали промежуточное положение по уровню определяемых параметров.

Таким образом, нами выявлены однонаправленные изменения изученных показателей у больных РМЖ как при аутоплазмо-, так и при аутомиелохи-миотерапии, зависящие от клинического эффекта проведенного лечения. Как и в случае аутоплазмохимиотерапии, значения интенсивности хемилюминесцен-ции плазмы крови, активности церулоплазмина, коэффициента отношения интенсивности хемилюмннесценции к активности церулоплазмина, текучести мембран лимфоцитов в зоне белок-липидных контактов и погруженности белков в липидный матрикс мембран клеток крови в наибольшей степени коррелируют с эффективностью аутомиелохимиотерапии.

ВЫВОДЫ

1. Уровень люминолзависимой перекись-индуцированной хемилюмннесценции плазмы крови является объективным критерием распространенности опухолевого процесса у больных раком молочной железы. Наибольшее снижение хемилюмннесценции наблюдается при генерализации процесса (на 56-76%, р<0,01-0,001), что свидетельствует об угнетении процессов свободнорадикаль-ного окисления на терминальных стадиях развития рака молочной железы.

2. Повышение активности компонентов антиоксидантной защиты (су-пероксиддисмутазы на 49%, каталазы на 28-83%, церулоплазмина на 65-80%, р<0,05—0,001) отражает увеличение распространенности рака молочной железы. Степень выраженности этих изменений является дополнительным диагностическим критерием для оценки распространенности злокачественного процесса.

3. Прогрессирование рака молочной железы сопровождается увеличением степени выраженности мембранодеструктивных процессов, о чем свидетельствует снижение текучести клеточных мембран (на 18-36%, р<0,05-0,001) при генерализации злокачественного процесса.

4. Показатели интенсивности свободнорадикальных процессов и структурного состояния мембран клеток крови больных раком молочной железы могут использоваться для оценки и/или прогнозирования возможного эффекта на этапах специального лечения. Нормализация этих параметров наблюдается при дос-

тижении максимального эффекта после аутоплазмохимиотерапии или аутомие-лохимиотерапии.

5. Коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови является наиболее информативным показателем, отражающим как распространенность процесса, так и эффективность проведенной химиотерапии при раке молочной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно использовать определение коэффициента отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови в качестве дополнительного диагностического критерия при оценке распространенности злокачественного процесса. При снижении данного показателя более чем в 8 раз по сравнению с нормой можно предполагать генерализацию РМЖ, не смотря на отсутствие ее клинической манифестации.

2. Комплексная оценка коэффициента отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина, текучести мембран лимфоцитов в области белок-липидных контактов, погруженности белков в липидный метрике лимфоцитов до и после проведения химиотерапии на аутосредах у больных РМЖ может быть использовано для прогноза эффективности противоопухолевого воздействия, что позволяет корректировать тактику лечения, улучшая его результаты и качество жизни онкологических больных.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Состояние антиоксидантной системы и процессы свободнорадикаль-ного окисления в крови онкологических больных // В сб. матер. VI Международной конференции «Биоантиоксидант». М., 2002. С. 680-681 (соавт. Горо-шинская И.А, Ровда Т.А., Сурикова Е.И., Голотина Л.Ю., Владимирова Л.Ю., Немашкалова Л.А.).

2. Оценка активности свободнорадикальных процессов и состояния мембран в крови больных раком молочной железы при аутоплазмохимиотера-пии // В сб. матер, первой межвузовской научно-практической конференции студентов, молодых ученых и специалистов «Обмен веществ при адаптации и повреждении». Ростов-на-Дону, 2002. С. 30 (соавт. Владимирова Л.Ю., Неску-бина И.В., Большакова П.С.).

3. Показатели свободнорадикального окисления и состояния мембран в крови больных раком молочной железы при аутоплазмохимиотерапии // Паллиативная медицина и реабилитация. М., 2002. №2. С. 53 (соавт. Горошинская И.А., Владимирова Л.Ю., Немашкалова Л. А., Нескубина И.В., Ровда Т.А.).

4. Влияние аутомиелотерапии на свободнорадикальные процессы и состояние мембран в крови больных раком молочной железы // Паллиативная медицина и реабилитация. М, 2003. №2. С. 60-61 (соавт. Горошинская И.А., Николаева Н.В., Немашкалова Л.А.).

5. Сравнительная оценка токсичности химиотерапии рака молочной железы на аутосредах организма // Паллиативная медицина и реабилитация. М. 2003. №2. С.63-64 (соавт. Горошинская И.А., Сычева Е.А., Нескубина И.В.).

6. The role of free radical processes in blood of patients with local and disseminated breast cancer // Internation conference "Reactive oxygen and nitrogen species, antioxidants and human health". Smolensk, 2003. P.96 (Goroshinskaya I.A., Vladimirova L.Yu., Nemashkalova L.A., Neskubina I.V.).

7. Способ определения распространенности патологического процесса при онкологических заболеваниях // Патент РФ № 2241987 от 10.12 2004г. Бюл. № 34 (соавт. Сидоренко Ю.С., Горошинская И.А., Владимирова Л.Ю., Нескубина И.В., Немашкалова Л.А.).

8. Использование некоторых показателей свободнорадикального окисления в крови больных раком молочной железы для оценки распространенности опухолевого процесса // Прогностические факторы в онкологии. М., 2004. С. 1724 (соавт. Горошинская И.А., Владимирова Л.Ю., Немашкалова Л.А., Нескубина И.В.).

9. Использование показателей свободнорадикальных процессов и состояния мембран в крови больных для прогнозирования эффективности лечения рака молочной железы // Прогностические факторы в онкологии. М., 2004. С. 2735 (соавт. Сидоренко Ю.С., Горошинская И.А., Владимирова Л.Ю., Немашкалова Л.А.).

10. Сравнительная оценка влияния разных способов введения химиопре-паратов на ряд биологических показателей крови больных раком молочной железы // Прогностические факторы в онкологии. М., 2004. С. 36-40 (соавт. Горошинская И.А., Сычева Е.А., Сурикова Е.И., Немашкалова Л.А.).

11. Показатели свободнорадикального окисления и состояния мембран клеток крови больных местно-распространенным раком молочной железы при аутомиелохимиотерапии // Прогностические факторы в онкологии. М., 2004. С. 305-311 (соавт. Николаева Н.В., Немашкалова Л.А., Горошинская И.А., Холодный М.Д.).

Печать цифровая. Бумага офсетная. Гарнитура «Тайме». Формат 60x84/16. Объем 1,0 уч.-изд.-л.

Заказ № 394. Тираж 100 экз. Отпечатано в КМЦ «КОПИЦЕНТР» 344006, г. Ростов-на-Дону, ул. Суворова, 19, тел. 247-34-88

1

*

#25908

РНБ Русский фонд

2006-4 3650

Актуальность работы. Заболеваемость и смертность от рака молочной железы (РМЖ) среди женского населения продолжают неуклонно расти как в нашей стране, так и за рубежом. В структуре заболеваемости злокачественными опухолями в мире РМЖ занимает третье место после рака легкого и рака желудка и составляет 10% от всех случаев онкопатологии. В России доля РМЖ среди злокачественных новообразований составляет 23% и имеет устойчивую тенденцию к увеличению, причем у 40-56% впервые зарегистрированных больных выявляются III-IV стадии опухолевого процесса. В структуре смертности от онкозаболеваний у женщин РМЖ составляет 13,7% (За-ридзе Д.Г., 2002; Ушакова Т.И. и соавт., 2002; Алясова А.В., 2004).

В связи с выше изложенным, весьма актуальными остаются ранняя диагностика РМЖ и выбор оптимальной тактики лечения данной категории больных. Для решения этих задач продолжается поиск, разработка и внедрение различных методов диагностики и прогноза, в том числе и биохимических, способных выявлять наличие и прогрессию опухолевого процесса и адекватно оценивать эффективность проведенной терапии.

Известно, что среди факторов риска развития злокачественных новообразований важная роль принадлежит нарушению равновесия в системе свободнорадикальное перекисное окисление липидов (ПОЛ) - антиоксидант-ная защита организма. При нарушении адекватного соотношения окислительных и антиокислительных процессов, несостоятельности антиоксидант-ных механизмов происходит избыточное накопление свободных радикалов, приводящее к повреждению нуклеиновых кислот, индукции хромосомных аберраций, нарушениям регуляции клеточной пролиферации и апоптоза, играющих важную роль в злокачественной трансформации клеток и опухолевой прогрессии (Савина Е.В. и соавт., 2001). Несомненная роль процессов ПОЛ при злокачественных новообразованиях подтверждена многочисленными исследованиями (Франциянц Е.М. и соавт., 1995; Пальмина Н.П., 2000;

Das U.N., 2002; Kohen R., Niska A., 2002; Ray G., Husain S.A., 2002). Это позволяет рассматривать опухолевую болезнь как одну из форм свободноради-кальной патологии.

Имеющиеся в литературе сведения о состоянии системы ПОЛ у больных РМЖ достаточно противоречивы. Показано как усиление процессов ПОЛ (Сирота В.Г., 2000), так и отсутствие их достоверных изменений (Савина Е.В. и соавт., 2001), представлены так же доказательства снижения уровня ПОЛ у больных РМЖ (Корман Д.Б. и соавт., 1992; 1995; 1997). Неоднозначные данные о состоянии прооксидантных и антиоксидантных показателей могут быть связаны как с гетерогенностью опухолей, так и с фазностью изменения антиокислительной активности липидов в процессе развития злокачественного новообразования (Бурлакова Е.Б. и соавт., 1975; Барабой В.А., Орел В.Э., 1983; Зенков Н.К. и соавт., 2001).

Исходя из этого, важным представляется изучение показателей сво-боднорадикального окисления, антиоксидантной системы и тесно с ними связанного структурно-функционального состояния клеточных мембран в крови больных РМЖ с различной степенью выраженности патологического процесса и различной чувствительностью к проведенному химиотерапевти-ческому воздействию. Необходимость химиотерапии, как одного из компонентов лечения данной категории больных, на сегодняшний день не вызывает сомнений. С этих позиций большой интерес представляют разработанные академиком РАМН Ю.С. Сидоренко методы аутобиотерапии с использованием естественных сред организма и, в частности, методики аутоплазмо- и ау-томиелохимиотерапии. Опыт применения и дальнейшая разработка этих методов в лечении больных РМЖ доказывает их высокую эффективность, обеспечивает снижение токсичности, возможность преодоления множественной лекарственной резистентности, иммуномодулирующий эффект (Владимирова Л.Ю., 2000; Николаева Н.В., 2003).

Цель работы:

Определить биохимические показатели в крови больных РМЖ, отражающие степень распространенности опухолевого процесса и позволяющие объективно оценить эффективность проводимого химиотерапевтического воздействия.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить особенности протекания свободнорадикального окисления, функционирования антиоксидантной системы и состояния клеточных мембран в крови больных с местнораспространенным и генерализованным РМЖ.

2. Изучить интенсивность хемилюминесценции плазмы крови, активность церулоплазмина и показатели структурно-функционального состояния мембран эритроцитов и лимфоцитов у больных РМЖ с различной эффективностью химиотерапии на аутосредах (аутоплазмохимиотерапия, ау-томиелохимиотерапия).

3. Разработать биохимический способ определения распространенности опухолевого процесса.

4. Разработать биохимический способ оценки эффективности противоопухолевого лечения в клинике.

Научная новизна работы:

Впервые на большом клиническом материале проведено комплексное исследование некоторых показателей свободнорадикальныного окисления, антиоксидантного статуса и структурного состояния клеточных мембран в крови больных РМЖ с различной распространенностью опухолевого процесса и эффективностью проведенной химиотерапии. Показано, что прогресси-рование злокачественного процесса у больных РМЖ характеризуется снижением уровня свободных радикалов на фоне увеличения оксидазной активности церулоплазмина и нарастанием мембранотоксических эффектов, проявляющихся в снижении текучести клеточных мембран, а также изменении полярности и погруженности белков в липидный матрикс. Впервые при применяемых в Ростовском научно-исследовательском онкологическом институте методах химиотерапии - аутплазмо- и аутомиелохимиотерапии установлены закономерности изменения уровня свободных радикалов и активности церулоплазмина в плазме крови, а также погруженности белков в липидный матрикс плазматических мембран лимфоцитов и эритроцитов и их текучести у больных РМЖ в зависимости от эффективности проведенного лечения. Показана прогностическая значимость исходного состояния процессов ПОЛ и структурной организации мембран клеток крови в плане оценки распространенности опухолевого процесса и результатов химиотерапии.

Практическая значимость исследования:

Выявленные на основе биохимических исследований в крови больных РМЖ прогностически значимые параметры состояния свободнорадикального окисления и структурно-метаболического статуса клеточных мембран позволяют разработать критерии для определения распространенности злокачественного процесса, способствующие индивидуализации лечения данной категории больных. На основании полученных данных предложены "Способ определения распространенности патологического процесса при онкологических заболеваниях" и "Способ прогнозирования эффективности лечения больных раком молочной железы III-IV стадий". Использование способов будет способствовать раннему выявлению генерализации опухолевого процесса, улучшению контроля за проводимой химиотерапией, что позволит планировать необходимую тактику лечения больным РМЖ.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Увеличение распространенности опухолевого процесса при РМЖ сопровождается снижением интенсивности свободнорадикальных процессов на фоне увеличения активности изученных компонентов антиоксидантной системы и нарушением структурно-функционального состояния клеточных мембран.

2. Нормализация показателей структурно-функциональной целостности мембран форменных элементов крови и значительная коррекция соотношения свободнорадикальных процессов и антиоксидантной активности являются одним из механизмов реализации клинического эффекта при проведении химиотерапии на аутосредах - аутоплазмо- и аутомиелохимиотерапии.

выводы

1. Уровень люминолзависимой перекись-индуцированной хемилюминесценции плазмы крови является объективным критерием распространенности опухолевого процесса у больных раком молочной железы. Наибольшее снижение хемилюминесценции наблюдается при генерализации процесса (на 56-76%, р<0,01-0,001), что свидетельствует об угнетении процессов свободно-радикального окисления на терминальных стадиях развития рака молочной железы.

2. Повышение активности компонентов антиоксидантной защиты (су-пероксиддисмутазы на 49%, каталазы на 28-83%, церулоплазмина на 65-80%, р<0,05-0,001) отражает увеличение распространенности рака молочной железы. Степень выраженности этих изменений является дополнительным диагностическим критерием для оценки распространенности злокачественного процесса.

3. Прогрессирование рака молочной железы сопровождается увеличением степени выраженности мембранодеструктивных процессов, о чем свидетельствует снижение текучести клеточных мембран (на 18-36%, р<0,05-0,001) при генерализации злокачественного процесса.

4. Показатели интенсивности свободнорадикальных процессов и структурного состояния мембран клеток крови больных раком молочной железы могут использоваться для оценки и/или прогнозирования возможного эффекта на этапах специального лечения. Нормализация этих параметров наблюдается при достижении максимального эффекта после аутоплазмохимиотера-пии или аутомиелохимиотерапии.

5. Коэффициент отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови является наиболее информативным показателем, отражающим как распространенность процесса, так и эффективность проведенной химиотерапии при раке молочной железы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Целесообразно использовать определение коэффициента отношения интенсивности хемилюминесценции к активности церулоплазмина в плазме крови в качестве дополнительного диагностического критерия при оценке распространенности злокачественного процесса. При снижении данного показателя более чем в 8 раз по сравнению с нормой можно предполагать генерализацию РМЖ, не смотря на отсутствие ее клинической манифестации.

2. Комплексная оценка Кхл/цп, текучести мембран лимфоцитов в области белок-липидных контактов, погруженности белков в липидный матрикс лимфоцитов до и после проведения химиотерапии на аутосредах у больных РМЖ может быть использовано для прогноза эффективности противоопухолевого воздействия, что позволяет корректировать тактику лечения, улучшая его результаты и качество жизни онкологических больных.