Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Иммуномоделирующее действие препарата плаферон в эксперименте и клинике

А 9

- ' ч» * * 1

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И СОЦИАЛЬНОГО ОБЕСПЕЧЕНИЯ РЕСПУБЛИКИ ГРУЗИЯ Научно-исследовательский институт экспериментальной и клинической терапии

На правах рукописи

БАХУТАШВИЛИ АЛЕКСАНДР ВЛАДИМИРОВИЧ

ИММУНОМОДУЛИРУКЩЕЕ ДЕЙСТВИЕ ПРЕПАРАТА ПЛАФЕРОН В ЭКСПЕРИМЕНТЕ И КЛИНИКЕ

14.00.36. - Аллергология и икмунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Тбилиси - 1991

Работа выполнена в Институте медицинской биотехнологии Академии наук Республики Грузия

Официальные оппоненты: - член-корреспондент АНН СССР,

доктор медицинских наук, профессор, В.Г. БОЧОРИЛГВИЛИ

- доктор медицинских наук, профессор Л.О. КИЛАСОНИЯ

- доктор биологических наук, профессор Д.Г. МИКЕЛАДЗЕ

Ведущее учреждение - Институт иммунологии МЗ СССР

Защита диссертации состоится ./2 •^■¿игё/иИ 1991 п. в "13" часов на заседании специализированного совета Д. 076.02.01 в Научно-исследовательском институте экспериментальной и клинической терапии Министерства здравоохранения и социального обеспечения Республики Грузия (380059, Тбилиси, ул. Любляны 4).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Научно-идследовательского - института экспериментальной и клинической терапии Министерства здравоохранения и социального обеспечения Республики Грузия.

Автореферат разослан 1991 г.

Ученый секретарь специализированного совета,

кандидат медицинских наук С.Б.Хомерики

......ига

0|дэл сертгций

- з -

I. ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. В настоящее время молекулярные подходы к изучению патогенеза различных заболеваний пользуются все большой популярность» в медицинских научных кругах. Особый интерес представляют универсальные для всех клеток переносчики внеклеточных сигналов - вторичные мессенджеры или посредики. Несмотря на огромное разнообразие факторов осуществляющих ауто-, пара- и эндокринную регуляцию клеточных функций, сами клетки обладают сравнительно ограниченный набором

внутриклеточных мессенджеров. К последним относятся цАМф, цГИф, ионы кальция, диацилглицерид, инозитолтрифосфат, продукты циклооксигеназного метаболизма арахидоновой кислоты и

2,5-олигоаденилат. Направленное изменение метаболизма вторичных мессенджеров изменяет биохимические процессы и функции клеток, уровень пролиферации и дифференциации в тканях, что, в свою очередь, приводит к изменению функций эндокринной,

сердечно-сосудистой, нервной и других систем и органов больного или здорового организма.

Безусловная заинтересованность описанных универсальных систем в патогенезе заболеваний заставляет изучать их роль в развитии органных и клеточных нарушений при различных заболеваниях. Одновременно с этим закономерный интерес представляет влияние лечебных препаратов на регуляцию метаболизма вторичных мессенджеров в норне и патологии.

Препарат плаферон, обладающий антирипоксическиы,

дезинтоксикациопним, и антивирусным свойствами, представляет собой смесь физиологически активных веществ, которые

-ч-

осуществяяют свое вл ияяие на функцию клеток посредством взаимодействия со специфическими рецепторами (В.И.Бахуташвили и соавт., 1985; В.Г.Бочоришиили и соавт.,1985; Е.Ш.Боцвадзе и соавт., 1965; Э. А.Имедидзе, 1985; Б.Н.Корсантия,1987; Л.Б.Картозия, 1966; Д.Г.Нерабииви ли, 1966; Т.И.Чиковани,19в9; Микеладзе и др., 1990). Последние цитоплазнатической частью связаны с ферментами осуществляющими контроль за метаболизмом вторичных мессенджеров. Таким образом изучение

иммуномодулирующего действия препрата и его влияния на метаболизм вторичных мессенджеров клеток представляется актуальной темой для исследований.

Вирусный гепатит В (ВГВ) характеризуется широкой распространенностью среди населения всего мира, поражением всех возрастных групп. Поэтому лечение и профилактика ВГВ стали первостепенной медико-социальной проблемой. Актуальность этой проблемы многократно возрастает в связи с тем фактом, что при ВГВ нередки тяжелые формы заболевания, хронизация процесса, возможны и летальные исходы (Е.С.Кетиладзе и соавт., 19вО, 1983; Т.А.Накарова, 1983; А.ф.Блюгер,Х.Н.Векслер,19вЗ;

Э.Л.Боцвадзе 1983; Н.А.Осна, 1984; А.ф. Блюгер,

И. Н.Новицкий, 1988; веПп, 1983; Вмгпе1 е! а1.,1984). Следует также отметить, что в настоящее время все еще отсутствуют достаточно эффективные методы лечения и соответствующие лечебные средства и нет единодушия среди исследователей инфекционистов относительно целесообразности использования в терапии острого ВГВ тех или иных лекарственных препаратов, включая группу глюкокортикостероидов (Н.А.фарбер, 1982;

Г.В.Нельник, 1905; В. И.Покровский и соавт., 1986; А.ф. Блюгер, И.Н.Новицкий, 1988).

Анализ литературы показывает, что в настоящее время, имеется достаточно санных (в том числе и клинического плана), указывающих на важную роль в развитии клинических проявлений ВГВ иммунной системы организма. К тому же иммунный дисбалланс в крови держится спустя длительное время после полного клинического выздоровления и нормализации показателей пигментного и ферментного обмена, что указывает на продолжение патолгического процесса и возможность развития хронических форм заболевания (В.ф.Баликин, 1987; А.ф.Влюгер, И.Н.Новицкий, 1986; Barnaba et al.( 1985).

Цель и задачи исследования. Целью работы являлось изучение механизмов иммунонодулирующего действия препарата плаферон на клеточной и молекулярном уровне, установление его действие на иммунокомпетентные клетки in vitro, а так же оценка его влияния на иммунный статус и метаболизм вторичных мессенджеров в периферических клетках иммунной системы для определения его терапевтического эффекта у больных острым ВГВ. При этом решались следующие задачи:

- изучение влияния препарата плаферон на некоторые

функции им ну некомпетентных клеток in vitro;

- определение содержания Т-лимфоцитов и их основных субпопуляций в периферической крови у больных острым ВГВ и влияние препарата плаферон на ото звено иммунной системы;

- исследование метаболизма внутриклеточного циклического аденозинмонофосфата (цАМф) в мононуклеарных клетках

периферической крови у больных острым ВГВ при лечении традиционными методами и под действием плаферона;

- изучение влияния препарата плаферон на клиническое течение острого ВГВ;

Научная новизна

Впервые:

- установлен механизм действия препарата плаферон на клеточном и молекулярном уровне;

- изучено влияние препарата нлаферои на активность внутриклеточных мессенджеров в иммунокомпетентных клетках;

- показано влияние препарата клаферон на активность ЕК-клеток периферических клеток здоровых доноров;

- обнаружены нарушения метаболизма внутриклеточной системы цАМф в мононуклеарных клетках периферической крови при остром ВГВ и установлена ее важная роль в патогенезе этого заболевания;

с помощью современных иммунологических методов исследования выявлена связь между клеточным звеном иммунитета, обменом внутриклеточного цАМф в мононуклеариых клетках периферической крови больных острым ВГВ;

- разработаны новые аспекты интерпретации показателей иммунного статуса больных острым ВГВ;

- доказано благоприятное влияние препарата плаферон на клиническое течение болезни;

- выявлены механизмы действия плаферона при остром 1)ГВ.

Практическая ценность.

исследовано действие препарата плаферон на

иммуяокомпетентные клетки, выявлены механизмы действии препарата иа их функциональную активность.

- предложен метод для скрининга и тестирования новых иммуномодулирующих препаратов.

- установлена эффективность препарата плаферон при лечении больных острын ВГВ. Определены наиболее оптимальные дозы препарата и эффективная схема лечения острого ВГВ.

установлена возможность использования состояния внутриклеточной системы цАИф в мононуклеарных клетках, как дополнительного критерия- для оценки иммунного статуса больных острым ВГВ, эффективности проведенной терапии и прогнозирования заболевания.

- освещены некоторые стороны патогенеза острого ВГВ (тонкие механизмы развития иммунологических нарушений).

- предложен новый нетод тестирования инмуномодулирующих веществ на основе яптерналиэадни поверхностных рецепторов иммунокомпетентных клеток.

Основные положения, выносимые на защиту:

- механизм инмуноыодупирующего действия препарата плаферон заключается в подавлении в иммунокомпетентных клетках активности протеинкиназы С (ПКС) и повышении концентрацию внутриклеточного цАМф;

- при остром ВГВ обнаруживается нарушение метаболизма внутриклеточного цАМф в мононуклеарных клетках периферической, крови что свидетельствует о патологических сдвигах в функциональной деятельности этих клеток;

субпопуляционный анализ мононуклеарных клеток

периферической крови у больных острым ВГВ показал повышение числа клеток Т-киллеры-супрессоры (клетки с фенотипом ОКТв, Т8 +, С08) и уменьшение содержания Т-хелперов (клетки с фенотипом ОКТ4, ТЧ + , СЮ4).

- включение препарата плаферон в общепринятую схему лечения острого ВГВ сопровождается коррекцией иммунологических и биохимических нарушений и, соответственно, более быстрым клиническим выздоровлением по сравнению с пациентами, не принимавшими этот препарат. Вместе с тем, у больных, леченных плафероном, ни в одном случае не отмечались рецидивы и переход заболевания в хронические формы;

- выявленные иинунологические и биохимические нарушения при традидионном методе лечения сохраняются практически без изменений и в период ранней реконвалесценции (при выписке из стационара), но быстро (спустя 12-15 дней после поступления) нормализуются под влиянием пдаферона.

Практическое внедрение полученных результатов. Материалы диссертации послужили основой для составления инструкции по применению препарата плаферон в качестве иммуномодулятора.

Апробация диссертации состоялась сентября 1991 года на совместном расширенном заседании Институтов морфологии и медицинской биотехнологии Академии наук Республики Грузия.

Основные положения диссертации были доложены на: Всесоюзной конференции "Итоги и перспективы теоретических и практических исследований по проблеме интерферона." Тбилиси, 1985 г-; Всесоюзном симпозиуме "Реабилитация иммунной системы." - Дагомыс - -1490

Обьем и структура работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, характеристики материалов и методов, раздела собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и указателя литературы. Работа изложена на 175 страницах, содержит 12 таблиц и 9 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Экспериментальные исследования: для решения поставленных задач предметом исследования являлись мононуклеарные клетки здоровых доноров. В работе использовались следующие методы: реакция бласттрансформации лимфоцитов (ParK.Qood 1972), реакция спонтанной цитотоксичности Е К клеток методом высвобождения радиоактивного изотопа хрома из клеток-мишеней К562, метод коньюгации и цитотоксичности в агаре (Grimm, Bonavida, 1979), определение рецепторов на поверхности Т лимфоцитов методом непрямой флюоресценции с помощью проточного цитофлюориметра ЭПИКС-С (Coulter, USA). В работе использовались моноклональные антитела против линфоцитов человека фирмы Ortho Pharmaceuticals.

Клинический материал:

Обследовано 101 человек, среди них 80 больных острым ВГВ и 21 здоровых доноров. 11 больных получавшие плаферон, составили 2-ую группу (основная группа), а остальные 39 пациентов - 1-ую.Больные, также как и доноры, были преимущественно молодого ворзраста 83 (в2,2Х) человек до '10 лет. Среди пациентов 1-ой группы было 21 (53,97) мужчин и 1в (46,ZX ) женщин. Во 2-ой группе мужчины составили 58,5'/ (24

человека), женщины 41,57. (17 человек).

Обследованные больные находились на излечении в Республиканской клинической инфекционной больнице г*. Тбилиси в период с 1967 по 1909 год.

Клинический диагноз ставился на основании клинике» -лабораторных и эпидемиологических данных и во веек случаях подтверждался серолорически, обнаружением HBsAg в сыворотке крови методами ВИЭФ, РОНГА и ИфА.

При подборе больных мы исходили из тех положений, что" подавляющее количество пациентов - 34 (87,IX) в 1-ой и 36 (07,9 У.) во 2-ой группах, не имели заметных отклонений со стороны других внутренних органов,нервной системы, а такие не имели интеркурентных заболеваний, которые могли бы повлиять на их иммунологический статус.

Оценку тяжести производили по совокупности

анамнестических, клинических и лабораторных данных. В 1-ой группе заболевание протекало в среднетяжелой форме у 25 (64,17.) больных, в тяжелой у - 14 (35,9Х), а во 2-ой соответственно -2Ь (63,ЧУ.) и 15 (3(5,6Х). Признаки интоксикации были выражены по всех случаях. В 1-ой группе в 3-ех случаях (7,6Х) течение заболевания осложнилось ОПО, во 2-ой - 0ПЭ отмечено в одном случае (2,6"/.).

Для всестороннего обследования больных были использованы: клинические наблюдения в динамике, биохимические тесты, иммунологические иследованин.

Биохимические и иммунологические исследования проводились спустя 1-7 (в среднем 3-Ь) дней после поступления (¡ольног'о (н

основном в первые 10 дней желтушного периода), и динамике-после 12-15 дней госпитализации и в стадии ранней рекониалесценции -при выписке из стационара.

Всей больным проводилось базистерания (постельный режим, диетотерапия, витаминотерапия) и интенсивное патогенетическое лечение.

Учитывая данные литературы относительно самоизлечения больных легкой формой острого ВГВ, наличие прямой связи между тяжестью заболевания и глубиной иммунологических нарушений, (Н. С.Соринсон и соавт., 1987; Е.С.Кетиладзе и соавт., 1987; А.ф. Блюгер, И.Н.Новицки, 1983), плаферонотерапию проводили только среднетяжелым и тяжелым больным. Естественно и 1-ую группу составили пациенты с анологичными формами заболевания.

Лечение плафероном проводилось в среднем 5-6 дней, самый

\

непродолжительный курс составил 3 дни, максимальный Я дней. Препарат вводили внутривенно один ра^ в день. Суточи доим препарата составила в среднем 0,свь кг белка на кг гзесл (минимальная -' 0,065 мг/кг, максимальная 0,100 мг/кг). Введение препарата прекращали после исчезновения симптомов интоксикации. Одновременно с этим не-прекращалась интенсивна л патогенетическая терапия. Кортикостероиды получали в 1 -ой группе Ь больных, во 2-ой - I пациентов (средняя курсовая доза кортикостероид'ов 800 мг).

' РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ Цикл работ, проведенных по изучению действия препарата на рецепторный аппарат клеток, показал, что плаферон

-1г-

целенаправленио повышает экспрессию рецепторов, активация которых связанна с увеличением метаболизма одного тина вторичных ыессенджеров и уменьшением другого. Плаферон понижает на поверхности нервных клеток количество (Вшах) -адренорецептора, Н1 -гистаыинового и Н-холинорецепторов, повышая, сродство (К<1) к лигандан -а доенорецепторов и рецепторов к гамма-аминомаслянной кислоте (ГАИК). Полученные данные свидетельствуют о понижении на поверхности клеток количества рецепторов связанных с обменом.

фосфатидилинозитфосфатов и активацией протеинкиназы С (ПКС), что предполагает снижение функции этого энзима в клетках, подвергшихся обработкой плафероном. В то же время, повышение сродства к лигандан рецепторов второй группы предполагает активацию аденилатциклазы и повышение внутриклеточной концентрации цАМф и соответственно усиление активности фермента 11КА (цАМф зависимая протеинкиназа).

Пролиферация лимфоцитов в ответ на митогенный стимул является фундаментальным свойством иммунокоипетентныж клеток. Критическим моментом в этой реакции лимфоцитов на внешний стимул является переход клеток из фазы покоя (Оо) в фазу, предшевствующую синтезу ДНК (й).

События, происходящие на молекулярной уровне во время фазы, представляют собой в основном реакции, связанные с инициацией тока ионов кальция в клетку и активацией процессов фосфорилирования цитоплазматических белков, фосфорилирование в цитоплазме активированных клеток идет в основном за счет активации ПКС и тирозинкиназ связанных с рецепторным аппаратом

мембраны лимфоцитов.

Добавление неспецифического нитогева фГЛ к мононуклеарным клеткам периферической крови человека приводит к запуску многих важных биохимических процессов в цитоплазме лимфоцитов. В частности, происходит активация фосфолипазы С (фЛС), которая в свою очередь расщепляет фосатидилинозиттрифосфат на инозитолтрифосфат (ИфЗ) и диацилглицерол (ДГ) (IsaKov et al.,1966; Hicbell,1975; Berridge, 1984; Berridge and Irvine, 1984; IsaKov et al., 1987; Liane et al., 1989). ИфЗ вызывает приток ионов капьция из эндоппазматического ретикулуна и внешней среды клеток в цитоплазму, а ДГ активирует ПКС. Наряду с этим происходит фосфорилирование серина, треонина и тирозина белков, связанных с рецепторным аппаратом клеток (Hercep et al., 1988; O'Shea et al., 1987; June et al., 1990;). Причем активность тирозинкиназ очевидно необходима для запуска ФЛС и следующих за ним биохимических процессов в цитоплазме лимфоцитов (Hustelin et al., 1990).

Подавление пролиферации лимфоцитов, имеющее место в присутствии плаферона (Рис.1), должно приводить к снижению активности ферментов, учавствующих в инициации перехода клеток из GO в G1 фазу. Добавление препарта через 24 часа после фГА приводило к менее выраженному подавлению пролиферации лимфоцитов. Этот факт объясняется нами тем, что происходящая в это время экспрессия рецептора ИЛН и синтез этого медиатора в меньшей степени зависит от активации ПКС, индуцированной распадон фосфатидилинозитфосфата. Последнее вытекает из анализа процессов связанных со второй стадией активации

Рисунок 1. Влияние препарата плаферон на пролиферании лимфоцитов человека, стимулированных ФГА.

О _ плаферон добавлен одновременно с ФГА. 24 - плаферон добавлен через сутки после ФГА. 4-8 ~ плаферон добавлен через 2 суток после ФГА. КОНТР - Ф'А без лобавления плдферина.

лимфоцитов. Наконец, плаферон практически не оказывал влияния на пролиферацию лимфоцитов при добавлении через 48 часов после фГА, то есть в начале синтеза ДНК. Это свидетельствует о неспособности плаферона влиять на биохимические процессы связанные с S фазой пролиферации клеток.

Как уже отмечалось, переход лимфоцитов из Go в G1 фазу сопровождается активацией протеинкиназ с последующим фосфорилированием цитоплазматических доменов рецепторного аппарата этих клеток. Одним из выражений этого процесса Ьяаляется интернализация (поглощение поверхностных рецепторов в цитоплазму) Ti-ТЗ рецепторного комплекса при активации лимфоцитов моноклональныни антителами и митогенами (Ledbetter et al. 1986, Carrel et al, 1988, Telerman et al.,198T). Интернализация рецепторов T лимфоцитов зависит от активации ИКС и тирозинкиназы. Таким образом по динамике интернализации лимфоцитами комплекса Ti-T3 можно судить о Ь активации протеинкиназ в этих клетках. В наших экспериментах инкубация лимфоцитов с антя-КДЗ моноклональными антителами приводила к уменьшению количества этих рецепторов на клетках. Инкубация с плафероном не влияла на интернализацию Ti-T3 комплекса лимфоцитами, активированными анти-КДЗ антителами.

Для инициации процесса интернализации Ti-T3 клеточного комплекса достаточно активации только ПКС без активации тирозиякиназ (Cantrell et al.,1985, Acres et al, 1986, Kaldjian et al.,1988, Cantrell et al.,1988). Этот факт дал нан возможность изучить влияние плаферона на активность ПКС в лимфоцитах. Показателем активации ПКС служила интенсивность

интернализации Тг-ТЗ рецепторного комплекса лимфоцитов периферической крови здоровых доноров под действием форболмиристатацетата (фНА).

Лимфоциты инкубированные с фНА уменьшают количество экспрессированных на поверхности КД-3 (Рис.2). Плаферон подавляет интернализацию этих поверхностных структур под влиянием фНА, а в отсутствие него повышает их экспрессию. Активирующие НКА агенты изопротеренол и теофиллин увеличивают количество экспрессированных на поверхности лимфоцитов Т1-ТЗ комплексов.

Из приведенных данных в первую очередь следует, что плаферон не оказывает влияния на активность тирозинкияаз ассоциированных с "Гх-ТЗ комплексом. Заинтересованность тирозинкиназ в процессе интернализации демонстрируется зависимостью этого процесса от степени фосфорипирования тирозина гамма цепи ТЗ комплекса (Zгangel,19й^). Повышение экспрессии КДЗ под влиянием плаферона аналогичное действию активирующих ПКА препаратов является подтверждением способности препарата повышать аденилатциклазную активность клеток. В то же время снижение динамики интернализации КДЗ на активированных фИА лимфоцитах под действием плаферона свидетельствуют о способности препарата подавлять активность ПКС. Исследования, посвященные способности препрата непосредственно влиять на способность фНА связываться с ПКС показали, что препарат не влияет на динамику взаимодействия этих веществ. Таким образом, плаферон подавляет индуцированную ФНА иитернализацию КДЗ опосредованно, не влияя на способность

У?

% 140

120108

684028 8

-I 1 я!л

10 28 Эй 58

Рисунок N2. Интернализация Т1-ТЗ рецепторного комплекса СКДЗ>с лимфоцитов периферической крови человека пол действием ФМЛ »• плаферона.

ЭМА - активация интернвализации КДЗ ФМА;

'МА^РЫ7 - влияние плаферона на интернализацию КДЗ, индуциров.лту» ИМА;

51_Г - влияние плаферона на экспрессию КДЗ интактными лимфоцитами;

-ш-

фМА связываться и активировать ПКС.

Возникает вопрос, каким образом нлаферон способен снижать интернализацию Т1-ТЗ рецепторного комплекса, не изменяя ни тирозинкивазной активности рецептора, ни способности фМА активировать ПКС?

Активация Т лимфоцитов под действием митогенов сопровождается быстрым (в течение минут) повышением внутрниклеточной концентрации цАМф и таким *е быстрым падением ее (Smith et al., 1971; Vang et al., 1978). Одновременно с этим агонисты бета-адренорецепторов, простагландин Е, аденозин и другие индукторы аденилатцикяазы ингибируют пролиферацию Т лимфоцитов (Федоров и др.,1990; Hadden et al.,1970; BaKer et al., 1981; DosReis et al., 1986; Lernei- et al.,1988; Liang et al., 1989; Hary et al.,19S9; и др.).

Действие цАМф затрагивает все три стадии активации лимфоцитов. Повышение концентрации цАМф в лимфоцитах ингибировапо метаболизм фосфатидилинозитфосфатов, ток Са в клетки и фосфорилирование некоторых белков, связанные со взаимодействием Ti-T3 рецептора с лигандон (Наг-у et al.,1989; Lerner et al.,1988;). По аналогии с действием цАМф в других клеточных системах предполагается, что эти события связаны с активацией протеинкиназы А (ПКА), которая фосфорилирует белки принимающие участие в метаболизме фосфоинозитолов.

По напему мнению чувствительность Т и В лимфоцитов к включению системы цАМф зависит от степени заинтересованности ч процессах активации этих клеток тирозинкиназ. Другими слонами, цАМф подавляет пролиферцию лимфоцитов индуцированных к

пролиферации сигналами, проведение которых в цитоплазму и ядро клеток осуществляется посредством активации тирозинкинаэ. Активация Т лимфоцитов посредством TÍ-T3 рецепторного комплекса зависит от тирозинфосфорилировавия его зета цепи (Hustelin et al.,1990) и этот процесс ингибируется при повышении внутрицитоплазматической концентрации цАМф (Klausner et al., 1967). Проведение сигнала при взаимодействии рецептора ИЛ2 с лигандои осуществляется при фосфорилиронал^и тирозина р75 (Ferri3 et al.,1989; Saltzman et al., 1988; Азао et al.,1990; Herida et al., 1?90), а цАНф ингибирует экспрессию этой цепи рецептора (Johnson et а1.,19вв; Feldman et al., 1987; Johnson etlal.,1990). В то же время повышение активности ПКС в ранние фазы цикла пролиферации Т лимфоцитов мало чувствительны к агентам повышающим внутриклеточную

концентрацию цАНф (Lingk et al.,1990). Наконец, активации В лимфоцитов форболовыми эфирами и ионофорами стимулируется при увеличении уровня цАНф в этих клетках, а активация посредстом анти IgH антителами подавляется (Klaus et al., 1987; Cohen et al., 1969; Li et al.,1989).

Таким образом уровень пролиферации лимфоцитов зависит от взаимодействия, по крайней мере, трех различных систем проведения сигнала, активирующих три типа протеинкиназ: ПКС, ПКА и тирозинкиназу. Взаимодействием последних определяется и степень интернализации Ti-T3 рецепторного комплекса при взаимодействии с лигандом. В наших экспериментах активация ПКА приводила к увеличению экспрессии СДЗ, что говрит о снижении процессов интернализации этого рецептора. В то же время,

-го-

иы(?ю'гся данные о способности агентов повышающих активность ПКА ускорять интернализацию СДЗ в лимфоциты стимулированные фГА (Iwaz et al.,1909). Разница в действии ПКА в этих экспериментах очевидно обусловлена тек, что в экспериментах Iwaz et al. лимфоциты были преактивированы, что конечно меняло Фон для действия ПКА. Из этого можно заключить, что интернализация рецепторов лимфоцитов зависит от сложного взаимодействия псех систем внутриклеточных мссендкеров ч изменение баллапсл этого 1;заимодойсткия может ио разному илн-гь на итог.

Суммируя приведенные RMœe данные, можно дать отк<?т на нопрос о механизме паиниия цлафероиа па активность ИКС. Антагонист ИКС и ПКА в клетках является относительным и записи-!- о-г общего состояния метаболизма вторичных мессенджеров в лимфоцитах. Илаферон ио природе своего фармакологического действия является модификатором внутриклеточного метаболизма, что может изменять функциональную значимость активации того или иного фермента. Другими словами, ирепрат, изменяя балланс внутриклеточных мессенджеров, может опосредованно

инактивировать функциональное следствие работы IIKC. Механизм такого действия плаферона заключается в повышении

аденилатциклазпой активности в цитоплазме лимфоцитов, так как ловывевис внутриклеточной концентрации цАМф приводит к подавлению пролиферативной активности лимфоцитов (Федоров и др. 1990; Hadden et al., 1970; Baker et al., 1931; DosReis et a)., 19Д6; Lerner et al., 1980; Liang et al., 19Й9; Mary et al., 1989).

Актииация ИКС при физиологических условиях в лимфоцитах происходит вследствие расщепления фосфатидилинозитола па инозитолтрифосфат и диацилглицерид. Продукт отого распада диацилглицерид является физиологическим активатором ПКС. Однако диацилглицерид под действием фосфолипазы А2 (ФЛА2) может превращаться в араяидоновую кислоту, которая в свою очередь бистро кетаболизирусгся до цростагландинои (ИГ) и тромбоксана А2 (Иазгпиззеп Н.,19в6). Плаферон в наших экспериментах подавлял продукцию ПГЕ, что очевидно является следстпнек блокады активности фПА2. Эти давние согласуются с предполагаемой нами ингибицией распада фосфатидилинозитфосфата и понижением активности ПКС п лимфоцитах под действием плаферсна, так как активность фЛС и фЛАН тесно связаны между собой (Федоров П.А. и др.1990). Таким образом эти эксперименты намечают путь действия плаферона, который заключается в блокировании биохимических процессов ведущих к активации распада фосфатидилинозитфосфата и следующих за этим процессами. Так как активность фосфолиназ, учавстпующих в гидролизе фосфоинозитоиа, регулируется их фосфорилированием (Н1зШ1>е е1 а1.,1990) вполне логичным представляется предположение, что плаферон, активируя аденилатциклазу и соответственно ПКА, изменяет степень фосфорилирования фЯС и ипгибирует ее активность.

Суммируя обсуждение результатов первого раздела данной работы, можно сказать, что препарат плаферон подавляет активность ПКС, фЛС и фЛА2 в лимфоцитах, это действие препарата приводит к подавлению пролиферации мононуклеарных

-гг-

клеток периферической крови в ответ на стимуляцию фГА.

Одной из важнейших эффекторных функций иммунной системы является ЕК-активность. Недавно было показано, что функциональная активность ЕК-клеток напрямую зависит от активности ПКС (Найет ег а1.,1990). Обработка человеческих лимфоцитов ингибитором тсс приводила к дозозависимой ингибиции их ЕК-ак'гивности. В то же время, ингибиторы ПКА не влияли на ~~ способность этих клеток лизировать клетки мишени. В наших экспериментах плаферон дозозависимо угнетая способность клеток периферической крови человека лизировать клетки К562. Очевидно, ингибкрующий эффект препарата не зависит от присутствия в нем эмбриоспецифических белков, обнаружить которые нам не удалось с помощью таких чувствительных методов как радиоиммунный и иммунофериентный анализы. В частности в препарате нет альфафетонротеина, трофобластического бета -глобулина, хорионоческого гонадотропииа и карцино-энбриоыального белка.

Ингибиция ЕК-активности клеток' периферической крови человека под действием плаферона возможно связана с повышением концентрации цАНф и подавлением активности ИКС. Известно, что агенты повышающие концентрацию цАИф в лимфоцитах угнетают ЕК-активность этих клеток (ите(1а, Аг1эа1га,1989). Таким образом ингибирушцее действие плаферона на ЕК-активность лимфоцитов укладывается в нашу концепцию действия препрата на метаболизм вторичных мессенджеров.

Следует отметить, что в амниотической жидкости мышей обнаруживается фактор белковой природы, ингибирующий

ЕК-активность (Dahl et al., 1980, Dahl, 1983). Следовательно, нами описана аналогичная супрессорная система для ЕК-клеток у человека. Однако ингибитор ЕК-клеток синтезировался клетками амниохориона человека.

При изучении механизма действия ингибитора ЕК-активности ны пришли к выводу, что он снижает как способность этих клеток распознавать клетки мишени, так и их цитолитическую активность по отношению к распознанным мишеням. Такие же данные были получены при изучении действия сыворотки беременных женщин на ЕК-активность периферической крови здоровых доноров (Toder et al., 1984). Десятипроцентное содержание сыворотки беременных женщин в культуральной среде ЕК-клеток приводило к снижению их активности на 25-46Z. Впрочем, действие сыворотки беременных женщин может быть обусловлено содержанием в ней иммуносупрессивных веществ, не обнаруживаемых в плафероне (см выше).

Суммируя экспериментальную част нашей работы можно сказать, что препарат пдаферон обладает иммуномодулирующии действием, суть которого заключается в повышении метаболизма аденилатциклазного звена вторичных мессенджеров. Следующим этапом нашей работы было изучение клинической эффективности и иммуномодулирующего действия препарата у болных ВГВ.

ВГВ одно из распространенных инфекционных заболеваний. Возрастающая заболеваемость во всем мире, в том числе и в СССР, значительный экономический ущерб, наносимый этим заболеванием обуслонлинаст актуальность изучения данной инфекции, а в

-еч-

частвости, изучение тонких механизмов его патогенеза с целью поиска новых эффективных средств терапии.

Имеющиеся в литературе данные, свидетельствуют о важной роли в развитии ВГВ нарушений фу нкционального состояния иммунной системы. Несмотря на неоднородность полученных

результатов, они убедительно доказывают, что показатели иммунолгического статуса больных ВГВ дают дополнительную информацию о степени патологического процесса, характере клинического течения и прогнозе заболевания, а также эффективности -проведенной терапии.

Важнейшим и наиболее существенным показателем состояния больных ВГВ является степень интоксикации (Н.И.фарбер, 1978). Оценивая результаты применения препарата плаферон, мы обнаружили существенное его влияние на купирование клинических проявлений синдроиа интоксикации. На фоне проводимой терапии исчезновение проявлений интоксикации достоверно быстрее отмечалось у больных, принимавших пяаферой, в частности таких симптомов, как адинамия, анорексия, тошнота, Бессонница, головная боль (Табл.1)

В разгар болезни саным ярким симптоном является желтуха, средняя продолжительность которой была значительно меньше в основной группе. Под влиянием препарата быстрее происходило сокращение до нормальных размеров печени и селезенки, а также нормализация гематологических показателей.

Вместе с теи, у больных, получавших плаферон, более быстро и полно нормализовались функциональные пробы печени. При выписке, отклонения от нормы в г-руппе пациентов,не получавших

Таблица Д

Длительность некоторых симптомов желтушного периода при остром ВГВ у больных 1-ой и 2-оЯ групп

Длительность в днях

Симптомы 1-ая группа 2 - ая группа границы до-

Сн 39) Сн 41") стоверности

С В >

Слабость 22,7±2,1 16 , 0±1, 4 «0,001

Анорексия 22,2 2.2 14,6+1,4 «0,001

Тошнота 10,3±1,3 7,3±0,7 «0,01

Головная боль 13,9+1,2 9,б±1,1 «0 ,01

Бессонница 17,2+1,2 11 ,4+1,1 «0,01

Боль и чувст-

во тяжести в

правом подре- 10,9+1,4 9,7+0,9 »0,1

берье

Зуд кожи 13,5+1,9 10, 6±1,4 «0,02

Артральгия 9, 6±1, 8 6,1+1,5 «0,1

Спленомегалия 23, 9±1, 9 17,1+2,0 «0,02

Длительность

желтушного 30,5+2,0 21,9+1,7 «0.001

периода

плаферон, были отмечены по всем изучаемым биохимическим тестам, в то время, как в основной группе лишь тимоловый показатель оставался незначительно повышенным.

Очевидным было влияние плаферона и на динамику НВя-антигенемии. До проведения терапии НВгАе в сравниваемых группах выявлялся в 100К случаев. После курса лечения, к моменту выписки, НВзА.£ определился у Зб,6Х (Н-15)исходно позитивных больных 2-ой группы, тогда как в 1-ой группе на этой стадии течения заболевания, серопозитивныии оставались 61,6У. (Н -21) пациентов.

И,как следствие всего этого.продолжитеаьность пребывания в стационаре у больных основной группы по сравнению с пациентами, не принимавшими плафероа была, достоверно меньше.

На значительное терапевтическое действие плаферона указывает такхе тот факт, что у пациентов,принимавших плаферон, сравнительно реже отмечались остаточные явления, такие как астеновегетативный синдром, гепатомегалия и дискинезия желчных путей.

Дальнейшим доказательством положительного влияния

плаферонотерапии явилось то, что во всех случаях, в основной группе заболевание имело гладкое течение, в то время как у значительной части пациентов,не принимавших препарат,отмечены обострения и рецидивы, затяжное течение заболевания, а в одном случае исход был летальным.

Вместе с тем, важно отметить, что по катамнестическим данным выявлен отдаленный клинический эффект лечения плафероном, в частности, уже в первые 6 месяцев после выписки

-гп-

из стационара все больные основной группы были практически здоровыми и функции печени у всех нормализовалась, тогда как, у пациентов, леченных традиционными методами, I! нескольких случаях отмечено формирование ХПГ и хронического носительства КВУ.

Таким образом, проведенные исследования убедительно показали, что препарат плаферон оказался высокоэффективным терапевтическим средством при остром ВГВ, в сочетании с традиционными методами лечения.

Высокая терапевтическая ценность илаферона подтверждается и в данных полученных нами при исследовании динамики изменения содержания Т лимфоцитов и их основных субпоцуляций у больных ВГВ (Табл.2).

У больных острый ВГВ при обеих форнах тяжести болезни, на протяжении всего периода наблюдения, содержание цельной Т-понуляции мало изменялось но сравнению с нормой. Полученные результаты относительно Т-лимфоцитов с фенотипом ОКТЗ противоречат данным многих автором, проводивших исследования в последние годы (11.ф. Каликин, 1985, 1987; Е.СЛСети ла дзе и соавт., 19^7; и др.). В связи с этим следует отметить, что нами использовался наиболее чувствительный из существующих метод определения субпоцуляций Т лимфоцитов в периферической крови. Это может быть причиной разногласия полученных нами данных с данными других авторов.

Уменьшение количества Т-хсл и еров (КДЧ) и повышение содержания 'Г-клеток киллеров су и рсссорив (КДЮ) в острый период ИГЛ были получены и другими исследователями (ТЬошам а!.,

- га -

Таблица 3,|

Влияние препарата плаферон- на количественные изменения Т-лимфоцитов и их главных субпопуляций яри остром ВГВ у больных 1-ой и 2-ой групп

Контингент Период исследования тз-кхз Т4+СХЗ Т8+СХЗ Т4+-Т8+

1. Спустя 3-5 дней после поступления б9,з±г,е зз,з±г,з зг, 9±2, 3 1, зг+о, 1 э

1-ая группа СМ 393 г: Спустя 1213 дней после поступления го, 9±з, о 29,1+3,9 зз, г±з.г 1, 0?±а, 27

3.При выписке 68, 1 +3, 8 35, 7±3, 1 29, 3+2, 3 1,38+0,22

4. Спустя 3-5 дней после поступления 60, 3+2, 6 33, 3±2, 3 32, 9+2, 3 1, зг±о, 19

2-ая группа СЫ 41 > 5. Спустя 1213 дней после поступления 73,911,9 42, 3+2, 3 гл, 4±г, з 1,93+0,18

6. При выписке 76,2 + 1,9 45,2+3,5 22, 2+1,9 2,16+0,20

Здоровые лоноры СМ 213 7. 75,012,4 47, 3 ±2,3 23,2+2,2 2,19+0, 16 1

Р1-г — >0, 1 >0, 1 >0,1 >0,1

Р1-3 - >0, 1 >0,1 >0,1 >0,1

Р1-7 - >0, 1 <0^ 02 <0, 03 <0, 05

Рг-э - >о, 1 >0, 1 >0,1 >0,1

Рг-о - >о, 1 <0, 01 <0, 01 <0,02

Р2-7 - >0, 1 <о,ог <0,0£ <0,01

РЗ-Й - >0, 1 <0, 03 <0, ог <0, 02

Рэ-7 - >о, 1 <0, о г <0, 1 <0, ог

Р«-5 - >0, 1 <0, 03 <0, 02 <0, 02

Р.1-Й - >0, 1 <0, 05 <0, 01 <0, 01

Р=-в - >0, 1 >0, 1 >о, 1 >0,1

Ро-7 - >0, 1 >0,1 >0,1 >0, 1

Рй-7 - >0, 1 >0,1 >0, 1 >0, 1

-291982; Barnaba et.al, 1985). Указанные нарушения в иммунном статусе больных острый ВГВ практически без изменений сохранялись и после стихания клинических проявлений заболевания, в период ранней реконналесценции. На длительное сохранение иммунолгических нарушений после клинического выздоровления указывают и другие авторы (В.ф.Валикин, 1987; А.ф.Блюгер, И.Н.Новицкийг, 1988; Ва ruaba et а]., 1965).

Причиной уменьшения количества Т-лимфоцитов с фенотипом 0КТ4 и увеличение клеток с фенотинон ОКТ8 в периферической крови больных острым ВГВ, по-видимому, является инфицирование этих клеток HBV и последующее уменьшение их способности к рециркуляции, так как HBcAg и HBeAg экспрессируются не только яа гепатоцитах но и на лимфоцитах. (А.ф.Блюгер, Х.И.Векслер, 1988; Х.И.Векслер, 1988; Laure et al., 1987; Horte et al., 1968). Кроне того, перераспределение основных субпопуляций Т-лимфоцитов, которое п большой степени зависит от состояния метаболизма организма (Vallies et al.,1979;Klexn et al., 1988), может быть обусловлено метаболическими нарушениями в организме вызванными заболеванием.

Улучшение этих показателей сразу после окончания курса плаферонотерапии и нормализация этих показателей к моменту выписки больных из стационара, могут свидетельствовать об элиминации вируса и/или исправлении метаболизма организма. Эти предположения подтверждаются как более частой элиминацией HBsAg из периферической крови больных, леченных плафероном, так и улучшением их биохимических показателей, по сравнению с пациентами, леченными без применения плаферона.

Увеличение процентного содержания лимфоцитов с фенотипом киллеров-супрессоров можно интерпретировать по разному. В частности, такое изменение может приводить к повышению реакций иммунной системы за счет активации эффекторных лимфоцитов киллером (Thomas et al., 19В5), что, очевидно и происходит в первые дни желтушного периода, так как на этой стадии отмечается выраженный цитолитический синдром. Однако, в последующие дни количество Т-киллеров уменьшается, а повышение содержания клеток, реагирующих с моноклинальными антителами ОКТв, по-видимому, происходит за счет активации супрессорыых Т~ лимфоцитов. Это заключение сделано на том основании, что в период ранней реконваяееценции у Сольных, не принимавших пяаферон, понижено содержание Т-иимфоцитов хенперов и обнаруживается высокий процент HBs-антигенемии. Вместе с тем, в этой группе у пациентов отмечены частые обострения и рецидивы заболевания, а после выписки формирование хронических форм инфкции.

Изучение активности аденилатциклазы (концентрация цАИф в лимфоцитах инкубированных с теофиллином) показало, что у больных ВГВ в начале заболевания активность фермента имебт тенденцию к повышению, а по мере развития заболевания падает и достигает минимума в период реконвалесценции (Рис 3). В то же время у больных, леченных плафероном, аденилатциклазная активность мононуклеарных клеток периферической крови более интенсивно снижалась сразу после окончании курса лечения, однако возрастала в период рекопвалесценции. По разнице между баэальным и теофиллининдуциронанным уровнем цАМф в клетках

Ют

Рисунок N 1. Динамика изменения содержания цАЛФ в мононуклеарных клетках периферической крови Оолькых Г<ГВ. 1. Спустя 3-3 дней после поступ. 2.Спустя 12-15 дней после поступления З.При выписке.

д - базальиый уровень концентрации цАМФ в клетках больных контрольной группы

В - теофиллинстимулированнмй уровень концентрации цАМФ в клетках (Зольных кон] рольной группы

С - базальиый уровень концентрации цАМФ м клетках больных основной группы

и -1еофнллиш:7 и^1улиро(мш/Ч|1 концентрации цАНФ в

клетках Оольштх ос.лонной 1 рупии

-зг-

можно определить активность фосфодиэстеразы цАНф (фДЭ). У больных ВГВ активность ФДЭ при поступлении имела нормальные значения, затем (через 12-15 дней после поступления) ее активность практически не определялась и, наконец, к выписке больных из стационара активность ФДЭ имела низкие значения. При лечении цлафероном активность фДЭ, не достигая нормальных значений, была выше чем у больных не леченных цлафероном. При выписке из стацирнара ФДЭ увеличивалась в большей степени, не достигая, однако, нормальных значений. Таким образом,

увеличение баэальной концентрации цАМф через 12-15 дней после поступления у больных, не леченных цлафероном, объясняется ингибицией ФДЭ при еще сохранившейся активности

аденилатциклазы. В то же время при выписке у этих больных отмечается как угнетение ФДЭ, так и ингибиция активности цАМф.

Угнетение активности изученных ферментов в определенной степени, является следствием интоксикации. Однако нельзя при этом не учитывать непосредственное воздействие НВУ на обмен нукиеотида в инмувоцитах. В пользу последнего соображения свидетельствует тот факт, что снижение его активности происходит не в начальный период заболевания, когда явления интоксикации и цитолиза выражены максимальчо, а в последующие дни, в фазу обратного развития инфекционного процесса. Вместе с тем, в период реконпалесценции у больных выявлен высокий процент обнаружения НВэАё в крови, что в спор очередь указывает на персистенцию НВУ в ННК.

С другой стороны, содержание цАМф в иммунекомпетентных клетках крови может быть отражением их функционального

Рисунок 4. Корелляция бэзального уровня цАМФ в мононуклеарных клетках крови с процентным содержанием КД4^ среди Т лимфоцитов крови.

1.Спустя 3-5 дней после поступ. 2.Спустя 12-13 дней после поступления З.При выписке.

состояния. При комплексной анализе процентного содержания Т4 лимфоцитов в периферической крови больных ВГВ и базальной концентрации сАНф в мононуклеарных клетках была выявлена корелляция между этими показателями. На Рис. Ч показано, что повышение базального уровня цАИф в мононуклеарных клетках сопровождается уменьшением процентного содержания среди них клеток с фенотипом 0КТ4. Таким образом, изменения метаболизма вторичных мессенджеров в мононуклеарных кпетках могут отражать фуыкциональное состояние иммунной системы.

Интересно, что снижение базального уровня цАМФ сразу после окончании курса печения плаферопом у больных ВГВ сопровождается повышением процентного содержания Т лимфоцитов с фенотипом ОХТ4. Ко времени выписки больных процентное содержание Т4 лимфоцитов увеличивается еще больше, что кореллирует с дальнейшим повышением базального уровня цАМф в мононуклеарных клетках. В настоящее время не представляется возможным в волной мере интерпретировать описанные корелияции, однако

их существование открывает новые направления для исследования диагностической ценности определения метаболизма вторичных мессенджеров при различных патологиях.

В экспериментальной части данной работы было сделано заключение, что механизм действия плаферона заключается в активации метаболизма аденилатциклазного звена вторичных мессенджеров иниувокомпетентных клеток человека. Исследование этого звена у больных с острым ВГВ показало, что при этой патологии имеет место существенное нарушение метаболизма цАНф в мононуклеарных клетках периферической крови. Назначение

-зь

препарата плаферои коррегировало эти изменения, существенно улучшая течение заболевания, состояние иммунной системы и кетаболизн цАМф в мононуилеарныя клетках периферической кропи больных ВГВ.

виводп

I. Раскрыты механизмы действия препарата плаферои:

1. Механизм действия препарата заключается в стимуляции адеиилатциклазной активности клеток и ингибиции обмена фосфатидилинозитфосфатов;

2. Препарат плаферои подавляет пролиферативную активность лимфоцитов периферической крови здоровых доноров и индуцированную протеиикиназой С интернализацию КДЗ с поверхности лимфоцитов;

3. Подавление пролиферации клеток и интернализации рецепторов под действием препарата плаферон происходит вследствие подавления активности цитоплазматической протеинкиназы С и повышения внутриклеточной концентрации цАМф;

I. Препарат плаферон подавляет продукцию простагландинов В мононуклеарными клетками перифе1>ической крови человека в результате подавления активности фосфолипазы А?;

5. Препарат плаферои угнетает активность ЕК клеток периферической крови здоровых доноров, снижая их способность распознавать и лизирооать клетки мишени К562;

II. Научно обосновано применение препарата плаферон при остром пир/сном гепатите В:

-361. При острой ВГВ обнаруживаются значительные нарушения в клеточной звене иммунитета, что выражается в уменьшении числа Т-лимфоцитов с фенотипом ОКТ4 и повышении количества Т-кдеток с фенотипом ОКТ8, вследствие чего понижается коэффициент соотношения Т4»/Тв+. Эти изменения сохраняются и в период ранней ре-конналесценции. Содержание цельной Т-популяции не изменяется.

Препарат плаферон модулирует нарушения в клеточном эвене иммунитета у больных острым ВГВ, повышая количество 'Г-клеток с фенотипом ОКТ4 и уменьшая число Т-клеток с фентипои ОКТ6; приобретает нормальные значения и коэффициент соотношения Т4+/ Тв+.

2. У больных острый ВГВ на 3-ей недеде желтушного периода и при выписке из клиники (период ранней реконвалесценции) наблюдаются нарушения в системе внутриклеточной цАНф внононукпеарных клетках периферической крови.

При применении препарата плаферон у больных острым ВГВ не происходит уменьшения аденилатциклазной активности в мононуклеарных клетках периферической крови, что

свидетельствует о нормализации Функциональной деятельности этих клеток.

3. Включение препарата плаферон в традиционную схему лечения острого ВГВ быстро снимает интоксикацию, значительно ускоряет обратное развитие клинических симптомов болезни, сопровождается коррекцией биохимических показателей функций печени к способствует более быстрому клиническому выздоровлению в сравнении с больными, не получавшими плаферон.

4. Диспансерное наблюдение над больными и течение 12 ые-

сяцев позволило сделать важное заключение о тон, что плафероно-терапия имеет также позитивный отдаленный эффект (ни у одного больного пе отмечены рецидивы болезни или хронизация процесса).

СПИСОК работ, опубликованных по теме диссертации

1. Д.З. Табагари, A.B. Бахуташвили -Имнуиомодулирующее действие плацентарного интерферона. (Материалы республиканской научной конференции молодых медиков Грузии. Бакуриани,1984 г.)

2. A.B. Вахуташвили, Д.З. Табагари - Влияние плаферона на иимунокомпетентные клетки человека. (Материалы совещания "Новые подходы к вопросам иммунологии рака", Кемерово, 1964 г. стр.28).

3. A.B. Бахуташвили, И.Б. Хоголева, Е.Н.Кушлинский, Д.З. Табагари, З.Г. Кадагидзе. - Подходы к изучению механизна антипролиферативного действия плаферона. (Материалы всесоюзной конференции "Итоги и перспективы теоретических и практических исследований но проблеме интерферона." Тбилиси, 1985 г.)

4. Чиковани Т.И., Шеварднадзе Ц.И., A.B. Вахуташвили Влияние физиологически активных веществ, полученных из плаценты, на синтез интерлейкина 1. - Хурнал "Сабчота Медицина" - Тбилиси - 1988 -Н 4 - с.45.

5. A.B. Бахуташвили, Г.И. Квитаишвили, Т.Д. Пирцхалава Клинико-иммунологические особенности при тяжелой и среднетяжелой формах острого циклического вирусного гепатита В. - Хурнал "Сабчота медицина" - 1988 - N6. -с.55.

6. Г.И. Квитаишвили, М.И. Даниелок, Л.В. Бахуташвили

- за -

Динамика инисиенин М2-миК1><.и'лобулина щ>и средней и тяжелой формо нируспого гепатита Я. Журнал "Сабчота Медицина" - 1989 - N4. с.!.Ч.

7. Л.it. Вахуташвнли, Г.И. Квигаипшили, В.И. Бахуташвили Динамика изменения внутриклеточного цАМф в лимфоцитах периферической кропи при остром вирусном гепатите В на фоне лечения препаратом ид аферой. - Хурыап "Сообщения академии наук Грузинской ССР" - Тбилиси - 1989 -.Т.136. - Hl. - с.173.

Ö. А.В.Бахуташвили, Д.Б.Картозия, Т.И.Чиковзни,

Т.Д.Пирцхаиава, Варнова Т.В. Иммунорегуяяторные пептиды из амниохориона человека. - I Всесоюзный съезд иммунологов. Тез. докл. - т.1. - с.372.

9. A.B. Вахуташиили, Г.И. Квмтаишвили, в.И. Бахуташвили йммунокорригирующий эффект препарата плаферон при остром вирусном гепатите В. - Материалы Всесоюан. симиоз. "Реабилитация иммунной системы." - Дагомыс - 1990 - с87.

10. A.B. Бахуташвили, Т.И. Чиковани, В.И. Бахуташвили Иммуномодулирующее действие препарата плаферон. - Иат. международн.симн. "Инмунофармакодогия" - 1990 г.

11. A.B. Бахуташвили, Г.И. Квитаишвили В.И. Бахуташвили Лечение тяжелых форм гепатита В осложненных острой печеночной энцефалопатией препаратом ияаферон. - Журнал "Известия академии наук Грузии" - 1991 - в печати.