Автореферат и диссертация по медицине (14.00.10) на тему:Иммунологические аспекты патогенеза и диагностики ВИЧ-инфекции

^ £

s^r er-

О w f

со

o>

cu I EjiíSl ЛЛОКСССППЧ

Па ергзах рухспгсл

¡ЛГШ5

П^УГИ)Л0ГПЧ2СШ2 АСПЕ1ГШ ПАТОГЕШЛ il ЕИГЕОСТЕЯ

ОПЧ-ПШЕКЩШ

11.00.10 - ннфекциошегз болезни 14.00.36 - аллергология н гглиунолопя

ADTCPECEPAT

rZ-cccyrc^-i na сспскшкэ уч^исЛ стспспя r.S'TCpi taya

САСТ-ГППхГБУГ-Г 1S97

Работа Е^апиэна в Боенно-кедацинской академии

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ: доктор медицинских наук

академик РАЕН профессор В.С.Новякоз

доктор медицинских наук староий научный сотрудник

ОФИЦИАЛЬНЫЕ! ОППОНЕНТЫ: доктор ыедицинских наук

профессор В.В.Иванова

доктор медицинских наук член-корреспондент РАМН профессор А.Я.Кульберг

доктор медицинских наук профессор Т.В.Сологуб

БЕДУЕЦШ УЧРЕЦЦЕНИЕ: Российский государственный медицинский университет

Защита состоится

- 1997 года в ^ часов на заседании специализированного совета Д.106.03.05 при Воешо-ыедицшской академии (194044, Санкт-Петербург. Лебедева 6)

С диссертацией могко ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-ыадицинской академии

Автореферат разослан О Г 1997 года

Ученый секретарь специализированного совета доктор медицинских наук профессор

Ю.Н.Лякняо

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

ВИЧ-инфекция является новым, во многой необычным заболеванием. За десять лет со времени открытия СПИДа (1981г.) эпидемическое распространение инфекции приобрело глобальный характер (Покровский В.И. с соавт.. 1992). По оценочным данным ВОЗ к концу 1996 года в мире было инфицировано ВИЧ 29,4 миллионов человек, в. том числе 26,8 миллионов взрослых и 2,6 миллиона детей.

В России первый случай ВИЧ-инфекции был зарегистрирован в 1987 году, и с этого времени отмечалось постепенное, но неуклонное нарастание числа инфицированных ВИЧ (Покровский В. В. с соавт., 1996). С 1996 года ситуация по ВИЧ-инфекции в стране резко ухудшилась, были зарегистрированы первые локальные эпидемии среди потребителей психоактивных веществ в Калининградской области. Краснодарском крае и ряде других регионов России. В течение 1996 года число вновь зарегистрированных случаев инфекции среди грая-дан России возросло более чем в 2 раза и к середине 1997 года составило более 3 тысяч человек.

Внимание ученых до настоящего времени было приковано, главным образом, к эпидемиологическим, клиническим, диагностическим, вирусологическим и некоторым ишунологическим аспектам патогенеза инфекции ВИЧ. Однако, практическая необходимость совершенствования методов диагностики и терапии обусловила повышение интереса исследователей к мало изученным иммунопатогенетическим. аллергологическим. иммуногенетическим закономерностям развития инфекции ВИЧ. Характеристика клинического течения инфекции, вне взаимосвязи с иммунологическими нарушениями, не позволяет в полной мере раскрыть роль этих механизмов в патогенезе, использовать знания закономерностей иммунопатогенеза в интересах совершенствования диагностики и лечения инфекции ВИЧ.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: изучить иммунопатогенез клинических стадий ВИЧ-инфекции и обосновать новые методические подхода к иммунодиагностике.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1.Изучить закономерности изменений систем иммунитета и неспецифической защиты, характерные для разных клинических стадий ВИЧ-инфекции.

2.Рассмотреть патогенетические механизмы аллергических реакций немедленного и замедленного типов при ВИЧ-инфекции и их диагностическое значение.

3.Изучить состояние суперспиральной ДНК, интенсивность процессов перекисного окисления липидов и синтеза нуклеиновых кислот в лимфоцитах и моноцитах при ВИЧ-инфекции.

4. Исследовать клинические и иммунологические особенности патогенеза ВИЧ-инфекции у детей.

5.Разработать и обосновать новые методические подходы к иммунологической диагностике ВИЧ-инфекции.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

Впервые проведено комплексное исследование иммунологических, аллергологических, иммуногенетических. иммунометаболических нарушений и обоснованы закономерности их развития в динамике клинических стадий ВИЧ-инфекции. Показано, что изменения субпо-пуляционного состава и нарушения функциональной активности лимфоцитов коррелируют с уровнем возрастания лимфоцитов, несущих на мембране вирусные антигены р24 и gpl20. '

Приоритетным направлением исследования является установление взаимосвязи нарушений иммунитета и неспецифической резистентности с гиперчувствительностыо немедленного и замедленного типов, что позволило разработать и обосновать использование антигенов ВИЧ erw. pol, gag в диагностике и иммунологическом мониторинге при ВИЧ-инфекции.

Впервые установлена связь морфологических изменений полиморфно-ядерных лейкоцитов с действием антигенов ВИЧ и доказано диагностическое значение выявленных нарушений. Определена частота развития клинических форм аллергии! связанная с сенсибилизацией к бытовым, эпидермальныы. пыльцевым, пищевым аллергенам и антигенам ВИЧ. уровень общего и аллергенспециФического IgE у инфицированных лиц. что позволило обосновать аллергологические закономерности патогенеза ВИЧ-инфекции.

Доказано, что в ходе-развития ВИЧ-инфекции происходят изменения суперспиральной ДНК. интенсивности процессов синтеза нуклеиновых кислот и деградации нуклеотидов, что сопровождается усилением катаболизма клеточных рецепторов, нарушением активности ферментов основных обменных циклов лимфоцитов и моноцитов. Анализ закономерностей деградации нуклеотидов позволил установить существование сопряженности процессов перекисного окисления-

липидов (ПОЛ) и состояния ядерного хроматина иммунокомпетентных клеток, роль процессов ПОЛ в формировании СПИДа.

Выявлены клинические, иммунологические, аллергологичес-кие, иммуногенетические. иммунометаболические особенности патогенеза инфекции у детей.

Установленные закономерности иммунопатогенеза позволили разработать и обосновать новые методические подходы k¡ иммунологической диагностике ВИЧ-инфекции.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ.

Разработана и внедрена система иммунологического мониторинга при ВИЧ-инфекции, включающая применение наиболее информативных показателей клеточного и гуморального иммунитета, гиперчувствительности немедленного и замедленного типов, факторов неспецифической защиты, а такге метаболизма и синтеза нуклеиновых кислот в лимфоцитах и моноцитах периферической крови.

Показана диагностическая значимость выявления антител к ВИЧ класса Ig И, возрастание чувствительности серологической диагностики при использовании комплекса антигенов ВИЧ. проточного цитофлуориметрического метода определения лимфоцитов, имеющих на мембранах антигены ВИЧ gpi20 и р24.

На основе использования ультразвука и. комплекса антигенов ВИЧ предлогены модификации методов ИФА и ИБ, позволяющие повысить скорость и. чувствительность анализа, проводить диагностику антител к ВИЧ, выделенных из иммунных комплексов.

Разработаны новые методические подходы, в: ючающие использование в диагностике инфекции реакций гиперчувствительности замедленного типа: тормозения миграции лейкоцитов (РТМЛ) и поврез-дения нейтрофильных лейкбцитов (ППН), под действием gag. pol,. env антигенов ВИЧ.

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЙЮСШЗЗ НА ЗАЩИТУ:

1.Клинические стадии ВИЧ-инфекции характеризуются патогенетически обусловленными функциональными и морфологическими нару-иениямй систем клеточного и гуморального иммунитета, неспецифической защиты, состояния суперспиральной ДНК, процессов синтеза нуклеиновых кислот и метаболизма иммунокомпетентных клеток.

2. Интенсификация перекисного окисления липидов в лимфоцитах при ВИЧ-инфекции, проявляющаяся, усилением прооксидантных и снижением активности антиоксидантных ферментных систем, отража-

ется на функциональных возможностях и состоянии ядерного хроматина лимфоцитов, метаболически способствуя развитию иммунодефицита.

3. Аллергические закономерности патогенеза ВИЧ-инфекции связаны с формированием реакций гиперчувствительности немедленного и замедленного типов, в том числе к антигенам ВИЧ, полисенсибилизацией, различными клиническими формами аллергии.

4. ВИЧ-инфекции у детей имеет клинико-иммунологические особенности, характеризующиеся частым развитием более тяжелых форм аллергических заболеваний, нарушений клеточного состава системы крови, более высокими уровнями общего и аллергенспециФического Ц Е.

РЕАЛИЗАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ.

Диссертационное исследование выполнено ■ в соответствии с проблемными планами научных работ Военно-медицинской академии по программам комплексных тем НИР: N ГР 1600484. ГР.1600467.

Полученные в исследовании теоретические результаты и практические рекомендации используются в научной и практической деятельности кафедр и лабораторий Военно-медицинской академии: инфекционных болезней, клинической биохимии и лабораторной диагностики. НИЛ СПИД и инфекционных заболеваний в Вооруженных Силах Российской Федерации, НИЛ иммунологии и вирусологии, а также лабораторий иммунодиагностики центральных, окружных и флотских госпиталей ВС РФ. Основные результаты работы реализованы в следующих методических руководствах и пособиях для медицинской слувбы Вооруженных Сил России:

1."Лабораторные методы исследований в экспертной диагностике ВИЧ-инфекции". Методическое пособие.-М: ГВМУ МО РФ, 1992.-35с.

2. "Лабораторная диагностика основных оппортунистических инфекций и инвазий при СГВДе". Методическое пособие.-СПб: ГВМУ МО РФ, 1992.- 107с.

3. "Диспансерное наблюдение при ВИЧ-инфекции". Методическое •пособие.-СПб:ГВМУ МО РФ, 1992.- 89с.

4."ВИЧ-инфекция. Указания по клинике, диагностике и профилактике в Воорукенных Силах России".- М:ГВМУ КО РФ, 1993. -52с.

5."ВИЧ-инфекция (этиология, патогенез, эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика )". Руководство для врачей. - СПб: Юнда, 1994.-448с.

Внедрены 23 рационализаторских предложения по совершенствованию методов аллергологической и иммунологической диагностики.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

По теме диссертации опубликованы 42 научные работы. Основные материалы диссертации доложены и обсуждены на I съезде иммунологов России (Новосибирск, 1992), 1 и 2 международных конференциях "СПИД, рак и ретровирусы человека " (С. -Петербург, 1992; 1993), 1-й международной региональной конференции по ВИЧ-инфекции "Балтика против СПИДа" (С.-Петербург. 1994), X меядународной конференции по СПИДу (Иокогама, 1994), 3 и 5 международных конференциях "СПИД, рак и родственные проблемы" (С.-Петербург, 1995, 1997) . 1 Всесоюзной научно-практической конференции " Профилактика и борьба со СПИДом в СССР" (Ленинград, 1990), 3 Всесоюзном съезде гематологов и трансфузиологов (Киров,1991). Всесоюзном съезде врачей-лаборантов, (Ивано-Франковск, 1991), Всесоюзной научной конференции "Профилактическая медицина. Состояние и перспективы." (Ленинград, 1991). Всесоюзной конференции "Применение ИФА-диагностики в практическом здравоохранении 11 (Сочи, 1990), 1 национальной научно-практической конференции по проблеме ВОТ/СПИД (Киев, 1995), XVIII и XX окруаных научно-практических конференциях врачей ЛВО "Актуальные вопросы совершенс-тврвания медицинского обеспечения войск округа" (Ленинград,1991; С.-Петербург,1993 ), ряде научно-практических конференций Северо-Западного регионального центра по профилактике и борьбе со СПИДом (С.-Петербург) и Военно-медицинской акадг<ии, на заседании Санкт-Петербургского отделения Всероссийского научного общества инфекционистов (1996),

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ РАБОТЫ.

Диссертация изложена на 291 странице машинописного текста, состоит из введения, 7 глав, заключения, выводов, .фактических рекомендаций, 3 прилонений. Работа иллюстрирована 53 таблицами и 46 рисунками. Список литературы содераит 326 источников (69 отечественных и 257 иностранных).

МАТЕРИАЛЫ !! МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

Углубленные клинико-иммунологические исследования были проведены в динамике у 977 человек, из которых 300 человек составили инфицированные ВИЧ взрослые и дети (208 и 92 соответственно), в том числе на II стадии заболевания было обследовано 84 взрос-

гш. и 8 детей. III стадии - 80 взрослых и 84 ребенка, IV стадии - 6 взрослых. В группы сравнения вошли 375 больных аллергией (211 взрослых и 164 ребенка), 46 взрослых, больных вирусным гепатитом В. Контрольную группу составили 256 здоровых лиц (214 взрослых и 42 ребенка). Распределение ВИЧ-инфицированных лиц по стадиям заболевания было проведено в соответствии с клинической классификацией ВИЧ-инфекции академика В.И.Покровского (1989).

Все обследуемые лица проходили общеклиническое обследование, вклшавшее клинический и биохимический анализы крови, анализ мочи, электрокардиографию, флюорографию органов грудной клетки и ряд других инструментальных и лабораторных (микробиологических. вирусологических и бактериологических) исследований. Диагноз ВИЧ-инфекции во всех случаях подтверждался выявлением антител к ВИЧ методами иммуноферментного анализа и иммунного блотинга.

Иммунологические методы исследования включали изучение Т- и В-систем иммунитета (определение в периферической крови абсолютного и относительного содержания Т-лимфоцитов с фенотипа;.« CD2*, CD3+. CD4*, CD8*, HLA-DR* и НК-лимфоцитов. В-лимфоцитов с фенотипом CD19* ; активных Е-розеткообразующих клеток (CD2-DR+), B-Ig+ B-IgM*, B-IgG*. B-IgÀ* субпопуляций лимфоцитов. ишуноглобу-линов основных классов (Ig M, Ig G. Ig А, ). уровня катиониых белков, циркулирующих иммунных комплексов, С-3 компонента комплемента. альфа-1-ангитрипсина, альфа-2- макроглобулина, церулоп-лазмина. бета-2-ыикроглобулина. Уровень общего и аллергенспеци-фического Ig Е определяли методом иммуноферментного анализа. Субпопуляции Т- и В-лимфоцитов. изучались на проточном цитофлуо-риметре "EPICS-C" (Coulter elektronics, США-Франция) с применением моноклональных антителфирмы "Ortho Diagnostic Systems" (CIA). Метод лазерной проточной цитофлуориметрии применяли и для анализа инфицированных ВИЧ-1 культур клеток линии Н9. МТ4, СЕМ и U 937. Использовались антитела к белкам ВИЧ-1 р 24 и gp 120. Результаты цитофлуориметрии анализировали с помощь» набора Прикладных программ фирмы "Becton Dlck inson н(США), Плотность суперспиральной да изучали эластовискозиметрическим методом.

В иммунокомпетентных клетках, с помощью модифицированных нами методов, изучали активность ферментов основных обменных циклов и перекисного окисления липидов, уровень продуктов, связывающих тиобарбитуровую кислоту (ТБК-СП) и деградации нуклеоти-дов (ГЩН). Кислородзависимую бактерицидность нейтрофильных лей-

коцитов анализировали с помощью цито-фотометрической модификации HCT - теста. Уровень Р-белков определяли с помощью реакции торможения гемагглютинации по методике А.Я. Кульберга.

Активность клеточного митотического цикла лимфоцитов и моноцитов периферической крови изучали на проточных цитофлуоримет-рах "EPICS-C" и "FACScan" (Coulter elektronlcs. США-Франция). Результаты исследований фиксировали графически в виде.гистограммы распределения и процентного содержания клеток, находящихся на различных стадиях клеточного цикла (G0- Gj. S, G2 - M).

Аллергологические методы исследования включали проведение скрининг-анкетирования с учетом особенностей личного и семейного адпергологического анамнеза. Для подтверждения сенсибилизации прш,меняли аппликационные, скарификационные, внутрикояньге пробы, прик-тесты с аллергенами. Уровни общего и аллергенспецифического Ig Е определяли методом иммуноферментного анализа. Для оценки реакции гиперчувствительности замедленного типа при ВИЧ-инфекции была использована собственная модификация методики реакции тор-моаения миграции лейкоцитов (РТМЛ) и методика поврездения нейт-рофильных лейкоцитов (ППН) под действием рекомбинантных антигенов ВИЧ. соответствующих продуктам генов ВИЧ env (gp41, gpl20), pol (рбб, p31), gag <pl7, p24).

Статистическую обработку результатов исследований выполняли на персональных. ЭВМ IBM PC/AT 386 и PENTIUM с помощью пакета прикладных программ " STATGRAPHICS" (1991) и "STADIA" (1990), позволяющих выполнить канонический корреляционный й различные виды факторного анализа. Графическая обработка -атериалов была выполнена с помощью пакета прикладных программ "F0XGRAPH"(1992).

РЕЗУЛЬТАТ!! ИССЛЕДОВАНИЯ.

При изучении содержания лейкоцитов в динамике ВИЧ-инфекции у взрослых было установлено, что на II стадии заболевания наблюдается снижение числа лейкоцитов периферической крови, достоверно не отличающееся от показателя в контрольной группе (соответственно 7,35+0.36 и 5.79+0.59х109/л. р<0,05) . В то ае время абсолютное число лимфоцитов достоверно снияалось на стадиях ПА-ПБ инфекции ВИЧ ( 1,69+0,09 и 2.26+0,09x109/л в контрольной группе, р<0,05). На стадиях инфекции ВИЧ IIB, IIIA и ШБ содержание лимфоцитов оставалось относительно стабильным (2,11+0,12, 2,03+0,09 и 2,28+0.31х109/л). Снияение числа лимфоцитов было характерно для IIIB-IV стадий, где их содерзание уменьшалось до

1,56+0.29x109/л.

Т-система иммунитета в динамике ВИЧ-инфекции.

Уровень CD34 субпопуляции лимфоцитов, достоверно сниженный, по сравнению со здоровыми лицами (1.46+0.04x10®/л) у инфицированных ВИЧ на 11А-Б стадиях (1,11+0,07х109/л) . не претерпевал существенных изменений при прогрессировании инфекции ВИЧ.

Уменьшалось абсолютное содержание субпопуляции CD4+ лимфоцитов на стадиях ПА-Б и IIB болезни (0,52+0,03 и 0,53+0,030х109/л,), сохраняясь примерно на одном уровне на стадиях IIIA и ШБ (0,56+0,05 и 0,62+0.04x109/л,), достигая минимальных значений на стадиях IIIB-IV (0.38+0,08х10э/л,) и достоверно отличаясь от показателей в контрольной группе (0,74+0,04х109/л. р<0,05). В то se время достоверное изменение относительного числа CD4* лимфоцитов наступало несколько позже, на стадии ИВ (25,03+1,5556). На стадиях ВИЧ-инфекции ША--ШБ и IIIB-IV сохранялись сниаенные значения CD4* лимфоцитов (26,20+0.74. 27,32+1.17 и 25,44+1,79% соответственно), отличав-шеся от показателей контрольной группы (36,48+1,36%, р<0,05).

В противоположность данному процессу наблюдалось увеличение числа С08* лимфоцитов уже в бессимптомную фазу развития инфекции (стадия IIB), что отражалось повышением как относительного, так и абсолютного содержания CD8* лимфоцитов в крови (37,03+2,04% и 0,78+0,04 х109/л) по сравнению с контрольной группой (26,20+0,74% и 0,56+0,05x109/л, при р<0,05). На стадиях ИВ. IIIA иШБ болезни абсолютное содержание CD8* лимфоцитов оставалось повышенным (0,67+0,04, 0,73+0,05 и 0,72+0,07x10®/л), сни-ааясь на стадии IIIB-IV (0,55+0, ЮхЮ9/л).

Описанные изменения, естественно, влияли на такой показатель, как соотношение CD4/CD8 лимфоцитов. Изменения индекса CD4/CD8 у инфицированных лиц составили от 0.99 до 0,81 с более выраженным снижением в бессимптомную фазу и в стадию IIIB-IV инфекции ВИЧ (0,81+0,04 и 0,90+0,08). В контрольной группе индекс CD4/CD8 составил 1,45+0,11.

Относительное число CD2-DR+ лимфоцитов на IIA и IIB стадиях заболевания оказалось достоверно сниженным по сравнению со здоровыми лицами (17,77+1,87 и 19,10+1.71%, 23,66±1,72%, р<0,05), однако без тенденции к изменениям в динамике болезни.

Кроме количественных изменений иммунокомпетентных клеток при прогрессировании заболевания отмечались изменения функциональной активности Т-лимфоцитов. Так в динамике РТМЛ с митогена-

ми - Кон А и ФГА рост показателей реакции торможения миграции лейкоцитов отражал постепенное снижение лимфокинпродуцирующей функции Т-лимфоцитов в ответ на митогенную стимуляцию. При этом процесс сниаения функциональных характеристик лимфоцитов носит нарастающий от предшествующей к последующей стадии характер, таким образом, что наибольшие изменения, по отношению к контрольной группе, отмечались в IIIB-IV стадиях болезни. Так на стадиях IIB и ИВ РТМЛ С Кон А составила 74,55+3,21 и 76.42+2. 74Х, а на ША-ШБ и IIIB-IV стадиях 83.8+4.10, 84,0+2.17 и 88,3+3,4136, что достоверно отличалось от показателей контрольной группы -57,44+2,53%.р<0,05. Сходные, но еще большие изменения, были характерны для реакции Т-лимфоцитов на ФГА.

Уяе на стадии ВИЧ-инфекции IIA-B и IIB установлено резкое возрастание числа клеток, несущих антигены ВИЧ. Число лимфоцитов, экспрессирующих р24 составило на стадиях IIA-Б и IIB 14,4+2.37 и 10.9+1,0135. а на стадии IIIA еще более увеличилось до 14,4+2.37% (уровень в контроле 0,34+0,20%). Сходные тенденции отмечались и в отношении gpl20+-лимфоцитов,'уровень которых составлял на стадиях IIA-Б 0,34+0.20%, ИВ 11,1+1,18%, IIIA 11,1+2,64%, ШБ 20,2+1,08%, IIID-IV 10,4+3.09% (в контроле 0,34+0.20%).

Таким образом, исследование иммунной системы инфицированных ВИЧ лиц "показало, что при развитии инфекции происходят закономерные изменения клеточного иммунитета, характеризующиеся возрастанием числа CD8* лимфоцитов, снижением числа субпопуляций CD2-DR* и CD4 лимфоцитов, соотношения CD4/CD8 ч функциональных характеристик лимфоцитов в тестах с митогенами - Кон А и ФГА. С этими процессами коррелируют возрастание HLA-DR* лимфоцитов и клеток, несущих на мембране вирусные антигены р24 и gp!20. Диагностика иммунологических нарушений не должна ограничиваться изучением одного-двух показателей иммунной системы. . в связи с чем мокко согласиться с мнением о том, что повышение на фоне терапии, например, содержания CD4* лимфоцитов, еще не приводит к изменению стадии болезни, хотя следуя формальной логике классификации ВИЧ-инфекции ВОЗ это должно иметь место (Hill А.М., 1995).

B-система иммунитета в динамике ВИЧ-инфекции.

Прогрессировать инфекции приводит.к изменению содержания B-лимфоцитов в периферической крови, нарастающего от ранних к более поздним стадиям болезни. Так, отмечено, что абсолютное содержание В Ig+-лимфоцитов имело минимальные значения в стадиях

ПБ и ИВ (0.36+0,03 и 0,38+0,02x10®/л), максимальные - в стадиях ША - ШБ -ШВ+Г/ (0,39+0,03 - 0,43+0,05 -0.49+0. ОбхЮ9 /л). Было установлено, что на стадиях ШБ и ШВ+1У достоверно повышается относительное содержание В -лимфоцитов (19,30+0,82% и 21,70+0,7930, по сравнению с контрольной группой (14,70+0,48%, р<0,05). По этому показателю имелись достоверные различия меяду стадиями ПВ и ША (соответственно 16,2+0,45 и 18,10+0,63%), при р<0,05.

Для характеристики изменений отдельных субпопуляций В-лим-фоцитов представляло интерес выяснить, за |счет каких из них (В да*, В , В 1еМ+) происходит преимущественный рост числа В-лимфоцитов. Показано, что в процессе развития инфекции изменялось количество субпопуляций В ^С* и В 1вА+. Так, было отмечено достоверное повышение относительного количества В да*-лимфоцитов в стадиях ПБ. ПВ ( 8,94+0,46 и 9,55+3,83% соответственно), и, особенно, ШВ-И (12,3+4,13%) по отношении к здоровым лицам (5,36+0,27%; р<0,05). В стадии ПВ_отмечалось повышение относительного содервания В 1еА+-лимфоцитов до 3,45+0,46%, достоверно отличающегося от показателей контрольной группы (2,20+0,15%; р<0,05 ). Данные различия сохранялись и в последующем, на стадиях инфекции ША-ШБ-ШВ+Г/ (3,46+0,42% - 3,26+0,61 -3,96+0,56% соответственно). постепенно нарастало и абсолютное содержание В 1вА+-лимфоцитов.

Изучение содержания иммуноглобулинов периферической крови в динамике болезни показало следующее. В стадии ПБ были выявлены:-увеличение М (1.63+0,12 г/л) по отношению к норме (1.36+0,06 г/л; р<0,05) и достоверные различия в содержании С между группами инфицированных ВИЧ на стадиях, болезни ПВ (14,0+0,64 г/л) - ЩА' (15.9+0,68 г/л) и ШБ (17.6+0.42 г/л) - ШВ+IV (18,7+0,86 г/Ю (р<0,05), Содержание А в крови у инфицированных ВИЧ лиц было достоверно (р<0.05) снижено в стадии ША (1,94+0,19 г/л) по отношению к этому показателю у здоровых лиц (2,27+ 0,13т/л). Кроме того, содержание А в стадии ША достоверно отличалось от показателей стадии 111В+1У (2,47+0, 45 г/л; р<0,05 ).

Известен факт повышения при ВИЧ-инфекции числа циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК). Мы отметили увеличение содержания ЦИК в крови уже на II стадии инфекции (ПА-Б - 56,5+4.22. ПВ -73,0+2,33%). Высокий уровень ЦИК сохранялся на стадиях ША (77.9+2.66%) и стадии II1Б (76.10+4.74%), ШВ+1У (78, 50+2,19%).

отличаясь от показателя контрольной группы (р<0.05).

Таким образом, при развитии инфекции ВИЧ наблюдались закономерные изменения показателей гуморального иммунитета, характеризующиеся возрастанием как абсолютного, так и относительного содернания В Ig+-лимфоцитов и субпопуляций В IgA+ и В IgG+ лимфоцитов, что, сопровождается изменением содераания отдельных классов иммуноглобулинов и ЦИК в периферической крови.

Взаимосвязь экспрессии антигенов ВИЧ и состояния клеточного иммунитета при ВИЧ-инфекции.

При инфицировании ВИЧ уже на ранних стадиях заболевания были выявлены количественные и функциональные сдвиги в иммунной системе. Эти процессы влекут за собой изменение структурной организации иммунной системы, отражением чего явилось установление новых я изменение силы и направленности ранее имевшихся корреляционных r-связей меаду основными характеристиками »«лунной системы. Уг.е на стадии II-B возникает положительная корреляционная связь (г=0. 49; t=l,94) меаду содержанием CD8+лимфоцитов и числом иммунокомпетентных клеток, тлеющих на поверхностных мембранах антиген ВИЧ р24. III-А стадия ВИЧ-инфекции, характерным клиническим проявлением которой являются вторичные инфекционные заболевания, приводит к существенному изменению взаимосвязей менду основными параметрами клеточного и гуморального иммунитета. отразением чего служит установление тесных положительных г-связей меяду числом НК-клеток, индексом CD4/CD8 и содержанием клеток, зкспрессирующих антигены ВИЧ р24 и gpl20 (риС.2). Стадии Ш-Б и III-B болезни характеризуются резкиг усилением связи меяду отдельными компонентами иммунной системы.

На стадии II1-Е инфекции были выявлены высокой степени тесные отрицательные г-связи'между числом СОЗ-лимфоцитов и содержанием клеток, зкспрессирующих антиген ВИЧ р24 (г=-1.0; t=-3.28x10000) и антиген ВИЧ gp!20 (г=-0.97; t=-4.25), меяду числом НК-клеток и числом р24+-лимфоцитов(r»1.0; t=100.0). Отражая иммунопатогенез, одной из сторон которого являются возрастание числа клеток, зкспрессирующих антигены ВИЧ р24 и gpl20, сила связей'показывает, что по мере прогрессировать все более проявляется влияние инфекции на иммунную систему. Возникают новые, не свойственные иммунной системе здорового организма взаимосвязи, что характеризует ВИЧ-инфекцию, как заболевание, затрагивающее функционирование всех звеньев иммунной системы, а не только инфицированные ВИЧ кммунокоыпетенткые клетки.

т

Лейкоциты -Лимфоциты-

н|к

— СБЗ-

ШАтОК

-С04/С08

311

2)

СО8 С04

Лейкоциты -Лимфоциты-

н|к ==

- СРЗ-

НЬЛ-БЙ -С04/СБ8

И ее и А

!1Г

СЭ8

в-рА4 н е с А

3)

Лейкоциты Лимфоциты

и,К *=—

I?3

С04

Л

4)

НЬА-БЯ

С04/С08 -

| Ш

9=р24 Н1У =ер120 Н1У

ццлты ®120 Н1У=

III!

= р24 Н1У =

НЬАЧШ

НК

СБ4-

СБ4/С08=

С||9

=и С08

в-|ем+ ¡ее1 в-|еА4 -

м г с А ле б 1ё А

Рис.2. Структура корреляционных связей между основными

показателями Т-и В-систем иммунитета у здоровых (1) и инфицированных лиц на II (2), ША(3). ШВ-Ш4) стадиях ВИЧ-инфекции.

Примечание: -г-связи. свойственные здоровьем лицам

? г-связи, свойственные ВИЧ-инфицировантг.: лицам

Система неспецифической защиты в динамике ВИЧ-инфекции.

При защите от инфекции, элиминации атипичных клеток наряду с факторами иммунной системы действуют неспецифические стимулирующие и эффекторные механизмы. Клетки и биологически активные факторы объединяют в так называемую систему резистентности, включающую в себя фагоцитарную систему, белки острой фазы, систему комплемента, интерферон, систему кининов, фибронектин. ли-зоцим и некоторые другие компоненты.

Изучение неспецифических факторов защиты при ВИЧ-инфекции показало, что на стадиях ПА-Б и ПВ наблюдается повышение абсолютного содержания НК-клеток (0,23+0,02x109/л и 0,31+0,04 х109/л), а также повышено относительное и абсолютное их содержание в стадиях ША (16,38+1,13% и 0,29+0,03x109/л), ШБ (16,13+1,11% и 0.28+0,03x10^). ШВ+1У (15.01+0,29% и 0,27+0,03х109/л) по сравнению с контрольной группой (11,34+0,26 % и 0,20+0,01x10®/л). Достоверность различий во всех случаях составила р<0,05. Концентрация СЗ-компонента комплемента в сыворотке крови была снижена (по сравнению с контролем - 0,92+0,03 г/л) на протяжении всех стадий, начиная с бессимптомной фазы развития ВИЧ-инфекции и составила на стадиях ПА-Б 0,69+0,03 г/л, ПВ 0, 71+0, 04г/л, ША -0,71+0,04- г/л, ШБ - 0,77+0.12 г/л, ШВ-1У - 0.63+0.02 г/л.

Было выявлено повышение уровня базального НСТ-теста при ВИЧ-инфекции, по сравнению с нормой (0,10+0,02 ед.экс.)(р<0,01). Наиболее выраженные изменения были обнаружены в стадиях ПА+Б ( 0,16+ 0,01 ед. экс.),. ШБ (0.21+0,02 ед.экс.) и ШВ+1У (0,20+0,01 ед. экс.). Достоверными были различив, мезду показателями базального НСТ-теста, полученными при обследовании инфицированных лиц в стадиях. ПА+Б (0,16+0,01 ед.экс.) и ПВ (0,19+ 0,01 ед.экс.) (р <0,05).

При анализе стимулированного НСТ-теста определено достоверное увеличение его значений, по сравнению с нормой (0,17+0.03 ед.экс.). в стадиях ПА+Б (0,21+0,01 ед.экс.. р<0,05). ПВ (0.24+0,01 ед.экс., р<0,05) и П1В+1У (0.20+0.01 ед.экс.. р<0,05).

Анализ изменений НСТ-теста показал, что при ВИЧ-инфекции происходит активация кислородзависимых антиинфекционных систем фагоцитов, так. что на протяжении всех стадий инфекции отмечается медленное повышение показателей базального НСТ-теста с постепенным уменьшением разницы мезду значениями базального и стиму-

лированного показателей, т. е. ''снижением резервных возможностей данного механизма неспецифической защиты организма.

При определении содержания лизосомально-катионных белков нейтрофильных лейкоцитов в динамике ВИЧ-инфекции было отмечено достоверное увеличение данного показателя в стадии IIA-B по сравнению с нормой (1,58+0,13 усл.ед. и 1,53+0,03 усл. ед. соответственно, при р<0,05), а также выявлены достоверные различия между показателями, полученными при обследовании лиц в стадиях IIB и IIIA (1,60+0,02 усл.ед. и 1,52+0,13 усл.ед. соответственно. при р <0,05). Тенденция к снижению содержания лизосомально-катионных белков нарастала по мере прогрбссирования инфекции, начиная со II стадии, что свидетельствует об уменьшении защитных возможностей кислороднезависимых микробицидных систем фагоцитов при ВИЧ-инфекции.

Содержание трансферрина медленно снижалось, достигая минимальных значений в стадии IIIB+IV (1,61+0,27 г/л). Тенденция начального роста и дальнейшего снижения отмечена в отношении содержания альфа-1-антитрипсина (А-1-АТ), который сохраняясь повышенным (по сравнению со здоровыми лицами) медленно снижался на всем протяжении ВИЧ-инфекции, что было более выражено у лиц в стадии ША. ШБ и IIIB+IV (2,50+0,44 г/л, 2,68+0,34 г/л, при р<0,01 и 2,43+0,29 г/л соответственно, р<0,05). Сходные изменения были характерны и для содержания альфа-2-макроглобулина в. сыворотке крови инфицированных ВИЧ лиц.

Динамика содержания церулоплазмина характеризовалась повышением его значений в ПА-Б, IIB, IIIA стадиях заболевания (соответственно 0,44+0.08, 0,33+0.11, 0,50+0,13, возвращаясь к показателям близким к норме (0,32+0,07 г/л) на стадии IIIB, IIIB-IV ВИЧ-инфекции (0,38+0,04 и 0,43+0,02 г/л).

В стадиях ПА-Б и IIB было выявлено повышение содержания орозомукоидов в сыворотке крови ( 1,52+0,22 г/л и 1,54+0,29 г/л), по сравнению со здоровыми лицами (1,18+0,14 г/л), с последующим некоторым снижением значений в стадиях IIIA (1,23+0,31 г/л) и ШБ (1,38+0,12 г/л). В стадии IIIB+IV содержание орозомукоидов было значительно повышено (1,61+0,19 г/л, р<0,05) по сравнению с контрольной группой, а также стадией ШБ (1,38+0,12 г/л, р<0,05). Уне на ПА-Б стадиях инфекции ВИЧ было определено значительное повышение уровня бета-2-микроглобулина (Б-2-МГ), по сравнению с контролем (соответственно 6,54+0.78 и 2,15+0,15 г/л).

Катаболизм клеточных рецепторных белков при ВИЧ-инфекции.

Клеточные рецепторы, как и другие компоненты цитоплазмати-ческой мембраны, непрерывно подвергаются обновлении за счет распада и последующего их новообразования. Эти процессы в случае стабильного состояния клеточного метаболизма находятся в равновесии, вследствие чего содержание рецепторных белков остается величиной относительно постоянной. Однако, в случае инфицирования ВИЧ, приводящего к активации метаболических процессов, скорость обмена конкретного рецептора мояет существенно увеличиваться. Этот процесс сопровождается возрастанием титра рецепторных белков (Р-белков) в сыворотке крови, что мы и наблюдаем при инфекции ВИЧ на стадиях ПА-Б и IIB (соответственно 13,23+0,59 и 14,30+0,21 log2) и IIIA и IIIB-IV (соответственно 14,05+0,43 и 14,22+0.61 log2).

Накопление продуктов катаболизма клеточных рецепторов с одной стороны является отражением защитной реакции клетки на экстремальное воздействие, а с Другой - Р-белки, сохраняющие способность конкурентно связывать лиганды, оказывают токсическое воздействие. Накопление в организме Р-белков указывает на общий процесс дестабилизации клеточного равновесия, возникающий при ВИЧ-инфекции. Р-белки, связывая циркулирующие естественные антитела в комплексы, без всякого участия антигена вызывают процессы усиления выработки аутоантител. Реализация воздействия рецепторных белков на биосинтез индукторов осуществляется через изменение метаболических процессов в клетках, ингибирование процессов пролиферации и дифференцировки B-лимфоцитов, чт~> находит свое выражение в коррелирующих между собой изменениях титра Р-белков и уровня В-Ig*. B-IgG* лимфоцитов, особенно характерных для стадии IIIA инфекции ВИЧ.

При многофакторном корреляционном анализе установлено, что Р-белки играют важную роль в регуляции иммунной системы при ВИЧ-инфекции: в частности, связаны устойчивыми корреляционными связями с узловыми показателями Т- и B-систем иммунитета: содержанием CD3*, CD4*,В-Ig', B-IgGf, CD2-DR* лимфоцитов. ЦИК, иммуноглобулинами и рядом других.

Метаболизм лимфоцитов и моноцитов при ВИЧ-инфекции.

Выполнение иммунокомпетентной клеткой своих функций реализуется через активацию ее метаболических процессов. Поэтому характеристика метаболической активности лимфоцитов у инфицирован-

ных ВИЧ является одной из важных характеристик ее функциональных возможностей. Снижение или повышение энергетики лимфоцитов отражает уровень реакции иммунной системы на различные воздействия внешней среды, что проявляется изменением активности ферментов основных обменных циклов. Основным поставщиком энергии в клетках является цикл Кребса, где идет образование АТФ. необходимой для обеспечения процессов деления лимфоцитов. При анализе показателей активности ферментов в лимфоцитах периферической крови у лиц, инфицированных ВИЧ, было отмечено повышение активности ключевого фермента цикла трикарбоновых кислот - сукцинатдегидроге-назы (СДГ) во все стадии ВИЧ-инфекции, наиболее выраженное при сравнении с нормой (0,10+0,02 ед.опт.плот.) в стадиях IIA-B (0,13+0,01 ед.опт.плот.) и IIIB-IV ( 0,15+0,01 ед.опт.плот.). при р<0,05. Повышенная активность СДГ была определена в стадиях IIB (0,14+0,01 ед.опт.плот.), IIIA (0,14+0,01 ед.опт. плот.) и IIIB (0,14+0,01 ед.опт.плот.), при р<0,05.

Повышение активности одного из основных ферментов цикла -СДГ компенсирует, как правило, снижение образования АТФ, связанное с угнетением альфа-глицерофосфатного челночного механизма, необходимого для переноса электронов. Это подтверждается снижении при ВИЧ-инфекции, активности альфа-глицерофосфатдегидрогена-зы (а-ГФДГ) в цитоплазме и митохондриях. Так, при ВИЧ-инфекции, наиболее существенное снижение активности а-ГФДГ, при сравнении с нормой (0,28+0,02 ед. опт.плот.), было выявлено в стадиях 11А-Б (0,19+0,01 ед.опт.плот.) и HIB (0,19+0,02 ед.опт.плот.), (при р<0,05).

Интенсификация обменных процессов в цикле Кребса приводит и к закономерному снижению активности гликолиза , что можно объяснить эффектом Пастера. У инфицированных этот процесс отражается снижением активности лактатдегидрогеназы (ЛДГ) - одного из главных ферментов гликолиза. При определение активности этого фермента установлено, что активность ЛДГ в лимфоцитах при ВИЧ-инфекции снижена, по сравнению с нормой (0,29 +0,02 ед.опт. плот.). В стадии IIB и IIIB-IV отмечалось максимальное снижение (0.21+0.01 ед.опт. плот., р<0,01). Снижение активности ЛДГ было характерным и для стадий IIA-Б, IIIA, ШБ (соответственно 0,22+0,01. 0,23+0,01 и 0,23+0,01 ед.опт.плот.). Это снижение активности ЛДГ, по-видимому, можно объяснить еще и тем, что фосфо-рилированные формы глюкозы усиленно используются для синтеза восстановленных форм НАДФН и рибоз, необходимых для биосинтети-

ческих процессов.

Активное участие в образовании биоэнергетических субстратов принимают никотинамид-адениндинуклеотид-оксидаза (НАД-оксидаза) и никотиначид-адениндинуклеотидфосфат-оксидаза (НАДФ-оксидаза), Эти ферменты осуществляют восстановление окисленных форм НАД и НАДФ, необходимых для синтеза АТФ. Наряду с этим НАД- и НАДФ-ок-сидазы выполняют функцию основных прооксидантных ферментных систем клетки, и повышение их активности, как правило, сопровождается усилением процессов перекисного окисления липидов, что в свою очередь моает быть одним из механизмов формирования СПИДа.

Было отмечено повышение активности НАД-оксидазы в динамике ВИЧ-инфекции при сравнении с активностью этого фермента у практически здоровых лиц ( 0,12+0,01 ед.опт. плот.): в стадиях ША, ШБ (0,16+0,01; 0,18+0,01; ед.опт.плот., р<0,05). Выявленная тенденция к дисбалансу активности указанных ферментов лимфоцитов еще раз подтверждает нарушение биоэнергетических процессов при ВИЧ-инфекции (рис.3.).

Изучение взаимосвязи изменений активности ключевых ферментов основных обменных циклов, происходящих в зависимости от стадии заболевания, показывает, что инфицирование ВИЧ существенно влияет на уровень Функциональной активности всей иммунной системы. Изменения метаболизма лимфоцитов при ВИЧ-инфекции носят, по все видимости, направленный характер, т.к. затрагивают широкий круг ключевых ферментов обменных циклов, наблюдаются уае в бессимптомную фазу развития ВИЧ-инфекции. Данное обстоятельство позволяет оценить метаболические изменения в лг 'фоцитах при инфицировании ВИЧ уже в ранний период развития патологии, что может использоваться в клинической практике, позволяя проводить дифференциальную диагностику меяду лоаносеропозитивными и инфицированными ВИЧ лицами.

В результате исследования активности ключевые ферментов гликолиза (ЛДГ) и цикла Кребса (СДГ) в моноцитарных клетках установлено, что начиная со стадии ПБ заметна отчетливая тенденция к повышению активности ЛДГ (207,51+14,0? у.е.) и параллельно этому к снижению активности СДГ (129.46+7,55 у.е.). Максимальная напряженность процессов анаэробного окисления глюкозы наблюдалась на стадии ПВ (253,01+17,39 у.е.), при этом активность ЛДГ примерно на 40% превышала контрольные значения (189,26±11,95 у.е.). Одновременно с этим было установлено снижение активности СДГ, минимальные значения которой, по сравнению с контролем

(142,09+10,68 у.е.), регистрировались на стадии IIIA (117,03+7,03 у.е.). Угнетение активности гликолиза и ферментов цикла Кребса свидетельствует о возникновении дисбаланса в процессах окисления, и в конечном итоге о нарушении Функциональной активности моноцитов в процессе развития ВИЧ-инфекции.

im (5лз)

СДГ(О.Ш)

SAii40.lt)

■ад (o.i г) сот (ал«)

■АД (0.17)

Air (0.го -------- ■ ,-пмг (0.1») ддг (о.гз)' -,-гедг <олз)

I I

1

Рис.3. Активность ферментов лимфоцитов у здоровых (1) и ВИЧ-инфицированных лиц (2).

Переписное окисление липидов при ВИЧ-инфекции.

В системе метаболических процессов клетки широко представлены реакции перекисного окисления липидов (ПОЛ). В основе ПОЛ лежат процессы окисления ненасыщенных жирных кислот мембран под действием свободных радикалов. Интенсификация ПОЛ может вызывать нарушения проницаемости мембран с последующей инактивацией мемб-ранассоциированных ферментных систем, выходом лизосомальных гид-ролаз в цитозоль, что приводит к повреждению ДНК и другим существенным изменениям в структуре и функциональном состоянии клетки.

Степень активации ПОЛ изучалась в связи с основными показателями, характеризующими функциональное состояние иммунной системы (количеством CD3f ,CD4*, CD8+ лимфоцитов, РТМЛ с ФГА и Кон А и др.). Установлено, что содержание ТБК-связывающих продуктов, активность прооксидантных ферментных систем, таких как НАД- и НАДФ-оксидазы, ксантиноксидаза в лимфоцитах инфицированных ВИЧ пациентов достоверно выше, чем в контрольной группе,- что подтверждает интенсификацию процессов перекисного окисления липидов в иммукокомпетентных клетках при ВИЧ-инфекции. Изучение активности СОД, фермента способного каталитически обезвреживать свободные радикалы, в лимфоцитах инфицированных ВИЧ лиц показало, что на IIA и Б стадиях заболевания отмечается существенный рост ее_значений, по сравнению с контролем (табл.1.).

Процессы перекисного окисления липидов могут служить инициирующим моментом в патогенезе функциональной неполноценности им-мунокомпетентных клеток, прежде всего CD4+ лимфоцитов, что в дальнейшем может приводить к развитию иммунодефицитного состояния,' особенно при снижении активности антиоксидантных систем, в частности СОД, что мы отмечаем на IIIB-IV стадиях болезни.

Уровень ТБК-связывающих продуктов достоверно коррелировал с величиной РТМЛ (Кон А).и имел тенденцию к корреляции с количеством CD8+- лимфоцитов. Положительные корреляционные связи отмечены между активностью КСО, СОД и РТМЛ с Кон А, а так яе меаду активностью НАД-оксидаз и РТМЛ с ФГА) и РТШ1 с Кон А. Отрицательные корреляционные связи имели место между активностью НАД-окси-дазы, КСО, СОД и количеством CD4+ лимфоцитов.

Изучение взаимосвязи этих параметров с помощью корреляционного анализа выявило, что определенным, клинически очерченным стадиям заболевания, соответствуют их метаболические эквиваленты. Основываясь на результатах проведенных исследований необхо-

димо отметить, что в лимфоцитарном пуле лиц, инфицированных ВИЧ, происходит усиление процессов перекисного окисления липидов, являющихся фактором дестабилизирующим мембранные структуры, изменяющим функциональное состояние иммунокомпетентных клеток.

Таблица 1

Уровень перекисного окисления липидов и активности СОД на различных стадиях ВИЧ-инфекции Ш 1 в)

Стадии П о к i з а т ел и

В И Ч-инфекции К С 0, н/мольхЮ9 кариоцитов НАД. у. е. НАДФ. у. е. Т^К-св. пр. нмоль/109 кариоцитов С О Д, у. е.

IIB 0,207+0,01 0,148+0,01 0,142+0,02 2,533+0,18 96,2+3, 38

IIB 0,216+0,02 0.163+0,01 0,155+0,02 2,781+0,16 112,5+4,51

Ulk 0.256+0.02 0,167+0.01 0,160+0.02 2.942+0,19 100, 6+5,09

ШБ 0.219+0,02 0.172+0.02 0,158+0,01 3,141+0.21 117,8+4.97

IIIB-IV 0.278+0.02 0,191+0.04 0,179+0,03 3.470+0.24 75,9+6,38

Контроль 0,278+0.02 0.113+0,01 0,129+0,01 2,026+0,12 42,12+1,57

Процессы перекисного окисления липидов могут служить инициирующим моментом в патогенезе функциональной неполноценности иммунокомпетентных клеток, прежде всего.. CD4+ лимфоцитов, при ВИЧ-инфекции, что может способствовать формированию иммунодефицитного состояния, особенно при нарушении деятельности антиокси-дантных систем.

Наиболее существенные изменения отмечены при формировании иммунодефицитного состояния (стадии IIIB-IV) : происходит активация пентозного цикла, усиливаются процессы распада пуриновых оснований, приводящие, в свою очередь к активации прооксидантных систем - НАДФ- и ксантин-оксидазы. Закономерным представляется, что эти изменения приводят к усилению перекисного окисления ли-

пидов. И если на начальных этапах развития инфекции усиление ПОЛ еще сдераивается активацией антиоксидантных систем, прежде всего СОД. глутатиона и других, то в период формирования СПИД возможности компенсации оказываются, по-видимому, недостаточными. Развивающиеся нарушения функций мембран и активация трипсиноподоб-ных эндонуклеаз приводят к разрушению ядерного хроматина, что зарегистрировано как увеличение числа одноцепочечных разрывов ДНК, продуктов деградации хроматина и фрагментации ядра. Все эти процессы способствуют развитию СПИДа и могут заканчиваться интерфазной гибелью клетки.

Исходя из предложенной концепции, одним из возможных путей, замедляющих развитие приобретенного иммунодефицита при ВИЧ-инфекции, может быть включение в состав диетического питания больных продуктов богатых SH-содержащими аминокислотами, витаминами А и Б.

Состояние нуклеиновых кислот иммунокомпетентных клеток.

Известно, что патологические процессы приводят к функциональным и морфологическим изменениям клеток иммунной системы, например, к появлению так называемых атипичных лимфоцитов. Это могут быть крупные лимфоциты с изменчивой формой ядер, двух- и трехъядерные, лимфоциты с вытянутыми ядрами и цитоплазмой, а также ворсинчатые лимфоциты (Абрамов М.Г., 1985).

При изучении морфологии лимфоцитов у ВИЧ инфицированных лиц нами было обнаружено, что существенная доля лимфоцитов представлена клетками, имеющими атипичную морфологию в виде двухъядерных или трехъядерных форм. Мы обозначили их как "сегментированные лимфоциты" (СЛ), Для выявления связи данных морфологических изменений лимфоцитов с инфекцией ВИЧ, нами были обследованы 58 инфицированных ВИЧ лиц (II-III стадии заболевания), 37 больных вирусным гепатитом В (ВГВ) 30 практически здоровых лиц (доноров).

Сравнительный анализ данных, полученных при ВИЧ-инфекции и вирусном гепатите В (8,63 + 0,81%) показал, что наиболее значительные изменения морфологии лимфоцитов, по сравнению со здоровыми лицами (4,36 + 0,59%), наблюдаются при инфекции ВИЧ. Различие в значениях содержания СЛ при данных инфекциях носили достоверный характер (р<0,05). На стадииях ВИЧ-инфекции IIB и IIB содержание СЛ составило 11,0 + 2,10% и 17,4 + 1,99%. Наибольшее число СЛ было выявлено в III А стадии заболевания (23,0 + 6,82%), а значения СЛ постепенно возрастали от предыдущей к последующей стадиям инфекции. На стадиях Ш-Б и III B-IV уровень

СЛ несколько уменьшался (16,0 +4,51 и 16,4 + 5,63%).

Особенно существенные различия в уровне СЛ наблюдались при сравнении инфицированных ВИЧ и здоровых лиц (р<0,001). И хотя при вирусном гепатите В мы также отметили существенно более высокий уровень СЛ, однако он не достигал значений, определенных при ВИЧ-инфекции. Морфологические нарушения ядерных структур им-мунокомпегентных клеток, по-видимому, входят в обусловленную инфекцией цепь патогенетических изменений иммунной системы. Они характерны для всей совокупности лимфоцитов, а не только для инфицированных ВИЧ клеток. Этот факт, вероятно, может служить еще одним доказательством вмешательства ВИЧ в деятельность иммуно-компетентных клеток, как целостного образования, системы, подтверждая мысль о том, что на всех уровнях - морфологическом, функциональном, метаболическом инфекция ВИЧ вызывает значительные нарушения, приводящие в итоге к развитию иммунодефицита.

В связи с этим было изучено состояние процессов деградации нуклеотидов у инфицированных ВИЧ лиц в динамике заболевания. Как показали результаты работы содержание продуктов деградации нуклеотидов (ПДН) у ВИЧ-инфицированных лиц было достоверно повышено по сравнению с контрольной группой (48,5+1,55 ед.), а также группой больных ВГВ (61,8+1,42 ед.). При прогрессировании инфекции происходил постепенный рост числа продуктов деградации на стадиях ПА-Б, IIВ (61,1+1,42 и 62.7+1.-39 ед.) и ША, ШБ (64,4+3,92 и 69,5+3,30 ед.), сменяющийся существенным возрастанием значений ПДН в стадиях ШВ-1У (82,3+4,61 ед.), что характеризует переход к новому состоянию иммунокомпетентных клеток. Сходные процессы характерны и для коэффициента альфа (К-альфа), отражающего соотношение числа одно- и двунитевых разрывов ДНК. .

В последние годы одним из важных направлений исследований клеточного ядра стало изучение суперспирально-доменной организации ДНК в составе хроматина.

С этой целью было проведено титрование растворов нуклеои-дов, полученных из лимфоцитов ВИЧ-инфицированных лиц, интеркали-рующим фенантреновым красителем - бромистым этидием, который воздействуя на дуплекс ДНК изменяет шаг двойной спирали, что по законам топологии приводит к падению числа супервитков. При концентрациях бромистого этидия 5-10 мкг/мл в норме наблюдается полная релаксация комплекса ДНК, а при более высоких концентрациях (20-40 мкг/мл) возникают супервитки противоположного знака, т.е. образуется оппозитная конформация.

Однако при наличии разрывов нитей ДНК достижение как натив-ной,. так и оппозитной конформации становится невозможным, что может быть зафиксировано на титрационной кривой фазой необратимой релаксации. При экспериментальном изучении степени суперспи-рализации ядерной ДНК у инфицированных ВИЧ лиц были получены результаты, свидетельствующие нарушении организации надмолекулярного комплекса ДНК, которые выражались в изменении плотности су-перспирализации ДНК (ссДНК) и затрагивали доменно-кластерный уровень организации хроматина (табл.2.).

Таблица 2

Конформационное состояние ссДНК у инфицированных ВИЧ , и больных ВГВ, по сравнению со здоровыми лицами

Обследуемые контингента Возраст (М+м) Время (сек) Максимальная концентрация бромистого этидия

Контроль Опыт

Доноры; 34,3+1,94 80.5+1,73 131,0+3,81 4,69+0,16

Инфицированные 33,8+1,82 86,2+2,91 122,0+5,67 5, 58+0. 52

Больные ВГВ 32,6+1.77 84.3+2.16 126,0+3,62 4, 88+0, 37

Следствием таких конформационных переходов надмолекулярного комплекса ДНК .может стать случайная активация тех или иных групп доменов. В свою очередь такая некорректная конформация ведет к нарушению скоординированной работы генетического аппарата, что проявляется несбалансированным ростом и высокой вероятностью преждевременной гибели клетки.

По современным представлениям генерационный цикл, т.е. время, затрачиваемое клеткой от одного деления до другого, делится на четыре периода или фазы: G1( S, G2, М. Период Gj - постмито-тическая фаза клеточного цикла. В данном случае в клетке содержится диплоидный набор ДНК и синтез пока не происходит. Период S - синтетический, когда начинается синтез нуклеиновых кислот. G2 период - премитотический, М-период - собственно митоз. Также выделяют и G0 период, во время которого клетка находится в состоянии митотического покоя.

Исследование кинетической активности клеточного цикла лим-фоидных клеток инфицированных БИЧ лиц показало наличие достоверных различий в содержании лимфоцитов периферической крози, находящихся на различных фазах клеточного цикла при ВИЧ-инфекции.

Так, было установлено возрастание, по сравнению с контролем (0,15+0,13%), уже на стадиях ВИЧ-инфекции IIB (9,99+0,96%), но еще более IIB, числа лимфоцитов, находящихся в фазе S (р<0,05).

В то же время существенно уменьшалась доля лимфоцитов, находящихся в фазе G0 - Gt клеточного цикла (контроль 98,02+3,18%, ВИЧ-IIB -90,61+4,07%). Затем содержание лимфоцитов, находящихся в фазах G0 - G1 и S на стадиях инфекции IITA (93,09+2,63 и 2,01+1,36%), IIIB (95.33+4.18 и 1,79+0.19%) и IIIB-IV (94,21+2,47 и 2,53+0,25%) оставалось достаточно стабильным.

Эти процессы несомненно являются отражением происходящих под действием ВИЧ и его антигенов изменений митотической активности иммунокомпетентных клеток. Характерным является падение числа лимфоцитов, находящихся в фазе клеточного цикла G0 - Gj и соответствующий рост их числа в фазе S при переходе от стадии II А к стадии II Б болезни, что служит, вероятно, отражением компенсаторного, связанного с развитием болезни, напряжения митоти-ческих процессов в иммунокомпетентных клетках. Эти изменения соответствуют феномену индукции синтеза клеточной ДНК онкогенными вируса!,1и в культуре клеток, проявляясь-и на уровне целого организма. '

Также проведено изучение напряженности процессов синтеза ДНК в моноцитах периферической крови лиц, инфицированных ВИЧ. Рост синтеза ДНК в моноцитарных клетках (фаза S) был зарегистрирован уже на стадии IIB (6,79+0,59%), достигая максимальных значений к стадии IIB (21,37+3,14%). По мере прогрессирования ВИЧ-инфекции, наблюдалось постепенное снижение митотической активности моноцитов и на стадии IIIB процент клеток, находящихся в S фазе, составлял всего лишь 0,24+0,09%, что достоверно не отличалось от контрольных значений (0,13+0,01%).

Установленное нарастание синтеза нуклеиновых кислот в иммунокомпетентных клетках от стадии IIB к стадии IIB, по всей видимости, указывает на активацию процессов репликации вирусной РНК. Это соответствует представлению о том, что именно на стадии ИВ инфекции происходит массовая наработка вирусных белков. Указанные процессы несомненно являются отражением происходящих под действием ВИЧ и его антигенов циклических изменений митотической

активности иммунокомпетентных клеток, устанавливающих новый уровень функционирования иммунной системы инфицированного ВИЧ организма.

Аллергические реакции о патогенезе ВИЧ-инфекции

Были обследованы 166 инфицированных ВИЧ лиц. Контрольную группу и группу сравнения составили 157 практически здоровых лиц (доноров) и 164 больных различными клиническими Формами атопи-ческой аллергии. С целью верификации аллергических заболеваний среди обследованных лиц проводилось скрининг-анкетирование с помощью анкеты, разработанной нами на основе опросника НИАЛ АМН СССР.

Лицам, у которых по данным скрининг-анкетирования предполагалось наличие аллергического заболевания, осуществлялось углубленное аллергологическое обследование, проводившееся с учетом "Методических рекомендаций по ранней диагностике и профилактике аллергических заболеваний в Армии и Военно-морском флоте"(1983).

Клиническими формами аллергии, определенными у 87 из 166 инфицированных ВИЧ лиц, были: ринита 41 (47,1%), лекарственная сыпь 27 (31,0%), крапивница (17,2%), атопический дерматит 14 (16,1%), ангионевротический отек 2 (2,3%). Эти формы встречались как самостоятельно, так и в сочетании. Отягощенный по аллергии семейный и личный анамнез имели большинство 102 (54,5%) пациента, инфицированных ВИЧ.

Проведено изучение аллергенспецифического IgE у ВИЧ-инфицированных лиц по отношению к 30 неинфекционным аллергенам (бытовым, эпидермальным, пыльцевым, пищевым). Час-юта выявления умеренного и высокого уровней специфического Ig Е к бытовым и эпидермальным аллергенам при ВИЧ-инфекции была следующей. В группе бытовых и эпидермальных аллергенов наиболее часто выявлялась сенсибилизация к аллергенам домашней пыли (22,46%), библиотечной пыли (14,44%), дерматофагоидным (D.pteronissinus и D.fari-пае) клещам (8,02 и 2,55%), пера подушки (3,06), шерсти собаки (2,04%) и кошки (1,02%). В группе пыльцевых аллергенов чаще выявлялась сенсибилизация по отношению к тимофеевке (12,24%), еже сборной (8,67%), лещине (6,95%), березе (6,12%), овсянице иле-беде (по 3,06%), ольхе и подсолнечнику (по 2,55%), реже к полевице и амброзии. Из пищевых аллергенов наиболее часто сенсибилизация выявлялась к аллергенам молока (4,81%), рыбы -сайды и хека (по 3,74%), куриных яиц и говядины (по 3,06%), мясу курицы (2,55%), pese - к свинине (1,6%) и мясу утки (1,07%).

Таким образом, уровень специфического IgE у ВИЧ-инфицированных лиц оказался наиболее высоким по отношению к бытовым (домашняя и библиотечная пыль) и ряду пыльцевых аллергенов (ежа сборная, лещина, тимофеевка и др.). Несомненно этот факт показывает, что сенсибилизация касается не только антигенов ВИЧ, и, вероятно, по времени'возникновения предшествует инфицированию. В то же время выявление методами In vitro сенсибилизации на ранних стадиях заболевания позволяет более качественно диагностировать нарушения иммунной системы и проводить их коррекцию.

Методом ИФА изучен уровень общего Ig Е, составивший в группе 187 инфицированных ВИЧ лиц 212,6 + 38,3 kE/1, у больных ато-пической аллергией 287,3 + 48,7 КЕ/1 и у здоровых лиц 48,2 + 3,52 kE/1. Исследование показало, что ВИЧ-инфицированные лица имеют довольно высокий уровень общего Ig Е, позволяющий его сравнивать его с таковым при атопической аллергии. Вероятно, это является отражением сенсибилизирующего влияния антигенов ВИЧ, в результате чего патогенез инфекции приобретает черты аллергического или аутоаллергического процесса.

При изучении гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) при ВИЧ-инфекции нами были использованы рекомбинантные антигены ВИЧ, соответствующие продуктам генов ВИЧ env (gpál, gpl20), pol (p66. p31), gag (pl7, p24).

При исследовании реакции торможения миграции лейкоцитов (РТМЛ) с антигенами ВИЧ у здоровых лиц не выявлено различий в реакции на антигены gag, env, pol. РТМЛ практически не изменялась, находясь в пределах от 95,2+ 4,38 при исследовании с антигеном env до 98,3+2,23 с антигеном gag вируса.

На стадии ВИЧ-инфекции II Б выявились различия в значениях РТМЛ с антигенш,!И ВИЧ (pol, env) между здоровыми и инфицированными лицами, не имевшие, однако, достоверного характера. Не выявлено существенных различий в показателях РТМЛ меаду стадиями инфекции II Б и II В, сохранялись близкие предшествующей стадии значения.

Существенно различной была реакция клеток иммунной системы на группы антигенов ВИЧ gag и env на II и III стадиях инфекции (табл.3).

Наиболее существенные изменения РТМЛ по отношению к антигенам ВИЧ env (gp4i.gpl20) были характерны для более поздних стадий инфекции, по-видимому, соответствуя более активному инфекционному процессу в организме.

Таблица 3

Показатели РТМЛ с антигенами ВИЧ на различных стадиях инфекции

Обследованные контингента Антигены ВИЧ

gag <р17. р24) pol (рбб, рЗП env ■ (gp41.gpl20)

' Здоровые лица 98,3 + 2,23 97. 8 + 3.66 95,2 + 4.38

Инфицированные ВИЧ : стадия II Б 69,4 + 12,8 83,0 + 12.6 86,8 + 12,9

стадия II В 73,2 +3.8 82,5 + 4,57 85,6 +_ 6,11

стадия III А 87,3 + 7,51 76.5 + 6,54 76,3 + 9,54

стадия III Б 86,0 + 13,9 76,5 + 15,8 68.8 + 3,7

стадии III В -IV 88.0 + 4,9 71,0 + 5,57 53,0 + 10,4

Реакцию нейтрофилов периферической крови на различные антигены и аллергены применяют для решения многих задач. Из них следует выделить первичную диагностику инфекционных процессов и диагностику сенсибилизирующих факторов при различных (в первую очередь имеющих аллергические механизмы патогенеза ) заболеваниях. Выраженность показателя повреждения нейтрофилов (ППН) была проанализирована в связи с воздействием комплекса антигенов ВИЧ (gag, pol, env) и'составила на стадиях инфекции II Б 0,24 + 0,012, IIB 0,27 + 0,015, III А 0,33 + 0,016, III Б 0,29 + 0,017, III В -IV 0,32 + 0,019 у.е, достоверно различаясь между ИВ и ША стадиями (р<0,05). У здоровых лиц ППН составил 0,05 + 0,008 (N=54). Таким образом, полиморфно-ядерные лейкоциты инфицированных. ВИЧ лиц принимают активное участие в формировании иммунологической реактивности организма и могут быть повреждены антигенами ВИЧ, начиная с ранних этапов развития инфекции.

Клинико-иммунологические особенности ВИЧ-инфекции у детей.

Материалы исследования характеризуют клинико-иммунологичес-кие особенности заболевания у парентерально, инфицированных ВИЧ

детей, перечисленных ниже возрастных категорий: 1-2 года (35 человек), 3-6 лет(35 человек), 7-14 лет (22 человека), в том числе на стадиях инфекции IIB - 8, ША -41, ШБ -27, IIIB-IV -16 человек. Частота клинических симптомов и синдромов у данных детей была следующей: лихорадка 56,0%, лимфоаденопатия 100,0%, увеличение печени'. 97,8%, увеличение селезенки 83,0%, сиалоаденит 18.4, диарейный синдром 38.0%, дефицит массы тела 64.1%.

Одним из ведущих синдромов ВИЧ-инфекции у детей явились поражения кожи, в том числе аллергического генеза. Они наблюдались у 74% больных детей. Частота и выраженность кожных поражений нарастала по мере прогрессирования болезни (в III-IV стадиях они имелись у 14 из 16 больных). Чаще всего наблюдались герпетические высыпания - у 47 из 68 детей (69%), далее следовали аллергические дерматиты и дерматозы - у 20 (29%), себорейный дерматит -у 7 (10%) и грибковые поражения - у 7 (10%) детей.

Клиническими формами аллергии, определенными у 38 из 92 инфицированных ВИЧ детей, были : лекарственная сыпь 27 (71,1%), атопический дерматит 20 (52,6%), пищевая аллергия 18 (47,4%), крапивница 17 (44,7%), риниты 6 (15,8%), ангионевротический отек

3 (7,9%). Эти формы встречались как самостоятельно, так и комбинировались. Отягощенный по аллергии семейный и ' личный анамнез имел 21 (22,8%) ребенок, инфицированный ВИЧ.

Лейкопения (4.0х10а/л) и менее ) наблюдалась у 18 из 43 больных с клиническими стадиями инфекции ШБ и III+IVB и лишь у

4 из 49 детей с ВИЧ-инфекцией IIB и IIIA. Тромбоцитопения (с количеством клеток 100000 мм и менее) наблюдалась у 24 из 84 обследованных (28.6%). Тромбоцитопения ниже 50000 /мм наблюдалась только у 5 из 25 детей с HIB и у 6 из 16 - III+IVB стадиями ВИЧ инфекции.. Снижение числа тромбоцитов клинически сопровождалось геморрагическим синдром в виде геморрагической сыпи, массивных кровоизлияний в местах травматизации, носовых кровотечений.

Количество CDd* лимфоцитов оказалось существенно (< 600 в мм") сниженным у 42 из 89 обследованных детей с ВИЧ-инфекцией, в т.ч. резко сниженным (< 400 в мм3) у 16 (18.0%). При этом имелась четкая корреляция с тяжестью и стадией. развития болезни. Так, резкое уменьшение абсолютного количества CD4* лимфоцитов не было отмечено у больных на стадии IIB, но при ВИЧ III А наблюдалось уже у 3 из 38, на стадии III Б - у 2 из 26 и на стадии СПИДа - у 8 из 16 детей, причем в' этой последней группе наблюдались очень низкие показатели CD4* лимфоцитов - от 84 до 200 кле-

ток 1 мм3. В то же время, как и у взрослых, наблюдалось увеличение числа CD8* лимфоцитов (в стадиях ПВ-ШБ), а затем снижение данного показателя в стадиях IIIB-IV, что приводило к изменению индекса CD4/CD8. Снижение коэффициента CD4/CD8 (1.25 и меньше) наблюдалась у всех без исключения детей с ВИЧ-инфекцией, в том числе безусловно достоверное (1.0 и ниже) - у 76 из 89 обследованных (85.4%), а резкое - 0.75 и меньше - у 46 (52%). Так, даже на такой ранней Стадии процесса, как персистирувщая генерализованная лимфоаденопатия (IIB), очень низкие показатели коэффициента отмечены у 5 из 8 детей. Кроме количественных изменений иммунокомпетентных клеток при ВИЧ-инфекции у детей проявлялись нарушения функциональной активности Т-лимфоцитов в тестах РТМЛ с митогенами - Кон А и ФГА. Была выявлена тенденция повышения числа В-Ig+лимфоцитов от минимума в стадии IIB (11,6+0,87 %) до максимума в стадии IIIB+IV (15,3+0,79 %, р<0,01). Уровни B-IgMf и B-IgG+ коррелировали друг с другом, при этом их максимальные значения были установлены у детей на IIIA и ШБ стадиях инфекции ВИЧ.

Существенные изменения были выявлены при определении уровня общего Ig Е, достоверно повышенного, по сравнению с показателем у контрольной группы (38,2 + 5,52 кЕ/1) и составившего на стадиях ВИЧ-инфекции IIB 121+27,1, IIIA 203+23,1, ШБ 164+22,5, IIIB-IV 223+32,4 кЕ/1. Анализ уровня Р-белков в сыворотке крови выявил наличие медленного повышения уровня катаболизма клеточных рецепторов по мере прогрессирования заболевания.

Уровень специфического Ig Е оказался наиболее высоким по отношению к бытовым (домашняя и библиотечная пыль), аллергенам дерматофагоидного клеща Pteronlssinus и ряду пыльцевых аллергенов (ежа сборная, амброзия, лещина, тимофеевка и др.).

Изучение взаимосвязи между аллергическими проявлениями, клинической стадией ВИЧ-инфекции и содержанием субпопуляций лимфоцитов показало, что на стадии ВИЧ-инфекции III А возникает прямая корреляция между уровнем общего.IgE и содержанием в периферической крови CD3* лимфоцитов, натуральных киллеров. При переходе инфекции в следующую стадию III Б статистический анализ _ выявил появление обратной корреляционной связи между уровнем общего Ig Е и содержанием в периферической крови CD3*, CD19* субпопуляций лимфоцитов. Эти изменения происходят при сохранении прочных положительных связей между уровнем общего Ig Е и содер-яанием CD8+ субпопуляции лимфоцитов, а также индексом CD4/CD8.

ВИЧ-инфекция, таким образом, может.стать фактором реализующим аллергию, особенно через модуляцию высокого уровня Е и формирование гиперчувствительности замедленного типа, что подт- . верждается данными статистического анализа и выявлением клинически выраженных форм аллергии у детей.

Характеризуя изменения неспецифической защиты при ВИЧ-инфекции у детей можно отметить повышение уровней альфа-2-макрог-лобулина и бета-2-микроглобулина в. сыворотке крови, тенденцию медленного повышения значений базального НСТ-теста, в том числе в стадиях инфекции ПБ ( 0,16+0,01 ед. экс.). ША (0,19+0,02 ед.экс.) ШБ и 111В+1У (0,20+0,01 ед.экс.), на фоне снижения лизосомально-катионных белков и С-3 компонента комплемента.

При сравнительном анализе изменений активности ферментов в лимфоцитах периферической крови у взрослых и детей, инфицированных ВИЧ. была отмечена разнонаправленность происходящих процессов. Так, если у взрослых характерным являлось повышение активности ключевого фермента цикла трикарбоновых кислот - СДГ во все стадии ВИЧ-инфекции, наиболее выраженное при сравнении с нормой в стадиях ПА-Б и ШВ+1У, то у детей отмечались примерно равные, значения в стадиях ПВ-ША-ШБ ( 0.15+0,01 - 0,14+0,01 -0,15+0,02 ед. опт. плот.) и снижение значений СДГ в стадии ШВ-1У заболевания (0,13+0,01 ед. опт. плот.). Общей для детей и взрослых оставалась тенденция снижения ДЦГ, с наименьшими показателями активности фермента в стадиях ШВ+1У (0,23+0,01 ед. опт. плот.).

Совершенствование методов серологической диагностики ВИЧ-инфекции.

В настоящее время как скрининговые, так и референтные исследования на ВИЧ инфекцию проводятся методами, основанными на определении свободных антител к ВИЧ в биологических зхидкостях. Однако при наличии низкого уровня антител,-. что характерно для ранних этапов ВИЧ-инфекции, чувствительность иммуноферментного метода определения антител моясет оказаться недостаточной. Связывание существенной доли (или даяе большинства) антител к ВИЧ, нахождение их в составе циркулирующих иммунных комплексов (ЦИК), может затруднить диагностику или даке привести к лакноотрица-тельному результату исследований.

Для анализа температурной устойчивости ЦИК и возможностей выделения из них антител к ВИЧ было проведено экспериментальное исследование. Спектрофотометрически определялся исходный уровень ЦИК в нативной сыворотке крови, взятой при +37°С. а затем'в диа-

/

пазоне температур +38-40°С. Время инкубации составило от 30 минут до 2 часов. Как показывает анализ проведенных исследований, уровень ЦИК под действием температуры снижался. Это может свидетельствовать о наличии довольно низкой температурной устойчивости иммунных комплексов. Разрушение ЦИК в условиях, которые могут создаваться в организме при гипертермии, т.е. в диапазоне 38-40°С, вероятно негативно сказывается на деятельности иммунной системы в связи с возрастанием в крови уровней алтител и антигенов.

Высвобождающиеся из ЦИК под действием гипертермии антитела к ВИЧ могут перекрестно реагировать с рецепторами клеток, вызывая нарушение кооперативных взаимодействий в иммунной системе: блокаду кооперации С04* лимфоцитов и антигенраспознающих клеток, несущих НЬА II. Поскольку антитела к гликопротеиду ВИЧ щз120 являются в то-же время антителами к С04, они могут вызывать дополнительную стимуляцию СЭ4+ клеток. Кроме того, ■ антитела против гликопротеидов ВИЧ бр!20 и ер41 опосредуют антителозависимую клеточную цитотоксичность.

Для выделения антител из состава ЦИК нами была разработана и применена ультразвуковая методика дезинтеграции ЦИК (удостоверение на рационализаторское предложение ВМедА N 3543/5 . от 20.05.90) с последующим определением свободных антител к ВИЧ класса да. В результате ультразвуковой дезинтеграции иммунных комплексов титр свободных . антител к ВИЧ существенно возростал. что позволяло проводить диагностику методами иммуноферментного анализа (ИФА).и иммунного блотинга (ИБ). Наиболее высокие цифры диагностических титров антител к ВИЧ и уровня ЦИК соответствовали II стадии заболевания, а повышение уровня ЦИК, в определенной мере связано с образованием иммунных комплексов, содержащих специфические антитела к ВИЧ.

Существенным недостатком иммуноферментного анализа (ИФА) является наличие частых ложноположительных результатов. Общей особенностью таких ложнопозитивных реакций в ИФА является их низкая воспроизводимость при повторных исследованиях. Поскольку эта лоанопозитивность связана с ^ С-фракцией антител к ВИЧ она монет быть устранена диагностикой антител к ВИЧ других классов.

Для выявления антител к ВИЧ 1д М-фракции наш была использована методика селективной иммуносорбции из исследуемого биоматериала всех антител класса М с последующим определением специфических ^ М-антител к ВИЧ. В качестве ишуносорбента были ис-

пользованы пластиковые шарики с сорбированными на них мышиными моноклональными антителами к иммуноглобулинам М человека. После проведения этапа селективной иммуносорбции производилось разрушение образовавшегося иммунного комплекса, антитела к ВИЧ переходили в раствор, где их выявляли методом ИФА. При обследовании 79 инфицированных ВИЧ лиц, у 74 (93,67%) выявлялись ^ М антитела к ВИЧ. В то же время у лиц, имевших положительные результаты ИфА и отрицательные результаты иммунного блотинга, таких антител выявлено не было, что позволяет рекомендовать методику выявления М антител к ВИЧ при арбитражных исследованиях, позволяя существенно сократить число лиц, направляемых на повторный, иммуно-ферментный анализ и, главное, иммунный блотинг.

Проблема ВИЧ-инфекции в современной медицине занимает особое место не только потому что ее распространение приобрело глобальный характер, но и в связи со сложностью стоящих перед врачами диагностических и лечебных задач. (Покровский В. И. с со-авт., 1992). Полученные в исследовании дачные, позволяют по-новому раскрыть взаимосвязь клинических проявлений с иммунологическими, аллергологическими, иммуногенетическими закономерностями инфекции, способствовать диагностике и терапии заболевания.

ВЫВОДЫ-

1. Клиническим стадиям ВИЧ-инфекции соответствуют в различной степени выраженные морфологические и функциональные нарушения субпопуляционного состава иммунокомпетентных клеток и системы неспецифической защиты.

2. Формирование патологической реакции иммунокомпетентных клеток на антигены вируса иммунодефицита человека статистически подтверждается возникновением достоверных корреляционных связей между основными показателями иммунной системы и числом лимфоцитов. экспрессирующих антигены ВИЧ р24 и gpl20.

3. Аллергические закономерности развития ВИЧ-инфекции характеризуются реакциями гиперчувствительности немедленного и замедленного типов, что проявляется возрастанием уровня общего и атлергенспецифического ^ Е, развитием гиперчувствительности замедленного типа к антигенам ВИЧ, полисенсибилизацией к широкому кругу аллергенов, частым возникновением клинически выраженных форм аллергии у инфицированных ВИЧ лиц.

4. Нарушения ядерных структур иммунокомпетентных клеток являются составной частью патогенетических изменений у ВИЧ-инфицированных лиц и проявляются ростом числа атипичных лимфоцитов, нарушением плотности суперспиральной ДНК и увеличением в клетках иммунной системы продуктов деградации нуклеотидов.

5. Реакция полиморфно-ядерных лейкоцитов на антигены ВИЧ является специфической чертой ВИЧ-инфекции и лабораторным дифференциально-диагностическим критерием между II и III клиническими стадиями заболевания.

6. Для иммунопатогенеза ВИЧ-инфекции характерно изменение метаболизма иммунокомпетентных клеток, проявляющееся в активации ключевого фермента цикла Кребса - сукцинатдегидрогеназы и снижение активности основного фермента гликолиза - лактатдегидрогена-зы,

7. Механизм интенсификации перекисного окисления липидов при ВИЧ-инфекции проявляется активацией проокейдантных ферментных систем лимфоцитов - НАД- и НАДФ-оксидаз, ксантиноксидазы, что при снижении уровня антиоксидантной защиты - СОД и Р-белков способствует морфологическим и функциональным нарушениям ядерных структур лимфоцитов, развитию синдрома-приобретенного иммунодефицита.

8. Клиника-иммунологическими особенностями ВИЧ-инфекции у детей являются лейко- и тромбоцитопения, анемия, высокий уровень общего и аллергенспецифического Ы Б, более частое, по сравнению со взрослыми, развитие аллергии в виде лекарственной сыпи, ато-пического дерматита, пищевой аллергии и более редкое - в виде ринита и'ангионевротического отека.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИЙ

Циркулирующие иммунные комплексы, содержащие антитела к ВИЧ. . могут быть дезинтегрированы (с помощью температуры, ультразвукового воздействия), что позволяет, особенно при низком уровне свободных антител к ВИЧ в биологических жидкостях, использовать выделенные из ЦИК специфические антитела для последующей диагностики. .

Для выявления антител к ВИЧ 1£ М-фракции может использоваться методика селективной иммуносорбции из исследуемого биоматериала всех антител класса ^ М, с последующим определением М-антител к ВИЧ, что позволяет уменьшить число ложноположитель-

ных результатов, связанных с антителами класса Ig G , при рефе-ренс-диагностике ВИЧ-инфекции. . •

При проведении диагностики и иммунологического мониторинга за ВИЧ-инфицированными лицами целесообразно использовать комплекс показателей клеточного и гуморального иммунитета. II стадия ВИЧ-инфекции характеризуется уменьшением CD3*. CD2-DR* и возрастанием числа CD8*,НК, В IgA*, HLA-DR* субпопуляций лимфоцитов, а также р24* и ер120* клеток. Ig Е и ЦИК, активацией клеточного цикла деления, уровней перекисного окисления липидов и метаболизма лимфоцитов, снижением функциональных характеристик лимфоцитов в тестах с митогенами. Для III стадии ВИЧ-инфекции характерно сохранение повышенного уровня С08*,НК, В IgA*", HLA-DR+ , дальнейший рост р24+ и gpl20* B-IgG+ субпопуляций лимфоцитов, уровней Ig G, Ig Е, бета-2-микроглобулина и циркулирующих иммунных комплексов, происходящее при снижении CD4+ лимфоцитов, С-3 компонента комплемента, J1KT и НСТ-теста, уровня СОД и Р-белков.

Для дифференциальной диагностики клинических стадий ВИЧ-инфекции могут быть использованы аллергологические методы выявления реакций гиперчувствительности замедленного типа: торможения миграции лейкоцитов (РТШ1) и повреждения нейтрофильных лейкоцитов (ППН), под действием gag, pol, env антигенов ВИЧ.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Эпидемиологические и иммунологические аспекты изучения атопических аллергических заболеваний у военнослужащих. // Тез. докл. 1 Всесоюзн. иммунологического съезда.-'М.. 1989.- Том2. -С. 378. (Соавт. Яковлев Г.М., Яковлев В. А., Лобкова 0. С.).

2. Актуальные проблемы аллергологии в Советской Армии // Воен.мед.журн.-1989.-N 12.-С.28-31. (Соавт. Яковлев Г.М.. Яковлев В. А.. Лобкова 0. С.).

3. Цито-спектрофотометрический метод определения активности глюкозо-6-фосфат дегидрогеназы (Г6ФДГ)в лимфоцитах // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: Сб.изобр.и рац. предложений /Воен. -мед. акад. -Л.: ВМедА, 1990. -Вып. 21.- С. 65. (Соавт. Пастушенков В. Л.. Сапроненков П.М.).

4. Цито-фотометрический способ постановки НСТ-теста // Там же, С. 68-69. (Соавт. Пастушенков В.Л.. ¡Келезкова Е.В.).

5. Использование иммуноферментного набора анти-ВИЧ "ДИАп-

I

- 37 -

люс" в качестве референтной тест-системы для выявления антител к вирусу иммунодефицита человека // Применение ИФА-диагностики в практическом здравоохранении: Тез. докл. Всесоюзн. конф. -М., 1990.-С.31. (Соавт. Пастушенков В.Л.).

6. Иммунометаболические характеристика инфицированных ВИЧ // Профилактика и борьба со СПИДом в СССР: Тез.докл. 1 Всесоюзн. науч. -практ. конф.-Л., 1990.-С. 56. (Соавт. Бельгесов Н. В., Пастушенков В.Л., Кузьмич А.Н.).

7. Иммунометаболический мониторинг у серопозитивных и инфицированных ВИЧ лиц // Иммунология.-1990. -N6. -С. 19-21. ( Соавт. Бельгесов Н. В., Пастушенков В. Л. ).

8. Антителозависимый цитотоксический метод определения количества естественных киллеров в периферической кроои // Лаб. дело. - N7.-1991.-С.48-49. (Соавт.Пастушенков В. Л. .Кузьмич А.Н. ).

9. Опыт создания иммуногенетического паспорта донора в организованном коллективе // Тез.докл. 3 Всесоюзн. съезда гематологов и трансфузиологов. -М., 1991.-Том 1.-С.38. (Соавт. Пастушенков В.Л., Сапроненков П.Î.Î. ).

10. Некоторые лабораторные тесты в диагностике ВИЧ-инфекции // Тез. докл. Всесоюзн. съезда врачей-лаборантов.- И. -Франковой, 1991.-С. 26. (Соавт. Бельгесов Н. В., Пастушенков В. Л. ).

11. Диспансерные мероприятия при ВИЧ-инфекции // Профилактическая медицина. Состояние и перспективы. /Тез.докл. Всесоюзн. науч. конф. -Л., 1991. -С. 133. (Соавт. Бельгесов Н. В.. КузьмичА. Н., Пастушенков В.Л., Дмитриев В.И., Шейбак В.В., Лебедева Н.Г. ).

12. Иммунометаболические критерии дифференциальной диагностики ложносеропозитивных и инфицированных ВИЧ людей // Гемат. и трансфузиология. - N7.-1991. - С. 19-21. (Соавт. Бельгесов Н. В., Пастушенков В.Л., Кузьмич А.Н., Дмитриев В.И.).

13. Лабораторные методы исследований в экспертной диагностике ВИЧ-инфекции : Методическое пособие.-М., ГВМУ МО РФ, 1992.35 с. (Соавт. Кожемякин Л. А.. Бельгесов Н. В., Морозов В. Г., Дмитриев В. И., Згода Н. В., Кузьмич А. Н., Усенко Р. С.. Шейбак В. В. ).

14. Военно-медицинские аспекты инфекции ВИЧ// Воен.мед. вурн. -1992.- N 2.- С. 62-65. (Соавт. Яковлев Г.М., Яковлев В. А., . Лобкова 0. С. ).

15. Лабораторная диагностика основных оппортунистических инфекций и инвазий при СПИДе: Методическое пособие. -СПб: ГВМУ МО РФ, 1992. - 107с. ( Соавт. Бельгесов Н. В., Морозов В. Г.. Родионов А.Н., Никитин А.Ф., Касьянов А.Д., Федотов В.А., Дмитриев

В. И., Згода Н. В.. Кузьмич А. Н.. Усенко Р. С.. Майков А. Н., Шейбак

B. В., Иустров А. К. ).

16. Цитофотометрический метод оценки ферментов дегидроге-назной группы в лимфоцитах // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: Сб. изобр.и рац. предложений /Воен.-мед. акад.-Л.: ВМедА, 1992.-Вып. 23.- С. 40. (Соавт. Пас-тушенков В. Л.).

17. Сравнительная оценка специфичности методов диагностики ВИЧ // Тез. докл. 1 съезда иммунологов России : Новосибирск. 1992.-С. 42. (Соавт. Бельгесов Н. В., Кузьмич А.Н.).

18. Выявление провирусной ДНК ВИЧ-I в геноме"лимфоцитов периферической крови человека методом полимеразной цепной реакции // Там же, С. 42-43. (Соавт. Морозов В. Г., Бельгесов Н. В., Кузьмич А. Н.).

19. Иммунометаболические критерии инфекции ВИЧ // Там же

C.303-304. (Соавт. Дмитриев В.И., Шейбак В. В., Кузьмич А.Н.).

20. Лабораторная диагностика основных оппортунистических инфекций и инвазий при СПИДе. Руководство для военных врачей. -СПб. : Б.и.- 1992.- 107 с. ( Соавт. Колков В.Ф., Морозов В. Г., Бельгесов Н. В., Родионов А.Н., Никитин А.Ф., Федотов В. А., Усенко Р.С., Пересыпкин 0.И., Шустров А.К., Кузьмич А.Н., Шейбак В. В.. Дмитриев В. И, Згода Н. В., Малков А. Н., Касьянов А. Д.).

21. Диспансерное наблюдение при ВИЧ-инфекций. ■ Руководство для военных врачей.-СПб.: Б. и. - 1992.- 89 с. ( Соавт. Савин Ю. Н., Морозов В. Г., Бельгесов Н.В., Иванов К. С., Родионов А. Н., ЛобзинЮ. В., Усенко Р. С., Гофман В. Р., Даниличев В. Ф.. Михайлен-ко А. А.. Кузьмич А. Н., Дмитриев В. И, Згода Н. В., Малков А. Н., Королькова Т.Н., Платонова Т. Н., Булатов К. Б., Михапьцов А.Н., Касьянов А.Д., Шпиленя Л.С., Каликанов С.А..Смирнов В.К.).

22. Immunological monitoring in HIV infection // AIDS. Cancer and Human Retroviruses : Progr.' and abstr. International conf. -St-Petersburg, 1992.-S.42. (Belgesov N. V.. Kuzmitch A.fJ.).

23. Иммунологический мониторинг в лечебных учреждениях // Актуальные вопросы совершенствования- медицинского обеспечения войск округа: Тез. докл. XX окружной научн.-практ. конф. врачей ЛенВО.-СПб, 1993.-С. 55-56. (Соавт. Бельгесов Н. В.. Кузьмич А.Н..).

24. Использование рекомбинанткых антигенов для выявления гиперчувствительнсти замедленного типа у инфицированных ВИЧ // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном

процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике: Сб. изобр. и рац. предложений / Воен. -мед. акад. -СПб.: ВМедА, 1993.-Вып. 24.- С. 49-50.

25. Способ выделения антител к ВИЧ из состава циркулирующих иммунных комплексов // Там же, С. 50 (Соавт. Бельгесов Н. В.).

26. Способ, повышения чувствительности иммуноферментных тест-систем диагностики ВИЧ-инфекции // Там же, О. 52.(Соавт. Морозов В. Г., Бельгесов Н. В.).

27. ВИЧ-инфекция (этиология, патогенез, эпидемиология, клиника, диагностика, лечение и профилактика ): Руководство для брачей под общей редакцией Э.А.Нечаева.-СПб.: Б.и.- 1994.- 349 с. (Соавт. Бельгесов Н. В., Булатов К. Б., Галкина М. В., Головкин В. И., Жданов К. В., Золочевский М. А., Иванов К. С., Касьянов А. Д., Королькова Т.Н.., Коземякин Л.А., Кузьмич А.Я., Лещинская Н.П., Лобзин И. В., Маслов В. П., Мебель Б. Д., Медведев М. Л.. Матвеев В.П., Морозов В.Г., Никитин А.Ф., Пересыпкин 0.И., Петленко В. П., Платонова Т.Н., Райзе Ф. Е., Ремезов А. П., Родионов А.Н., Смольская Т.Т. .Фомин Ю. А. .Усенко Р.С. .Шилова Э.А. .Шустров А.К.).

28. ВИЧ-инфекция: Указания по клинике, диагностике и профилактике в Вооруженных Силах России.-М. •: ГВМУ МО РФ.-1993.-52с. (Соавт. Бельгесов Н. В., Иванов К. С., Корольков В. Ф., Колков В. Ф., Кузьмич А. Н., Морозов В. Г., Усенко P.C.).

29. Цитохимический метод оценки активности дегидрогеназ в лимфоцитах // Клин. лаб. диагностика.-1993. -N2. -С.42-43. (Соавт. Пастуиенков В. Л.).

30. Гиперчувствительность замедленного типа при ВИЧ-инфекции // Актуальные проблемы инфекционной патологии: Тез. докл. на-учн.конф. -СПб. -1993. -С. 161 (Соавт.Морозов В.Г.. Бельгесов Н.В.).

31. Способ определения гиперчувствительности замедленного типа у инфицированных ВИЧ при помощи рекомбинантного антигена gp41 Н Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клиниче-сен.-мед.акад.-СПб.:ВМедА. 1994.-Вып. 25,- С.59. (Соавт. Лебедева Н. Г., Михайлова 0. И.).

32. Способ определения антилимфоцитарных антител в реакции_ лимфоцитолиза у инфицированных лиц // Tai/ же, С. 59 (Соавт. Петленко С. В., Лебедева Н. Г.).

33. Функциональное состояние иммунной системы и перекисное окисление липидов в лимфоцитах при ВИЧ-инфекции // Иммунология.-1993. - N 4.-C.10-U. ( Соавт. Пастушенкоз В. Л., Каликанов С.А.).

34. The Prognostic Value of Cellular and Serologic Markers In infection with HIV 1 // AIDS. Cancer and Human Retroviruses: Progr. and Abstr.-St. Petersburg.-1993.-P. 17 (Bulatov K.B.).

35. Lipid peroxidation role in formation of immunodeficiency in HIV-1 Infection // Tenth intern. Conference on AIDS : Abstr. Book.-Yokohama. - 1994. - P. 63. (Pastushenkov V. L.).

36. Сложности при диагностике ВИЧ-инфекции и применение в связи с этим генетических методов // 1 нац.научн.- практ. конф. по проблеме ВИЧ/СПИД с между нар.' участ.: Тез. докл. -Киев. -1995.-С. 24-25. (Соавт. Михайлов Н. В., Змушко Е.И.. Кузьмич А. Н.).

37. Роль перекисного окисления липидов в формировании иммунодефицита при ВИЧ-инфекции // Там же. С.89. (Соавт. Пастушенков В. Л.).

38. Активность ферментов в лимфоцитах при ВИЧ-инфекции// Республ. научн.конф. по проблеме СПИД:- Тез.докл.- Петрозаводск, -1995. -С. 28. (Соавт. Змушко Е. И., Кузьмич А. Н.. Касьянов А. Д.).

39. Состояние неспецифической резистентности при ВИЧ-инфекции // Там же, С.28-29. (Соавт. Змушко Е.И..Кузьмич А.Н., Касьянов А. Д.).

40. Клиника и диагностика аллергии при ВИЧ-инфекции // Там же, С. 34-35.

41. Иммунологический мониторинг в диагностике и изучении патогенеза ВИЧ-инфекции // СПИД, рак и родственные проблемы : Тез. 3 межд. конф. -СПб.- 1995.- С.87. ( Соавт. Бельгесов Н.В.. Кузьмич А.Н.). ,

42. Клинико-иммунологическая характеристика аллергических заболеваний при ВИЧ-инфекции // Инфектология. Достижения и перспективы: Тез. юбил. научн. конф. - 1996.- СПб.-С. 154-155 ( Соавт. Змушко Е. И.).