Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Иммунофлуорецентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.01.12
Оглавление диссертации Соколова, Зинаида Александровна :: 2010 :: Москва
Список сокращений.
Введение.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Опухолевые маркеры и их роль в диагностике рака.
1.1.1. Индивидуальные опухолевые маркеры.
1.1.1.1. Простат-специфический антиген.
1.1.1.2. Альфа-фетопротеин.
1.1.1.3. Раково-эмбриональный антиген.
1.1.1.4. Нейрон-специфическая енолаза.
1.1.1.5. Хорионический гонадотропин.
1.1.2. Комбинации опухолевых маркеров.
1.2. Биологические микрочипы - новая технология в диагностике злокачественных новообразований.
1.2.1. Белковые микрочипы.
1.2.2. Белковые микрочипы для анализа опухолевых маркеров.
Введение диссертации по теме "Онкология", Соколова, Зинаида Александровна, автореферат
По данным ВОЗ диагноз «рак» ежегодно ставят более чем 11 млн. человек. Прогнозируется, что к 2020 году число раковых больных возрастет до 16 млн. в год. Смертность от рака в мире непрерывно увеличивается и приближается к 10 млн. человек в год, что составляет 15% всех смертных случаев. Фундаментальные исследования в области онкологии направлены на раскрытие молекулярных механизмов злокачественного роста и поиск генов и антигенов, позволяющих обнаружить появление опухоли на ранних стадиях [1, 2]. Уровень опухолевых маркеров в сыворотке крови является важным информативным показателем наличия опухолевого процесса. В клинической онкологии онкомаркеры широко применяются для оценки эффективности терапии раковых больных. Их роль значима в ранней диагностике злокачественных новообразований при массовых обследованиях населения [3]. Достижения в области протеомики открыли новые перспективы для создания и внедрения современных технологий в клиническую онкологию [4, 5]. С применением таких технологий как биочипы создаются высокоинформативные диагностические системы, которые уже нашли применение в медицине в развитых странах мира [6, 7, 8]. Представленные исследования являются частью проводимых в нашей стране работ по разработке и внедрению в онкологию отечественных технологий биочипов для создания современных диагностикумов [9, 10].
В настоящие время для ранней диагностики и мониторинга проводимой терапии злокачественных новообразований широко используется неинвазивные методы количественного определения онкомаркеров в сыворотке крови [11]. В РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН ранее был разработан набор для количественного определения общего простатического специфического антигена (ПСАобщ) в сыворотке крови человека методом одностадийного твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) [12].
Отсутствие у известных опухолевых маркеров высокой специфичности и чувствительности, заметно ограничивает возможности их использования в клинической диагностике при разных нозологических формах рака (исключением можно считать ПСА). Решение проблемы поиска «идеального» маркера может быть частично компенсировано одновременным определением нескольких опухолевых маркеров, что существенно повышает эффективность диагностики у пациентов с ранними стадиями опухолевого процесса [13]. Одновременное определение нескольких онкомаркеров в сыворотке крови с помощью иммуноферментных диагностических систем, широко используемых в клинике, трудоемко и дорого. Поэтому в настоящее время большие надежды связывают с мультиплексными системами, такими, как белковые микрочипы с иммобилизованными моноклональными антителами, позволяющие одновременно измерять уровень нескольких опухолевых маркеров в одном образце сыворотки крови и значительно расширить линейный диапазон определяемых концентраций [6, 14, 15, 16]. Белковые микрочипы являются экономичной, эффективной альтернативой традиционным ИФА-системам и их внедрение в широкую клиническую практику важная задача современной медицины.
В данной работе впервые на большом клиническом материале проведены испытания отечественных диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип», разработанных в ИМБ им. В.А.Энгельгардта РАН на основе технологии «трехмерных» гидрогелевых микрочипов, позволяющих проводить одновременный количественный иммуноанализ сразу нескольких опухолевых маркеров [10]. В результате совместных исследований на этапе разработки систем и проведения их лабораторных испытаний дана оценка возможности применения первых отечественных тест-систем в формате биочипа в диагностике злокачественных новообразований.
Цель и задачи исследования
Целью исследования является испытания новых отечественных мультиплексных диагностических систем на основе белковых микрочипов и оценка возможности их применения в клинической практике. Тест-системы предназначены для количественного определения в сыворотке крови человека набора опухолевых маркеров значимых в диагностике онкологических заболеваний:
- диагностическая система для одновременного определения общей и свободной формы ПСА - «ОМ-Биочип (ПСА)» (ИМБ РАН).
- диагностическая система для одновременного определения шести опухолевых маркеров: общей и свободной форм ПСА, раковоэмбрионального антигена (РЭА), альфа-фетопротеина (АФП), хорионического гонадотропина человека (ХГЧ), нейронспецифической енолазы (НСЕ) - «ОМ-Биочип» (ИМБ РАН).
В связи с этим были поставлены следующие задачи:
1. Сформировать банк образцов сыворотки крови больных со злокачественными и доброкачественными опухолевыми заболеваниями, неопухолевыми заболеваниями, а также здоровых доноров, необходимый для испытаний.
2. Изучить аналитические характеристики испытываемых тест-систем в варианте одностадийного иммунофлуоресцентного «сэндвич»-анализа, как наиболее простого и технологически приемлемого для клинического использования.
3. Оценить и сравнить диагностическую эффективность тест-систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» с традиционными ИФА-системами «Fujirebio Diagnostics» (Швеция), применив современные статистические методы ROC-анализа и логистической регрессии.
Научная новизна и практическая значимость
Впервые на большом клиническом материале проведены испытания диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» (Центр биологических микрочипов ИМБ им. В.А.Эигельгардта РАН) в сравнении с наборами ИФА «Fujirebio Diagnostics». С применением методов ROC-анализа и логистической регрессии получены положительные оценки диагностической эффективности испытанных тест-систем. Показана применимость первых отечественных диагностических систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» в формате биочипа для одновременного количественного определения нескольких опухолевых маркеров в одном образце сыворотки крови человека методом иммунофлуоресцентного анализа в диагностике злокачественных новообразований, начиная с ранних стадий опухолевого процесса. На образцах сыворотки крови больных со злокачественными и доброкачественными опухолевыми заболеваниями, неопухолевыми заболеваниями, а также здоровых доноров получены и оценены основные аналитические и диагностические характеристики тест-систем: аналитическая чувствительность, воспроизводимость, тесты на «открытие» и линейность. Показано, что аналитические и диагностические характеристики системы в формате биочипа сопоставимы с характеристиками традиционных ИФА-систем фирмы «Fujirebio Diagnostics». Продемонстрированы преимущества тест-систем в формате биочипа перед традиционными системами ИФА, каждая из которых предназначена для определения одного онкомаркера: 1) одновременное определение спектра информативных онкомаркеров; 2) расширение линейного диапазона определяемых концентраций онкомаркеров; 3) проведение анализа с микроколичествами образца и реагентов; 4) автоматизированный режим компьютерной регистрации и обработки результатов. Информативность и экономичность биочипов открывает для медицины возможность массовых скрининговых обследований населения с целью ранней диагностики онкологических заболеваний.
Заключение диссертационного исследования на тему "Иммунофлуорецентный анализ общей и свободной форм простат-специфического антигена и других опухолевых маркеров в формате биочипа"
120 ВЫВОДЫ
1. Тест-система в формате микрочипа «ОМ-Биочип (ПСА)» на две формы ПСА (общую и свободную) имеет аналитические характеристики, сопоставимые с характеристиками традиционных ИФА систем «Fujirebio Diagnostics»: аналитическая чувствительность 0.2 нг/мл, воспроизводимость KB <10%, процент «открытия» 102% и 107%. Полученные в тесте на линейность величины находятся в пределах ±10% от ожидаемых величин.
2. На большом клиническом материале (239 сывороток крови) показана высокая степень корреляции уровней ПСАобщ и ПСАсв, измеренных в системе «ОМ-Биочип (ПСА)» и в традиционной ИФА системе «Fujirebio Diagnostics».
3. Показано, что система «ОМ-Биочип (ПСА)» для одновременного определения двух форм ПСА и их соотношения имеет диагностическую эффективность, позволяющую достаточно надежно дифференцировать исследуемую группу больных РПЖ от группы здоровых доноров, больных ДГПЖ и иными злокачественными урогенитальными заболеваниями. Диагностическая эффективность новой системы не уступает эффективности традиционных ИФА систем Fujirebio Diagnostics и может быть использована для своевременной диагностики РПЖ в группе высокого риска (мужчины старше 45 лет).
4. Результаты одновременного определения уровней шести опухолевых маркеров в системе «ОМ-Биочип» хорошо коррелируют с результатами, полученными при их индивидуальном определении в традиционных ИФА-системах Fujirebio Diagnostics и DRG Diagnostics (АФП r=0.97 (pO.OOl), РЭА r=0.95 (p<0.001), ПСАобщ и ПСАсв r=0.94 и г=0.91, соответственно (pO.OOl), ХГЧ r-0.91 (pO.OOl), НСЕ r=0.71 (pcO.OOl)).
5. Применение систем в формате биочипа позволяет одновременно измерять уровень нескольких ОМ, использовать минимальные количества образца и реагентов, расширить линейный диапазон определяемых концентраций ОМ. Информативность испытанных мультиплексных систем в формате микрочипа не уступает монодиагностическим наборам ИФА и в перспективе позволит улучшить диагностику злокачественных новообразований.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Нами исследованы аналитические характеристики и диагностическая эффективность первых отечественных высокотехнологичных диагностических тест-систем на основе микрочипа, проведена их сравнительная оценка и продемонстрировны возможности их практического применения. Полученные в наших исследованиях результаты показывают преимущества тест-систем «ОМ-Биочип (ПСА)» и «ОМ-Биочип» перед традиционными ИФА-диагностикумами; новые системы могут быть рекомендованы для широкого использования в диагностике онкологических заболеваний.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Соколова, Зинаида Александровна
1. Заридзе, Д.Г. В кн.: Канцерогенез (под ред. Заридзе Д.Г.) / Д.Г. Заридзе -М.: Медицина, 2004. 22 с.
2. Weinberg, R.The Biology of Cancer / R.Weinberg Garland Science, Toylor & Group, LLC, 2006.- 10 p.
3. Tumor markers: Physiology, Pathobiology, Technology and Clinical Applications / E.P. Diamandis, H.A. Fritsche, D.W. Chan et al. USA. AACC Press Inc, 2002. - Chapter 1, 2.
4. Latterich, M. Proteomics: new technologies and clinical applications / M. Latterich, M. Abramovitz, B. Leyland -Jones // Eur. J. Cancer 2008. - 44(18) -P. 2737-2741.
5. Seibert, V. Advances in clinical cancer proteomics: SELDI-ToF-mass spectrometry and biomarker discovery / V. Seibert, M. Ebert et al. // Briefing in functional genomics and proteomics 2005 - 4(1) - P. 16-26.
6. Cho, W. Contribution of oncoprotemics to cancer biomarker discovery /W. Cho// Molecular Cancer 2007. - 6 - P. 25-38.
7. Maurya, P. Proteomic approaches for serum biomarker discovery in cancer / P. Maurya, P. Meleady, P. Dowling, M. Clynes // Anticancer Res. 2007. -27(3A) - P. 1247-1255.
8. Xiao, G. Recent Advances in Proteomics and Cancer Biomarker Discovery / G. Xiao, R. Recker, H. Deng // Clinical Medicine Oncology. 2008. - 2 - P. 6372.
9. Осипова, T.B. Диагностические микрочипы: применение в онкологии / Т.В.Осипова, Т.П. Рябых, А.Ю. Барышников // Российский биотерапевтический журнал. 2006. - 5(3) - С. 72-81.
10. Maruvada, P. Biomarkers in molecular medicine: cancer detection and diagnosis / P. Maruvada, W. Wang, P.D. Wagner, S. Srivastava // Biotechniques. Suppl 2005. - P. 9-15.
11. Wingren, С. Microchip Methods in Diagnostics / С. Wingren, A. Borrebaeck // Antibody-Based Microarrays. 2009. - V.509 - P. 57-84. Chapter 5.
12. Nakamura, R.M. Cancer Diagnostics: Current and Future Trends / R.M. Nakamura, W.W. Grody, J.T. Wu, R.B. Nagle // USA.: Humana Press Inc. -2004. Chapter 1,2.
13. Wright , J.L. Newer Potential Biomarkers in Prostate Cancer / J.L. Wright, P.H. Lange // Diagnostic Update. 2007. - 9(4) - P. 207-213. "
14. Balk, S. Biology of Prostate-Specific Antigen / S. Balk, Y. Ko, G. Bubley // J. Clin. Oncol.-2003 -21 P. 383-391.
15. Schulz, W. Molecular biology of prostate cancer / W. Schulz, M. Burchardt, M. Cronauer // Molecular Human Reproduction. 2003. - 9(8) - P. 437-448.
16. Mimeault, M. Recent advances on multiple tumorigenic cascades involved in prostate cancer progression and targeting therapies / M. Mimeault, S. Batra // Carcinogenesis. 2006. - 1 - P. 1-22.
17. Ablin, R.J. Precipitating antigens of the normal human prostate / RJ. Ablin, W.A. Soanes, P. Bronson, E. Witebsky // J. Reprod. Fertil. 1970. - 22(3) - P. 573-574.
18. Wang, M.C. Purification of a human prostate specific antigen / M.C. Wang, L.A. Valenzuela, G.P. Murphy, T.M. Chu // Invest. Urol. 1979. - 17(2) - P. 159-163.
19. Papsidero, L.D. A prostate antigen in sera of prostatic cancer patients / L.D. Papsidero, M.C. Wang, L.A. Valenzuela, G.P. Murphy, T.M. Chu // Cancer Res. 1980. - 40(7) - P. 2428-2432.
20. Young, F. Regions of prostate specific antigen (PSA) promoter confer androgen independent expression of PSA in prostate cancer cell / F. Young, X. Li, J. Ellet, et al II J. Biol. Chem. - 2000. - 275(52) - P. 40486-40855.
21. Bostwick, D.G. Prostate specific antigen. Current role in diagnostic pathology of prostate cancer // J. Clin. Pathol. 1994. - 102 - P. 31-37
22. Lilja, H. Prostate-specific antigen in serum occurs predominantly in complex with alpha 1-antichymotrypsin / H. Lilja, A. Christenssons, U. Dahlen, M.T. Matikainen, O. Nilsson, K. Pettersson, T. Lovgren // Clin. Chem. 1991 -37(9) -P. 1618-1625.
23. Zhang, W.M. Characterization and immunological determination of the complex between prostate-specific antigen and a2 macroglobulin / W.M.
24. Zhang, P. Finne, J. Leinonen, S. Vesalainen, S. Nordling, et al Clin. Chem. -1998.-44-P. 2471-2479.
25. Gretzer, M.B. PSA markers in prostate cancer detection / M.B. Gretzer, A.W. Partin // Urol. Clin. N. Am. 2003. - 30 - P. 677-686.
26. Кушлинский, H.E. Возможности, неудачи и перспективы исследования опухолевых маркеров в онкологической клинике / Клин.лаб.диагн. 1999. - №3,4, 25-32. - Части 1 и 2.
27. Slev, P. Intermethod differences in results for total PSA, free PSA and Percentage of free PSA / P. Slev, S. La^ulu, W. Roberts // Am. J. Clin. Pathol. -2008.- 129-P. 952-958.
28. Матвеев, Б.П. Рак предстательной железы / Б.П. Матвеев, Б.В. Бухаркин, В .Б. Матвеев 1999. - М. - Р. 153.
29. Uzzo, R. Free prostate-specific antigen improves prostate cancer detection in a high-risk population of men with a normal total PSA and digitalrectal examination / R. Uzzo, W. Pinover, E. Horwitz et al. // Urology. 2003. - 61(4) -P. 754-759.
30. Gonzalgo, M.L. Update on PSA testing / M.L. Gonzalgo, H.B. Carter // J. Natl. Compr. Cane. Netw. 2007. - 5(7) - P. 737-742.
31. Абелев, Г.И. Альфа-фетопротеин взгляд в биологию развития и природу опухолей // Соросовский образовательный журнал. - 1998. - №9 - Р. 8-13.
32. Marrero, J.A. Alpha-fetoprotein, des-gamma carboxyprotrombin, and lectin-bound alpha-fetoprotein in early hepatocellular carcinoma / J.A. Marrero, Z. Feng, Y. Wang et al. II Gastroenterology. 2009. - 137(1) - P. 26-29.
33. Zhou, L. Serum tumor markers for detection of hepatocellular carcinoma / L. Zhou, J. Liu, F. Luo // World J. Gastroenterology. 2006. -12(8) - P. 11751181.
34. Khan, S.A. Diagnosis of hepatocellular carcinoma // World J. Gastroenterol. -2009. 15(11) — P. 1301-1304.
35. Bergstrand, C.G. Demonstration of a new protein fraction in serum from human fetus / C.G. Bergstrand, B. Czar // Scan. J. Clin. Lab. Invest. 1956. - 8 -P. 174-176.
36. Muralt, G. Immunological study of human fetal serum proteins / G. Muralt, D.L.A Roulet // Helv. Pediatr. Acta. 1961. - 16 - P. 517-520.
37. Abelev, G.I. Production of embryonal alpha-globulin by transplantable mouse hepatomas / G.I. Abelev, S.D. Perova, N.I. Khramkova, Z.A. Postnikova, I.S. Irlin // Transplantation. 1963. - 1 - P. 174-180.
38. Татаринов, Ю.С. В кн. I Всесоюзный биохимический съезд. Тезисы 2 // АН СССР, М.-Л. 1963. - с. 274.
39. Gomaa, A. Diagnosis of hepatocellular carcinoma / A. Gomaa, S. Khan, E. Leen, I. Waked, S. Taylor-Robinson // World Journal of Gastroenterology ISSN.-2009.- 15(11)-P. 1301-1314.
40. Bellini, C. Serum a-fetoprotein in newborns / C. Bellini, W. Bonacci, E. Parodi, G. Serra // Clin. Chem. 1998. - 44(12) - P. 2548-2550.
41. Ruoslahti, E. Studies of carcino-fetal proteins. 3. Development of a radioimmunoassay for a-fetoprotein. Demonstration of a-fetoprotein in serum of healthy human adults / E. Ruoslahti, M. Seppala // Int. J. Cancer. 1971. -8(3)-P. 374-383.
42. Jones, E.A. Differences between human and mouse a-fetoprotein expression during early development / E.A. Jones, M. Clement-Jones, O.F. James, D.I. Wilson // J. Anat. 2001. - 198 (5) - P. 555-559.
43. Debruyne, E.N. Diagnosing and monitoring hepatocellular carcinoma with a-fetoprotein: new aspect and applications / E.N. Debruyne, J.R. Delanghe // Clin. Chim. Acta. 2008. - 395 (1-2)-P. 19-26.
44. Koide, N. Alpha-fetoprotein-producing gastric cancer: histochemical analysis of cell proliferation, apoptosis, and angiogenesis / N. Koide, A. Nishio, J. Igarashi, S. Kajikawa et al. //Am. J. Gastroenterol. 1999. - 94(6) - P. 16581663.
45. Chan, M.H. Alpha-fetoprotein variants in a case of pancreatoblastoma / M.H. Chan, M.M. Shing, T.C. Poon, P.J. Johnson, C.W. Lam // Ann. Clin. Biochem. 2000.-37(5)-P. 681-685.
46. Карпищенко, А.И. Онкомаркеры и их диагностическое значение / А.И. Карпищенко, В.Г. Антонов, А.Б. Бутенко, А.С. Белохвостов, Е.П. Шелепина СПб.: ВМедА., 1999. - 47 с.
47. Thomas, P. The structure, metabolism and function of carcinoembryonic antigen gene family / P. Thomas, C.A. Toth, K.S. Saini, J.M. Jessup, G. Steele // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - 1032 - P. 177-189.
48. Thompson, J.A. Carcinoembryonic antigen gene family: molecular biology and clinical perspectives / J.A. Thompson, F. Grunet, W. Zimmermann // J. Clin. Lab. Anal. 1991. - 5 - P. 344-366.
49. Gold, P. Specific carcinoembryonic antigens of the human digestive system / P. Gold, S.O. Freedman // J. Exp. Med. 1965. - 122 - P. 467-481.
50. Gold, P. Demonstration of tumor-specific antigen in human colonic carcinomata by immunological tolerance and absorption technique / P. Gold, S.O. Freedman// J. Exp. Med. 1965. - 121 - P. 439-462.
51. Boucher, D. Studies on the control of gene expression of the carcinoembryonic antigen family in human tissue / D. Boucher, D. Cournoyer, C.P. Stanners, A. Fuks // Cancer Res. 1989. - 49 - P. 847-852.
52. Thomson, D.M.P. The radioimmunoassay of circulating carcinoembryonic antigen of the human digestive system / D.M.P. Thomson, J. Krupey, S.O. Freedman, P. Gold // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1969. - 64 - P. 161-167.
53. Huerta, S. Recent advances in the molecular diagnosis and prognosis of colorectal cancer//Expert. Rev. Mol. Diagn. 2008. - 8(3) - P. 277-288.
54. Uedo, N. Measurement of carcinoembryonic antigen in colonic effluent as a high-risk marker for colorectal carcinoma / N. Uedo, H. Ishikawa, H. Narahara et al. // Cancer Detect.Prev. 2000. - №3 - P. 290-294.
55. Engwegen, J. Detection of colorectal cancer by serum and tissue protein profiling: A Prospective study in a population at risk / J. Engwegen, A. Depla, M. Smits et al. // Biomarker Insights. 2008. - 3 - P. 375-385.
56. Скворцов, С.В. Опухолевые маркеры в оценке степени распространенности опухолевого процесса при злокачественных новообразованиях желудочно-кишечного тракта / С.В. Скворцов, И.М. Храмченко, Н.Е. Кушлинский // Клин. лаб. диагн. 1999. - № 9. - с.26.
57. Lee, Y.C. Tissue polypeptide antigen and carcinoembryonic antigen as tumor marker in lung cancer / Y.C. Lee, P.C. Yang, S.H. Kuo, K.T. Luh // J. Formos. Med. Assoc. 1991. - 90 - P. 631-636.
58. Sajid, K.M. Carcinoembryonic antigen (CEA) levels in hookan smokers, cigarette smokers and non-smokers / K.M. Sajid, R. Parveen, Duur-e-Sabin., K. Chaouachi, A. Naeem, R. Mahmood, R. Shamin // J. Pak. Med. Assoc. 2007.-57(12)-P. 595-599.
59. Ferrigno, D. Neuronspecific enolase is an effective tumour marker in non-small cell lung cancer (NSCLC) / D. Ferrigno, G. Buccheri, C. Giordano // Lung Cancer.-2003-41 P. 311-320.
60. Sung, H.J. Biomarkers for the lung cancer diagnosis and their advances in proteomics / H.J. Sung, J.Y. Cho // BMB Rep. 2008. - 41(9) - P. 615-625.
61. Riley, R.D. A systematic review of molecular and biological tumor markers in neuroblastoma / R.D. Riley, D. Heney, D.R. Jones, A.J. Sutton, P.C. Lambert, K.R. Abrams et al //Clin. Cancer Res. 2004. - 10 (1 pt 1) - P. 4-12.
62. Andoh, M. Serum Neuron Specific Enolase Level as a Prognostic Factor in Non-Small Cell Lung Cancer / M. Andoh, A. Gemma, K. Takenaka, S. Hisakatsu, K.Yamada, J. Usuki, K. Hasegawa, Sakonji M. et al. II Intern. Med. 1994. - 33(5) - P. 271-276.
63. Tofani, A. S-100 and NSE as serum markers in melanoma / A.Tofani, R. Cioffi, R. Sciuto et al. // Acta. Oncol. 1997. -36(7) - P. 761-764.
64. Poyner, R.R. Role of metal ions in catalysis by enolase: an ordered kinetic mechanism for a single substrate enzyme / R.R. Poyner, W.W. Cleland, G.H. Reed //Biochemistry. 2001. - 40(27) - P. 8009-8017.
65. Kaiser, E. Clinical biochemistry of neuron specific enolase / E. Kaiser, R. Kuzmits, P. Pregant, O. Burghuber, W. Worofka // Clin. Chim. Acta. 1989. -183(1)-P. 13-31.
66. Pierce, J.G. Glycoprotein hormones: structure and function / J.G. Pierce, T.F. Parsons // Annu. Rev. Biochem. 1981. - 50 - P. 465-495.
67. Cole, L.A. The deactivation of hCG by nicking and dissotiation / L.A. Cole, A. Kardana, S.-Y. Park, G.D. Braunstein // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1993. -76-P. 704-713.
68. Norman, R.J. Monoclonal antibodies to human chorionic gonadotropin: implications for antigenic mapping, immunoradiometric assay, and cinical application / R.J. Norman, T. Poulton, T. Gard, T. Chard // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1985.-61 P. 1031-1038.
69. Cole, L.A. Human chorionic gonandropin tests // Expert. Rev. Mol. Diagn. -2009. 9(7) - P. 721-747.
70. Hoermann, R. Immunological recognition and clinical significance of nicked human chorionic gonadotropin in testicular cancer / R. Hoermann, P. Berger, G. Spoettle, F. Gillesberger, A. Kardana, L.A. Cole, et al. // Clin. Chem. -1994. 40-P. 2306-2312.
71. Cole, L.A. New perspectives in measuring human chorionic gonadotropin levels for measuring and monitoring trophoblast disease // J. Reprod. Med. -1994.-39-P. 193-200.
72. Hoshi, S. Significance of simultaneous determination of serum human chorionic gonadotropin (hCG) and hCG-beta in testicular tumor patients / S. Hoshi, K. ISuzuki, S. Ishidoya, C. Ohyama, M. Sato, et al. //nt. J. Urol. 2000. -7-P. 218-223.
73. Алексеева, M.JI. Онкомаркеры, их характеристика и некоторые аспекты клинико-диагностического использования / M.JI. Алексеева, Е.В. Гусарова, С.М. Муллабаева, Т.С. Понкратова // Проблемы репродукции. -2005. -№3 с. 65-79.
74. Alaoui-Jamali, М.А. Protein technology for biomarker profiling in cancer: an update / M.A. Alaoui-Jamali, Y. Xu // J.Zhejiang University Science B. 2006. -7(6)-P. 411-420.
75. Lahousen, M. The predictive value of combination of tumor markers in monitoring patients with ovarian cancer / M. Lahousen, H. Stettner, H. Pickel // Cancer. 1987. - 60 - P. 2228-2232.
76. Muzushima, Y. Clinical significance of the number of positive tumor markers in assisting the diagnosis of lung cancer with multiple tumor marker assay / Y. Muzushima, H. Hirata, S. Isumi, et al. II Oncology. 1990. - 47 - P. 43-48.
77. Zhang, Z. Three biomarkers identified from serum proteomic analysis for the detection of early stage ovarian cancer / Z. Zhang, R.C. Bast, Y. Yu, et al. // -2004.-64-P. 5882-5890.
78. Саркисян, Г.П. Возможности ранней диагностики опухолей / Г.П. Саркисян, Т.И. Булычева, С.Р. Карагюлян, А.В. Точенов, B.C. Шавлохов // Терапевтический архив. 2005. - №4 - с. 33-37.
79. Carpelan-Holmstrom, М. Estimating the probability of cancer with several tumor markers in patients with colorectal disease / M. Carpelan-Holmstrom, J. Louhimo, U.H. Stenman, H. Alfthan, H. Jarvinen, C. Haglund // Oncology.-2004. 66(4) - P. 296-302.
80. Liao, Q. Combined detection of serum tumor markers for differential diagnosis of solid lesions located at the pancreatic head / Q. Liao, Y.P. Zhao, Y.C. Yang, L.J. Li, X. Long, S.M. Han // Hepatobiliary Pancreat. Dis. Int. 2007. - 6(6) -P. 641-645.
81. Proudnikov, D. Immobilization of DNA in polyacrilamide gel for the manufacture of DNA and DNA-oligonucleotide microchips / D. Proudnikov, E.Timofeev, A. Mirzabekov // Anal. Bichem. 1998. - 259 - P. 34-41.
82. Rubina, A. Hydrogel drop microchips with immobilized DNA properties and methods for large-scale production / A. Rubina, S. Pan'kov, E. Dementieva, et al. // Anal. Biochem. 2004. - 325 - P. 92-106.
83. Мирзабеков, А.Д. Применение матричных биочипов с иммобилизованной ДНК в биологии и медицине / А.Д. Мирзабеков , Д. В. Прокопенко , В.Р. Чечеткин // Информационные медико-биологические технологии. 2002. - М.,с. 166-198.
84. Скотникова, О. И. Новые технологии определения лекарственной чувствительности Mycobacterium tuberculosis / О.И. Скотникова, В. М. Михайлович, Е. Ю. Носова и др. // Пробл. туб. 2004. - № 6 с. 40-43.
85. Kricka, L.J. Current perspectives in protein array technology / L.J. Kricka, S.R. Master, Т.О. Joos, P. Fortina // Ann. Clin. Biochem. 2006. - 43(Pt 6) - P. 457
86. Zhang S. Hydrogels: Wet or let die // Nat. Mater. 2004. - 3(1) - P. 7-8.
87. Rubina, A. Yu. Why 3-D? Gel-based microarrays in proteomics / A.Yu. Rubina, A. Kolchinsky, A.A. Makarov, A.S. Zasedatelev // Proteomics. 2008. -8-P. 817-831.
88. Angenendt, P. Progress in protein and antibody microarray technology // Drug Discov. Today.-2005.- 10-P. 503-511.
89. Rusmini, F. Protein immobilization strategies for protein biochips / F. Rusmini, Z. Zhong, J. Feijen // Biomacromolecules. 2007. - 8(6) - P. 1775-1789.
90. Fang, F. Kinetics and thermodynamics of protein adsorption: a generalized molecular theoretical approach / F. Fang, I. Szleifer // Biophys. J. 2001. -80 -2568-2589.
91. Seurynck-Servoss, S.L. Surfaces chemistries for antibody microarrays / S.L. Seurynck-Servoss, C.L. Baird, K.D. Rodland, R.C. Zangar // Front. Biosci. -2007.-12-P. 3956-3964.
92. Pirrung, M.C. A general method for the spatially defined immobilization of biomolecules on glass surfaces using "caged" biotin / M.C. Pirrung, C.Y. Huang // Bioconjug. Chem. 1996. - 7(3) - P. 317-321.
93. Cheng, M.M. Nanotechnologies for biomolecular detection and medical diagnostics / M.M. Cheng, G. Cuda, Y.L. Bunimovich, M. Gaspari, J.R. Heath et al. //Curr. Opin. Chem. Biol. 2006. - 10(1) P. 11-19.
94. Angenendt, P. Toward optimized microarrays: a comparison of current microarray support material / P. Angenendt, J. Glokler, D. Murphy, H. Lenrach, D.J. Cahill // Anal. Biochem. 2002. - 309 - P. 253-260.
95. Vasiliskov, V. Fabrication of microarray of gel-immobilized compounds on a chip by copolymerization // V. Vasiliskov, E. Timofeev, S. Surzhikov; A. Drobyshev, V. Shick, A. Mirzabekov // BioTechniques. 1999. - 27 - P. 592606.
96. Arenkov, P. Protein microchips: Use for immunoassay and enzymatic reactions / P. Arenkov, A. Kukhtin, A. Gemmell, V. Chupeeva, S. Voloschuk, A. Mirzabekov // Anal. Biochem. 2000. - 278 - P. 123-131.
97. Wild D. The Immunoassay handbook. // 2005. ELSEVIER Ltd., ISBN: 0-08044526-8. P. 930.
98. Earley, M.C. Report from a workshop on multianalyte microsphere assays / M.C. Earley, R.F. Jr. Vogt, H.M. Shapiro, F.F. Mandy et al. // Cytometry. -2002. 50(5) - P.239-242.
99. Kellar, K.L. Multiplexed microsphere-based flow cytometric assays / K.L. Kellar, M.A. Iannone // Exp. Hematol. 2002. - 30(11) - P. 1227-1237.
100. Haab, B.B. Antibody arrays in cancer research. // Mol. Cell. Proteomics. -2005.-4-P. 377-383.
101. Kingsmore, S.F. Multiplexed protein measurement: technologies and applications of protein and antibody arrays. // Nat. Rev. Drug Disc. 2006. -5(4)-P. 310-320.
102. Wingren, C. Atibody microarrays: current status and key technological advances / C. Wingren, C.A. Borrebaeck // OMICS. 2006. - 10(3) - P. 411427.
103. Haab B.B. Protein microarrays for highly parallel detection and quantitation of specific proteins and antibodies in complex solutions / Haab B.B., Dunham M.J., Brown P.O. // Genome Biol. 2001. - 2(2) - P. 1-13.
104. Bacarese-Hamilton T., Detection of allergen-specific IgE on microarrays by use of signal amplification techniques / Bacarese-Hamilton T., Mezzasoma L., Ingham C., Ardizzoni A., Rossi R., Bistoni F., Crisanti A. // Clin. Chem. -2002.-48-P. 1367-1370.
105. Harwanegg C., Allergen microarrays for the diagnosis of specific IgE againsti rcomponents of cows milk and hens egg in a multiplex biochip-based immunoassay / Harwanegg C., Hutter S., Hiller R. // Methods Mol.Biol. -2007.-385-P.145-157.
106. Huang R.P. Cytokine protein arrays. // Methods Mol. Biol. 2004. - 264 - P. 215-231.
107. Nielsen U.B., Multiplexed sandwich assays in microarray format / Nielsen U.B., Bernhard H.G. // J. of Immunol. Methods. 2004. - 290 - P. 107-120
108. Zhou X., Antibody-microarrays on hybrid polymeric thin film-coated slides for multiple-protein immunoassay / Zhou X., Zhou J. // Methods Mol. Biol. -2007.-382-P. 259-271.
109. Bacarese-Hamilton T., Serodiagnosis of infectious diseases antigen microarrays / Bacarese-Hamilton T., Mezzasoma L., Ardizzoni A., Bistoni F., Crisanti A. // J. Appl. Microbiol. 2004. - 96 - P. 10-17.
110. Feng Y., Parallel detection of autoantibodies with microarrays autoantibodies with microarray in rheumatoid diseases / Feng Y., Ke X., Ma R., Chen Y., Hu G., Liu F. // Clin. Chem. 2004. - 50(2) - P. 416-422.
111. Miller J.C., Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera. / Miller J.C., Zhou H., Kwekel J., Cavallo R., Burke J., Butler E.B., Teh B.S., Haab B.B. // Proteomics 2003. - 3 - P. 56-63.
112. Belov L., Immunophenotyping of leukemias using a cluster of differentiation antibody microarray / Belov L., de la Vega O., dos Remedios C.G., Mulligan S.P., Christopherson R.I. // Cancer Res. 2001. - 61 - P. 4483.
113. Sreekumar A., Using protein microarrays to study cancer / Chinnaiyan A.M. // BioTechniques. Suppl 2002. - P. 46-53.
114. Shafer MW, Antibody array profiling reveals serum TSP-1 as a marker to distinguish benign from malignant prostatic disease / Shafer MW, Mangold L, Partin AW, Haab BB. // Prostate. 2007. - 67(3) - P. 255-267.
115. Hamelinck D., Optimized Normalization for Antibody Microarrays and Application to Serum-Protein Profiling / Hamelinck D., Zhou H., Lin Li., Verweij C., Dillon D., Feng Z., Costa J., Haab B.B. // Molecular & Cellular Proteomics 4 2005. - P. 773-784.
116. Ligler F.S., Array biosensor for detection of toxins / Ligler F.S., Taitt C.R., Shriver-Lake L.C., Sapsford K.E., Shubin Y., Golden J.P. // Anal. Bioanal. Chem. 2003. - 377(3) - P. 469-477.
117. Ngundi M.M., Detection of bacterial toxin with monosaccharide arrays / Ngundi M.M., Taitt C.R., McMurry S.A., Kahne D., Ligler F.S. // Biosens. Bioelectron. 2006. - 21(7) - P. 1195-1201.
118. Sun Z. A protein chip system for parallel analysis of multi-tumor markers and its application in cancer detection / Sun Z, Fu X, Zhang L, Yang X, Liu F, Hu G. //Anticancer Res. 2004. - 24(2C) - P. 1159-1165.
119. Yu D.Y. Application of multi-tumor markers protein chip assistance diagnostic system for detection of various tumors. // China Trop. Med. 2005. - 5 - P. 414-416.
120. Liang Z., Clinical value of 12 tumor markers protein biochip detection of digestive system neoplasm / Liang Z., Wang H.F., Wu A.Z., Fu S.M. // China Trop. Med. 2005. - 5 - P. 407-409.
121. Jiang Z.J., Application of multi-tumor markers protein chip diagnose system in the diagnosing of intestinal neoplasms / Jiang Z.J., Zhou W.X., Lin W., Huang Q.X. // J. Mod. Med. 2005. - 20 - P. 17-19.
122. Mou J.H., Combined detection of multiple tumor markers and its diagnostic value in colorectal cancer / Mou J.H., Li Z.P., Wang D., Ma Y., Xiao H.L., Zhang Q.H. // J. Digest. Surg. 2007. - 4 - P. 268-270.
123. Zhong Z.Y., Clinical significance of C-12 multiple tumor markers protein chip detective system in diagnosing colorectal carcinoma / Zhong Z.Y., Wang D., Li Z.P., Li M.X., Dai N., Cao X.J., et al. // Chongqing Med. 2007. - 36 - P. 2406-2408.
124. Chen C., Value of tumor markers in diagnosing and monitoring colorectal cancer and strategies for further improvement: analysis of 130 cases / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // Ai. Zheng. 2007. - 26(11) - P. 1221-1226.
125. Chen C., The application of C12 biochip in the diagnosis and monitoring of colorectal cancer: Systematic evaluation and suggestion for improvement / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // J. Postgrad. Med. 2008. - 54(3) - P. 186-190.
126. Chen C., Evaluation of tumor markers biochip C12 system in the diagnosis of gastric cancer and the strategies for improvement: analysis of 100 cases / Chen C., Chen L.Q., Yang G.L., Li Y. // Hepatogastroenterology. '- 2008. 55(84) -P. 991-997.
127. Song S.-P., Simultaneous multianalysis for tumor markers by antibody fragments microarray system / Song S.-P., Li В., Hu J., Li M.-Q. // Analytica Chimica Acta. 2004. - 510 - P. 14.7-152.
128. Wilson M.S., Multiplex measurement of seven tumor markers using an electrochemical protein chip / Wilson M.S., Nie W. // Anal. Chem. 2006. - 78 -P. 6476-6483.
129. Wiese R., Simultaneous multianalyte ELISA performed on microarray platform / Wiese R., Belosludtsev Y., Powdrill Т., Thompson P., Hogan M. // Clinical Chemistry. 2001. - 47(8)-P. 1451-1457.
130. Gao W.M., Distinctive serum protein profiles involing abundant proteins in lung cancer patients based upon antibody microarray analysis / Gao W.M., Kuick R., Orchekowski R.P. et al. // BMC Cancer. 2005. - 5 - P. 110-119.
131. Miller J.C., Antibody microarray profiling of human prostate cancer sera: antibody screening and identification of potential biomarkers / Miller J.C., Zhou H., Kwekel J. et al. // Proteomics. 2003. - 3 - P. 56-63.
132. Orechekowski R., Antibody microarray profiling reveals individual and combined serum proteins associated with pancreatic cancer / Orechekowski R., Hamelinck D., Li L. et al. // Cancer Res. 2005. - 65(23) - P. 11193-11202.
133. Мог G., Serum protein markers for early detection of ovarian cancer / Мог G., Visintin I., Lai Y. et al. // PNAS. 2005. - 102 - P. 7677-7682.
134. Greene K., Prostate Specific Antigen Best Practice Statement: 2009 Update / Greene K., Albersten P., Babain R., Carter H., Gann P., Han M. et al. // The Journal of Urology. 2009. - 182 - P. 2232-2241.
135. Shroder F., Screening and prostate-cancer mortality in a randomized European study / Shroder F., Hugosson J., Roobol M. et al. // N. Engl. J. Med. 2009 -360-P. 1320-1328.
136. Мирзабеков А.Д., Рубина А.Ю., Паньков C.B. Способ полимеризационной иммобилизации биологических макромолекул и• композиция для его осуществления. Патент РФ N 2216547. 2003.Бюл. изобр. №32.
137. Rubina A., Hydrogel-based protein microchips: manufacturing, properties, and applications / Rubina A., Dementieva E., Stomakhin A., Darii E., Pan'kov S., Barsky V., Ivanov S., Konovalova E., Mirzabekov A. // BioTechniques. 2003. -34 -P. 1008-1022.
138. Multiplex tests for heritable DNA markers, mutations and expression patterns; draft guidance for industry and FDA Reviewer. // Draft Guidance 2003.
139. Тигранян P.А., Методическое руководство по проведению контроля качества наборов реагентов для иммуноферментного анализа / Тигранян
140. Р.А., Калита Н.Ф., Роганов А.С. // Министерство Здравоохранения и Медицинской промышленности РФ. 1994. - Москва. - С. 33 159.Selby С. Interference in immunoassay. // Ann. Clin. Biochem. - 1999. - 36 - P. 704-721.
141. Jassam N., The hook effect: a need for constant vigilance / Jassam N., Jones C., Briscoe Т., Horner J. // Ann. Clin. Biochem. 2006. - 11 - P. 96-104.