Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Иммунный статус и уровень перекрестно реагирующих аутоантител к внутренним органам при хронических вирусных гепатитах В и С в сочетании с ВИЧ-инфекцией

На правах рукописи

МАСЛО ЕЛЕНА ЮРЬЕВНА

Иммунный статус и уровень перекрестно реагирующих аутоантител к внутренним органам при хронических вирусных гепатитах В и С и в сочетании с ВИЧ-инфекцией

14.00.16 - Патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Чи га-2007

003176509

Работа выполнена в ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава"

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Цыбиков Намжил Нанзатович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук

Патеюк Андрей Владимирович

кандидат медицинских наук

Латышева Инга Борисовна

Ведущая организация: ГОУ ВПО "Новосибирский государственный медицинский университет Росздрава"

дании диссертационно)... ________, _ ггинская госу-

дарственная медицинская академия Росздрава" (672090, г Чита, ул Горького, 39-А)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО "Читинская государственная медицинская академия Росздрава"

Защита состоится

часов назасе-

Автореферат разослан

2007 г'

Ученый секретарь

диссертационного совета Д 208 118 01 кандидат медицинских наук, доцент

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Вирусные гепатиты явчяюгся одной из самых актуальных проблем современной медицины Это опредетяется их повсеместным распространением латенгностью течения и выраженностью неблагоприятных исходов (Прудникова ГМ , 2004, Зуева Л П , 2006) На протяжении последних нескольких лет отмечается прогрессивный рост инфицированности иасе-тения гелатотропными вирусами и фактически речь идет о пандемии которая превосходит зараженность вирусом СПИДа (Аюшиева С Ц 2005, Арямкина О J1,2006) Угроза здоровью населения обусловлена не только высокой вероятностью развития диффузных заболеваний печени - хроническою гепатита, цирроза гепатоцеллюлярной карциномы но и вовлечения впатотогический процесс ряда других органов и систем с развитием широкого спектра внепеченоч-ных проявлений (Шерлок Ш 1999 Игнатова ТМ ,2005, Rosen Н R 2003)

Не менее 10 млн чечовек в мире имеют сочетанную патологию - ХВГ и ВИЧ-инфекция Сходные пути передачи вирусов гепатита и вируса иммунодефицита человека обусловливают высокую частоту микст-инфекции (Баранов ИП,2003 НаумоваТА и соавт,2003, МоисеевВ С , 2006) Повреждение печени, вызванное вирусами гепатита - один из факторов отягощающих течение основной патологии у ВИЧ-инфицированных Заболевание протекает как правите более быстро характеризуется высоким уровнем репликации вируса по сравнению с ншами без ВИЧ скорость развития цирроза повышается в 5 раз При успешном контроте ВИЧ-инфекции современными антиретровнрусны-ми препаратами печеночная патология является одной из павных причин смертности таких пациентов (Кирпичникова Г И 2003 МедуницынНВ 2005)

Несмотря на то, что считается доказанной иммуноопосредованная природа ХВГ (Каминский Ю В исоавт 2006 Freeman A J исоавт,2001) иммунологические нарушения при данном виде патологии остаются до сих пор мало изученными Не выяснены до конца патогенез факторы, способствующие прогрессирующему течению процесса В литературе имеются разрозненные сведения свидетельствующие об участии иммунопатоюгических процессов в механизмах вирусного поражения печени Неизвестно что оказывает ботьшее повреждение - прямое цитотоксическое действие вируса inn аутоиммунные реакции против собственной ткани (Серов В В и соавт 2004 Ястребова О Н , 2005) В то же время до сих пор не ясно наско 1ько весом вклад перекрестно реагирующих аутоантител в механизмы чронизации гепатитов и формирование внепеченочной патологии при длитетьной перснсгенции возбудшетя

Учитывая важную роль иммунопатоюгических сдвигов в механизмах по-врелчдения печени и других орынов при хронических вир\слых гепатитах В и С и гепатитов с ВИЧ в настоящей работе мы предпринят попытку оценить

возможное значение специфических иммунных нарушений в патогенезе про-грессирования этих инфекций и их системных проявлений

Решение поставленных вопросов представляет несомненный интерес для теоретической и клинической медицины, что и определило предмет наших исследований

Цель работы: изучение иммунного статуса и определение уровня перекрестно реагирующих аутоантител различных классов к антигенам внутренних органов у больных хроническими вирусными гепатитами В и С, а также в сочетании с ВИЧ-инфекцией

Для достижения цели решались следующие задачи:

1 Изучить состояние клеточного и ^морального иммунитета, фагоцитарную активность лейкоцитов у больных хроническими вирусными гепагитами В и С в активную и неактивную фазы, больных ВИЧ-инфекцией и при хронических вирусных гепатитах С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией

2 Исследовать уровень перекрестно реагирующих аугоантител классов lg А, М, G к антигенам внутренних opi анов (печени, сердца, поджелудочной железы) у больных хроническими вирусными гепатитами В и С в активную и неактивную фазы, больных ВИЧ-инфекцией и при хронических вирусных гепатитах С и В+С в соче гашш с ВИЧ-инфекцией

3 Оценит ь характер корреляционных взаимосвязей между некоторыми показателями иммунитета и содержанием аутоантител к антигенам внутренних органов у больных хроническим вирусным гепатитом В и С, больных ВИЧ-инфекцией и хроническим вирусным гепатитом С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка иммунологических показателей, фагоцитарном активности лейкоцитов и определен уровень аутоантител к антигенам внутренних органов у больных хроническими вирусными гепатитами В и С и больных гепатитами С и C-t В в сочетании с ВИЧ-инфекцией

Показано, что при хронических гепатитах как В т ак и С снижается популяция NK-клеток (CD16 ь56+), при активации процесса происходит повышение Т-киллеров (CD3+8+), а при гепатите С - и Т-активированных Т-лимфоцитов (CD3+DR+) Кроме этого увеличивается уровень аутоантител к аутоантигенам печени и других внутренних органов Влияние гепатита С и В +-С на иммунитет больных ВИЧ-инфекцией характеризуется стимуляцией клеточного звена за счет увеличения числа Т-лимфоцитов (CD3+) Г-киперов (CD3+8) и Т-активирован-иых лимфоцитов (CD3+DR+) Со стороны гуморального звена иммунитета отмечается повышение уровня В-лимфоцитов

Впервые с помошью корреляционного анализа (прямые связи между уров-

нем Т-зависимых естественных киллеров и Т-активированных лимфоцитов и концентрацией аутоантител класса обратная связь между МК-клетками и аутоантителами класса 1§А) доказано наличие вирус-индуцированного аутоиммунного звена в патогенезе повреждения печени, сердца и поджелудочной железы в условиях длительной персистенции возбудителей гепатитов и ВИЧ-инфекции

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные результаты позволяют считать изменения клеточного и гуморального иммунитета одним из звеньев патогенеза вирусного поражения печени Значительный вклад в развитие этого состояния вносят аутоиммунные процессы, о чем свидетельствует высокий уровень аутоантител к антигенам внутренних органов у больных гепатитами

Повышение уровня аутоантител может опосредовать патогенетические механизмы хронизации инфекции и возможного присоединения аутоиммунного звена с формированием системных проявлений хронических вирусных гепатитов, как моноинфекций, так и в сочетании с ВИЧ

Внедрение в практику. Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах патофизиологии и инфекционных болезней с курсами общей и военной эпидемиологии Читинской государственной медицинской академии Положения, выносимые на защиту:

1 У больных хроническим вирусным гепатитом С 1 -2 стадии, 1 -2 степени активности при повышении уровня аутоантител к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы выявлен дисбаланс в показателях иммунитета Определяется прямая зависимость между содержанием Т-зависимых ЫК-кле-ток, Т-активированных лимфоцитов и концентрацией аутоантител класса 1§0, а также обратная связь между ]ЧК-клетками и аутоантителами класса 1£А к внутренним органам

2 При хроническом вирусном гепатите В 1-2 стадии 1-2 степени повышение уровня аутоантител к антигенам печени сердца, поджелудочной железы сопровождается изменениями клеточного и ^морального иммунитета Имеет ся прямая зависимость между содержанием Т-зависимых ИК-клеток и концентрацией аутоангит ел класса а также обратная связь 1ЧК-клеток с уровнем аутоантител класса ^А к аутоантигенам внутренних органов

3 При гепатите С и микст-гепатитах (Вн С) протекающих с ВИЧ-инфекцией на фоне иммуносупрессии хелперного звена фагоцитарной активности лейкоцитов и активации киллерных популяций существует прямая связь между Т-активированными чимфоцитами и аутоантителами и обратная - МК-клеток с уровнем аутоантител класса 1§А к аутоантигенам печени

Апробация диссертации. Основные положения диссертационной работы докладывались на V] Восточно - Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием "Клинико - эпидемиологические и этно -экологические проблемы заболеваний органов пищеварения" (Красноярск, 2006), на X международной молодежной научной конференции "Молодежь Забайкалья культура здоровья - здоровое общее гво" (Чита, 2006), на V Всероссийской университетской научно - практической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула, 2006), на 41 -й всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых "Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины" (Тюмень, 2007), на I межрегиональной конференции "Сочетанные заболевания внутренних органов в терапевтической практике" (Иркутск, 2007), на V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 работ, 4 из которых в изданиях, рекомендованных ВАК

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций иллюстрирована 21 таблицей, 5 рисунками Список литературы содержит 200 источников, из которых 143 отечественных и 57 зарубежных

МАТЕРИАЛЫИМЕТОДЫИСХШВДОВАНИЯ

Работа выполнялась на базе ГУЗ "Областная клиническая инфекционная больница"*, "Областной Центр по профилактике и борьбе со СПИД и инфекционными заболеваниями", г Читы, НИИ Экологии ЧГМА Характеристика обследованных групп

Всего было обследовано 114 человек, в возрасте от 18 до 36 лет Исследования выполнялись в следующих группах

1 группа 16 больных ХВГС 1 -2 стадии из них 50% (8 человек) с 0 степенью активности и 50% (8 человек) с 1 -2 степенью активности, средний возраст которых составил 26,2±5,8 года

2 группа 14 больных ХВГВ 1 -2 стадии из них 50% (7 человек) с 0 степенью активности и 50% (7 человек) с]-2 степенью активности процесса Средний возраст 26,3±4,2 года

* авторы работы выражают бтагодарность за помощь и содействие в процессе выполнения кчинической части исследования кчиническому консультанту зав кафедрой инфекционных болезней с курсами обшей и военной эпидемиоюгии к м н доц Л Б Кижто

3 груша 20 больных ВИЧ-инфекцией, из них 60% (12 человек) со 2-3 стадией, 40% (8 человек) - 4 А-Б стадией Средний возраст представителей группы -25,2+5,4 года

4 группа 30 больных ХВГС 1-2 степени активности с ВИЧ-инфекцией 2-3 стадии, их средний возраст - 27,6±4,7 года

5 группа 14 больных ХВГВ+С 1-2 степени активности с ВИЧ-инфекцией 23 стадии, в возрас i е 28,1 ±5,4 го да

Всем пациентам исследовали состояние клеточною и гуморального иммунитета, фагоцитарную активность лейкоцитов и уровень аутоантител к ауго-антигенам печени, сердца и поджелудочной железы Взятие крови проводилось утром, вне критических периодов менструального цикла (у женщин) Результаты сравнивали с аналогичными показателями здоровых лиц (20 человек), средний возраст которых составил 24,8+5,1 года

Опытные группы и контрольная были сопоставимы по половому составу

Верификация вирусной этиоло! ии процесса осуществлялась путем обнаружения в крови маркеров гепатитов (HBsAg, a/HBsIgM, a/HBslgG, HBeAg, a/1 IBe IgG, HBcoreAg, a/HBcorelgG, a/HBcorelgM, а/ВГС1ёС core, NS3, NS4,NS5), ВИЧ-инфекции - специфических антител методом ИФА, а также выявлением ДНК и РНК вирусов методом полимеразно-цеггной реакции Хроническое течение гепатита подтверждалось нарушением белоксинтезируюшей функции печени, данными ультразвукового исследования и скенирования печени Стадия и активность гепатита определялись согласно критериям международной Лос-Анджелесской классификации 1994 года

У больных гепатитами давность обнаружения маркеров составила от 5 до 7 лет Длительность заболевания пациентов с ВИЧ от 2 до 5 лет

В работе с обследуемыми лицами соблюдались этические принципы, предъявляемые Хельсинской Декларацией Всемирной Медицинской Ассоциации (World Medical Association Declaration of Helsinki 1964,2000 ред)

Методы изучите клеточного и гуморального иммунитета.

1) Подсчет общею числа лейкоцитов, лейкоцитарной формулы и основных популяций лимфоцитов проводили на проточном циюметре Epics XL -MCL фирмы Beckman Coulter (реактивы Immunocech, поставка компании "Био-химмакс") с выявлением поверхностных маркеров лейкоцитов CD3+, CD3+4+. CD3+8+, CD16+56+, CD19- CD3+16+56+, CD3+DR+

2) Концентрацию иммуноглобулинов классов IgA, М, G определяли методом турбидиметрии с использованием поликлональных антииммуноглобули-новых антител (реактивы Sentinel, Италия) на биохимическом анализаторе Pronto, Италия

Метод оценки фагоцитарной активности лейкоцитов. Базальную (без

продигиозана) и стимулированную (продигиозаном) фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали по их способности поглощать частицы латекса с помощью тест-набора "Реакомплекс" (i Чита) (Меньшиков В В , 1987)

Определение перекрестных аутоантител. Определение перекрестных ауто-антител классов IgA, M, G проводили методом твердофазного ИФА с помощью наборов реактивов ЗАО "Вектор-Бест" (г Новосибирск) В качестве антигена использовались водно-солевые экстракты внутренних органов печени, сердца, поджелудочной железы (Чернушенко Е Ф , 1981)

Статистическая обработка материала. Анализ полученных данных проводили с помощью методов вариациотюй статистики с определением различий по критерию Стыодента, корреляционные зависимости определяли по методу Пирсона (Реброва О К), 2006) Статистический расчет осуществлен с использованием электронных программ Microsoft Office 2003 for Windows XP Professional и "BIOSTAT"

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Состояние клеточного, гуморального иммунитета и фагоцитарной активности лейкоцитов у больных ХВГС и ХВГВ

У больных ХВГС 1 -2 ст адии, 0 степени активности процесса с сравнении с контрольной группой отмечается уменьшение клеток экспрессирующих антигены Т-хелнеров (CD3+4+) и NK-клеток (CD 16+56+) (р<0,05) Подобные изменения могут реализовываться несколькими механизмами избирательной репликацией вируса в определенной популяции лимфоцитов, синтезом функциональных антагонистов TcR. изменением соотношения цитокинов продуцир>е-мых Тх-1 и Тх-2 типов, сбоя дифференцировки клеток (Каминский Ю В и соавт, 2006) Выявленные изменения свидетельствуют о слабом пролиферативном ответе клеток Т-хелперов и NK на антигены вируса гепатита С При активации вирусного процесса сохраняется депрессия этих клеток, тогда как число Т-киллеров (CD3+8+) и Т-активированных лимфоцитов (CD3+DR+) увеличивается (р<0,05) Стимулирование киллерной популяции диктуется доминантной необходимостью цитолиза инфицированных клеток Некоторые авторы (Лоб-зинЮВ и соавт, 2003, Серов В В и соавт, 2003)трактуютцитотоксический механизм усилением продукции гамма-интерферона при активации хронического процесса Это способствует экспрессии молекул HLA класса 1 в совокупности с пептидными антигенами на мембране гепатонитов, которые распознаются СВЗ+-клетками (Рис 1)

Кроме того, отражением усиленной антигенной стимуляции в активную фазу вирусного процесса явилось увеличение уровня В-лимфоцитов (CD19+) и концентрации IgG, что характеризует напряженность гуморального иммуни-

тета (Табл. 1). Этот феномен может быть обусловлен повышением продуктов разрушения гепатоцитов, вероятным увеличением аутоантигенной стимуляции вследствие модификации гепатоцитов неспецифическим протеолизом, изменения ¡слеток печени реакциями ПОЛ, при комплексировании с вирусом.

2,5 2

1,5 1

0,5

CD3 CD4 CD8

■ контроль и ХВГС 0 ст.акт. ШХВГС 1-2 ст.акт.

0,35 0,3 0,25 0,2 0,15 0,1 0,05 0

CD16 T-NK Та

■ контроль и ХВГС 0 ст.акт. о ХВГС 1-2 ст.акт.

Примечание:

* - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами и контролем ** - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами

Рис. 1. Субпопуляции лимфоцитов у больных ХВГС при 0 и 1-2 степени активности процесса, абс. число х 1О9/л (М±ш)

Таблица 1

Состояние гуморального иммунитета у больных ХВГС 0 и 1-2 степени активности процесса (М±т)

Показатель Контрольная группа (п=20) Больные ХВГС 0 ст. акг-ти (п~8) Больные ХВГС 1-2 ст. акт-ти (п=8)

В-лимфоциты, мкл (CD3-19+) 178,0+17,0 176,0+18,2 230,9+14,5 р<0,05 р*<0,05

В-лимфоциты, % (CD3-19+) 7,3±0,4 9,2+3,5 11,8+2,1 р<0,05

lg А, г/л 2,1+0.2 2,5+0,7 2,6+0,7

lg М, г/л 2,1+0,1 1.8+0.1 1,9+0,5

lg G. г/л 12,1+0,2 12,2+0,8 16,9+0,7 р<0,001 р* <0,001

Примечание:

р - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами и контролем р*- уровень значимости достоверных отличий между опытными группами

Полученные результаты совпадают с некоторыми литературными данными (Абдукадырова М.А., 2002; Wedemeyer 11,2003). Вероятно, этим объясняется тенденция к более высокому уровню аутоантител к гепатоцитам и к антигенам других внузренних органов при активации вирусного процесса.

У больных ХВГВ 1 -2 стадии, 0 активности процесса по сравнению со здоровыми лицами также отмечается снижение популяции NK-клеток, а с активацией заболевания происходит увеличение популяции Т-лимфоцитов (CD3+) и Т-киллеров (CD3+8+).

Полученные результаты доказывают участие CD8 (--лимфоцитов в элиминации вируса, что обусловлено их способностью вызывать гибель инфицированных клеток, экспрессируюшие соответствующие пептиды молекулами HLA класса 1 и секретировать противовирусные факторы (ИФНу, ФИО) (Серов В.В. и соавт., 2004) (Рис. 2).

*

CD3 CD4 CD8 NK T-NK Та

■ контроль и ХВГВ 0 ст акт. ш ХВГВ 1-2 ст.акт. Я контроль П ХВГВ 0 ст акт. Ш ХВГВ 1-2 ст.акт.

Примечание: как к рис. 1.

Рис. 2. Субпопуляции лимфоцитов у больных ХВГВ при 0 и 1 -2 степени активности процесса, абс. число х 107л (М±гп)

Гуморальное звено иммунитета в условия активации вирусного процесса также характеризуется признаками стимуляции за счет повышения уровня В-лимфоцитов и уровня JgG (Табл. 2).

При анализе фагоцитарной активности лейкоцитов в группах больных ХВГ С и В 0 и 1 -2 степени активности - фагоцитарного числа и фагоцитарного индекса - не было выявлено значимых различий.

Согласно сведениям литературы в механизмах гибели гепатоцитов имеет место цитопатический эффект вируса на мембраны и структуры клеток печени. Однако биология гепатотропных вирусов и их особенности взаимодействия

Таблица 2

Состояние гуморального иммунитета у больных ХВГВ 0 и 1 -2 степени актив поста процесса (М±т)

Показатель Контрольная группа (п=20) Больные ХВГВ 0 ст акт-ти (п=7) Ботьные ХВГВ 1-2 ст акт-ти (п=1)

В-тимфошлы, мкл КТО-19+) 178,0±17,0 181,5± 15,0 228 5±10,2 р<0 05 р*<0 05

В-лимфоциты, % (СОЗ-19+) 7,3±0,4 8,5±0,2 8,2±1,1

^ А, г/л 2,110,2 2 5±0,2 2,1±0 6

г/л 2,1±0,1 2,1±0,1 1 6±0,2

в г/ч 12 1±0,2 13,1±0,1 16,1 ±0,9 р<0,001 р*<0,005

Примечание

р - уровень значимости достоверных опичий между опытными группами и контролем р*- уровень значимости достоверных отличий между опытными группами

с иммунной системой хозяина делают возможным запуск иммуноопосредо-ванного повреждение печени, кроме того, с вовлечением в патологический процесс других органов и систем (Апросина 3 Г и соавг, 2004)

Среди возможных механизмов индукции возбудителем аутоиммунных реакций основную роль отводят феномену молекулярной мимикрии между антигенными структурами вируса и эпитопами клеток хозяина Выявлена гомология последовательностей вируса и эпитопов цитохрома Р450, поверхностная экспрессия которого является обязательным условием в процессе активации механизмов аутоиммунитета Предполагается наличие Т - клеточной цито-токсичности направленной на аугоантигены Показана способность пептидов вируса гепатита С индуцирова! ь аутореактивные СОЗ+8+-цитотоксические лимфоциты, распознающие эпитопы цитохрома Р450 Имеет значение и то, что встраивание антигенов вируса в поверхностные мембраны клеток приводит к изменению НЬА и образованию комбинированных антигенов со свойствами аутоантигенов Кроме того, при ХВГС проявляется еще одна форма количественного и качественного дисбаланса в иммунной системе - нарушение процессов клональной активации В этом случае при развитии адаптивного им-мунно1 о ответа вместо избирательного реагирования специфичных к конкретному антигену лимфоидных клеток развивается их поликлональная активация (Каминский Ю В и соавг, 2006) Подобный ответ иммунном системы опасен

из-за возможного ускорения процесса дезорганизации ее регуляторного звена и растормаживания клонов с ауто - или "запрещенной" реактивностью В последнем случае развивается аутосенсибилизация, при которой неизбежна агрессия иммунной системы против собственных клеток и тканей (Герасун Б А , 2006, КаттегА Я, 1999)

Менее изучен феномен аутоиммунизации при хроническом гепатите В, при котором также обнаруживаются аутоантитела Полагают, что в развитии этого феномена играют роль специфические механизмы перекрестная реактивность вирусных антигенов с нативными печеночными антигенами на уровне сходства последовательностей или путем мимикрии третичных структур (АпросинаЗГ, 1998)

Воробьев А А и Быковская С Н (2005) рассматривают вирусы гепатитов В и С как пусковые факторы аутоиммунного повреждения печени Вызывая клеточный иммунный огвет, вирусы усиливают продукцию ИФНу, который, действуя на генатоциты, способствует экспрессии и индукции на их поверхности молекул НЬА 1 и 2-го классов В результате гепатоцигы приобретают свойства антигенпрезентируютцих клеток, индуащрующих иммунный ответ

Состояние клеточного, гуморального иммунитета и фагоцитарной активности лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией и больных ХВГС и ХВГВ+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией

Как описано в многочисленных источниках (Покровский В В 2001, Лоб-зш! Ю В , 2003, Папуашвили М Н , 2004) особенностью иммунитета при ВИЧ-инфекции является значительный дисбаланс Т-звеиа, который заключается в уменьшении субгюпуляции Г-хелперов (СБЗ+4+) с компенсаторным ростом Т-киллеров (СБЗ+В-ь) Кроме изменений в количественном распределении Т-клеточных популяций, при ВИЧ-инфекции описаны многочисленные функциональные нарушения практически во всех звеньях иммунитета Происходит угнетение активности процессов фагоцитоза, уменьшается активность нормальных киллеров, отмечается хроническая активация Т-звена на фоне падения выработки ИЛ-2, роста концентрации ИЛ-1, ИЛ-6, ФНО Со стороны гуморального звена иммунитета - гиперстимуляция В-клеток вследствие вирус-индуци-рованной активации антителпродуцирующих клеток

По результатам наших исследований у ВИЧ-инфицированных отмечается угнетение СП4 I популяции, падение иммуно-регулягорного индекса уменьшение Т-лимфоцитов (СЭЗ+), МК-клеток, что указывае1 на супрессию естественного противовирусного потенциала На этом фоне возрастает уровень Т-активированных лимфоцитов, что является компенсаторной реакцией (Рис 3)

Лц CD3 CD4 CD8

■ контроль и ВИЧ-инфекция п ХВГОВИЧ-инфекция

Примечание: как к рис. 1.

NK Т-NK Та

I контроль □ а^Ч-инфекция Ш ХЕЗ~С+ВИЧ-инфекция

Рис. 3. Субпопуляиии лимфоцитов у больных ВИЧ-инфекцией и больных ХВГС в сочетании с ВИЧ, абс. число х 109/л (М+ш)

Со стороны гуморального звена иммунитета больных ВИЧ 2-3 стадии выявлено уменьшение B-лимфоцитов. Однако отражением иммуностимулирующего действия вирусной инфекции на иммунитет явилось увеличение концентрации IgG. К настоящему времени установлено, что в процессе развития заболевания происходит поликлональная активация В-лимфоцитов, что проявляется повышением общего числа иммуноглобулинов (Бобкова М.Р., 2006) (Табл.4).

Кроме клеточного и гуморального иммунитета в патологический процесс при ВИЧ-инфекции вовлекаются клетки моноцитарно-макрофагальной системы, где вирус способен интегрироваться в геном и осуществлять репликацию. Это находит отражение в снижении показателей фагоцитарной активности лейкоцитов (Табл. 5).

У больных ВИЧ 4А-Б стадии по сравнению со 2-3 стадией инфекции было отмечено еще большее угнетение Т-хелперов (CD3+4+) (р<0,001) при возрастающем числе Т-киллеров (CD3+8-I) (р<0,05) и Т-активированных лимфоцитов (р<0,001), что сопровождалось снижением иммуно-регуляторного индекса (р<0,001); в гуморальном звене - уменьшение B-лимфоцитов (р<0,001) с ростом IgG (р<0,001).

В процессе исследования клеточного иммунитета больных микст-инфекцией ХВГС+ВИЧ и ХВГВ+С с ВИЧ по сравнению с контролем выявлено снижение уровня Т-хелперов (CD3-+4T-) и NK-клеток. При сравнении этих групп с группой ВИЧ-илфицировапных 2-3 стадии без гепатита отмечено увеличение числа Т-лимфоцитов (CD3+), Т-активированных лимфоцитов, а в группе больных ХЕ5ГС+ВИЧ, кроме того, и Т-киллеров (CD3+8+) (Рис. 3,4).

Таблица 4

Состояние гуморального иммунитета у больных ВИЧ-инфекцией и больных ХВГС и ХВГВ+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией (М±т)

Показатель Контрольная группа (II=20) Больные ВИЧ 2-Зст. (п=]2) Больные ХВГС+ВИЧ (п=30) Больные ХВГВ+С с ВИЧ (п=14)

В-лимфоциты, мкл (CD3-19+) 178,0+17,0 112,5-Ы2,9 р<0,05 161,7+25,5 р*<0,05 183,7+29,5 р**<0,05

В-лимфоциты, % (CD3-19+) 7,3±0,4 7,6±0,8 7,2±0,8 8,2+0,8

Ig А, г/л 2,1 ±0,2 2,2±0,2 2,4±0,2 2,4+0.2

Ig М, г/л 2,1 ±0,1 1,9*0,1 2,1±0,04 1,9±0,04

ig G, г/л 12,1±0,2 16,4±0,2 р<0,001 15,1 ±0,5 р<0,005 15,4±0,4 р<0,001

Примечание:

р - уровень значимости достоверных отличий между группой больных ВИЧ и контролем;

р* - уровень значимости достоверных отличий между группой больных ХВГС+ВИЧ и группой больных ВИЧ-инфекцией;

р** - уровень значимости достоверных отличий между группой больных ХВГВ+С+ВИЧ и группой больных ВИЧ-инфекцией.

з

2,5 2 1,5 1

0,5 О

* *

" 1 | t*

ЛИ

CD4

CD3 ■ контроль

Z ВИЧ-инфекция

ШХВГВ+С с ВИЧ-инфекцией

Примечание: как к рис. I.

NK T-NK Та

■ контроль И ВИЧ-инфекция Ш ХВГВ+С с ВИЧ-инфекцией

Рис. 4. Субпопуляции лимфоцитов у больных ВИЧ-инфекцией и больных ХВГВ+С в сочетании с ВИЧ. абс. число х 107л (М±т)

Таблица 5

Состояние фагоцитарной активности лейкоцитов у больных ВИЧ-инфекцией

и больных ХВГС и ХВГВ+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией (М±т)

Показатель Контрольная группа (п=20) Больные ВИЧ 2-Зет («=12) Больные ХВГС-ВИЧ (п= 30) Больные ХВГВ+С с ВИЧ (гг14)

Фагоцитарный индекс, базисный, % 41,6+4,2 30,1+3,4 р<0,05 31,4+3,0 р<0,05 32,2+2 9 р<0,05

Фагоцитарный индекс, сгимучированый. % 48,5+2,5 36,0+3,7 р<0 05 46 0+5,4 38 4+2,4 р<0,05

Фагоцитарное число, базисное 3,7+0 3 3,1+0,2 р<0,05 2,9+0 3 р<0,05 2 8+0,3 р<0,001

Фагоцитарное число, ста мутированное 4 0+0 5 3,1+0,2 р<0,05 3,0+0,1 р<0 05 3,1+0,1 р<0,05

Примечание какктабл 4

Со стороны гуморального иммунитета больных микст-инфекцией ХВГС+ВИЧ и ХВГВ+С с ВИЧ по сравнению с контролем увеличен уровень а в сравнении с группой ВИЧ-инфицированных 2-3 стадии выявлено нарастание количества В-лимфоцитов (Табл 4)

Состояние фагоцитарной активности лейкоцитов у больных гепатит ом С с ВИЧ по сравнению с контролем характеризовалась снижением базисного фагоцитарного индекса по сравнению с контролем Кроме того, у этих больных отмечено снижение базисного и стимулированного фагоцитарного числа У больных гепатитом В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией фагоцитарная активность характеризовалась снижением показателей базисного и стимулированного фагоцитоза (табл 5)

Содержание аутоантител к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы у больных ХВГВ и С, ВИЧ-инфекцией и больных ХВГ+ВИЧ

В процессе исследования уровня аАТ к аАг внутренних органов у больных ХВГВ и ХВГС было выявлено повышение аАТ классов 1§А и

Так больные ХВГВ и ХВГС имели высокий уровень аАТ класса IgA к аАГ печени и поджелудочной железы (р<0,001), аАТ класса lgG - к аАГ печени, сердца и подже дудочной железы, концентрация которых нарастала с увеличением степени активности процесса (р<0,001) (Рис 5,6,7)

С целью установления системных закономерностей изменений показателей иммунитета и уровня перекрестных аутоантитет для определения патогенетических взаимосвязей между изученными параметрами у больных ХВГ, ВИЧ и ХВГ с ВИЧ-инфекцией проведен корреляционный анализ

IgA IgM IgG

в контроль 0 ХВГВ О ст.акт. £0 ХВГВ 1 -2 ст.акт. Q ХВГС О ст,акт. 0 ХВГС 1 -2 ст.акт.

Примечание:

* - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами и контролем ** - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами ХВГС *** - уровень значимости достоверных отличий между опытными группами ХВГВ

Рис. 5. Уровень аАТ к аАг печени у больных ХВГВ и С 0 и 1 -2 степени активности, ЕД (М±ш)

■) ----

А А& А

IgA !gM igG

®контроль и ХВГВ 0 ст.акт. (ffl ХВГВ 1-2 ст.акт.

и ХВГС 0 ст.акт. И ХВГС 1 -2 ст.акт

Примечание: как к рис. 6.

Рис. 6. Уровень аАТ к аАг сердца у больных XBIБ и С 0 и ] -2 степени активности, ЕД, (М±т)

У больных ХВГС выявлена прямая связь T-NK-клеток с уровнем аАТ класса IgG к аАГ печени (г=0,43), сердца (г=0,45), поджелудочной железы (i=0,37); Т-активированных лимфоцитов с аАТ класса IgG к аАГ печени (г=0,68), сердца (г=0,37) и поджелудочной железы (г=0,32); а также обратная - NK-клеток и аАТ класса IgA к аАГ печени (г- - 0,32) и поджелудочной железы (г= - 0,38).

Корреляционный анализ больных ХВГВ показал наличие прямой связи Т-NK-лимфоцитов с аАТ класса IgG к аАГ печени (г=0,66), сердца (г=0,65) и под-

в контроль ES ХВГВ О ст.акт. ш ХВГВ 1 -2 ст.акт.

Р ХВГС 0 ст.акт. И ХВГС 1-2 ст.акт.

Примечание: как к рис .6.

Рис. 7. УровеньаАТ к аАг поджелудочной железы у больных ХВГВ и С 0 и 1-2 степени активности, ЕД (М±га)

желудочной железы (г=0,47); а также обратной зависимости между NK-клетка-ми и содержанием аАТ класса IgA к аАГ печени (г= - 0,47) и поджелудочной железы (г= - 0,42).

Важным для патогенеза свойством ВИЧ является сходство его структурных компонентов (особенно gp 120) с многими молекулами и рецепторами клеток организма (молекула CD4+, TcR, молекула HLA2-ro класса, рецептор для ИЛ-2, молекула gpllla тромбоцитов). Это создает условия для запуска аутоиммунных реакций за счет гомологии поверхностных белков вируса с белками организма (Weiss L. и соавт., 2004). Наши исследования не показали увеличения уровня аАТ к аАГ в группах больных с ВИЧ-инфекцией. Однако для выявления взаимосвязей между изменением показателей иммунитета и уровнем аА'Г с целью предположения возможного запуска аутоиммунного процесса при данной патологии нами также был проведен корреляционный анализ.

Так, у больных ВИЧ-инфекцией 2-3 стадии определяется положительная зависимость T-NK-клеток (г=0,3 8) и Т-активированных лимфоцитов (г=0,32) с аАТ класса JgG к аАГ печени. Корреляционные взаимоотношения изученных параметров у больных ХВГС с ВИЧ-инфекцией показали наличие прямой связи Т-активированных лимфоцитов (г=0,38) с аАТ класса IgG и обратной NK (г= - 0,39) с аАТ класса IgA к аАГ печени. Такие же связи между названными популяциями лимфоцитов и количеством аАТ к аАГ печени (г=0,30; г^ - 0,42) сохраняются у больных микст-гепатитом (В+С) с ВИЧ-инфекцией.

Возможно, что развитие аутоиммунного процесса в условиях вирусной персистенции имеет связь с цитокиновой системой - соотношением провоспа-лительных цитокинов, синтезируемых Т-активированными лимфоцитами и

противовоспалительных цитокинов

Таким образом существенные изменения показателей клеточного и гуморального иммунитета у больных ХВГ В ХВГС сочетается с высоким уровнем аАТ к антигенам внутренних органов что указывает на участие аутоиммунных механизмов в процессах хронизации вирусного поражения печени Не исключено что деструкция гелатоцитов и вовлечение в патологический процесс других органов свя даны именно с дисбалансом иммуннои системы и приобретением собственными тканями иммуногенных свойств вследствие чего, они становятся мишенью для аутоиммунной агрессии

ВЫВОДЫ

1 У больных хроническим вирусным гепатитом С 1-2 стадии вне активности снижено число Т-хелперов (СОЗ-4+) и МК-клеток (СО 16+56+) С активацией процесса при сохранении указанных изменений увеличивается количество Т-киллеров (СОЗ-В-1-) Т-активированны\ лимфоцитов (СОЗ->ТЖ-), В-лимфо-цитов и содержания

2 У больных хроническим вирусным гепатитом В 1-2 стадии, 0 степени активности снижено число МК-клеток (СБ 16-56-) а при активации процесса происходит увеличение Т-лимфоцнтов(СОЗ-'-) и Т-киллеров (СОЗ-8-) возрастает количество В-лимфоиитов и уровень 1§С

3 Фагоцитарная активность лейкоцитов при хронических гепатитах В и С 0 и 1 -2 степени активности не изменяется

4 При хронических вирусных гепатитах В и С к антигенам печени, сердца и поджелудочной железы происходит увеличение аутоантител класса 1§А и особенно класса с нарастанием его в активную фазу процесса Выявлено наличие прямых корреляционных связей между уровнем аутоантител и числом Т-активированных чимфоиитов (СОЗ-ОЯ) и Т-зависимых естественных ьилтеров (СОЗ+16-56-) и обратная зависимость уровня аутоантител и МК-клеток (СО 16-56-)

5 У больных ВИЧ-инфекцией при сниженном количестве Т-хелперов (СОЗ-4) возрастает >ровень Т-киллеров (СОЗ-8-) и Т-активированных лимфоцитов (СОЗ+ЭК-), со стороны п морального звена иммунитета отмечае гея снижение В-.лимфоцитов и рост концентрации Фагоцитарная активность характеризуется снижением базалыюю и стимулированного фагоцитарного индекса и фагоцитарного числа Уровень аутоантител не изменяется однако наблюдается прямая зависимость Т-зависимых естественных ки ¡леров и Т-активированных лимфоцитов с аутоантителами класса к аутоантше-нам печени

6 В случае микст-заболеваний гепатитС+ВИЧ и гепатит В-С с ВИЧ в оттичиеот

больных ВИЧ-инфекцией наблюдается стимуляция клеточного иммунитета за счет Т-лимфоцитов (СПЗ О, Т-киллеров (СОЗ+8+) и Т-активированных лимфоцитов (СШ+ОК), а в 1уморальном - повышение В-лимфоцитов При этом фагоцитарная активность остается на прежнем сниженном уровне На фоне указанных изменений отмечается прямая зависимость между Т-активиро-ванными лимфоцитами и аутоантителами класса 1^0 и обратная - Т\К-клсток (С016+56+) с аутоантителами класса ^А к аутоантигенам печени

IIРАКТИЧ КСК*И Е РЕКОМЕ11Д4ЦИИ

Для прогнозирования характера течения инфекционного процесса, вызванного гепатотропными вирусами диагностики доклинических системных проявлений хронических вирусных гепатитов, в том числе в сочетании с ВИЧ-инфекцией рекомендуется определять аутоантигела классов 1£А и к аутоантигенам внутренних органов с предпочтительным изучением количества МК-клеюк и Г-активированных лимфоцитов

СПИСОКРАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Сравнительная характеристика показателей иммунитета у больных хроническим вирусным гепатитом С в сочетании с ВИЧ-инфекцией /ЕЮ Масло, В Я Розенберг,ДД Цынгеева, АН Бутыльский//Клинико - эпидемиологические и этно - экологические проблемы заболеваний органов пищеварения

материалы V]! Восточно - Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием (4-5 мая, 2006 г, Красноярск) - Красноярск, 2006 -С 369-370

2 Масло Е Ю Перекрестно реагирующие аутоантитела к внутренним органам у больных хроническими вирусными гепатитами /ЕЮ Масло // Естествознание и гуманизм сборник научных работ -Томск, 2006 Том 3,№3 -С 53

3 Розенберг В Я Сравнительная характеристика показателей иммунитета у больных ВИЧ-инфекцией и больных хроническим вирусным гепатитом С и С+В в сочетании с ВИЧ-инфекцией /В Я Розенберг, Е Ю Масло, Д Д Цынгеева // Материалы V Всероссийской университетской научно - практической конференции молодых ученых и студентов по медицине -Тула,2006 - С 201202

4 Масло Е Ю Показатели иммунитета у больных хроническими вирусными гепатитами В и С / Е Ю Масло // Актуальные проблемы теоретической экспериментальной и клинической медицины материалы 41-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых -Тюмень, 2007 - С 89-90

5 Сравнительная характеристика показателей иммунитета у больных хрони-

ц

ческим вирусным гепатитом С и больных с коинфекцией гепатит С+ВИЧ / Н Н Цыбиков, Е Ю Масло, В Я Розенберг, Д Д Цынгеева, Л Б Кижло // Сибирский медицинский журнал - 2007 - Т 70, № 3 - С 54-55

6 Перекрестно реагирующие аутоантигела к внутренним органам при хронических вирусных | епатитах С и В и гепатитах в сочетании с ВИЧ-инфекцией / Н Н Цыбиков, Е Ю Масло, В Я Розенберг, Д Д Цынгеева // Аллергология и иммунология -2007 -Т 8,№1 -С 100

7 Состояние иммунитета при сочетании ВИЧ с хроническими вирусными гепатитами / Н Н Цыбиков, Е Ю Масло, В Я Розенберг, Д Д Цынгеева // Аллергология и иммунология -2007 -Т 8,№1 -С 100-101

8 О влиянии коинфекции ВИЧ и хронического вирусного гепатита на показатели иммунитета / Н Н Цыбиков,ЕЮ Масло,В Я Розенберг, ДД Цынгеева/ /Дальневосточный журнал инфекционной патологии -2007 -№10 - С 4850

СПИШКСОКРАЩЕНИЙ

аАГ - аутоантиген аАТ - аутоантитело ЕД - единицы оптической плотности ИФА - иммуноферментный анализ ХВГ - хронический вирусный гепатит ХВГВ - хроническии вирусный гепатит В ХВГС - хронический вирусный гепатит С НЬА - главный комплекс гистосовместимости ТсЯТ - клеточный рецептор

Лицензия ИД №03 077 от 23 10 00 Подписано в печать 11 10 07 Бумага офсетная Формат 60 х 84 '/ Уел печ л-1,0 Тираж 100 Заказ № 1402007

Отпечатано в информационно-издательском центре ЧГМА 672090, Чита, ул Горького, 39а

Актуальность проблемы

Вирусные гепатиты являются одной из самых актуальных проблем современной медицины. Это определяется их повсеместным распространением, латентностью течения и выраженностью неблагоприятных исходов [16, 39, 49, 88, 102]. Из всей инфекционной патологии, вирусные гепатиты наносят наибольший экономический ущерб, уступая только гриппу и острым респираторным заболеваниям [92]. На протяжении последних нескольких лет отмечается прогрессивный рост инфицированности населения гепатотропными вирусами [1, 2, 13, 76]. В настоящее время в мире насчитывается около 350 млн носителей вируса гепатита В [10]. Вирусом гепатита С инфицировано около 10 % населения земного шара, что составляет примерно 500 - 700 млн человек, и фактически речь идет о пандемии, которая по масштабу в 5 раз превосходит зараженность вирусом СПИДа [41, 67, 135, 185]. ВОЗ прогнозирует дальнейший рост глобального распространения инфекции и числа неблагоприятных исходов ХВГС в XXI веке. Предполагается, что к 2015 - 1020 гг. число больных ХВГС в мире удвоится. В нашей стране количество инфицированных составляет 5 млн человек. При этом средний уровень обнаружения антител к ВГС в популяции колеблется от 0,3 до 0,7% и увеличивается с возрастом, достигая среди лиц старше 40 лет 2,54% [79, 92].

Угроза здоровью населения обусловлена не только летальностью от фульминантных форм гепатита, но и высокой вероятностью развития хронических форм поражения печени - хронического гепатита, цирроза печени, гепатоцеллюлярной карциномы [139, 192]. Высок риск перехода в хроническую форму при гепатите В, приобретенном перинатально или в детском возрасте. Однако еще более высокий уровень хронизации (60 -85%) характерен для гепатита С [114]. Кроме того, современные результаты исследований свидетельствуют о том, что гепатотропные вирусы являются инициаторами не только диффузных заболеваний печени, но и ряда системных заболеваний, онкогематологической патологии [35, 77, 78].

Несмотря на значительное углубление в последнее десятилетие представлений об этиологии и патогенезе вирусных заболеваний печени многие вопросы, касающиеся механизмов развития патологического процесса и его прогрессирования, остаются открытыми [53, 85, 100, 143]. Не выяснены до конца патогенез, факторы, способствующие прогрессирующему течению процесса, диагностические признаки острой и хронической форм заболевания [38, 76].

Не вызывает сомнения, что вирусные поражения печени являются иммуноопосредованными инфекциями, однако до сих пор недостаточно изучена роль нарушений иммунитета и других защитных систем в патогенезе данной патологии [23].

Не менее 10 млн человек в мире имеют сочетанную патологию -хронический вирусный гепатит и ВИЧ-инфекцию. Сходные пути передачи вирусов гепатита и вируса иммунодефицита человека - внутривенное введение психоактивных веществ (наркомания) и / или незащищенные сексуальные контакты - обусловливают высокую частоту микст-инфекции [15, 86, 98,99].

Поражение печени, вызванное ВГС - один из факторов отягощающих течение основной патологии у ВИЧ-инфицированных. Заболевание протекает, как правило, более быстро, характеризуется высоким уровнем репликации вируса по сравнению с лицами без ВИЧ, скорость развития цирроза повышается в 5 раз. При успешном контроле ВИЧ-инфекции современными антиретровирусными препаратами хроническая печеночная патология является главной причиной смертности пациентов с иммунодефицитом [64, 80, 135].

Решение поставленных вопросов представляет несомненный интерес для теоретической и клинической медицины, что и определило предмет наших исследований.

Цель и задачи исследования

Основной целью наших исследований явилось изучение иммунного статуса и определение уровня перекрестно реагирующих аутоантител различных классов к антигенам внутренних органов у больных хроническими вирусными гепатитами В и С, а также в сочетании с ВИЧ-инфекцией.

Для достижения цели решались следующие задачи:

1. Изучить состояние клеточного и гуморального иммунитета, фагоцитарную активность лейкоцитов у больных хроническими вирусными гепатитами В и С в активную и неактивную фазы, больных ВИЧ-инфекцией и при хронических вирусных гепатитах С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией.

2. Исследовать уровень перекрестно реагирующих аутоантител классов Ig А, М, G к антигенам внутренних органов (печени, сердца, поджелудочной железы) у больных хроническими вирусными гепатитами В и С в активную и неактивную фазы, больных ВИЧ-инфекцией и при хронических вирусных гепатитах С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией.

3. Оценить характер корреляционных взаимосвязей между показателями иммунитета и содержанием аутоантител к антигенам внутренних органов у больных хроническим вирусным гепатитом В и С, больных ВИЧ-инфекцией и хроническим вирусным гепатитом С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией.

Научная новизна

Впервые определен уровень аутоантител к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы, и проведена комплексная оценка иммунологических показателей у больных хроническими вирусными гепатитами В и С и больных гепатитами С и С+В в сочетании с ВИЧ-инфекцией.

Показано, что при хронических гепатитах как В, так и С увеличивается уровень аутоантител к аутоантигенам печени и других внутренних органов. Так, у больных ХВГВ и С повышен уровень аутоантител класса IgG к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы и класса IgA к антигенам печени и поджелудочной железы. Кроме этого, со стороны клеточного иммунитета отмечается снижение популяции NK-клеток (CD 16+56+), при активации процесса происходит повышение Т-киллеров (CD3+8+), а при гепатите С - и Т-активированных лимфоцитов (CD3+DR+). Иммунитет больных гепатитом С и В+С в сочетании с ВИЧ-инфекцией характеризуется стимуляцией клеточного звена за счет увеличения числа Т-лимфоцитов (CD3+), Т-киллеров (CD3+8) и Т-активированных лимфоцитов (CD3+DR+). В гуморальном звене иммунитета отмечается рост количества В-лимфоцитов.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные результаты позволяют считать изменения клеточного и гуморального иммунитета одним из звеньев патогенеза вирусного поражения печени и других органов. Значительный вклад в развитие этого состояния вносят аутоиммунные процессы, о чем свидетельствует высокий уровень аутоантител к антигенам внутренних органов у больных гепатитами.

Повышение уровня аутоантител может опосредовать патогенетические механизмы хронизации инфекции и механизмы возможного присоединения аутоиммунного звена с формированием

Внедрение в практику

Результаты работы внедрены в учебный процесс на кафедрах патофизиологии и инфекционных болезней с курсами общей и военной эпидемиологии Читинской государственной медицинской академии.

Положения, выносимые на защиту

1. У больных хроническим вирусным гепатитом С 1-2 стадии, 1-2 степени активности при повышении уровня аутоантител к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы выявлен дисбаланс в показателях иммунитета. Определяется прямая зависимость между содержанием Т-зависимых NK-клеток, Т-активированных лимфоцитов и концентрацией аутоантител класса IgG, а также обратная связь между NK-клетками и аутоантителами класса IgA к внутренним органам.

2. При хроническом вирусном гепатите В 1-2 стадии, 1-2 степени активности повышение уровня аутоантител к антигенам печени, сердца, поджелудочной железы сопровождается изменениями клеточного и гуморального иммунитета. Имеется прямая зависимость между содержанием Т-зависимых NK-клеток и концентрацией аутоантител класса IgG, а также обратная связь NK-клеток с уровнем аутоантител класса IgA к аутоантигенам внутренних органов.

3. При гепатите С и микст-гепатитах (B+C) протекающих с ВИЧ-инфекцией на фоне иммуносупрессии хелперного звена, фагоцитарной активности лейкоцитов и активации киллерных популяций существует прямая связь между Т-активированными лимфоцитами и аутоантителами IgG и обратная - NK-клеток с уровнем аутоантител класса IgA к аутоантигенам печени.

Апробация диссертации

Основные положения диссертационной работы докладывались на VI Восточно - Сибирской гастроэнтерологической конференции с международным участием «Клинико - эпидемиологические и этно -экологические проблемы заболеваний органов пищеварения» (Красноярск, 2006), на X международной молодежной научной конференции «Молодежь Забайкалья: культура здоровья - здоровое общество» (Чита, 2006), на V Всероссийской университетской научно - практической конференции молодых ученых и студентов по медицине (Тула, 2006), на 41-й всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные проблемы теоретической, экспериментальной и клинической медицины» (Тюмень, 2007), на I межрегиональной конференции «Сочетанные заболевания внутренних органов в терапевтической практике» (Иркутск, 2007), на V Всемирном конгрессе по иммунопатологии и аллергии (Москва, 2007).

11

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Исследование показателей естественной резистентности при вирусных заболеваниях печени проводятся в течение последних десятилетий. К настоящему времени установлено, что иммунитет в условиях хронической персистирующей инфекции претерпевает как количественные, так и качественные изменения.

Проводя анализ иммунологических сдвигов при вирусной патологии, мы преследовали две основные цели. Во — первых, дать комплексную оценку иммунного статуса больных гепатитами В, С и больных с микст-инфекцией ХВГ и ВИЧ. Во - вторых, оценить вклад полученных результатов в механизмы запуска аутоиммунного звена патогенеза хронизации инфекции и ее системных проявлений.

Известно, что возникновение и течение любого инфекционного процесса обусловлено характером взаимодействия возбудителя и организма, что зависит, прежде всего, от состояния защитных сил последнего. j Иммунный ответ включает в себя разнонаправленные типы эффекторных механизмов, каждый из которых наиболее оптимален в отношении определенных патогенов. При этом субпопуляции Т-хелперов, цитотоксических лимфоцитов и вся киллерная популяция играют ключевую роль в осуществлении функции противовирусной защиты [87].

В условиях хронизации гепатита С приобретают значение механизмы подавления иммунного ответа, что по результатам наших исследований нашло отражение в снижении популяций Т-хелперов (CD3+4+) и естественных клеток киллеров (CD16+56+). Среди возможных механизмов описанной реакции наибольшую роль отводят избеганию вирусом как гуморального, так и клеточного иммунного ответа путем мутаций. Предполагается, что изменение эпитопов ВГС, являющихся мишенями цитотоксических Т-лимфоцитов, может вести к нарушениям процессинга антигена [55]. Отсутствие роста популяции ЦТЛ в группе больных гепатитом минимальной степени активности от контроля может служить подтверждением предположения автора. Кроме того, установлено, что вирус гепатита С обладает способностью индуцировать пептиды, которые являются функциональными антагонистами Т-лимфоцитарных рецепторов. Вызываемая «Т-клеточная анергия» в значительной степени блокирует хелперную активность, что способствует хронизации инфекционного процесса [23]. Высказывается гипотеза о роли в персистенции ВГС его связывание с липопротеинами низкой плотности, которые, как полагают, маскируют вирус, предотвращая нейтрализацию его антителами, и, возможно, способствуют его проникновению путем эндоцитоза. Кроме того, способность вирусов реплицироваться в лимфоцитах и моноцитах нарушает их иммунную функцию, что позволяет вирусам «избегать» иммунного надзора [134].

В представленной разнице в иммунограммах больных гепатитом С в активную и неактивную фазы заболевания выявлены некоторые сдвиги. Так у больных гепатитом С исследуемые показатели отражают более напряженный иммунитет при увеличении степени активности процесса, что находит отражение в увеличении популяций Т-киллеров (CD3+8+), Т-активированных лимфоцитов(СБЗ+ВК+), а также росте уровня IgG. Полученные факты не должны вызывать удивление, так как при активации инфекционного процесса усиливаются процессы цитолиза клеток.

Полученные результаты доказывают, что СБЗ+8+-цитотоксические лимфоциты и киллерные популяции играют главную роль в элиминации вируса. Это обусловлено их способностью вызывать гибель инфицированных клеток, экспрессирующих соответствующие пептиды, презентированные молекулами HLA 1 класса.

Более отчетливые изменения со стороны Т-лимфоцитов в периферической крови больных гепатитами и гепатитами с ВИЧ-инфекцией можно обнаружить при исследовании функции этих клеток, то есть определении Т-активированных (CD3+DR+) лимфоцитов. По данным литературы у больных ХВГ выявляется увеличение числа таких клеток [164, 172] В наших исследованиях также отмечается повышение количества Т-активированных лимфоцитов у больных ХВГ в активную фазу заболевания и больных ХВГ в сочетании с ВИЧ-инфекцией.