Автореферат и диссертация по медицине (14.01.09) на тему:Хронический гепатит C

005008761

На правах рукописи

АЛЕКСАНДРОВА Людмила Николаевна

ХРОНИЧЕСКИМ ГЕПАТИТ С: ВОЗМОЖНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ АНТИГИПОКСАНТОВ ДЛЯ МЕТАБОЛИЧЕСКОЙ КОРРЕКЦИИ.

14.01.09 - инфекционные болезни

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 ОЕВ ті

Санкт-Петербург

2012

005008761

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней ГБОУ ВПО «СевероЗападный государственный медицинский университет им. И.И.Мечникова» Минздравсоцразвития России

Научный руководитель

доктор медицинских наук,

профессор Романцов Михаил Григорьевич

Официальные оппоненты

доктор медицинских наук,

профессор Антонова Тамара Васильевна

доктор медицинских наук Горячева Лариса Георгиевна

Ведущая организация: ГБОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет им. В.И. Разумовского» Минздравсоцразвития России.

Защита диссертации состоится $7 2012 года в 1315 часов

на заседании диссертационного совета Д 20S.O9O.O2 при ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Минздравсоцразвития России в НИИ Пульмонологии по адресу Санкт-Петербург, 197022, ул. Рентгена 12.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Санкт-Петербургский государственный медицинский университет им. И.П. Павлова» Минздравсоцразвития России по адресу Санкт-Петербург, 197022, ул. Л.Толстого 6-8

Автореферат разослан

2012 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

Александров А.Л.

Актуальность проблемы. Вирусный гепатит С (ВГС) является растущей проблемой мирового здравоохранения, затрагивая около 170 млн людей, а распространенность HCV- инфекции достигает 20%. HCV - одна из основных причин формирования цирроза печени и гепатоцеллюлярной карциномы (Keefe Е.В., 2008; Geppert С.М.А., 2008 ; Webster D.P., 2009; Nelson D.R., 2009). В России хронический гепатит С (ХГС) остается серьезной социальной и медицинской проблемой, представляя угрозу национальной безопасности страны, поскольку численность больных ХГС приближается к 2 млн. Заболеваемость гепатитом С составляет 12 человек на 100 000 населения, а возраст пациентов обычно не превышает 40 лет (Ивашкин В. Т., 2005; Малеев В.В., 2007; Онищенко Г.Г.,2008; Антонова Т.В., 2010; Белобородова Э.И., 2010; Сологуб Т.В., 2010).

Патогенетические механизмы повреждения печени многообразны, для них характерно развитие цитолиза, воспалительной реакции, с последующим прогрессированием фиброза. Подобный сценарий развития патологического процесса, с разным инициирующим агентом, формирует хронические заболевания печени. (Никитин И.Г., 2007). В патогенезе повреждения гепатоцитов значительную роль играет тканевая гипоксия, приводящая к нарушению функций митохондрий, истощению запасов АТФ с активацией свободнорадикальных процессов (Антонова Т.В., Лукьянова Л.Д., 2004; Радченко В.Г., 2005; Сологуб Т.В., 2010). HCV, вызывая оксидативный стресс с повреждением митохондриальной мембраны, снижает активность ферментных комплексов дыхательной цепи, способствуя развитию тканевой гипоксии (Граник В.Г., 2006; Хазанов

В.А., 2009; Ripoli М., 2010;). Гипоксическое повреждение печени обусловлено активными кислородными метаболитами (Klune J.R., 2010), синтезируемыми клетками Купфера. Подавляя антиоксидантную защиту, АКМ способствуют развитию внепеченочных осложнений (Лазебник Л.Б., 2003; Оковитый Ю.Н., 2010; Коваленко А.Л. 2010; Simula М.Р., 2010; Bhogal R.H., 2010).

Арсенал лекарственных средств, ориентированных на лечение хронических поражений печени (адекватной моделью является ХГС) включает средства метаболической терапии, эффективность которых не всегда достаточна,

что послужило основанием для включения митохондриального субстрата (янтарная кислота, сукцинат) в разрабатываемые оригинальные композиции (Коваленко А. Л., 2005). Созданные лекарственные средства Кожока Т.Г. (2007) выделил в фармацевтическую группу, «субстраты энергетического обмена)) или «субстратные антигипоксанты». Их действие носит неспецифический характер, уменьшая уровень активных метаболитов кислорода (На Н.Ь.,2010), повышая клиническую эффективность терапии (Гордюшина И.В.,2002; Шешунов И.В., 2006; Качалина Т.С., 2007; Мазина Н.К.,2009; Клембовский А.И., 2008; Хазанов В.А., 2009; Сологуб Т.В., 2010).

Таким образом, изучение фармакотерапевтической эффективности «субстратов энергетического обмена», включая механизм действия при хронических поражениях печени, роль которой в метаболических реакциях организма исключительна, представляется актуальным и весьма своевременным.

Цель исследования: на основании комплексного клинико-лабораторного, психологического обследования оценить течение инфекционного процесса и влияние на него лекарственных средств, ориентированных на коррекцию митохондриальной дисфункции, у больных хронической НСУ-инфекцией.

Задачи исследования:

1 .Охарактеризовать механизм действия сукцинат содержащих препаратов при моделировании вирусного, лекарственного и токсического повреждения печени у экспериментальных животных, обосновав их клиническое применение.

2.Изучить особенности течения хронического поражения печени и выявить психосоциальные изменения больных хроническим гепатитом С.

3.Оценить фармакотерапевтическую эффективность сукцинат содержащих препаратов, их влияние на уровень качества жизни и психосоциальную активность больных хронической НСУ-инфекцией.

Личный вклад автора в проведение исследования. Автор непосредственно планировала исследование, провела клиническое наблюдение и заполнила необходимую медицинскую документацию, выполнила статистическую обработку экспериментальных данных, обобщила результаты, выполненных клинических и лабораторных исследований, провела анализ и интерпретацию

полученных результатов.

Научная новизна. На экспериментальных моделях развития поражения печени, инициирующих повреждение гепатоцита разным этиологическим воздействием, охарактеризованы гепатопротективные свойства субстратных анти-гипоксантов, посредством изучения их антигипоксантного/антиоксидантного, мембраностабилизирующего и метаболического эффектов. Изучена их клиническая эффективность, показано влияние на ферментное звено антиоксидант-ной системы при хроническом поражении печени, установлено их позитивное влияние на психосоциальную активность больных, что привело к улучшению качества их жизни.

Практическая значимость работы заключается в применении при хронических поражениях печени различного генеза субстратных антигипоксантов с целью коррекции метаболических нарушений, вызывающих повреждения ге-патоцитов. Согласно патогенетическим механизмам развития патологического процесса в печени для стабилизации активности ферментативных систем ан-тиоксидантной защиты предложены схемы применения субстратных антигипоксантов с целью минимизации цитолиза, мезенхимально-воспалительного и холестатического синдромов.

Внедрение. Материалы исследования включены в главу «Гепатопротекто-ры с антиоксидантной активностью при поражениях печени», учебные пособия «Вирусные гепатиты. Современные аспекты терапии и фармакоэкономики» (УМО от 04.06.2007), «Свободнорадикальные процессы и воспаление (патогенетические, клинические и терапевтические аспекты)» (2008). Результаты исследования используются при проведении практических занятий и чтении лекций на кафедрах инфекционных болезней Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И.Мечникова, Саратовского государственного медицинского университета им. В.И.Разумовского. Полученные результаты работы внедрены в практическую работу Калининградской областной инфекционной больницы, инфекционных отделений Пензенского областного центра специализированных видов медицинской помощи.

Апробация работы. Основные положения работы доложены на междуна-

родной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, РУДН, 2005). На Юбилейной межвузовской конференции «Молодежная наука и современность» (Курск, КГМА, 2005). На Российском съезде врачей инфекционистов (Нижний Новгород, 2006). На научно-практической конференции «Социально-значимые инфекции», в рамках международной конференции, посвященной 100-тию СПбГМА им. И.И.Мечникова (Санкт-Петербург, 2007). На Ш-й Южно-Российской научно-практической конференции «Актуальные вопросы инфекционной патологии» (Сочи, 2008). На международных конференциях «Современные подходы к диагностике и лечению в инфектологии» (Харьков, 2007); «Инфекции в практике клинициста» (Харьков, 2008); «Инфекционные и паразитарные болезни в практике клинициста» (Харьков, 2010), «9 международном симпозиуме гепатологов Беларуси» (Брест, 2011).

Публикации. Основные положения и выводы диссертационного исследования опубликованы в 9 научных работах, в том числе в 4-х статьях, рекомендованных ВАК.

Основные положения, выносимые на защиту

1.В патогенезе поражения гепатоцитов, независимо от этиологического фактора, значительную роль играет оксидантный стресс с последующим повреждением митохондриальных мембран и развитием тканевой гипоксии.

2.Сукцинаты при вирусном, токсическом и лекарственном поражения печени оказывают гепатопротективное действие, посредством реализации антигипо-ксического, антиоксидантного и мембранопротекторного эффектов.

3.Умеренно выраженная активность патологического процесса, преобладание астеновегетативного, диспептического синдромов, нарушения психосоциальной активности, формирование синдрома «умеренно выраженной астении» -являются особенностью хронического поражения печени.

4.Субстратные антигипоксанты, подавляя процессы липопероксидации, стабилизируют антиоксидантную защиту, улучшая функциональную активность печени, минимизируют выраженность синдрома умеренной астении, повышая социальную активность больных.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 136 страницах текста компьютерного набора, состоит из введения, обзора литературы, главы материал и методы, результатов собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов и практических рекомендаций. В списке используемой литературы приведены данные 226 источников, из которых 135 отечественных и 91 иностранных авторов. Работа иллюстрирована 34 таблицами, 10 рисунками, двумя клиническими примерами.

Материал и методы исследования

Клиническое исследование выполнено на кафедре инфекционных болезней Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И. И. Мечникова (7-е отделение городской инфекционной клинической больницы № 30 им. Н.П.Боткина).

В клиническое исследование включено 138 больных в возрасте от 19 до 58 лет, мужчин 102 (73.9%), женщин 36 (26.1%), средний возраст больных составил 36,0±6.3 лет, с верифицированным диагнозом: «Хронический гепатит С». Проводимое исследование согласовано с этическим комитетом ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская медицинская академия им.И.И. Мечникова» и этическим комитетом Санкт-Петербургской клинической инфекционной больницы №30. Дизайн исследования - контрольно-сравнительное изучение фармакотерапев-тической эффективности сукцинат содержащих препаратов. Метод клиниколабораторного анализа включал: осмотр пациентов по органам и системам, определение размеров печени по Курлову. Клинико-биохимические исследования проводились в соответствии со стандартами обследования больных хроническим вирусным гепатитом. Генотип ПСУ определялся с помощью наборов "АмплиСенс НСУ-Генотип" ЦНИИ эпидемиологии. При биохимическом исследовании для выявления синдрома цитолиза, определяли активность амино-трансфераз (АлАТ, АсАТ) по Райтману и Френкелю в модификации К. Г. Капе-танаки и Т. С. Гладкова (1962); для определения характера нарушений пигментного обмена - содержание билирубина в сыворотке крови методом Ендра-шика (1963). Для выявления нарушений белково-синтетической функции печени использованы методы: определение общего белка и белковых фракций сы-

воротки крови микробиуретовым методом по Д. Бейли (1965). Для выявления холестаза определялся уровень щелочной фосфатазы и гамма-глютамилтранспептидазы ферментным методом с использованием унифицированных наборов фирмы «Human». Определение биохимических параметров (протромбиновый индекс, фибриноген, лактатдегидрогеназа, тимоловая проба, креатинин, мочевина) проводилось на автоматическом биохимическом анализаторе Integra 400 фирмы Roche (Швейцария). Для оценки показателей антиок-сидантной системы (АОС) изучены активность каталазы и супероксиддисмута-зы (СОД) гомонизата крови (Чумаков В.Н., Осинская П.Ф., 1979).

Инструментальные методы исследования больных включали проведение ультразвукового исследования органов брюшной полости аппаратом «Hitachi EUB-450», учитывались размеры печени, уровень эхогенности, однородность структуры ткани, характеристика контуров, изменений сосудистого рисунка. Оценка параметров качества жизни проведена с использованием шкалы «SF=36», позволяющей больным субъективно оценить состояние здоровья и высказать мнение о проводимом лечении. Психологические изменения

наблюдаемых больных оценивались по тесту BSI, ориентированного на выявление синдромов пограничного состояния (Коваленко С.Н., с соавт.,2005).

Экспериментальная часть исследований выполнена в лаборатории лекарственной токсикологии ФГУН «Институт токсикологии» ФМБА. Токсическое поражение печени изучено при введении животным (мыши п=49) экстракта грибов, включающего токсины: а/ р-аманитины, фаллоидин, Доза 1 ЬД50 вводимого экстракта составила - 0,67±0,21 мл/10 г. Для оценки вирусного поражения печени использована модель аденовирусного гепатита (хомячки п=39). Лекарственное поражение печени моделировалось у животных (n=21) введением гепатотропного яда - циклофосфана в дозе ЬД5о (200 мг/кг массы) (Коваленко А.Л., 2005).

В работе (экспериментальном и клиническом разделе) использованы лекарственные препараты, являющиеся субстратными композициями сукцината (янтарной кислоты): ремаксол - раствор для инфузий, метаболическое средство, показан больным с токсическим, лекарственным, алкогольным, вирусным по-

ражением печени.; цитофлавин - метаболическое средство, ориентирован на гипоксические/ишемические состояния, на лечение энцефалопатий различного генеза, включая печеночную. Глюкоза использована как субстрат энергетического обмена, усиливая окислительно-восстановительные процессы в организме, улучшая антитоксическую функцию печени, оказывает дезинтоксикацион-ное, метаболическое действие. (Кожока Т.Г., 2007).

Рандомизация больных проведена с помощью метода «конвертов» на 3 группы: пациенты 1-ой группы (51 человек) получали препарат ремаксол, раствор для инфузий, больным 2 группы (38 человек) вводился раствор цито-флавина, больные 3-й группы (49 человек) получали 5% раствор глюкозы (группа сравнения).

Для статистической обработки полученных данных использованы программы Excel 2000 и Statistica 5.5. Оценка значимости различий между группами проведена с помощью U-критерия Манна-Уитни, Т-критерия Вилкоксона, параметрического t-критерия Стьюдента. Уровень значимости выбран равным 0,05, результат считается статистически значимым, если р<0,05.

Результаты исследования и обсуждение

Фармакологическая активность сукцинат содержащих препаратов при вирусном, токсическом и лекарственном поражении печени (экспериментальные исследования)

На экспериментальных моделях вирусного, токсического и лекарственного гепатитов изучена фармакологическая активность препаратов ремаксола и ци-тофлавина. Вирусное поражение печени животных сопровождалось цитолизом. На это указывало повышение активности АлАт (в 9.5 раз), в сравнении с контролем (0.20 ±0.03мккат/л). Повышенный уровень процессов липопероксида-ции (повышение МДА в 3.3 раза), сниженная активность ферментативного звена внутриклеточной АОС (каталаза в 2.4 раза) и сдвиг энергетического метаболизма клеток в сторону анаэробного гликолиза (рост ЛДГ в 1.8 раз), свидетельствовали о метаболических нарушениях. Уровень щелочной фосфатазы и тимоловой пробы повышены, соответственно в 3.1 и 3.4 раза, при концентрации билирубина, превышающего норму в 2.3 раза.

Сукцинат содержащие препараты уменьшали число очагов вирусного поражения печени. Цитофлавин сохранял 7.5 (от 6 до 9) очагов, ремаксол 4 (от 3 до 5) очагов, а в группе животных без лечения, на фоне прогрессирующего поражения печени, число очагов составило 14.5 ( от 11 до 18) на 10 мм2площади среза. Торможение некротических процессов у животных, получавших терапию, значительнее выражено под воздействием ремаксола, чем под влиянием цитофлавина.

У животных, при токсическом поражении печени, повышена (в 13.6 раза) активность Ал АТ, которая составила 2.45±0.11 при уровне у интактных животных 0.18 ±0.03 мккат/л. Уровень билирубина достиг 7.5+0.3, против 4.0 ±0.4 ммоль/л (интактные животные), на фоне увеличения ЛДГ в 1.8 раза, тимоловой пробы - в 3.5 раза. В 8.3 раза снижен резерв сульфгидрильных групп и гликогена (в 5.2 раза), при падении уровня восстановленного глютатиона до 51.0±7.5, против 136.0±7.0мг%. При индивидуальной динамике показателей наблюдалось снижение (-2.3-1.4 ммоль/л) уровня билирубина, цитолиза (1.84-1.53 мккат/л) на фоне терапии сукцинат содержащими препаратами, соответственно ремаксолом и цитофлавином.

Анализируя результаты экспериментальных исследований, показано анти-оксидантное действие (повышение уровня восстановленного глютатиона, сохранение концентрации сульфгидрильных групп белков в печени, на уровне контроля, стабилизация тиолдисульфидного статуса гепатоцитов). Повышение активности антиперекисной защиты препятствует повреждению клеток реакционными продуктами метаболизма. Уровень МДА и концентрация ДК у животных без лечения превышали норму в 2.2. раза. Ремаксол снижал в 1.2 и

1.9 раза уровень МДА и ДК, которые составили 17.45±3.97 при уровне у интактных животных 14.77±0.68 нмоль/гткани. Сукцинат содержащие препараты увеличивали низкую активность каталазы, индуцируя влияние на ферменты первой линии антиоксидантной защиты, предупреждая рост пероксидации липидов в клетках печени. На снижение интенсивности процессов перекисного окисления липидов, вызванных различными факторами в митохондриях гепа-

тоцитов после использования сукцината, указывали Ваизов В.Х. (1994); Fariss M.W. (1994).

Антиоксидантный эффект доказан по росту концентрации низкомолекулярного антиоксиданта клетки - восстановленного глютатиона. Уровень глютатио-на увеличился на +61.0 и +32.0%, соответственно, под влиянием цитофлавина и ремаксола. Снижение (-1.62 и -1.12 ммоль/ч/л) активности ЛДГ связано с "эффектом Пастера" - сдвиг влево финальной реакции гликолиза при достаточном количестве кислорода, что говорит о переходе энергетического обмена на аэробный тип и характеризует антигипоксический эффект сукцинат содержащих препаратов. Восстановление уровня глютатиона и сохранение его уровня в течение 24-х часов связано с метионином, входящим в состав ремаксола.

В связи с нарушением естественной цитопротекции, изучена интенсивность перекисного окисления липидов и процессы клеточного дыхания в ткани печени (моделирование лекарственного поражения) экспериментальных животных, которым вводился циклофосфан. Препарат подавлял (в 3.3 раза) интенсивность утилизации NAD - зависимо окисляемых субстратов (до 0.14±0.01, против 0.46 ±0.01мкл/мг), вызывая в клетках печени биоэнергетическую гипоксию, истощая пул восстановленного NADH+ в клетках печени. Внесение в среду инкубации сукцинатов повышало (до 2.2 ± 0.03, против 0.85 ± 0.03 мкл/мг) скорость потребления кислорода у животных, восстанавливая содержание сульфгидрильных групп (16.7±0.3, против 10.6 ±0.7, при норме14.7±0.7 мкмоль/г), указывая на их антигипоксантное действие. На истощение энергетических субстратов гепатоцитов, необходимых для антирадикальной защиты, указывает падение активности Г-6-Ф-ДГ, фермента - основного источника НАДФН в реакциях пентозофосфатного пути окисления глюкозы и кофермента для редуктазы цитохрома Р 450 и глютатионредуктазы. Индуцированная выработка Г-6-Ф-ДГ, обеспечивает цитопротекторное действие, предупреждая истощение пула восстановленной формы глютатионредуктазы, восстанавливая глютатион (Liu Н., Kehrer J.;1996). Отмечена тенденция к нормализации активности каталазы, концентрация которой увеличивалась в 1.6 раза, умеренно превысив (+119.67 мкмоль/г) уровень интактных животных. Эффект подтвержден

изучением активности глютатионпероксидазы — «предупредительного» фермента антиоксидантной защиты, а также конечных продуктов перекисного окисления липидов. Активность малонового диальдегида и диеновых конъюгат снизилась до 316.7± 15.3 и 17.45±3.97 при уровне интактных животных 175.5± 18.8 и 14.77±0.68 нмоль/гткани, соответственно. Уровень защиты клеток, от избытка эндогенных метаболитов и ксенобиотиков, осуществляет глютатион -S- трансфераза, локализованная в цитозоле, митохондриях и ядрах клеток, являющаяся важным защитным механизмом клетки, как за счет реакций конъюгации, так и за счет ковалентной и нековалентной связи различных субстратов (Северин Е.С., 2009). Индуцирующее влияние препаратов на активность фермента способствовало достижению ее уровня 572.5±45.0, против 346.8± 17.2 мкмоль/гткани, превысив в 1.4 раза, уровень интактных животных.

Мембраностабилизирующий эффект препаратов проявился снижением активности индикаторных печеночных ферментов и сопровождался падением уровня гидроперекисей липидов, а детоксицирующий эффект проявился уменьшением эндогенной интоксикации. Ведущая роль в обезвреживании Нг02 и органических гидроперекисей в условиях перекисного стресса принадлежит глютатионпероксидазе. Падение (в 1.3 раза) активности фермента, в сравнении с уровнем фермента интактных животных, составило -5.76 мкмоль/гткани. Образующиеся в результате окислительного стресса активные формы кислорода повреждают не только липидные и белковые структуры, но и нуклеиновые кислоты, вызывая цитолиз (Т.Е.Сосина с соавт., 2004; А.Ю.Петров с соавт., 2004).

Таким образом, сукцинат содержащие препараты, восстанавливая метаболизм энергетических субстратов гепатоцитов, реализуют антиоксидантный, мембраностабилизирующий и антигипоксантный эффекты. Снижая уровень билирубина и щелочной фосфатазы, повышая активность глютатион-S-трансферазы обеспечивают детоксицирующую функцию. Доказанные фармакологические свойства препаратов позволили рассматривать их как перспективные лекарственные средства, обладающие гепатопротективной активностью, которые целесообразно использовать в клинике при поражении печеноч-

ной паренхимы с целью коррекции метаболических нарушений.

Клинико-лабораторная характеристика метаболических нарушений больных хроническим поражением печени и их коррекция сукцинат содержащими антиоксидантами

Основные клинические симптомы ХГС неспецифичны и наблюдаются при хронических заболеваниях печени любой этиологии, а повреждения печени с нарушением метаболизма, требуют адекватной патогенетической терапии (Апросина З.Г. 2002; Раков А.Л. 2006; Оковитый Ю.Н, 2010; В.А.Хазанов, 2009; Сологуб Т.В., 2010). Среди жалоб у больных преобладали признаки астенове-гетативного синдрома: слабость наблюдалась у (110) 79.7% больных; утомляемость у 66.1% пациентов, повышенная потливость в 3,0% случаев. Жалобы диспептического характера выявлялись у 23.2-28.3% пациентов и сочетались с астеновегетативным синдромом. 26.8% больных жаловались на тошноту после приема пищи или в перерывах между ее приемами. Болезненность живота выявлена у 45 (32.6%) наблюдаемых больных.

Необходимо отметить, наличие психоневрологических дисфункций, проявляющихся снижением внимания у 68 (49.3%) больных, нарушением сна у 33 (23.9%) пациентов, у 8 (5.8%) % больных - эмоциональной лабильностью и подавленностью. Проведенная оценка психологических особенностей пациентов выявила «снижение психической активности», характеризующееся физической слабостью, повышенной истощаемостью, раздражительностью, снижением продуктивности психических процессов и вегетативносоматическими нарушениями. Исследование симптоматики (тест В81) у пациентов подтвердило наличие психологических изменений личности, характеризующихся выраженностью тревожности и депрессии, затруднением продуктивного контакта с окружением. Показаны специфические черты, по результатам исследования копинг-механизмов, характеризующие способность адаптации к проблеме. Так в «поведенческой сфере» наблюдалось обращения за помощью. В «когнитивной сфере» отмечена растерянность, в «эмоциональной сфере» - самообвинение.

У наблюдаемых пациентов, выявлен повышенный уровень липопероксида-

ции, проявляющийся увеличением уровня ДК и МДА. Патологический процесс проявился умеренно-выраженной активностью у 45% больных по уровню АлАТ, увеличение активности которой составило от 4 до 8Ы, низкая активность отмечена у 36.4%, а высокая активность проявилась лишь у 18.5% больных. Дисбаланс со стороны белкового обмена, проявился снижением уровня альбумина и увеличением фракции у-глобулина с тенденцией к повышению фракций р,ир2. У больных хроническим гепатитом С сопутствующие соматические заболевания регистрировались в 92.8% случаев. Симптомокомплекс, со стороны желудочно-кишечного тракта в виде диспептического синдрома наблюдался в 23.2-28.3% случаев, нарушение пигментного обмена выявлено у 29.7% больных. У 32.6% пациентов определялась болезненность при пальпации области правого подреберья, гепатомегалия отмечена у 88.4%, а спленомегалия - в 9,4% случаев. Астеновегетативный (слабость, утомляемость, нарушение сна) синдром являлся ведущим и сопутствовал 81,2% больным.

Патогенетическая терапия хронических поражений печени направлена на адекватную фармакологическую коррекцию мультифакторных звеньев патогенеза (С.В.Оковитый, 2010). НСУ, снижая метаболическую активность митохондрий, способствует развитию гипоксии, а антиоксиданты, регулирующие гомеостаз клетки, повышая активность ферментов дыхательной цепи, минимизируют дистрофические изменения в печени, предотвращая индуцированную активными метаболитами кислорода, клеточную гибель при гипоксии (ШроН М., 2010; вапе ЕЛ., 2010).

Наблюдаемые пациенты с ХГС, рандомизированны, используя метод «конвертов» на 3 группы: больным 1-й группы (п=51) вводился раствор ремаксола для инфузий; пациенты 3-й группы (п=49) получали 5% раствор глюкозы -препарат сравнения. Больным, включенным при проведении рандомизации во 2 -ю группу (п=38), назначен раствор цитофлавина для внутривенного введения.

Больные имели умеренно-выраженную и низкую активность вирусного процесса, что составило, соответственно, 43-47% и 31-39% (табл.1). Определение генотипа НСУ проведено 62 больным, преобладал генотип 1Ь (51,6%) и генотип За (33,9%). Течение ХГС, по частоте и выраженности клини-

ческих проявлений, характеризовалось минимально-выраженными признаками.

Таблица 1.

Активность патологического процесса у наблюдаемых больных ХГС

Степень активности Наблюдаемые группы больных

Г руппа 1, больные, получавшие ремаксол, п=51 Группа 3, больные получавшие, раствор глюкозы 5%,п=49 Г руппа 2, больные, получавшие цитофлавин, п=38

Высокая (>8Ы) 9/17.6±2.2 8/16.3±1.7 8/21.1±1.9

Умеренная (4-8Ы) 22/43.1±1.9 22/44.9±1.4 18/47.3±1.6

Низкая (<4Ы) 20/39.2±1.7 19/38.8±1.1 12/31.6±1.4

Индивидуальная динамика показателей, характеризующих функциональную активность печени (табл.2), показывает, что у пациентов 1-й группы, получавших ремаксол, наблюдалась более быстрое снижение (-79.7 МЕ) у-ГГТП, у получавших цитофлавин (группа 2) оно составило -57,7 МЕ, против -40.8 МЕ, пациентов группы сравнения. На этом фоне отмечено снижение общего билирубина, уровень которого к окончанию лечения нормализовался. У пациентов 2-группы, получавших цитофлавин, динамика холестатического синдрома была менее выражена, составив -57.7 и -19.0, соответственно, в сравнении с пациентами 1-й группы, получавших ремаксол.

Щелочная фосфатаза - дефосфорилирует белки, снижая активность регуляторных ферментов. Её средние уровни были незначительно выше, чем у здоровых лиц (138,2 и 139,7, при норме до 120МЕ/л), а частота гиперферменте-мии не превышала 33,5%. Хроническое поражение печени носит смешанный гепатоцеллюлярный/холестатический характер, что подтверждается коэффициентом (Я) ЩФ/АлАТ равным Л<2. До лечения больных препаратами он равнялся 0,49±0,01, а у больных группы сравнения 0.73, терапия сукцинатсодер-жащими растворами увеличила коэффициент до 0.82, а у пациентов группы сравнения он равнялся 0.63.

Таблица 2.

Динамика изменений показателей, характеризующих функциональную активность печени, под влиянием проводимой терапии

Г руппы больных, Препарат Изменение ( Д -дельта) показателя в динамике наблюдения

ГГТП-у ЩФ БИЛ лдг АлАТ А с АТ

1-я, п=51, ремаксол •79.7+1.4* ■26.1+0.2* -31.9+0.9* ■169.5+3.1* 149.5+4.1** 82.0+1.1**

3-я, п=49; глюкоза -40.8+0.7 -7.8+0.08 -14.5+0.4 +41.7+3.4 -22.5+2.2 -18.7+0.6

2-я,п=38 Цитоф лавин -57.7+1.3" 19.0+0.2* -26.5+0.2* ■135.9+3.3* 148.0+3.8** 60.8+1.1**

р<0.05*; 0.01** в сравнении с группой контроля (больные, получавшие глюкозу 5% раствор)

Проявление мезенхимально-воспалительного синдрома в зависимости от вида применяемого лечения характеризуется тем, что до начала лечения у больных всех групп выявлен умеренный дисбаланс со стороны белковых фракций, проявляющийся падением общего белка, умеренным снижением ( в 1.1 раза) уровня альбумина, повышенным (1.3 раза) содержанием фракции у-глобулина. Увеличение (+3.3 г/л) альбуминов отмечено после лечения ремак-солом на фоне выраженного (-2.4%) снижения у-глобулина (до 17.9+0.3) под влиянием ремаксола, умеренное ( в 1.1 раза) его падение под влиянием цито-флавина (18.7±0.4) с отсутствием изменений у больных, получавших раствор глюкозы. Уровни креатинина, мочевины на протяжении курса терапии не менялись, а частота их повышенных значений была от 0 до 2,1%, без значимых изменений в ходе лечения. Цитолитический синдром (катаболизм нуклеиновых кислот за счет распада ядер гепатоцитов) косвенно характеризует и уровень мочевой кислоты (369-396 мкмоль/л), который соответствовал средним значениям нормы (214-458 мкмоль/л). В динамике наблюдения отмечался небольшой рост (в пределах значений нормы), что связано с процессами окисления пуриновых азотистых оснований на микросомах (цитохром Р450, НАДФ-зависимые дегидрогиназы), с активацией ферментов дыхательной цепи и увеличением синтеза и потребления макроэргов, прежде всего АТФ, одним из конечных продуктов метаболизма которых является мочевая кислота. Подобного

факта у больных, получавших глюкозу, выявлено не было. Следовательно, «транзиторная гиперурикемия», отражает антигипоксическое действие сукци-нат содержащих растворов, поскольку образование мочевой кислоты из гипоксантина под действием ксантиноксидазы (как конечного продукта распада пуринов) возможно, только в гепатоцитах, и не происходит в других клеточных структурах (Северин Е.С., 2009, Зайчик А.Ш., 2002).

Прооксидантную и антиоксидантную системы оценивали с помощью тестов, характеризующих процессы перекисного окисления липидов и активность ферментов (СОД. каталаза), обезвреживающих токсичные продукты ПОЛ. До начала терапии у больных ХГС наблюдалась интенсификация процессов ПОЛ, проявляясь нарастанием концентрации продуктов липопероксидации (МДА и ДК). Антиоксидантная система характеризовалась снижением активности факторов обезвреживающих первичные кислородные радикалы - СОД и каталазы в 1.3 и 1.4 раза, соответственно.

У больных, получавших цитофлавин и ремаксол, наблюдалось снижение активности продуктов липопероксидации (МДА ДК), составив, 4.1 ± 1.1 и 3.9± 1.4, позволив стабилизировать процессы липопероксидации, за счет повышения активности ферментов СОД (до 16.2 и 11.2 усл.ед, соответственно) и каталазы (до 8.3 и 11.7мккат/л, соответственно) (рис.1).

Рис.1. Динамика изменений показателей, характеризующих активность проок-сидантной и антиоксидантной систем, у больных ХГС

Повышение активности каталазы связано с увеличением концентрации ее субстрата - перекиси водорода, являющегося продуктом восстановления кислорода в дыхательной цепи. Нарастание концентрации янтарной кислоты, на фоне введения сукцинатсодержащих растворов, происходит за счет усиления активности ФАД-зависимой сукцинатдегидрогеназы (чему способствует и увеличение концентрации рибофлавина - кофактора фермента входящего в состав цитофлавина), катализирующей 5-ю реакцию цикла трикарбоновых кислот (ЦТК), входящей в состав 2-го митохондриального ферментного комплекса. В результате, пероксидный радикал, активирует антиоксидантные системы клетки, характеризуя механизм действия сукцината (Мартинович Г.Г, 2007; Чиркин А.А.,2010).

У больных, группы сравнения (3-я), изменение показателей было минимальным, составив по уровню каталазы 1.8, а вот активность СОД снизилась на -З.Оусл.ед.

Активность ферментов, инактивирующих супероксид-анион радикал и перекись водорода (при введении сукцинат содержащих растворов) объясняется антигипоксическим действием препаратов, обуславливая рост количества субстрата второго ферментного комплекса (сукцинат) и, как следствие, повышенную «утечку» электронов 3-го ферментного комплекса (коэнзим Q), с образованием субстрата для СОД и каталазы (Кухта В.К., 2008). Таким образом, помимо реализации положительного антиоксидантного эффекта, данный факт является «свидетелем» антигипоксического действия препаратов янтарной кислоты, указывая на активацию аэробных путей метаболизма в митохондриях.

Оценивая качество жизни (тест SF=36) пациентов, получавших сукцинат содержащие препараты, после окончания терапии, показано улучшение (на +7.6.балла) физической активности (PF), увеличился на +6.8 средний балл, характеризующий показатель психического здоровья. Социальная активность больных увеличилась на +6,27 баллов, составив 45.8.

Удовлетворительный психосоциальный статус пациентов, после лечения отмечен у 68,5% больных, максимальное улучшение наблюдалось в 85.2% случаев по шкале социализация личности, а у 80% больных по шкале вербаль-

ные коммуникации. На улучшение внимания, памяти указали 71% пациентов. При оценке психологических изменений личности больных (в тесте ВБ1 -опроснике, для выявления синдрома пограничных состояний) по окончании проведения лечения, показано уменьшение (-0.53) выраженности дисстресса до 1.29 с 1.В2, по шкалам соматизации, неуверенности в социальных контактах, тревожности, депрессивности.

Таким образом, стабилизация мезенхимально-воспалительного синдрома обеспечивается увеличением альбуминовой фракции, снижением уровня гамма-глобулинов, минимизируя белковый дисбаланс. Подавление процессов липо-пероксидации и стабилизация антиоксидантного статуса реализуется нарастанием активности СОД и стабилизации каталазы. Сукцинат содержащие препараты повышают физическую активность, улучшают психическое состояние, уменьшая выраженность дистресса, активизируя социальную активность больных.

Выводы

1.Течение хронического поражения печени у животных, индуцированное вирусным, токсическим и лекарственным повреждением паренхимы, сопровождается цитолизом, холестазом, усилением процессов липопероксидации, подавлением ферментативного звена антиоксидантной системы, сдвигом энергетического метаболизма в сторону анаэробного гликолиза, вызывая биоэнергетическую гипоксию и метаболические нарушения в паренхиме печени.

2.На экспериментальных моделях хронического поражения печени показано, что сукцинат содержащие препараты, реализуют антигипоксантный, антиокси-дантный, мембраностабилизирующий, и детоксицирующий фармакологические эффекты, обеспечивая цитопротекторное действие, позволяя рассматривать их как перспективные композиции, обладающие гепатопротекторной активностью.

3.Хроническое поражение печени проявляется умеренно выраженной активностью процесса (45.0%), наличием астеновегетативного (81.2%) и диспети-ческого (46.4%) синдромов, присутствием психологического дискомфорта (5.8 - 29.3%), включающего умеренно выраженную астению на фоне наличия

тревожности, депрессии (8.9-10.3%), что затрудняет продуктивный социальный контакт с окружением (5.12%).

4.Клиническая эффективность сукцинат содержащих препаратов обеспечивается гепатопротекторной активностью, проявляющейся снижением цитолиза, холестаза, подавлением процессов липопероксидации, стабилизацией ферментов первой линии (СОД, каталаза) антиоксидантной защиты, а также повышением физической активности, улучшением психического состояния и социальной активности больных.

Практические рекомендации Назначение субстратных антигипоксантов (ремаксол, цитофлавин), рекомендовано больным с хроническим поражением печени различного генеза (вирусного, токсического, лекарственного) для патогенетической терапии, корригирующей метаболический дисбаланс. В качестве критериев эффективности патогенетической терапии необходимо рассматривать стабилизацию антиоксидантного статуса (подавление процессов ПОЛ, нарастание активности СОД и уровня каталазы) на фоне снижения (нормализации) цитолиза и синдрома холестаза,

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Гордюшина И.В., Александрова Л.Н., Петров А.Ю., Романцов М.Г. Коррекция цитофлавином антиоксидантной системы и фосфолипидного спек-тра//ВРАЧ.- 2005.- №4.- С.75-77.

2.Александрова Л.Н., Суханов Д.С., Петров А.Ю., Погромская М.Н., Коваленко А.Л., Романцов М.Г.Оценка гепатопротекторной активности метаболической композиции на основе янтарной кислоты //Материалы Российского съезда инфекционистов. - Нижний Новгород.- 2006,- С.239-240.

3.Александрова Л.Н., Суханов Д.С., Коваленко А.Л., Саватеева Т.Н., Романцов М.Г.Эффективность сукцинат содержащих препаратов при хронических диффузных заболеваниях печени//Социально-значимые инфекции,- Санкт-Петербург.-2007,- С.29-31.

4. Суханов Д.С., Александрова Л.Н. Саватеева Т.Н., Лазаренко Л.Л., Кова-

ленко А.Л., Романцов М.Г. Коррекция цитолиза сукцинат содержащими препаратами при лекарственных поражениях печени //Вестник Санкт-Петербургской государственной медицинской академии

им.И.И.Мечникова.-2007.- №3.- С.79-83.

5. Сологуб Т.В., Романцов М. Г., Кремень Н.В., Александрова Л.Н., Комиссаров

С.Н., Ледванов М.Ю., Стукова Н.Ю. Вирусные гепатиты. Современные аспекты терапии и фармакоэкономики / Пособие для врачей с грифом УМО от 04.06.2007.-Москва, Академия Естествознания,- 68с.

6.Александрова Л.Н. Аникина О.В., Суханов Д.С., Лазаренко Л.Л., Коваленко А.Л., Романцов М.Г. Сукцинат содержащие препараты как средство патогенетической терапии хронических диффузных поражений печени//Социально-значимые инфекции,- Санкт-Петербург,- 2007.- С.31-33.

7. Кремень Н.В., Агаева С.Г.Александрова Л.Н. Качество жизни и психологические особенности больных с хроническим поражением печени //Фармакотерапевтический альманах.-2009.- выпуск 3.- С. 63-71.

8. Романцов М.Г., Петров А.Ю., Суханов Д.С., Сологуб Т.В. Александрова Л.Н. и др. Применение субстратов энергетического обмена при хроническом поражении печени для коррекции метаболических нарушений (экспериментально-клинические исследования)//Фундаментальные исследования.-201 1.-№ 3- С.131-142.

9. Суханов Д.С., Петров А.Ю., Романцов М.Г., Александрова Л.Н. и др. Фармакологическая активность сукцинат содержащих препаратов при хроническом поражении печени различными инициирующими агентами //Фундаментальные исследования.-2011.-№5.- С.159-169.

Условные обозначения

AJIT - аланинаминотрансфераза АОС - антиоксидантная система ACT - аспартатаминотрансфераза АФК - активные формы кислорода ДК - диеновые конъюгаты ГГТП-гамма-глютамилтранспептидаза ЛДГ - лактатдегидрогеназа МДА - малоновый диальдегид ГС - группа сравнения

ОГ - основная группа ПОЛ - перекисное окисление липидов

СОД - супероксиддисмутаза ХГС - хронический гепатит С ХГ - хронический гепатит ЦТК - цикл трикарбоновых кислот ЩФ - щелочная фосфатаза НВС - вирус гепатита С

Подписано в печать 16.01.12 г. Формат 60x84/16. Уел. печ. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ №052 Отпечатано в ООО «Реноме», 192027, Санкт-Петербург, наб. Обводного канала, д.40