Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Характер изменений биохимических показателей крови у крыс при острой и хронической боли

На правах рукописи

РЕШЕТНИК ДМИТРИЙ ВИТАЛЬЕВИЧ

ХАРАКТЕР ИЗМЕНЕНИЙ БИОХИМИЧЕСКИХ ПОКАЗАТЕЛЕЙ КРОВИ У КРЫС ПРИ ОСТРОЙ И ХРОНИЧЕСКОЙ БОЛИ

14.00.16 - Патологическая физиология 03.00.04-Биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Москва - 2005

Работа выполнена в ФГУ «Центральная Клиническая больница с поликлиникой» Управления Делами Президента Российской Федерации

и ГУ Научно-исследовательский институт общей патологии и патофизиологии Российской АМН

Научные руководители'

Доктор медицинских наук, профессор

Доктор медицинских наук, профессор

Кукушкин Михаил Львович Никушкин Евгений Васильевич

Официальные оппоненты

1 Доктор медицинских наук, профессор Александров Пётр Николаевич

2 Доктор биологических наук, профессор Архипенко Юрий Владимирович

Ведущее учреждение:

Московская медицинская академы им И М Сеченова

Защита диссертации состоится _ г в _ часов на заседании

Диссертационного совета при НИИ общей патологии и патофизиологии Российской АМН Д 001 003 01 по адресу Москва, у л Балтийская, д 8

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ общей патологии и патофизиологии Российской АМН

Автореферат разослан « »

Ученый секретарь диссертационного совета Д 001 003 01,

кандидат медицинских наук Л Н Скуратовская

toon

тчъбь

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Боль, являясь симптомом большинства острых и хронических заболеваний человека и одной го наиболее частьи причин нетрудоспособности, представляет собой не только сложную медицинскую, но также и социально-экономическую проблему Только в США экономические потери в результате острых и хронических болевых синдромов составляют более 150 миллиардов долларов (J. Bonica, 1990) В последние годы проблема изучения механизмов боли и обезболивания еще больше актуализируется вследствие увеличения частоты военных конфликтов, техногенных и природных катастроф

В последние десятилетия проводятся интенсивные исследования механизмов боли, поиск эффективных средств ее подавления и патогенетически обоснованного лечения Сформулированы представления о ноцицепгавных и ангиноцицепгивных системах мозга, о роли целого ряда нейромедиаторных и нейромодулягорных веществ в регуляции болевой чувствительности, о генераторных и системных механизмах патологической боли (Крыжановский ГН, 1980,1997; Крыжановский Г Н и др 2004, Калюжный JIB, 1990, Ашмарин И П, Каменская М.А, 1988, Игнатов ЮД, 1986,2001, Кукушкин МЛ, Хитрое НК, 2004 Wall P.D, Melzack R, 1994, Wolf G et al, 2003), однако предмет изучения настолько сложен, что несмотря га большое количество разноплановых работ, многое остается неясным и требует дальнейших исследований.

На практике острый болевой синлром, как правило, удается купировать современными средствами Однако при хронических болевых синдромах, применение медикаментозных средств часто приводит к лекарственной интоксикации, аллергии, иммунодефищпу Очевидно, что дальнейший поиск путей предупреждения и эффективных методов лечения болевых синдромов должен быть связан с проведением фундаментальных исследований, раскрывающих сущность физиологической и патологической боли Обследование пациента с жалобами на боль часто бывает затруднено, так же, как и сколь либо объективная оценка выраженности болевого воздействия и его влияния на гомеосгатические показатели Патологическая боль, также как и стресс может вызывать существенные изменения во многих системах организма, объективными показателями которых являются, в частности, изменения биохимических показателей крови Однако до настоящего времени остаются недостаточно изученными различия в изменениях биохимических показателей крови при стрессе, острой и хронической боли Требует также дальнейшего научного обоснования тенденция предпочтения местной анестезии перед центральной аналгезией

PQC. НАЦИОНАЛАМ Í БИБЛИОТЕКА )

Цель исследования:

Изучить влияние стресса, острой и хронической боли на биохимические показатели крови у крыс и протеста сравнительный анализ эффективности центральной аналгезии и местной анестезии для коррекции биохимических изменений при острой бснш

Задачи исследования:

1 Изучить особенности изменений основных биохимических показателей крови крыс гдеи иммобилизационном стрессе и острой боли;

2 Определить изменения порогов болевой чувствительности у крыс при иммобилизационном стрессе и острей боли;

3 Исследовать влияние хронического болевого синдрома на биохимические показатели крови крыс,

4. Выявить половые различия в изменениях биохимических показателей крови у крыс под

действием острой и хронической боли; 5 Изучтъ особенности изменения ноцицетивного флексорного рефлекса при центральной

аналгезии и местной анестезии; 6. Определил, влияние центральной аналгезии и местной анестезии на изменение биохимических показателей крови при острей боли.

Научная новизна исследования.

Впервые проведено комплексное сравнительное изучение биохимических изменений показателей крови (БПК) у животных в условиях иммобилизаиионного стресса (ИС), острой соматогенной боли (ОСБ) и хронического нейрогенного болевого синдрома (ХБС) Установлено, что изменения БПК при стрессе и боли различной этиологии имеют сходный характер

У крыс после ИС и воздействия ОСБ отмечается повышение болевых порогов, те возникает сгресс-аналгезия Несмотря на повышение болевых порогов у крыс подвергшихся последовательному действию ИС и ОСБ происходят более значительные биохимические сдвиги, чем это имеет место при действии каждого из этих факторов в отдельности.

Показано, что при хроническом нейрогенном болевом синдроме степень изменений БПК имела прямую зависимость от степени выраженности аугогомий ОСБ вызывает более выраженные сдвиги метаболической активности по сравнению с нейрогенной хронической болью

Сравнительное изучение особенностей изменения БПК при ОСБ у самцов и самок значительных половых различий не выявит)

Использование для обезболивания центрального аналгетика морфина и местного анестетика маркаипа покатало, что последний более адекватно препятствует нарушению Ы1К при ноцицегтгивном воздействии.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные о снижение сенсигазации центральных ноцицептивных нейронов при регионарном блоке ноцицептивной афференгации, являются важным патогенетическим обоснованием для разработки методов предотвращающей аналгезии и стабилизации метаболических реакций при болевом стрессе.

Изменения БПК при острых и хронических болевых синдромах могут служить дополнительными, объективными критериями наличия и выраженности болевых синдромов в клинике Знание особенностей изменения БПК может способствовать проведению коррекции гомеосгаза при болевых синдромах. Полученные данные о преимуществе местной анестезии перед центральной аналгезией для предотвращения биохимических нарушений могут способствовать более широкому использованию местной анестезии, как для лечения боли, так и для предотвращения последствий постоперационных болевых синдромов

Основные положения, выносимые на защшу:

1 Изменения биохимических показателей крови при боли и стрессе имеют однонаправленный характер, но при болевых воздействиях выраженность биохимических нарушений больше, чем при стрессе

2 Характер изменений биохимических показателей крови не зависит от половой принадлежности и этиологии болевого синдрома, а выраженность изменений находится в прямой зависимости от интенсивности боли.

3 Местная анестезия более адекватно предотвращает биохимические нарушения при ноцицегтгивном воздействии по сравнению с центральной аналгезией.

Внедрение в практику.

Результаты работы включены в лекционный курс кафедры анестезиологии и реаниматологии ФГУ Учебно-научный центр УД Президента РФ

Апробация работы.

Результаты работы доложены на Ш международной конференции по восстановительной медицине (реабилигологии) Москва, 2000 г; Научно-практической конференции посвященной 35 - летаю

5

Учебно-научного центра МЦ УД Президента РФ, Москва, 2003г, Научно-практической конференции «Клинические и теоретические аспекты боли» Н Новгород 2003г, П1 Российском конгрессе по патофизиологии, Москва, 2004 г, Российской научно-практаческой конференции с международным участием «Актуальные вопросы острой и хронической боли», Самара, 2005 г

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ

Структура и объем диссертации.

Диссертация изложена на 160 страницах машинописного текста и состоит из введения, четырех глав выводов и указателя жгературы Работа иллюстрирована 21 таблицей и 12 рисунками Указатель

литературы включает 88 работ отечественных и 169 - зарубежных авторов ***

Автор выражает искреннюю признательность заведующим лабораториями клинической эндокринологии и клинической биохимии ФГУ «ЦКБсП» УДП РФ Бобкову А И и Гайдуковой Н В, а также старшем)' ¡шумному сотруднику НИИ ОПиПФ РАМН Смирновой В С за помощь в данной работе

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Исследования проведены на половозрелых самцах и самках белых нелинейных крыс массой 250300 г Было использовано 275 животных (84 самки и 191 самец) Самки брались в эксперимент без учета фазы полового цикла Все животные до начала эксперимента содержались в одинаковых условиях с обычной сменой светового режима, без ограничений в пище и воде, характер и режим питания в ходе опытов в различных группах не изменялся

Для изучения влияния острой соматогенной боли (ОСБ) на биохимические показатели крови (БПК) были сформированы 4 группы из самцов крыс В контрольную группу №1 вошли интакгные животные (п=15) В группе №2 (п=10) у крыс моделировался иммобилизационный стресс (ИС) в группе №3 (п=10) - ОСБ В группе №4 (п=10) изучалось сочетанное воздействие ИС и ОСБ

Для изучения изменений БПК при хроническом нейрогенном болевоми синдроме (ХБС) контролем служила группа №1 ингактных самцов (п=15), а также группа ложнооперированных животных (группа №5, п=10)

У 30 самцов крыс ХБС моделировался перерезкой седалищного нерва Животные подвергшиеся перерезке нерва, в зависимости от тяжести развившегося на 8-ые сутки после операции ХБС включались в группу №6 (п=12, крысы без ауготомий), в группу №7 (п=9, с аутоточиями 1-5 копей

6

задней лапы (соответственно 1-5 бал), в группу №8 (п=6, с аугатомиями 1-2 фаланг или стопы (6-11 бал.)

Для выявления половых различий в изменении БГЖ в ответ на ОСБ были сформированы две группы самок В группу № 9 (п=10) вошли ингакгные самки, в группу №10 (п=10) - самки с моделью ОСБ

Для сравнительного изучения изменения БПК при ХБС у крыс разных полов, 10 самкам без учета фазы эструса производилась ложная операция (группа №11), другим 20 самкам ХБС моделировался тем же образом, как и у самцов

В зависимости от выраженности аутотомии, самки, подвергшиеся перерезке нерва, были включены вгруппу№12(п=10,безау1агомий),в1руппу№13(п=ю, сауютомиями 1-5когтей(1-5бал)

Для изучения роли ноцицетивной афферентации в характере и степени изменений БПК были сформированы две группы из самцов крыс За 10 мин до моделирования ОСБ группе № 14 (п=10) производилась проводниковая анестезия задней лапы 0,5 мл 2% раствора марками, группе №15 (п=10) - инъекция морфина гвдрохлорида (5 ж/кг)

Следующие серии эксперимента имели своей целью изучение изменений порогов болевой чувствительности (ПБЧ) у крыс при ИС и ОСБ Оценка изменения уровней ПБЧ во всех сериях экспериментов проводилась с помощью стандартных тестов hot plate и tail flick. Тест hot plate использовался для определения особенностей регуляции болевой чувствительности на уровне центральных структур мозга. Метод оценки ПБЧ с помощью теста отдергивания хвоста tail flick позволял оценить особенности регуляции болевой чувствительности на уровне сегментарных отделов спинного мозга (СМ)

Для оценки изменения ПБЧ при стресовызванной аналгезии у крыс были созданы три группы самцов В группе №3а (п=10) моделировалась ОСБ Исследования ПБЧ с помощью тестов hot plate и tail flick проводились до и через 10 мин после нанесения болевого раздражения В группе №2а (п=10) моделировался ИС Исследование ПБЧ проводилось до иммобилизации и через 10 мин после освобождения животного В группе №4а (п=10) животные подвергались сочеганному воздействию ИС и ОСБ Исследование ПБЧ проводилось до иммобилизации и через 10 мин после освобождения животного

Для изучения половых различий в возникновении стресс-вызванной аналгезии у крыс ИС, ОСБ и их сочеганное воздействие воспроизводились в трёх группах самок (группы № 26,36 и 46, все п=8) Исследования ПБЧ с помощью тестов hot plate и tail flick проводились таким же образом, как и у самцов Результаты в группах самок, сравнивались с аналогичными группами самцов

Для изучения изменений ПБЧ под действием морфина животным обеих групп (по 10 самцов и самок) вводился раствор морфина гидрохлорида. Исследования с помощью hot plate и tail flick

проводились до и через 20 мин после инъекции Результаты в обеих группах сравнивались между собой.

Для изучения ноцицеппшной активности нейронов, реагирующих на активацию как AS -, так и С-афференгов, у крыс-самцов оценивался ноцицептивный флексорный рефлекс (НФР) В одной группе (п=6) он определялся до и после инъекции морфина пцрохлорида (5 мг/кг), в другой (п=6) - до и после инъекции 0,5 мл 2% раствора маркаина по ходу a suralis В качестве контроля 5 самцам вводился физраствор подкожно в область спины, другим пяти - по ходу ходу п. suralis

В исследовании применялись следующие модели и методы При моделировании ИС животные на 4 часа помещались в специальный футляр ю оргстекла (200 х 60 х 60 мм), резко ограничивавший их движения

ОСБ у крыс вызывалась наложением винтового зажима на левую заднюю лапу непосредственно выше коленного сустава на 30 мин (Р » 400 кПа /см2) Дня изучения комбинированного воздействия ИС и ОСБ, животным, находящимся в специальном футляре, после 3,5 ч пребывания в состоянии ИС вышеописанным способом накладывался зажим на 30 мин.

При ложной операции, животным в условиях эфирного наркоза производилось рассечение поверхностных тканей над областью подколенной ямки с последующим ушиванием раны

Для моделирования ХБС была использована модифицированная методика (Р Wall, 1982) Животным в условиях эфирного наркоза производилась перерезка левого седалищного нерва на уровне подколенной ямки выше места трифуркации с его лигированием для предотвращения регенерации и ушиванием раны Конечная оценка состояния животных производилась на 8-ые сутки после перерезки нерва Интенсивность ХБС у крыс оценивалась каждый день по степени выраженности аутотомии в баллах. Аутотомия 1-5 когтей задней лапы оценивалась в 1-5 бал, 1-5 фаланг - 6-10 бал, стопы - 11 бал Моделирование ОСБ и ХБС у самок и самцов осуществлялось в ходе полиостью идентичных процедур На 8-ой день после перерезки седалищного нерва или после ложной операции крысы подвергались декапитацда, кровь для биохимических исследований бралась из пейных сосудов

Биомагериал (цельная кровь) забирался у животных в одно время 10 00-11 00 Все исследования выполнялись на сыворотке крови после центрифугирования цельной крови (20 мин., 2000 rpm) Во всех сериях экспериментов определялись следующие БПК глюкоза, холестерин, мочевая кислота (МК) мочевина, общий белок (ОБ), альбумины, глобулины, калий, кальций, натрий, хлориды, магний, аланиновая и аспарагиновая трансаминазы (АЛТ, ACT) и гамма-глюгамат-трансфераза (у-ГТ) Исследования проводились унифицированными лабораторными методами на автоматическом биохимическом анализаторе Konelab-60i («Konelab», Финляндия), позволяющем определять концентраций исследуемых веществ по расчету изменения оптической плотности реакционных сред,

измеренных интерференционным или хроматографическим способом. Натрий, калий и хлориды определялись ионсеяективным методом с использованием анализатора «MicroLit» (Konclab, Финляндия)

Оценка изменения болевой чувствительности у крыс проводилась с помощью стандартных тестов hot plate и tail flick. Тест hot plate использовался для определения особенностей регуляции болевой чувствительности на уровне центральных структур мозга. ПБЧ измерялся по времени, через которое крыса, находившаяся на нагретой до 55°С металлической пластине, начинала облизывать лапы или подпрыгивать Измерение ПБЧ велось при помоши прибора («Ugo Basile», Италия), позволяющего регулировать нагрев пластины и фиксировать время появления болевого поведения животного Тест отдергивания хвоста tail flick позволял оценшь особенности регуляции болевой чувствительности на уровне сегментарных отделов СМ Для этого использовался специальный прибор («Ugo Basile», Италия), позволяющий подавать сфокусированный пучок света на хвост животного и фиксировать время появления болевой реакции (латентный период) по отведению хвоста животного Величина ПБЧ измерялась в секундах (с) по времени появления болевого поведения животного в hot plate (лизания лап или подпрыгивания) или отведения хвоста в tail flick.

При проведении экспериментов в качестве анестетика был использован маркаин (бупивакаин) («Astra Zeneca», Швеция) Инъекции 0,5 мл 2% раствора маркаина производилась животным по ходу левого седалищного и левого бедренного нервов

В качестве аналгетического средства с центральным механизмом действия был использован раствор морфина гчдрохлорвда Инъекция раствора морфина пидрохлорида в физиологическом растворе животным производилась подкожно в область спины между лопатками из расчета 5 мг/кг с доведением объема инъекционного раствора до 0,5 мл

Для оценки влияния анальгетика и анестетика на возбудимость ноцицгггшвных нейронов, реагирующих как на активацию A-делиа-, так и С-афференгов, определялся ноцицегпивный флексорный рефлекс (НФР) Для этого регистрировалась биоэлектрическая активность в двуглавой мышце бедра при помощи биполярных игольчатых электродов в ответ на ноцицептивное раздражение рецептивного поля n suralis Вызванные потенциалы поступали на вход широкополосного усилителя и отображались на осциллографе «VC-9» («Nïhon Kohden») Анализ биоэлектроакгивносги производился на компьютеризированной системе «Microlink» («Biodata Limited»)

НФР регистрировался у животных до и через 15, 45, 60 и 90 мин после инъекции морфина гидрохлорида, маркаина или физиологического раствора соответственно Раздражение наносилось силами тока в 1, 2, 3, 4, 5, 10 и 15мА Сравнивались пороги первичного и вторичного ответов, лате[пгные периоды, продолжительность ранних и поздних компонентов НФР, частота, характер и амплитуды разрядов до и посте инъекций соответствующих препаратов

9

Дня статистической обработки всех результатов биохимических исследований применялись непараметрические критерии Манна-Уиши и Данна Для попарного сравнения групп при исследовании порогов болевой чувствительности по принципу едо и после» применялся парный критерий Стьюденга Статистическая обработка данных проводилась с помощью компьютерной программы BMDP New System (BMDP Statistical Software, inc, США)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Результаты исследований влияния ИС, ОСБ и их сочеганного воздействия на изменение БПК приведены в табл 1 При ИС, относительно контрольной группы, в крови снижались концентрации ОБ, альбуминов, глобулинов, кальция, магния и у-ГТ и повышались уровни AJTT, ACT Изменения остальных показателей статистически не были достоверны, хотя у большей части животных концентрации глюкозы и МК были выше, а холестерина - ниже, чем в контрольной группе

У животных группы №3 с ОСБ по сравнению с контрольной группой, были снижены концентрации ОБ, альбуминов, глобулине® и кальция Повышены уровни ACT и МК Уровни глюкозы и АЛТ у большей части животных были выше, а уровни холестерина и нагтрия ниже, чем в контрольной группе, хотя в целом статистически достоверных различий выявить не удалось

Отличия от крыс из группы №2 (ИС) касались лишь уровня МК, который в группе №4 был выше, чем в группе №2, и уровня альбуминов, бывшего более низким Таким образом, при ОСБ имели место в целом такие же по характеру и по степени выраженности изменения БПК, как и у животшлх, подвергшихся ИС

Можно сделать вывод, что реакция организма на ОСБ в целом носит характер стрессовой реакции со всеми ее проявлениями Повышение уровней трансаминаз свидетельствует о стрессорном поражении органов Снижение концентраций ОБ и белковых фракций и повышение концентрации МК укрывают на разрушение белковых структур и пуриновых оснований В этом вцлны признаки основных составляющих начального этапа стрессовой реакции, таких как активация стрессовых систем с первоначальным поражением органов и перестройка метаболической активности в сторону катаболизма белка и пуринов Снижение уровня кальция в крови присуще начальному этапу стрессовой реакции Отсутствие выраженных изменений других показателей, в частности глюкозы и холестерина, может свидетельствовать о начальной стадии процесса, относительно небольшой интенсивности реакции на данном этапе и отсутствии глубоких сдвигов в углеводном и липидном обмене Показатели, полученные при ИС и ОСБ, в основном соответствуют по характеру и по величине Это может означать, что направленность реакций в обоих случаях была одинаковой, а их интенсивность сопоставима

Таблица 1

Изменения концентрации основных биохимических показателей крови у крыс при иммобнлизационном стрессе, острой соматогенной боли и комбинированном воздействии

Показатель Единицы измерения Группа № 1 (контроль, п=15) Группа №2 (ИС, п=10) Группа №3 (ОСБ, п=10) Группа №4 (ИС + ОСБ, пИО)

Глюкоза (ммолт/п) 7,59 ±0,78 7,83 ±0,64 7,75 ±0,61 9,39 ± 0,87 щш

Мочевина (ммоль/л) 7,12 ±1,84 5,51 ± 1,71 6,53 ±1,33 9,60 ±2,16 иш

МК (мкмоль/л) 96,5 ±36,8 102,5 ±31,6 138,5 ±45,2 u 141,8 ±41,2 u

ОБ (г/л) 73,13 ±3,94 61,20±1,691 60,91 ± 2,871 57,13 ±9,081

Альбумины (г/л) 34,00 + 2,45 30,86 ±3,04' 26,14 ± 1,68 й 25,57 ±4,1612

Глобулины (г/л) 39,38 ±4,10 29,87 ±0,54' 32,55 ±3,07' 29,35 ±6,02'

АЛТ (Е/л) 69,25 ± 13,72 86,88 ± 23,74 13 89,67 ±17,81 112,38 ± 6,30 й5

ACT т) 223,80 ±77,98 364,88 ±116,28' 398,40 ±37,73' 539,20 ± 58,03 11Ш

Y-ГТ (Е/л) 7,90 ±2,69 3,13 ±1,46' 14,33 ± 12,59 9,13 ±5,87

Калий (ммоль/л) 6,31 ±0,46 5,84 ±0,44 6,66 ±0,80 7,69 + 0,53

Кальций (ммоль/л) 2,71 ±0,11 2,57±0,131 2,52 + 0,15' 2,35 ±0,1212-1

Натрий (ммоль/л) 144,13 ±5,69 140,25 ±4,46 135,63 ±6,91 135,88 ±1,55 12

Магний (ммоль/л) 0,98 ±0,09 0,91 ±0,08' 0,97 ±0,02 0,98 ±0,09

Хлориды (ммоль/л) 100,23 ±2,89 100,43 ±2,47 98,03 ±2,48 94,33 ±0,9111Ш

Примечание хг - достоверное (р<0,05) отличие от групп №№1 мин _ достоверНое (р<0,01) отличие от групп №№

-3 соответственно, 1-3 соответственно

Таблица 2

Изменения концентрации основных биохимических показателей крови у самцов крыс с разной степенью выраженности ХБС

Показатель Единицы измерения Группа № 1 (контроль, п=15) Группа №6 (без ХБС, п=12) Группа №7 (ХБС 1-5 бал, п=9) Группа №8 (ХБС 6-11 бал., п=6)

Глюкоза (ммоль/л) 7,59 ±0,78 5,27 ±0,66' 6,57 ±0,6216 6,06 ±0,59'

Холестерин (ммоль/л) 1,96 ±0,45 1,70 ±0,33 1,58 ± ОД) 1,58 ±0,64

Мочевина (ммоль/л) 7,12 ± 1,84 4,10 ± 0,971 4,15 ±0,57' 5,44 ±2,63

МК (мкмоль/л) 96,5 ±36,8 87,38 ±9,77 106,83 ±9,97 6 112,40±29,01

ОБ (г/л) 73,13 ±3,94 66,79 ±5,61 1 67,19±3354 1 59,92 ±3,60 147

Альбумины (г/л) 34,00 ±2,45 31,50 ± 3,12' 30,33 + 2,58' 27,00 ± 1,79 lviv°

Глобулины (г/л) 39,38 ±4,10 35,69 ±2,44 36,05 ±3,17 31^7±4,00IVI

АЛТ (Е/л) 69,25 ±13,72 50,00 + 8,25 58Д) ± 7,40 63,80 ±30,85

ACT (Efo) 223,80 ±77,98 348,57±51,641 439,67±74,0716 442^0±23,12li

у-ГТ (Е/л) 7,90 ±2,69 3,83 ±2,32 5,20± 1,31 6,20 ±3,03

Калий (ммоль/л) 6,31 ±0,46 5,87 ±0,26 6,22 ±0,39 6,34 ±0,47

Кальций (ммоль/л) 2,71 ±0,11 2,64 ±0,08 2,62 ±0,07 2,61 ±0,08

Натрий (ммоль/л) 144,13 ±5,69 144,00 ±237 144,67 ±3,72 143,00 ±4,06

Магний (ммоль/л) 0,98 ±0,09 1,Ю±0,06' 1,08 ±0,12 1,08 ±0,06'

Хлориды (ммоль/л) 100,23 ±2,89 98,27± 1,19 99,14±2,91 99,80 ±1,16

Изменения БПК относительно контроля, выявленные у крыс группы №4 (ОСБ на фоне HQ оказались гораздо более выраженными, чем в двух предыдущих группах В данном случае концентрации глюкозы мочевины, калия, АЛТ и ACT были резко повышены, превышая показатели не только контрольной группы, но и групп № 2 и №3 Уровень МК был выше, чем в контрольной группе и группе №2 Снижались, по сравнению с кошролем и группами №2 и 3, уровни кальция и хлоридов Уровни альбуминов и натрия были ниже, чем у контрольной группы и группы №2 Концентрации ОБ и глобулинов были ниже, чем в контроле, при этом, не имея достоверных различий с группами №2 и 3

Все эти изменения свидетельствует о значительной выраженносга стрессовой реакции, сопровождающейся глубокими изменениями углеводного обмена в сторону гликогенолща и глюконеогенеза, а также белкового обмена в сторону катаболизма белков и пуринов Мобилизация ресурсов организма происходит наряду с выраженным сгрессорным поражением органов с разрушением тканей и клеток, о чем свидетельствует значительное повышение уровней калия и трансаминаз Изменения большинства определявшихся БПК в группе №4 (комбинированное воздействие) по сравнению с группами №2 (ИС) и №3 (ОСБ) позволяют сделать вывод, что при сочеганном воздействии ИС и ОСБ выраженность стрессовой реакции была значительно более высокой, чем при действии этих же факторов по отдельности Повреждение органов и разрушение сгрукгур при этой реакции, также были более выраженными

Для изучения изменения БПК при ХБС в группе животных №5 производилась ложная операция, а в других трёх группах (№ 6-8) моделировался ХБС К 8-ым суткам после перерезки седалищного нерва ХБС с аушгомиями развился у 15 животных (50,0 %) У 9 крыс (30% от всех подвергшихся перерезе нерва) аушгомии подверглись 1-5 когтей задней лапы (1-5 баллов) Эти животные составили группу №7 (п=9) Шесть крыс (20% оперированных и 40% животных ХЬС) с аутотомиями 1-2 фаланг или стопы (6-11 баллов), включены в группу №8 Из 15 животных, у которых ХБС не развился или не имея внешних проявлений, 12 составили группу № 6 (п=12)

В группе ложнооперированных животных (группа№5) на 8-е сутки после операции БПК статистически не отличались от контрольных значений, за исключением лишь более низких уровней холестерина и ОБ Таким образом, реакция на повреждение поверхностных тканей, имевшая место при ложной операции, к 8-ым суткам практически завершалась, при этом большинство БПК либо изменялось незначительно, либо в основном стабилизировалось

В то же время в группе животных, перенесших перерезку седалищного нерва (группа №6), даже в отсутствие внешних проявлений ХБС наблюдались более выраженные сдвиги БПК Содержание глюкозы, мочевины, ОБ и альбуминов в крови у крыс згой группы были ниже, а уровни ACT и

магния выше, чем у ингакшых животных. Уровни двух последних показателей превышали таковые у ложнооперированных животных в группе №5 Таким образом, перерезка нерва с частичной денервацией задней конечности, даже без внешних проявлений ХБС вызвала реакцию организма животных в виде перестройки метаболической активности, и соответственно, заметные изменения БПК При этом реакция на перерезку нерва была более выраженной и продолжительной, чем на сам факт рассечения поверхностных тканей, а оказываемое ею влияние на метаболическую активность и, ' соответственно, БПК вызывало более глубокие изменения

Как указывалось выше, у 50% животных, перенесших перезку нерва, развился ХБС различной степени интенсивности Результаты биохимических исследований, полученные в группе №6 (без 1 ХБС), группе №7 (ХБС 1-5 баллов) и группе №8 (ХБС 6-11 баллов) в сравнении с результатами

контрольной группы приведены в табл 2 Как видно из полученных данных, в группе № 7 (п=9), где у животных ХБС развивался и имел различную интенсивность, выражавшуюся в аугогомии 1-5 когтей (1-5 баллов), относительно контрольной группы, снижались уровни глюкозы, мочевины, ОБ и альбуминов и повышалась концентрация ACT Относительно группы №6 (без ХБС) были повышены уровни глюкозы, МКиАСТ

Основной характеристикой группы №8 (п=б) с ХБС 6-11 баллов являлся значительный разброс результатов по целому ряду показателей Это может свидетельствовать об определенной доле специфичности и индивидуальности реакции, развившейся у каждого отдельного животного на перезку нерва, появление ХБС и выраженную ауготомию, повлекшую дополнительную травматизашпо животного Большой разброс результатов, большинство из которых не попадало в рамки контрольных значений, в ряде случаев не позволило выявить достоверные изменения отдельных БПК относительно других групп. Тем не менее, в группе №8 ниже, чем в контрольной группе, были уровни глюкозы, ОБ, альбуминов, глобулинов и выше концентрации ACT и магния j Относительно группы №6 (без ХБС) были ниже уровни ОБ, альбуминов и глобулинов и выше

уровень ACT В сравнении с группой №7 (с ХБС 1-5 бал.) ниже был уровень ОБ и альбуминов Уровни мочевины, МК и АЛТ у большинства животных группы №8 также отличались и от контроля, • и от группы №7, но эти отличия не стали достоверными для всей группы в целом

Все эти изменения БПК могут свидетельствовать о том, что у животных после перерезки седалищного нерва, вне зависимости от наличия и степени выраженности внешних проявлений ХБС, возникала реакция, характеризовавшаяся поражением органов и тканей, изменением метаболической активности в сторону катаболизма и мобилизацией энергетических резервов, носившая достаточно длительный характер О длительности реакции могут свидетельствовать пониженные концентрации ОБ и его фракций, включая глобулины, при невысоких концентрациях мочевины и МК, а также сниженный относительно контроля уровень глюкозы Соответственно, можно говорить о том, что на

8-е сутки после операции у крыс без ХБС мобилизация основных ресурсов в целом уже произошла, а стрессовая реакция могла перешла в стадию резистентности.

Появление поведенческих признаков ХБС и степень аутотомии меняли характер и интенсивность изменений БГЖ Развитие ХБС после перерезки нерва значительно усиливало изменения БПК, интенсивность которых на 8-е сутки после операции была намного выше, чем при перерезке нерва без развития ХБС То есть, при развившемся ХБС и аутогомиях стабилизации не наступало Разрушение белков и пуринов продолжалось, в следствие чего, уровни ОБ и его фракций, включая глобулины, продолжают неуклонно снижаться, в то же время уровни метаболитов не снижаются, как при относительной стабилизации у крыс без ХБС Метаболические изменения в сторону катаболизма и степень поражения органов были более значительными, патологический компонент реакции по-прежнему присутствовал и становился более выраженным

Если сравнивать данные, полученные в группах животных, перенесших перерезку седалищного нерва, относительно группы № 3 с ОСБ (табл 1 и 2), то у животных группы № 6 (без ХБС), по сравнению с группой №3 были ниже уровни глюкозы, мочевины, МК и АЛТ и выше -уровни ОБ, альбуминов, глобулинов, натрия и магния У животных с ХБС 1-5 баллов ниже, чем при ОСБ были уровни глюкозы, мочевины и АЛГ и выше - ОБ, альбуминов, глобулинов, натрия и магния Наконец, животные, с ХБС 6-11 бал, относительно группы №3 имели лишь достоверно более низкую концентрацию глюкозы и более высокую - магния

Сравнение изменений БПК между группами № 3 и 6 указывает на то что реакция на перерезку седалищного нерва без внешних признаков ХБС по своей интенсивности на 8-ые сутки после операции значительно уступала реакции на ОСБ Большинство БПК в группе №6 (без ХБС) были ближе к нормальным значениям в контрольной группе ингактных животных, чем в группе №3 с ОСБ Так, большей сохранностью отличались концентрации в крови ОБ и его фракций, а также актвносгь АЛТ Реакция на развигае ХБС 1-5 бал у животных группы №7, на 8-ые сутки после операции, несмотря на продолжительный и явно патологический характер, также была менее выраженной, чем на ОСБ у животных группы №3 Лишь реакция на выраженный ХБС 6-11 бал у животных группы №8 была практически идентичной по степени выраженности реакции на ОСБ

В тоже время, следует отметить что реакция, постадийно развивавшаяся в ответ на ХБС, к 8-ым суткам могла истощить концентрации многих вешесгв, участвующих в реактивных метаболических процессах В следствие этого, уровни глюкозы и белковых метаболитов могли оказаться заметно более низкими относительно начальной фазы реакции и поэтому достоверно не отличались на 8-ые сутки от уровней соответствующих веществ в крови крыс с ОСБ

Интересной особенностью реакции на перерезку нерва и развитие ХБС явился повышенный уровень магния Достоверное повышение уровня магния в крови наблюдалось лишь при

повреждении нервной ткани (перерезке нерва), вне зависимости от наличия и степени выраженности Х5С Это, безусловно, результат действия различных факторов, среди которых возможно, и гаражение клеток, в частности самих нейронов, и снижение функции паращиговидных желез при стрессовой реакции. Однако, полного объяснения этому явлению нет Возможно, что факт повышения уровней магния при нейрогенной боли согласуется с предположениями о роли дтухваленгных металлов в развитии ХБС, высказывавшимися в литературе (Wu J-Y et al 1981)

Исследования ПБЧ проводились в 6 группах животных В группах №2а и 26 (гю 10 самцов и сачок соответственно) моделировался ИС, а группах ЖЗа и 36 (8 самцов и 8 самок) - ОСБ В группах N 4а и 46 (10 самцов и 10 самок) животные подвергались сочетанному воздействию ИС и ОСБ У всех животных этих шести групп ПБЧ измерялись с помощью тестов но! plate и tail flick до и после ш несения болевого и стрессового воздействий. Результаты приведены в табл 3 и 4

Как видно из полученных результатов, ПБЧ при тестах hot plate и tail flick у ингактных самцов и самок до начала опытов достоверно отличались лишь в группах № За и 36 До опытов в этих группах, у самок величина ПБЧ оказалась ниже, чем у самцов Однако, средние величины для всех гр упп животных, бравшихся в опыт, достоверных различий не имела

В ответ на ИС и у самцов, и у самок величины ПБЧ в обоих тестах увеличивались у всех жтвотных. Прирост величины ПБЧ у самцов и самок достоверно не отличался В ответ на ОСБ у самок в тесте tail flick прирост ПБЧ после нанесения болевого воздействия оказалась выше, чем у самцов В тесте hot plate достоверных отличий между группами не было Однако, учитывая, что фоновые значения ПБЧ у самок в этой группе были ниже, прирост ПБЧ в ответ на болевое Бездействие у самок был выше, чем у самцов В ответ на сочетанное воздействие ИС и ОСБ и~ менения носили тог же характер, при этом у самок величина ПБЧ и относительный прирост его ве личины относительно кошроля в тесте hot plate была выше, чем у самцов

При сравнении изменений ПБЧ в ответ да различные виды воздействия, видно, что шиболыяее влияние оказывает комбинированное воздействие ИС и ОСБ по отдельности вызывали меньшие изменения ПБЧ Так же можно сделать вывод, что в ответ на внешнее воздействие, Bt лючающее болевой компонент, у самок прирост ПБЧ был выше

При ОСБ внешняя эмоциональная и двигательная реакция у самок была значительно выше, чем у самцов Самки были более активны и проявляли агрессию по отношению к другим особям в СЕОей группе

Фоновые значения БПК у самцов и самок в достаточной степени различались Это оСсгоятельсгво, объясняется, по-видимому, некоторыми феногипическими отличиями животных, а также тем обстоятельством, что группы самок составлялась без учета фазы эструса Известно, что и у однополых грьиунов, принадлежащих к разным линиям, фоновые концентрации отдельных БПК

могут заметно отличаться (Середенин СБ и др, 1989) Хотя расхождения показателей в нашем случае статистически значимыми не были, сравнивать абсолютные результаты мы сочяи невозможным.

Таблица 3

Изменение болевых порогов после стрессового и болевого воздействия у самцов и самок в тесте tail flick

Самцы Самки

До опыта (с) После опыта (с) До опыта (с) После опыта (с)

ИС 4001045 8.92 ±4 011 5 40 ±0.71 8 2012 08 п

ОСБ 5 00 ± 0 60 6 42+ 1 61 1 4 02 ±0 38 ш 7 90+ 1 01 114

ИС + ОСБ 3 85 ± 0 54 10 28 ± 4 391 5 18 ±1 14 10 82 ±2 01 п

Таблица 4

Изменение болевых порогов после стрессового и болевого воздействия у самцов и самок в тесте hot plate

Самцы Самки

До опыта (с) После опыта (с) До опыта (с) После опыта (с)

ИС 9501281 13 5014 93' 12 60 1 2 19 16 8015 89°

ОСБ 19 801444 21 4013 85 1 14 0011 873 25 801545"

ИС + ОСБ 15 3315 72 22 3316 02' 13 2012 59 35 2014.76 дк

Прим ,г-достоверное (о<0,05) отличие от результатов до опыта в групгах самцов и самок 1П- достоверное (а<0,01) отличие от результатов до опыта в груптх самцов и самок "-достоверное (а<0,05) отличие в группе самок от группы самцов до и после опыта достоверное (а<0,01) отличие в группе самок от группы самцов до и после опыта

Таблица 5

Изменения концентраций основных биохимических показателей крови у самцов и самок крыс при моделировании острой соматогенной боли

Показатель Единицы измерения Группа№ I (кошроль самцы, п=15) Группа -N'"4 (самцы, ОСБ, п=10) №4/1 %при- росга Группа №9 (кошроль самки, п=10) Группа №10 (самки, ОСБ, п=10) №10/9 % прироста

Глюкоза (ммоль/л) 7,59 ±0,78 7,75 ±0,61 - 6,8610,33 7,3610,39' 0-8

Холестерин (ммоль/л) 1,96 ±0,45 1,56 ±0,31 - 1,65 ±0,18 1,6210,27 -

Мочевина (ммоль/л) 7,12 ±1,84 6,53 ± U3 - 6,9410,76 8,2010,82' 0-19

МК (мкмоль/л) 96,5 ±36,8 138,5 ±45,2' 0-38 57,43 ±5,05 72,80 1 9,51 к 1-32

ОБ (Г/л) 73,13 ±3,94 60,9112,87' -9-17 77,39 1 3,43 75,4114,31 -

Альбумины (г/л) 34,00 ±2,45 26,14 ±1,68' -9-24 35,75 ±0,88 33,0012,07 к -0-11

Глобулины № 39,38 ±4,10 32,55 ±3,07' -1-18 44,00 1 3,06 43,3812,43 -

АЛГ (Е>л) 69,25 ± 13,72 89,67117,81 - 56,63 ±7,01 64,50115,23 -

ACT (Е/л) 223,80 ±77,98 398,40 ±37,73' 19-45 259,63±16,89 313,13±33,28к 1-25

УГГ (Е/л) 7,9012,69 14,33112,59 5,08 ±3,17 5,17± 1,83 -

Калий (ммаль/л) 6,31 ±0,46 6,66 ±0,80 5,6810,19 5,78 ±0,43 -

Кальций (ммоль/л) 2,71 ±0,11 2,52 ±0,15 2,60 ±0,06 2,5210,06 -

Нэтрий (ммоль/л) 144,13 ±5,69 135,63 1 6,91 139,1712,79 143,00 ±5,04 -

Магний (ммоль/л) 0,98 ±0,09 0,9710,02 0,98 ±0,05 0,98 ± 0,03 -

Хлориды (ммаль/л) 100,23 ± 2,89 98,03 ±2,48 104,05 ±0,87 102,7511,83 -

При сравнении относительных величин - положительного или отрицательного прироста огдельных показателей при ОСБ у самцов и самок было выявлено следующее (табл.5) У самок при ССБ выше, чем в группе ингактных самок, были уровни МК и ACT, а уровень альбуминов - ниже В отличие от самцов, у самок при ОСБ, хотя и незначительно, также повышались уровни глюкозы и мочевины Однако, при этом, увеличение уровня ACT и уменьшение концентрации альбуминов у C.1MOK бьш вдвое ниже, чем у самцов, а уровни ОБ и глобулинов изменялись незначительно Иэ этих данных можно сделать вывод, что реакция на ОСБ у самцов и самок в целом не имела значительных отличий в своих главных проявлениях и характере изменения основных БПК

При сравнительном изучении изменения БПК при хронической нейрогенной боли у крыс р иных полов к 8-ым суткам после перерезки нерва ХБС, сопровождавшийся аутотомиями, развился у 1} самок (50,0 %) и 15 самцов (50,0 %) По этому показателю группы самцов и самок были абсолютно иденгачны Однако, у самок аугогомия при ХБС распространялась только на когга задней лапы (1-5 бм), в то время, как в группе самцов у б из 15 животных ауготомии подвергались и фаланги и даже стопа (40% от всех животных с развившимся ХБС).

Динамика развития ХБС у самцов и самок без учета степени выраженности ауготомии была практически идентична Выраженность ауготомии у самцов в среднем оказалась несколько выше -4 80 ±2,96 балла, в то время как у самок она составляла 3,80 ± 1,23 балла Однако, при сравнении групп С.1МЦШ и самок (группы №7 и №13), у которых аугогомия составляла от 1 до 5 баллов, самки имели б злее высокий средний балл - 3,80 ± 1,23 против 2,78 ± 1,20 у самцов. Таким образом, у самцов в группах №7 и 8 разброс степени выраженности ауготомии был значительнее, чем у самок.

Изменения БПК у самцов и самок при моделировании ХБС представлены в табл. 6 и 7 Как в здно из полученных результатов, у самцов без внешних проявлений ХБС (группа №6) относительно контроля на 8-ые сутки после операции снижались уровни глюкозы, мочевины, общего белка и атьбуминов Увеличивались концентрации ACT и магния Группа ложнооперированных самцов (ipyima №5) от контроля отличалась лишь сниженным уровнем ОБ и холестерина Группа лэжнооперированных самок имела более заметные отличия от ингактных самок. У ложнооперированных самок снижались концентрации ОБ, альбуминов и натрия и повышались уровни г.покозы, МК, AJ1T и у-ГТ Самки, у которых при перерезке седалищного нерва на 8-е сутки внешние птоявления ХБС отсутствовали (группа №12) относительно контроля изменения БПК были такими же, к ж и в группе № 11, за исключением сниженных уровней глобулинов, AJ1T и мочевины Относительно г|1упгты №11 у самок с перерезкой нерва без ХБС были более высокие уровни МК и более низкие -мочевины, глобулинов и AJIT

Таким образом, можно сказать, что у самок реакция на сам факт операции на 8-е сутки олавалась более значительной, чем у самцов, поскольку значительная часть БПК заметно отличалась

от фоновых значений у ингакшых самок У самцов на 8-е сутки после опершим в основном тших явлений не было.

Реакция самок на факт повреждения нервной ткани путем перерезки седалищного нерва также представляется более значительной, чем у самцов, поскольку вызывала изменения большего чипа БПК Так у самок выявились изменения концентраций мочевой кислоты, глобулинов, AJ1T, калит и хлоридов, чего у самцов не было

У сачок без ХБС (группа №12) относительно контроля достоверно снижались уровни ОБ, альбуминов, глобулинов, мочевины и AJ1T, в то же время повышались концентрации глюкозы, МК, ACT, калия и хлоридов Самки с аутотомиями (группа №13) имели относительно контроля в основюм те же изменения, за исключением более высоких уровней AJ1T и ACT и отсутствия нарастания уровня глюкозы Различия между группами касались лишь уровней AJIT и глобулинов

По отношению к самцам без ХБС (группа №6) у самок на перерезку нерва развивалась в цег ом такая же реакция со снижением к 8-ым суткам уровня ОБ в основном за счет альбуминов, а таьже мочевины Однако, в отличие от самцов, у самок группы №12 на 8-ые сутки после операции происходило повышение уровней глюкозы и МК, в тоже время уровень ACT нарастал недостоверно, а АЛТ относительно снижался Следует огмелль, что группа самок без ХБС, в отличие от группы самцов, характеризовалась большим разбросом результате» по раду БПК Однако, отсутспше выраженных различий между самками без признаков ХБС и с ХБС, позволяет предполагать, что самки оказались более чувствительными к самому факту операции и перезки нерва с одной стороны, или, ■ по ХБС у рада крыс группы №12 все же развивался, хотя и не приводил к аушгомии Можно предполагать, что появление реакции и нарастание её интенсивности у самок и самцов не совпадали во времени, те реакция развивалась с разной скоростью Все эти обстоятельства, возможно, привел! к тому, что на 8-ые сутки после операции группы самцов и самок находилась на разном уровне развития болевой реакции, что не позволяет делать однозначные выводы относительно ее максимальной интенсивности

Таким образом, при наличии некоторых количественных отличий, качественно изменения БП< у самцов и самок крыс в ответ на боль были однонаправленными Следует отметить, что у сачок, по-видимому, повреждающее действие болевого стресса затрагивало печень в меньшей степени, г к. уровни ACT были относительно невысокими, но влияло на другие органы, приводя к разрушению их структур, косвенным показателем чего могут служить существенно более высокие уровни МК

Учитывая результаты предыдущих опытов, показавших зависимость степени выраженноли изменений БПК от силы и характера болевого раздражения, были проведены исследования влияния анестетика маркаина и аналгетика центрального действия морфина на изменение болеиой чувствительности и основных БПК у крыс

Таблица 6

Изменения концентраций основных биохимических показателей крови у самцов крыс без ХБС и с развившимся ХБС в виде еуготомий

Показатель Единицы измерения Группа № 1 (самцы контроль, п=15) Группа №6 (самцы без ХБС, п = 12) Группа №7 (самцы с ХБС 1 -5 бал , п=9) №7/1 % прироста №7/6 % прироста

Глюкоза (ммоль/л) 7,59 ±0,78 5,27 ± 0,66' 6,57 ± 0,62 1VI -0-14 1 -29

Холестерин (ммоль/л) 1,96 ±0,45 1,70 ±0,33 1,58 ±0,30 - -

Мочевина (ммоль/л) 7,12 ± 1,84 4,10 ±0,97' 4,15 ±0,57' -11 - 47 -

МК (мкмоль/л) 96,5 ± 36,8 87,38 ±9,77 106,83 ±9,976 - 0-23

ОБ (Г/л) 73,13 ±3,94 66,79 ±5,61 1 67,19 ±3,54 1 -0-9 -

Альбумины (Г/Л) 34,00 ±2,45 31,50 ±3,12 1 30,33 ±2,58 1 - -

Глобулины (Г/Л) 39,38 ±4,10 35,69 ±2,44 36,05 ±3,17 - -

АЛТ (Е/л) 69,25 ±13,72 50,00 ±8,25 58,20 ±7,40 - -

ACT (Е/л) 223,80 ±77,98 348,57+51,64' 439,67±74,07 16 122-251 0-23

г-гт (Е/л) 7,90 ±2,69 3,83 ±2,32 5,20 ± 1,31 - -

Калий (ммоль/л) 6,31 ±0,46 5,87 ± 0,26 6,22 ±0,39 - -

Кальций (ммоль/л) 2,71 ±0,11 2,64 ±0,08 2,62 ± 0,07 - -

Натрий (ммоль/л) 144,13 ±5,69 144,00 ±2,37 144,67 ±3,72 - -

Магний (ммоль/л) 0,98 ±0,09 1,10±0,06 1 1,08 + 0,12 - -

Хлориды (ммоль/л) 100,23 ±2,89 98,27 ±1,19 99,14 ±2,91 - -

Примечание 'достоверное (р<0,05) отличие от групп 1 и 6 соответственно, 1,а - достоверное (р<0,01) отличие от групп 1 и 6 соответственно

t

Таблица 7.

Изменения концентраций основных биохимичажих показателей крови у самок крыс без ХБС и с развившимся ХБС в виде аутотомий

Показатель Единицы измерения Группах» 9 (самки контроль,п=10) Группа №12 (без ХБС, п=10) Группа №13 (самки ХБС 1-5 бал, п=10) №13/9 % прироста №13/12 % при-jxxrra

Глюкоза (ммоль/л) 6,86 ±0,33 7,65 ±0,84' 7,33 ±0,58 - -

Холестерин (ммоль/л) 1,65 ±0,18 1,56 ±0,29 1,75 ±0,23 - -

Мочевина (ммоль/л) 6,94 ±0,76 4,12 ± 1,50 к 3,90 ± 0,37 к -31-41 -

МК (мкмоль/л) 57,43 ± 5,05 165,00 ± 29,98 к 162,50±22,90 к 222-297 -

ОБ (г/л) 77,39 ±3,43 71,63 ± 3,49 к 69,92 ± 1,74 к -3-11 -

Альбумины (г/л) 35,75 ±0,88 32,33 ± 2,94 к 32,17 ± 1,17 й -4-9 -

Глобулины (г/л) 44,00 ±3,06 40,30 ±2,81 9 37,25 ± 1,73к''2 -5-18 -0-7

АЛТ (Е/л) 56,63 ±7,01 40,50 ± 2,59 к 50,50 ±4,51 ™ - 6-22

АСТ (Е/л) 259,63±16,89 292,50±57,61 321,50±45,06к 1-33 -

у-ГТ (Е/л) 5,08 ±3,17 9,5 ± 7,34 7,83 ±1,60 - -

Калий (ммоль/л) 5,68 ±0,19 6,10±0,16к 6,06 ± 0,25' 0-7 -

Кальций (ммоль/л) 2,60 ±0,06 2,54 ±0,10 2,61 ± 0,07 - -

Натрий (ммоль/л) 0,98 ±0,05 0,96 ±0,06 0,96 ± 0,04 - -

Магний (ммоль/л) 104,05 ±0,87 97,18 ± 1,36 к 96,25 ± 1,26 к 5-10 -

Хлориды (ммоль/л) 100,23 ±2,89 98,27 ±1,19 99,14 ±2,91 - -

Адекватная доза морфина подбиралась с помощью исследования изменения ПБЧ в тестах iot plate и tail flick. В табл. 8 приведены результаты исследования влияния инъекции морфии гидрохлорида в дозе 5 мг/кг на изменение ПБЧ у самцов и самок крыс В тесте tail Aide фоновые ПБ< I и ПБЧ после инъекции препарата у самцов и самок достоверно не отличались В тоже время, в тесте iot plate при одинаковом фоновых ПБЧ, после инъекции у самок значения ПБЧ были выше, чем в трутне самцов При этом прирост составлял у самок 97-310%, а у самцов 72-239%

Таким образом, можно предполагать, что действие морфина в дозе 5 мг/кг веса на самцов и сан юк в отношении влияния на ноцицепцию одинаково, чш определено в тесте tail Aide В тесте hot plate, где определяется выраженность комплексной реакции на болевое раздражение, у самок влияние иньеквии морфина гидрохлорида было выше, а сама реакция на боль у самок подавлялась сильнее, чем у самцов

Результаты исследований Ы1К в группах животных с моделью ОСБ на фоне инъекции марканна (группа №14) и морфина (группа №15) в сопоставлении с контрольной группой и группой с моделью ОСБ (группа №3) приведены в табл 9 У животных группы №14 относительно котпроля снижены уровни глюкозы, ОБ, альбуминов, глобулинов и магния Уровень ACT был недостоверно, но все же выше, чем в контрольной группе В то же время, относительно группы №3 (ОСБ) у крыс группы N"14 уровень альбуминов был достоверно выше, а концентрации глюкозы, ACT, МК и магния ниже Исходя из этих результатов, можно сделать вывод о том, что реакция (в т ч, возможно, и на саму инъекцию) имела место и при применении марками, однако ее выраженность была в целом меньшей, чем при ОСБ без применения маркаина. Повреждение тканей с гибелью клеток, катаболизм белка и мобилизация резервов гликогена были меньшими, чем при ОСБ Следовательно, применение данного анестетика позволило в значительной степени снизить уровень реакции на ОСБ Животные группы №15 отличались от интаюных более низкими уровнями холестерина, мочевины, ОБ. альбуминов, глобулинов, ACT, калыдая, магния и хлоридов Более высоким бьи уровень AJTT По сравнению с группой №3 были ниже лишь концентрации мочевины, ACT, магния и хлориде»

Влияние морфина на выраженность изменения БПК при ОСБ представляется не столь выраженным Подавление центрального механизма восприятия боли, по видимому, не приводит к существенному подавлению метаболических реакций на болевое воздействие Значительные изменения БПК относительно контрольной группы при инъекции морфина до наложения зажима, очевидно, приходится объяснять, учитывая значительные побочные эффекты морфина и неоднозначное влияние его применения на определение ряда БПК В частности, даже заметное снижение концентраций ОБ и его фракций отнюдь не сопровождается повышением уровней мочевины и МК В данном случае снижение уровней основных БПК скорее может свидетельствовать об определенном угнетении препаратом метаболической активности.

Таблица 8

Изменение болевых порогов в тестах tail flick и hot plate у самцов и самок крыс посте инъекции морфина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг

Группа животных Болевой порог tail flick, с Болевой порог hot plate, с

До инъекции После инъекции До инъекции После инъекции

Самцы 4.98 ±0 72 9.7611.37 1 12.20 ±3.96 24.80 ± 10 64 1

Самки 4 46 ± 0 67 10 55 ± 0 562 11.80 ±2.59 36 80 ± 4 602 3

Примечание " достоверное (р<0,01) отличи: от фонового значения в группе самцов

2 - достоверное (р<0,01) отличие от фонового значения в группе самок

3 - достоверное (р<0,05) отличи: в группе самок от группы самцов

Таблица 9.

Изменения концентраций основных биохимических показателей крови у крыс с острой соматогенной болью после инъекции аналгетических средств

Показатель Единицы измерения Группа № 1 (контроль, п= 15) Группа №4 (ОСБ, п=10) Группа №14 (ОСБ + маркаин, п=10) Группа №15 (ОСБ + морфин, п=10)

Глюкоза (ммоль/л) 7,59 ±0,78 7,75 ±0,61 6,34 ±0,66 14 7,79 ± 1,20

Холестерин (ммолб/л) 1,96 ±0,45 1,56 + 0,31 1,76 ±0,15 1,33 ±0,23'

Мочевина (ммоль/л) 7,12 ±1,84 6,53 + 1,33 5L33 ± 0,93 4,17± 1,32 м

МК (мкмоль/л) 96,5 ±36,8 138,5 ±45,2 92,38 ±11,614 123,57 ±28,58

ОБ (г/л) 73,13 ±3,94 60,91 ±2,87 63,13 ±2,79' 57,06 ±10,51'

Альбумины (г/л) 34,00 ±2,45 26,14 ±1,68 29,88 ± 1,57lIV 26,14+1,46'

Глобулины (т/л) 39,38 ±4,10 32,55 ±3,07 33,27 ±3,06' 30,91 ±9,50'

АЛТ (ЕУл) 69,25 ±13,72 89,67 ±17,81 72,86 ±17,15 91,50 ±20,21 1

ACT (Е/л) 223,80 ± 77,98 398,40 ±37,73 289,00 ±65,09™ 80,29 ±97,20lIV

у-ГТ (Е/л) 7,90 ±2,69 14,33 ±12,59 7,00 ±1,53 7,33 ±2,73

Кальций (ммол1/п) 2,71 ±0,11 2,52 ±0,15 2,54 ±0,17 2,50± 0,141

Натрий (ммоль/л) 144,13 ±5,69 135,63 ±6,91 141,20 ±3,27

Магний (ммоль/л) 0,98 ±0,09 0,97 ±0,02 0,87 ±0,1114 0,79 ± 0,041 w

Хлориды (ммол^л) 100,23 ±2,89 98,03 ±2,48 — 90,83 ±2,58lIV

Примечание 1|4-достоверное (р<0,05) отличиеот групп №№1 и 4 соответственно, lIV-достоверное (р<0,01) отличие от групп №№1 и4 соответственно

Для уточнения характера влияния маркаина и морфина на активность ноцицепшвных нейрмов дорзальных рогов СМ изучался ноцицегпивнй флексорный рефлекс (НФР) Электрическое ра шражение тканей в области иннервации п. Я1га1к вызывало у крыс до инъекций аналгегаков появление НФР представленного ранним и поздним компонентами ответа Ранний ответ возникал четез 10-15 мс, начиная с импульса силой тока в 2мА, поздний ответ проявлялся, начиная с импульса в 4 мА, и имел латешный период 190-250 мс Ранний ответ характеризовался относительной

стабильностью и состоял из 2-5 разрядов, общей длительностью 55-70 мс Длительность позднтх ответов зависела от интенсивности наносимого раздражения и колебалась от 350 до 800 мс Порог возникновения раннего ответа составлял 2мА, позднего - 4-5 мА. Наиболее стабильным вторичнь й ответ бьи при силе импульса 10-15мА

Введение физиологического раствора, осуществленное как подкожно в область спины, так и гю ходу п яла! ¡5, не вызывало изменений НФР

Введение морфина гидрохлорида в дозе 5 мг/кг через 15 мин после инъекции вызывало значительные изменения НФР Происходило повышение порога вторичного ответа до 10 мА П]-и импульсе силой тока 10мА наблюдалось значительное увеличение продолжительности латентного периода вторичного ответа до 350-400 мс, снижение частоты и амплитуды разрядов и уменьшение общей продолжительности вторичного ответа до 600 мс

После инъекции маркаина к 15 мин при импульсах силой тока 1-15 мА практически полность о блокируются оба компонента НФР

Считается, что ранний компонент ответа НФР возникает при активации А5-волокон и возбуждением специфических ноиицептивных нейронов дорзальных рогов СМ, а поздний компонент отражает активацию С-афференгов и возбуждение в дорзальных рогах СМ ноцицетивных нейронов широкого динамического диапазона Таким образом, действие морфина в отношении НФР ограничивается только выраженным торможением активности нейронов широкого динамического диапазона, практически не влияя на специфические нопицегггивные нейроны дорзальных рогов СМ

Действие местного анестетика маркаина наблюдается в отношении обоих типов ноцицепгоров При этом нейрональная активность в данных группах клеток практически отсутствует

Из воего вышесказанного можно заключить, что выраженность развития метаболических реакций и повреждений отдельных тканей и органов в ответ на болевое воздействие определяется, в большей степени интенсивностью ноцицегпивного потока с периферии и способностью его блокады ангиноцицеттгивными структурами В связи с такой зависимостью, использование только центральных аналгегиков," не обеспечивает полного блокирования ноцицептивной афферентации Поэтому, для ее адекватного подавления и, соответственно предотвращения повреждающего действия болевого раздражения на организм необходимо использовать методы регионарной анестезии. Такой вывод хорошо согласуется с существующими представлениями о предотвращающей аналгезии, направленной на предотвращение развития послеоперационных болевых синдромов, и включающей в себя комплексное использование регионарных блокад и аналгегиков с центральным механизмом действия (Овечкин А М, 1995).

выводы

1 Болевое воздействие вызывает схожие с действием стрессорных факторов изменяли биохимических показателей крови, отражающие перестройку основных видов обмена веществ' |>еякового, пуринового, углеводисто и минерального, мобилизацию адаптивных метаболических ] ресурсов организма и частичную деструкцию некоторых тканей

2 Основной характер изменений биохимических показателей крови не зависит от вида болевого оицдрома и полотой принадлежности животных.

3 Выраженность изменений биохимических показателей крови находится в прямой зависимости <ут интенсивности развивающегося болевого синдрома

4 Аналгетическое действие морфина, обусловленное преимущественным торможением ^специфических ноцицетггивных нейронов, проявляется повышением порога возникновения и ;нижением количества потенциалов действия в поздней фазе ноцицепгивного флексорного рефлекса

5 Блокирование ноцицептивного афферентного потока местным анестетиком маркаином в шачительной степени предотвращает развитие изменений биохимических показателей крови при товреждающих воздействиях.

6 Использование местных анестетиков при операционных вмешательствах должно рассматриваться в качестве обязательного компонента операционного обезболивания.

Список опубликованных работ по теме диссертации:

1 Бобков АИ, Решетник Д.В., Никушкин Е В О компенсированных и декомпенсированных таругаетшях при клиническом стрессе // Клиническая Лабораторная диагностика. - 2000, - №9, - С145-146.

2 Решетняк В К, Решетняк Д.В. Половые и возрастные особенности болевого восприятия '/Некоторые актуальные вопросы клинической медицины -МД002 -С 159-165

? Решетняк Д.В., Смирнова В С Изменение биохимических показателей крови у крыс при эстрой и хронической боли // Клинические и теоретические аспекты острей и хронической боли Российская научно-практическая конференция -Н Новгород,2003 -С 27

1 Решетняк В К, Решетняк Д.В. Болевые синдромы при воспалении // Избранные вопросы <линической медицины -М,2003 -Т1.-С 194-203.

5 Решетняк Д.В., Бобков А И, Шевалдышев О Н Гормональный фон у женщин с долевыми синдромами в период перименопаузы // Материалы научно-практической конференции тосвященной 35-летию УНЦ УДП РФ -МД003 - С 369-71

6 Решегняк Д.В, Смирнова В С, Кукушкин М.Л Половые различия при изменении биохизд ги-ческих показателей крови у крыс в ответ на острую соматическую и хроническую нейрогенную бол // Боль -2004,-№2(3).-С. 12-16.

7. Горизонтам МП, Решетник Д.В. Состояние микроциркуляции и некоторые механизмы её нарушений при ОСБ и стрессе (тезисы) // Ш Российский конгресс по патофизиологии -М.2004- С 28-29

8 Решегняк Д.В, Смирнова В С Особенности изменения ноцицептивного флексорного рефти са у крыс при применении маркаина и морфина гидрохлорида //Патогенез - 2005 - №1 - С 22-23

Список использованных сокращений:

АЛТ - аланинаминогрансфераза

ACT - аспарагинаминотрансфераза

БПК - биохимические показатели крови

7-ГТ - у-глутамилтрансфераза

ИС - иммобилизационный стресс

МК - мочевая кислота

НФР - ноцицешивный флексорный рефлекс

ОБ - общий белок

ОСБ - острая соматогенная боль

ПБЧ - порог болевой чувствительности

СМ - спинной мозг

ХБС - хронический нейрогенный болевой синдром

I

>

г

»13303

РНБ Русский фонд

2006-4 10735

Лицензия серия ПД № 00987 от 6 марта 2001 г. Тираж 100 Заказ № 100

ФГУП "ГлавНИВЦ" Управления делами Президента Российской Федерации

Актуальность проблемы.

Боль, являясь симптомом большинства острых и хронических заболеваний человека и одной из наиболее частых причин нетрудоспособности, представляет собой не только сложную медицинскую, но также большую социальную и экономическую проблему. Так, по данным Всемирной ассоциации по изучению боли, ежегодно в США экономические потери в результате острых и хронических болевых синдромов составляют более 150 миллиардов долларов [107]. Одна лишь боль в нижней части спины каждый год в США приводит к потере 100 миллионов рабочих дней [48]. В последние годы проблема изучения механизмов боли и обезболивания еще больше актуализируется вследствие увеличения частоты военных конфликтов, техногенных и природных катастроф.

Учитывая большую актуальность проблемы, в последние десятилетия проводятся интенсивные исследования механизмов боли, поиск эффективных средств ее подавления и патогенетически обоснованного лечения. !

Сформулированы представления о ноцицептивных и антиноцицептивных j 1 системах мозга, о роли целого ряда неиромедиаторных и неиромодуляторных* ^ веществ в регуляции болевой чувствительности, о генераторных и системных/ i механизмах патологической боли [4,27,30,37,41,44,151,154]. Однако предмет изучения настолько сложен, что, несмотря на большое количество разноплановых работ, многое остается неясным и требует дальнейших1 исследований.

В отличие от физиологической боли, играющей роль пускового механизма защитных реакций организма, патологическая боль имеет дезадаптивное, патогенное значение. Острый болевой синдром, как правило, удается купировать современными средствами. Однако, когда речь идет о стойких, хронически протекающих болевых синдромах, продолжительное применение медикаментозных средств часто приводит к лекарственной интоксикации, аллергии, иммунодефициту. Очевидно, что дальнейший поиск путей предупреждения и эффективных методов лечения болевых синдромов должен быть связан с проведением фундаментальных исследований, раскрывающих сущность физиологической и патологической боли.

Обследование пациента с жалобами на боль ?часто бывает затруднено, поскольку боль - это восприятие [48,], а не ощущение. Физическое и

- / эмоциональное состояние человека, прЪшлые воспоминания о боли и ее предчувствие, половая принадлежность — все это влияет на восприятие боли. Большое влияние на восприятие боли-, оказывает стресс. Известно, что центральная регуляция тормознйх влитий антиноцицептивной системы во

I I „ многом определяется активност&ю опиоиднои системы мозга. Эта система играет также важнейшую роль втйобилиЗации адаптивных функций организма в условиях стресса [79]. Активация опйоидной системы при остром стрессе вызывает повышение болевых порогов [10,59], а истощение этой системы при повторном стрессе в эксперименте приводит к снижению болевых порогов h fy

191]. Известно, что при неврастении - естественной «модели» хронического i психоэмоционального стресса происходит снижение порогов боли, не сопровождаемое снижением порогов чувствительности к тактильному раздражению [19]. Показано? рнижение болевых порогов у пациентов с Ч неврастенией, депрессией и ^различными алгиями (цефалгия, кардиалгия, плексалгия). Считается, что при длительном психоэмоциональном стрессе снижаются нисходящие тормозные влияния антиноцицептивной системы [3].

Следовательно, стресс может как активировать, так и угнетать опиоидную антиноцицептивную систему. Вместе с тем, сама по себе боль может вызывать стресс. Стресс - это состояние нарушенного гомеостаза [66].

Патологическая боль, также как и стресс может вызывать существенные изменения во многих системах организма, объективными показателями которых являются, в частности, изменения биохимических показателей крови. Однако до настоящего времени остаются недостаточно изученными различия в изменениях биохимических показателей крови при стрессе, острой и хронической боли. Требует также дальнейшего научного обоснования тенденция предпочтения местной анестезии перед центральной аналгезией.

Цель исследования:

Изучить влияние стресса, острой и хронической боли на биохимические показатели крови у крыс и провести сравнительный анализ эффективности центральной аналгезии и местной анестезии для коррекции биохимических изменений при острой боли.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности изменений основных биохимических показателей крови крыс при иммобилизационном стрессе и острой боли воздействии;

2. Определить изменения порогов болевой чувствительности у крыс' при иммобилизационном стрессе и острой боли;

3. Исследовать влияние хронического болевого синдрома на биохимические показатели крови крыс;

4. Выявить половые различия в изменениях биохимических показателей крови у крыс под действием острой и хронической боли;

5. Изучить особенности изменения ноцицептивного флексорного рефлекса при центральной аналгезии и местной анестезии;

6. Определить влияние центральной аналгезии и местной анестезии на изменение биохимических показателей крови при острой боли.

Научная новизна исследования.

Впервые проведено комплексное сравнительное изучение биохимических изменений показателей крови у животных в условиях иммобилизационного стресса, при острой и хронической боли. Установлено, что изменения биохимических показателей крови при стрессе и боли различной этиологии имеют сходный характер. Наиболее выраженными являются изменения белкового и пуринового обмена. И при болевом воздействии, и при иммобизизационном стрессе уровень общего белка и его фракций в крови падает, а концентрация продуктов катаболизма: мочевины и мочевой кислоты возрастает. Минеральный обмен также претерпевает изменения. Наиболее выраженные изменения отмечены в концентрации кальция, значительно понижающейся при острой боли и при иммобилизационном стрессе. Вместе с тем, изменения биохимических показателей крови в ответ на болевое воздействие являются более выраженными по сравнению со стрессорным воздействием. Так при острой соматогенной боли, по сравнению с безболевым стрессом, у крыс наблюдалось достоверное снижение уровней альбуминов в крови и увеличение концентрации мочевой кислоты, мочевины и активности трансаминаз.

У крыс после иммобилизационного стресса и болевого воздействия отмечается повышение болевых порогов в тестах hot plate и tail flick, т.е. возникает стресс-аналгезия. Несмотря на повышение болевых порогов у крыс, подвергшихся последовательному действию иммобилизационного стресса и боли, происходят более значительные биохимические сдвиги, чем это имеет место при действии каждого из этих факторов в отдельности.

При моделировании хронического нейрогенного болевого синдрома степень изменений биохимических показателей крови имела прямую зависимость от степени выраженности аутотомий. Острая соматогенная боль вызывает более выраженные сдвиги метаболической активности по сравнению с нейрогенной хронической болью.

При изучении половых различий при острой боли установлено, что, несмотря на более выраженные поведенческие реакции на боль у самок, разница в болевых порогах и в изменениях со стороны биохимических показателей крови у самцов и самок были очень незначительными.

Использование для обезболивания центрального аналгетика морфина и местного анестетика маркаина показало, что последний более адекватно препятствует изменению биохимических показателей крови при ноцицептивном воздействии.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные данные, отражающие снижение сенситизации центральных ноцицептивных нейронов при регионарном блоке ноцицептивной афферентации, являются важным патогенетическим обоснованием для разработки методов предотвращающей аналгезии и стабилизации метаболических реакций при болевом стрессе.

Изменения биохимических показателей крови при острых и хронических болевых синдромах могут служить дополнительными, объективными критериями наличия и выраженности болевых синдромов в клинике. Знание особенностей изменения биохимических показателей крови может способствовать проведению коррекции гомеостаза при болевых синдромах. Полученные данные о преимуществе местной анестезии перед центральной аналгезией для предотвращения биохимических нарушений могут способствовать более широкому использованию местной анестезии, как для лечения болевых синдромов, так и для предотвращения вызываемых ими нарушений биохимического гомеостаза.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Изменения биохимических показателей крови при боли и безболевом стрессе имеют однонаправленный характер, но при болевых воздействиях выраженность биохимических нарушений больше, чем при безболевом стрессе.

2. Характер изменений биохимических показателей крови не зависит от половой принадлежности и этиологии болевого синдрома, а выраженность изменений находится в прямой зависимости от интенсивности боли.

3. Местная анестезия более адекватно предотвращает биохимические нарушения при ноцицептивном воздействии по сравнению с центральной аналгезией.

•к-к-к

Автор выражает искреннюю признательность заведующим лабораториями клинической эндокринологии и клинической биохимии Центральной клинической больницы с поликлиникой УДП РФ Бобкову А.И. и Гайдуковой Н.В., а также сотруднику НИИ ОПиПФ РАМН Смирновой B.C. Без их неоценимой помощи написание данной работы было бы невозможным.

ВЫВОДЫ

1. Болевое воздействие вызывает схожие с действием стрессорных факторов изменения биохимических показателей крови, отражающие перестройку основных видов обмена веществ: белкового, пуринового, углеводного и минерального, мобилизацию адаптивных метаболических ресурсов организма и частичную деструкцию некоторых тканей.

2. Основной характер изменений биохимических показателей крови не зависит от вида болевого синдрома и половой принадлежности животных.

3. Выраженность изменений биохимических показателей крови находится в прямой зависимости от интенсивности развивающегося болевого синдрома.

4. Аналитическое действие морфина, обусловленное преимущественным торможением неспецифических ноцицептивных нейронов, проявляется повышением порога возникновения и снижением количества потенциалов действия в поздней фазе ноцицептивного флексорного рефлекса.

5. Блокирование ноцицептивного афферентного потока местным анестетиком маркаином в значительной степени предотвращает развитие изменений биохимических показателей крови при повреждающих воздействиях.

6. Использование местных анестетиков при операционных вмешательствах должно рассматриваться в качестве обязательного компонента операционного обезболивания.