Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Гипотензивное и антиаритмическое действие комплексов растительных углеводсодержащих метаболитов со средствами, влияющими на сердечно-сосудистую систему

На правах рукописи

2 О АВГ 20Ю

ХВОСТОВ МИХАИЛ ВЛАДИМИРОВИЧ

ГИПОТЕНЗИВНОЕ И АНТИАРИТМИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ КОМПЛЕКСОВ РАСТИТЕЛЬНЫХ УГЛЕВОДСОДЕРЖАЩИХ МЕТАБОЛИТОВ СО СРЕДСТВАМИ, ВЛИЯЮЩИМИ НА СЕРДЕЧНО-СОСУДИСТУЮ СИСТЕМУ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации па соискание ученой степени кандидата биологических наук

Томск-2009

003475358

Работа выполнена в Новосибирском институте органической химии им. H.H. Ворожцова Сибирского отделения РАН

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор

Толстакова Татьяна Генриховпа

Научпын консультант:

доктор медицинских наук, профессор

Лифишц Галина Израилевна

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук

Плотников Марк Борисович Ван зова Ольга Евгеньевна

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Новосибирский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

диссертационного совета Д 001.031.01 при Учреждении Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН (634028, г. Томск, пр. Ленина, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Учреждения Российской академии медицинских наук НИИ фармакологии СО РАМН.

Автореферат разослан "¿^ " ¿¿¿РЯ-?_2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

Защита состоится "// " <fC/ffC{/J 2009 г. в.

h/J

11031

часов на заседании

доктор биологических наук

Амосова E.H.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. По данным Всемирной организации здравоохранения, сердечно-сосудистые болезни являются основной причиной инвалидности и преждевременной смертности во всем мире (World Health Qrganization. Prevention of Cardiovascular Disease. Guidelines for assessment and management of cardiovascular risk, 2007). В структуре смертности населения России заболевания сердечно-сосудистой системы также занимают основное место. Особую тревогу вызывает значительная смертность населения от этих болезней в репродуктивном и трудоспособном возрасте (Здравоохранение в России, 2007). Известно, что большинство используемых лекарственных средств для лечения заболеваний сердечно-сосудистой системы обладают рядом нежелательных побочных действий на различные органы и системы организма (Zaidenstein et al., 2002; Gholami et al., 2007; Faulx et al., 2008). В связи с этим, проблема разработки малотоксичных и высокоэффективных препаратов для терапии данной патологии является актуальной для медицины и фармакологии.

В настоящее время успехи в разработке новых лекарственных средств связаны не только с синтезом новых химических соединений (Зефирова и соавт., 2000), но и, в значительной степени, с улучшением свойств существующих препаратов (Fischer et al., 2006), в том числе, путем создания новых лекарственных форм с направленной доставкой к органу-мишени (Nakanishi et al., 2001; Jain et al., 2007). Одним из перспективных подходов в разработке подобных лекарственных форм является связывание действующего вещества в молекулярный комплекс с растительными углеводсодержащими метаболитами, который обеспечивает защиту базового препарата от быстрого метаболизма в организме и улучшает его транспорт через биологические мембраны (Толстикова и соавт., 2007а). Кроме этого комплексообразование позволяет пролонгировать эффект действующего вещества за счет повышения аффинности к рецептору органа-мишени (Толстиков и соавт., 2007а). К настоящему времени наиболее изученным в качестве комплексирующего растительного углеводсодержащего метаболита является глицирризиновая кислота, получаемая из корня солодки. Исследованы комплексы этого гликозида с различными НПВС (Бондарев и соавт., 1991), простагландинами (Толстиков и соавт., 1991), антиаритмическим средством аллапинином (Брызгалов и соавт., 2005), психотропными средствами (Толстикова и соавт., 2004; Августович и соавт., 2004), противоопухолевыми средствами (Балтина и соавт., 2003) и др. Во всех перечисленных работах показано, что проявление эффекта комплексообразования заключается в снижении дозы действующего вещества и токсичности при сохранении высокой базовой активности.

Однако, эффект комплексообразования с препаратами, воздействующими на сердечно-сосудистую систему, изучен не достаточно. Не известно также влияние на фармакологические свойства сердечно-сосудистых средств комплексообразования с другими растительными углеводсодержащими метаболитами.

Целью данной работы является изучение гипотензивного и антиаритмического эффекта комплексов пропранолола, амиодарона и нифедипина с углеводсодержащими растительными метаболитами (глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом, арабиногалактаном). Проведение расширенного фармакологического исследования для перспективного комплекса.

Задачи исследования.

1. Провести скрининг гипотензивной и антиаришической активности комплексов пропранолола, нифедипина и амиодарона с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом, арабиногалактаном. Выбрать комплекс для расширенного изучения.

2. Изучить гипотензивное действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой на крысах линии Вистар и НИСАГ при парентеральном и энтеральном способах введения.

3. Исследовать антиаритмическое действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой при внутривенном способе введения крысам линии Вистар и НИСАГ.

4. Оценить действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой на Са2+-каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа

5. Изучить субхроническую токсичность комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой при парентеральном и энтеральном способах введения.

Научная новизна работы. В настоящей работе впервые изучены гипотензивная и антиаритмическая активность комплексов пропранолола, нифедипина и амиодарона с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном.

В результате проведенного скрининга выявлен наиболее перспективный комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин), обладающий высокой гипотензивной и антиаритмической активностью в дозах, на порядок сниженных по сравнению с нифедипином. Показано, что в основе его плавного действия лежит постепенная блокада кальциевых каналов. Впервые показано, что комплексирование нифедипина с глицирризиновой кислотой усиливает его антиаритмическое свойство в дозе, сниженной в 29 раз по сравнению с дозой нифедипина, требуемой для снижения артериального давления. Установлено, что введение крысам глицидипина

в течение 14 и 45 дней не оказывает токсического воздействия на жизненно важные органы и системы.

Научно-практическая ценность работы. Для нифедипина впервые обнаружен высокий антиаритмический эффект при его комплексировании с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном, а его гипотензивный эффект сохраняется при снижении дозы фармакона в комплексе в 10 раз. Результаты проведенных исследований могут служить основой для разработки препаратов нового структурного типа для терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Положения, выносимые на защиту.

1. В результате скрининга выявлен комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин), обладающий высоким гипотензивным и антиаритмическим действием.

2. Гипотензивное действие глицидипина сохраняется при снижении дозы фармакона в комплексе в 10 раз.

3. Глицидипин проявляет высокое гипотензивное и антиаритмическое действие на крысах линии Вистар и НИСАГ.

4. Глицидипин постепенно блокирует Са2+ каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа stagnalis.

Парентеральное и энгеральное введение глицидипина крысам в течение 14 и 45 дней, соответственно, не вызывает токсических изменений в жизненно важных органах и системах.

Апробация результатов. Основные результаты работы были представлены на «1-м съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2005), 2-й международной научно-практической конференции «Исследование, разработка и применение высоких технологий в промышленности» (Санкт-Петербург, 2006), б-й молодежной научной конференции института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2007), Зй Всероссийской конференции «Новые достижение в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007), 2-й международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений», (Алматы, 2007), Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Достижения в области аналитической, судебно-медицинской, клинической токсикологии» (Запорожье, 2007), ежегодной научной конференции «Фундаментальные науки - медицине» и научно-практической конференции «Новые материалы и методы для медицины» (Новосибирск, 2008), а также научной конференции «Органическая химия для медицины» (Черноголовка, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ из них 3 - в журналах, рекомендованных перечнем ВАК.

Работа выполнена при поддержке Интеграционной программы СО РАН №54 «Научные основы разработки новых лекарственных препаратов. Перспективы использования возобновляемого сырья». Межакадемической Интеграционной программы СО РАН и СО РАМН № 53 «Поиск, создание и доклинические испытания новых биологически активных соединений сердечно-сосудистого, ангивоспалигельного и ангипролиферативного действия. А также программ фундаментальных исследований Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине»: «Разработка научных основ создания низкодозных кардиотропных препаратов. Новые подходы» и «Медицинская химия. Молекулярный дизайн физиологически активных соединений и лекарственных препаратов. Исследование свойств и направленный отбор физиологически активных соединений как потенциальных лекарственных препаратов».

Структура и объем работы.

Диссертация включает введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты исследований и обсуждение, заключение, выводы и список литературы, включающий 157 ссылок. Работа изложена на 118 страницах, содержит 11 рисунков и 28 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на крысах линии Вистар массой 180-240 г, крысах линии НИСАГ со стресс-индуцированной гипертонией, массой 250-300 г. и белых беспородных мышах массой 20-25 г. Животные были получены из лаборатории экспериментальных животных Института цитологии и генетики СО РАН и содержались в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и стандартному гранулированному корму. Всего в работе использовано 750 крыс и 100 мышей. Экспериментальные 1руппы формировали по 8-10 особей одинакового веса.

Комплексы были синтезированы в Институте химии твердого тела и механохимии СО РАН в группе механохимии органических соединений (зав. группой - д.х.н. Душкин A.B.). Всего было предоставлено на исследование 10 комплексов. На основании комплексирующего соединения, агенты разделены на группы.

1. Комплексы с растительными гликозидами:

1.1. Комплексы ппицирризиновой кислоты (ГК) (метаболит солодкового корня) с нифедипином (НФ) в молекулярном соотношении НФ:ГК 1:4 (глицидипин), с пропранололом (ПП) в молекулярном соотношении ПП:ГК 1:4, с амиодароном (АМД) в молекулярном соотношении АМД:ГК 1:4.

н

Глицирризиновая Нифедишш Амиодарон Пропранолол

кислота

1.2. Комплекс стевиозида (СТ) (гликозид 5/т'а геЬаисИапа ВеПопГ) с нифедипином в молекулярном соотношении НФ:СТ 1:4.

Стевиозид

1.3. Комплекс стевиозида «8\Л'ЕТА» (Б\У) с нифедипином в молекулярном соотношении 1:4.

1.4. Комплекс ребаудаозида (РБ) (гликозид 57еу/а геЬаисИапа ВеПот) с нифедипином в молекулярном соотношещш НФ:РБ 1:2 и 1:4.

2. Комплексы с растительным полисахаридом

2.1. Комплексы арабиногалактана (АГ) (полисахарид лиственницы сибирской) с нифедипином в молекулярном соотношении 1:4,1:8,1:16.

2.2. Комплекс арабиногалактана с амиодароном в молекулярном соотношении 1:4.

Изучение гипотензивной активности комплексов при внутривенном введении проводили на наркотизированных тиопенталом натрия (30 мг/кг, внутрибрюшинно) крысах. АД измеряли в сонной артерии через предварительно введенную канюлю. Глицидипин вводили в дозе 3,5 мг/кг, НФ вводили в дозе 3,5 мг/кг и 035 мг/кг. Комплекс ПП:ГК (1:4) вводили в дозах 0,2 мг/кг, 0,0025 мг/кг, 0,00025 мг/кг. ПП вводили в дозах 0,2 мг/кг, 0,02 мг/кг, 0,0025 мг/кг, 0,00025 мг/кг. Комплексы НФ:СТ (1:4) и НФ:8У/ (1:4) вводили в дозе 3,5 мг/кг. Комплексы НФ:РБ (1:2, 1:4) вводили в дозе 3,5 мг/кг. Комплексы НФ:АГ (1:4; 1:8; 1:16) вводили в дозах 35 мг/кг, 14 мг/кг, 7 мг/кг, 3,5 мг/кг, 0,175 мг/кг; 70 мг/кг, 14 мг/кг, 7 мг/кг, 3,5 мг/кг,

Ребаудиозид Арабиногадактан

140 мг/кг, 28 мг/кг, 14 мг/кг, 0,07 мг/кг, 0,07 мг/кг. НФ вводили в дозах 3,5 мг/кг, 1,4 мг/кг, 0,7 мг/кг. Все агенты вводили в бедренную вену. Регистрацию параметров вели в течение 15 минут после введения агентов с помощью электрофизиологического комплекса LabLinc V фирмы «Coulboum Instruments» (США). При внутрижелудочном введении агентов АД записывали бодрствующим крысам с помощью хвостовой манжеты и прибора LE 5007 Automatic blood pressure computer (Letica, Испания). Глицидипин вводили в дозе 3,5 мг/кг, НФ вводили в дозе 3,5 мг/кг и 0,35 мг/кг. Антиаритмическую активность исследовали на наркотизированных тиопенталом натрия (30 мг/кг, внутрибрюшинно) крысах. Для записи ЭКГ накладывали подкожные электроды во второе стандартное отведение. Агенты вводили в бедренную вену крысы. На модели хлорид кальциевой аритмии (СаС12 в/в 250 мг/кг) глицидипин вводили в дозе 0,12 мг/кг, НФ вводили в дозе 0,12 мг/кг. Комплекс АМД:ГК (1:4) вводили в дозах 0,05 мг/кг и 0,05 мг/кг. Комплексы НФ:СТ (1:4) вводили в дозе 0,15 мг/кг. Комплексы НФ:РБ (1:2, 1:4) вводили в дозах 0,0035 мг/кг, НФ вводили в дозах 0,0035 мг/кг и 0,00035 мг/кг. Комплекс АМД:АГ (1:4) вводили в дозе 0,002 мг/кг. На модели адреналовой аритмии (адреналин в/в 0,3 мг/кг) комплекс ПП:ГК 1:4 вводили в дозе 0,0025 мг/кг. ПП вводили в дозе 0,0002 мг/кг. Глицидипин вводили в дозе 0,15 мг/кг. Регистрацию параметров вели в течение 10 минут после введения агентов с помощью электрофизиологического комплекса LabLinc V фирмы «Coulboum Instruments» (США).

Изучение действия глицидипина на медленные Са~ проводили на стандартной модели изолированных нейронов моллюска Lymnaea stagnalis (Запара, 2005).

Изучение острой и субхронической токсичности. Острую токсичность комплексов определяли при однократном внутрибрюшинном введении на крысах линии Вистар.

Субхроническую токсичность при внутрибрюшинном введении изучали при внутрибрюшинном введении самцам и самкам крыс линии Вистар в течение 14 дней. Животные были разбиты на 5 групп (по 6 животных в каждой): группа 1 - контрольная, физиологический раствор; группа 2 - глицидипин в дозе 200 мг/кг, группа 3 - глицидипин в дозе 3,5 мг/кг, группа 4 - нифедипин в дозе 3,5 мг/кг; группа 5 - глицирризиновая кислота в дозе 3,2 мг/кг. Растворы вводили из расчета 0,2 мл/ЮО гр. веса животного. Для растворения субстанции нифедипина в воде добавляли 0,05 мл Tween-80. Для корректности эксперимента, остальные растворы готовили аналогичным образом. Через 14 дней после начала эксперимента была взята периферическая кровь для общего анализа из сосудов хвоста. Для биохимического анализа была забрана кровь из шейных сосудов. Для гистологического исследования были взяты жизненно-важные органы:

легкие, сердце, печень, почки. Субхроническую токсичность при внутрижелудочном введении изучали на самцах крыс линии НИСАГ в течении 45 дней. Животные в количестве 25 штук были разбиты на 4 группы с учетом исходного артериального давления: группа 1 -глицидипин в дозе 3,5 мг/кг, группа 2 - контрольная, нифедипин в дозе 3,5 мг/кг, группа 3 - контрольная, глицирризиновая кислота в дозе 3,2 мг/кг; 1руппа 4 - контрольная, физиологический раствор. Для растворения субстанции нифедилина в воде добавляли 0,05 мл Тлуееп-80. Для корректности эксперимента, остальные растворы готовили аналогичным образом. Растворы вводили из расчета 0,2 мл/100 гр. веса животного. Через 45 дней после начала эксперимента была взята периферическая кровь для общего анализа из сосудов хвоста. Для биохимического анализа была забрана кровь из шейных сосудов. Для гистологического исследования были взяты жизненно-важные органы: легкие, сердце, печень, почки.

Гематологические показатели периферической крови определяли на гемоанализаторе «МесЬгис» СА 530» (Швеция). Биохимические показатели крови: креатинина, аланинаминотрансферазы, аспаргатаминотрансферазы, щелочной фосфатазы, холестерина, общего белка и глюкозы определяли с использованием стандартных диагностических наборов фирмы "Ольвекс-диагностикум" на фотометре - 5010 «ВоеЬппдег МаппЬет» (Германия).

Гистологическое исследование. Полученный для морфологического исследования материал подвергали гистологической обработке на комплексе МКЖМ («Карл Цейс» Германия) по стандартной методике. Окрашенные препараты исследовали методом световой микроскопии в проходящем свете, а сердце - дополнительно в поляризованном свете на микроскопе Ахювкор 40, с последующим микрофотографированием с использованием фотокамеры АхюСат №Жс и программного обеспечения АхюУ13юп 4.5.

Статистическую обработку данных вели с помощью программного пакета "81айзйса 7.0". Результаты представлены как среднее ± стандартная ошибка среднего. О достоверности различий судили, используя ^критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Комплексы с глицирризиновой кислотой

Гипотензивная и антиаритмическая активнотсь комплекса с пропранолопом. Для комплекса ПП:ГК (1:4) и фармакона экспериментальным путем были подобраны дозы, при которых происходило снижение артериального давления. Агенты вводили внутривенно.

Максимальная доза комплекса, при которой АД снижается на 27 мм.рт.ст. является доза 0,2 мг/кг, а минимальной дозой - 0,0025 мг/кг

(снижение на 15 мм.рт.ст.). Одинаковое снижение АД после введения комплекса и ПП в дозе 0,0025 мг/кг показывает стабилизирующий эффект комплексообразования. Примечательным является то, что в комплексе содержание ПП в 12 раз меньше. При этом сама ПС не оказывает влияние на артериальное давление.

Антиаритм ическая активность комплекса ПП:ГК 1:4 была изучена на модели адреналовой аритмии в дозе при которой достигается максимальный гипотензивный эффект (0,0025 мг/кг). После введения комплекса в этой дозе на фоне аритмогена выживаемость животных составила 100%, в то время как при введении пропранолола в дозе 0,0002 мг/кг содержащейся в комплексе, выживаемость животных снизилась до 40%. Сама ГК в этих дозах не обладает антиаритмическим эффектом. На основании полученных результатов можно заключить, что комплекс ШГ.ГК 1:4, введенный в дозе 0,0025 мг/кг, способен одновременно снижать АД и оказывать высокое антиаритмическое действие. Отсутствие гипотензивного и антиаритмического свойств у ГК в указанных дозах согласуется с литературными данными (Толстиков и соавт., 2007).

А нтиаритми ческая активность комплекса амиодарона с глицирризиновой кислотой. Для комплекса амиодарона с ГК (1:4) была изучена антиаритмическая активность на хлорид кальциевой модели аритмии. Было установлено, что при внутривенном введении комплекса в дозе 0,005 мг/кг до аритмогена выживаемость животных составляет 100%, а при введении на фоне аритмии 80%. При введении амиодарона в такой же дозе и в дозе, содержащейся в комплексе (0,0008 мг/кг), наблюдался 100% антиаритмический эффект при аналогичных схемах введения.

Полученные результаты свидетельствуют о том, что в комплексе АМД:ПС 1:4 не было достигнуто свойств, характерных для пгакозидного комплексообразования (снижение дозы при сохранении базовой активности) (Толстиков и соав., 2007а). При этом стоит отметить, что при введении комплекса в дозе 0,005 мг/кг животным наступление летального исхода наблюдается на 1,5-2 минут позже по сравнению с амиодароном введенной в той же дозе.

Гипотензивная и антиаритмическая активность комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой. Для комплекса нифедипина с ГК 1:4 изучено гипотензивное и плейотропное антиаритмическое действие. Установлено, что при внутривенном введении комплекса и чистого нифедипина в одинаковых дозах 3,5 мг/кг наблюдается аналогичное (26% (37 мм.рт.ст.) и 30% (36 мм.рт.ст.) снижение АД. Примечательно, что в составе комплекса доза нифедипина в 10 раз меньше - 0,35 мг/кг. В такой же дозе нифедипин снижает АД только на 9% (11,5 мм.рт.ст.) Наши результаты по гипотензивному действию НФ в дозе 0,35 мг/кг согласуются с литературными данными (Paulis et al., 2007).

Известно, что антиаритмическое действие для нифедипина является не существенным (Машковский, 2005). В этой связи был изучен антиаритмический эффект комплекса в сравнении с нифедипином. На модели хлорид кальциевой аритмии была установлена доза комплекса (0,12 мг/кг), при которой достигается максимальный антиаритмический эффект при двух схемах введения агентов. Выживаемость животных составляет 80% при введении комплекса до аритмогена и 90% при введении комплекса после аритмогена. Для нифедипина в дозе 0,12 мг/кг антиаритмического действия не обнаружено. На модели адреналовой аритмии эффекта не обнаружено.

Таким образом, комплекс НФ:ГК 1:4 - не только являются новым, но и не имеет аналогов по характеру фармакологического действия, поскольку позволяет изменением дозы переходить от гипотензивного действия к антиаритмическому.

Комплексы с метаболитами Stevia rebaudiana BertonL Гипотензивная и антиаритмическая активность комплексов нифедипина со стевиозидом и ферментативно обработанной формой стевиозида -«SWETA». Как и в случае с ГК, были проведены исследования по изучению, характерных для комплексообразования свойств, а именно снижение дозы и усиление плейотропных свойств. При изучении гипотензивного действия комплексов нифедипина со стевиозидом и стевиозидом «SWETA» при внутривенном введении, показано их высокая базовая активность в той же дозе (3,5 мг/кг), что и комплекс НФ:ГК 1:4. Комплексы НФ:СТ 1:4 и HO:SW 1:4 снижают АД на 26% (34 мм.рт.ст.) и 32% (46 мм.рт.ст.), соответственно. Сами СТ и SW в дозе 3,5 мг/кг снижают АД, соответственно только на 7% (10 мм.рт.ст.) и 8% (И мм.рт.ст.). При сравнении гипотензивного действия двух комплексов следует отметить разницу в снижении АД (на 6%) при введении комплекса HO:SW 1:4. Такое отличие, возможно, связано с повышением стабильности комплекса со стевиозидом «SWETA».

Антиаригмическое действие комплекса НФ:СТ 1:4 было изучено на двух моделях аритмий - хлорид кальциевой и адреналовой. Установлена доза 0,15 мг/кг, при которой достигается 100% и 40% выживаемость животных при введении агента до аритмогена на хлорид кальциевой и адреналовой модели аритмии, соответственно. При введении агента в той же дозе, на фоне развившейся хлорид кальциевой аритмии, выживаемость животных составила 20%, а на адреналовой - эффекта не наблюдалось. Стоит отметить высокую ангиаритмическую активность самого стевиозида, который предотвращает развитие аритмии в среднем на 45% на обеих моделях аритмии. Данное свойство может быть обусловлено известным для стевиозида антагонизмом кальция (Chan, et al., 1998; Lee et

а1., 2001). Исходя из этого, можно предположить, что комплексирование стевиозида НФ усиливает плейотропное действие последнего.

Гипотензивная и антиаритмическая активность комплекса нифедипина с ребаудиозидом. При изучении гипотензивного действия комплекса НФ:РБ 1:4 в дозе 3,5 мг/кг, установлено снижение АД на 9%, тогда как аналогичные комплексы нифедипнина с ГК, СТ и SW снижают АД в среднем на 26%. Данное отличие, возможно, связано со структурной особенностью и стабильностью комплекса. Одним из решений этой проблемы было уменьшение количества РБ в составе комплекса до соотношения НФ:РБ 1:2. При изучении гипотензивной активности комплекса НФ:РБ 1:2 показано резкое повышение эффекта в 2,8 раза, что подтверждает наше предположение о влиянии количества молекул РБ в комплексе на проявление базовой активности (Толстикова и соавт., 2007). Сам РБ в дозе 3,5 мг/кг не оказывает влияния на АД, что сопоставимо с литературными данными (МаЫа е! а1., 2008).

На основании малой эффективности комплексов с НФ на адреналовой модели аритмии, изучение антиаритмической активности комплекса НФ:РБ (1:4; 1:2) было проведено только на модели хлорид кальциевой аришии. Была установлена доза 0,0035 мг/кг, в которой оба комплекса при введении до аритмогена обеспечивают 100% выживаемость животных. При введении после аритмогена эффекта не обнаружено. НФ в той дозе, в которой он содержится в комплексе (0,00035 мг/кг) не проявляет антиаритмической активности. Таким образом, комплексы с ребаудиозидом отличаются от других изученных комплексов, проявлением высокой базовой активности фармакона в соотношении 1:2, а не 1:4, при этом усиление плейотропной активности сохраняется для обоих комплексов (НФ:РБ 1:2 и 1:4)

Комплексы с арабиногалактаном. Гипотензивная и антиаритмическая активность комплексов нифедипина с арабиногалактаном. Для изучения гипотензивной и антиаритмической активности были получены комплексы НФ:АГ с различным содержанием АГ - 1:4, 1:8, 1:16. В результате проведенного скрининга установлен дозозависимый эффект при внутривенном введении комплексов НФ:АГ. Показано, что при введении комплексов НФ:АГ 1:4, 1:8 и 1:16 в максимальных дозах 35 мг/кг, 70 мг/кг и 140 мг/кг (что соответствует терапевтической дозе нифедипина 3,5 мг/кг), соответственно, происходит увеличение гипотензивной активности от 41% до 54,6%. При введении комплекса НФ:АГ 1:4 в более низких дозах - 14 мг/кг, 7 мг/кг и 3,5 мг/кг АД снижается в среднем на 26%. Аналогичное снижение АД было отмечено и при введении комплекса НФ:АГ 1:8 в дозах 14мг/кг, 7 мг/кг, и комплекса НФ:АГ 1:16 в дозах 28 мг/кг, 14 мг/кг. Нифедипин в максимальной дозе 3,5 мг/кг снижает АД на 31,4%, а в минимальной дозе

0,35 мг/кг на 9%. Таким образом, было установлено, что все исследованные комплексы НФ:АГ при внутривенном введении в диапазоне доз от 1,4 мг/кг до 0,35 мг/кг (в пересчете на нифедипин) превосходят нифедипин по силе и по стабильности гипотензивного действия. Сам арабиногалактан не вызывает статистически значимого снижения АД.

Для комплекса НФ:АГ 1:4 было изучено антиаритмическое действие на крысах при внутривенном введении. Установлено, что комплекс в дозе 0,175 мг/кг (доза нифедипина 0,0175мг/кг) при введении до аритмогена купирует наступление летального нарушения сердечного ритма в 100% случаев, а при введении после аритмогена - только в 65% случаев. Нифедипин, введенный в дозе 0,017 мг/кг, не обнаруживает антиаритмического действия на модели хлорид кальциевой аритмии. Таким образом, результаты комплексообразования нифедипина с полисахаридом арабиногалактаном сопоставимы с результатами, полученными при комплексировании с растительными гликозидами, характеризующимися высокой гипотензивной и антиаритмической активностью при десяти кратном снижении дозы нифедипина.

Антиаритмическая активность комплекса амиодарона с арабиногалактаном. При изучении антиаритмической активности комплекса АМД.ГК 1:4 показано, что на модели хлорид кальциевой аритмии происходит 100% предупреждение развития аритмии и незначительная (30%) ее блокада.

В результате проведенного исследования установлено, что комплексирование амиодарона с полисахаридом арабиногалактаном не привело к существенным изменениям фармакологической активности комплекса АМД:АГ 1:4.

Таблица 1. Скрининг гипотензивной активности комплексов нифедипина и пропранолола с углеводсодержащими растительными метаболитами.

Агеоты, дозы (ьг/кт), в скобках доза фармакона

НФ п пп 2 пп ПП:ПС «V « О о НФ:ГК 1:4 " 2 НФСТ 1:4 т е нф.-я 1* N НФЯ6 Н 1* « ® Ф:РВ 12 я ¡в" НФ*Г в 1:8 о НФАГ «г 2 о 1:16 о *

1 !!!! - 1 - —

щ

м>

Таблица 2. Антиаритмическая активность комплексов.

100 90 80 70 60 50

40 —|! 30 20 10 0

100

100 100

55

40

~55~

60

45

/ / / / о/ / У У

У У У У У <

^ ¿Г 4Г

Г

Г

о^

¿г

г

г у

у

Анализ представленных выше результатов скрининга выявил кандидата на дальнейшее углубленное изучение - комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой 1:4 (далее глицидипин) по следующим параметрам:

1. Снижение дозы нифедипина в десять раз при сохранении высокого гипотензивного действия.

2. Проявление антиаритмического эффекта в дозе, которая в 29 раз меньше гипотензивной дозы.

3. Повышение растворимости вводе.

4. Наличие достаточной сырьевой базы солодкового корня на территории РФ и СНГ.

5. Обширные данные по изучению фармакологических свойств ГК по сравнению с другими изученными метаболитами.

Гипотензивная и аншаршмическая активность глицидипина на крысах линии Вистар. Проведено исследование гипотензивной активности глицидипина на нормотензивных крысах линии Вистар при внутривенном введении.

Таблица 3. Гипотензивное действие глицидипина.

Агент Доза, (мг/кг) Исходное АД, (мм.рт.ст) АД после введения агента, (мм.рт.ст) % снижения АД

Глицидипи н 3,5 139,0±5,0 102,0±4,Г 26

Нифедипи н 3,5 125,0±6,6 89,0±4,5* 29

0,35 120,1±4,4 109,0±3,2* 9

ГК 3,2 126,5±1,3 129,6±2,0 0

*р<0,05 по отношению с исходному АД

Установлено, что снижение АД при введении глицидипина в дозе 3,5 мг/кг (доза нифедипина 0,35 мг/кг) аналогично нифедипину и составляет 37 мм.рт.ст. Следует отметить, что НФ в дозе 0,35 мг/кг снижает АД только на 11 мм.рт.ст. Приведенные результаты полностью воспроизводят данные скрининга (табл. 3).

Следующим этапом исследования стало изучение гипотензивной активности глицидишша на модели артериальной гипертензии, индуцированной адреналином (0,0005 мг/кг) (Колла и соавт., 1998). Эффект агентов оценивали по времени восстановления АД до исходных значений. Агенты вводили по двум схемам. При схеме введения «агент + адреналин» было показано, что время восстановления АД на фоне глицидишша и нифедипина статистически отличается от контроля (204,8 сек.) и составляет 94,4 и 79,7 сек., соответственно. При этом НФ, вводимый в дозе 3,5 мг/кг, восстанавливает АД на 15% быстрее глицидипина, введенного в аналогичной дозе, но содержащего в 10 раз меньшую дозу нифедипина. При изучении влияния глицидипина на индуцированную гипертензию по схеме «адреналин + агент», восстановление АД до исходного уровня так же было статистически достоверным во всех группах. При этом стоит отметить, что в противоположность описанным выше результатам, в данном случае на фоне развившейся гипертензии купирование высокого АД происходит на 37 сек. быстрее после введения глицидипина. Из приведенных результатов следует, что на модели, экспериментально вызванной артериальной гипертензии, глицидипин проявляет аналогичную нифедипину гипотензивную активность и купирует повышение АД как при введении до адреналина, так и после, но в дозе 10 раз меньшей (0,35 мг/кг). При внутрибрюшинном введении глицидипина в дозе 3,5 мг/кг крысам линии Вистар неинвазивным методом установлено постепенное снижение АД до максимального значения 22 мм.рт.ст (17% от исходного АД) в течение 30 минут и плавное восстановление АД до 9 мм.рт.ст. (практически до исходного уровня) в течение 90 минут. Постепенное снижение, а также плавное восстановление АД под влиянием глицидипина, введенного внутрибрюшинно в дозе 3,5 мг/кг, несомненно, является положительной характеристикой данного соединения (рис. 1).

Рис. 1. Гипотензивная активность глицидипина

при внутрибрюшинном введении крысам линии Вистар

При внутрижелудочном введении глицидипина в дозе 3,5 мг/кг крысам линии Вистар неинвазивным методом установлено постепенное снижение АД до максимального значения 18 мм.рт.ст в течение 60 минут и плавное восстановление АД до 11 мм.рт.ст. (практически до исходного уровня) в течение 180 минут. В то время как нифедипин, введенный в дозе 3,5 мг/кг, более резко снижает АД на 19,5 мм.рт.ст. за 30 мин., а восстановление АД происходит в течение 210 мин. и менее плавно, чем у глицидипина (рис.2).

По плавности снижения артериального давления, что является весьма важной характеристикой, шицидипин можно приблизить к производным 1,4 дигидропиридинов второго поколения блокаторов кальциевых каналов (нифедипин ретард, нимодипин, низолдипин,

манидипин и др.) (Meredith et al., 2004).

При изучении антиаритмического свойства глицидипина на модели хлорид кальциевой аритмии была установлена доза 0,12 мг/кг, при которой выживаемость животных при введении до аритмогена составляет 80%, а при введении его после аритмогена - 90%. Нифедипин в дозе 0,12 мг/кг не проявил антиаритмической активности (табл. 4).

Таблица 4. Ангиаритмическая активность глицидипина на модели хлорид кальциевой аритмии.__

Агент Доза препарата мг/кг Количество выживших крыс, %

Агенг+СаС12 СаС12+Агент

Глицидипин 0,12 80 90

Нифедипин 0,12 0 0

Таким образом, глицидипин был изучен на нормотензивных крысах линии Вистар при различных способах введения. В остром эксперименте при внутривенном введении глицидипина в дозе 3,5 мг/кг (доза нифедипина 0,35 мг/кг) было установлено, что снижение АД аналогично нифедипину и составляет 37 мм.рт.ст., тогда как НФ в дозе 0,35 мг/кг снижает АД только на 11 мм.рт.ст. На фоне индуцированной адреналином гипертензии показано, что глицидипин проявляет большую эффективность по сравнению с НФ.

При сравнительном анализе результатов, полученных при изучении гипотензивной активности глицидипина при неинвазивном способе

ИЭМДмое 30 60 120 IM 3*0

j—*—К0м1яиг.1.6мг/>г ■ на.З.ВиДд]

Рисунок 2. Гипотензивная активности глицидипина при внутрижелудочном введении крысам линии Вистар.

регистрации АД показано, что как при парентеральном, так и энтеральном способах введения в дозе 3,5 мг/кг наблюдается постепенное снижение с последующим плавным восстановлением АД. Впервые для глицидипина в дозе 0,12 мг/кг показана высокая антиаритмическая активность на хлорид кальциевой аритмии (выживаемость животных составила в среднем 85%).

Изучение гипотензивной и антнаригмической активности глицидипипа па крысах линии НИСАГ. Известно, что артериальная гипертепзия является хроническим заболеванием (Кобалава и соавт., 2004), поэтому было интересно изучить влияние глицидипина на АД у крыс с генетически обусловленной стресс-индуцированной артериальной гипертензией (НИСАГ) (Маркель и соавт., 1985). Гипотензивную активность глицидипина определяли при его внутривенном введении в дозе 3,5 мг/кг. Установлено, что после введения глицидипина в указанной дозе происходит достоверное, по сравнению с исходным, снижение АД на 28% (50,8 мм.рт.ст.), тогда как при введении нифедипина, в той же дозе, наблюдается аналогичное снижение АД на 34% (65 мм.рт.ст.) (табл. 5).

Таблица 5. Гипотензивнее дейиБиепмцвдипиш, крысы линииНИСАГ.

Агент Доза, (мг/кг) Исходное АД, (мм.рт.ст) АД после введения агента, (мм.рт.ст) % снижения АД

Глициди пин 3,5 180,5±4,7 129,7±5,Г 28

Нифедип ин 3,5 192,0±4,0 127,0±6,0* 34

0,35 189,0±4,2 170,1±5,4* 10

*р<0,05 по отношению к исходному АД

В результате исследования показано, что введение глицидипина крысам с генетически обусловленной артериальной гипертензией достоверно снижает АД, так же как и в экспериментах на нормотензивных крысах.

При введении глицидипина внутрибрюшинным способом в дозе 3,5 мг/кг было установлено, что максимальное снижение АД на 19 мм.рт.ст происходит через 30 минут после введения агента и плавное восстановление АД до 8 мм.рт.ст. (практически до исходного уровня) в течение 90 минут. Таким образом, фармакодинамика, наблюдаемая у глицидипина на крысах линии НИСАГ, аналогична таковой у крыс линии Вистар, а именно постепенное снижение и плавное восстановление АД под влиянием глицидипина в дозе 3,5 мг/кг (рис. 3). Данный факт,

Рис. 3. Гипотензивная активность глицидипина при внутрибрюшинном введении крысам линии НИСАГ

несомненно, расширяет терапевтические возможности глицидипина по сравнению с нифедипином.

Было обнаружено, что глицидипин в дозе 3,5 мг/кг при внутрижелудочном введении проявляет максимальный

гипотензивный эффект (20 мм.рт.ст.) через 60 мин. после введения. Интересной

особенностью гипотензивного действия нифедипина в этом эксперименте стало резкое снижение АД на 41 мм.рт.ст. уже через 30 минут после его введения в дозе 3,5 мг/кг, при сохранении высокой гипотензивной активности (на 35 мм.рт.ст.) на протяжении 90 мин (рис. 4).

Как известно, резкое снижение АД может спровоцировать эффект

«коронарного обкрадывания» и привести к ишемии миокарда, в то время как при постепенном снижении АД такая особенность гипотензивного действия менее вероятна (Triggle, 2007). В результате изучения антиаритмической активности глицидипина в дозе 0,12 мг/кг, обнаружено, что как при введении агента до аритмогена, так и после него, выживаемость животных составляет 60%.

Проведенные исследования основных свойств глицидипина на крысах линии НИСАГ показали полную аналогию проявления его действия, установленного в экспериментах на нормотензивных животных. Отличительным в этих экспериментах стала гипотензивная активность нифедипина, проявляющаяся в резком и значительном снижении АД. Кроме того, следует отметить сниженную антиаритмичсскую активность, которая может быть связана с большей восприимчивостью крыс линии НИСАГ к аритмогену из-за длительно персистирующей артериальной гипертензии (Summaiy of the 2007 European Society of Hypertension and European Society of Cardiology Guidelines for the Management of Arterial Hypertension, 2007) и, как следствие, гипертрофии левого желудочка и нарушения коронарного кровотока (Сахаров и соанг., 1994.; Yakobsonetal., 1995).

Вц» гнет ицц

—Комтжс, 3,$мг*т —■— Н». З.Ьмгк [

Рис. 4. Гипотензивная активность глицидипина при внутрижелудочном введении крысам линии НИСАГ

Изучение действия глицидипина на медленные Са2+-каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа ШдпаЛх (Запара, 2005). Данная модель позволила оценить взаимодействие глицидипина с рецепторами кальциевых каналов - мишенями нифедипина в качестве блокатора медленный кальциевых каналов.

В результате исследований агентов в одинаковых концентрациях обнаружено, что подавление кальциевого тока под действием нифедипина развивается монотонно и максимальная блокада токов наблюдается в среднем на 25-ой минуте инкубации нейронов (рис. 5, кривая 1). Под влиянием глицидипина уменьшение амплитуды кальциевого тока в случае глицидипина имело отчетливый бимодальный характер (рис. 5, кривая 2). Максимальная блокада токов кальция под влиянием глицидипина наблюдалась в среднем на 55 минуте инкубации нейронов, что подтверждает предположение о более сложном типе взаимодействия глицидипина с рецепторами. Более медленно, по сравнению с нифедипином, происходила отмывка гаицидипина и

восстановление амплтуды кальциевых токов (рис. 5). Наблюдаемое различие в восстановлении кальциевых токов после отмывки одинаковых концентраций нифедипина и глицидипина свидетельствует о пролонгированном удерживании последнего на рецепторе по сравнению с нифедипином, концентрация которого была в 10 раз больше, чем в глицидипине.

Сравнение действия нифедипина и глицидипина на рецепторы кальциевых каналов изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа з/а^па/« позволяют сделать предположение, что

глицидипин обладает повышенным аффинитетом к рецепторам по сравнению с нифедипином (Толстикова и соавт., 2007).

Рис. 5. Изменения амплитуды кальциевого тока, вызванные действием и отмыванием блокаторов (по 12 клеткам).

1 - изменение амплитуды кальциевых токов, вызванное нифедипином.

2 - изменение амплитуды кальциевых токов, вызванное глицидипином.

Стрелки вверх начало действия блокаторов. Стрелки вниз начало отмывания блокаторов.

По оси X время в минутах

По оси У амплитуда входящего тока в пА.

Изучение возможного кардпопротективпого действия глицидипина. Исследования были выполнены совместно с кафедрой фармакологии (зав., каф. проф. Беленичев И.Ф.) Запорожского Государственного медицинского университета, Запорожье, Украина. Изучение кардиопротективного действия глицидипина проводилось в условиях моделирования ишемии миокарда (ИМ) введением питуитрина (0,5 Ед/кг внутрибрюшинно) и изадрина (100 мг/кг подкожно) по таким показателям, как предупреждение ишемического повреждения кардимиоцигов, уменьшение проявлений оксидативного стресса, оптимизация энергетического метаболизма миокарда (Стефанов, 2002; Тишкин, 1989). В качестве электрокардиографического критерия эффективности противоишемического действия препарата использовали метод ЭКГ картирования (Стефанов, 2002; Тишкин, 1989) с расчетом показателей суммарной степени смещения сегмента БТ относительно изолинии (ЕдвТ). Глицидипин и препарат сравнения изоптин вводили 3-х кратно в течение суток параллельно с формированием ИМ внутрибрюшинно в дозе 5 мг/кг крысам линии Вистар.

Экспериментальная ИМ у животных характеризовался увеличением сегмента БТ от изолинии. Введение глицидипина на фоне ИМ приводила к уменьшению отклонения БТ, способствовала снижению гиперферментемии ЛДГ, что свидетельствует о противоишемическом действии препарата. Моделирование ИМ приводило к типичным ишемическим нарушениям энергетического метаболизма миокарда -активации гликолиза, дискоординащш в цикле Кребса, энергодефициту. Введение глицидипина приводило к увеличению уровня АТФ за счет интенсификации аэробных процессов, уменьшало активность малопроизводительного анаэробного гликолиза, о чем свидетельствует снижение уровня лактата и нормализовало окисление в цикле Кребса на дикарбоновом (повышение уровня малата) участке. Глицидипин в условиях ишемии миокарда оказывал позитивное действие не только на продукцию энергии, но и ее транспорт, о чем свидетельствовало увеличение активности митохондриальной креатинфосфокиназы (КФК-мх). При моделировании ИМ наблюдалось угнетение активности СОД и повышение уровня маркеров окислительной модификации белка - АФГ и КФГ в миокарде. Введение глицидипина оказывало значительный антиоксидантный эффект, что проявлялось в повышении активности СОД и снижении маркерных продуктов - АФГ и КФГ.

Таким образом, установлено, что глицидипин обладает высоким кардиопротективным и антиоксидантным действием. Вышеизложенные результаты позволяют заключить, что комплексирования нифедипина с глицирризиновой кислотой сохраняет высокий кардиопротективный эффект, характерный для обоих этих соединений.

Острая в субхроническая токсичность глицидипина. При

определении острой токсичности глицидипина на крысах не удалось установить его ЬВ50 при внутрибрюшинном способе введения. Максимальная доза глицидипина, которую удалось ввести внутрибрюшшшо - 200 мг/кг, что соответствует 20 мг/кг нифедипина. Тогда как, Г^о для нифедипина при внутрибрюшинном введении крысам - составляет 15 мг/кг, а ЬБ50 для ГК при внутрибрюшинном введении крысам 1650 мг/кг. Внутрибрюшшшое введения глицидипина животным в течение 14 дней в диапазоне доз от 20 до 200 мг/кг токсических проявлений не вызывало.

С целью определения субхронической токсичности глицидипина проведены исследования на крысах линии Вистар при внутрибрюшинном введении в течение 14 дней и на крысах линии НИСАГ при внутрижелудочном введении в течение 45 дней. Ежедневное внутрибрюшинное введение глицидипина, в дозе 3,5 мг/кг в течение 14 дней не вызвало интоксикации животных, изменения их состояния и поведения, не оказало заметного патологического влияния на такие интегральные показатели, как температура и масса тела. В результате анализа показателей периферической крови установлено, что в течение всего опыта в каждой группе крыс имели место колебания отдельных показателей, которые, однако, не выходили за пределы физиологической нормы для данного вида животных (Даренская и со авт., 2004).

Анализ лейкоцитарной формулы крови, проведенный через 14 дней от начала введения показал отсутствие статистической разницы в клеточном составе между опытными и контрольными животными. Таким образом, в результате гематологического исследования не было выявлено значимых изменений в картине периферической крови под влиянием длительного введения глицидипина в дозе 3,5 и 200 мг/кг. Сравнительный анализ биохимических показателей крови исследуемых агентов показал небольшие колебания, которые являются физиологичными и показывают отсутствие токсического воздействия исследуемых агентов на организм (Даренская и соавт., 2004). Для оценки метаболической

функции почек определяли следующие показатели мочи: объем, рН, белок, глюкозу, кетоны, скрытую кровь, уробилиноген и билирубин. Сбор мочи проводили в индивидуальных обменных клетках с водной нагрузкой (5 мл). Для анализа мочи использовали тест-полоски. Согласно полученным данным, введение агентов в изученных дозах в целом не оказало влияние на величину суточного диуреза, рН мочи и экскретируемые метаболиты. Не обнаружено нарушений экскреции билирубина и уробилиногена с мочой. Сделан вывод об отсутствии влияния агентов на почечную функцию. Описанные выше результаты свидетельствуют о том, что введение глицидипина в дозе 3,5 мг/кг в

течение 14 дней не оказывает токсического воздействия на жизненно важные органы животных.

При макроскопическом исследовании внутренних органов всех животных отклонений от физиологической нормы не обнаружено. При световом микроскопическом исследовании усановлено:

1. Внутрибрюшинное введение глицидипина в субтоксической дозе (200 мг/кг) приводит к расширению резистивных сосудов в миокарде и почках, вызывает увеличение степени их кровенаполнения и оказывает токсическое поражение эпителиоцигов дистальных и проксимальных канальцев почек.

2. Введение глицидипин в дозе 3,5 мг/кг вызывает более выраженное расширение резистивных сосудов в миокарде, почках и сопровождается повышением степени их кровенаполнения по сравнению с нифедипином в дозе 3,5 мг/кг.

3. Введение глицирризиновой кислоты не влияет на морфологическую картину исследуемых органов.

Ежедневное внутрибрюшинное введение глицидипина в дозе 3,5 мг/кг в течение 45 дней не вызывало интоксикации животных, изменения их состояния и поведения, не оказывало заметного патологического влияния на такие интегральные показатели, как температура и масса тела. В результате гематологического исследования не было выявлено значимых изменений в картине периферической крови под влиянием длительного внутрижелудочного введения глицидипина в дозе 3,5 мг/кг. Сравнительный анализ биохимических показателей крови исследуемых агентов показал небольшие колебания, которые являются физиологичными и показывают отсутствие токсического воздействия исследуемых агентов на организм (Даренская и соавт., 2004). При оценке метаболической функции почек сделан вывод об отсутствии токсического влияния агентов.

При макроскопическом исследовании внутренних органов всех животных отклонений от физиологической нормы не обнаружено. При световом микроскопическом исследовании обнаружено:

1. Внутрижелудочное введение нифедипина приводит к расширению резистивных сосудов в миокарде, почках и вызывает уменьшение объема контрактурных изменений миокардиоцигов.

2. Введение глицидипина в дозе 3,5 мг/кг вызывает более выраженное расширение резистивных сосудов в миокарде, почках и сопровождается повышением степени их кровенаполнения по сравнению с нифедипином в дозе 3,5 мг/кг.

3. Введение глицирризиновой кислоты не оказывает заметного влияния на морфологическую картину исследуемых органов.

выводы

1. В результате скрининга установлено, что антиаритмическое действие комплекса лропранолола только с глицирризиновой кислотой проявляется при снижении дозы фармакона в 50 раз, а высокое гипотензивное действие комплексов нифедипина с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, стевиозидом «SWETA», ребаудиозидом и арабиногалактаном сохраняется при снижении дозы фармакона в 10 раз. Комплексирование амиодарона не приводит к существенным изменениям его антиаригмических свойств.

2. Комплексирование нифедипина с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном позволило усилить его антиаритмическое действие при снижении дозы в 30 раз. Выявлен наиболее перспективный комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин).

3. Глицидипин проявляет высокую гипотензивную активность в дозе 3,5 мг/кг (доза нифедипина 0,35 мг/кг) при парентеральном и энтеральном способах введения крысам линии Вистар и НИСАГ.

4. Установлен высокий антиаритмический эффект глицидипина в дозе

0.12.мг/кг при парентеральном введении крысам линии Вистар и НИСАГ.

5. Показано, что глицидипин постепенно блокирует Са2+ каналы изолированных нейронов моллюска Lymnaea stagnalis, а его максимальный блокирующий эффект развивается на 25 минут позже нифедипина.

6. Установлено, что парентеральное и энтеральное введение глицидипина крысам в течение 14 и 45 дней, соответственно, не вызывает токсических изменений в жизненно важных органах и системах.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Хвостов М.В., Брызгалов А.О. Использование нового подхода комплексообразования известных лекарственных препаратов с растительными гликозидами в профилактике и купировании острых гипергензивных состояний (экспериментальное исследование) // Тезисы докладов «1 съезда терапевтов Сибири и Дальнего Востока». -Новосибирск, 2005. - С. 1025-1032.

2. Толстикова Т.Г., Сорокина И.В., Брызгалов А.О., Хвостов М.В., Лифшиц Г.И. Использование нового подхода комплексообразования известных лекарственных препаратов с растительными гликозидами в профилактике и купировании острых гипертензивных состояний (экспериментальное исследование) // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. - 2006. - №1. - С. 55-58.

3. Хвостов М.В., Брызгалов А.О., Толстикова Т.Г., Лифшиц Г.И Использование нового подхода клатрирования кардиотропных препаратов с глицирризиновой кислотой в профилактике и купировании острых гипертензивных состояний в эксперименте // Тезисы 2й международной научно практической конференции «Исследование, разработка и применение высоких технологий в промышленности». - Санкт-Петербург, 2006. - С. 252-253.

4. Толстикова ТР., Хвостов MB., Лифшиц Г.И, Брызгалов АО., Сорокина ИВ. Комплексообраэование в создании низкодозных бега-адреноблокаторов (экспериментальное исследование) // Вестник НГУ. Серия: биология, клиническая медицина. -2007. - Вып. 2. - Т. 5. - С. 70-73.

5. Хвостов М.В., Толстикова Т.Г., Лифшиц Г.И, Брызгалов А.О., Метелева Е.С., Душкин A.B. Клатрирование фармаконов -эффективный путь создания низкодозных лекарственных препаратов // Тезисы 3 Всероссийской конференции «Новые достижение в химии и химической технологии растительного сырья». - Барнаул, 2007. - С. 404.

6. Tolstikova T.G., Biyzgalov АО., Hvostov M.V., Sorokim I.V., Ratushnyak A.S., Zapara TA,. Simonova O.G. Increase in Pharmacological Activity of Drugs in their Clathrates with Plant Glycosides // Letters in Drug Design and Discovery. - 2007. - V. 4. - P.168-170.

7. Толстикова Т.Г., Брызгалов A.O., Хвостов M.B., Лифшиц Г.И. Эффект гликозидного клатрирования фармаконов II Тезисы 2 международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений». - Алматы, Казахстан, 2007. - С. 85.

8. Хвостов MB., Толстикова Т.Г., Брызгалов А.О., Лифшиц Г.И., Метелева ЕС., Душкин A.B. Зависимость фармакологических свойств низкодозных лекарственных препаратов от способа получения // Тезисы 2 международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений». - Алматы, Казахстан, 2007. - С. 91.

9. Хвостов М.В., Толстикова Т.Г., Лифшиц Г.И, Брызгалов А.О., Сорокина И.В. Изучение базовой активности амиодарона в низкой дозе // Тезисы 3 съезда фармакологов России «Фармакология практическому здравоохранению». - Санкт-Петербург, 2007. - С. 1998.

10. Толстикова ТР., Брызгалов АО., Хвостов MB. Гликозидное клатрирование

- перспективный подход снижения токсичности лекарственных препаратов И Тезисы Всеукр. Научда-прахг. конф. с между нар. участь. «Достижения в области аналитической, судебно-медицинской, клинической токсикологии».

- Запорожье, 2007. - С. 321-330.

11. Брызгалов А.О., Толстикова Т.Г., Хвостов М.В., Душкин A.B., Метелева Е.С. Эффект гликозидного клатрирования - научная основа создания низкодозных водорастворимых лекарственных средств // Тезисы ежегодной научной конференции «Фундаментальные науки -

медицине» и научно-практической конференции «Новые материалы и методы для медицины». - Новосибирск, 2008. - С. 13.

12. Толстикова ТГ., Брызгалов А.О., Хвостов МБ., Душкин AB. Клатрирование фармакопов утаеводсодержащими растительными метболигами. Фармаокологические свойства//Тезисы научной конференции «Органическая химия дня медицины». - Черноголовка, 2008. - С. 263.

13. Толстикова Т.Г., Хвостов М.В., Брызгалов А.О., академик РАН Толстиков Г.А. Ребаудиозид - новый агент гликозидного клатрирования фармаконов // Доклады академии наук. - 2009. - Т. 426.-№3.-С. 414-415.

14. Tolstikova T.G., Khvostov M.V., Biyzgalov А.О., Dushkin A.V., Meteleva E.S. Complex of nifedipine with glycyrrhizic acid as a novel water-soluble antihypertensive and antiarrhythmic agent // Letters in Drug Design and Discovery. - 2009. - V. 6. - № 2. - P. 155-158.

15. Толстикова Т.Г., Хвостов M.B., Брызгалов A.O., Лифшиц Г.И., Душкин A.B. Исследование стевиозида как комплексообразующего растительного гликозида // Вестник НГУ, Серия: Биология, клиническая медицина. - 2009. - Т. 2. - Вып. 7. - С. 119-123.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

LD5o - среднесмертельная доза

SW - стевиозид «SWETA»

АГ - арабиногалактан

АД - артериальное давление

АЛТ - аланинаминотрансфераза

АМД - амиодарон

ACT - аспартатаминотрансфераза

АФГ - альдегидфенилгидразон

ГК - глицирризиновая кислота

ИМ - инфаркт миокарда

КФГ - кетонфенилгидразон

КФК-мх - митохондриальная креатинфосфокиназа

ДЦГ - лактатдегидрогеназа

НИСАГ - наследственная индуцированная стрессом артериальная

гилертензия

НФ - нифедипин

ПП - пропранолол

РБ - ребаудиозид

СОД - супероксиддисмутаза

CT - стевиозид

ЩФ - щелочная фосфотаза

ЭКГ - электрокардиограмма

Формат бумага 60x84 1/16

Объем 1,6 печ. л. Тираж 100 экз.

Отпечатано на ротапринте Новосибирского института органической химии им. Н.Н. Ворожцова СО РАН. 630090, г. Новосибирск, пр. Лаврентьева, 9.

Актуальность проблемы. По данным Всемирной организации здравоохранения, сердечно-сосудистые болезни являются основной причиной инвалидности и преждевременной смертности во всем мире (World Health Organization. Prevention of Cardiovascular Disease. Guidelines for assessment and management of cardiovascular risk, 2007). В структуре смертности населения России заболевания сердечно-сосудистой системы также занимают основное место. Особую тревогу вызывает значительная смертность населения от этих болезней в репродуктивном и трудоспособном возрасте (Здравоохранение в России, 2007). Известно, что большинство используемых лекарственных средств для лечения заболеваний сердечнососудистой системы обладают рядом нежелательных побочных действий на различные органы и системы организма (Zaidenstein et al., 2002; Gholami et al., 2007; Faulx et al., 2008).

В связи с этим, проблема разработки малотоксичных и высокоэффективных препаратов для терапии данной патологии является актуальной для медицины и фармакологии.

В настоящее время успехи в разработке новых лекарственных средств связаны не только с синтезом новых химических соединений (Зефирова и соавт., 2000), но и, в значительной степени, с улучшением свойств существующих препаратов (Fischer et al., 2006), в том числе, путем создания новых лекарственных форм с направленной доставкой к органу-мишени (Nakanishi et al., 2001; Jain et al., 2007). Одним из перспективных подходов в разработке подобных лекарственных форм является связывание действующего вещества в молекулярный комплекс, который обеспечивает защиту базового препарата от быстрого метаболизма в организме и улучшает его транспорт через биологические мембраны (Толстикова и соавт., 2007а). Кроме этого комплексообразование позволяет пролонгировать эффект действующего вещества за счет повышения аффинности к рецептору органамишени (Толстяков и соавт., 2007а). Стоит отметить, что наибольший интерес представляет комплексообразование растительными углеводсодержащими метаболитами, поскольку использование для этих целей различных синтетических соединений, особенно наноразмерных, таит в себе непредсказуемые последствия (Maureen et al., 2006) и, как отмечают авторы Medina et al., 2007; Nishimori et al., 2009, могут оказывать токсическое воздействие на жизненно важные органы и системы человеческого организма.

К настоящему времени наиболее изученным в качестве комплексирующего растительного углеводсодержащего метаболита является глицирризиновая кислота, получаемая из корня солодки. Исследованы комплексы этого гликозида с различными НПВС (Бондарев и соавт., 1991), простагландинами (Толстиков и соавт., 1991), антиаритмическим средством аллапинином (Брызгалов и соавт., 2005), психотропными средствами (Толстикова и соавт., 2004; Августович и соавт., 2004), противоопухолевыми средствами (Балтина и соавт., 2003) и др. Во всех перечисленных работах показано, что проявление эффекта комплексообразования заключается в снижении дозы действующего вещества и токсичности при сохранении высокой базовой активности.

Однако, эффект комплексообразования с препаратами, воздействующими на сердечно-сосудистую систему, изучен не достаточно. Не известно также влияние на фармакологические свойства сердечнососудистых средств комплексообразования с другими растительными углеводсодержащими метаболитами.

Этому направлению исследований и посвящена настоящая работа.

Цель исследования. Изучение гипотензивного и антиаритмического эффекта комплексов пропранолола, амиодарона и нифедипина с углеводсодержащими растительными метаболитами (глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом, арабиногалактаном). Проведение расширенного фармакологического исследования для перспективного комплекса.

Задачи исследования.

1. Провести скрининг гипотензивной и антиаритмической активности комплексов пропранолола, нифедипина и амиодарона с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом, арабиногалактаном. Выбрать комплекс для расширенного изучения.

2. Изучить гипотензивное действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой на крысах линии Вистар и НИСАГ при парентеральном и энтеральном способах введения.

3. Исследовать антиаритмическое действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой при внутривенном способе введения крысам линии Вистар и НИСАГ.

4. Оценить действие комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой на Са -каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа

5. Изучить субхроническую токсичность комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой при парентеральном и энтеральном способах введения.

Научная новизна работы. В настоящей работе впервые изучены гипотензивная и антиаритмическая активность комплексов пропранолола, нифедипина и амиодарона с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном.

В результате проведенного скрининга выявлен наиболее перспективный комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин), обладающий высокой гипотензивной и антиаритмической активностью в дозах, на порядок сниженных по сравнению с нифедипином. Показано, что в основе его плавного действия лежит постепенная блокада кальциевых каналов. Впервые показано, что комплексирование нифедипина с глицирризиновой кислотой усиливает его антиаритмическое свойство в дозе, сниженной в 29 раз по сравнению с дозой нифедипина, требуемой для снижения артериального давления. Установлено, что введение крысам глицидипина в течение 14 и 45 дней не оказывает токсического воздействия на жизненно важные органы и системы.

Научно-практическая ценность работы. Для нифедипина впервые обнаружен высокий антиаритмический эффект при его комплексировании с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном, а его гипотензивный эффект сохраняется при снижении дозы фармакона в комплексе в 10 раз. Результаты проведенных исследований могут служить основой для разработки препаратов нового структурного типа для терапии заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Положения, выносимые на защиту.

1. В результате скрининга выявлен комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин), обладающий высоким гипотензивным и антиаритмическим действием.

2. Гипотензивное действие глицидипина сохраняется при снижении дозы фармакона в комплексе в 10 раз.

3. Глицидипин проявляет высокое гипотензивное и антиаритмическое действие на крысах линии Вистар и НИСАГ.

2+

4. Глицидипин постепенно блокирует Са каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа 81а^паИз.

5. Парентеральное и энтеральное введение глицидипина крысам в течение 14 и 45 дней, соответственно, не вызывает токсических изменений в жизненно важных органах и системах.

Апробация результатов. Основные результаты работы были представлены на «1-м съезде терапевтов Сибири и Дальнего Востока» (Новосибирск, 2005), 2-й международной научно-практической конференции «Исследование, разработка и применение высоких технологий в промышленности» (Санкт-Петербург, 2006), 6-й молодежной научной конференции института физиологии Коми НЦ УрО РАН «Физиология человека и животных: от эксперимента к клинической практике» (Сыктывкар, 2007), Зй Всероссийской конференции «Новые достижение в химии и химической технологии растительного сырья» (Барнаул, 2007), 2-й международной конференции «Химия, технология и медицинские аспекты природных соединений», (Алматы, 2007), Всеукраинской научно-практической конференции с международным участием «Достижения в области аналитической, судебно-медицинской, клинической токсикологии» (Запорожье, 2007), ежегодной научной конференции «Фундаментальные науки - медицине» и научно-практической конференции «Новые материалы и методы для медицины» (Новосибирск, 2008), а также научной конференции «Органическая химия для медицины» (Черноголовка, 2008).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 15 работ, из них 3 - в журналах, рекомендованных перечнем ВАК.

Работа выполнена при поддержке Интеграционной программы СО РАН №54 «Научные основы разработки новых лекарственных препаратов. Перспективы использования возобновляемого сырья». Межакадемической Интеграционной программы СО РАН и СО РАМН № 53 «Поиск, создание и доклинические испытания новых биологически активных соединений сердечно-сосудистого, антивоспалительного и антипролиферативного действия. А также программ фундаментальных исследований Президиума РАН «Фундаментальные науки - медицине»: «Разработка научных основ создания низкодозных кардиотропных препаратов. Новые подходы» и «Медицинская химия. Молекулярный дизайн физиологически активных соединений и лекарственных препаратов. Исследование свойств и направленный отбор физиологически активных соединений как потенциальных лекарственных препаратов».

Структура и объем работы.

ВЫВОДЫ

1. В результате скрининга установлено, что антиаритмическое действие комплекса пропранолола только с глицирризиновой кислотой проявляется при снижении дозы фармакона в 50 раз, а высокое гипотензивное действие комплексов нифедипина с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, стевиозидом «8\\ПЗТА», ребаудиозидом и арабиногалактаном сохраняется при снижении дозы фармакона в 10 раз. Комплексирование амиодарона не приводит к существенным изменениям его антиаритмических свойств.

2. Комплексирование нифедипина с глицирризиновой кислотой, стевиозидом, ребаудиозидом и арабиногалактаном позволило усилить его антиаритмическое действие при снижении дозы в 30 раз. Выявлен наиболее перспективный комплекс нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин).

3. Глицидипин проявляет высокую гипотензивную активность в дозе 3,5 мг/кг (доза нифедипина 0,35 мг/кг) при парентеральном и энтеральном способах введения крысам линии Вистар и НИСАГ.

4. Установлен высокий антиаритмический эффект глицидипина в дозе 0,12 мг/кг при парентеральном введении крысам линии Вистар и НИСАГ.

Л I

5. Показано, что глицидипин постепенно блокирует Са каналы изолированных нейронов моллюска Ьутпаеа а его максимальный блокирующий эффект развивается на 25 минут позже нифедипина.

6. Установлено, что парентеральное и энтеральное введение глицидипина крысам в течение 14 и 45 дней, соответственно, не вызывает токсических изменений в жизненно важных органах и системах.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Артериальная гипертензия (АГ) является общей проблемой как индустриально развитых, так и развивающихся стран (Kearney et al., 2005). Примерно половина больных получающих лечение по данной нозологии не достигают требуемых значений артериального давления (Brown, 1997; Mancia et al., 1997), в то время как даже небольшое снижение артериального давления приводит к снижению заболеваемости и риска смертности (Collins et al., 1990; Staessen et al., 2003).

В настоящее время для лечения АГ рекомендованы пять основных классов антигипертензивных препаратов ингибиторы ангиотензин-превращающего фермента, блокаторы рецепторов АТь антагонисты кальция, Р-адреноблокаторы, диуретики. В качестве дополнительных классов антигипертензивной терапии для комбинированного лечения могут использоваться а- адреноблокаторы и агонисты имидазолиновых рецепторов (Шальнова и соавт., 2006; ESH-ESC Guidelines Committee. 2007 guidelines for the management of arterial hypertension, 2007).

Все представленные классы соединений обладают теми или иными нежелательными побочными действиями (Johnston, 1992; Zaidenstein et al., 2002; Gholami et al., 2007; Faulx et al., 2008). В связи с этим проблема разработки эффективных препаратов для терапии артериальной гипертензии, обладающих минимальными побочными действиями, остается актуальной для фармакологов и специалистов медицинской химии. Одним из эффективных подходов для решения этой задачи является связывание действующего вещества в молекулярный комплекс с растительными углеводсодержащими метаболитами, что обеспечивает защиту базового препарата от быстрого метаболизма в организме и улучшает его транспорт через биологические мембраны (Толстикова и соавт., 20076).

В данной работе представлено углубленное изучение водорастворимого комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой (метаболит корня солодки) в молекулярном соотношении 1:4 (глицидипин), выбранного среди комплексов растительных гликозидов, полисахарида с пропранололом, нифедипином, амиодароном в результате скрининга на гипотензивную и антиаритмическую активности. Его физико-химические характеристики были изучены в Лаборатории магнитных явлений Института химической кинетики и горения СО РАН (зав. лабораторией д.х.н., профессор Лешина Т.В.). Было показано, что нифедипин образует комплекс 1:4 с ГК с константой стабильности К=105 М"1, превышающей на два порядка широко применяемых комплексирующих агентов таких как циклодекстрин (Stella et al., 2008). Методами ядерно-магнитного резонанса и химической поляризации ядер показано уменьшение скорости реакции нифедипина с аминокислотами входящими в состав активных центров соответствующих рецепторов, что, вероятно, может привести к пролонгированию действия лекарственного вещества.

Глицидипин можно отнести к дегидропиридиновым блокаторам медленных кальциевых каналов (БММК). Применение нифедипина - первого препарата из этой группы - имеет более чем тридцатилетнюю историю. Войдя в практику как эффективное антиангинальное средство, нифедипин вскоре начал широко применяться в качестве гипотензивного препарата, а также в качестве вазодилататора у больных с хронической сердечной недостаточностью. По мере накопления опыта стало известно, что длительное применение высоких доз короткодействующего нифедипина может приводить к увеличению смертности больных с острыми коронарными синдромами. Этот факт привел к резкому падению популярности нифедипина и других БМКК среди практикующих врачей. Однако, начиная с середины 90-х годов прошлого столетия, стали появляться результаты рандомизированных, в том числе мультицентровых исследований, подтверждающие высокую эффективность и безопасность пролонгированных форм нифедипина при лечении артериальной гипертензии и стабильной стенокардии. Также высокую эффективность и безопасность показали дигидропиридины последних поколений: амлодипин, фелодипин, лацидипин и др. (Чирейкин и соавт., 1999; Fischer et al., 2006; Triggle, 2007), отличительной характеристикой которых является не технология получения, а специфические особенности фармакодинамики. Ярким примеров этого типа БМКК является амлодипин, который характеризуется высокой биодоступностью, замедленным началом и большей продолжительностью действия. Амлодипин — единственный дигидропиридиновый антагонист кальция, применение которого не приводит к активации симпатоадреналовой системы и не сопровождается повышенной выработкой ренина и альдостерона (Чирейкин и соавт., 1999).

Кроме производных дигидропиридина к блокаторам кальциевых каналов относятся производные фенилалкиламина (верапамил, галлопамил и др.) и производные бензотиазепина (дилтиазем, клентиазем и др.). Препараты данной группы могут снижать сократимость миокарда (отрицательный инотропный эффект), уменьшать ЧСС (отрицательный хронотропный эффект) и замедлять предсердно-желудочковое (атриовентрикулярное) проведение (отрицательный дромотропный эффект). Поэтому производные фенилалкиламина и бензотиазепина иногда объединяют и описывают как группу "кардиоселективных", или "снижающих ЧСС" антагонистов кальция. В* отличие от дигидропиридиновых антагонистов кальция, производные фенилалкиламина и бензотиазепина обладают антиаритмическим действием, их относят к IV классу антиаритмических средств по классификации E.Vaughan-Williams (Кукес и соавт., 2003).

Во время исследования гипотензивного действия глицидипина при внутривенном введении крысам линии Вистар и крысам линии НИСАГ (крысы с генетически обусловленной артериальной гипертензией) было обнаружено характерное для нифедипина снижение артериального давления. Степень его снижения была аналогичной при использовании одинаковых доз нифедипина и глицидипина, однако- в глицидипине действующая доза фармакона снижена в 10 раз. Сам нифедипин в такой дозе не проявляет столь выраженного гипотензивного эффекта. Наблюдаемое усиление основного действия нифедипина в комплексе с глицирризиновой кислотой было названо авторами Толстиков и соавт., 2007а эффектом гликозидного клатрирования, поскольку аналогичные положительные эффекты обнаруживаются и при комплексировании ГК с другими фармаконами, например аллапинином, флуоксетином, бутадионом и др. (Толстикова и соавт., 20076; Толстиков и соавт., 2007а). Кроме того, комплексирование приводит к усилению плейотропных свойств фармаконов, как например, в случае с гипохолестиринемическими и нестероидными противовоспалительными средствами (Толстиков и соавт., 2007а).

На основании выше изложенного, было интересно исследовать глицидипин при внутривенном введении на появление плейотропного (антиаритмического) свойства нифедипина. Так, на модели хлорид кальциевой аритмии был установлен высокий антиаритмический эффект глицидипина, который в большей степени характерен для БМКК производных фенилалкиламина и бензотиазепина.

При энтеральном введении глицидипина крысам линий Вистар и НИСАГ было обнаружено плавное снижение (в среднем на 18 мм.рт.ст) артериального давления в течение часа, в отличие от нифедипина, который снижал АД у крыс линии Вистар на 19,5 мм.рт.ст за 30 мин. Действие нифедипина на АД крыс линии НИСАГ значительно отличалось от такового на крысах линии Вистар. Было отмечено в два раза большее снижение АД (на 41 мм.рт.ст) в течение получаса. Столь выраженное действие нифедипина является весьма характерным для 1,4 дигидропиридинов первого поколения и является одним из основных его отрицательных свойств, наряду с выраженной системной вазодилатацией (Гилман, 2006). Кроме этого, резкое снижение АД может спровоцировать эффект «коронарного обкрадывания» и привести к ишемии миокарда, (Triggle, 2007).

Описанную выше динамику снижения АД при введении глицидипина энтеральным способом позволяет понять результаты исследования, проведенного in vitro на изолированных нейронах моллюска Lymnaea stagnalis (Запара, 1996). Используя данную модель, было возможно оценить взаимодействие глицидипина с рецепторами медленных кальциевых каналов - мишенями нифедипина. В результате было показано, что глицидипин, в отличие от нифедипина, блокирует кальциевые каналы постепенно, что выражается в виде двухступенчатой кривой изменения амплитуды кальциевого тока, а максимальная блокада кальциевых каналов наступает на 25 минут позднее, чем у нифедипина. Вероятнее всего, наблюдаемое явление напрямую связано с наличием четырех молекул ГК вокруг молекулы нифедипина (Толстикова и соавт., 20076), которые замедляют связывание активных центров нифедипина с соответствующими сайтами кальциевых каналов (Flockerzi, 1989). В результате этого, вероятно, происходит постепенная конфигурация глицидипина, проявляющаяся в виде ступенчатой кривой in vitro и более отсроченным снижением АД in vivo при энтеральном введении.

Таким образом, комплексирование нифедипина с ГК привело, наряду с сохранением вазоселективности у нифедипина, к появлению у него тропности к миокарду. Исходя из изложенного, можно предположить, что глицидипин является новой группой в классе БМКК, совмещая в себе свойства производных дигидпропиридина, фенилалкиламина и бензотиазепина, к тому же, хорошо растворим в воде и не требующий дополнительных компонентов для растворения, как в случае инфузионной формы адалата (Справочник Видаль, 2008).

Безвредность глицидипина была изучена на двух линиях крыс, согласно Руководству по экспериментальному (доклиническому) исследованию новых фармакологических веществ, 2005, в котором рекомендовано при изучении новых гипотензивных средств использовать нормотензивных крыс (линия Вистар) и крыс с артериальной гипертензией (линия НИСАГ), особенностью последних является стабильно высокое артериальное давление (Маркель, 1985).

Крысам линии Вистар глицидипин вводили внутрибрюшинно в течение 14 дней. Такой способ введения практически приближен к внутривенному и позволяет за короткий срок оценить воздействие инфузионного введения глицидипина на организм здорового животного. Столь короткий срок введения объясняется тем, что инфузионная форма глицидипина может использоваться при гипертонических кризах в ургентных ситуациях и не предполагает длительного применения.

Схема длительного (45 дневного) перорального введения глицидипина крысам линии НИСАГ была выбрана не случайно, поскольку данная модель позволяет экстраполировать результаты на человека с длительно персестирующей артериальной гипертонией, при которой развиваются сопутствующие изменения в органах и системах (Сахаров и соавт., 1994.; УакоЬэоп еГа1., 1995).

В результате эксперимента было обнаружено отсутствие токсического действия глицидипина на жизненно важные органы и системы крыс, как при парентеральном, так и энтеральном способах введения. При микроскопическом исследовании было отмечено характерное для нифедипина расширение резистивных сосудов в миокарде (Такаэе е! а1., 2006) крыс обеих линий, однако под воздействием глицидипина расширение было более выраженным.

Таким образом, проведенные углубленные исследования глицидипина (комплекса нифедипина с глицирризиновой кислотой в молекулярном составе 1:4), показали его высокую гипотензивную и антиаритмическую активность в сочетании с безвредностью применения.

Перспективность данного класса препаратов объясняется еще и тем, что для лечения артериальной гипертензии у больных с метаболическим синдромом предпочтением пользуются недигидропиридиновые и дигидропиридиновые блокаторы кальциевых каналов. В большом числе рандомизированных исследованиях подтверждена не только высокая антигипертензивная эффективность, но и метаболическая безопасность блокаторов кальциевых каналов пролонгированного действия. В исследованиях INVEST, INSIGHT, NORDIL, НОТ продемонстрировано положительное влияние блокаторов кальциевых каналов на смертность, риск развития сердечно-сосудистых осложнений, а в исследовании INVEST наблюдалось уменьшение числа новых случаев сахарного диабета при терапии блокаторами кальциевых каналов. В результате исследования INSIGHT многолетняя терапия нифедипином ГИТС снизила риск развития сахарного диабета и подагры. Кроме всего прочего, блокаторы кальциевых каналов обладают способностью уменьшать гипертрофию левого желудочка (TOHMS), а также оказывают антисклеротический эффект (VHAS) (Проект рекомендаций экспертов ВНОК по диагностике и лечению метаболического синдрома, 2009).

На основании всего вышеизложенного, глицидипин можно рекомендовать для дальнейших доклинических испытаний в качестве нового гипотензивного и антиаритмического средства.