Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Функциональные особенности некоторых форм поведения на фоне введения антиоксидантных средств (экспериментальное исследование)

На правах рукопйЬи

ВЕРТИНСКИЙ ВЛАДИСЛАВ ВИКТОРОВИЧ

ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ НЕКОТОРЫХ ФОРМ ПОВЕДЕНИЯ НА ФОНЕ ВВЕДЕНИЯ АНТИОКСИДАНТНЫХ СРЕДСТВ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□ОЗ1саи^о

Владивосток - 2007

003173826

Работа выполнена в Гос\ дарственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Амурская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальном} развитию»

Нал чиыи рл ководнтсль:

доктор медицинских нал к, профессор Доровскич Владимир Анатольевич

Нал "mi.ш копс.л. H. I ат :

кандидат медицинских наук Пластинин Михаил Львович

Официальные оппопепгы: доктор медицинских наук профессор

Кропотов Александр Валентинович

Кандидат медицинских наук Бездстко Геннадии Николаевич

Всдлщдя организация: Государственное образовательное лчреждение высшего профессионального образования «Читинская госх дарственная медицинская академия»

Защита состоится «Q» ноября 2007 г в 10 00 часов на заседании диссертационного совета К 208 007 02 при ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский университет» по адресу 690002 г Владивосток пр Острякова 2

С диссертацией молено ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Владивостокский государственный медицинский у ниверситет»

Автореферат разослан « S » бстяЬря

2007 г

Ученый секретарь

диссертационного совета Шмыкова И И

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

В современных условиях неоспоримым является (¡»акт, что среда обитания постоянно ставит перед человеком новые, ранее не встречавшиеся, проблемы и задачи, которые способны при известных условиях привести к развитию психосоматической патологии Для борьбы с негативными последствиями различных стрессовых воздействий у живых организмов эволюцией выработан универсальный адаптационный сгресс-сицдром (Frelle M Gant W H. 2005) Этот синдром не только предшествует развитию адаптационно-приспособительных механизмов но и играет значительную роль в ({юрмировании собственно адаптации Данный эффект достигается несколькими путями к числу которых принадлежат мобилизация энергетических ресурсов органшча и воздействие различными химическими соединениями на метаболшм и функцию клеток биологической системы в которой формируется специальный стру ктурный след (Harman D , 2003)

Стресс-синдром сложился эволюционно как необходимое неспецифическое звено более сложного целостного механизма адаптации (Smith Е R, Hadidan Z, 2004) При этом ну ясно отметить, что поведенческие реакции играют в этой схеме важную роль, формируя адекватную функциональную систему целостного поведенческого акта, способную вывести организм из сложнейших, порой кажущихся тупиковыми, ситу аций (Слоним А Д, 1986) Ряд авторов свидетельствуют, что нейрогенная патология у животных способна развиться от частой смены стереотипов условнорефлекторной деятельности и двигательной активности, а также посредством эмоционального возбуждения, вызываемого прерывистым голоданием и длительной электростимуляцией вентромедиального ядра гипоталамуса (Чепурнов С А 1994. Benesova О , 2004) Эта информация коррелирует с данными, в которых у людей, профессионально испытывающих мощные психологические и эмоциональные нагрузки (работники МЧС. врачи и т д ), частота развития таких патологий, как инсульт, ишемическая болезнь сердца и инфаркт миокарда особенно высока (Кораблев M В, Лукиенко ПИ, 1999. Broun H , 1997) Главным механизмом приводящим кразвитию патологии под влиянием тяжелого стресса многие исследователи считают стрессорную активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Доровских В А, 2004) которая оказывает повреждающее действие в первую очередь на сердечно-сосудистую и центральную нервную системы (ЦНС), а также на организм в целом (Доровских В А , Цслуйко, С С. 2005) Таким образом, хронический выраженный стресс сопровождающийся чрезмерной интенсивностью ПОЛ, явтяется, на наш взгляд, основной причиной в появлении и развитии многих заболеваний (в том числе и опухолевых (Markus Е J, 2006) Несомненно, организм пытается бороться с патологией сгрессогенного происхождения (Salt J S Taberner P V, 2002) но в условиях современного общества, в котором хронический поведенческий стресс стал обыденным явлением (Якунин Т С 2005) внутренних защитных механизмов человеку уже недостаточно Поэтому необходимо искать дополнительные

пути не только лечения постстрессовых состояний, но и профилактики стрессорных повреждений Одним из перспективных направлений по борьбе с психоэмоциональным стрессом является применение фармакологических веществ, обладающих антиоксидантным ангигипоксантым и мембраностабилизирующим свойствами, нацеленными против последствий хронического стресса (Доровских В А, 2002) Антиоксиданты включают в себя широкий спектр различных эффектов (антиамнестический, ноотропный и др ), однако до сих пор досконально не изучено изменение поведенческих реакций на фоне введения противоокислительных препаратов синтетического происхождения в условиях искусственной инструментальной среды (Пластинин М Л, Григорьев Н Р, 2003) Подобные исследования представляют особый интерес не только для фармакологов но и для психофизиологов и психотерапевтов так как данные, полученные в подобных экспериментах на животных, можно с большой степенью достоверности экстраполировать на поведение человека в урбанистическом обществе Профессором В А Доровских с соавт (2004, 2005) были проведены работы по изучению фармакологических эффектов производных пиримидина и тиобарбитуровой кислоты, обладающих антиоксидантными и антигшкжеантными эффектами, доказавшие перспективность широкого применения антиоксидантов в повышении резистентности организма и физической работоспособности при экстремальных воздействиях

Исходя из вышеизложенного, целыо нашего исследования явилось изучение влияния фармакологических препаратов с антиоксидантными свойствами (ТБ-52. мексидол) на поведение лабораторных крыс-самцов в стрессогенных искусственных инструментальных средах

Задачи исследования

1 Исследовать поисковое поведение \ животных в искусственной инстр\ ментальной среде под воздействием мексидола, ТБ-52 и альфа-токоферола

2 Определить параметры ориентировочно-исследовательского поведения у лабораторных животных в темно-светлой камере на фоне введения антиоксидантного препарата ТБ-52

3 Изучить поведенческие реакции у животных, получавших ТБ-52. в открытом поле и приподнятой открытой платформе

4 Определить время выхода и 5 стресс-ситуации у подопытных крыс, которым вводили ТБ-52, в тесте экстраполяционного избавления подныриванием

Научная новизна результатов исследования

1 Экспериментально обоснована эффективность применения антиоксиданта ТБ-52 для профилактики негативных последствий психосоматического стресса

2 Доказано позитивное влияние антиоксидантных средств (мексидол, ТБ-52, альфа-токоферол) на показатели поведения у лабораторных животных в проблемной камере

3 Выявлены положительные изменения локомоторных реакций у животных получавших ТБ-52, в тесте экстраполяционного избавления подныриванием

4 Впервые исследованы поведенческие механизмы стресс-реакции v крыс, которым вводили ТБ-52 в темно-светлой камере

5 В методах изучения ориентировочно-исследовательского поведения («открытое поле», «приподнятая открытая платформа») выявлены анксиолитические свойства v ТБ-52

Работа (номер госрегистрации 0120065170) выпотнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакологии ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии

Теоретическая и практическая значимость работы В работе предложена и экспериментально обоснована целесообразность применения производного пиримидина ТБ-52 для профилактики последствии хронического психосоматического стресса Результаты работы внедрены в научную и преподавательскую деятельность на кафедрах фармакологии, физиологии ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии На заявку №2006123293/13 (025275) от 29 06 2006 г «Модульное устройство для изучения способности животных к достижению подкрепления», соавторы В А Доровских, М JI Пластинин, Ю Г Дутов, получено решение о выдаче патента на изобретение

Апробация и внедрение регулы атов работы Материалы диссертации обсуждены на IV Международной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Подмосковье, 2006), на VII Региональной межвузовской научно-практической конференции посвященной 150-летию основания г Благовещенска «Молодежь XXI века шаг в будущее» (г Благовещенск, 2006), на региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы физической культуры, спорта и здоровья на Дальнем Востоке и их решение» (г Благовещенск, 2007) Публикации

Материалы диссертации опубликованы в 7 работах Одна статья напечатана в издании ВАК По теме диссертации получено 4 удостоверения на рационализаторские предложения, внедренные на кафедре фармакологии Амурской государственной медицинской академии

Структура диссертации

Диссертация изложена на 110 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц, 9 графических изображений - рисунков В структуру диссертации входят введение, обзор литературы, материалы и методы исследования результаты собственные исследования, заключение, выводы и список литературы, содержащий 259 источников, из них 103 -иностранные источники, 156 - русскоязычные Положения, выносимые на защиту

1 Антиоксидантные препараты мексидол и ТБ-52 являются

эффективным средством коррекции нарушений поведения в условиях психоэмоционального стресса

2 Производное тиобарбитуровой кислоты ТБ-52 обладает анксиолитическими свойствами

3 Мексидол и ТБ-52 достоверно быстрее чем альфа-токоферол, увеличивают скорость выработки условных рефлексов в условиях инструментальной среды

4 Ориентировочно-исследовательское поведение у подопытных животных оптимизируется на фоне введения ТБ-52

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты, связанные с изучением поведения животных, выполнены на 480 белых нелинейных крысах-самцах массой 120,0-270,0 г

Данные распределения биологических объектов по условиям экспериментов представлены в таблице 1 Крысы содержались в стандартной обстановке вивария при естественном чередовании суточной освещенности Животные жили в просторных клетках по 5 - 8 особей Все опыты по обучению и тестированию проводились в дневное время суток В работе применялись пять вариантов методик поведенческих исследований проблемная камера, тест экстраполяционного избавления подныриванием. открытое поле, темно-светлая камера и приподнятая открытая платформа

Таблица 1

Объем проведенных исследований поведенческих реакций

Фармаколог ический Установка Возраст животных (в месяцах) Количество животных

препарат Контрол ь Опыт

ТБ-52 ПК тек 7 45 35 45 35

1 Приподнятая платформа ОП Тест ТЭИП 40 37 40 40 37 40

Мс КС ид от ПК тек 7 45 35 45 35

2 Приподнятая платформа ОП Тест ТЭИП 40 37 40 40 37 40

3 Альфа-токоферол ПК тек Приподнятая платформа 7 45 35 40 37 45 35 40 37

Темпо-свстллн камера (Кра\лн Ж., 1980)

Аппарат представлял собой прозрачный закрытый ящик из оргстекла с центральной перегородкой посередине состоящий из дву\ равных отсеков 25 \ 25 \ 25 см Отсеки сообщались между собой через отверстие в перегородке (25 \ 10 см), которое имело выдвижную вертикальную дверцу Сверху оба отсека были снабжены плотно подогнанными открывающимися наверх крышками Один из отсеков (а также перегородка и ее дверца со стороны другого отсека) снаружи, поверх оргстекла по периметру стен, был полностью обклеен черной фотографической светонепроницаемой бумагой Это требовалось для создания темноты внутри отсека («темный отсек») В эксперименте крыса опекалась в темный отсек камеры, после чего камера закрывалась сверху крышкой Дверца в перегородке также была плотно закрыта В полной темноте крыса адаптировалась к темном} отсеку Привыкшие длилось 5 мин после чего над светлым отсеком зажигалась электрическая лампочка и открывалась дверца в перегородке, приподнимаясь на высоту 15 см Собственно тестирование длилось 5 мин, в ходе которых визуально регистрировалось поведение животных В ходе эксперимента были испотьзованы следующие поведенческие показатели исследовательской активности животных число и латенгность (сек) выгладываний из темного отсека в светлый через отверстие в перегородке, а также - выходов в светлый отсек

2. Приподнятая огкрьпая платформа (Т|1с Б-Е., 1996)

Устройство представляло собой пластиковую площадку 25 х 32 см

белого цвета фиксированную на ножке на высоте 50 см над уровнем пола Площадка была расчерчена на 4 квадрата 12 5 х 12 5 см, располагающихся по углам При этом по центру образовывалась центральная зона в форме полоски 7 х 25 см. разделяющей платформу на две половины По периметру одной половины площадки располагалась стенка-бортик высотой 5 см, ограничивая примыкающие к ней «закрытые» квадратики (по аналогии с «закрытыми» рукавами ПКЛ) в отличие от «открытых» квадратиков, находящихся по другую сторону от центральной зоны Тестирование длилось 3 мин. в ходе которых регистрировалась спонтанная поведенческая активность животных Учитывались количество пересеченных «открытых» и «закрытых» квадратиков (по границе между квадратиками одного типа), число пересечений границ центральной зоны, число заглядывания вниз с края платформы и стоек (для каждого вида квадратиков - отдельно), а также -число актов груминга и время тестирования

3. Проблемная камера (Григорьев Н.Р., 1996)

В проведенных исследованиях применена методика формирования ПА с одновременной регистрацией ее параметров в эксперименте при создании фру стрирующей ситуации Способ предполагает поэтапное развитие ПА при условии синхронной отметки ее проявлений в форме предпринимаемых животными попыток избегания или избавления при решении задачи возрастающей сложности Для этой цели используется установка, интегрально включающая в себя устройство

в виде ПК, средства нанесения электро-кожного раздражения (ЭКР) и аппарат для регистрации элементов инструментального поведения и избегания (ПЭВМ) (Григорьев Н Р Пластинин М JT, 2002) Установка состоит из импульсного электростимулятора, соединенного с электродным полом, двустенной шестигранной из оргстекла проблемной камеры Формирование ПА в структуре оборонительного поведения и измерение ее параметров при первичном тестировании включает в себя два этапа

Первый этап - предварительное обучение животных одностороннему избавлению а затем избеганию аверсивного ЭКР лап, наносимого через электродный пол ПК Данный этап продолжается в течение 5 суток Побежки из камеры в безопасное окружающее ее пространство до нанесения ЭКР квалифицируют как активное избегание, а выход после нанесения ЭКР как активное избавление Завершением первого этапа считают стабильную работу каждого животного, немедленное и быстрое без промедления совершение побежки из камеры, что является строгим и жестко соблюдаемым зачетным фактором, определяющим допуск к основному тестированию

Второй этап - формирование ПА с измерением ее параметров В тестирующих экспериментах применяют мягкое, щадящее ЭКР, только подталкивающее к выходу и создающее неблагоприятную и аверсивную для нахождения в камере ситу ацию Этот этап начинается на следующие сутки после окончания обучения и длится 5 суток Регистрируются следующие параметры ПА зафиксированные в УПК в условиях ее формирования при первичном или однократном тестировании

1) Энергетические показатели время поиска (ВП) в секундах, интенсивность поиска (ИП) - частота побежек животных из УПК в минуту 2) Когнитивный показатель (КП) в процентах - количество безошибочных обращений к выходам из установки Если особь не совершила ни одной ошибочной побежки, то КП равен 100% Формирование ПА основано на постановке перед тестируемым животным стандартной когнитивной задачи (СКЗ), которая заключается в непрерывном поиске выхода из ПК Подобный динамизм создают тем, что обеспечивают мгновенное блокирование только что результативно использованной дверки канала Крысу сразу же после выхода вновь помещают в ПК Эта тактика проведения эксперимента разделяет поисковую и консуматорную фазы оборонительного, пищевого и питьевого поведения Создаются условия для непрерывной регистрации первичных - результативных выходов из ПК. то есть "правильных" решений, и повторных "ошибочных" побежек - обращений к блокированным дверкам камеры Все эти события в ПК регистрируются ПЭВМ

4. Открытое поле (Hall PCL., 1936)

Тест открытого поля (open field) (ОП), впервые разработанный С S Hall, с его последующими модификациями является многоплановым, первоначально применялся в качестве простого теста на эмоциональность

(страх) В наших экспериментах использовался метод оценки поведения крыс в ОП, предложенный С Ю Бусловичем с соавт (1993) Опыты проводились в течение 4 суток и начинались в одно и то же время Длительность одиночного тестирования не превышала 3 минут Необходимая для исследований оценка ОИП обеспечивалась с учетом величин следующих элементов поведения подопытных животных в ОП общее число посещении квадратов, количество стоек, число заглядываний в норковые отверстия, число посещений внутренних квадратов

5. Тест экстраполяцнонного избавления подныриванпем (Хендерсон П., 1976)

Предложенная для оценки поведенческих реакций крыс на новизну раздражителей N D Henderson в модификации Н А Бондаренко методика экстраполяцнонного избавтсния подныриванием при острой стрессовой ситуации была условно отнесена к ПА при оборонительном поведении (Рябинская ЕА Батуев АС, 1986) Лимит времени тестирования для не нашедших выхода животных составляет 5 минут Продолжительность эксперимента - 5 суток Оценка ПА в условиях теста избавления из острой стрессовой ситуации производилась нами путем подсчета латентного периода избавления из стресс-ситуации с помощью секундомера

Характеристика используемых в экспериментах фармаколог ичсскнх средств В хронических поведенческих экспериментах применялись вещества, обладающие антиокендантными (мексидол, альфа-токоферол, ТБ-52) свойствами Препараты вводили в дозе 10 мг/кг внутрибрюшинно Обработку полученных результатов ос\ щсствляли методом вариационной статистики с определением доверительных границ (М±ш), с расчетом достоверности различий по критерию Стьюдента согласно руководствам С Гланца (1999) Статистически и отсчет всех показателей выполнялся на компьютере IBM PC пакетом «Biostat» Список использованных источников составлен с учетом современных требований, предъявляемых к библиографии

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Определение параметров приобретенного поведения (поисковой актпвпостн) у экспериментальных животных при введении антиоксидантоп (альфа-токоферола, мексидола, ТБ-52) Вероятность положительного влияния антиоксидантов на параметры приобретенного поведения высока Об этом можно предполагать, опираясь на литературные источники (Воронина Т А 2001) Однако, эта область недостаточно изучена, поэтому мы провели три серии экспериментов по изучению динамики показателей поисковой активности у подопытных животных в ПК при оборонительной, пищевой и питьевой мотивациях под влиянием препаратов антиоксидантов (альфа-токоферол, мексидол, ТБ-52)

ПЭВМ регистрировала время обучения и показатели ПА (ВП, ИП, КП) в УПК у особей, получавших фармакологические средства, и сопоставляла с аналогичными параметрами у контрольной группы а также сравнивались значения параметров поиска у подопытных особей на

1 и 5 сутки

Воздействие альфа-токоферола на поисковую активность белых крыс

Результаты обучения тестируемых гр\пп представлены в таблице

2

Время выработки ИРАИ на 5 сутки у контрольных особей было в 6 раза меньше по сравнению с 1 сутками показатель ИПР понизился в 5,9 раза, а значение ПИР в последние сутки обучения было в 3,8 раза ниже, чем в первые (таб 2)

У животных, получавших альфа-токоферол ИРАИ на 5 сутки вырабатывался в 5,4 раза быстрее, чем в 1 сутки ИПР и ПИР при аналогичном сравнении были ниже в 6,6 раз и в 5 8 раза соответственно (таб 2)

Таблица 2

Время выработки инструментальных рефлексов у

контрольной группы н группы, получавшей альфа-токоферол

Рефлек- 1 сутки 2 3 4 сутки 5 сутки

сы С} тки СУТКИ

ИРАИ 139,46 82,63+ 45.41 38,19±2,91 22,12+

±15,22 8.24 ±3.52 2,54***

ИПР 355,53 289.32 205.71 140 66± 60 43±

Контроль ±27.84 ±22.37 + 28,92 11,58 6,92**

ПИР 309 24 248,92 201.94 128,16± 79.31+

±24.11 ±21 17 ±8,37 8 07 8.44*

ИРАИ 97,34+ 77,02± 38,94 26,32± 20,01±

7,32 6,21 ±2,55 2,14 1,62***

ИПР 349,27 249,81 160,54 95,76+ 52,19+

Опыт ±20,72 ±19,01 ± 15,51 6,33**

17,13

ПИР 298,24 209,66 159,31 82,21± 50,11+

±27,08 ±24,46 + 15,04 15,77 6,09**

Примечания * - помечены показатели ПА при Р<0,05 **-при Р<0,01 *** - при Р<0,001

(сравнивались 1 и 5 сушки тестирования у группы при данной мотивации)

Сопоставление показателей обучения в условиях оборонительно!» методики показало, что у подопытной гр\ппы время выработки ИРАИ было достоверно меньше чем у контрольных животных

в 1 сутки на 27.9% (Р<0 05). на 2 сутки на 10 4% (Р>0,05), на 3 сутки на 12 6% (Р<0,01), на 4 день на 24 5% (Р<0,()1). на 5 день на 22.9% (Р<0,05)

(таб 2) При ннщевой_мотивации инструментальный

пищедобывательный рефлекс у подопытных животных развивался быстрее достоверные сдвиги регистрировались, начиная со 2 суток (пока мтсль увеличился на 13,6% (РС0.01) на 3 сутки уровень параметров возрос уже на 19,5% (Р<0 05), на 4 сутки на 31.4% (РС0.01), на 5 сутки различие показателей было недостоверно и у животных, получавших альфа-токоферол, время выработки условного рефлекса было меньше всего на 14% (Р>0,05) (таб 2) Сравнение скорости формирования питьевого инструментального рефлекса дало информацию что у группы получавшей альфа-токоферол показатель обучения был недостоверно меньше чем у контрольной на 1 сутки на 3,5% (Р>0,05), на 2 сутки на 14.9% (Р>0.05) Только на 3 сутки различие приобрело достоверность параметр снизился на 15,4% (Р<0 01) на 4 сутки на 24,9% (РС0.01). на 5 сутки на 22.9% (Р<0.001) (таб 2)

Второй этап формирования ПА в УПК при оборопиташшй мотивации (рис 1) показал, что ВП у подопытных животных было недостоверно меньше чем у контрольных в 1 сутки на 10,2% (Р>0.05) на 2 сутки на 16 1% (Р>0,05), на 3 сутки на 0 7% (Р>0,05), на 4 сутки на 9,5% (Р>0 05) Только на 5 сутки пока затель достоверно снизился по сравнению с контролем на 15,9% (Р<0 01) ИП у ясивотных, получавших альфа-токоферол была недостоверно выше в течение всего эксперимента в 1 сутки на 2.2% (Р>0,()5), на 2 сутки на 9,7% (Р>0,05), на 3 сутки на 3% (Р>0,05), на 4 сутки на 4,3% (Р>(),05), на 5 сутки на 10,9% (Р>0,05) (рис 1) КП у животных получавших альфа-токоферол недостоверно превышал аналогичный параметр у контроля в 1 су тки на 9% (Р>0,05) на 3 сутки на 1 5% (Р>0,05), на 4 сутки на 5 9% (Р>0 05) На 2 сутки (характеристика поиска выше 15% (Р<0 05) и на 5 сутки (возросла на 22% (Р<0,05) различие стало достоверным (рис 1)

Влияние мексидола на показатели поисковой активноеги у крыс подопытной группы в структуре оборонительного, пищевого и питьевого поведения

Мы выполнили серию опытов по определению изменений ПА у лабораторных крыс в УПК при различных мотивациях на фоне введения мексидола Предварительно у всех животных были выработаны инструментальные рефлексы Результаты представлены в таблице 3

ИРАН на 5 сутки у контрольных особей был в 5,5 раза меньше по сравнению с 1 сутками, показатель ИПР понизился в 5 7 раза а значение ПИР в последние сутки обучения было в 3.6 раза ниже, чем в первые (таб 3)

У животных, получавших мексидол, время выработки ИРАИ на 5 сутки уменьшилось в 10 раз, показатель ИПР при аналогичном сравнении

снизился в 8 раз, а ПИР был в 12 раз ниже по сравнению с первыми сутками (таб 3)

Таблица 3

Время выработки инструментальных рефлексов у

Рефлексы 1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5 сутки

ИРАИ 87 42± 66.17± 50 21± 33.12+ 15,24+

6.93 4.48 3,24 5 64 3,27***

Контроль ИПР 354.11 ±24 32 287,66 ±21,32 204,33 ±22,16 138.32 ±12,44 60,71+ £

ПИР 300 21 248.32 196,39 127.03 78,44±

±22.12 ±20,14 ±10,36 ±7.31 7,22***

ИРАИ 68,16+ 44,11± 30,76± 14,21± 7,54±

28,02 3,45 2,83 2,43 1,22***

Опыт ИПР 297,31 ±28,14 184,23 ±30,21 70,66± 15,12 48,22± 12,02 35,23± 8,34***

ПИР 286,21 ±25,35 159,34 ±19,43 59,81± 14,51 45,37± 9,06 25,26± 4,42***

Примечания *** - при Р<0,001

(сравнивались 1 и 5 сутки обучения у группы при банной мотивации)

Сопоставление показателей обучения в условиях оборонительной методики свидетельствует, что у подопытной группы время выработки ИРАИ было достоверно меньше чем у контрольных животных в 1 сутки на 18,6% (РОДИ), на 2 сутки на 31,5% (Р<0,05), на 3 сутки на 33,4% (Р<0.01), на 4 сутки на 51,5% (Р<0,001), на 5 сутки на 56,2% (Р<0,001) (таб 3) При пищевой мотивации инструментальный пищедобывательный рефлекс у группы, получавшей препарат, ниже чем у контрольной в 1 сутки на 15,4% (Р<0,05), на 2 сутки на 33,1% (Р<0.01), на 3 сутки на 67% (Р<0,001), на 4 сутки на 65% (Р<0 001), на 5 сутки на 37% (Р<0.01) (таб 3) Сравнение значений питьевого инструментального рефлекса дало информацию что у подопытных особей показатель обучения был меньше на 1 сутки на 6% (при Р>0,05), на 2 сутки на 35% (при Р<0,05), на 3 сутки на 68% (при Р<0,001), на 4 сутки на 60% (при Р<0,001), на 5 сутки на 65% (при Р<0,001) (таб 3) Второй этап формирования ПА в УПК при оборонительной мотивации (рис 2) показал что ВП было достоверно меньше в 1 сутки на 50% (Р<0,001), на 2 день на 47% (Р<0,001), на 3 сутки на 30% (Р<0,01), на 4 сутки на 40% (Р<0,01) на 5 сутки на 32% (Р<0 01) ИП увеличилась в 1 сутки на 24% (Р<0 01) на 2 сутки на 17% (Р<0,05), на 3 сутки на 15% (Р<0.05), на 4 сутки на 13% (Р<0 05), на 5 сутки на 12% (Р<0 05) (рис 2)

та

ТОО -.....Д-

во

дет «

20 О

-ь

J

з

(Г/ТКИ

О контроль

ОвитагданЕ

Интенсивность поиска

25

1 20

р о 15 -

т

"3! О 10 --

о

о

5

0 4

г£г

3

сутки

□ контроль

□ витамин Е

Когнитивный показатель

100 -80 - ■ 60 ■ 40 20 -0

1 2 3 —I-1- .... --- 4 5

сутки

—«— контроль —в — витамин Е

Рис. I Динамика показателен поисковой активности в структуре Оборонительного поведения у подопытной (альфа-токоферол (витамин Е) 10 мг/кг) и контрольной групп в проблемной га мере в течение 5 суток тестирования

КП у животных, получавших мсксидол. был выше чем у контрольных в 1 сутки на 35% (Р<0,001). на 2 сутки на 35% (Р<0,001), на 3 сутки на 25% (Р<0,05), на 4 сутки на 26% (Р<0,01), на 5 сутки на 30% (Р<0,01) (рис 2) Сравнение показателей поведения на втором этапе формирования ПА в УПК у крыс на фоне введения мексидола между- 1 и 5 сутками проведенного эксперимента дало следующие результаты ВП было меньше при оборонительной мотивации - в 1,5 раза (Р<0,05), при пищевой - в 3 раза (Р<0,001) при питьевой - в 1,7 раза (Р<0 01) ИП была выше в структуре оборонительного поведения - 1,3 раза (Р>0,05), в структуре пищевого - 1,3 раза (Р<0,05), в структуре питьевого - 1 5 раза (Р<0,05) КП увеличился в оборонительной методике -1,4 раза (Р>0,05), в пищевой методике - 2 5 раза (Р<0.001), в питьевой методике - 1,2 раза (Р>0,05)

Воздействие ТБ-52 на поисковую активность у лабораторных крыс в проблемной камере в структуре оборонительного, пищевого и

питьевого поведения

Следующий эксперимент был посвящен изучению изменений ПА лабораторных крыс в УПК при оборонительной, пищевой и питьевой мотивациях на фоне введения ТБ-52 ПЭВМ регистрировала и сравнивала показатели ПА (ВП. ИП, КП) в ПК \ подопытных и у контрольных животных ТБ-52, обладающий антиоксидантными свойствами, представляет для наших исследовании особый интерес По сравнению с другими фармакологическими средствами, применяемыми в нашей работе, нейротропные эффекты которых достаточно изучены, публикаций об экспериментах по выявлению способностей у данного препарата воздействовать на поведение нами не обнаружено

Результаты выработки инстру ментальных рефлексов у животных, участвующих в эксперименте, в УПК в условиях различных мотиваций представлены в таблице 4 Время выработки ИРАИ на 5 сутки у контрольных особей было в 9,3 раза меньше по сравнению с 1 сутками, показатель ИПР понизился в 5,9 раза а значение ПИР в последние сутки обучения было в 3,8 раза ниже чем в первые (таб 4) У животных, получавших ТБ-52, ИРАИ на 5 сутки был в 7,8 раза ниже по сравнению с началом эксперимента, время формирования ИПР в аналогичных условиях снизилось в 7 раз, а ПИР на 5 сутки был в 6,9 раза ниже по сравнению с первыми (таб 4)

Сопоставление показателей в условиях оборонительной методики свидетельствует, что у подопытных животных время выработки ИРАИ было достоверно меньше чем у контрольных на 1 сутки на 42% (Р <0,001), на 2 сутки на 41% (Р<0 001), на 3 сутки на 54% (Р<0,001). на 4 сутки на 45,8% (Р<0,001), на 5 сутки на 47,1% (Р<0,01) (таб 4) При пшцевон мотивации ИПР понизился на 1 сутки на 43% (Р<0,001). на 2 сутки на 47% (Р<0,001), на 3 сутки на 70% (Р<0,001), на 4 сутки на 75% (Р<0,001), на 5 сутки на 50% (Р<0,001) (таб 4)

120 ■ 100 -80 | 60 40 4 20 ■ О -

з

сутки

□ контроль

□ мексидол

20 т- —

2

Ё 15

| ю £ Ф

° 5 о э *в

0

Интенсивность поиска

—Л.

1 я

□ контроль

3

сутки

тф-ГТ

□ мексидол

100

80 -

60 -* I

40 -! 20 ■

Когнитивный показатель

%

сутки

■контроль

■мексидол

Рис. 2. Динамика показателей поисковой активности в структуре оборонительного поведения у подопытной (.мексидоя. Ю мг/кг) и контрольной групп в универсальной проблемной камере в течение 5 суток тестирования.

Таблица 4

Время выработки инструментальных рефлексов у контрольной группы и группы, получавшей ТБ-52_

Рефлексы 1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5 сутки

Контроль ИРАИ 161 82 ±10.45 140.76 ±12.32 61,55± 8,32 37,95± 5,77 20,15+ 3 54***

ИПР 359.54 ±26.73 288,15 ±20 61 200,77 ±23,42 140.53 ±10 32 59,66± 6,43**

ПИР 307 62 ±26 52 248.54 ±20,19 203,68 ±12,34 129,07 ±8 82 79,43± 801*

Опыт ИРАИ 98,65± 9,33 84,67+ 7,08 27,93± 3,04 23,49± 2,66 12,45± 1,07**

ИПР 207,56 ±20,9 147,53 ±12,64 56,34± 12,79 35,32± 3,09 27,14± 2,37**

ПИР 249,87 ±12,58 176,54 ±8,21 90,77+ 6,53 50,11± 5,23 35,52± 2,44**

Примечания * - помечены показатели ПА при Р<0,05 **- при Р<0,01 *** - при Р< 0,001

(сравнивались 1 и 5 сутки тестирования у группы при данной мотивации)

Сравнение времени выработки питьевого ипстт ментального рефлекса у контрольных и подопытных животных дало информацию, что у группы, получавшей ТБ-52, показатель обучения был меньше чем у контрольной в 1 сутки на 18% (Р<0.05), на 2 сутки на 24% (Р<0,05), на 3 сутки на 55% (Р<0,01), на 4 сутки на 60% (Р<0,001), на 5 сутки на 55% (Р<0,001) Второй этап формирования ПА в УПК при оборонительной мотивации (рис 3) показал, что ВП у особей получавших ТБ-52, было достоверно меньше, чем у контрольных в 1 сутки на 85% (Р<0 001), на 2 сутки на 80% (Р<0,001), на 3 сутки на 58% (Р<0 001), на 4 сутки на 70% (Р<0,001), на 5 сутки на 35% (Р<0,001) ИП повысилась в 1 сутки на 73.4% (Р<0,001), на 2 сутки на 70% (Р<0,001), на 3 сутки на 55,9% (Р<0.001). на 4 сутки на 56% (Р<0,001). на 5 сутки на 38% (Р<0.05) (рис 3) КП у подопытных животных был выше в 1 сутки на 35% (при Р<0,01), на 2 сутки на 20% (при Р<0,05) на 3 сутки на 4% (при Р>0 05), на 4 сутки на 16% (при Р<0,05). на 5 сутки на 3,1% (при Р>0 05) (рис 3) Сравнение показателей поведения на втором этапе формирования ПА в УПК у крыс на фоне введения ТБ-52 между 1 и 5 сутками проведенного эксперимента дало следующие результаты ВП было меньше при оборонительной мотивации - в 3 5 раза (Р<0,01) ИП в структуре оборонительного поведения не изменилась (Р>0 05) КП в оборонительной методике остался прежним (Р>0,05) Проведенные исследования позволяют сделать следующие констатирующие выводы по проведенной серии

экспериментов 1 ТБ-52 способствовал оптимизации показателей поведения у подопытных животных в ПК 2 Введение ТБ-52 обеспечивало увеличение скорости выработки условных рефлексов у тестируемых особей 3 Достоверность различия между показателями на втором этапе формирования ПА при сравнении первых и последних суток эксперимента у группы, принимавшей ТБ-52 зависела от мотивации

Поисковая активность у лабораторных животных под влиянием ТБ -52 в тес те экстраполяционного избав тення поднырнванисм по Хендерсону в модификации Бондаренко

Следующий эксперимент был направлен на изучение изменения ПА у лабораторных животных в ТЭИП по Хендерсону в модификации Бондаренко Эксперимент проводился только с использованием мексидола и ТБ-52, для проверки у этих препаратов эффективности изменять поисковое поведение в искусственной инструментальной обстановке Результаты опыта представлены в таблице 5

Таблица 5

Латентный период выхода из стресс-ситуации (в секундах) у

контрольных животных и крыс, получавших ТБ-52

Группы 1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки 5 сутют

Контроль 92,96± 12.81 50,48± 14 22 16.32± 5.44 8.21± 1,93 6 29± 1 25

ТБ-52 57,21± 5,59 35,55± 3,12 14,23± 4,04 5,24± 0,67 3,15± 0,27***

Примечания *** - при Рг 0,001

(сравнивались 1 и 5 сутки обучения V группы при данной мотивации)

Латентный период выхода из стрссс-ситуации в ТЭИП у контрольных крыс на 5 сутки эксперимента был в 13 2 раза меньше по сравнению с 1 сутками У особей, получавших ТБ-52, время выработки инструментального рефлекса на 5 сутки было меньше чем в первые в 15 раз Изучение поискового поведения лабораторных животных в ТЭИП по Хендерсону в модификации Бондаренко показало, что обучение в искусственных стрессовых условиях у группы получавшей ТБ-52 шло быстрее, чем у контрольной в 1 сутки на 45% (Р<0,05), на 2 сутки на 38 2% (Р>0 05). на 3 сутки на 40% (Р>0 05). на 4 сутки на 40.5% (Р<0 05), на 5 сутки на 54% (Р<0.05)

Эффекты ТБ-52 в тсмно-свстлой камере

Доза ТБ-52 (10 мг/кг) демонстрирует определенные эффекты в ТСК у крыс (таб 6) В частности, ТБ-52 обнаруживает тенденцию к увеличению показателей ориентировочно-исследовательского поведения - числа выглядываний (на 52,8%) и выходов в освещенный отсек (на 50.0%)

300 250 ■ 200 | 150 ■ 100 I ■ 50 0

□ контроль

3

сутки

ШЕВЬ

□ ТБ-52

25 - ■■

я

Ь 20 -

- 10

о

и

о 5 -ю

Интенсивность поиска

□ контроль

3

сутки

I

•Л

-ЭЕ-

□ ТВ-52

70 60 50 . ^О

;зо ■ ■ 20 10 о

Когнитивный показатель

3

сутки

■ контроль

— ТБ-52

Рис. 3. Динамика показателей поисковой активности в структуре оборонительного поведения у подопытной (ТБ-52. 10 мг/кг) и контрольной групп в универсальной проблемной камере в течение 5 суток тестирования.

Таблица 6

Показатели ИА \ контрольной и подопытной гр>пн крыс в _темно-светлой камере__

Показатели Контроль 10 мг/кг

Число выглядываний 3 259±0,57 4,55±0 65*

Количество выходов в освещенный отсек 2,48±0 25 3,21±0,27*

Примечания при рО, 05

Кроме того показателен еще один эффект - в опыте в не том больший процент животных за время тестированиям продемонстрировал выглядывания и/или выходы в светтый отсек При этом отмечлстся достоверное снижение латентностей двух данных показателей Так. латентность первого выглядывания достоверно снизилась на 46% Латентность первого выхода в открытый отсек достоверно снизилась на 60.2% Следует заметить, что, в целом, подобный поведенческий профиль в данном тесте характерен для анксиолитических препаратов Особое внимание следует уделить изменениям, связанным с выглядываниями Изменения этих поведенческих показателей под влиянием ТБ-52 подтверждает анксиотропное действие указанного препарата Таким образом можно отметить следующие эффекты ТБ-52 в данном тесте ТБ-52 незначительно (на уровне тенденщш) увеличивал количество показателей исследовательской активности -выглядываний и выходов в открытый отсек, в ряде случаев достоверно снижал латентность выглядываний и выходов вызывал достоверное увеличение длительности выглядываний и выходов, однако не влиял на соотношеш!е количества и длительности выглядыванш! и выходов и интенсивность дефекации Можно заключить, что ТБ-52 в данном тесте акгшзирует исследовательское поведение животных что свидетельствует о возможности обладания препаратом некоторыми анксиолитическтш эффектами

Изменение исследовательском активное гп у лабораторных крыс в открытом ноле при введении ТБ-52

В серии опытов изучено изменение ИА лабораторных крыс в ОП и ПКЛ Результаты тестирования представлены в таблице 7 Из полученных данных следует, что у подопытной группы общее число посещений квадратов открытого поля было больше, чем у контрольной группы в 1 сутки в 2,8 раза, на 2 сутки в 2 8 раза, на 3 сутки в 4,4 раза, на 4 сутки в 5 1 раза Все различия достоверны Количество стоек у животных получавших мексидол было больше чем V контрольных в 1 сутки в 1 4 раза на 2 сутки в 2,9 раза на 3 сутки в 2 2 раза, на 4 сутки в 3,7 раза Число заглядывании в отверстия \ подопытных крыс было выше, чем у контрольной группы в 1 сутки в 1.1 раза, на 2 сутки в 1,2 раза, на 3 сутки в 1,8 раза, на 4 сутки 5,5 раза Число посещений внутренних квадратов ОП свидетельствующее об уровне тревожности, у подопытной

группы было выше, чем у контрольной в 1 день в 3,3 раза, во 2 день в 3,1 раза, на 3 день в 4,8 раза, на 4 день в 6,8 раза Все различия достоверны Поведенческие эффекты ТБ-52 в блнц-TCCie: приподнятая открытая

платформа

Количественные показатели поведенческих реакций животных под влиянием ТБ-52 на приподнятой открытой платформе приведены в табл 8 Следует обратить внимание на общее стимулирующее действие препарата на поведенческую активность крыс Taie, ТБ-52 достоверно активировал локомоцию (общее число пересеченных квадратов) в 2,5 раза Аналогично еще одна «локомоторная» функция - заглядывания вниз - у животных получавших ТБ-52, было достоверно на 18% выше контроля При этом общее число показателей вертикальной активности - стоек - в опыте и контроле практически не различалось Груминговая активность у подопытных крыс также подверглась изменениям под действием ТБ-52 Так, в подопытной группе груминг достоверно увеличился на 78,3% Таким образом, можно суммировать наблюдаемые эффекты ТБ-52 как явные анксиолигаческие свойства в отношении локомоторной активности подопытных животных У крыс, которым вводили ТБ-52, показатель «число переходов» был на 85% достоверно выше контроля, что свидетельствует об усилении мотивации подопытных животных исследовать гораздо более опасную «открытую» зону по сравнению с контрольными особями В заключение можно сказать, что ТБ-52 вызвал определенные активирующие изменения не только в двигательной активности, но и в параметрах, отражающих тревожность животного в «открытых» и «закрытых» частях приподнятой платформы Эффекты, в целом, всегда были достоверны и часто наблюдались в первые минуты тестирования

Таблица 7

Показатели исследовательской активности у контрольной группы и группы, получавшей ТБ-52, в открытом поле_

1 сутки 2 сутки 3 сутки 4 сутки

Общее число посещений квадратов 9.56± 2,43 10,16± 2.54 4,56+ 1,57 3,64+ 1,29

Количество 4,48+ 1,55+ 1 65+ 1,37+

стоек 1.34 0,28 0,23 0.17

Контроль Число заглядываний в отверстия 2,37+ 0,66 1,25+ 0,38 1,09+ 0,05 0,39+ 0,04

Число

посещении

внутр

Квадратов 4 17± 5,69± 2,28± 1.23±

1,26 1,43 0,37 0,05

Опыт Общее число посещении квадратов 26,38± 4,52* 28,34± 4,78** 18,23+ 2,56* 16,34+ 3,35*

Количество стоек 6,37± 2,41**** 4,53± 1,76** 3,65+ 1,19** 4,43± 1,54*

Число заглядываиий в отверстия 2,49± 1,04**** 1,55± 0,87*** 1,69± 0,27** 2,45± 0,39*

Число посещений внутр. квадратов 13,76± 2,54** 17,44+ 2,37*** 10,28± 2,06* 7,43± 1,77*

Число посещении внутр. квадратов 13,75+ 2,44** 15,42± 2,46*** 9,32± 2,17* 6,24± 1,76*

Примечания *- при р<0,001, **- при Р<0,0], ***- при Р<0,05, при Р>0,05

Таблица 8

Эффекты влияния ТБ-52 на поведение крыс в ириподниюН

открытой платформе

Показатели Контроть ТБ-52

Общее число

пересеченных 83 66+10,98 216,34+12.66***

квадратов

Число переходов 74.28+16,27 96,57+13,23*

Количество стоек 28,11+2 47 33.06+4,53

Заглядывания вниз 42 07+5 65 56,79+2,87**

Грумннг 11,43+135 19,23+2 56**

Примечания *-при рг 0,05, **-при р'0,01, *** при рг 0,001

ВЫВОДЫ

1 Мексидол, ТБ-52 и альфа-токоферол в дозе 10 мг/кг оказывают активирующее влияние на параметры поискового поведения (время поиска, интенсивность поиска, когнитивный показатель) у лабораторных крыс в искусственной инструментальной среде (проблемной камере)

2 Параметры ориентировочно-исследовательского поведения (число выглядываний, количество выходов в светлый отсек) в темно-светлой камере под влиянием ТБ-52 в дозе 10 мг/кг статистически достоверно увеличиваются по сравнению с контрольными животными

3 Введение ТБ-52 подопытным крысам приводит к статистически достоверному возрастанию у них показателей ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле (общее число посещений квадратов, число стоек, количество пересеченных внутренних квадратов, число заглядываний в отверстия) и приподнятой открытой платформе (общее число пересеченных квадратов число переходов, число заглядываний вниз, груминг)

4 Антиоксидантный препарат ТБ-52 снижает время выхода из стресс-ситуации у подопытных крыс в тесте экстраполяционного избавления подныриванием на 5 сутки на 54% по сравнению с контрольными животными

5 ТБ-52 проявляет анксиолитические свойства в методах «открытое поле», «темно-светлая камера», «приподнятая открытая платформа»

6 Антиоксидантные препараты ТБ-52 и мексидол обладают выраженными стресспротекторными свойствами

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Всртинскии В В Физиология тревожности перспективы антиоксидантов как анксиолитических средств // Молодежь XXI века шаг в будущее Сборник трудов VII региона 1ьнои межвузовской нау^но-практичсскои конференции посвященной 150-летию основания г Благовещенска - Благовещенск 2006 - С 22-21

2 Всртинскии В В Евсеева А Н Гордсева Н В Аверсивныи стимул вопрос выбора раздражителя в поведенческих экспериментах // Молодежь XXI века шаг в б\ дущее Сборник трудов VII региональнон межвузовской научно-практической конференции посвящсннон 150-тстию основания г Благовещенска -Благовещенск 2006 - С 20-21

3 Всртинскии В В Пластиннн М Л . Пластинина О Н Бурлаковл И Г Антиоксидантнля коррекция приобретенного поведения // Сборник научно - практических статей посвященный 110 - летнему юбилею городской больницы №1 г Благовещенска Амурской области - Благовещенск 2006 -С 24

4 Всртинскии В В . Пллстннин М Л . Пластинина О Н . Бур такова И Г В зияние нового антиоксидлнтного препарата на поисковую активность в структуре оборонительного поведения // Сборник научно - практических статей, посвященный 110 - летнему юбилею городской больницы №1 г Благовещенска Амурской области -Благовещенск 2006 - С 28

5 Вертинский В В . Пластиннн М Л , Пластинина О Н Бурлакова И Г Поисковая активность и ее фармакологическая регуляция эмоксипином // Сборник научно - практических статей, посвященный 110 - летнему юбитею городской больницы №1 г Благовещенска Алгу рекой области -Благовещенск 2006 - С 59-60

6 Вертинский В В Евсеева А Н , Гордсева Н В Доровскич В А , Пластиннн М Л, Можаев С И Коррекция сложных поведенческих реакций у белых крыс-самцов посредством введения антиоксиданта // Дальневосточный медицинскии ж\ риал - Хабаровск 2006 - №4 - С 90 -93

7 Всртинскии В В Евсеева А Н Гордеева Н В Изменение пространственной ориентации в искусственной инструментальной обстановке у белых крыс на фоне приема лнтиокислитсльного средствл // Научно-практическая конференция «Актуальные проблемы физической культуры, спорта и здоровья на Дальнем Востоке и их решение» Региональный межву зовскии сборник трудов - Благовещенск 2007 - С 243 - 246

СПИСОК ПРИМЕНЯЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ ИА - исследовательская активность ОП - открытое поле ПА -поисковая активность ПОЛ - псрекисное окисление липидов, ТЭИП -тест экстраполяционного избавления подныриванием ПК - проблемная камера, СКЗ - стандартная когнитивная задача ТСК - темно-светлая камера ЭКР - электро - кожное ра здражение

Подписано в печать 01 10 2007 г Формат 60 х 84/16

1 уч-изд л Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №125

Отпечатано в типографии Амурской государственной медицинской академии, ул Горького, 95

Актуальность темы

В современных условиях неоспоримым является факт, что среда обитания постоянно ставит перед человеком новые, ранее не встречавшиеся, проблемы и задачи, которые способны при известных условиях привести к развитию психосоматической патологии. Для борьбы с негативными последствиями различных стрессовых воздействий у живых организмов эволюцией выработан универсальный адаптационный стресс-синдром (Frelle М., Gant W.H., 2005). Этот синдром не только предшествует развитию адаптационно-приспособительных механизмов, но и играет значительную роль в формировании собственно адаптации. Данный эффект достигается несколькими путями, к числу которых принадлежат мобилизация энергетических ресурсов организма и воздействие различными химическими соединениями на метаболизм и функцию клеток биологической системы, в которой формируется специальный структурный след (Harman D., 2003).

Стресс-синдром сложился эволюционно как необходимое неспецифическое звено более сложного целостного механизма адаптации (Smith E.R., Hadidan Z., 2004). При этом нужно отметить, что поведенческие реакции играют в этой схеме важную роль, формируя адекватную функциональную систему целостного поведенческого акта, способную вывести организм из сложнейших, порой кажущихся тупиковыми, ситуаций (Слоним А.Д., 1986).

Ряд авторов свидетельствуют, что нейрогенная патология у животных способна развиться от частой смены стереотипов условнорефлекторной деятельности и двигательной активности, а также посредством эмоционального возбуждения, вызываемого прерывистым голоданием и длительной электростимуляцией вентромедиального ядра гипоталамуса (Чепурнов С.А., 1994; Benesova О., 2004).

Эта информация коррелирует с данными, в которых у людей, профессионально испытывающих мощные психологические и эмоциональные нагрузки (работники МЧС, врачи и т.д.), частота развития таких патологий, как инсульт, ишемическая болезнь сердца и инфаркт миокарда особенно высока (Кораблёв М.В., Лукиенко П.И., 1999; Brown Н., 1997).

Главным механизмом, приводящим к развитию патологии под влиянием тяжелого стресса, многие исследователи считают стрессорную активацию перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Доровских В.А., 2004), которая оказывает повреждающее действие в первую очередь на сердечнососудистую и центральную нервную системы (ЦИС), а также на организм в целом (Доровских В.А., Целуйко, С.С., 2005).

Таким образом, хронический выраженный стресс, сопровождающийся чрезмерной интенсивностью ПОЛ, является, на наш взгляд, основной причиной в появлении и развитии многих заболеваний (в том числе и' опухолевых (Markus E.J, 2006)).

Несомненно, . организм посредством стресс-синдрома пытается: бороться с патологией (Salt J.S., Taberner P.V., 2002), но в условиях современного общества, в котором хронический поведенческий стресс стал обыденным явлением (Якунин Т.С., 2005), внутренних защитных механизмов человеку уже недостаточно. Поэтому необходимо искать дополнительные пути не только лечения постстрессовых состояний, но и профилактики стрессорных повреждений.

Одним из перспективных направлений по борьбе с психоэмоциональным стрессом является применение фармакологических веществ, обладающих антиоксидантным, антигипоксантым и мембраностабилизирующим свойствами, нацеленными против последствий хронического стресса (Доровских В.А., 2002).

Антиоксиданты включают в себя широкий спектр различных эффектов (антиамнестический, ноотропный и др.)? однако до сих пор досконально не изучено изменение поведенческих реакций на фоне введения противоокислительных препаратов синтетического происхождения в условиях искусственной инструментальной среды (Пластинин M.JL, Григорьев Н.Р., 2003). Подобные исследования представляют особый интерес не только для фармакологов, но и для психофизиологов и психотерапевтов, так как данные, полученные в подобных экспериментах на животных, можно с большой степенью достоверности экстраполировать на поведение человека в урбанистическом обществе.

Профессором В. А. Доровских с соавт. (2004, 2005) были проведены работы по изучению фармакологических эффектов производных пиримидина и тиобарбитуровой кислоты, обладающих антиоксидантными /антигипоксантными эффектами, доказавшие перспективность широкого применения антиоксидантов в повышении резистентности организма и физической работоспособности при экстремальных воздействиях.

Исходя из вышеизложенного, целью нашего исследования явилось изучение влияния фармакологических препаратов с антиоксидантными свойствами (ТБ-52, мексидол) на поведение лабораторных крыс-самцов в стрессогенных искусственных инструментальных средах.

Задачи исследования

1. Исследовать поисковое поведение у животных в искусственной инструментальной среде под воздействием мексидола, ТБ-52 и альфа-токоферола.

2. Определить параметры ориентировочно-исследовательского поведения у лабораторных животных в темно-светлой камере на фоне введения антиоксидантного препарата ТБ-52.

3. Изучить поведенческие реакции у животных, получавших ТБ-52, в открытом поле и приподнятой открытой платформе.

4. Определить время выхода из стресс-ситуации у подопытных крыс, которым вводили ТБ-52, в тесте экстраполяционного избавления подныриванием.

Работа (номер госрегистрации 0120065170) выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармакологии ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии.

Научная новизна результатов исследования

1. Экспериментально обоснована эффективность применения антиоксиданта ТБ-52 для профилактики негативных последствий психосоматического стресса.

2. Доказано позитивное влияние антиоксидантных средств (мексидол, ТБ-52, альфа-токоферол) на показатели поведения у лабораторных животных в проблемной камере.

3. Выявлены положительные изменения локомоторных реакций у животных, получавших ТБ-52, в тесте экстраполяционного избавления подныриванием.

4. Впервые исследованы поведенческие механизмы стресс-реакции у крыс, которым вводили ТБ-52 в темно-светлой камере.

5. В методах изучения ориентировочно-исследовательского поведения («открытое поле», «приподнятая открытая платформа») выявлены анксиолитические свойства у ТБ-52.

Положения, выносимые на защиту

1. Антиоксидантные препараты мексидол и ТБ-52 являются эффективным средством коррекции нарушений поведения в условиях психоэмоционального стресса.

2. ТБ-52 обладает анксиолитическими свойствами.

3. Мексидол и ТБ-52 увеличивают скорость выработки условных рефлексов в условиях инструментальной среды.

4. Ориентировочно-исследовательское поведение у подопытных животных оптимизировалось на фоне введения ТБ-52 и мексидола.

Личное участие автора в выполнении работы

Автор вёл все эксперименты, самостоятельно выполнял фармакологические исследования, проводил анализ и статистическую обработку экспериментальных данных. Экспериментальные исследования выполнены на базе кафедры фармакологии ГОУ ВПО Амурской государственной медицинской академии.

Апробация и внедрение результатов работы

Материалы диссертации обсуждены и доложены на межвузовской научно-практической конференции, посвященной 110-летнему юбилею больницы №1 г. Благовещенска Амурской области; на VII Региональной межвузовской научно-практической конференции, посвященной 150-летию основания г. Благовещенска «Молодежь XXI века: шаг в будущее» (г. Благовещенск, 2006); на региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы физической культуры, спорта и здоровья на Дальнем Востоке и их решение» (г. Благовещенск, 2007).

Публикации

Материалы диссертации опубликованы в 7 работах. Одна статья напечатана в издании ВАК. По теме диссертации получено 4 удостоверения на рационализаторские предложения, внедренные на кафедре фармакологии Амурской государственной медицинской академии. На заявку №2006123293/13 (025275) от 29.06.2006 г. «Модульное устройство для изучения способности животных к достижению подкрепления», соавторы: В. А. Доровских, М. J1. Пластинин, Ю. Г. Дутов, получено решение о выдаче патента на изобретение.

Структура диссертации

ВЫВОДЫ

1. Мексидол, ТБ-52 и альфа-токоферол в дозе 10 мг/кг оказывают активирующее влияние на параметры поискового поведения (время поиска, интенсивность поиска, когнитивный показатель) у лабораторных крыс в искусственной инструментальной среде (проблемной камере)

2. Параметры ориентировочно-исследовательского поведения (число выглядываний, количество выходов в светлый отсек) в темно-светлой камере под влиянием ТБ-52 в дозе 10 мг/кг статистически достоверно увеличиваются по сравнению с контрольными животными.

3. Введение ТБ-52 подопытным крысам приводит к статистически достоверному возрастанию у них показателей ориентировочно-исследовательского поведения в открытом поле (общее число посещений квадратов, число стоек, количество пересеченных внутренних квадратов, число заглядываний в отверстия) и приподнятой открытой платформе (общее число пересеченных квадратов, число переходов, число заглядываний вниз, груминг).

4. Антиоксидантный препарат ТБ-52 снижает время выхода из стресс-ситуации у подопытных крыс в тесте экстраполяционного избавления подныриванием на 5 сутки на 54% по сравнению с контрольными животными.

5. ТБ-52 проявляет анксиолитические свойства в методах «открытое поле», «темно-светлая камера», «приподнятая открытая платформа».

6. Антиоксидантные препараты ТБ-52 и мексидол обладают выраженными стресспротекторными свойствами.

ГЛАВА V ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема борьбы с психической дезадаптацией, вызванной стрессорными факторами, является на сегодняшний день чрезвычайно актуальной. Поиск и изучение фармакологических способов коррекции поведения относится к одним из приоритетных направлений современной науки, причем это касается в первую очередь лекарственных средств, обладающих «мягким», щадящим влиянием на психику человека. Из этого вытекает другая, не менее важная, задача: разработка и внедрение в научную практику новых, более совершенных поведенческих методик исследования нейротропных свойств фармакологических препаратов.

В настоящей работе мы изучали в проблемной камере показатели приобретенного поведения у лабораторных животных (белых крыс-самцов), получавших фармакологические препараты, обладающие антиоксидантными свойствами. Экспериментально обосновали возможность изменения параметров поискового поведения с их помощью. Нами впервые выявлены и изучены противотревожные свойства ТБ-52.

В своих исследованиях мы доказали возможность коррекции стрессорных реакций у лабораторных животных при различных мотивациях посредством введения фармакологических средств, обладающих актопротекторными и антиоксидантными свойствами.

Подобные результаты были получены М.Г. Айрапетянц с соавт. (2000), Н.В. Гуляевой, И.П. Левшиной (1988) при изучении ИА. Они обнаружили, что витамин Е увеличивал показатели ИА в открытом поле и способствовал выработке условных рефлексов в темно-светлой камере.

Это доказывает, что, в условиях эмоционально-болевого стресса, вызванного электро-кожным раздражением, у животных, получавших токоферол, ПА увеличивается. Данное влияние препарата на ПА мы связываем с его адаптогенным и стресспротективным свойствами, которыми обладает витамин Е (Климов А.Н., Леви Р.И., 1983). В свою очередь, психотропные эффекты мексидола непосредственно связаны с его антиокислительной активностью, а так как ключевым механизмом повреждающего действия психо-эмоционального стресса является чрезмерная активация ПОЛ, введение антиоксидантов нормализует чрезмерное свободнорадикальное окисление (Largo L., Livet R.A., 2001).

Результаты другой серии опытов выявили существенные изменения в параметрах ПА у животных, которым вводили антиоксидант ТБ-52, по сравнению с контрольными.

Поскольку в литературе нет прямых данных об ТБ-52 как ноотропном препарате, наблюдаемый эффект мы попытаемся объяснить, исходя из имеющихся косвенной информации. Нейротропное свойство у ТБ-52 связано, на наш взгляд, со следующим: удар электрического тока вызывает у крыс эмоционально-болевую реакцию, которая активирует свободнорадикальное окисление липидов, обнаруживаемое в начальной фазе стресса (Lapin I.P., 1995). Согласно синапсо - мембранной теории памяти, механизм её формирования определяется структурно функциональными изменениями в мембранах нейронов, которые включают стабилизацию конформационных синаптических мембранных протеиновых макромолекул, в результате чего происходит активация синаптической передачи. Свободные радикалы повреждают цитолемму и нарушают передачу нервного импульса в синапсах ЦНС (Olson L, Nordberg А.Н. von Hoist et al., 2005).

Антиоксидант ТБ-52, обладая протекторным действием, нейтрализует повреждающее влияние свободных радикалов, стимулирует функциональные свойства биомембран и повышает скорость синаптических процессов, улучшая, таким образом, формирование памятного «следа».

После подготовительного этапа тестирование в ПК в начальном эксперименте выявило следующие изменения в показателях ПА у подопытных животных. Внутрибрюшинное введение ТБ-52 приводило к достоверному уменьшению ВП у подопытных крыс, увеличению ИП и, особенно, росту КП по сравнению с контрольной группой.

В литературе имеются сведения о том, что одно и то же вещество способно по-разному влиять иа выработку поведенческих реакций у одних и тех же животных в зависимости от мотиваций (Rothballer А.В., 2002; Samuel G.K., Kodama J.K., Mennear J.H., 2000). Например, адреналин не изменяет формирование реакции активного избегания у крыс, однако, будучи введенным в латеральную зону гипоталамуса, стимулирует пищедобывательное поведение на фоне седативного состояния (Shimizu N., Tomoda М., Kanari М., 1991). Поэтому мы провели две серии опытов по изучению влияния ТБ-52 на ПА крыс при пищевой и питьевой мотивациях.

Подопытные крысы быстрее вырабатывали ИПР. Аналогичный результат был получен в эксперименте по изучению ПА в структуре питьевого поведения: ПИР формировался у испытуемой группы достоверно быстрее, чем у контрольной.

Позитивное изменение (увеличение) динамики обучения тестируемых групп, основанных на ПА при пищевой и питьевой мотивациях, соответствует изменению показателя выработки инструментального рефлекса в опытах по изучению ПА в структуре оборонительного поведения. Это свидетельствует о том, что ноотропный эффект ТБ-52 проявляется не только в ситуации, связанной с эмоционально - болевым стрессом (оборонительная методика в УПК), но и в обстановке хронического эмоционального стресса (пищедобывательная и питьевая методики).

При тестировании ТБ-52 достоверно изменял мотивационно-энергетические и когнитивный показатели ПА в структуре пищевого поведения. ВП у животных, которым вводился ТБ-52, было достоверно ниже, ИП и КП достоверно выше, чем у контрольной группы. Аналогичное изменение показателей у подопытных животных по сравнению с контрольными было получено при изучении ПА в структуре питьевого поведения. Таким образом, ТБ-52 достоверно улучшает ПА при оборонительной, пищевой и питьевой мотивациях.

Подводя итог работе, направленной на исследование влияния антиоксиданта ТБ-52 на ПА у животных при различных мотивациях, мы видим, что данный препарат позитивно изменяет выработку сложных поведенческих реакций в искусственной инструментальной обстановке. Это действие объясняется, на наш взгляд, не только ноотропным 1 свойством ТБ-52, но и стресспротективным и анксиолитическим эффектами.

Антигипоксантное и антиоксидантное свойство ТБ-52 приводило к положительным сдвигам в биохимических процессах организма и функционально-морфологическим изменениям в сердечно-сосудистой системе. Как следствие, изменялась адаптивная способность и реактивность ЦНС, что позволяло животным быстрее вырабатывать сложные приспособительные поведенческие реакции в стрессогенной обстановке.

Об анксиолитическом эффекте ТБ-52 мы могли судить на основании визуальных наблюдений за подопытными крысами в УПК. У этих животных по сравнению с контрольными наблюдалось снижение локомоции и вокализации, более целенаправленные побежки к предполагаемым незаблокированным выходам после повторного помещения внутрь установки. Учитывая высокий уровень значений интегративных показателей ПА у подопытных групп, мы считаем, что ТБ-52 не подавляет, подобно транквилизаторам (поведенческие coping-механизмы), а, умеренно снижая эмоциональность, оказывает регулирующее действие в зависимости от исходного биохимического и функционального состояния мозга, при необходимости снимая возбуждение (в аверсивной обстановке) или повышая его (в норме).

Таким образом, проведенные эксперименты по изучению изменения поисковой активности у животных в проблемной камере при введении антиоксидантов (ТБ-52, мексидол, витамин Е) показали, что характеристики ПА в условиях оборонительной, пищедобывательной и питьевой мотивации активируются под влиянием данных фармакологических средств. Это позволяет рекомендовать введение препаратов, повышающих ПА, для профилактики психосоматической патологии.

В серии опытов по изучению ПА крыс в ТЭИП мы выявили, что ТБ-52 снижает значение регистрируемого показателя поведения у животных. Препарат достоверно уменьшал латентный период выхода из стресс — ситуации, что говорит об увеличении у подопытных групп способности решать экстраполяционную задачу и более быстрой выработке у них целенаправленных действий по выходу из экстремальной ситуации.

В экспериментах по изучению влияния мексидола на ИА животных в ОП и приподнятой открытой платформе мы выяснили, что он обладает анксиолитическими свойствами, а также оказывает стимулирующее влияние на ИА подопытных животных. Препарат в методике ОП достоверно увеличивал общую двигательную активность особей, количество стоек и заглядываний.

С одной стороны, повышение локомоции у крыс, получавших мексидол, можно расценить как усиление «страха» в обстановке опыта, однако более частые посещения центра ОП свидетельствуют об обратном.

Механизм этого эффекта описан нами выше, когда мы анализировали ПА крыс, которым вводился ТБ-52.

Тестирование животных в приподнятой открытой платформе показало, что ТБ-52 достоверно увеличивает двигательную активность у подопытных крыс, повышает количество стоек (вертикальную активность) и время пребывания в открытых рукавах лабиринта, повышает число свешиваний.

Таким образом, опыты подтвердили стимулирующее воздействие изучаемого препарата на ИА, а также его анксиолитические способности. Это действие ТБ-52 на ИА животных, возможно, связано с его антиоксидантными свойствами и способностью влиять на содержание катехоламинов в крови, так как имеются данные о зависимости изменений состава липидов с чувствительностью нейромедиаторных систем, что опосредованно может влиять поведение.

Методики по изучению поведенческих реакций животных широко применяются в психофармакологии для выявления возможных психотропных свойств веществ. Так, крестообразный лабиринт, в котором изучается ИА мелких лабораторных животных (мышей, крыс), используется для проверки эффектов анксиогенов и анксиолитиков. По ряду показателей ИА животных в ПКЛ мы можем достоверно судить о наличии или отсутствии влияния фармакологического препарата на уровень тревожности (Smith E.R., Hadidan Z., Mazon M.M., 2004).

Однако, данная методика полезна только при изучении анксиолитических или анксиогенных свойств веществ и не может применяться для проверки ноотропного или стресспротективного эффектов. Кроме того, экспериментатор должен точно соблюдать ряд требований в работе с этой моделью тревоги: взятие в руки (handling) должно быть той же продолжительности, что и в моменты инъекции, так как эта манипуляция способна влиять на ИА животного; хэндлинг должен быть по возможности минимальным, потому что многократное взятие в руки изменяет поведение в ПКЛ, нарушая плотность ГАМК-бензадиазепиновых рецепторов в коре мозга лабораторных грызунов.

Для результатов опытов в ПКЛ имеют значение вид и линия животных, освещённость, манипуляции перед тестом. Это и неудивительно, так как поведение мышей и крыс в ПКЛ представляет собой интегральный результат минимум 3 мотиваций: ориентировочно -исследовательского рефлекса, норкового рефлекса (рефлекса предпочтения темноты) и страха высоты. Известно, что многие тестируемые препараты могут изменять все три мотивации, причём в неодинаковой пропорции. В зависимости от этого интегральный эффект может быть. Различия в деталях конструкции ПКЛ также сказываются на результатах теста, о чём свидетельствует информация, приведенная в литературе (Vernon M.V., Sorkin Е.М., 1991).

Из перечисленного выше следует, что методика ПКЛ требует тщательного всестороннего контроля, что не очень удобно и отнимает у экспериментатора дополнительные время и усилия. ОП также подчиняется большинству требований, предъявляемых к ПКЛ, так как оба метода основаны на изучении ИА, только с той разницей, что в ОП у животных фактор страха высоты заменен на фактор страха открытого пространства.

Таким образом, на основании литературных данных, мы убедились, что данные способы «капризны» и недостаточно эффективны для тестирования фармакологических препаратов, обладающих потенциальной нейротропной активностью.

Более перспективными, на наш взгляд, являются методики, направленные на исследование ПА животных. Эти методы просты в реализации, они менее зависимы от особенностей конструкции экспериментальных установок и факторов подготовительных процедур.

Например, в тесте экстраполяционного избавления подныриванием, предложенным N.D. Henderson, модифицированным Н.А. Бондаренко и условно отнесенным нами к методу изучения ПА при оборонительном поведении, регистрируются всего один - два параметра (латентный период выхода из стресс - ситуации и количество болюсов), что упрощает ~ процедуру тестирования, делает её более точной. Кроме того, различные варианты конструкции установки не влияют на результаты экспериментов. ТЭИП был нами успешно опробован для проверки психотропных свойств исследуемого фармакологического препарата. Однако, эта методика имеет значительный минус: регистрация только временного параметра ПА или числа болюсов дает слишком мало информации для глубоких выводов. Этот метод можно использовать в научной работе, связанной с психофармакологией, как дополнительный, контрольный.

В ходе работы мы успешно использовали ПЭВМ для регистрации и анализа интегративных показателей ПА лабораторных крыс в ПК

Анализируя результаты, полученные на втором этапе формирования ПА, мы смогли убедиться, что проблемная камера, в отличии от других методик, позволяет значительно быстрее выявить различия между характеристиками ПА у крыс, получавших фармакологические препараты, и у животных, не подвергавшихся воздействию химических веществ.

УПК также позволила выявить достоверные различия в регистрируемых показателях ПА у контрольной и подопытной групп крыс в структуре пищевого и питьевого поведения. Эта информация сопоставима с выводами, полученными в результате экспериментов с оборонительной методикой, что говорит об универсальности установки (Григорьев Н.Р., 2002) и возможности использования ее для определения степени воздействия фармакологического вещества на ПА при различных мотивациях.

Таким образом, мы можем заключить, что исследуемый метод изучения поведения животных адекватен для поиска и обнаружения нейротропных свойств веществ в психофармакологических экспериментах, позволяет выявлять вызванные тестируемыми фармагентами изменения в различных компонентах интегративной деятельности центральной нервной системы с учетом мотиваций особей и индивидуально - типологических особенностей ВНД, прост и удобен в эксплуатации.