Автореферат и диссертация по медицине (14.00.45) на тему:Фетотоксическое действие алкоголя и изыскание способов его коррекции

На правах рукописи

ЛЬВОВА

ЮЛИЯ АЛЕКСЕЕВНА

ФЕТОТОКСИЧЕСКОЕ ДЕЙСТВИЕ АЛКОГОЛЯ И ИЗЫСКАНИЕ СПОСОБОВ ЕГО КОРРЕКЦИИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.45. - Наркология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Национальном научном центре наркологии Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации (директор -член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Иванец Н.Н.)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Нужный Владимир Павлович

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Проскурякова Татьяна Васильевна

доктор медицинских наук Морозов Юрий Евсеевич

Ведущая организация:

Государственный научный центр социальной и судебной психиатрии им. В.П. Сербского

Защита диссертации состоится "22" июня 2004 года в Ю^чшжв заседании диссертационного совета Д 208.051.01 при ННЦ наркологии МЗ СР РФ по адресу: 119002, Москва, Малый Могильцевский переулок, 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ННЦ наркологии МЗ СР РФ (Москва, Малый Могильцевский переулок, 3).

Автореферат разослан "ЛА." мая 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета:

кандидат биологических наук.

.Львова Ольга Федоровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы диссертации

Негативное влияние алкоголя на потомство замечено давно [Бехтерев В.М.,1913], однако, углубленное изучение этого воздействия началось лишь в последние 25-30 лет, когда было отмечено нарастание алкоголизма у женщин во всех странах мира [Jones K.L., 1975; Majewski F.,1981; Norstrom T.,1996]. Первые сообщения об алкогольном синдроме плода (АСП) появились во Франции в 1968 году [Lemoine Р., 1968], а в 1973 году американские исследователи подтвердили результаты наблюдений французских коллег [Jones K.L.,1973].

Эпидемиологические исследования последних лет свидетельствуют о том, что алкогольный синдром плода, как нозологическая единица пренатальной этиологии, имеет довольно широкое распространение и обнаруживается в диапазоне от 1 на 300 новорожденных до 1 на 1000 новорожденных от женщин, потреблявших алкоголь во время беременности [Abel E.L.,1987]. В развернутом виде АСП включает специфические морфологические черепно-лицевые изменения, пре- и постнатальное отставание роста, пороки развития внутренних органов и скелета и, наконец, психическую неполноценность [Majewski F.,1981; Rosett H.Z.,1980]. Правда, все признаки АСП одновременно встречаются относительно редко.

Причины возникновения АСП связывают, прежде всего, с токсическими эффектами алкоголя. В экспериментальных исследованиях было обнаружено, что пренатальная алкоголизация животных увеличивает смертность эмбрионов и плодов, число мертворожденных и смертность в течение первого месяца жизни [Трофимов С.С., 1999]. Токсические эффекты алкоголя могут быть усилены за счет различного рода примесей, содержащихся в алкогольных напитках [Нужный В.П.,1995; Brusch С.А.,1995].

Середина 1990-х годов ознаменовалась увеличением смертности от отравлений алкоголем, а также ростом числа алкогользависимых соматических заболеваний [Харченко В.И.,1998; Lohiniva R.J.,1999]. По времени увеличение числа смертельных отравлений алкоголем совпало с увеличением случаев обнаружения синтетического спирта в алкогольных напитках, реализуемых населению [Немцов А.В.,1995]. В результате возникли опасения относительно токсических свойств синтетического спирта, которые привели к тому, что синтетический спирт был внесен в перечень ядовитых и сильнодействующих веществ.

Способы предупреждения АСП ограничиваются проведением профилактических бесед с многопьющими и больными алкоголизмом женщинами детородного возраста. Попытки использования с этой целью некоторых лекарственных средств, в частности ноотропов, успехом не увенчались [Кругликов Р.И., 1991; Майзелис М.Я.,1988]. Поиск способов и средств, препятствующих реализации эмбрио- и фетотоксического действия алкоголя представляется исключительно важным, как в теоретическом, так и в практическом отношении. Потенциально к таким средствам могут быть отнесены лекарственные препараты и иные средства, обладающие антиоксидантным ствием,

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ 1 БИБЛИОТЕКА {

в частности такие как новое лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда под названием «Каприм».

Цель и задачи исследования Цель настоящего исследования заключалась в сравнительной оценке фето-токсического действия спирта этилового синтетического ректификованного и спирта этилового пищевого, а также в изыскании способов коррекции эмбрио-и фетотоксического действия алкоголя.

В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на физическое развитие и поведение потомства.

2. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации > крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на чувствительность к наркотическому' действию этанола и уровень добровольного потребления раствора этилового спирта у потомства.

3. Оценить способность лекарственного препарата «Гипоксен» корректировать развитие нарушений роста, развития и поведения крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.

4. Изучить способность экстракта из гребней винограда препятствовать развитию нарушений роста, развития и поведения потомства крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.

5. Изучить способности лекарственного препарата «Гипоксен» и экстракта гребней винограда корректировать эмбриотоксическое действие алкоголя.

Научная новизна полученных результатов Подтверждено, что синтетический спирт и пищевой спирт при хроническом воздействии оказывают одинаковое по проявлениям и выраженности действие на плод.

Впервые на экспериментальной модели алкогольной фетопатии обнаружена способность нового лекарственного средства антигипоксантного типа действия под названием «Гипоксен» для предотвращения нарушений развития и поведения, а также формированию алкогольной мотивации и изменению чувствительности к наркотическому действию этанола у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.

Впервые показано, что экстракт из гребней винограда, эффективно препятствует реализации проявлений фетотоксического действия алкоголя на уровне формирования алкогольной мотивации, нарушений развития и поведения у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.

Впервые установлено, что лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт из гребней винограда препятствуют проявлениям эмбриотоксического действия алкоголя.

Практическая значимость полученных результатов Разработан комплекс методик, позволяющих без использования дорогостоящего оборудования дать заключение о потенциальной способности того или иного спирта вызывать у животных, подвергшихся пренатальной алкоголизации, патологию физического развития и поведения, предрасположенность к формированию алкогольной зависимости.

Результаты исследований позволили сформулировать несколько важных в практическом плане положений.

Первое - спирт этиловый синтетический ректификованный по параметрам хронической токсичности не отличается от пищевого этилового спирта и потому алкогольные напитки, изготовленные на его основе, не могут служить причиной повышенной смертности от отравлений алкоголем. Внесение этого спирта в перечень ядовитых веществ является необоснованным.

Второе - экстракт гребней винограда и лекарственное средство «Гипоксен» могут служить в качестве эффективных средств, препятствующих нарушениям развития и поведения у потомства, подвергавшегося длительной пренатальной алкоголизации.

Личный вклад соискателя Автор принимал непосредственное участие в выполнении исследований по всем разделам диссертации, включая выдвижение идеи, освоение методических подходов, организацию и проведение экспериментальных исследований, аналитический обзор литературы, обобщение и анализ результатов исследований. Экспериментальная часть выполнена соискателем на базе Национального Научного Центра Наркологии Министерства Здравоохранения и Социального Развития Российской Федерации. Научный руководитель оказывал консультативную помощь в разработке моделей, при постановке целей и задач исследования, обсуждении и трактовке полученных результатов. В выполнении отдельных фрагментов исследований принимали участие сотрудники лаборатории токсикологии ННЦН.

Апробация результатов диссертации Результаты исследований, включенные в диссертацию, докладывались на: 2-ой научно-практической конференции по традиционным методам терапии в акушерско-гинекологической практике (Москва, 2003); 2-ом съезде токсикологов России (Москва, 2003).

Опубликованность результатов Результаты диссертации отражены в 4 публикациях (4 статьи в научных журналах).

Структура и объем диссертации Диссертация изложена на 138 страницах машинописного текста и состоит из общей характеристики работы, аналитического обзора литературы по теме, описания объектов и методов исследования, изложения полученных результа-

тов исследования и их обсуждения, выводов и библиографии, включающей 197 названий. Диссертация содержит 12 иллюстраций и 25 таблиц.

МАТЕРИАЛЫ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнена на 115 крысах-самках и 50 крысах-самцах линии в

репродуктивном возрасте с начальной массой тела 200-240 г и на 897 крысятах (самцы и самки) - потомстве крыс-самок, подвергавшихся воздействию алкоголем в течение всей беременности.

Введение беременным самкам испытуемых растворов спирта этилового пищевого и спирта этилового синтетического производили интрагастрально с 1-го дня по 21-ый день беременности один раз в сутки в виде 25% раствора в дозе 4,5 г/кг. Животным контрольной группы один раз в сутки вводили интрагастрально воду в объеме 18 мл/кг. Каприм в дозе 100 мг/кг и Гипоксен в дозе 30 мг/кг вводили беременным самкам интрагастрально с 1-го дня по 21-ый день беременности один раз в сутки в составе 25% раствора спирта этилового пищевого в дозе 4,5 г/кг.

Методики и основные эксперименты по оценке физического развития и изучению мозга и поведения животных, подвергшихся пренатальной алкоголизации. На протяжении всего периода беременности и до 28-го дня лактации у крыс-самок еженедельно регистрировали массу тела. У потомства помимо массы тела и динамики ее прироста [Вепе80Уа О.,1989; Трофимов С.С.,1999] регистрировали время появления признаков, характеризующих развитие крысят (отлипание ушей, покрытие шерстью и открывание глаз) /В1Шг;ке Р Л.,1992]. На 10-й день жизни у крысят обоего пола определяли наличие безусловных рефлексов переворачивания на плоскости и удержания передними лапами на горизонтальной веревочке (по продолжительности, в сек.) [Ва А., 1996].

В возрасте 48-58 дней оценивали физическую выносливость и координацию движений животных в тесте "вращающийся стержень", фиксируя время удержания на барабане, вращающемся со скоростью 18 оборотов/минуту. За день до тестирования животных предварительно тренировали в течение 5 мин. при скорости вращения барабана 9 об./мин. [КипЬага Н.,1977].

В возрасте 48-58 дней изучали двигательную активность в тесте "открытое поле" в условиях естественного освещения [Трофимов С.С.,1996]. Для этого животных помещали в центр "открытого поля", представляющего собой квадратную камеру площадью 100 х 100 см и высотой стенок 40 см, разделенную на 25 равных квадратов. В течение 5-ти мин. регистрировали горизонтальную (число пересеченных внутренних и внешних квадратов) и вертикальную (число стоек) двигательную активность, груминг и его продолжительность, время пассивного поведения, количество встряхиваний головой, лапами и всем телом, а также число фекальных болюсов и уринаций.

В возрасте 47 - 57 дней исследовали поведение животных в тесте "крестообразный приподнятый лабиринт ", оценивая исследовательскую активность и уровень тревожности крысят. О состоянии рабочей памяти животных судили по оптимальности исследовательского поведения, определяемой по числу заходов

в рукава, количеству свешиваний вниз головой с лучей в течение одного обхода (3 мин). Об уровне тревожности судили по числу выходов на открытые лучи и суммарному времени нахождения на открытых лучах [Pellow S.,1985].

В возрасте 66 - 76 дней оценивали уровень тревожности крысят с помощью теста "темная-светлая камера". Эксперимент проводился в течение 5 минут. Животное помещали в светлый отсек и затем регистрировали следующие параметры: время до первого перехода в темный отсек, суммарное время нахождения в светлом отсеке, количество стоек в светлом отсеке, количество выглядываний из темного отсека в светлый, количество переходов из отсека в отсек [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ,2000].

В возрасте 84 - 89 дней проводили выработку условного рефлекса в Y-образном лабиринте. На протяжении 5-ти дней каждое животное помещали в исходную позицию лабиринта (ограничивающее время пребывания в лабиринте

- 5 мин). В качестве положительно подкрепляющего фактора использовались семена подсолнечника. Обучаемость оценивали по безошибочному посещению отсека с семенами и их поеданию. Через 10 дней проверяли сохранность выработанного условного рефлекса [Буреш Я., 1985].

В возрасте 99 - 109 дней оценивали склонность животных к депрессивно-подобному состоянию [Porsolt R.D.,1978]. Для этого крыс помещали в бассейн (диаметр 37см и глубина 50см) с водой (температура 20° С). В течение 10 минут регистрировали следующие показатели: длительность первого эпизода активного плавания — латентного периода первого активного плавания, время появления эпизодов пассивного плавания, когда животные прекращали плавание и зависали в воде, суммарное время пассивного плавания.

Помимо основных экспериментов по оценке физического развития и исследования поведения, в работе дополнительно оценивали болевую чувствительность крыс, потребление раствора этанола в условиях свободного выбора, толерантность животных к наркотическому действию этанола и реакцию крысят на аудиогенный раздражитель.

Болевую чувствительность крысят оценивали в тесте «tail-flick» в возрасте 32 - 46 дней. Для моделирования боли хвосты крыс погружали на 4-5 см в горячую воду (56°С), а болевую чувствительность определяли по длительности латентного периода реакции отдергивания хвоста [Ва А., 1996; Заблудовский А.Л.,1989].

У крыс в возрасте 3 6-41 день, помещаемых в индивидуальные клетки на 8 дней, оценивали потребление в условиях свободного выбора между водой и этанолом [Држевецкая И.А.,1991; Mankes R.F.,1992].

Для оценки уровня толерантности к наркотическому действию этанола у 93

- 103-дневных крысят измеряли время наркотического сна после внутрибрю-шинного введения 25% раствора этанола в дозе 3 г/кг [Коган Б.М.,1987].

В возрасте 103 - 113 дней оценивали чувствительность крысят к аудиоген-ному раздражителю (звон ключей, по 1 мин. индивидуально каждое животное) по появлению судорожной реакции [Abel E.L.,1990].

Полученные результаты обрабатывали методами вариационной статистики (критерий Стьюдента) с помощью компьютерной программы «Statistica». Все данные представлены в виде M+S.D.

Оценка алкогольной эмбриотоксичности.

Учет показателей эмбриотоксического эффекта алкоголя производили на эмбриональном материале после вскрытия предварительно наркотизированных беременных самок и извлечения плодов. Первичной экспериментальной единицей наблюдения для статистического расчета являлся один помет, в котором определяли следующие показатели по формулам A.M. Малашенко, М.К. Егоровой (1967), Iyon M.F. et al (1974) [Красовский Г.Н.,1986]: общую эмбриональную смертность, пред- и постимплантационную гибель зародышей, показатель внутриутробной выживаемости, количество живых плодов на одну самку.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

1. Исследование фетотоксического действия спирта этилового синте-ти ческого ректификованного.

Динамика прибавки массы тела в процессе беременности у контрольных крыс-самок, получавших воду (1-я группа) и подопытных животных, получавших раствор пищевого этилового спирта (2-я группа), была одинаковой, тогда как самки, получавшие раствор спирта этилового синтетического ректификованного (3-я группа), отличались более существенной прибавкой в весе во 2-ю и 3-ю недели беременности. На протяжении 4-х недель лактации различий в массе тела между контрольной и опытными группами животных обнаружено не было.

В помете контрольных крыс-самок случаев мертворожденности зарегистрировано не было. Напротив, в помете крыс 2-й и 3-й групп количество мертворожденных составило 1,0% и 4,3%, соответственно. Общая гибель новорожденных крысят контрольной и опытных групп на протяжешнии 30-ти дней от рождения была практически одинаковой (20-26%).

Новорожденные из 2-й и 3-й групп имели меньшую массу тела по сравнению с контрольными (р<0,05). Развитие крысят контрольной и опытных групп, судя по срокам отлипания ушей, проходило синхронно. Однако, крысята 2-й и 3-й групп отставали в развитии от контрольных животных по срокам прорезывания глаз (р<0,001) и по срокам покрытия шерстью (р<0,001). При этом у крысят 3-й группы была выявлена значимая задержка в сроках покрытия шерстью (р<0,001) и по сравнению с потомством 2-й группы. По способности к удерживанию на горизонтальной веревочке в 10-дневном возрасте только крысята 3-й группы отставали от контрольных в развитии мышечной активности (р<0,05).

Данные, полученные при регистрации массы тела потомства на протяжении более трех месяцев со дня рождения указывают на то, что крысята (самцы и самки до 36-го дня жизни и самцы с 50-го по 95-й дни жизни) из помета животных, подвергавшихся воздействию растворами пищевого и синтетического спирта, во все сроки наблюдения статистически значимо отличаются от крысят из помета контрольных самок задержкой наращивания массы тела. Однако,

различий по этому показателю между крысятами 2-й и 3-й групп выявить не удалось.

Изучение двигательной активности крысят в тесте «Открытое поле» показало, что пренатальная алкоголизация раствором пищевого спирта реализуется выраженной тенденцией к уменьшению времени пассивного поведения. Из числа статистически достоверных различий следует отметить снижение количества эпизодов встряхивания головой (р<0,05) и общего числа встряхиваний всем телом (р<0,05) у крысят 2-й группы по сравнению с 1-й группой.

У крысят 3-й группы - потомков матерей, подвергавшихся воздействию синтетического спирта, наблюдалось достоверное уменьшение эпизодов встряхивания лапами (р<0,05) и умывания (р<0,05), а также уменьшение времени груминга (р<0,05) по сравнению с 1-й группой. Время пассивного поведения у крысят 3-й группы было в три раза больше (р<0,05), чем у крыс пренатально алкоголизированных раствором пищевого спирта. Обращает внимание тот факт, что по этому показателю крысы 3-й группы не отличались от контрольных животных.

В тесте «крестообразный приподнятый лабиринт» у животных 2-й и 3-й групп не было выявлено достоверных различий по сравнению с контрольной группой, за исключением уменьшения количества выглядываний за борта закрытых лучей у крысят 3-й группы (р<0,05) и уменьшения количества встряхиваний у животных 2-й группы (р<0,05). При этом у животных 3-й группы отмечено увеличение латентного периода пребывания в центре (р<0,05), уменьшение вертикальной двигательной (р<0,01) и суммарной локомоторной активности (р<0,01), а также уменьшение количества выглядываний (р<0,01) и увеличение времени пассивного поведения (р<0,05) по сравнению с животными 2-й группы.

Тест на обучение распознаванию с пищевым подкреплением показал, что пренатальная алкоголизация раствором пищевого этилового спирта провоцирует почти двукратное снижение способности крыс к обучению, а пренатальная алкоголизация раствором синтетического этилового спирта - полуторакратное снижение выработки данного навыка. Иными словами, крысы 3-й группы по способности к обучению заняли промежуточное положение между контрольными животными и крысами 2-й группы. При оценке сохранности приобретенного навыка, оказалось, что у животных 3-й группы целенаправленную поведенческую реакцию воспроизвели не только те животные, у которых навык был зафиксирован в последний - 5-й день тренировки, но и часть крыс, которые в этот день наличие навыка не подтвердили. Показатель сохранения навыка в этой группе достоверно превысил таковой, регистрируемый в контроле и во 2-й группе. Пренатальная алкоголизация раствором пищевого этилового спирта не отражалась на способности животных к сохранению и воспроизведению приобретенного навыка (табл. 1).

Таблица 1

Приобретение навыка к целенаправленному поведению и оценка сохранения навыка через 10 дней в Y-образном лабиринте (с пищевым подкреплением) у крыс-самцов, пренатально подвергавшихся воздействию пищевым или синтетическим спиртом

Дни наблюдения М±5.0. (п)

1-я группа Вода (19) 2-я группа Пищевой спирт ' (18) 3-я группа Синтетический спирт (22)

Б А Л Л Ы 1-й день 2,26*1,44 1,11±1,07 ** 1,55±1,17

2-й день 5,68±1,90 3,25±2,43 3,64+2,17 **

3-й день 6,55+2,31 4,31±2,57 5,39±2,43

4-й день 6,05+2,87 3,61±2,23 ** 4,82+2,10

5-й день 8,10±2,29 4,79±1,79 *** 5,83±2,09 **

5-й день (с дополнительными баллами) 10,05±2,94 5,97±3,12 •** 6,71+2,97 **•

Тестирование через 10 дней после обучения (с доп. баллами) 8,32±3,47 5,00±3,24 ** 8,10±2,61 ф*

Сохранение навыка, % 83,96±32Д2 90,80±64,77 ** ♦ 138,39±68,68

Примечание: достоверность различий по сравнению с контролем: ** - р £ 0.01, *** - р 5 0.001; по сравнению с пищевым спиртом (2-я группа): * - р 5 0.05, ** - р £ 0.01.

Поведение в условиях неизбегаемого плавания животных 2-й и 3-й групп, подвергавшихся воздействию спиртами в процессе внутриутробного развития, характеризовалось одинаковым по степени выраженности снижением латентного периода первого активного плавания на 24% (р<0,05) и на 30% (р<0,01) и увеличением суммарного времени пассивного плавания на 20% (р<0,05) и на 29% (р<0,01) по сравнению с контролем, соответственно. Эти данные дают основание заключить, что, крысята, пренатально подвергшиеся воздействию алкоголем, выявили склонность к развитию депрессивно-подобных состояний [259].

Оценка характера добровольного потребления 15% раствора этилового спирта показала, что пренатальная алкоголизация, вне зависимости от разновидности использованного при этом спирта, приводит к резкому, почти трехкратному увеличению потребления алкоголя в условиях свободного выбора крысятами в возрасте от 1 до 1,5 месяцев (табл. 2).

Таблица 2

Добровольное потребление 15% раствора этанола крысами-самцами, пренатально подвергавшихся воздействию пищевым или синтетическим

спиртом

Дни наблюдения Доза этанола в мл/крысу, М±5.П. (п)

1-я группа Вода (19) 2-я группа Пищевой спирт (17) 3-я группа Синтетический спирт (22)

1-й день 0,53±0,51 1,26±1,13 * 1,25±0,63 ***

2-й день 0,51±0,32 1,32±0,89 *** 1,06±0,61 *

3-й день 0,40±0,26 1,49±1,06 *** 1,99±1,55 ***

4-й день 0,33±0,20 2,09±1,40 *♦* 1,88±1,71

5-й день 0,79±1,13 2,Ю±1,88* 1,52±1,39

6-й день 0,79±0,82 1,79±1,37 * 1,82±1,36

7-й день 0,44±0,24 1,49±1,76* 2,11±1,71 •••

Суммарная доза 3,79±1,29 11,54±7,38 11,61±6,03

Примечание: достоверность различий по сравнению с контролем: * - р<0.05, ** - р<0.01, * -р<0.001.

При исследовании толерантности крыс к этанолу длительность наркотического сна у крыс 2-й и 3-й групп была на 20% (р<0,05) и на 29% (р<0,01) меньше по сравнению с контролем, соответственно. Таким образом, пренатальная алкоголизация пищевым и синтетическим спиртом приводит примерно к одинаковому снижению длительности наркотического сна, что может свидетельствовать о снижении чувствительности этих животных к наркотическому действию алкоголя.

Нам не удалось получить различий между животными, подвергавшимися пренатальному воздействию пищевым и синтетическим этиловым спиртом, и контрольными животными в способности к удержанию на вращающемся стержне, по показателям в тесте «темная-светлая камера» и в тесте <4аИ-11юк», а также при оценке судорожной готовности животных- растворы пищевого и синтетического этилового спирта не оказывали негативного действия (различия с контрольной группой отсутствовали).

2. Изыскание способов ослабления эмбрио- и фетотоксического действия этанола.

2.1. Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью Гипоксена.

Динамика прибавки массы тела у крыс-самок, получавших раствор этанола с Гипоксеном (3-я группа), на протяжении всей беременности не отличалась от таковой в контрольной группе (1-я группа), тогда как самки, получавшие в течение всей беременности интрагастралыю 25% раствор этанола (2-я группа) имели большую прибавку (р<0,05) по сравнению с контролем.

Явления мертворожденности у крыс-самок ни в одной из исследуемых групп зарегистрировано не было. Общая гибелъ новорожденный крысят на протяжении 30-ти дней жизни от рождения составила в 1-й группе - 0,1 ±0,4%; во 2-й группе - 2,4±2,5% (р<0,05 по сравнению с контролем) и в 3-й группе - 0,0±0,0% (р<0,05 по сравнению со 2-й группой), то есть в помете крыс-самок, получавших раствор этанола с Гипоксеном гибели потомства не наблюдалось.

Вес новорожденных крысят в 3-й группе был на 5% больше (р<0,01), чем у животных во 2-й группе и не отличался от такового в контроле. Динамика прироста массы тела у крысят всех трех групп на протяжении почти трех месяцев со дня рождения статистически не различалась.

Сочетанное воздействие Гипоксена с раствором этанола не оказывало существенного влияния на признаки, характеризующие развитие крысят (сроки отлипания ушей, покрытия шерстью и открывания глаз). При изучении созревания элементарного поведенческого рефлекса у 10-ти дневных сосунков установлено, что время удержания на горизонтальной веревочке в 3-й группе было на 46% больше (р<0,05), чем во 2-й группе, иными словами, добавление Гипок-сена в раствор этанола предотвращало снижение мышечной силы крысят, вызванное пренатальной алкоголизацией.

В тесте "открытое поле" было обнаружено, что Гипоксен способствовал увеличению количества выходов в центр (р<0,05) и уменьшению времени гру-минга (р<0,05) по сравнению с животными 2-й группы. Но при этом у крыс 3-й группы, как и у крыс 2-й группы, наблюдалось достоверное уменьшение эпизодов умывания (р<0,001) и времени груминга (р<0,001), а также увеличение количества уринаций (р<0,001) по сравнению с контрольными животными.

В тесте "крестообразный приподнятый лабиринт" добавление Гипоксепа в раствор этанола в период внутриутробного развития приводило к нормализации такого показателя, как количество выглядываний (р<0,05 по сравнению со 2-й группой). При этом крысы 3-й группы характеризовались двукратным снижением (по сравнению с 1-й и 2-й группой) латентного периода пребывания в центре (р<0,05 и р<0,01 соответственно) и почти полным отсутствием груминга (р<0,05 и р<0,001 соответственно).

В тесте "темная-светлая камера" суммарное время нахождения животных 3-й группы в светлом отсеке и количество стоек, сделанных в светлом отсеке (р<0,05 по сравнению со 2-й группой), практически достигало показателей, регистрируемых у контрольных животных. У животных 2-й группы наблюдалось достоверное уменьшение суммарного времени нахождения в светлом отсеке (р<0,05) и уменьшение количества стоек, сделанных в светлом отсеке (р<0,01) по сравнению с контролем.

При выработке условного рефлекса двустороннего избегания (УРДИ) Ги-поксен оказывал отчетливое корректирующее воздействие, которое проявилось в том, что критерий обученности крыс 3-й группы к пятому дню обучения не отличался от такового в контрольной группе и был, соответственно, в 2,3 раза больше, чем во 2-й группе (р<0,05). Показатель сохранности навыка у крыс 3-й группы был достоверно больше по сравнению с животными 2-й группы и не отличался от такового в контроле (рис. 1а, б).

Рис.1 а. Влияние Гипоксена на показатели выработки УРДИ у крыс-самцов, пренатально подвергавшихся воздействию этиловым спиртом

100 т-

1 2 „3 4

Дни

—■—контроль - - этанол - • * - • зтанол+Гипоксен

Рис.1 б. Сохранение УРДИ через две недели после выработки

•Ж

контроль

этанол+Гипоксен

Примечание: по сравнению с контролем: * - р<0 05; ** - р<0.01; по сравнению с этанолом: + - р<0.05.

В тесте «неизбегаемого плавания» животные 3-й группы отличались от крыс 2-й группы резким повышением (в 3,5 раза, р<0,001) латентного периода первого активного плавания и уменьшением на 18% (р<0,001) суммарного времени пассивного плавания. При этом животные 3-й группы, подвергавшиеся воздействию алкоголем в сочетании с Гипоксеном в процессе внутриутробного развития, по регистрируемым показателям заняли промежуточное положение между контролем и животными 2-й группы. Животные 2-й группы, подвергавшиеся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития, отличались от контрольных крыс резким снижением латентного периода первого активного

плавания - на 74% (р<0,001) и увеличением суммарного времени пассивного плавания - на 31% (р<0,001).

Размеры добровольного потребления раствора этанола в условиях свободного выбора представлены в таблице 3. Из таблицы следует, что животные 3-й группы почти во все сроки наблюдения потребляли достоверно меньше этанола, чем крысы 2-й группы.

Таблица 3

Влияние Гипоксена на добровольное потребление 15% (в/об) раствора этанола крысами-самцами, пренатально подвергавшимися воздействию этиловым спиртом

Дни наблюдения Доза этанола в мл/крысу М±5.Б. (п)

1-я группа Вода 2-я группа Этанол 3-я группа Этанол +Гипоксен

1-й день 2,9*3,8 (10) 2,9*1,9 (11) 2,4*3,0 (10)

2-й день 1,2*0,9(9) 4,0*2,7 (12) ** 1,9±0,9 (11) *

3-й день 4,9*5,3(10) 7,2*6,3(11) 2,0*1,4 (11) *

4-й день 2,9*3,0 (10) 6,7±5,6 (12) 2,3±1,2 (11)*

5-й день 6,6*4,7 (10) 8,1*4,2(12) 4,6±2,8 (11) *

6-й день 9,9*7,1 (10) 12,2*6,3 (12) 6,9±4,3 (11) 4

7-й день 7,1 ±5,8 (10) 6,0*4,5 (12) 4,3*4,1 (11)

8-й день 5,8*4,8(9) 5,2±4,6(12) 3,4*3,8(11)

Среднесуточная доза 5,2*2,8 (8) • 6,5*2,9(8) 3,5*1,7 (8) ф

По сравнению с контролем: ** - р<0.01; по сравнению с этанолом: * - р<0.05.

При оценке толерантности крыс к наркотическому действию этанола было обнаружено, что длительность наркотического сна в 3-й группе в два раза больше (р<0,05) в сравнении со 2-й группой и не отличается от таковой у животных 1-й группы.

2.2. Экспериментальная коррекция фетотоксического действия этанола с помощью экстракта гребней винограда.

У крыс, получавших раствор этанола с Капримом (3-я группа), отмечен достоверно больший прирост массы тела на протяжении всей беременности по сравнению с контрольными животными, получавшими в процессе всей беременности воду (1-я группа), а по сравнению с животными, получавшими 25% раствор этанола в дозе 4,5 г/кг (2-я группа) - в первую неделю беременности.

В помете контрольных крыс-самок случаев мертворожденности зарегистрировано не было, тогда как в помете крыс 2-й и 3-й групп количество мертворожденных составило 1% и 2%, соответственно (различия между группами недостоверны). Общая гибель новорожденных крысят контрольной и опытных групп на протяжении 30-ти дней от рождения была практически одинаковой (21-26%).

Масса тела крысят при рождении в 3-й группе была больше, чем во 2-й группе и практически не отличалась от таковой в 1-й группе. По признакам, характеризующим развитие крысят (сроки отлипания ушей, покрытия шерстью и открывания глаз) Каприм не предотвращал задержки в сроках открывания глаз и покрытия шерстью у потомства. При изучении созревания элементарных поведенческих рефлексов у 10-дневных сосунков было установлено, что время удержания на горизонтальной веревочке животных 3-й группы было меньше в сравнении с животными и 2-й группы (р<0,05), и контрольной группы (р<0,01), то есть пренатальное сочетанное воздействие Каприма с раствором этанола, видимо, способствовало уменьшению мышечной силы крысят.

Результаты регистрации массы тела потомства на протяжении более грех месяцев со дня рождения указывают на то, что вес крысят, внутриутробно подвергавшихся воздействию этанолом в сочетании с Капримом, достоверно не отличался от контроля.

Изучение двигательной активности крысят в тесте "открытое поле" показало, что добавление Каприма привело к увеличению количества встряхиваний (р<0,05) у животных по сравнению со 2-й группой. Обращает на себя внимание тот факт, что у животных 3-й группы по сравнению с крысами 1-й группы обнаружено увеличение количества посещенных внутренних (р<0,05) и наружных квадратов (р<0,05), а также увеличение суммарной горизонтальной (р<0,05) и общей двигательной (р<0,05) активности. .

В тесте "крестообразный приподнятый лабиринт" пренатальная алкоголизация в сочетании с Капримом приводила к увеличению времени пребывания на открытых лучах (р<0,05) и уменьшению количества стоек (р<0,05) по сравнению с потомством 2-й группы. При этом у крыс 3-й группы было увеличено время пребывания на открытых лучах (р<0,01) и количество светивший (р<0,05) по сравнению с контрольными животными. Таким образом, сочетанное воздействие Каприма с алкоголем в период беременности оказало существенное воздействие на уровень тревожности и появление так называемого "поведения риска" у потомства.

Навык целенаправленного поведения в тесте на обучение распознаванию с пищевым подкреплением в 3-й группе достигал показателя, регистрируемого у контрольных животных (рис.2). Процент сохранения и воспроизведения навыка целенаправленного поведения в У-образном лабиринте не различался во всех трех группах. То есть, добавление Каприма в процессе внутриутробной алкоголизации почти полностью предотвращало снижение способности крыс к обучению и не оказывало влияния на способность к сохранению и воспроизведению указанного навыка.

В условиях неизбегаемого плавания поведение животных 3-й группы, подвергавшихся воздействию алкоголем в сочетании с Капримом в процессе внутриутробного развития, характеризовалось увеличением на 41% латентного периода первого активного плавания (р<0,05) по сравнению с животными 2-й группы, иными словами Каприм предотвращал такой дефект поведения у пре-наталыю алкоголизированных животных, как склонность к развитию депрессивно-подобных состояний (рис.3).

Рис.2. Влияние Каприма на приобретение навыка к целенаправленному поведению в У-образном лабиринте крыс-самцов, пренатально подвергавшихся воздействию этиловым спиртом

1 л'

1*2 дЬи 4 5

—■— контроль - - • ■ - этанол — • этанол+Каприм

Примечание по сравнению с контролем * * - р < 0 01, по сравнению с этанолом - р<0 01

Рис.3. Поведение в условиях неизбегаемого плавания крыс-самцов, пренатально подвергавшихся воздействию этиловым спиртом

ЯП первого активного плавания Время пассивного плавания

□ контроль Иэтанол В этанол+Каприм

Примечание по сравнению с контролем * - р<0 05, по сравнению с этанолом +- р<0 05

Добровольное потребление 15% раствора этанола (г/кг) представлено в таблице 4. Животные 3-й группы во все сроки наблюдения потребляли достоверно меньше этанола, чем крысы 2-й группы.

Таблица 4

Влияние Каприма на добровольное потребление 15% (в/об) раствора этанола крысами-самцами, пренатально подвергавшихся воздействию этиловым спиртом

Дни наблюдения Доза этанола в г/кг М±8.В. (п)

1-я группа Вода (19) 2-я группа Этанол (17) 3-я группа Этанол+Каприи (20)

1-й день 0,53±0,51 1,26±1,13 • 1,35±1,79

2-й день 0,51±0,32 1,32±0,89 •*• 0,65±1,05 *

3-й день 0,40±0,26 1,49±1,06 *** 1,02±0,82

4-й день 0,33±0,20 2,09±1,40 *** 0,74±0,79 *

5-й день 0,79±1,13 2,10±1,88 * 0,79±0,80 4Ф

6-й день 0,79±0,82 1,79±1,37 * 0,93±1,24

7-й день 0,44±0,24 1,49±1,76 • 1,37±1,34 **

Суммарная доза 3,79±1,29 11,54±7,38 6,85±6,20 *

По сравнению с контролем: * - р<0.05, ** - р<0.01, *** - р<0.001; * - р<0.05, ** • р<0.01, *** -р<0.001.

Исследование толерантности крыс к этанолу показало следующее: у крыс 3-й группы длительность наркотического сна заняла промежуточное положение между продолжительностью наркотического сна у крыс контрольной и 2-й групп. Таким образом, Каприм способствует снижению продолжительности наркотического сна пренатально алкоголизированных животных (рис.4).

Рис.4. Влияние Каприма на продолжительность наркотического сна после в/б введения 25% р-ра этанола в дозе 3 г/кг у крыс-самцов, пренатально подвергавшихся воздействию этиловым спиртом

контроль этанол этанол+Каприм

Примечание по сравнению с контролем * - р<0 05

2.3. Экспериментальная коррекция эмбриотоксического действия этанола с помощью Гипоксена и экстракта гребней винограда.

Результаты, полученные при исследовании эмбриотоксического действия представлены в таблице № 5. Можно видеть, что пренатальная алкоголизация приводит к значительному увеличению числа мертвых плодов, уменьшению размеров плаценты, снижению массы и длины тела живых плодов, резкому увеличению постимплантационной гибели и общей эмбриональной смертности плодов, снижению их внутриутробной выживаемости, а также к увеличению числа геморрагии и появлению феномена гидроцефалии у плодов. В этом результаты проведенного исследования согласуются с данными, полученными другими авторами [Заблудовский А.Л ,1989; Коломейцева И.А.,1989; Mankes КК,1992].

Каприм и Гипоксен способствуют достоверному восстановлению массы эмбрионов, оказывают нормализующее влияние на параметры массы и размеров плаценты, предотвращают предимплантационную гибель плодов и полностью нормализуют показатели общей эмбриональной смертности и внутриутробной выживаемости по сравнению со 2-й группой. При этом Гипоксен оказывает бо

лее существенное влияние на уменьшение количества мертвых эмбрионов в помете, на нормализацию длины эмбрионов и предотвращение постимпланта-ционной гибели плодов по сравнению с Капримом.

Каприм и Гипоксен достоверно уменьшают способность алкоголя провоцировать развитие геморрагии у плодов.

Гипоксен, в отличие от Каприма полностью предотвращает развитие гидроцефалии.

Таблица 5

Влияние Гнпоксена н Каприма на показатели нарушения эмбрионального развития у крыс (популяция Вистяр), подвергавшихся

воздействию этиловым спиртом во время беременности, на 20-й день беременности

ШвЛ. (г)

Показатели Контроль Этанол Этанол + Каприм Этанол + Гипоксен

Масса тела на момент вскрытия, г 321*29 321*19 292*28 331*38

(12)' (Ю)' <Ю) ■ (Ю)*

Кол-во живых эмбрионов в помете 6,9*1,9 5,8*2,5 7,5*0.7 8,2*2,3

(12)' (Ю)' (Ю)' (ЮГ

Кол*во мертвых эмбрионов в помете 0,08*0,29 2,56*2,01 0,50*0,71 0,20*0,45 *

(12)' (Ю)' (10)' (ЮГ

Кол-во резорбций в помете 0,58*0,90 1,33*1,50 0,50*0,71 0,80*0,98

(12)' (Ю)' (Ю)' (Ю) •

Масса эмбриона, г 2,68*0,60 1,82*0,58 **• 2,79*1,37*" 2,46*0,93 ***

(84) (75) (82) (81)

Длина эмбриона, мм 33,75*3,92 28,24*5,07 *•* 31,78*9,04 * 34,00*4,36***

(84) (75) (82) (81)

Масса плаценты, г 0,52*0,09 0,45*0,08 "» 0,57*0,17 *** 0,50*0,10 **

(84) (75) (82) (81)

Диаметр 1 плаценты, мм 14,45*1,33 13,48*1,49 *»• 14,50*1,37 * 14,75*0,96 ***

(84) (75) (82) (81)

Диамегр2 плаценты, мм 12,08*1,18 11,13*1,12»«» 12,44*1,68 *** 12,13*1,06 ***

(84) (75) (82) (81)

Толщина плаценты, мм 4,87*0,63 3,95*0,69 "" 4,47*0,46 * * * 4,75*0,77 ***

(84) (75) (82) (81)

Предимплантацнокная гибель, % 28,57*23,43 35,07*21,40 16,67*23,57 30,54*23,43

(12)' (Ю)' (ЮГ (ЮГ

Постимплантациокная гибель, % 0,93*3,21 30,87*26,20 «»« 6,25*8,84 2,22*3,21 *

(12)" (Ю)' (Ю)' (Ю)'

Общая эмбриональная смертность, % 29,27*23,43 54,74*19,93 * 20,83*29,46 32,54*23,44

(12)' (Ю)' (Ю)' (Ю)'

Внутриутробная выживаемость, % 70,73*23,43 45,26*19,93 * 79,17*29,46 67.46*23,44

(12)' (Ю)' (ЮГ (Ю)'

Геморрагии, % 0,56*0,23 3,49*2,52 *»» 1,72*0,98 * 0,92*0,75 **

(84) (75) (82) (81)

Гидроцефалия, % 0,00*0,00 8,36*5,46 »»• 3,15*2,16 ** * 0,01*0,02 ***

(84)' С") (82) (81)

По сравнению с контролем: * - р<0.05, »» -р<0 01, •*• -р<0.001 по равнению с этанолом: * -р<0.05, " -р<0.01, *** -р<0.001.

Примечание: диаметры плаценты 1 и 2 - максимальный и минимальный диаметры, измеряемые в одной плоскости под углом 90°.1 - количество пометов в группе.

Таким образом, все исследованные препараты обладают выраженной биологической активностью, что проявляется в их способности модифицировать эм-бриотоксические эффекты этанола.

Наиболее выраженный положительный профилактический эффект оказывает Гипоксен, который практически полностью устраняет все проявления эмбрио-токсического действия алкоголя.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Полученные в настоящей работе результаты дают основание заключить, что экспериментальная модель АСП представляет собой чувствительный тест, позволяющий выявлять различия в токсическом эффекте разных спиртов и обнаруживать протекторное действие лекарственных препаратов и других биологически активных субстанций. Использование экспериментальной модели АСП в качестве инструмента для сравнительной оценки токсического действия спирта этилового синтетического ректификованного и спирта этилового пищевого ректификованного показало, что и тот и другой оказывают существенное влияние на процесс эмбрионального развития, на физическое развитие и поведение потомства.

В настоящем исследовании установлено, что алкоголь способствует значительному увеличению числа мертвых плодов, резкому увеличению постим-плантационной гибели и общей эмбриональной смертности плодов, снижению массы и длины тела живых плодов, увеличению числа геморрагии и появлению феномена гидроцефалии, а также провоцирует снижение массы тела новорожденных крысят, приводит к задержке их роста, особенно в первую неделю эмбрионального развития и на 7-12-ой неделе их жизни.

Пренаталыюе воздействие пищевым и синтетическим этиловым спиртом приводит к отставанию развития и изменению поведения потомства, что выражается в увеличении срока прорезывания глаз и покрытия шерстью, склонности к развитию депрессивно-подобных состояний и снижению устойчивости к не-избегаемому стрессу, повышении двигательной активности, наличии феномена «неофобии» и снижению способности крыс к обучению.

Особого внимания заслуживают данные о характере реагирования прена-тально алкоголизированного потомства на алкоголь, которые свидетельствуют о повышении толерантности к наркотическому действию этанола и появлении признаков предпочтительного потребления раствора алкоголя в условиях свободного выбора. Феномен предпочтительного отношения к алкоголю у животных, подвергавшихся алкоголизации в процессе пренаталыюго периода развития хорошо известен в экспериментальной наркологии и трактуется как проявление предрасположенности к развитию зависимости от алкоголя. Этот феномен со всей очевидностью проявился у потомства крыс от матерей, получавших на протяжении всего периода беременности раствор пищевого или синтетического этилового спирта. С биологической точки зрения врожденная предрасположенность к развитию алкогольной зависимости понимается как комплекс особенностей функционирования нейрохимических систем мозга, отвечающих

за регуляцию дофаминэргической сферы. Изучение биологических механизмов формирования зависимости от алкоголя на протяжении последних сорока лет убедительно доказало, что функциональные изменения обмена дофамина (ДА) в мезолимбической системе головного мозга являются нейрохимической основой зависимости от алкоголя. Возможно, функциональная недостаточность дофаминовой мезолимбической системы возникает вследствие нарушения нормальной синхронизированной дофаминэргической нейромедиации. И эти нарушения являются результатом токсического действия алкоголя на ДА содержащие нейрональные клетки.

В настоящей работе было показано, что при пренатальном воздействии спиртом этиловым синтетическим относительно более выражены такие нарушения развития и поведения как задержка в сроках покрытия шерстью, отставание в выработке безусловного рефлекса, чем при воздействии пищевым спиртом. В тоже время при пренатальной алкоголизации спиртом синтетическим наблюдалась более существенная прибавка массы тела самок-крыс в период беременности и увеличение показателя сохранения навыка к целенаправленному поведению.

Таким образом, спирт этиловый синтетический ректификованный (Этол медицинский) и спирт пищевой марки «Экстра» оказывают однотипное по проявлениям и выраженности фетотоксическое действие. Незначительные, обнаруженные в разных тестах на грани достоверности или на уровне тенденции, различия в токсическом действии синтетического и пищевого спирта разнонаправленны и не системны.

Что касается используемых в работе средств, предупреждающих токсические эффекты алкоголя, то положительный эффект от применения Гипоксена можно было прогнозировать заранее. Это связано с тем, что алкогольная интоксикация сопровождается развитием гипоксиподобного состояния [Кирющенков А.П.,1987], а препарат Гипоксен обладает антигипоксантным действием. Помимо этого Гипоксен обладает высокой антирадикальной активностью: он стимулирует разрушение продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ), защищая, таким образом, мембраны клеток от разрушительного воздействия свободных радикалов.

Согласно полученным данным, воздействие Гипоксеном в процессе внутриутробной алкоголизации приводило к нормализации веса новорожденных, улучшению выработки безусловного рефлекса, препятствовало развитию повышенного уровня тревожности и сопровождалось увеличением критерия обучаемости и показателя сохранности навыка при выработке УРДИ, а также снижением склонности к депрессивно-подобным состояниям, уменьшением уровня потребления раствора этанола в условиях свободного выбора и нормализацией устойчивости к наркотическому действию алкоголя. Таким образом, Гипоксен, вводимый беременным самкам крыс одновременно с раствором этанола, полностью устранял или в значительной мере нивелировал вызываемые алкоголем аномалии поведения и реагирования на алкоголь потомства этих животных.

В отличие от Гипоксена, экстракт гребней винограда достаточно подробно исследовался ранее в экспериментах с острой и хронической алкогольной ин-

токсикацией [Анохина И.П.,2000]. Результаты настоящего исследования полностью согласуются с данными, полученными другими авторами, и свидетельствуют о том, что внесение в раствор этилового спирта экстракта гребней винограда ослабляет эффекты пренатального воздействия алкоголя.

Экстракт гребней винограда (Каприм) эффективно ослабляет или предупреждает развитие проявлений эмбрио- и фетотоксического действия алкоголя. Среди положительных эффектов экстракта из гребней винограда следует выделить его способность ослаблять влияние алкоголя на способность крысят к обучению, устранять их склонность к депрессивно-подобному поведению и эффективно препятствовать формированию индуцированного пренатальной алкоголизацией предпочтительного потребления раствора этанола в условиях свободного выбора у пренатально алкоголизированных крыс. Каприм не провоцировал гибели крысят на протяжении первых тридцати дней жизни и не оказывал негативного влияния на динамику массы тела потомства. Каприм устранял и негативное влияние этанола на физическую выносливость и/или координацию движений пренатально алкоголизированных крыс.

В то же время Каприм резко стимулировал прирост массы тела беременных крыс в процессе алкоголизации. Обращает внимание тот факт, что этот препарат не предотвращал повышения активности психомоторной системы и появления так называемого «поведения риска», что можно трактовать, как уменьшение тревожности и "страха новизны" (неофобия).

Следует отметить, что Каприм эффективно препятствовал реализации эм-бриотоксического действия этилового спирта: геморрагии, кровотечений, резорбций плодов, гибели среди животных этой группы и явлений мертворож-денности отмечено не было.

Таким образом, результаты проведенного исследования позволяют заключить, что Гипоксен и Каприм являются достаточно эффективными средствами, препятствующими проявлению эмбрио- и фетотоксического действия алкоголя.

ВЫВОДЫ.

1. Пренатальное воздействие пищевым и синтетическим этиловым спиртом оказывает сходное по проявлениям и выраженности фетотоксическое действие (снижение массы тела новорожденных, задержка прироста массы тела потомства, отставание потомства в развитии, снижение способности к обучению и появление склонности к развитию депрессивно-подобных состояний).

2. Пренатальная алкоголизация пищевым и синтетическим этиловым спиртом вызывает одинаковое по выраженности изменение реакции потомства на алкоголь (снижение чувствительности к наркотическому действию этанола и увеличение размеров добровольного потребления алкоголя).

3. Лекарственное средство «Гипоксен», вводимое в сочетании с этанолом в процессе внутриутробного развития, ослабляет или устраняет проявления фето-токсического действия алкоголя и нормализует реакции потомства на алкоголь.

4. Экстракт гребней винограда обладает сходной, но менее выраженной (по сравнению с Гипоксеном), способностью ослаблять или устранять проявления

фетотоксического действия этанола, а также нормализовать реакции потомства на алкоголь.

5. Лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда «Ка-прим» ослабляют или полностью устраняют проявления эмбриотоксического действия этанола.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Львова Ю.А., Нужный В.П. Профилактика алкогольных фетопатий с помощью натриевой соли [поли-(2,5-дигидроксифенилен)]-4-тиосульфокислоты // Реф. сб. ВИНИТИ: «Новости науки и техники». - Сер. «Медицина». - Вып. «Алкогольная болезнь». - М. - 2001. - №. - С. 1-7

2. Львова Ю.А., Суркова Л.А., Демешина И.В., Нужный В.П. Алкогольный синдром плода: современное состояние проблемы (обзор литературы) // Реф. сб. ВИНИТИ: «Новости науки и техники». - Сер. «Медицина». - Вып. «Алкогольная болезнь». - М. - 2002. - № 9-10. - С. 1-10

3. Нужный В.П., Львова Ю.А., Суркова Л.А., Забирова И.Г., Демешина И.В., Листвина В.П., Самойлик Л.В. Исследование токсичности спирта этилового синтетического ректификованного // Токсикол. вестник. - 2002. - № 5. - С. 13-22

4. Нужный В.П., Львова Ю.А., Листвина В.П., Демешина И.В., Забирова И.Г., Самойлик Л.В. Сравнительное экспериментальное исследование эффективности двух экстрактов гребней винограда в качестве средства профилактики алкогольной фетопатий // Реф. сб. ВИНИТИ: «Новости науки и техники». -Сер. «Медицина». - Вып. «Алкогольная болезнь». - М. - 2002. - № 1. - С. 3-10

Подписано в печать 18.05.2004. Формат А5. Тираж 80 экз. Заказ 18-01/2004. Полиграфические работы -Центр полиграфических услуг «Радуга» ПБОЮЛ «Гайнуллин» Лицензия: серия ИД № 06137 от 24.04.2000 г. Москва, Малый Могильцевский пер., 3 Тел.: 241-36-06

Hé 1 О 6 6 А

Актуальность темы диссертации

Негативное влияние алкоголя на потомство замечено давно [8], однако, углубленное изучение этого воздействия началось лишь в последние 25-30 лет, когда было отмечено нарастание алкоголизма у женщин во всех странах мира [48, 162]. Первые сообщения об алкогольном синдроме плода (АСП) появились во Франции в 1968 году [146], а в 1973 году американские исследователи подтвердили результаты наблюдений французских коллег [138].

Эпидемиологические исследования последних лет свидетельствуют о том, что алкогольный синдром плода, как нозологическая единица пренатальной этиологии, имеет довольно широкое распространение и обнаруживается в диапазоне от 1 на 300 новорожденных до 1 на 1000 новорожденных от женщин, потреблявших алкоголь во время беременности [100]. В развернутом виде АСП включает специфические морфологические черепно-лицевые изменения, пре- и постнатальное отставание роста, пороки развития внутренних органов и скелета и, наконец, психическую неполноценность [152, 178]. Правда, все признаки АСП одновременно встречаются относительно редко.

Причины возникновения АСП связывают, прежде всего, с токсическими эффектами алкоголя. В экспериментальных исследованиях было обнаружено, что пренатальная алкоголизация животных увеличивает смертность эмбрионов и плодов, число мертворожденных и смертность в течение первого месяца жизни [88]. Токсические эффекты алкоголя могут быть усилены за счет различного рода примесей, содержащихся в алкогольных напитках [51, 52, 53, 57].

Середина 1990-х годов ознаменовалась увеличением смертности от отравлений алкоголем, а также ростом числа алкогользависимых соматических заболеваний [95, 149]. Увеличение числа смертельных отравлений алкоголем по времени совпало с увеличением случаев обнаружения синтетического спирта в алкогольных напитках, реализуемых населению [48]. В результате возникли опасения относительно токсических свойств синтетического спирта, которые привели к тому, что синтетический спирт был внесен в перечень ядовитых и сльно- У действующих веществ.

Способы предупреждения АСП ограничиваются проведением профилактических бесед с многопьющими и больными алкоголизмом женщинами детородного возраста. Попытки использования с этой целью некоторых лекарственных средств, в частности ноотропов, успехом не увенчались [28, 41, 90, 96]. Поиск способов и средств, препятствующих реализации эмбрио- и фетотокси-ческого действия алкоголя представляется исключительно важным как в теоретическом, так и в практическом отношении. Потенциально к таким средствам могут быть отнесены лекарственные препараты и иные средства, обладающие антиоксидантным и антигипоксантным действием, в частности такие как новое лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда под названием «Каприм».

Цель и задачи исследования

Цель настоящего исследования заключалась в сравнительной оценке фето-токсического действия спирта этилового синтетического ректификованного и спирта этилового пищевого, а также в изыскании способов коррекции эмбрио-и фетотоксического действия алкоголя.

В ходе исследования решались следующие задачи:

1. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на физическое развитие и поведение потомства.

2. Сравнительное изучение действия пренатальной алкоголизации крыс спиртом этиловым синтетическим ректификованным и спиртом этиловым пищевым ректификованным на чувствительность к наркотическому действию этанола и уровень добровольного потребления раствора этилового спирта у потомства.

3. Оценить способность лекарственного препарата «Гипоксен» корректировать развитие нарушений роста, развития и поведения у крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.

4. Изучить способность экстракта гребней винограда, препятствовать развитию нарушений роста, развития и поведения потомства крыс, подвергавшихся воздействию алкоголем в процессе внутриутробного развития.

5. Изучить способности лекарственного препарата «Гипоксен» и экстракта гребней винограда корректировать эмбриотоксическое действие алкоголя.

Научная новизна полученных результатов

Подтверждено, что синтетический спирт и пищевой спирт при хроническом воздействии оказывают одинаковое по проявлениям и выраженности действие на плод.

Впервые на экспериментальной модели алкогольной фетопатии обнаружена способность нового лекарственного средства антигипоксантного типа действия под названием «Гипоксен» для предотвращения нарушений развития и поведения, а также формированию алкогольной мотивации и изменению чувствительности к наркотическому действию этанола у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.

Впервые показано, что экстракт гребней винограда эффективно препятствует реализации проявлений фетотоксического действия алкоголя на уровне формирования алкогольной мотивации, нарушений развития и поведения у потомства, пренатально подвергавшегося воздействию алкоголем.

Впервые установлено, что лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда препятствуют проявлениям эмбриотоксического действия алкоголя.

Практическая значимость полученных результатов

Разработан комплекс методик, позволяющих без использования дорогостоящего оборудования дать заключение о потенциальной способности того или иного спирта вызывать у животных, подвергшихся пренатальной алкоголизации, патологию физического развития и поведения, предрасположенность к формированию алкогольной зависимости.

Результаты исследований позволили сформулировать несколько важных в практическом плане положений.

Первое - спирт этиловый синтетический ректификованный по параметрам хронической токсичности не отличается от пищевого этилового спирта и потому алкогольные напитки, изготовленные на его основе, не могут служить причиной повышенной смертности от отравлений алкоголем. Внесение этого спирта в перечень ядовитых веществ является необоснованным.

Второе - экстракт гребней винограда и лекарственное средство «Гипоксен» могут служить в качестве эффективных средств, препятствующих нарушениям развития и поведения у потомства, подвергавшегося длительной пренатальной алкоголизации.

Личный вклад соискателя.

5. ВЫВОДЫ.

1. Пренатальное воздействие пищевым и синтетическим этиловым спиртом оказывает сходное по проявлениям и выраженности фетотоксическое действие (снижение массы тела новорожденных, задержка прироста массы тела потомства, отставание потомства в развитии, снижение способности к обучению и появление склонности к развитию депрессивно-подобных состояний).

2. Пренатальная алкоголизация пищевым и синтетическим этиловым спиртом вызывает одинаковое по выраженности изменение реакции потомства на алкоголь (снижение чувствительности к наркотическому действию этанола и увеличение размеров добровольного потребления алкоголя).

3. Лекарственное средство «Гипоксен», вводимое в сочетании с этанолом в процессе внутриутробного развития, ослабляет или устраняет проявления фето-токсического действия алкоголя и нормализует реакции потомства на алкоголь.

4. Экстракт гребней винограда обладает сходной, но менее выраженной (по сравнению с Гипоксеном), способностью ослаблять или устранять проявления фетотоксического действия этанола, а также нормализовать реакции потомства на алкоголь.

5. Лекарственное средство «Гипоксен» и экстракт гребней винограда «Ка-прим» ослабляют или полностью устраняют проявления эмбриотоксического действия этанола.