Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакотерапевтическая эффективность "Нефрофита" при экспериментальных лекарственных повреждениях почек

На правах рукописи

АБГАЛДАЕВА ЕЛЕНА АЛЕКСЕЕВНА

ФАРМАКОТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ «НЕФРОФИТА» ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПОВРЕЖДЕНИЯХ ПОЧЕК

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Улан - Удэ 2005

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской Академии наук

Научный руководитель: доктор биологических наук

Ажунова Татьяна Александровна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Цыренжапова Октябрина Даши-Дондобовна

кандидат медицинских наук Кириллова Елена Сергеевна

Ведущая организация: Иркутский государственный институт

усовершенствования врачей Министерства здравоохранения и социального развития РФ

Защита состоится 2 февраля 2005 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета К 003.028.01. в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения РАН по адресу: г. Улан - Удэ, ул. Сахьяновой, д. 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра Сибирского отделения РАН

Автореферат разослан января 2005 г.

Ученный секретарь

диссертационного совета —-

кандидат биологических наук у) 1( 1 - В.Б. Хобракова

Актуальность темы. В настоящее время частота развития нежелательных реакций при назначении ряда препаратов достигает 17 % у госпитализированных больных и 4 - 6 % случаев у пациентов, находящихся на амбулаторном лечении (Цой, 1988; Pirmohamed et al., 1998; Lazarou et al., 1998). При лекарственной патологии особенно часто страдают почки. В частности, лекарственные нефропатии составляют 10 - 15 % в общей структуре почечных заболеваний (Зак и соавт., 1992; Рябов, 2000; Тареева, 2000; Glassoer, 1987; Landanis, 1987). Наиболее часто лекарственные поражения почек вызывают антибактериальные препараты, среди которых наиболее нефротоксичными считаются аминогликозидные антибиотики (Серов и соавт., 1985; Kleinknecht et al., 1986). Так, у 5 - 25 % пациентов при лечении аминогликозидными препаратами возникают нежелательные реакции, а в 50 % случаев при приеме аминогликозидов развивается острая почечная недостаточность (ОПН) (Лукьянова, 2002; Репин, 2000; Рябов, 1982; Тареева, 1987; Hoitsma et al., 1991; Karchmer, 2000). Нефротоксиче-ские осложнения антибактериальной терапии при лечении туберкулоста-тиками в процессе комбинированной химиотерапии возникают в 78 % случаев у больных с сопутствующими заболеваниями почек, а в группе больных без патологии мочевыделительной системы - в 53 % случаев (Черник, Моторина, 1982). Второй по частоте группой лекарственных препаратов, вызывающих медикаментозные нефропатаи, являются нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) (Астахова, 2000; Лопатин 1992; Синяченко, Дядык, 1984; Hulberg, 1982; Kantor, 1984). НПВП вызывают нефропатии у 5% больных, которым были назначены указанные препараты, а у пациентов с факторами риска нефротоксический синдром отмечается в 20 % случаях (Bush, 1999). С увеличением частоты использования рентгеноконтрастных средств (РКС) все большее значение приобретает возможность развития нефропатии, индуцированной лекарственными препаратами указанной группы (Свиридов и соавт., 2001). Поражение почек РКС остается одним из основных видов ятрогенной почечной недостаточности, составляющей около 12 % госпитальной ОПН (Дзогоева и соавт., 1996).

Отрицательные лекарственные воздействия многообразны, однако, можно выявить наиболее частый путь повреждения, знание которого позволяет проводить целенаправленную профилактику и лечение почечных медикаментозных повреждений. Некоторые авторы предполагают, что патогенез токсического действия медикаментозных средств на почки связан с активацией перекисного окисления липидов (ПОЛ) (Гаврюшова, Сотникова, 1985; Навашин, Фомина, 1982). Более того, в настоящее время установлено, что метаболизм ряда лекарственных препаратов сопровождается образованием свободных радикалов, которые инициируют ПОЛ био-

РОС. »

, IÎ ИОНАДЬКАЯ 13

Б у. 1- '

:.чл

C.ilcicpöjiP»

мембран, что также способствует повышению токсичности медикаментозных средств (Моргунова, 2000; Сейсембеков, 1996; 2000; Тиунов, 1995). Вопрос о роли процессов липопероксидации и антиоксидантной защиты в патогенетических механизмах поражений почек в настоящее время остается весьма актуальным. С этих позиций новые подходы к изучению патогенеза развития лекарственных нефропатий и методов их лечения и профилактики целесообразно рассматривать в связи с возможностью регулирования процессов ПОЛ и повышения активности антиоксидантной защиты (АОЗ) организма, а также способов их коррекции.

В связи с этим, актуальной проблемой является изучение средств природного происхождения, способных оказывать нефропротекторное действие при нефропатиях лекарственного генеза, в связи с тем, что растительные препараты, как правило, нетоксичны, не оказывают отрицательного побочного действия, что, особенно важно при медикаментозных нефропатиях. Полученное растительное нефропротекторное средство «Нефрофит» представляет собой сухой легкорастворимый экстракт, полученный из листьев ортосифона тычиночного, травы горца птичьего, листьев толокнянки обыкновенной и травы десмодиума канадского.

Цель исследования. Целью настоящей работы явилась оценка фарма-котерапевтической эффективности комплексного растительного средства «Нефрофит» при экспериментальных лекарственных нефропатиях.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Оценить нефротоксические свойства антибиотиков аминоглико-зидного ряда, противотуберкулезных препаратов, НПВП и рентгенокон-трастных средств и выявить основные патогенетические механизмы развития медикаментозных нефропатий.

2. Определить спектр фармакологической активности «Нефрофита», обеспечивающий его нефрозащитное действие.

3. Оценить фармакотерапевтическую эффективность «Нефрофита» при медикаментозных поражениях почек.

4. Выявить особенности механизма нефропротекторного действия «Нефрофита» при лекарственных нефропатиях различной этиологии.

Научная новизна. В работе исследованы основные патогенетические особенности лекарственных повреждений почек, дано обоснование целесообразности применения растительного средства «Нефрофит» в качестве средства, предотвращающего нефротоксические осложнения медикаментозной терапии. Установлено, что активация процессов ПОЛ и изменение активности ферментов антиоксидантной защиты при нефротоксическом

действии лекарственных препаратов служат основой для развития медикаментозного поражения почек Показано, что «Нефрофит» обладает ги-поазотемической, противовоспалительной, мембраностабилизирующей, антиоксидантной, иммуномодулирующей активностью. Установлено, что «Нефрофит» обладает выраженной фармакотерапевтической эффективностью при нефропатиях лекарственного генеза и способствует нормализации морфофункционального состояния почек. Показано, что одним из ведущих молекулярно-клеточных механизмов нефропротекторного действия «Нефрофита» при медикаментозных повреждениях почек является ингибирование процессов перекисного окисления липидов и повышение активности ферментов антиоксидантной системы.

Практическое значение. Материалы исследований включены в отчет по доклиническому изучению «Нефрофита», рекомендованного в качестве биологически активной добавки для лечения и профилактики заболеваний почек различной этиологии. Полученные данные о высокой фармакотерапевтической эффективности «Нефрофита» позволяют рекомендовать его в комплексной терапии и профилактике поражений почек, возникающих при осложнениях медикаментозной терапии.

Апробация материалов диссертации. Основные положения диссертации доложены и обсуждены на:

• научной конференции Восточно-Сибирского технологического университета «Химия и биологически активные вещества» (Улан-Удэ, 2002);

• юбилейной конференции РОО «Фитотерапевтическое общество» (Москва, 2002);

• X Российском национальном конгрессе "Человек и лекарство" (Москва, 2003);

• научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» (Улан-Удэ, 2003);

• Байкальских чтениях - Разгрузочно-диетическая терапия и традиционная медицина (Санкт-Петербург, 2003);

• III межрегиональной конференции «Медицина завтрашнего дня» (Чита, 2004);

• научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 9 работ.

Работа выполнена в Отделе биологически активных веществ ИОЭБ СО РАН в соответствии с программой «Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов»; № гос. регистрации 01.9.400031.83, утвержденной 06.12.95 г. Президиумом СО РАН.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Аминогликозидные антибиотики, нестероидные противовоспалительные препараты, туберкулостатики, рентгеноконтрастные средства вызывают активацию свободнорадикального окисления липидов, снижают активность ферментов эндогенной антиокислительной защиты с последующим развитием тубулоинтерстициального поражения почек.

2. «Нефрофит» обладает гипоазотемическим, противовоспалительным, мембраностабилизирующим, антиоксидантным, иммуномодулирую-щим действием.

3. Курсовое введение «Нефрофита» сопровождается выраженным фармакотерапевтическим эффектом при поражении почек аминогликозид-ными антибиотиками, нестероидными противовоспалительными средствами, противотуберкулезными препаратами и реIгтгенеконтрастными веществами.

4. Одним из основных молекулярно-клеточных механизмов нефро-протекторного действия «Нефрофита» является его способность ингиби-ровать процессы свободнорадикального окисления липидов и повышать активность ферментов антиоксидантной защиты организма, обусловленная высоким содержанием веществ фенольной природы.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, экспериментальной части, заключения, выводов и указателя литературы. Материал изложен на 166 страницах машинописного текста, включая 31 таблицу, 4 графика и 19 микрофотографий. Указатель литературы содержит 353 источника, из которых 125 работ на иностранных языках.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты выполнены на 630 белых крысах линии \Vistar обоего пола с исходной массой 190 - 230 г; 120 мышах линии СВА и Р1 (СВА х С57 В 1/6) с исходной массой 18 - 20 г. Кроме того, были использованы: 1 % суспензия эритроцитов из свежей донорской крови в физиологическом растворе (1:10); эритроциты барана в качестве антигена; культура моно-нуклеарных лейкоцитов, содержащая 80 % лимфоцитов и 20 % моноцитов (Воуит, 1968); суспензия липосом из яичного желтка (Лопухин и соавт., 1983).

В работе использовался сухой экстракт «Нефрофита», состоящий из экстрактов толокнянки обыкновенной - 2 части, ортосифона тычиночного - 4 части, горца птичьего - 3,5 части, десмодиума канадского - 0,5 части. В качестве препарата сравнения использовали «Канефрон».^^^§5Й®йШ экстракт «Нефрофит» лабораторные животные получали на фоне введения потенциально нефротоксичных лекарственных средств в форме экстракта

в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг массы 1 раз в сутки, внутрижелудочно. Продолжительность введения «Нефрофита» варьировала в зависимости от цели эксперимента. Препарат сравнения «Канефрон» вводили в объеме 1,5 мл/кг массы 1 раз в сутки, внутрижелудочно, по аналогичной схеме. Кроме того, в качестве препаратов сравнения использовали- 10 % масляный раствор витамина Е, который вводили на фоне нефро-токсичных лекарственных средств 1 раз в день внутрижелудочно в дозе 10 мг/кг в течение 2-х дней; «Калефлон» вводили белым крысам в дозе 150 мг/кг внутрижелудочно 1 раз в сутки (Машковский, 2004). Животные контрольной группы получали очищенную воду в эквиобъемных количествах в аналогичных условиях.

Поражение почек антибиотиками группы аминогликозидов вызывали внутримышечным введением канамицина в дозе 300 мг/кг массы 1 раз в сутки в течение 14 дней. Для оценки нефротоксического действия нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) белым крысам в течение 8 дней вводили индометацин, бруфен и диклофенак в следующих дозах: индометацин и бруфен - 10 мг/кг и 6 мг/кг соответственно внутрижелудочно 1 раз в сутки, диклофенак - 10 мг/кг 1 раз в сутки внутримышечно. Также лекарственную нефропатию индуцировали внутрижелудоч-ным введением бруфена в дозе 6 мг/кг 1 раз в сутки в течение 14 дней (Руководство..., 2001). Туберкулостатическое повреждение почек вызывали по методу Н.П.Скакуна, О.Е.Табачука (1992): лабораторным животным внутрижелудочно с 2-х часовым интервалом вводили изониазид (50 мг/кг), рифамиицин (50 мг/кг), пиразинамид (1,5 мг/кг) 1 раз в сутки в течение 14 дней. Для оценки нефротоксичности рентгеноконтрастных средств лабораторным животным под тиопенталовым наркозом (40 мг/кг, внутрибрю-шинно) в яремную вену вводили 90 % раствор урографина в объеме 10 мл/кг, однократно (Vari и соавт., 1988).

С целью оценки функционального состояния почек определяли: интенсивность диуреза (Берхин, Иванов, 1972); концентрацию катионов натрия и калия в моче - методом пламенной фотометрии на приборе "Flapho-4"; концентрацию мочевины и креатинина в сыворотке крови и моче с использованием наборов реактивов «Соппау» (Польша); содержание белка в моче (Меньшиков и соавт., 1987); скорость клубочковой фильтрации (Ка-питаненко, Дочкин, 1985). Мембраностабшшзирующую активность «Нефрофита» оценивали по степени гемолиза эритроцитов (Ковалев, и соавт., 1986). Антиоксидантные свойства «Нефрофита» оценивали по: скорости генерации супероксидного анион-радикала (02_) (Nichikimi и соавт., 1972); концентрации диеновых конъюгатов в сыворотке крови (Гаврилов, Миш-корудная, 1983); концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови (Osakava, Matshushita, 1980) и гомогенате почек (Osakava, Matshushita,

1980); антиокислительную активность фитоэкстракта определяли по активности каталазы в сыворотке крови (Королюк и соавт., 1988) и суперок-сиддисмутазы в эритроцитах крови (Чевари и соавт., 1985). Определение уровня Ре2+ - индуцированной хемилюминесценции проводили по общепринятому методу (Клебанов и соавт., 1988; Сергеев и соавт., 1991). Для оценки противовоспалительной активности «Нефрофита» определяли его влияние на выраженность экссудации при остром асептическом воспалении (Стрельников, 1960), на образование фиброзно-грануляционной ткани по методу Ф. Тринус и соавт. (1975), на альтерацию тканей по методу И. А. Ойвин, С.Л. Шетель (1961). Влияние фитосредства на сосудистую проницаемость определяли методом «меченых» сосудов (Горизонтова и соавт., 1975). Иммуномодулирующее действие растительного экстракта «Нефро-фит» изучали по его влиянию на состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета и фагоцитарную активность перитонеальных макрофагов (Методические .., 1992). Функциональное состояние печени оценивали по активности аминотрансфераз, концентрации общего билирубина, активности щелочной фосфатазы и тимоловой пробы в сыворотке крови. Исследования проводили на биохимическом анализаторе «Ьша» с использованием диагностических наборов реактивов фирмы «Согтау» (Польша). Для патоморфологических исследований почки животных фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина и фиксаторе Буэна (Микроскопическая техника..., 2001). Депарафинированные гистологические срезы окрашивали гематоксилин-эозином (Киселева и соавт., 1983). Для осуществления морфологических исследований, морфометрии и микрофотографирования использовали микроскоп со встроенной видеокамерой «Мо^с 1т-а§ез-2000» (Германия).

Полученные данные статистически обработаны общепринятыми методами с использованием ЬГ- критерия Уилкоксона-Манна-Уитни (Сергиен-ко, Бондарева, 2001). Различие считали достоверным при вероятности 95 % (р<0,05).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

При исследовании влияния «Нефрофита» на функциональное состояние почек белых крыс было установлено, что при его однократном введении в экспериментально-терапевтической дозе 150 мг/кг скорость диуреза крыс повышается на 42 % по сравнению с данными у животных контрольной группы. Наряду с этим, при введении «Нефрофита» отмечается снижение концентрации креатинина в сыворотке крови на 18 %, а также повышение скорости клубочковой фильтрации и минутного диуреза на 90 и 42 % соответственно по сравнению с аналогичными показателями животных контрольной группы.

При изучении противовоспалительной активности «Нефрофита» установлено его антиэкссудативное действие, которое сопровождается угнетением формалинового отека на 15 %.' При исследовании влияния «Нефрофита» на альтеративную фазу воспаления показано, что «Нефрофит» уменьшает степень альтерации тканей у белых крыс на 41 %.

При оценке антиокислительного действия «Нефрофита» установлено, что на фоне однократного введения «Нефрофита» увеличивается активность ферментов АОЗ я крови белых крыс: супероксиддисмутазы (СОД) -на 14 %, каталазьт - в 4 раза, по сравнению с показателями у контрольных животных. Кроме того, введение «Нефрофита» в инкубационную среду оказывает существенное влияние на скорость восстановления нитросинего тетразолия, повышая скорость перехвата 02" на 90 %.

При изучении влияния «Нефрофита» на кинетику Ре2+ - индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) установлено, что фитоэкстракт оказывает существенное ингибирующие влияние на кинетику ПОЛ в суспензии ли-посом яичного желтка, о чем свидетельствовало снижение амплитуды «быстрой» вспышки, увеличение продолжительности латентного периода, а также угнетение скорости ХЛ.

При исследовании мембраностабилизирующей активности «Нефрофита» установлено, что он ослабляет перекисный гемолиз эритроцитов на 70 %, что свидетельствует о выраженном мембраностабилизирующем действии указанного средства.

Установлено, что «Нефрофит» обладает иммуномодулирующим действием, в наибольшей степени оказывая благоприятное влияние на клеточное звено иммунитета и в меньшей степени, стимулируя фагоцитарное звено иммунного ответа. В частности, на фоне введения «Нефрофита» у животных, подвергшихся иммунодепрессивному действию азатиоприна, наблюдается достоверное увеличение индекса реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) в 2,1 раза; увеличение количества антите-лобразующих клеток (АОК) как в абсолютных значениях, так и при расчете на 106 спленоцитов - в 1,5 и 1,2 раза соответственно; повышение активности фагоцитоза на 40 %, а интенсивности - в 2 раза по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольных групп.

Как следует из таблицы 1, при введении канамицина на 3 сутки у лабораторных животных развивается синдром умеренной азотемии. Наряду с этим, назначение канамицина сопровождается индукцией ПОЛ и нарушением активности ферментов АОЗ (повышением каталитической активности крови, на фоне снижения активности СОД). Установлено, что курсовое введение «Нефрофита» оказывает умеренное нефрозащитное и выраженное антиоксидантное действие. Так, уровень накопления ДК и МДА в крови и гомогенате почек животных снижается соответственно на 40; 33 и 34

% по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Одновременно с этим отмечается повышение каталитической активности сыворотки крови белых крыс на 21 % по сравнению с контролем. Вместе с тем выявлено, что витамин Е на фоне введения канамицина оказывает гипоа-зотемическое и антиоксидантное действие и практически не влияет на активность ферментов АОЗ в сыворотке крови.

Таблица 1

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние почек, динамику накопления ПОЛ и активность ферментов АОЗ при канамициновой нефропатии (3 сутки исследования)

Показатели Группы животных

Интактная (п = 10) Контрольная (канамицин) (п= 10) Опытная 1 (канамицин + «Нефрофит») (п=10) Опытная 2 (канамицин +■ Витамин Е) (п = 10)

Креатинин, мкмоль/л 57,01±3,03 63,28±3,79 59,19±3,07 58,76±0,62

Мочевина, ммоль/л 5,44±0,46 6,96±0,61 6,08±0,49 4,87±0,35

ДК, усл.ед. 5,81 ±0,67 14,52±1,69* 8,74±8,43** 8,43±1,37

МДА, мкмоль/мл мин 5.26±0,33 8,79±0,81* 5,91±0,73** 5,45±0,64

МДА, ммоль/г ткани почки 2,40±0,15 4,63±0,51* 3,08+0,29** 2,94±0,27

Каталаза, мкат/л 8,82±0,69 10,03±0,61 12,12±0,73** 10,45±1,58

СОД в эритроцитах, мкмоль/л 19,24±1,37 17.534:1,68 19,02±1,75 17,68±1,93

Примечание: * - здесь и далее разница достоверна по сравнению с показателями у животных интактной группы, ** - разница достоверна по сравнению с показателями у животных контрольной группы при р<0,05.

Как следует из таблицы 2, при длительном курсовом введении канамицина (15 суток) у лабораторных животных развивается острая почечная недостаточность (ОПН), сопровождающаяся синдромами гиперазотемии, протеинурии, олигурии и нарушениями электролитного обмена. Нарастание тяжести функциональных расстройств зависит от длительности введения антибиотика. Развитие канамициновой нефропатии сопровождается индукцией процессов свободнорадикального окисления (СРО) липйдов и снижением активности эндогенной АОЗ организма. Следует отметить, что активация ПОЛ и снижение активности ферментов АОЗ предвосхищает

развитие нарушений функционального состояния почек. Так, на 3 сутки эксперимента у лабораторных животных, получавших канамицин, отмечается выраженный оксидативный стресс, тогда как изменения со стороны функционального состояния почек незначительны.

Выявлено, что курсовое введение «Нефрофита» сопровождается улучшением азотовыделительной функции почек, на что указывает снижение уровня креатинина и мочевины в сыворотке крови животных опытных групп на 8 сутки на 21 и 32 % соответственно; на 15 сутки - на 42 и 47 % соответственно по сравнению с контролем. Также, на фоне введения «Нефрофита» повышается экскреторная и диуретическая функция почек, увеличивается выделение электролитов с мочой. Так, на 8 и 15 сутки опыта экскреция белка с мочой у животных опытных групп уменьшается на 68 % и в 3,2 раза соответственно; СКФ возрастает на 52 и 64 %; объем мочи увеличивается на 32 и 55 % соответственно; выделение катионов калия и натрия с мочой увеличивается в 1,9 и 3,2 раза соответственно по сравнению с аналогичными данными у контрольных животных. Наряду с этим, введение «Нефрофита» сопровождается достоверным снижением скорости накопления продуктов ПОЛ в крови и почках белых крыс. Так, у животных, получавших «Нефрофит» через 8 и 15 суток отмечается снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 33 и 36 % соответственно; снижение концентрации МДА в крови и гомогенате почек на 26 и 40 % и - на 28 и 41 % соответственно по сравнению с показателями контрольной группы. Также, при введении «Нефрофита» повышается активность антиоксидант-ной защиты, о чем свидетельствуют увеличение уровней активности ката-лазы и СОД на 8 и 15 сутки эксперимента - на 23 и 29 % и 54 и 42 % соответственно по сравнению с контролем.

Таблица 2

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние почек, динамику накопления ПОЛ и активность ферментов АОЗ при канамициновой нефропатии

Показатели Группы животных

Интактная (п=10) Контрольная (канамицин) (п=10) Опытная 1 (канамицин + «Нефрофит») (п=10) Опытная 2 (канамицин + «Канефрон») (п=10)

1 2 3 4 5

8 сутки

Креатинин, мкмоль/мл 54,01±5,12 87,54±2,03* 69,50±3,44** 84,00±4,19

Мочевина, ммоль/мл 5,23±0,28 9,13±0,92* 6,24±0,81** 6,75±0,94

1 2 3 4 5

Белок в моче, г/л 1,02±0,52 3,49±0,43* 1,12±0,17** 1,83±0,17

СКФ,мкл/мин 84,97±7,31 45,34±3,72* 68,91±4,11** 51,79±4,35

Объем мочи 1,41±0,12 1,08±0,06 1,43±0,05** 1,39±0,06

за 2 часа, мл/100 г.

ДК, усл.ед. 5,93±0,48 12,69±1,34* 8,54±0,81** 10,10±0,95

МДА, мкмоль/мл 4,20±0,21 6,05±0,22* 4,47±0,19** 5,38±0,27

мин

МДА, моль/г 2,40±0,15 5,74±0,29* 4,11±0,26** 4,93±0,42

ткани почки

Каталаза, 8,34±0,49 5,82±0,57* 7,20±0,48 6,08±0,54

мкат/л

СОД в эрит- 27,01±1,57 19,31±1,52* 24,93±1,31** 17,88±1,64

роцитах, мкмоль/л

15 сутки

Креатинин, 54,01±5,12 304,76±24,51* 176,38±16,99** 262,09±31,01

мкмоль/мл

Мочевина, ммоль/мл 5,23±0,28 23,18±2,06* 12,27±1,08** 20,39±1,72

Белок в моче, 1,02±0,52 4,59±3,85* 1,42±0,08** 4,08±3,20

г/л

СКФ,мкл/мин 84,97±7,31 13,92=1-1,49* 22,96±3,78** 16,84±1,67

Объем мочи 1,41±0,12 0,88±0,07* 1,36±0,09** 1,31±0,69

за 2 часа, мл/100 г.

К+ в моче, 2,93±0,17 1,35±0,14* 2,57±0,20** 2,19±0,17

мг/мл

№+в моче, 1,01±0,08 0,24±0,04* 0,77±0,07** 0,51±0,08

мг/мл

ДК, усл.ед. 5,93±0,48 20,75±0,87* 13,28±0,76** 18,26±1,12

МДА, 4,20±0,33 8,89±0,93* 5,34±0,21** 7,35±0,39

мкмоль/мл

мин

МДА, моль/г 5,46±0,31 15,37±1,24* 9,06±0,85** 13,06±1,29

ткани почки

Каталаза, 8,34±0,49 3,61±0,17* 5,56±0,21** 4,72±0,19

мкат/л

СОД 27,01 ±1,60 15,67±1,39* 22,25±2,31** 18,02±0,91

мкмоль/л

Патоморфологическими особенностями канамицинового поражения почек являются дистрофические и некротические поражения каналь-цевого аппарата почек, дилатация и вакуолизация нефроцитов, воспаление тубулоинтерстициальной ткани, формирование участков кальциноза. При морфологическом и морфометрическом исследовании почек белых крыс, получавших «Нефрофит», отмечается снижение выраженности отека ин-терстиция, уменьшение дистрофических и некротических изменений канальцев, уменьшение числа дилатированных нефроцитов и участков кальциноза, а также значительное уменьшение площади и периметра канальцев (табл. 3).

Таблица 3

Влияние «Нефрофита» на показатели морфометрического

исследования почек при канамициновой нефропатии

Показатели морфометрического исследования почек Группы животных

Контрольная (канамицин) Опытная (канамицин + «Нефрофит»)

Количество кальцинатов 4,83±0,19 0,82±0,04**

Количество расширенных нефроцитов 6,07±0,28 1,01±0,05**

Количество канальцев с включениями 5,45±0,27 1,14±0,05**

Площадь канальцев, мкм2 6747,63±202.42 1658,50±61,34**

Периметр канальцев, мкм 325,93±9,78 165,41±4,95**

Полученные в работе данные показывают, что введение НПВП в максимально-переносимых дозах приводит к развитию нарушений функционального состояния почек у экспериментальных животных. Кроме того, введение НПВП сопровождается инициированием ПОЛ и снижением активности ферментов антиокислительной системы. По выраженности неф-ротоксического действия НПВП распределяются следующим образом: индометацин > бруфен > диклофенак.

При оценке нефротоксичности бруфена установлено, что курсовое назначение бруфена приводит к развитию морфо - функциональных изменений почек, характеризующихся как тубулоинтерстициальный нефрит (ТИН) (табл. 4). В частности, у животных, получавших бруфен, отмечаются азотемия, умеренная протеинурия, снижение СКФ, повышение экскреции с мочой ионов калия и натрия, полиурия, а также снижение удельного

веса мочи. Полученные данные соответствуют клиническим проявлениям лекарственного ТИН (К1пса1с1-8ткЬ, 1978; Ыапга, 1980). Развитие ТИН сопровождается активацией ПОЛ и снижением активности ферментов АОС. Следует отметить, что нарастание выраженности оксидативного стресса коррелирует со степенью тяжести морфофункционального состояния почек.

Как следует из таблицы 4, введение «Нефрофита» на фоне бруфеновой нефропатии на 8 и 15 сутки эксперимента сопровождается повышением азотовыделительной, диуретической и экскреторной функций почек, а также уменьшением выделения электролитов с мочой. Так, на 8 и 15 сутки эксперимента концентрации креатинина и мочевины в сыворотке крови белых крыс, получавших «Нефрофит», снижаются на 20 и 22 % и на 26 и 27 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Одновременно с этим, на 8 и 15 сутки опыта экскреция белка с мочой у животных опытных групп уменьшается на 39 и 56 % соответственно; СКФ возрастает в 1,3 и 1,4 раза; количество мочи уменьшается на 20 и 31 %; экскреция катионов калия снижается на 16 и 21%; экскреция с мочой катионов натрия уменьшалась на 20 и 33 % соответственно с аналогичными данными у животных контрольной группы. Также, на 15 сутки эксперимента отмечается увеличение удельного веса мочи по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.

Выявлено, что «Нефрофит» оказывает выраженное антиоксидантное действие, сопровождающееся достоверным снижением скорости накопления ДК и МДА в крови и почках белых крыс. Так, при введении «Нефрофита» на 8 и 15 сутки исследования отмечается снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 25 и 56 % соответственно; снижение концентрации МДА в крови и почках белых крыс - на 17и21 %ина33и40% соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Наряду с этим, «Нефрофит» повышает активность антиоксидантной защиты: при его курсовом назначении через 8 суток уровни активности каталазы и СОД в сыворотке крови крыс возрастают по сравнению с контролем на 41 и 18 % соответственно; на 15 сутки - на 70 и 28 %.

При морфологическом исследовании почек крыс, получавших бруфен, отмечаются в основном дистрофические, и в меньшей степени, некротические изменения канальцев, а также расширения их просветов. Кроме того, имеются изменения со стороны сосудов почек в виде полнокровия и участков кровоизлияний. Введение «Нефрофита» положительно сказывается на состоянии структуры элементов почек Проксимальные и дистальные извитые канальцы в меньшей степени подвержены дистрофии и некрозу, отмечаются уменьшения площади и периметра канальцев на 72 % и 46 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы.

Таблица 4

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние почек, динамику накопления ПОЛ и активность ферментов АОЗ

Показатели Группы животных

Ишактная (п=10) Контрольная (бруфен) (п = 10) Опытная (бруфен + «Нефрофит») (п=10)

8 сутки

Креатинин, мкмоль/мл 62,00±1,37 78,62±5,04* 62,86±3,07**

Мочевина, ммоль/мл 5,37±0,22 7,68±0,39* 5,61±0,29**

Белок в моче, г/л 0,91 ±0,05 1,92±0,72 1,17±0,42

СКФ, мкл/мин 173,41±10,03 130,05±8,41 169,06±6,4**

Объем мочи за 2 часа, 80,66±5,02 105,66±6,71 84,52±8,39

мл/100 г.

К+ в моче, мг/мл 4,93±0,39 5,97±0,43 5,01±0,35

№+в моче, мг/мл 1,53±0,10 2,35±0,19 1,89±0,16

ДК, усл.ед 6,41±0,39 11,90±0,97* 8,97±0,74**

МДА, мкмоль/мл мин 3,65±0,27 4,36±0,21 3,68±0,24**

МДА, моль/г ткани 10,30±0,56 18,69±0,47* 14,83±1,07**

почки

Каталаза, мкат/л 4,01±0,37 2,54±0,16* 3,58±0,14**

СОД в эритроцитах, мкмоль/л 9,45±0,64 7,41 ±0,48* 8,37±0,41**

15 сутки

Креатинин, мкмоль/мл 62,00±0,37 85,35±5,24* 66,57±2,66**

Мочевина, ммоль/мл 5,37±0,22 7,94±0,61* 5,82±0,26**

Белок в моче, г/л 0,91 ±0,05 2,30±0,15* 1,01±0,04**

СКФ, мкл/мин 173,41±10,03 112,36±7,61* 152,6±8,51

Удельный вес мочи 1030,12±61 1017,40±59 1026,60±73

Объем мочи за 2 ч , 0,80±0,05 1,26±0,05 0,87±0,04**

мл/100 г.

К+ в моче, мг/мл 80,66±5,02 126,67±5,46* 87,32±4,85**

№+в моче, мг/мл 4,93±0,39 6,03±0,56 4,76±0,51

ДК, усл.ед 6,41 ±0,39 20,60±2,11* 8,82±0,75**

МДА, мкмоль/мл мин 3,65±0,27 6.24±0,31* 4,16±0,24**

МДА, моль/г почки 10,30±0,56 25,96±2,33* 15,57±1,71**

Каталаза, мкат/л 4,01±0,37 2,26±0,10* 3,84±0,43**

СОД в эритроцитах, мкмоль/л 9,45±0,64 6,42±0,58* 8,23±0,65**

Установлено, что введение лабораторным животным рифампицина, изониазида, пиразинамида сопровождается развитием полиорганной патологии, характеризующейся как гепато-ренальный синдром. Так, назначение туберкулостатиков сопровождается развитием синдромов цитолиза, холестаза и мезенхимального воспаления, а также снижением белковосин-тетической функции печени. Поражение почек при назначении ПТП характеризуется незначительной азотемией, протеинурией, снижением СКФ, умеренным повышением диуреза и гипостенурией. На фоне медикаментозного гепато-ренального синдрома у белых крыс развивается оксидатив-ный стресс с понижением мощности эндогенной антиокислительной защиты.

Таблица 5

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние почек, динамику накопления ПОЛ и активность ферментов АОЗ при лекарственной нефро-

патии, индуцированной ПТП

Показа гели Группы животных

Интактная (п = 10) Кошрольная (ПТП) (п = 10) Опытная 1 (ПТП + «Нефрофит») (п = 10) Опытная 2 ПТП + («Канефрон») (п=10)

Креатинин, мкмоль/мл 52,10±4,16 63.02±4,98 54,42±3,02 56,83±5,11

Мочевина, ммоль/мл 5,56±0,52 7,19±0,48 5,78±0,42 6,45±0,58

Белок, г/л 0,70±0,05 1.05±0,07* 0,65±0,04** 0,78±0,06

СКФ, мкл/мин 173,41±10,34 127,68±9,37* 152,90±8,76 134,82± 12,03

Объем мочи за 2 часа, мл/100 г. 80,66±5,02 120,50±6,56* 86,21±4,85** 89,36±7,93

Удельный вес мочи 1030,21±65,47 1021,14±78,01 1029,45±76,31 1024,01±91,22

ДК, усл.ед. 5,81±0,42 10,34±0,72* 7,18±0,56** 8,26±1,01

МДА, мкмоль/мл мин 13,28->Д65 19,17± 1,70* 13,94±0,76** 15,92±1,49

МДА, моль/г ткани почки 14,01±1,27 21,59±1,76* 16,01±0,96** 17,36±1,52

Каталаза, мкаг/л 8,60±6,10 6,10±0,36* 8,61±0,77** 7,92±0,49

СОД в эр., мкмоль/л 14,06±1,26 7,69±1,04% 12,32±0,86** 11,41±0,91

Курсовое введение «Нефрофита» животным, получавшим ПТП, сопровождается нефропротекторным, умеренным гепатозащитным и выраженным антиоксидантным действием (табл 5, 6). В частности, уровени креатинина и мочевины в сыворотке крови животных опытных групп снижаются на 14 и 20 %; протеинурия - на 38 %; СКФ повышается в 1,2 раза; диурез уменьшается на 28 % по сравнению с контролем. Наряду с этим, введение «Нефрофита» сопровождается снижением концентрации АсТ и АлТ на 23 и 21 % соответственно; уменьшением показателя тимоловой пробы на 38 % по сравнению с аналогичными данными у животных ин-тактной группы.

Кроме того у животных, получавших «Нефрофита, выявлено уменьшение накопления продуктов липопероксидации в сыворотке крови и го-могенате почек; усиление антиокислительной активности организма, о чем свидетельствует снижение концентрации ДК в сыворотке крови на 30 %; снижение концентрации МДА в крови и почках белых крыс - на 27 и 26 % соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Одновременно с этим, «Нефрофита повышает активность ферментов ан-тиоксидантной защиты - каталазы и СОД в 1,4 и 1,6 раза по сравнению с показателями у контрольных крыс.

Таблица 6

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние печени белых крыс при комплексном введении противотуберкулезных

Показатели Группы животных

Интактная Контрольная (ПТП) Опытная (ПТП + «Нефрофита)

АсТ, ЕД/л 38,41 ±2,68 86,01±5,17* 66,34±3,79**

АлТ, ЕД/л 58,09±4,17 87,59±7,01* 69,18±4,39**

Тимоловая проба, ЕД 0,81±0,05 1,70±0,08* 1,06±0,05**

Общий билирубин, мкм/л 3,36±0,16 23,59±1,87* 19,56±1,23

Щелочная фосфа-таза, ЕД/л 4,52±0,31 5,87±0,31 5,56±0,29

При мофометрическом исследовании выявлено, что «Нефрофита на фоне введения ПТП стимулирует регенераторные процессы в почках, а также уменьшает размеры нефроцитов (площадь на - 57 %, периметр - на 45 %) по сравнению с аналогичными показателями в контроле.

В результате исследования установлено, что однократное введение урографина в максимально переносимой дозе приводит к формированию у лабораторных животных олигурической ОПН, которая сопровождается развитием выраженного окислительного стресса на фоне нарушения активности эндогенной антиокислительной защиты. Морфологическая картина рентгеноконтрастной нсфропатии характеризуется дистрофическими и некротическими изменениями проксимальных канальцев, полнокровием сосудов, многочисленными диапедезными кровоизлияниями, а также увеличением и полнокровием клубочков. Как следует из таблицы 7, превентивное введение «Нефрофита» оказывает нефропротекторное действие, которое характеризуется снижениями концентраций креатинина и мочевины на 44 и 48 %; уменьшением протеинурии на 40 %; повышением СКФ и диуреза в 1,9 и 2 раза соответственно по сравнению с показателями у животных контрольной группы. Наряду с этим, введение испытуемого фито-экстракта оказывает выраженное антиоксидантное действие. Об этом свидетельствует снижение уровня ДК в сыворотке крови и МДА в сыворотке крови и гомогенате почек на 45; 38 и 38 %; а также повышение активности каталазы и СОД в 1,5 и 1,2 раза соответственно по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Кроме того, введение «Нефрофита» способствует сохранности нефрона в целом, повышению его функциональной активности, уменьшению площади и периметра диапедезных кровоизлияний на 82 и 70 % соответственно по сравнению с аналогичными показателями у животных контрольной группы.

Таблица 7

Влияние «Нефрофита» на функциональное состояние почек, динамику накопления ПОЛ и активность ферментов АОЗ при рентеноконтрастной нефропатии

Показатели Группы животных

Интактная (п=10) Контрольная (урографин) (п = 10) Опытная (урографин + «Нефрофит») (п= 10)

1 2 3 4

Креатинин, 59,49±3,61 108,47±10,72* 60,74±5,19**

мкмоль/мл

Мочевина, 6,74±0,41 13,95^1,27* 7,21±0,56*

ммоль/мл

Белок в моче, г/л 0,67±0,05 1,71 ±0,23* 1,02±0,16*

СКФ, мкл/мин 92,68±5,38 41,09±3,14* 80,75±6,54*

Объем мочи за 1,93±0,09 0,87±0,06* 1,80±0,09**

2 часа, мл/100 г

1 2 3 4

ДК, усл.ед. 5,81±0,42 10,34±0,72* 7,18±0,56**

МДА в крови, мкмоль/мл мин 13,28±0,65 19,17±1,70* 13,94±0,76**

МДА, моль/г ткани почки 14,01±1,27 21,59±1,76* 16,01±0,96**

Каталаза, мкат/л 8,60±0,61 6,10±0,36* 8,61 АО,77**

СОД в эритроцитах, мкмоль/л 14,06±1,26 7,69±104* 12,32±0,86**

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, полученные данные свидетельствуют, что аминогли-козиды, НПВП, туберкулостатики, рентгеноконтрастные вещества вызывают тубулоинтерстициальное поражение почек, характеризующееся гиперазотемией, протеинурией, гипостенурией, нарушением водно-электролитного баланса. По степени тяжести проявлений нефротоксиче-ских эффектов исследуемые препараты располагаются следующим образом: урографин > канамицин > нестероидные противовоспалительные препараты > туберкулостатики. Показано, что структурной основой большинства медикаментозных нефропатий является деструкция, в основном, тубулярного аппарата почек и развитие отека интерстициальной ткани. Выявлено, что общим молекулярно-клеточным патогенетическим механизмом развития лекарственного поражения почек различной этиологии является нарушение структурно-функциональной целостности мембран нефроцитов в результате индукции перекисного окисления липидов и снижения мощности эндогенной антиокислительной системы организма.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что фитоэкс-тракт «Нефрофит» обладает широким спектром фармакологической активности. Испытуемое растительное средство оказывает антиоксидантное, мембраностабилизирующее, гипоазотемическое, противовоспалительное и иммуномодулирующее действие.

Установлено, что «Нефрофит» при его курсовом введении в экспериментально-терапевтической дозе на фоне лекарственных повреждений почек различной этиологии обладает фармакотерапевтической эффективностью, характеризующейся улучшением морфофункционального состояния почек. В частности, на фоне введения испытуемого фитоэкстракта улучшаются экскреторная, водорегулирующая, ионорегулирующая функции »■'П0«1й*,-;&ййяейется выраженность протеинурии.

Полученные данные свидетельствуют, что в реализации нефропротек-торного действия растительного средства участвуют как базисные реналь-ные факторы: снижение азотемии, повышение диуреза, увеличение скоро-

сти клубочковой фильтрации, уменьшение протеинурии, так и экстраре-нальные фармакологические эффекты: противовоспалительное, мембрано-стабилизирующее, антиоксидантное и иммуномодулирующее действия.

Установлено, что важнейшим механизмом нефропротекторного действия «Нефрофита» является его способность ингибировать процессы пере-кисного окисления липидов и стабилизировать мембраны при повреждении почек. Основным действующим началом «Нефрофита» является комплекс полифенольных соединений, обладающих выраженными антиокси-дантным и мембраностабилизирующим действиями. Антиоксидантная активность «Нефрофита» обусловлена как непосредственным антирадикальным эффектом, так и опосредованным, связанным с повышением под его влиянием активности эндогенной антиоксилительной защиты.

ВЫВОДЫ

1. Повреждение почек медикаментозными средствами (канамицин, нестероидные противовоспалительные препараты, туберкулостатики, уро-графин) сопровождается развитием однородного симптомокомплекса ту-булоинтерст ициальных повреждений. Обгцим молекулярно-клеточным звеном патогенеза медикаментозной нефропатии являются нарушение структурно-функциональной целостности биомембран нефроцитов в результате индукции перекисного окисления липидов и снижения активности антиоксидантной защиты организма.

2. Курсовое введение «Нефрофита» в экспериментально-терапевтической дозе на фоне лекарственных нефропатий сопровождается снижением токсического действия медикаментозных препаратов и улучшением морфофункционального состояния почек.

3. Фармакотерапевтическая эффективность «Нефрофита» при экспериментальных медикаментозных повреждениях почек обусловлена широким спектром фармакологической активности' гипоазотемической, диуретической, салуретической, способности повышать скорость клубочковой фильтрации и снижать степень протеинурии, а также выраженным антиок-сидантным, мембраностабилизирующим, противовоспалительным, сосу-доукрепляющим и иммуномодулирующим действием.

4. Основным механизмом нефропротекторного действия фитоэкс-тракта является ингибирование процессов перекисного окисления липидов и повышение активности ферментов антиокислительной защиты организма благодаря наличию в его составе большого количеств фенольных соединений.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Николаев С М , Хобракова В,Б , Мондодоев А. Г. , Абгалдаева Е

А , Петунова А Н , Иванова И К , Юндунова О В. Иммуномодулирующее действие многокомпонентных фитосредств в условиях вторичного иммунодефецита // Практическая фитотерапия. М. - 2002. - № 4.- С. 9-12.

2. Абгалдаева Е А., Мондодоев А.Г., Хобракова В.Б., Ажунова Т А

Влияние «Нефрофита» на показатели клеточного и i-уморального звеньев иммунитета // Сб. тр. ВСГТУ. Серия: «Химия и биологически активные вещества»,- Улан Уцэ. - 2002,- С. 74.

3 Николаев С.М., Хобракова В.Б., Мондодоев А.Г., Абгалдаева Е А,

Петунова А.Н., Иванова И К., Юндунова О.В Иммуномодулирующее действие многокомпонентных фитосредств в условиях вторичного иммунодефицита // Мат-лы юбилейной конф. РОО «Фитотерапевтическое общество». - М. - 2002. - С. 67.

4. Абгалдаева Е.А., Мондодоев А Г., Ажунова Т.А. «Нефропротек-торные свойства «Нефрофита» при экспериментальной канамициновой нефропа-тии»//Тез. докл X Росс национ конгресса "Человек и лекарство". - 8-12 апреля -М., 2003. - С 685-686

5. Абгалдаева Е А , Мондодоев А.Г . Ажунова Т А Сравнительный анализ нефротоксичности нестероидных противовоспалительных препаратов // Материалы научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине» -Улан-Удэ. - 2003.-С. 106.

6 Мондодоев А Г , Абгалдаева Е А , Батоев С.Д Фитотерапия и фи-

топрофилактика нефропатий // Байкальские чтения - 1 Разгрузочно - диетическая терапия и традиционная медицина - СПб - 2003. - С. 217-221.

7. Абгалдаева Е А., Мондодоев А Г. Нефропротекторное действие «Нефрофита» при экспериментальной канамициновой нефропатии // Вестник БГУ -. 2002 -. С.25-27.

8. Абгалдаева Е.А., Мондодоев А Г , Могнонова Т.Д. Антиоксидант-ное действие «Нефрофита» при экспериментальной лекарственной нефропатии // Материалы третьей межрегиональной конференции «Медицина завтрашне! о дня», Чита, 6-7 мая. 2004 г - Чита ЧГМА, 2004,- С 4.

9. Абгалдаева Е.А, Мондодоев А.Г., Ажунова Т.А Нефропротекторное действие «Нефрофита» при экспериментальной лекарственной нефропатии, вызванной туберкулостатиками //Материалы научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России».- Улан-Удэ.- 2004 - С.5

и-

Подписано в печать 13.01.2005 г. Формат 60x84 1/16. Уел пл.'1.22 Тираж 100 эьз Заказ Х»6

Отпечатано в типографии ВСП"!>. г. Улан-Удэ. ул, Ключевская, 40 в

V «

г*

к

РНБ Русский фонд

2005-4 46955