Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическое изучение фотозащитного действия новой лекарственной композиции "Спектр+"

На правах рукописи

Миславский Олег Владимирович

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ФОТОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТВИЯ НОВОЙ ЛЕКАРСТВЕННОЙ КОМПОЗИЦИИ "СПЕКТР+"

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Купавна 2004

Работа выполнена в Государственном научном центре лазерной медицины Министерства здравоохранения Российской федерации и в отделе фармакологии Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ.

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор С.П. Гладких

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор В.Л. Ковалева

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

С.Я. Скачилова доктор биологических наук Л.А. Радкевич

Ведущая организация: Московский государственный медико-стоматологический университет

Защита состоится "•?£>"-г*а/атц 2004 г. в "часов на заседании диссертационного совета Д 217.004.01 во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ по адресу: 142450, Московская обл., п. Старая Купавна, ул. Кирова, 23.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Всероссийского научного центре по безопасности биологически активных веществ.

Автореферат разослан "У**-*2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор биологических наук, профессор

Л.В. Корольченко

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. В последнее время возросла актуальность защиты кожи человека от солнечных лучей, инициирующих, как известно, развитие различных фотодерматозов, старение кожи и раковые заболевания (А.Д. Стрижинский, 1995). В связи с этим возникает необходимость разработки лекарственных препаратов для терапии фотодерматозов и фотозависимых поражений кожи (пигментная ксеродерма, солнечная крапивница, солнечная экзема, световая оспа, профессиональные заболевания, дискоидная красная волчанка, системная красная волчанка, порфириновая болезнь, розацеа) и профилактики состояний, связанных с повышенной светочувствительностью кожи.

Как следует из данных литературы, существующие в настоящее время лекарственные средства для наружного применения обеспечивают защиту только от непосредственного солнечного излучения, находящегося в ультрафиолетовой части спектра области А с длинами волн 320 - 350 нм и области В с длинами волн 280 - 315 нм (Г. Фойстем и др., 1990; J.M. Menter, 1990; N.J. Lowe, R.L. Моу, 1991; А.Д. Стрижинский, 1995). Незначительная эффективность отечественных и зарубежных фотозащитных лекарственных средств при вышеназванных заболеваниях объясняется тем, что в качестве биологически активных соединений в состав этих препаратов входят вещества, поглощающие, как правило, эритемные лучи (максимумы поглощения на 260 нм и 290 нм) (С.П. Гладких, и др., 1986). Причиной этого является тот факт, что при разработке фотозащитных препаратов в основном учитывается максимум эритемной эффективности излучения в области 260 - 315 нм (Г. Фойстем и др., 1990; А.Д. Стрижинский, 1995), хотя поверхности земли достигает только длинноволновая составляющая ультрафиолетового спектра солнечного света в диапазоне 320 - 400 нм (W. Reifshyder, 1965; Ю. Одум, 1975).

Однако следует подчеркнуть, что необходимость защиты кожи от солнечного излучения только как от физического фактора воздействия является лишь частью проблемы. Помимо этого, существует необходимость защиты кожи от факторов, способствующих повреждающему действию солнечного излучения. К таким факторам относятся фотосенсибилизаторы, содержащиеся в коже человека -порфирины (В.К. Подымов и др., 1979), или фотосенсибилизаторы, попадающие на нее извне, которые включают в себя такие химические вещества как красители (эозин, метиленовый синий), некоторые соли марганца, железа, ртути, мышьяка, каменноугольная смола, ее продукты и др. (БМЭ, т. 26, 1985).

Особое место среди перечисленных фотосенсибилизаторов занимают порфирины. Результаты проведенных Ю.В Алексеевым, С.П. Гладких с соавт. (1985) исследований показали, что эффективными для лечения и профилактики таких кожных заболеваний как дискоидная красная волчанка, системная красная волчанка, порфириновая болезнь, при которых увеличено содержание порфиринов в коже, могут быть лекарственные средства, в которых в качестве биологически активного компонента присутствует химическое соединение, интенсивно поглощающее световую энергию в спектре действия порфиринов (400

•410 нм). В настоящее время *

ЮС. H».ft< ,.;HAjli>HA* БИЬ ■'■■,'TFKA С. Г-. >006 PK

:дством является линимент

"Фогем" (С.П. Гладких и др., 1986).

Однако применение линимента "Фогем" в качестве фотозащитного средства недостаточно эффективно из-за особенности лекарственной формы данного препарата. Для универсального применения фотозащитного препарата в условиях, связанных с повышенной инсоляцией, необходимо расширить спектр его фотозащитного действия, кроме того, необходимо учитывать молекулярные механизмы повреждающего действия солнечного света (как прямого, так и опосредованного через кислород) на элементы клеточных структур.

Учитывая важное значение фотодинамического действия порфиринов, теоретической основой для разработки новой фотозащитной лекарственной композиции "Спектр +" были данные о способности эндогенного кислорода поглощать в области видимого света и ближнего инфракрасного излучения и о способности эндогенного кислорода переходить в синглетное состояние при отсутствии фотосенсибилизатора (В.П. Данилов, 1990). Ранее, при разработке лекарственного препарата "Фогем" это обстоятельство авторами не учитывалось.

Указанные обстоятельства явились основанием для разработки новой фотозащитной лекарственной композиции "Спектр +".

Цель исследования. На основании имеющихся данных о действии традиционных фотозащитных средств и линимента "Фогем" и новых данных о молекулярных механизмах воздействия света на биологические объекты теоретически обосновать состав новой лекарственной композиции "Спектр +" и провести экспериментальное исследование фотозащитного действия этой лекарственной композиции на моделях фотодинамического воспаления кожи у крыс и морских свинок в сравнении с известными фотозащитными препаратами. Задачи исследования.

1. Разработать теоретическую концепцию создания оригинальных фотозащитных лекарственных средств с учетом повреждающего воздействия на кожу не только ультрафиолетовых лучей типа А и В, но и лучей в видимой и инфракрасной области спектра; обосновать подбор активных ингредиентов для новой лекарственной композиции "Спектр +" и составить пропись этой композиции с описанием технологии ее приготовления.

2. Исследовать фотозащитное действие оригинальной лекарственной композиции "Спектр +" в сравнении с линиментом "Фогем" и широко используемыми в настоящее время фотозащитными составами "Johnson's suncare", "Photoderm Мах" и "Anthelios" на экспериментальной модели фотодинамического воспаления (ФДВ) кожи у крыс и морских свинок путем оценки фармакологического эффекта по развитию эритемы и отека.

3. Изучить фотозащитное действие лекарственной композиции "Спектр +" в сравнении с линиментом "Фогем" и солнцезащитным кремом "Johnson's suncare" на экспериментальной модели ФДВ кожи у крыс методом лазерной допплеровской флоуметрии с компьютерной обработкой экспериментальных данных.

4. Изучить фотозащитное действие лекарственной композиции "Спектр +" в сравнении с высокоэффективными солнцезащитными кремами "Photoderm Мах" и "Anthelios" на экспериментальной модели ФДВ кожи у морских

свинок методом лазерной биофотометрии, а также исследовать указанным методом дозозависимый эффект лекарственной композиции "Спектр +". 5. Оценить возможные аллергизирующие свойства лекарственной композиции

"Спектр +" у морских свинок. Научная новизна. Впервые предложена новая концепция разработки составов фотозащитных лекарственных средств, основанная на учете не только повреждающего воздействия на кожу ультрафиолетовых лучей типа А и В, но и видимого и ближнего инфракрасного света.

С использованием методов компьютерной лазерной допплеровской флоуметрии и лазерной биофотометрии впервые получены экспериментальные данные, свидетельствующие о высокой фотозащитной активности оригинальной отечественной лекарственной композиции "Спектр +".

Новая оригинальная лекарственная композиция "Спектр +" обладает более высоким фотозащитным действием на моделях фотодинамического повреждения кожи (ФДВ) у экспериментальных животных по сравнению с широко используемыми зарубежными солнцезащитными кремами "РЫЛос1егт Мах" и "АпЛеИоБ ХЬ" и отечественным препаратом "Фогем".

Впервые использованы прецизионные инструментальные методы исследования (лазерная допплеровская флоуметрия и лазерная биофотометрия) для количественной оценки эффективности фотозащитных препаратов на модели ФДВ.

Практическая значимость. Результаты экспериментального изучения специфической фармакологической активности новой оригинальной лекарственной композиции "Спектр +" представляют собой основу для создания нового отечественного фотозащитного лекарственного препарата, который должен обеспечить с высокой степенью эффективности защиту кожи человека от воздействия световых лучен в диапазоне длин волн 280 - 1500 нм. Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на втором Российском конгрессе по патофизиологии (Москва, 2000), третьем Всероссийском симпозиуме по применению лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике (Москва, 2000), Международной конференции "Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века" и научно-практической конференции Северо-западного региона Российской Федерации (Санкт-Петербург, 2001), Научно-практической конференции российских ученых "Актуальные аспекты лазерной медицины" (Москва-Калуга, 2002), Первой научно-практической конференции Северо-Западного региона Российской Федерации с международным участием (Санкт-Петербург, 2003). Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 7 печатных работах.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 165 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы, посвященной описанию материалов и методов исследования, главы с изложением теоретического обоснования состава новой лекарственной композиции "Спектр +", двух глав экспериментального изучения фотозащитной активности "Спектр +" и обсуждения результатов, выводов, приложения и списка литературы,

«

включающего в себя 240 источников (129 работ отечественных и 111 работ иностранных авторов). Диссертация содержит 27 таблиц и 18 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для выполнения экспериментальной работы были использованы 50 нелинейных белых крыс-самцов с массой тела 200-220 г, 60 белых морских свинок-самцов с массой тела 450-500 г и 20 морских свинок с массой тела 200-250 г. Животные содержались по 10 особей (крысы и морские свинки с массой тела 200-250 г) или по 5 особей (морские свинки с массой тела 450-500 г) в стандартных пластмассовых клетках в условиях вивария (12-часовой режим освещения; температура — 21+2 °С; влажность воздуха - 60 + 5%; свободный доступ к корму и питьевой воде. Модель фотодинамического воспаления кожи

Для оценки фотозащитной активности исследуемых препаратов была использована модель искусственной фотопатологии с применением аппликации раствора гематопорфирина (гематопорфирин для медицинских целей, ВФС 42171-72) в диметилсульфоксиде (ДМСО; ВФС 42-1166-81) с концентрацией 3 мг/мл. Аппликацию гематопорфирина проводили согласно методике "Выявление фотосенсибилизирующего действия вязких и мазеобразных веществ, при их воздействии на кожные покровы в эксперименте на животных" (Е.В. Трофимова, С.П. Гладких, 1997).

Подготовку контрольных и опытных животных, которая заключалась в удалении шерсти на участке спины ниже лопаток (площадью около 5 см2 у крыс или площадью около 25 см2 у морских свинок), выполняли за сутки до проведения эксперимента.

В серии экспериментов, проведенных на крысах, в день проведения эксперимента за 30 мин до начала манипуляций каждому животному вводили тиопентал-натрий в дозе 10 мг/100 г массы тела. Далее, согласно выше указанной методике, животным на указанные участки кожи спины при помощи шприца емкостью 1 мл через иглу с напаянной на конце оливой, равномерно наносили раствор гематопорфирина (фотосенсибилизатор); в ДМСО с концентрацией 3 мг/мл в объеме 1 мл (крысы) или 3 мл (морские свинки). Контрольным животным на аналогичный участок кожи наносили ДМСО без добавления фотосенсибилизатора в объеме 1 мл (крысы) и 3 мл (морские свинки). После полного всасывания раствора гематопорфирина участки исследуемой кожи опытных и контрольных животных подвергали облучению искусственным источником освещения (осветитель ОИ-18; рабочая плотность мощности - 40-50 мВт/см2) в течение 30 мин (крысы) или 45 мин (морские свинки) на расстоянии 25 см при полностью открытой диафрагме без светофильтров. После облучения животных контрольных и опытных групп помещали в клетки и содержали в стандартных условиях. Оценку воспалительной реакции кожи каждого животного проводили через 6 ч, 24 ч и 48 ч после облучения. Метод лазерной допплеровской флоуметрии

Регистрация состояния местной микроциркуляции у животных осуществлялась методом лазерной допплеровской флоуметрии (ЛДФ) с

компьютеризованной обработкой первичных экспериментальных данных. ЛДФ -высокочувствительный неинвазивный метод количественной регистрации уровня микроциркуляции в органах и тканях, позволяющий проводить диагностику и прогнозирование при ангиопатиях и расстройствах кровообращения различного генеза в микроциркуляторном звене (В.И. Козлов, 1996). Интегральной характеристикой капиллярного кровотока, регистрируемой при ЛДФ, является показатель микроциркуляции (ПМ), который представляет собой параметр, который зависит от концентрации эритроцитов в измеряемом объеме ткани и их средней скорости (Уср) (В.И.Козлов, 1995, 1996, 1998). Параметр ПМ измеряли в вольтах (В), что на табло индикатора прибора соответствовало перфузионным единицам (пер. ед.). Детальный анализ параметра ПМ показывает, что входящий в его состав показатель объемной концентрации эритроцитов в ткани определяется двумя факторами: капиллярным гематокритом (HfK; объемное содержание эритроцитов в капиллярной крови, оцениваемое в процентах) и количеством функционирующих капилляров в измеряемом объеме ткани (N):

ПМ = Vcp • HtK • N.

Регистрируемый при ЛДФ сигнал количественно характеризует кровоток в микрососудах с временным разрешением ~ 100 мс (т.е., речь идет о мгновенной величине потока) и с пространственным разрешением 1 мм (т.е., измерение осуществляется примерно в 1-1,5 мм3 ткани).

В качестве регистрирующей аппаратуры использовали лазерный анализатор капиллярного кровотока (ЛАКК-01) в комплексе с компьютером серии Pentium.

Для анализа получаемых допплерограмм использовали следующие показатели: ПМ, амплитуда вазомоторных колебаний (А„), амплитуда высокочастотных ритмов колебаний кровотока (Авч), отношение амплитуды вазомоторных колебаний к амплитуде высокочастотных ритмов колебаний кровотока (А„/Авч).

Метод оценки воспалительной реакции кожи по развитию эритемы и отека

Оценка воспалительной реакции кожи экспериментальных животных по развитию эритемы основывалась на визуальном сопоставлении исходной окраски кожи животного и интенсивности окраски кожи после облучения эритемы по сравнению с цветовым эталоном. На эталоне были показаны цветом три типа исходной окраски кожи животного, которые соответствует отсутствию эритемы, и соответствующие этим типам четыре градации покраснения, обозначающие степень эритемы. Оценку интенсивности окраски кожи животного проводили при естественном освещении в утренние часы (9.00 - 11.00). В качестве цветового эталона использовали колориметрическую линейку C.B. Суворова (1976).

Оценка тяжести отека основывалась на измерении толщины складки кожи. Интенсивность эритемы и интенсивность отека выражали в баллах, используя схему оценки воспалительной реакции кожи, предложенную (Е.А. Иевлева и др., 1976).

Метод лазерной биофотометрии

Метод лазерной биофотометрии основан на измерении коэффициента отражения светового потока (Котр ) от поверхности ткани и ее глубоких структур. Коэффициент отражения измеряется в биологических тканях, на кожных

покровах, на поверхности язв и других повреждений биологических тканей. При измерении коэффициента отражения на кожных покровах важно учитывать, что коэффициент отражения зависит от степени пигментации кожи (М.Т. Александров и др., 1996)

Для определения коэффициента отражения использовали лечебный аппарат "Милта-Ф 8-01" со встроенным биофотометром, который обеспечивал измерение коэффициента отражения в двух режимах: с "поверхностных" структур кожи и "глубоких" структур кожи (В.Ф. Балаков и др., 1998; И.Н. Голубинская, 1996).

В состав лекарственной композиции "Спектр +" входили следующие

ингредиенты:

□ гемин (ТУ 6-09-10-594-77) 0,1 г;

□ пара-аминобензойная кислота (ПАБК, ТУ 6-08-1971-88) 2,0 г;

□ персиковое масло (ГОСТ 30623-98) 25,0 г;

□ ланолин 30,0 г;

□ диметилсульфоксид (ВФС 42-1166-81) 10,0 г

□ 2% водный раствор бета-каротина (ТУ 400-00001927-116-96) 1,0 г;

□ раствор цитраля спиртовой 1% 1,0 г;

□ вода дистиллированная (ГФ X, ст. 73) 30,9 г.

В качестве препаратов сравнения были использованы крем "Johnson's suncare" с индексом зашиты 30 ("Johnson & Johnson"), крем "Photoderm Мах" с индексом защиты 100 ("Laboratoire Bioderma"), крем "Anthelios" с индексом зашиты 60+ ("La Roche-Posay") и линимент "Фогем".

Экспериментальные исследования проводились в двух сериях. Серия А (нелинейные белые крысы-самцы): Группа 1. Контрольная группа (интактные животные);

Группа 2. Модель фотодинамического воспаления (ФДВ; гематопорфирин +

облучение); Группа 3. Модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%; Группа 4. Модель ФДВ + "Johnson's suncare"; Группа 5. Модель ФДВ + "Фогем".

Серия Б (белые морские свинки-самцы): Группа 1. Контрольная группа (интактные животные); Группа 2. Модель ФДВ (гематопорфирин + облучение); Группа 3. Модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%; Группа 4. Модель ФДВ + "Спектр+" 0,05%; Группа 5. Модель ФДВ + "Photoderm МАХ"; Группа 6. Модель ФДВ + "Anthelios XL"

В каждую экспериментальную группу были включены по десять животных. Во всех группах, за исключением контрольных групп в сериях А и Б, животным наносился раствор гематопорфирина в ДМСО в соответствии с описанной выше модели ФДВ. В группах 3, 4 и 5 серии А после полного всасывания раствора гематопорфирина в ДМСО животным на исследуемые участки кожи спины площадью 5 см2 наносили навески изучаемых препаратов

("Спектр+", "Johnson's suncare", "Фогем") массой 200 мг, равномерно распределяя их шпателем по всей поверхности, и после всасывания препаратов проводили облучение. В группах 3, 4, 5 и 6 серии Б после всасывания раствора фотосенсибилизатора животным на исследуемые участки кожи спины площадью 25 см2 наносили навески препаратов ("Спектр+" 0,1%, "Спектр+" 0,05%, "Photoderm МАХ" и "Anthelios XL") массой 300 мг. Облучение животных серий А и Б проводилось согласно рассмотренной ранее модели ФДВ. После облучения животных контрольных и экспериментальных групп содержали в стандартных условиях. Воспалительную реакцию кожи у каждого животного оценивали через 6 ч, 24 ч и 48 ч после облучения.

На заключительной стадии экспериментальной работы было проведено изучение аллергизирующих свойств лекарственной композиции "Спектр+" у 20 белых морских свинок с массой тела 200-250 г с испольванием метода комбинрованой сенсибилизации морских свинок и конъюктивальной пробы, указанным в сборнике "Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ" (В.П. Фисенко, и др., 2000). Оценка аллергизирующего действия исследуемого потенциального лекарственного средства проводилась через 10-12 сут после внутрикожной сенсибилизации введением в ухо морским свинкам (опытная группа; п =10) 40 мкг гемина, растворенного в ДМСО, в объеме 0,05 мл. Контрольной группе животных (п =10) в таком же объеме вводился растворитель. На выстриженные участки спины площадью 2x2 см2 контрольной и опытной группам животных наносился препарат "Спектр+" (500 мг) в концентрации, не вызывающей раздражение (15%). На другие участки спины площадью 2x2 см2 контрольной и опытной группам животных наносилась основа препарата "Спектр+" (500 мг). В этих группах морских свинок проводилась коньюнктивальная препарата "Спектр+" (50 мг) в концентрации не вызывающей раздражение (3%). Гиперчувствительность немедленного типа оценивали через 15 мин, 30 мин, 1 ч и 4 ч. Гиперчувствительность замедленного типа определяли через 1 сут, 2 сут и 3 сут.

Статистическую оценку результатов исследований проводили методами вариационной статистики с использованием t-критерия Стьюдента (компьютерные программы "Stadia 6.2/demo", Куланчев А.П., 1996; "Statistica '99 Kernel release 5.5" - Demo Version).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Оценку воспалительной реакции кожи крыс в серии экспериментов А (крысы) после облучения проводили по показателям ЛДФ: ПМ, А„, Авч, выраженным в перфузионных единицах (пер. ед.), и Ав/Авч. Кроме того, воспалительную реакцию оценивали по развитию эритемы и отека.

В начале эксперимента были зарегистрированы следующие фоновые показатели: ПМ - 3,4 ± 0,20 пер. ед.; Ав - 0,22 ± 0,03 пер. ед.; Авч - 0,13 ± 0,02 пер. ед.; А„/Авч - 1,51 ± 0,02.

На рис. 1 представлены результаты изучения динамики ПМ в группах крыс серии экспериментов А.

10

ffl 6

□ фон В группа 1 ■ группа 2 ■ группа 3 0 группа 4 И группа 5

I

d

I

■ cfei

■ f 1 шшшл ► ж

24 Время,ч

48

Рис. 1. Динамика показателя микроциркуляции в серии экспериментов А у крыс: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Johnson's suncare" (группа 4), модель ФДВ + "Фогем" (группа 5); п=10.

Как видно из рис. 1, в группе 1 (контрольная группа) через 6 ч после облучения животных было выявлено незначительное увеличение показателя ПМ до 3,7 ± 0,23 пер. ед. Через 24 ч после облучения в группе 1 наблюдалось уменьшение ПМ до фоновых значений (3,4 ±0,18 пер. ед.). Через 48 ч значение ПМ в этой группе оставалось на фоновом уровне.

В группе 2 (модель ФДВ) через 6 ч после облучения животных произошло значительное увеличение величины ПМ до 8,0 ± 0,42 пер. ед., что свидетельствовало о наличии выраженного воспалительного процесса в коже крыс. Зафиксированное в данный момент времени значение ПМ достоверно превышало величину ПМ в группе 1 (контроль) (р < 0,01). Через 24 ч значение ПМ в группе 2 уменьшилось до 5,6 ± 0,38 пер. ед.. Через 48 ч в группе 2 наблюдалась тенденция дальнейшего снижения значения ПМ (5,0 ± 0,34 пер. ед.). Значения ПМ в группе 2 через 24 и 48 ч были существенно выше соответствующих величин в контроле (р < 0,01).

У крыс группы 3 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%) через 6 ч после облучения было зафиксировано несущественное повышение величины ПМ (3,7 ± 0,25 пер. ед.; р > 0,05 по сравнению с контролем). Значение ПМ в группе 3 незначительно превышало величину ПМ фона, но было существенно ниже аналогичного показателя у животных группы 2 (модель ФДВ; р < 0,01) или у крыс группы 4 (ФДВ + "Johnson's suncare"; р < 0,05). Через 24 ч после индукции ФДВ в группе 3 наблюдалось уменьшение ПМ до фонового значения (3,3 ± 0,21 пер. ед.; р > 0,05), причем уровень этого показателя был значительно ниже величин ПМ в группе 2

(р < 0,01), группе 4 (р < 0,05) и группе 5 (модель ФДВ + "Фогем"; р < 0,01). Через 48 ч после индукции ФДВ величина ПМ в группе 3 по-прежнему была на фоновом уровне, оставаясь достоверно ниже величины ПМ в группе 2 (р < 0,05), и не отличалась от значения ПМ в группе 4 (р > 0,05).

У животных группы 4 (модель ФДВ + "Johnson's suncare") через 6 ч после индукции ФДВ уровень ПМ повысился до 5,5 ± 0,36 пер. ед. (р < 0,01 по сравнению с контролем), что указывало на наличие воспаления в коже, хотя эта величина была достоверно ниже, чем в группе 2 (модель ФДВ; р < 0,01). Через 24 ч после облучения в этой группе отмечалось уменьшение значения ПМ до 4,9 + 0,34 пер. ед., хотя величина ПМ была достоверно больше, чем в группе 1 (р < 0,01), но значительно меньше, чем в группе 2 (р < 0,05). Через 48 ч значение ПМ в группе 4 уменьшилось до уровня фона (3,4 ± 0,28 пер. ед., р > 0,05).

Через 6 ч после индукции ФДВ у крыс группы 5 (модель ФДВ + "Фогем") также наблюдалось несущественное увеличение значения ПМ (3,6 ± 0,24 пер. ед.; р > 0,05 по сравнению с контролем). Величина ПМ в группе 5 незначительно превышала значение ПМ фона, но была существенно ниже аналогичного показателя группы 2 (модель ФДВ; р < 0,01) или группы 4 (модель ФДВ + "Johnson's suncare"; р < 0,05). Через 24 ч после облучения в группе 5 отмечалось существенное увеличение величины ПМ до 5,5 ± 0,34 пер. ед., что значительно превышало показатели контроля или фона (р < 0,01). Через 48 ч в этой группе наблюдалось значительное снижение величины ПМ до 3,8 ± 0,2 пер. ед. по сравнению со значением ПМ в этой же группе через 24 ч (р < 0,05). На данный срок значение ПМ в группе 5 было значительно ниже величины ПМ в группе 2 (модель ФДВ; р < 0,05).

На рис. 2-4 представлены результаты изучения динамики остальных показателей ЛДФ (А„, Авч и AJAB4) в группах крыс серии экспериментов А.

Как видно из этих данных, характер изменений показателей А„, Авч и AJAB4 в ходе проведенных экспериментов был примерно таким же, что и для показателя ПМ.

У животных группы 1 (контрольная группа) через 6 ч после облучения для этих показателей ДЦФ были получены следующие результаты: А„ - 0,24 ± 0,023 пер. ед., Авч - 0,15 ± 0,014 пер. ед., AJAB4 - 1,62 ± 0,027. Величины этих показателей, как и в случае показателя ПМ, свидетельствовали о незначительной воспалительной реакции кожи крыс на данный срок эксперимента. Через 24 ч после облучения значения параметров ЛДФ в этой группе снизились до фоновых значений (А, - 0,21 + 0,019 пер. ед.; Авч - 0,14 ± 0,015 пер. ед.; AJA„ - 1,51 ± 0,024; р > 0,05). Через 48 ч после облучения значения показателей Ав, Авч и Ав/Авч в контрольной группе по-прежнему оставались на фоновом уровне.

У крыс группы 2 (модель ФДВ) через 6 ч после облучения было обнаружено существенное увеличение показателей ЛДФ (Ав - 0,42 + 0,026 пер. ед.; Авч - 0,21 ± 0,022 пер. ед.; Ав/Авч - 1,93 ± 0,049), указывающее на развитие выраженной воспалительной реакции в коже животных, причем вышеперечисленные параметры достоверно превышали таковые в контрольной группе (р < 0,01).

0,5

0,4

5 0,3

d.

с

ш 0,2 0,1 о

□ фон э группа 1 ■ группа 2 ■ группа 3 Ыгруппа 4 и группа 5

_ 24 Время, ч

48

Рис. 2. Динамика амплитуды вазомоторных колебаний в серии экспериментов А у крыс: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Johnson's suncare" (группа 4), модель ФДВ + "Фогем" (группа 5); п=10.

0,25

0,2

S 0,15

Q. «

£ 0,1 <

0,05

□ фон Ш группа 1 ■ группа 2 ■ группа 3 Н группа 4 и группа 5

24 Время, ч

48

Рис. 3. Динамика амплитуды высокочастотных ритмов колебаний кровотока в серии экспериментов А у крыс: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Johnson's suncare" (группа 4), модель ФДВ + "Фогем" (группа 5); п=10.

2,5

=г 1,5

оо ^

m

0,5 0

□ фон э группа 1 и группа 2 ■ группа 3 ЕЗ группа 4 И группа 5

24 Время, ч

48

Рис. 4. Динамика отношения амплитуды вазомоторных колебаний к амплитуде высокочастотных ритмов колебаний кровотока в серии экспериментов А у крыс: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Johnson's suncare" (группа 4), модель ФДВ + "Фогем" (группа 5); п=10.

Через 24 ч у крыс группы 2 прослеживалась тенденция уменьшения значений исследуемых показателей ЛДФ, хотя эти показатели продолжали оставаться достоверно более высокими, чем в контрольной группе (Ав - 0,31 ± 0,025 пер. ед. (р < 0,01), Авч - 0,17 ± 0,013 пер. ед. (р < 0,05), А./Авч - 1,82 ± 0,024 (р < 0,05)). Через 48 ч после индукции ФДВ в группе 2 наблюдалось дальнейшее снижение величин А„, Авч и Ав/Авч (А„ - 0,24 ± 0,022 пер. ед., Авч - 0,15 ± 0,013 пер. ед., AJAB4 - 1,61 ± 0,027), которые, как видно из представленных диаграмм, тем не менее, оставались повышенными по сравнению с контролем, хотя в отличие от данных по ПМ на данный срок полученные результаты достоверно не отличались от значений показателей в контрольной группе (р > 0,05).

В группе 3 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%) через 6 ч после облучения исследованные показатели ЛДФ составляли 0,24 ± 0,025 пер. ед., 0,15 ± 0,014 пер. ед. и 1,62 ± 0,034 соответственно, незначительно превышая фоновые данные, но были достоверно ниже, чем в группе 2 (модель ФДВ; р < 0,01). Как в случае с параметром ПМ, по отношению к контрольной группе достоверных отличий на данный срок эксперимента не наблюдалось (р > 0,05). Через 24 ч после облучения значения исследованных показателей ЛДФ в группе 3 снижались до фоновых значений (А„ - 0,21 ± 0,015 пер. ед.; Авч - 0,13 ± 0,011 пер. ед.; Ав/Авч - 1,51 ± 0,027; р > 0,05), достоверность отличия полученных величин от значений показателей ЛДФ в группе 2 сохранялась (р < 0,05). Через 48 ч после облучения значения показателей Ав, Авч и Ав/Авч группе 3 по-прежнему оставались на

уровне фоновых данных (р > 0,05).

У крыс, получавших после индукции ФДВ препарат "Johnson's suncare" (группа 4), через 6 ч после облучения было зарегистрировано увеличение изучаемых показателей ЛДФ (А, - 0,27 ± 0,025 пер. ед. (р < 0,01); Авч - 0,16 ± 0,011 пер. ед. (р < 0,05); А„/Авч - 1,72 ± 0,024 (р < 0,05)), хотя степень воспаления и была менее выражена, чем в группе 2. Через 24 ч после облучения в этой группе наблюдалось снижение всех измеряемых показателей (Ав - 0,24 ±0,018 пер. ед., А„/Авч - 1,62 ± 0,026 (р < 0,05)), причем эти показатели были достоверно ниже параметров, наблюдаемых в группе 2 и группе 5 (модель ФДВ + "Фогем"; р < 0,05), в отличие от Авч - 0,15 ± 0,012 пер. ед (р > 0,05). Через 48 ч после облучения указанные показатели ЛДФ в группе 4 уменьшились до значений, которые практически не отличались от величин фона (А„ - 0,20 ± 0,015 пер. ед., Авч - 0,13 ± 0,014 пер. ед., Ав/А.ч - 1,51 ± 0,023; р > 0,05).

В группе 5 (модель ФДВ + "Фогем") показатели ЛДФ через 6 ч после облучения были достоверно снижены по отношению к группе 2 (модель ФДВ) (А„ - 0,21 ± 0,012 пер. ед., Авч - 0,13 ± 0,012 пер. ед., AJAB4 - 1,51 ± 0,027; р < 0,01). Следует отметить, что показатели ЛДФ в группе 5 практически не отличались от фоновых значений (р > 0,05). Через 24 ч после ФДВ в группе 5 (модель ФДВ + "Фогем") наблюдалось увеличение показателей ЛДФ (Ав — 0,31 ± 0,024 пер. ед. (р < 0,01); Авч - 0,16 ± 0,013 пер. ед. (р < 0,05); AJA„ - 1,82 ± 0,043 (р < 0,01)), которые существенно превышали значения фона и результаты, полученные в контрольной группе. Через 48 ч после ФДВ в группе 5 отмечалось значительное уменьшение показателей ЛДФ (Ав - 0,22 ±0,017 пер. ед.; Авч — 0,14 ± 0,012 пер. ед.; AJAB4 - 1,51 ± 0,025 (р < 0,05)) по сравнению с результатами, зарегистрированными в этой же группе через 24 ч.

При оценке воспалительной реакции кожи животных по эритеме и отеку через 6 ч после облучения в контрольной группе (группа 1) было отмечено слабое покраснение кожи (1 балл) и отсутствие отека (0 баллов). Оценка воспалительной реакции кожи через 6 ч после облучения в группе 2 (модель ФДВ) выявила наличие выраженной эритемы (3 балла) и выраженного отека (2 балла). В этот же срок эксперимента в группе 3 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%) воспалительная реакция характеризовалась слабой эритемой (1 балл) и слабым отеком (1 балл). В группе 4 (модель ФДВ + "Johnson's suncare") эритема была умеренной (2 балла), а отек - слабо выраженным (1 балл). В группе 5 (модель ФДВ + "Фогем") через 6 ч после облучения эритема была слабо выражена (1 балл), а отек вообще не наблюдался (0 баллов).

Через 24 ч облученные участки кожи крыс в группе 1 соответствовали показателям нормы (эритема - 0 баллов; отек - 0 баллов). У животных группы 2 через 24 ч после индукции ФДВ отмечалось уменьшение эритемы (2,5 балла) и отека (1,5 балла) по сравнению с наблюдениями, сделанными через 6 ч. На данное время наблюдения в группе 3, как и контрольной группе, эритема и отек не регистрировались (0 баллов). В группе 4 эритема уменьшилась до 1 балла, тогда как тяжесть отека оставалась прежней (1 балл). Эритемная реакция кожи животных в группе 5 в этот период времени была умеренно выраженной (2

J !

балла), а состояние кожной складки характеризовалось незначительным утолщением (1 балл).

Через 48 ч после облучения состояние исследуемых участков кожи животных в группе 1 (контрольная группа) и группе 3 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%) оставалось в пределах нормы (эритема и отек - по 0 баллов). В этот же период времени в группе 2 (модель ФДВ) обнаруживалось дальнейшее постепенное ослабление воспалительной реакции (эритема - 2 балла, отек - 1 балл). В группе 4 (модель ФДВ + "Johnson's suncare") гиперемия визуально не отмечалась (0 баллов), отек отсутствовал (0 баллов). В группе 5 (модель ФДВ + "Фогем") кожная гиперемия соответствовала 1 баллу, а отека не наблюдалось (0 баллов).

На рис. 5 и 6 представлены результаты, полученные в серии опытов Б у морских свинках с использованием метода лазерной биофотометрии, позволяющего проводить измерения коэффициентов отражения с "поверхностных" и "глубоких" структур кожи (К0тр.П01). и Котр.гл. соответственно), выраженных в условных единицах (у. ед.). Кроме того, результаты этих экспериментов оценивались по развитию эритемы и отека.

Рис. 5. Динамика коэффициента отражения от "поверхностных" структур кожи в серии экспериментов Б у морских свинок: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Спектр+" 0,05% (группа 4), модель ФДВ +"РЬоео(1ег1П МАХ" (группа 5), модель ФДВ + "АпШеШк ХЬ" (группа 6); п=10.

До облучения в группе 1 (контрольная группа) величины коэффициентов отражения К^пов. и К^р.^,. составляли 88,1 ± 1,0 у. ед. и 22,9 ± 0,9 у. ед. соответственно. В группе 2 (до облучения, но после нанесения и всасывания раствора гематопорфирина) коэффициенты Котр.пов. и Котр гл. были равны 84,8 ±1,2 у. ед. и 21,4 ± 0,6 у. ед. (р > 0,05) соответственно. После нанесения и всасывания раствора гематопорфирина и последующего нанесения и всасывания исследуемых

средств (но до облучения) для исследуемых препаратов были получены следующие коэффициенты отражения: "Спектр+" 0,1% (группа 3) - 82,7 ± 1,0 у. ед. (р > 0,05) и 17,7 ± 1,0 у. ед. (р < 0,05) соответственно; "Спектр+" 0,05% (группа 4) - 82,1 ± 1,4 у. ед. (р > 0,05) и 18,1 ± 1,3 у. ед. (р < 0,05) соответственно; "РЬоЫегш МАХ" (группа 5) - 82,3 ± 0,9 у. ед. и 20,8 ± 1,2 у. ед. (р > 0,05) соответственно; '\Anthelios ХЬ" (группа 6) - 78,8 ± 1,2 у. ед. и 16,0 ± 1,0 у. ед. (р < 0,05) соответственно; примечание: результаты измерений коэффициентов отражения сравнивались по отношению к группе 2, после нанесения фотосенсибилизтора, но до облучения.

5 группа 1 ■группа 2 ■ группа 3 И группа 4 н группа 5 и группа 6

до облуч.

Рис. б. Динамика коэффициента отражения от "глубоких" структур кожи в серии экспериментов Б у морские свинок: контрольная группа (группа 1), модель ФДВ (группа 2), модель ФДВ + "Спектр+" 0,1% (группа 3), модель ФДВ + "Спектр+" 0,05% (группа 4), модель ФДВ +"Р1^о<!егт МАХ" (группа 5), модель ФДВ + "АпШеШм ХЬ" (группа 6); п=10.

Через 6 ч после облучения в группе 1 (контрольная группа) коэффициенты отражения имели следующие значения: К^пов. - 76,5 + 1,2 у. ед. и К^^л. - 20,1 + 0,6 у. ед. (р < 0,05), достоверно отличаясь от показателей необлученной кожи в этой группе; эритемная реакция составила 1,5 балла, отек - 0,5 балла. Через 24 ч после облучения коэффициент К„Тр.п0В. незначительно увеличился до 79,6 ± 1,4 у. ед. (р < 0,05), тогда как коэффициент Котр.гл., наоборот, уменьшился, составив 16,5 ± 1,2 у. ед. (р < 0,01); эритема и отек были слабо выраженными (на уровне 1 балла). Через 48 ч после облучения коэффициенты Котр пов и К^,.™. увеличились до 84,4 ± 1,4 у. ед. (р > 0,05) и 19,8 ± 0,5 у. ед. (р < 0,05) соответственно, оставаясь ниже аналогичных показателей, полученных до облучения; эритема и отек, по оценкам, составляли 0,5 балла.

Через 6 ч после облучения животных в группе 2 (модель ФДВ) значения

коэффициентов отражения указывали на наличие явной воспалительной реакции (К0тр.пов. - 56,2 ± 1,0 у. ед.; Котр.гл. - 10,6 ± 0,75 у. ед; р < 0,05), причем полученные данные значительно отличались от значений показателей контрольной группы; наличие выраженной воспалительной реакции подтверждалось проведенной оценкой эритемы и отека (по 2 балла). Через 24 ч после облучения коэффициенты отражения существенно уменьшились (Котр.пов. - 48,6 ± 1,4 у. ед.; Котр.гл. - 4,1 ± 0,5 у. ед.; р < 0,01), что указывало на значительное усиление воспалительного процесса; эритема и отек по 3 балла. Через 48 ч после облучения наблюдаемое увеличение значений коэффициентов отражения свидетельствовало об ослаблении воспалительной реакции кожи (Котр.пов. - 58,7 ± 1,25 у. ед. (р < 0,01); К«>тр.гл. - 8,6 ± 0,8 у. ед. (р < 0,05)), хотя эти значения и оставались достоверно более низкими по сравнению с показателями контрольной группы; эритема и отек снизились до 2 баллов.

В группе 3 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,1%) через 6 ч после индукции ФДВ коэффициенты отражения имели следующие значения: К,^.,,,,.. - 75,7 ± 1,25 у. ед. (р < 0,01), Котр.гл. - 13,6 ± 1,1 у. ед. (р < 0,05), достоверно отличаясь от показателей группы 2 (модель ФДВ); эритема была слабой (1,2 балла), отек был также слабым (1 балл). В группе 4 (модель ФДВ + "Спектр+" 0,05%) через 6 ч после индукции ФДВ значения коэффициентов отражения также свидетельствовали о наличии воспалительной реакции: К,^.,,,,.. - 63,3 ± 1,5 у. ед. (р < 0,05) и Кот,,.™. - 9,5 ± 1,0 у. ед. (р < 0,05), причем воспалительная реакция в группе 4 была более выражена, чем в группе 3 (эритема - 2 балла, отек - 2 балла).

Через 24 ч после облучения в группах 3 и 4 было отмечено уменьшение коэффициентов отражения (группа 3: Котр.„ов. - 78, 2± 1,2 у. ед.; К^.™. -14,5 + 1,0 у. ед.; р < 0,01; группа 4: К^.,,,,.. - 70,5 ± 0,75 у. ед., К^.™. - 11,5 ± 1,1 у. ед.; р < 0,05), причем величины коэффициентов отражения в этих группах достоверно отличались от модели ФДВ. В группе 3 эритема и отек соответствовали 0,5 балла, а в группе 4-1,5 балла.

Через 48 ч после облучения значения коэффициентов отражения в группе 3 были на уровне значений показателей, зарегистрированных до облучения (Котр.пов.

- 82,9 ± 1,1 у. ед.; Котр.гл. - 16,4 ± 0,8 у. ед.; р > 0,05), тогда как эти коэффициенты в группе 4 не достигали исходных значений (Котр.пов. - 75,5 ± 1,3 у. ед. (р < 0,01), Котргл. - 14,5 + 0,9 у. ед. (р < 0,05)), достоверно отличаясь при этом от показателей морских свинок в группе 2 (модель ФДВ). В группе 3 эритема и отек отсутствовали (эритема и отек - по 0 баллов), а в группе 4 воспалительная реакция была слабой (эритема и отек - по 1 баллу).

Через 6 ч после индукции ФДВ в группе 5 (модель ФДВ + "РЬоЬёегш МАХ") коэффициенты отражения составляли: Котр пов. - 71,2 ± 1,3 у. ед. (р < 0,01), Котргл.

- 15,6 ± 0,9 у. ед. (р < 0,05), достоверно отличаясь от результатов, полученных в группе 2 (модель ФДВ); эритема составила 1,5 балла, отек - 1 балл. Через 24 ч значения коэффициентов отражения были равны: Котр „„„ - 75,6 ± 1,2 у. ед.; К„Тр гл

- 16,7 ± 1,0 у. ед.; р < 0,01), и достоверно отличались от данных полученных в группе 2; эритема и отек были слабыми, составляя по 1 баллу. Через 48 ч коэффициенты отражения в этой группе практически не отличались от исходных

показателей (Котр.пов. - 82,1 ± 1,6 у. ед.; Ко^л. - 19,7 ± 1,5 у. ед.; р > 0,05), признаков эритемы и отека не наблюдалось (по 0 баллов).

Через 6 ч после облучения в группе 6 (модель ФДВ + "Anthelios XL") величины коэффициентов отражения Котр пов и Котр гл составляли 67,2 ± 1,5 у. ед. и 9,9 ± 0,9 у. ед. (р < 0,05) соответственно, по отношению к данным полученным до облучения в этой группе; эритема и отек были на уровне 1,5 балла. Через 24 ч после индукции ФДВ коэффициенты отражения К^р пов и Котр гл были равны 72,8 ± 1,4 у. ед. (р < 0,01) и 11,1 ± 1,1 у. ед. (р < 0,05). соответственно, достоверно превышая аналогичные показатели в группе 2 (модель ФДВ), а эритема и отек были слабыми (по 1 баллу). Через 48 ч коэффициенты отражения полностью не восстанавливались (Котр.™,. - 77,6 ± 1,2 у. ед. (р < 0,01); К^гл. - 13,1 ± 0,9 у. ед. (р < 0,05)), достоверно отличаясь от показателей группы 2; незначительная воспалительная реакция сохранялась (эритема и отек - по 0,5 балла).

В целом, оценивая специфическую фармакологическую эффективность фотозащитных препаратов и композиций методом ЛДФ и с помощью традиционного метода оценки воспалительной реакции кожи по эритеме и отеку, можно сделать вывод о схожести характера динамики фотодинамического воспалительного процесса в коже, что дает возможность в дальнейшем сочетано использовать эти методы для поиска и сравнительного углубленного исследования фармакологической активности потенциальных фотозащитных средств и составов.

При этом важно оценивать эффективность действия фотозащитных средств как по отношению к результатам наблюдений, полученных в контрольной группе животных, так и по отношению к результатам измерений показателей ЛДФ на модели ФДВ. На основании представленных экспериментальных данных и диаграмм четко видна динамика воспалительного процесса как при нанесении на кожу животных только одного раствора гематопорфирина в отдельности, так и в сочетании с изучаемыми образцами фотозащитных препаратов и композиций. Особенно ярко воспалительная реакция проявлялась в группе 2 (модель ФДВ), в которой даже через 48 ч после облучения параметр ПМ составил 5,0 + 0,34 пер. ед., эритема - 2 балла, отек - 1 балл. На основании сравнения изучаемых образцов кремов и композиций явно видно, что использование композиции "Спектр +" 0,1% у крыс приводит к тому, что уже через 24 ч после облучения животных воспалительная реакция кожи исчезает, оставаясь в пределах нормы и при наблюдении через 48 ч. Показатели ЛДФ, эритемы и отека при использовании крема "Johnson's suncare" возвращаются к норме только через 48 ч после облучения. Данные, полученные при использовании линимента "Фогем", отличаются своей динамикой от данных, полученных при использовании препаратов "Спектр +" и "Johnson's suncare". Показано, что через 6 ч после облучения животных признаки воспаления после применения линимента "Фогем" были незначительно меньше, чем в группе животных, у которых использовали композицию "Спектр +", но через 24 ч воспалительная реакция кожи животных существенно усилилась (ПМ - 5,6 ± 0,34 пер. ед., эритема — 2 баллов, отек - 1 балл). Через 48 ч после облучения наблюдалось ослабление воспаления (ПМ - 3,8 ± 0,20 пер. ед., эритема - 1 балл, отек - 0 баллов).

f

*

Одним из объяснений наблюдаемого феномена может быть особенность консистенции линимента "Фогем", который представляет собой густую суспензию. Показано, что при нанесении этого линимента образуется тонкий сплошной слой, который, возможно, обладает более высокой способностью экранировать ультрафиолетовые лучи (280 - 320 нм), чем препараты "Спектр +" и "Johnson's suncare". По мнению Д.И. Рощупкина и М.Ю. Писцова (1984), именно эти лучи вызывают оксигемоглобиновую эритему, которая наступает через 3-4 ч после облучения. Причиной развития воспалительной реакции кожи через 24 ч после облучения при применении препарата "Фогем" может быть именно консистенция этого линимента, которая, предположительно, могла вызвать отсроченное по времени воспаление, обусловленное раздражающим действием препарата "Фогем" вследствие отсутствия в нем смягчающих (мазевых) компонентов.

При оценке фотозащитной эффективности изучаемых образцов препаратов и композиций методом лазерной биофотометрии и традиционным методом оценки воспалительной реакции кожи по эритеме и отеку, также как и при использовании метода ЛДФ и указанного традиционного метода, на основе полученных данных можно сделать вывод о схожести динамики показателей-маркеров фотодинамического воспалительного процесса.

Методом лазерной биофотометрии и путем оценки воспалительной реакции кожи по развитию эритемы и отека было установлено, что в условиях индукции ФДВ динамика восстановления коэффициентов отражения и ослабление эритемы и отека до нормальных значений при использовании лекарственной композиции "Спектр +" происходит более быстро и более полно, чем при применении крема "Anthelios XL". Так, через 24 ч после облучения в группе животных, которым наносили композицию "Спектр +" 0,1%, эритема и отек составили 0,5 балла, а в группе животных, у которых применяли препарат "Anthelios XL", эритема и отек были равны 1 баллу. Через 48 ч после облучения в группе животных, у которых применяли композиция "Спектр +", наблюдалось полное восстановление коэффициентов отражения и отсутствие эритемы и отека, тогда как в группе морских свинок, которым наносили крем "Anthelios XL", отклонения от нормы сохранялись.

При сравнении экспериментальных данных, полученных с использованием оригинальной лекарственной фотозащитной композиции "Спектр +" 0,1%, с результатами применения крема "Photoderm Мах" видно, что отклонения величин коэффициентов Котр. пов. и Котр.гл. от исходного уровня через 6 ч, 24 ч и 48 ч после облучения при использовании композиции "Спектр +" были меньше, чем при использовании препарата "Photoderm Мах". В эксперименте с применением лекарственной композиции "Спектр +" 0,1% эти отклонения составили для коэффициента К<„р.„ов.- 7, 4,5 и 0 у. ед. соответственно, а для коэффициента К0тр.гл. - 4,1, 3,2 и 1,3 у. ед. соответственно. При использовании крема "Photoderm Мах" отклонения коэффициентов отражения от исходных данных составили: Кэтр-пов. - 11Д, 6,7 и 0 у. ед. соответственно; Котр.™. - 5,2, 4,1 и 1,1 у. ед. соответственно. По значениям эритемы и отека лекарственная композиция "Спектр +" 0,1% превосходила крем "Photoderm Мах" на 0,5 балла. Эти данные

свидетельствуют о несколько более высокой эффективности лекарственной композиции "Спектр +" по сравнению с кремом "Photoderm Мах". При уменьшении концентрации гемина в 2 раза эффективность лекарственной композиции "Спектр +" уменьшалась в 1,1-1,4 раза.

При постановке аллергической пробы с нанесением 15% лекарственной композиции "Спектр +" на участки кожи спины морских свинок и постановке конъюнктивальной пробы с использованием 3% лекарственной композиции "Спектр +" было установлено отсутствие какого-либо раздражения и аллергических реакций на коже животных.

Таким образом, оценивая эффективность изучаемых препаратов и композиций по результатам, полученным с использованием методов ЛДФ, лазерной биофотометрии и оценки эритемы и отека, можно заключить, что наиболее эффективным из исследованных препаратов в условиях фотодинамического воздействия является новая отечественная лекарственная композиция "Спектр +".

ВЫВОДЫ

1. Теоретически обоснован выбор состава действующих веществ новой оригинальной лекарственной композиции "Спектр +" (пара-аминобезойная кислота 2,0 г; гемин 0,1 г; персиковое масло 25,0 г; диметилсульфоксид 10,0 г; 2%-ный водный раствор бета-каротина), составлена пропись этой композиции и описан способ ее приготовления.

2. При оценке фармакологического эффекта по развитию эритемы и отека установлено, что на модели фотодинамического воспаления кожи у крыс и морских свинок новая лекарственная композиция "Спектр +" по выраженности фотозащитного действия превосходит эффективность известных зарубежных солнцезащитных кремов ("Johnson's suncare" "Photoderm Max", "Anthelios XL") и отечественного линимента "Фогем".

3. Методом лазерной допплеровской флуометрии показано, что при использовании препарата "Спектр +" восстановление исследуемых показателей микроциркуляции у крыс с фотодинамическим воспалением кожи до значений нормы происходит через 24 часа после облучения фотосенсибилизированных животных, тогда как при использовании препаратов "Johnson's suncare" и "Фогем" это действие наблюдается через 48 часов, причем в случае применения линимента "Фогем" полного восстановления этих показателей не достигается.

4. Методом лазерной биофотометрии обнаружено, что на модели фотодинамического воспаления кожи у морских свинок эффективность лекарственной композиции "Спектр +" сопоставима с эффективностью крема "Photoderm Мах" и превышает эффективность крема "Anthelios XL".

5. Новая лекарственная композиция "Спектр +" при нанесении на кожу не вызывает раздражения и аллергических реакций у морских свинок.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что применение методов лазерной допплеровской флуометрии и лазерной биофотометрии дает более детальную, количественную, статистически достоверную информацию об экспериментально индуцированном фотодинамическом воспалительном процессе в коже животных по сравнению с официальной методикой исследования. Таким образом, проведенное исследование может служить основой для разработки новых методических рекомендаций, позволяющих проводить более адекватную оценку результатов экспериментов, связанных с воздействием на кожу животных света различной длины, а также для оценки специфической фармакологической активности применяемых в практике и новых потенциальных фотозащитных средств.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Терман O.A., Гладких С.П. Миславский О.В., Кухарева E.H. Оценка выраженности кожной эритемы с помощью лазерной допплеровской флоуметрии. // Материалы Второго Российского конгресса по патофизиологии.-Москва, 2000.-С. 274.

2. Терман O.A., Гладких С.П. Миславский О.В., Кухарева E.H. Эффективность фотозащитных препаратов по данным ЛДФ. // Под ред. В.И. Козлова. Применение лазерной допплеровской флоуметрии в медицинской практике: Материалы Третьего Всероссийского симпозиума-Москва, 13-14 декабря 2000.-С. 90-93.

3. Терман O.A., Гладких С.П. Миславский О.В., Кухарева E.H. Состояние кожной гемомикроциркуляции как критерий подбора фотопротекторов. // Под ред. A.B. Гейница, Г.И. Цыгановой. Материалы Международной конференции "Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века" и научно-практической конференции Северо-Западного региона Российской Федерации. Ч. 2.-Санкт-Петербург, 21-22 июня 2001.-С. 504-505.

4. Алексеев Ю.В., Гладких С.П. Миславский О.В., Рудый P.O. Роль эндогенных порфиринов в фотодинамическом повреждении кожи и особенности применения лазеротерапии при некоторых заболеваниях с патологией порфиринового обмена. // Под ред. A.B. Гейница, Г.И. Цыгановой. Материалы Международной конференции "Лазерные и информационные технологии в медицине XXI века" и научно-практической конференции Северо-Западного региона Российской Федерации. Ч. 2.-Санкт-Петербург, 21-22 июня 2001-С. 406-407.

5. Гладких С.П., Алексеев Ю.В., Миславский О.В. Изучение специфической активности нового Универсального фотозащитного лекарственного средства (УФЛС) в экспериментальных и клинических условиях. // Материалы Научно-практической конференции российских ученых "Актуальные аспекты лазерной медицины".-Москва-Калуга, 3-5 октября 2002.-С. 316-318.

6. Гладких С.П., Алексеев Ю.В., Миславский О.В., Макарова Ю.Б., Потекаев H.H. Исследование фотозащитной активности препаратов на модели фотодинамического воспаления кожи. // Материалы Первого Российского конгресса дерматологов. -Санкт-Петербург, 23-26 сентября 2003.-С. 167.

7. Гладких С.П., Алексеев Ю.В., Миславский О.В., Макарова Ю.Б. Новый метод оценки эффективности фотозащитных препаратов на модели фотодинамического воспаления на основе лазерной биофотометрии. // Материалы Первой научно-практической конференции Северо-Западного региона Российской Федерации с международным участием .-Санкт-Петербург, 20-21 ноября 2003.-С. 183-185.

Подписано к печати 12 01 04 г Заказ № 5344 Тираж 100 экз Формат 60 х 90 Уел печ. 1/16 N 1,9

ООО «Фирма Блок», г г Москва, ул Русаковская , д 1 тел 264-30-73 Изготовление брошюр, авторефератов и диссертаций

РЫБ Русский фонд

2006-4 20652

1 s m ш

i

Актуальность В последнее время возросла актуальность защиты кожи человека от солнечных лучей, инициирующих, как известно, развитие различных фотодерматозов, старение кожи и раковые заболевания (Стрижинский А.Д., 1995). В связи с этим возникает необходимость разработки лекарственных препаратов для терапии фотодерматозов и фотозависимых солнечная поражений кожи (пигментная экзема, ксеродерма, оспа, крапивница, солнечная световая профессиональные заболевания, дискоидная красная волчанка, системная красная волчанка, порфириновая болезнь, розацеа) и профилактики состояний, связанных с повышенной светочувствительностью кожи. Как следует из данных литературы, существующие в настоящие время средства для наружного применения обеспечивают защиту только от непосредственного солнечного излучения, находящегося в ультрафиолетовой части спектра области А с длинами волн 320 350 нм и области В 280 315нм (Фойстем Г. и др., 1990; Menter J.M., 1990; Lowe N.J., Моу R.L., 1991; Стрижинский А.Д., 1995). Незначительная фотозащитных эффективность лекарственных отечественных средств при и зарубежных биологически (максимумы вышеназванных заболеваниях объясняется тем, что в качестве поглощающие, как правило, эритемные лучи активных соединений в состав этих препаратов входят вещества, поглощения 260 и 290 нм) (Гладких СП., и др., 1986). Причиной этого является тот факт, что при разработке фотозащитных препаратов производители учитывают данные эритемной эффективности в основном в области 260 315нм (Фойстем Г. и др., 1990; Стрижинский А.Д., 1995), хотя поверхности земли достигает только длинноволновая составляющая ультрафиолетового спектра солнечного света в диапазоне 320 400 нм (Reifshyder W., 1965; ОдумЮ., 1975). Однако следует подчеркнуть, что необходимость защиты от солнечного излучения только как от физического фактора воздействия является лишь частью проблемы. Помимо этого, существует необходимость защиты от факторов, способствующих повреждающему действию солнечного излучения. К таким факторам относятся фотосенсибилизаторы, содержащиеся в коже человека порфирины (Подымов В.К. и др. 1979), или фотосенсибилизаторы, попадающие на нее из вне, которые включают в себя такие химические вещества как красители (эозин, метиленовый синий), некоторые соли марганца, железа, ртути, мышьяка, каменноугольная смола и ее продукты и др.(БМЭ, т. 26,1985). Особое место среди перечисленных фотосенсибилизаторов занимают порфирины. Результаты, проведенных Алексеевым Ю.В. Гладких СП. с соавторами (1985), исследований показали, что эффективными для лечения и профилактики кожных волчанка, порфириновая болезнь, при которых таких заболеваний, как дискоидная красная волчанка, системная красная увеличено содержание порфиринов в коже, могут быть лекарственные средства, в которых в качестве биологически активного компонента присутствует химическое соединение интенсивно поглощающее световую энергию в спектре действия порфиринов (400 410 нм). В настоящее Однако время таким лекарственным линимента средством в является качестве из-за линимент "Фогем" (Гладких СП. и др., 1986). применение средства "Фогем" фотозащитного недостаточно эффективно особенности лекарственной формы данного препарата. Для универсального применения фотозащитного препарата в условиях, связанных с повышенной инсоляцией, необходимо расширить спектр его фотозащитного действия, кроме того, необходимо учитывать молекулярные механизмы повреждающего действия солнечного света (как прямого, так и опосредованного через кислород) на элементы клеточных структур. Учитывая порфиринов, важное значение фотодинамического для действия новой теоретической основой разработки лекарственной композиции "Спектр+" были данные о способности эндогенного кислорода поглощать в области видимого света и ближнего инфракрасного излучения и о способности эндогенного кислорода переходить в синглетное состояние при отсутствии фотосенсибилизатора (Данилов В.П., 1990). Ранее, при разработке лекарственного препарата "Фогем", это обстоятельство авторами не учитывалось. Указанные обстоятельства явились основанием для разработки новой фотозащитной лекарственной композиции "Спектр+". Цель исследования На основании имеющихся данных о действии традиционных фотозащитных препаратов и линимента "Фогем" и новых данных о молекулярных механизмах воздействия света на биологические объекты теоретически обосновать состав новой лекарственной композиции исследование "Спектр и провести действия экспериментальное этой лекарственной фотозащитного композиции на моделях фотодинамического воспаления кожи у крыс и морских свинок в сравнении с известными фотозащитными препаратами.Задачи исследования 1. Разработать теоретическую концепцию создания оригинальных фотозащитных лекарственных средств с учетом повреждающего воздействия на кожу не только ультрафиолетовых лучей типа А и В, но и лучей в видимой и инфракрасной области спектра; обосновать подбор активных ингредиентов для новой лекарственной композиции "Спектр и составить пропись этой композиции с описанием технологии ее приготовления. 2. Исследовать фотозащитное действие лекарственной композиции "Спектр в сравнении с линиментом "Фогем" и широко используемыми в настоящее время фотозащитными составами "Johnsons suncare", "Photoderai Мах" и "Anthelios" на экспериментальной модели фотодинамического воспаления (ФДВ) кожи у крыс и морских свинок путем оценки фармакологического эффекта по развитию эритемы и отека. 3. Изучить фотозащитное действие лекарственной композиции "Спектр в сравнении с линиментом "Фогем" и солнцезащитным кремом "Johnsons suncare" на экспериментальной модели ФДВ кожи у крыс методом лазерной допплеровской флоуметрии с компьютерной обработкой экспериментальных данных. 4. Изучить фотозащитное действие лекарственной композиции "Спектр в сравнении с высокоэффективными солнцезащитными кремами "Photoderai Мах" и "Anthelios" на экспериментальной модели ФДВ кожи а у морских свинок методом указанным лазерной методом биофотометрии, также исследовать дозозависимый эффект лекарственной композиции "Спектр 5. Оценить возможные аллергизирующие свойства лекарственной композиции "Спектр у морских свинок.Научная новизна 1. Впервые предложена новая концепция разработки составов фотозащитных лекарственных средств, основанная на учете не только повреждающего воздействия на кожу ультрафиолетовых лучей типа А и В, но и видимого и ближнего инфракрасного света. 2. С использованием методов компьютерной лазерной о допплеровской флоуметрии и лазерной биофотометрии впервые получены экспериментальные данные, свидетельствующие высокой фотозащитной активности оригинальной отечественной лекарственной композиции "Спектр 3. Новая оригинальная лекарственная композиция "Спектр обладает более высоким фотозащитным действием на моделях фотодинамического повреждения кожи у экспериментальных животных по сравнению с широко используемыми зарубежными солнцезащитными кремами "Photoderm Мах" и "Anthelios XL" и отечественным препаратом "Фогем". 4. Впервые использованы прецизионные инструментальные методы исследования (лазерная допплеровская флоуметрия и лазерная биофотометрия) для количественной оценки эффективности фотозащитных препаратов на модели ФДВ. Практическая значимость Результаты экспериментального изучения специфической фармакологической активности новой оригинальной лекарственной композиции "Спектр представляют собой основу для создания нового отечественного фотозащитного лекарственного препарата, который должен обеспечить с высокой степенью эффективности защиту кожи человека от воздействия световых лучей в диапазоне длин волн 280 1500 нм.

Выводы

1. Теоретически обоснован выбор состава действующих веществ новой оригинальной лекарственной композиции "Спектр +" (пара-аминобезойная кислота 2,0 г; гемин 0,1 г; персиковое масло 25,0 г; диметилсульфоксид 10,0 г; 2%-ный водный раствор бета-каротина), составлена пропись композиции и описан способ ее приготовления.

2. При оценке фармакологического эффекта по развитию эритемы и отека установлено, что на модели фотодинамического воспаления кожи у крыс и морских свинок новая лекарственная композиция "Спектр +" по выраженности фотозащитного действия превосходит эффективность известных зарубежных солнцезащитных кремов ("Johnson's suncare" "Photoderm Max", "Anthelios XL") и отечественного линимента "Фогем".

3. Методом лазерной допплеровской флоуметрии показано, что при использовании препарата "Спектр +" восстановление исследуемых показателей микроциркуляции у крыс с фотодинамйческим воспалением кожи до значений нормы происходит через 24 часа после облучения фотосенсибилизированных животных, тогда как при использовании препаратов "Johnson's suncare" и "Фогем" это действие наблюдается через 48 часов, причем в случае применения линимента "Фогем" полного восстановления этих показателей не достигается.

4. Методом лазерной биофотометрии обнаружено, что на модели фотодинамического воспаления кожи у морских свинок эффективность лекарственной композиции "Спектр +" сопоставима с эффективностью крема "Photoderm Мах" и превышает эффективность крема "Anthelios XL".

5. Новая лекарственная композиция "Спектр +" при нанесении на кожу не вызывает раздражения и аллергических реакций у морских свинок.

Пратические рекомендации

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что применение методов лазерной допплеровской флоуметрии и лазерной биофотометрии дает более детальную, количественную, статистически достоверную информацию об экспериментально индуцированном фотодинамическом воспалительном процессе в коже животных по сравнению с официальной методикой исследования. Таким образом, проведенное исследование может служить основой для разработки новых методических рекомендаций, позволяющих проводить более адекватную оценку результатов экспериментов, связанных с воздействием' на кожу животных света различной длины, а также для оценки специфической фармакологической активности применяемых в практике и новых потенциальных фотозащитных средств.