Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологические свойства азагетероциклических производных янтарной кислоты и азолопиримидинов

дои- & ¿Ч.иг-ъь- ихтг. л/£ ос-е с г ¿ь-.ш.у^

всероссийский научный цевдр по безопасности биологически активных веществ.

На правах рукописи Для служебного пользования ■Экз.* '¿У- ' ' ■ '

.■"■ • й: и (I и ~

Горбенко Наталья Ивановна

ФАРМАКОЛОГИЧЕХЖИЕ. СВОЙСТВА АЗАГЕТЕРОЩШИЧЕСКИХ ПРОИЗВОДНЫХ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ И А30Л0ЩРИМИЦИН0В ■

14.00.25 - фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Купавна - 1993 г.

Работа выполнена в лаборатории биологических испытаний химических соединений Украинского НИИ фармакотерапии эндокринных заболеваний

Научные руководители:кандидат медицинских наук А.А.Кириченко доктор медицинских наук В.В.Полтора«

Официальные оппоненты:доктор медицинских наук А.Е.Успенский кандидат медицинских наук Л.Г.Муляр

Ведущая организация: ИМ фармакологии РАШ

10

Защита состоится " и^ССЬЛ. 1993г. в 10 час. на заседании специализированного совета Л 090.01.02. при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ ( Московская обл., п. Старая КуПавна, ул. Кирова, 23)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Всероссийского научного центра по безопасности биологически активных веществ .

Автореферат разослан Ч" ¿¿Л^ЭЭЗг.

Ученый секретарь специализированного совета кандидат биологических наук

Т.Н.РоСакидзе

Актуальность проблемы. Одной из приоритетных задач фармакологии является изучение оригинальных, биологически активных субстанций и создание на их основе высокоэффективных и низкотоксичннх лекарственных препаратов. К важным направлениям в этой области относится поиск пероральных антидиабетических средств, которые позволят решить проблему реальной компенсации сахарного диабета и предотвратят развитие специфических осложнений, являющихся основной причиной инвалидазации и смертности бодышх. современные схемы терапии, направле1рше на ликвидацию инсулиновой недостаточности, не способны обеспечить длительную ремиссию при перром типе заболевания и предупредить развитие абсолютной инсулиновой зависимости - при втором. '

'Сложившаяся в последние годы мультигенная концепция патогенеза сахарного диабета позволила обосновать новые подходы к его лечению, соотвбтсвенно которым приоритет принадлежит препаратам, биологическое действие которых не ограничивается-только гипогликеми-зирущим эффектом, предпочтителен широкий спектр влияния на различные патогенетические звенья: предупреждение или ограничение аутоиммунной деструкции панкреатических островков,стимулирование регенерации ß-клегок, улучшение толерантности к глюкозе, ингибиро-вание свободно радикального окисления липидов (Ефимов A.C., Полто-рак В.В., 1989; Oberlay L.W., .'1988).

Большими потенциальными возможностями в плане комплексных анти-ди абетических свойств наделены азагетероциклические производные янтарной кислоты и азолопиримидинов, содержащие, в своей структуре дескрипторные фрагменты, которые обеспечивают проявление сахаро-снижающей, противовоспалительной, иммуномодулирущей и антиокси-дацтной активностей. Кроме того,-включение в состав молекулы природного метаболита янтарной кислоты способствует снижению токсичности и повышению биодоступности, что создает реальные предпосылки для создания на их основе высокоэффективных и безвредных лекарственных средств (Черных В.П., Гриценко М.С., Гридасов В.И, 1991).

В связи с вышеизложенным представляется перспективным изучение фармакологических свойств синтезированных азагетероциклических производных янтарной кислоты и азолопйримидинои с целью расширения спектра пероральннх препаратов для лечения диабета и связанных' с ним состояний.

Работа выполнена в соответствии с основными направлениями науч-, на исследовательских работ Украинского НИИ фармакотерапии эндок- . ринных заболеваний: "Изучение роли иммунных механизмов в эволюции сахарного диабета и эффективности специфической терапии, поиск и исследование новых антидиабетических средств среди производных карбоновых кислот" (Л госрегистрации 01.9.040345); "Изучение роли аутоиммунитета в эволюции сахарного диабета и эффективности специфической терапии. Поиск и исследование новых антидиабетических средств - производных карбоновых кислот" (* госрегистрации 01.89., 005520).

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работа явилось установление зависимости фармакологической активности от химической структуры в ряду взагетэроциклических производных янтарной кислоты и азолопиримидинов (51 вещество), а также отбор наиболее перспективной субстанции с.комплексным антидиабетическим действием и проведение ее доклинического изучения.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи: 1

- оценить логико-структурными методами возможный спектр биологической активности вновь синтезированных соединений;

- изучить общее действие и острую токсичность указанных веществ;

- с учетом результатов, компьютерного прогноза провести фармакологический скрининг-51 производного янтарной кислоты й азолопиримидинов на предмет выявления у них гипогликемического, ней-ротропного и анальгетического действия;

- исследовать специфическое (антидиабетическое) действие наиболее активного соединения на моделях абсолютной и относительной инсу-линовой недостаточности (сахарный диабет I и II типов);

- изучить хроническую токсичность отобранной субстанции.

Научная новизна. Впервые проведена логико-структурная оценка возможного спектра биологического действия 51 вновь синтезированного производного янтарной кислоты и азолопиримидинов, экспериментально изучена зависимость их фармакологической активности от химической структуры. Выявлен ряд соединений с выраженным гипоглике-мическим, анальгетическим, нейротропннм и иммуномодулирущим действием. Проведено доклиническое изучение специфической активности и токсических свойств Я-имида 4-(Н1-Оу тил(н)уре идо сульфонил)сукцин-

аниловой кислоты (условное название - сукциоан) как потенциального препарата, обладающего комплексным антидиабетическим действием.

Практическая значимость работы. Установлены определенные закономерности зависимости фармакологической активности от химической структуры 51 производного янтарной кислоты и азолопиримидинов, которые нашли отражение в рекомендациях по дальнейшему целенаправленному синтезу биологически активных веществ в изучаемом ряду соединений и пополнили банк данных программ ОРАКУЛ и НАТАР информацией о новых дескрилторшх центрах. Выявленные закономерности связи "строение действие" в изученных структурно-логических рядах используются при проведении научных исследований и в учебном процессе на кафедрах органической и фармацевтической химии, а также фармакотерапии Украинской фармацевтической академии. По результатам фармакологического изучения сукцибана и фэнсукцинала ф-фенилэтиламид-2-оксисукцин аниловой кислоты) в настоящее время составляется пакет нормативно-технической документации для' представления в фармакологический комитет. Значимость и новизна проведенных исследований подтверждена авторским свидетельством.

Апробация работы. Основное содержание работы излагалось на научных конференциях молодых ученых и специалистов Украинского НИИ фармакотерапии эндокринных заболеваний (Харьков, 1990 г), и Государственного центра лекарственных средств Украины (Харьков,.1991 г); XIII съезде'Украинского физиологического общества имени Й.П.Павлова (Харьков, 1990 г); VI съезде фармакологов УССР ( Харьков, 1990 г); IV'конгрессе международной федерации украинских врачебных обществ (Харьков, 1992 г) и др. ■

Публикации. Материалы диссертации отражена в Ю печатных работах, в" том числе 1 авторском свидетельстве (без права опубликования в открытой печати).

Объем и. структура.диссертации. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста; состоит из введения, 6 глав, заключения и выводов; содержит 14 рис. и 34 табл. Библиографический список включает 206 наименований, в том числе 85 зарубежных авторов.

, Основные положения, выносимые на защиту; 1. Установленные закономерности зависимости фармакологической активности от химической структуры в ряду азагетероциклических

производных янтарной кислоты и азолопиримидинов. 2. Специфическая активность и хроническая токсичность й-имида 4- (и1 -бутил (н) уреидосульфонил) сукщшаииловой. кислоты ( сукцибана), обладающего комплексным антидиабетическим действием.

основное содержание работы

1.Современные проблемы.пероральной терапии сахарного диабета и перспективность поиска новых антидиабетических средств в ряду производных янтарной кислоты и азолопиримидинов.

В обзоре литературы отражены сведения о новых подходах к фармакотерапии сахарного диабета и связанных с ним состояний. Обосновывается необходимость дополнения арсенала используемых лекарственных средств препаратами, направленными на устранение доминирующих звеньев диабетогенеза и обладающих, наряду с гшюгликемйческим эффектом иммуномодулирующими, антиоксидантными и регенеративными свойствами. Рассматривается широкий спектр фармакологической активности производных янтарной кислоты и азолопиримидинов, свидетельствующий о перспективности поиска в указанном ряду высокоэффективных и Низкотоксичных соединений с комплексным антидиабетическим действием.

2.Материалы и метода исследований

Продмотом фармакологического изучения явились впервые синтезированные азагетероцйклические производные янтарной кислота и азолопиримидинов (51 вещество), представленные следующими структурными группами:

1. 1,4-Дигидропиримадо[1,2-а]бензимидазолы (соединения 1-14);

я»

2. 4,7-Дигидро-1,2,4-триазоло[1,5-а]пиримидины (соединения 15-32);

6. а- Бенцшлсушкншгалсгшо кислоты. (сооданшгая 49-51). вшсосна-сн-соон

Изучаемые вещества применяли в виде 3-656 тонкодисперсной водной суспензии, стабилизированной твином-80. Первичный фармакологический скрининг 51 исследуемого производного с целью вявления анальгатиче-ской активности проводили на модели "уксусных корчей", используя в качестве препаратов сравнения анальгин и вольтарон в эффективных дозах. Сахаросникающеэ действие исследуемых субстанций изучали согласно методическим рекомендациям (Полторак В.В., Покрышшн В.И. 1984),. сопоставляя с эффектом.Оукарбдна и глибенкламида..Уровень глюкозы в крови экспериментальных животных определяли глюкойооксидазным методом с применением анализатора "Эксан-Г". Нейротропныэ свойства соединений оценивали по тесту взаимодействия с этаминал-натрием, сравнивая с активностью аминазина и кофеин-бензоата натрия.

• При изучении специфического (антидиабетического) действия и хронической токсичности сукцибана руководствовались методическими.ре-

комендациями по экспериментальному моделированию сахарного диабета (Полторак В.В., Блох К.О., Малашенко A.M., 1991) и требованиями к доклиническому изучению общетоксического действия новых фармакологических вещбсгв. В процессе выполнения диссертационной работы использовано 3030 лабораторных животных, в том числе 1330 белых мышей, 1520 крыс популяции Вистар, 60 мышей'линии BAlb/c и 120 мышей (CBAXC57BV6) Fj.

Полученные результаты обработаны статистически с применением критерия Стьюдента.

3.Компьютерное прогнозирование биологической активности азаге-.тероциклических производных янтарной кислоты и азолопирими-динов на основе логико-структурных методов анализа.

. Оценку возможных видов биологической активности изучаемых соединений проводили по комплексу программ ОРАКУЛ и НАТАР с учетом .коэффициента доверия /Д/, характеризующего вероятность проявления признака, и коэффициента еффективности /Э/, отражающего прогностическую ценность дескриптора/Полученные результаты свидетельствуют о широком спектре потенцйальйого фармакологического действия исследуемых веществ, включая иммуномодулйрувдие, антйаллергичес-кие, противовоспалительные , гийотензивные й сосудорасширяющие свойства (табл. i). При этом, согласно компьютерному анализу, с максимальной степенью вероятности в данном ряду соединений прогнозируется проявление гипогликемической, внальгетйческой и нейро-тропной активности, что послужило основанием для определения направленности фармакологического скрининга.

4,Зависимость фармакологической активности от химической структуры в ряду азагетероциклических производных янтарной кислоты и азолопиримиданов.

В результате изучения острой токсичности исследуемых производных, установлено, что, согласно классификации Сидорова К.К. (1973), 34 соединения (66,756) относятся к группе умеренно или малотоксичных веществ, а 17 структур (33,3%) принадлежат к разряду

Таблица 1.

Результаты компьютерного прогнозирования фармакологической активности азагетероциклических производных янтарной кислоты и дигидроазолошфимидинов по программе ОРАКУЛ и НЛТАР

* п/п Предполагаемый вид фармакологического действ. Кол- во. соед. Шифр соединений Коэффициент доверия КоэЙмциент эффективности О)

1 Регулирующее углеводный обмен . 38 1-4,6-10,12-24 26,27,30-32,36 37,39-43,45-47 51 0/,09-0,49 / / 6,1-32,5

2 Регулирующее метаболизм 51 1-51 0,18-0,63 1,4-4,8

3 Анальгетиче-' скоё ■ 41 4-14,17-21,2428, 30-32,3448,50,51 0,11-0,33 2,9-8,6

4 Противовоспалительное 51 1-51 0,12-0,69 4,3-10,3

5 Сосудорасширяющее . v 47 1-35.37-43,4548,51 0,11-0,25 1,9-4,2

6 Иммуномодули-рующее 39 1-36,41,42,44, 46 ' - 0,24-0,83 3,4-6,2

7 Седативное 48 1-43,46-50 ' 0,11-0,31 2,7-7,5

8 1'ранквилизи-. рующее 51 1т-51 ' - 0,09-0,47 2,8-15,3

9 Гипотензивное 51 1-51 0,15-0,47 2,2-7,0

10 Антиаллергическое 48 1-48 0,12-0,84 4,1-28,6 ;

11 Гипогликеми-ческое 46 1-30, 32-3/, 36-43,44-47,50 0,62-0,97 2,2-3,1 .

практически безвредных. Из всего массива изучаемых веществ наименее токсичными оказались Я-имили и-ашдосульфонилсуквднанилових ' кислот, а наиболее - производные пиразоло- и триазоло-[1,5-а]пири-мидоща с незамещенными фенильными радикалами.

Проведенная оценка гипогликемической активности исследуемых производных позволила выявить 20 соединений, оказывающих -в различ- ' ной степени сахароснижающий эффект, что в 42% случаев совпадает с даниными компьютерного прогноза для этого вида фармакологического действия. Следует отметить повышение сахаросшжающих свойств при . введении в пиримидшгавую структуру циклических заместителей (да-, гйдронафталина, циклопентана, ийдена), а также остатков сукЦинами-новой кислоты. Максимальный гипогликёмический эффект, сопоставимый по степени выраженности с глибешмамидоМ, проявило соединение 34 , содержащее бензилиденциклопентановый фрагмент. Среди производных .сукцинаниловых кислот сахароснижающую активность, не уступающую букарбану, проявила вещества 48 и 39, представляющие' собой соответственно р-фенилэтиламид 2-оксйсукцинаниловоЙ кислоты й н-имид 4- (п' -буткл (н )уреидосульфс!млсукшшшшловой кислоты .

При изучении анальгетической активности выявлено 7 структур, оказывающих обезболивающее действие, сравнимое с аналогичным у вольтвреня и анальгина в эффективных дозах. Наличие в составе производных п-хлорфенильного, толуидильного и фенилэтиламинного и сукцинамового радикалов способствовало усилению угнетающего влияния соединений на экспериментальную болевую реакцию: (снижение ко-.личества "уксусных корчей" составило Ь7,8-71,036 по сравнению с контролем).

Максимальную анальгетическую активность,.превосходящую действие вольтарена, наблюдали в группе дигидротрйазоло[1,5-а]пйрймндинов при введении в триазольное кольцо остатка.сукцинаминовой кислоты, а в пиримидиновую структуру - фепила (соединение 28).

Результаты изучения Мейротропннх свойств исследуемых веществ по тесту взаимодействия с этаминал-натрием позволяют сделать вывод о преимущественном депримирующем влиянии азолопиримидинов на центральную нервную систему, тогда как производные сукцинаминовых Кислот практически не оказывали изменяли действие барбитуратов. Следует отметить, что пролонгированию сна способствовало наличие в структуре веществ галогенарилов. Выявлены соединения (4,9), уд- '

линнявдие наркотический сон на 109,5-118,по сравнению с контролем, что почти в 2 раза превышает активность аминазина.

Учитывая актуальность поиска антидиабетических средств, сочетающих в себе наряду с гипоглшсемической активностью способность предупреждать или ограничивать аутоиммунную деструкцию иисулин-продуцирущего аппарата поджелудочной железы, изучались иммуномо-дулирующйе. свойства соединений .39 и 48, проявивших выраженный и продолжительный сахароснижающий эффект. Результаты проведенных экспериментов показали, что направленность иммуномодулирувдего влияния изучаемых соединений определяется выбором дозы и экспериментальной модели, на которой проводится исследование. Так, р-феНилэ.тиламид сукцинаниловой кислоты оказывал, супрессивное действие на интенсивность антителообразовяния й п то же время стимулировал клеточное звано иммунного ответа только в дозе 2,5 мг/кг, тогда как ее 10-кратное увеличение приводило к потере данного вида активности. Несколько иным характером иммуномодулирующего действия отличалось вещество 39 (N-имид 4-<н!-бутил(н)уреидосульфонил)-сукцинаниловой кислоты), которое независимо от дозы не оказывало достоверного влияния на интенсивность гуморального иммунного ответа, но проявляло выраженное йммунодепрессивное действие, соответствующее уровню активности левамизола, ингйбируя реакцию гиперчув-ствйтельНости замедленного типа.

Выраженное и стабильное сахароснижащее действие соединения 39 (сукцйбан) в сочетании с иммуномодулируюнщми свойствами, доступностью химического синтеза, а также дашшыми литературы об ангио-протекторнчх свойствах производных бутамида (с.Bunting,1988) .послужили основанием для проведения углубленного изучения специфической активности и хронической токсичности этой субстанции в качестве потенциального антидиабетического средства

Б.Изучение специфической (антидиабетической) активности сукцибана.

Исследование антидиабетических свойств изучаемого вещества проводили на моделях химически-йндуцируемой абсолютной и относительной инсулиновой недостаточности, которые по ведущим патогенетическим механизмам и клиническим характеристикам максимально сходны с сахарным диабетом I и II типа у человека на различных стадиях па-

тологического процесса, соответственно ийсулинзависимый (ИЗСД) и инсулиндаяявисишй (ИНЗСД) сахарный диабет. В результате проведенных исследований установлено, что сукцибан при остром перораль-ном введении в максимально эйюктившх дозах проявляет стойкий са-хароснижающий эффект у животных с абсолютной и относительной инсулиновой недостаточностью, достигающий максимума через 4 часа и по степени выраженности значительно превосходящий гипогликемизирущее действие букарбана (табл.2,3).

При оценке протективнаго эффекта исследуемого соединения у жи- ■ вотных с неонатальным стрептозотоциновнм диабетом на. стадии относительной инсулиновой недостаточности было обнаружено, что постна-тальная 8-недельная обработка сукциОаном в большей степени (по сравнению с букарбаном) ослабляет экспрессию отставленных диабето-генных эффектов стрептозотоцина, вводимого новорожденным крысятам, обеспечивая базальную нормогликемию и отсутствие изменений толерантности к глюкозе (табл.4), предупреждая повреждение морфострук-туры островков и активируя компенсаторные и регенеративные процессы в р-клетках.

Двухнедельное профилактическое и терапевтическое применение препарата на фоне низкодозового етрептозотоцинового диабета снижало выраженность патологических иммунных процессов, уменьшая тяжесть инсулита в панкреатических островках. При этом степень про-тективного эффекта сукцибана была аналогична букарбану. В то же время терапевтический эффект исследуемой субстанции в условиях абсолютной инсулиновой недостаточности превышал наблюдаемый у препарата сравнения по реабилитационному действию на морфоструктуру поджелудочной железы, в большей степени снижая атрофию ее экзок-ринной части и активируя регенеративные процессы в р-клетках.

Учитывая важную роль свободно-радикального окисления липидов в развитии сахарного диабета и связанных с ним осложнений, проведено изучение антиоксидантной активности.сукцибана, в результате чего установлено, что применение исследуемого препарата в эффективной дозе на протяжении 30 дней приводит к угентению интенсивности ас-корбат-зависимого переписного окисления липидов, снижая накопление малонового диальдегида в печени животных в 2,5 раза по сравнению с контролем.

Выявленная атиоксидантная активность непосредственно связана с

Таблица 2.

Динамика гликемии у крйс с ИНЗСД при однократном введении сукцибана и букарбана

Характер воздействия п Исходный уровень, ммоль/л После перорального введения препарата через

2 ч 4 Ч 6ч

ммоль/л % снижения ммоль/л % снижения ммоль/л % снижения

Контроль (ИНЗСД) 4 6,83 ± 6,90 + - 6,31 ± 6,97 + 6,14 ± 10,1 +

0,10 0,25 0,17 0,84 /0,10 0,89

Сукцибан 50 мг/кг 4 6,97 + 0,29 4,88 + 0,90 30,11+ 6,69*х 4,66 + 0,90* 33,10+ 5,23*Х 5,74 ± 0,13 26,21+ 2,16*х

Букарбан 50 мг/кг 4 6,18 ± 0,17 5,15 ± 0,19* 16,73+ 1,20* 5,17 + 0,17* 16,40 + ' 1,06* 5,56 ± 0,50 14,39+ 2,71

Примечания:

1. * - достоверность различий по сравнению с контролем р<0,05.

2. х - достоверность различий по сравнению с Оукврбаном р<0,05.

Таблица 3.

Динамика гликемии у мышей линии ВАЬь/с с ИЗСД при однократном введении сукцибана и букарбана

Характер воздействия п Исходный уровень, ммоль/л После перорального введения препарата -через

2 ч 4 ч 6ч

ммоль/л % снижения ммоль/л % снижения ммоль/л % снижения

Контроль 4 7,75 + 7,83 ± - 7,15 + 7,51 + 7,49 ± 3,34 ±

(ИЗСЙ) 0,36 0,41 0,Ю 1,12 0,39 0,79

Сукцибан 4 7,62 + 5,49 ± 27,96+ 4,88 + 35,39 + 6,40 + 28,44+

250мг/кг 0,70 0,52* 1,92*х 0,48* 5.85* 0,70* 8,45*

Букарбан 4 7,47 +' 6,34 + 15,34+ 5,32 + 28,09 ± 6,16 + 17,02+

250мг/кг 0,58 0,16* 2,61* 0,31* .. 6,38* 0,38* 4,68*

П р и м е Ч а н и я:

1. * - достоверность различий по сравнению с контролем р<0,05.

2. х - достоверность различий по сравнению с букарбаном р<0,05.

Таблица 4.

Влияние постнатальной 8-недельной обработки сукцибаном и букарбаном на диабетогенное действие стрептозотоцина, введенного новоркдошшм крысятам популяции Вистар.

Группа животных ... -Характер-воздействия (п) Динамика гликемии. ммйль/л Диабетический индекс Интегральная гликемия Базаль-ная инсулине -мия, пкмоль/. Масса тела, г

исходи, уровень после внутриорюшинного введения глюкозы через .... мин.

30 60 120 .180 i

1- Интактный 4,90 ■+. 8,28 ± 7,36 + ■5,95 ± ■ 5,16 ± - 31,70 ± 23,66 + 125,5

контроль (6) 0,50 0,19 0,27 ■ 0,10 ■ 0,14.. 0,52 3,65 ±9,7

2 Стрептозо-тоцин + placebo (10) Стрептозо-тоцин + сукхшбан (9) 7,72 ± 0,65* 13,62 ± 1,00* 12,71.+ 0,91* 10,2 .+ 0,82* 8,76 ± . 0,69* 3,12 + 0,48 53,75 + .4,14* 16,92 + 0,50* 123,3 ±11,8

3 5,36 ± . 0,31х 9,50 + . 0,57х 8,69 + 0,53х -7,16 i -0,40х 5,43 + 0,27х 1,46 ± 0.13х 36,09 ± 1,41х 20,26 + 1,81 120,6 +6,4 .

4 Стрептозо-тоцин + букарбан (7) 6,85 ± 0,61* 13,49 + 1,28*' 11,76 i 0,67* 9,01 + 0,83* ■ 7,49 ± 0,51* 2,52 + 0,57 ■ 48,62 ± 4,14* 19,9 + 1,77 118,8 ±11,8

При меч а н и я: ~

1.» - достоверность различий по сравнению с 1 группой.р<0,05.

2.x - достоверность различий по сравнению со 2 группой р<0,05.

проявлешем противовоспалительных свойств сукцибана, экспериментально подтвержденных на модели кзррагенинового отека. Показано, что через 3 ч после введения флогогешгого агента степень ингибиро-вания воспалительной реакции у животных, получавших'препарат, составила -42,296 по сравнению с контролем.

Анализ экспериментальных данных по изучению специфической активности сукцибана Позволяет предположить,, что его антидиабетическое (превентивное и терапевтическое) действие в условиях-химически моделируемой абсолютной и относительной инсулотовой недостаточности реализуется за счет подавления аутоиммунной агрессиии в панкреатических (З-клетках при 1 типе заболевания, а также-усиления . пролиферативной активности и снижения количества активтх свободных радикалов в островках при двух типах сахарного диабета.

6.Изучение Токсических свойств сукцибана ' "'••..

Исследование острой токсичности сукцибана позволило установить, .что ПрИ внутрибрюшинном введении изучаемой субстанции ДДзд, рассчитанная по методу Кербера, составляет на мышах - 2650 мг/кг, а на крысах - 3050 мг/кг массы тела^ В то же время при пероралыюм использовании.этого препарата не удалось определить точное значение среднелетальной дозы, так как оно превышало максимальное количество вещества. (10000 мг/кг), которое практически возможно ввести животному в течение суток, что позволяет отнести сукцибан к группе практически безвредных соединений

При ежедневном пероральном применении сукцибана в дозах 50 и 25Й мг/кг в течение 3-х месяцев не было отмечено .Негативного воздействия на общее состояние, поведение и массу тела животных. Длительное введение препарата в эффективной дозе не вызывало достоверных патоморфологиче-ских и гистологических Изменений во внутренних органах крыс, а также отрицательного влияния на функциональное состояние сердечно-сосудистой системы, печени, почек и морфологический состав периферической крови.

. Преимуществом сукцибана по сравнению с используемыми сахаросни-жающими средствами является наличие у него наряду с. выраженной ги-погликемической активностью иммуномодулирующих, противовоспалительных и антиоксидантных свойств, а также способности к стимуля-

ции регенеративных:процессов в р-клотках.

Широкий спектр фармакологического действия в сочетании с низкой токсичностью позволит эффективно использовать данное соединение в терапии сахарного диабета как I типа, так и II типа, в том числе с целью профилактики специфических сосудистых осложнений.

вывода

1. Е результате сравнения полученных, экспериментальных данных с компьютерным прогнозом возможной биологической активности 51 производного янтарной кислоты и азолопиримидицов установлено, что совпадение логико-структурной оценки с данными фармакологического скрининга по проявленному гипогликемическому', .анальгетическому и нейролептическому действию составляет соответственно 42, 60 и 68 ■ .

2. Выявлено, что 66,7$ исследуемых соединений относятся к группе умеренно или малотоксичных веществ, а 33,3 % - принадлежат к разряду практически безвредных. Наименее токсичными оказались и-имиды М-амидосульфрнилсукцинаниловых кислот, а наиболее - производные пи-разоло- и 4,7-дигадро-1,2,4-триазолоЦ,5-а]гшримидина с незамещенными фенильными радикалами. .

3. Обнаружено 7 структур• (соединения 2,3,13,24,27,28,29), , проявляющих обезболивающее действие, на уровне вольтарена и анальгина и 2 вещества (4,9), потенцирующих эффект этаминал-натрия в большей степени, по сравнению с аминазином.

4. Установлено, что 40 % изученных структур обладают гипоглике-мическими свойствами, причем, наиболее активными и стабильными по действию оказались соединения 34, 48 и 39 (сукциоан).

5. Результаты изучения специфической активности сукцибана в условиях абсолютной и относительной инсулиновой недостаточности свидетельствуют о его выраженном антидиабетическом (превентивном и терапевтическом) эффекте. Преимуществом сукцибана по сравнению со структурным аналогом - букарбаном является наличие у него, наряду с гипо-гликемической' активностью, иммуномодулирующих, противовоспалительных и антиоксидантных свойств, а также способности, к стимуляции регенеративных процессов в панкреатических р-клетках.

6. Длительное применение сукцибана в эффективной дозе не оказывает негативного влияния на функции основных систем жизнедеятельно-

сти организма и не вызывает достоверных морфологических и гистологических изменений структуры тканей внутренних органов.

7. Сочетание широкого спектра фармакологического действия сукци-бана при отсутствии токсических свойств делает его весьма перспективным для завершения фармакологических исследований с целью создания на его основе оригинального антидиабетического препарата, оказывающего влияние на основные патогенетические звенья заболевания.

■ Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 A.c. 1814285 СССР , МКИ5 С 07 С 103/00, А 61 К 31/16р-4енИЛ-этиламид 2-оксисукцинаниловоЙ кислоты, проявляющий анаболическую, иммуномо,рлирующую активность и ингйбйруклций клеточное звено ауто-иммунитета к инсулинпродуциругацему аппарату/, Чувурин A.B., Натаров В.В., Сальникова С.И. и др. (СССР). 4825617/04;3аяв. 14.05.90 .- (Не подлежит публ.).-

2.Горбенко Н.И. Изучение иммунотролного эффекта производных сукцин-аниловых кислот с предполагаемой сахаросникающей активностью

// Актуальные вопросы современной эндокринологии и химии гормо-нов:Тез.докл.коНф.молодах ученых и специалистов ХНШЭиХГ.Харьков, 1990.-С.52.

3.Вивчення анальгегично! активност! деяких пох!дних карбокс!-сукцинан1лово! кислота / Легонькова 1.Ю.,Бокко Т.е..Горбенко H.I. та 1н.// Розвиток фИзИологП в УРСР за 1986-1990р.: Тез.доп.XIII з'1зду Укр.ф1з1ол.тов.,Харк1в,1991.-Т.1.-С.189.

4.Анальгетическая и противовоспалительная активность азагетеро-цикдических производных дшеарбоновых кислот /Горбенко Н.И., Сударкина E.H. .Липсон В.В. и др.// Создание, исследование и применение новых лекарственных препаратов: Тез. докл. конф. молодых ученых и'специалистов ВНШХТЛС, Харьков, 1991.-С.52.

5.Изучение гипогликемической активности конденсированных азагете-роциклических производных дакарбоновых кислот / Горбенко Н.И.,

Кириченко А.А.,Липсон B.B. и др.// Реализация научных достижений . в практической фармации :Тез.докл.иаучн. конф..Харьков,1991.-С.220.

6.Оптимизация поиска биологически активных соедшюнкй (БАС) ь ряду карбоксисукцинаниловых кислот на основе компьютерного прогнозирования / Легонькова И.О., Чувурин А,В.,'Горбенко Н.И. и др.// Создание, исследование и применение новых ликаретьешшх препаратов: Тез..докл. конф. молодух ученых и специалистов ВНИИХТЛС, Харьков, 1991.- С.56.

7.Компьютерная оптимизация поиска оригинальных анальгетических средств в ряду.производных дикарбоноВцх кислот/ Кириченко,A.A., Горбенко Н.И., Божко Т.О. и др.//Синтез, фармакология и клини- . ческие аспекты новых обезболивающих средств: Тез.докл.' всесоюзн.конф.Новгород, 1991.-С.146. :

8.Оптимизация поиска препаратов кардиогонического действия в ряду алкил-цюслоалкил-дикарбоношх кислот на основе компьютерного прогнозирования /Чувурин A.B., Квдиченко'A.A., Вожко Т.е. и ^.//Материалы научн.-практ. конф. по результатам лечения пострадавших на ' Чернобыльской АЭС и. создании новых, лекарственных препаратов., Харьков, 1992.- С.95-98.

9.Изучение протективных свойств оригинального антидиабетического средства - сукцибана / Кириченко A.A..Горбенко Н.И., Полторак В.В. и др.//Л1карськ1 засоОи Укра!ни, синтез, науковГ дссл/дкешм, вироб-ництво, реал1зац(я: Матер1али наук.-практ.конф., Харк1в, 1992.- , С.203.

Ю.Горбенко H.I., Кир1ченко O.A., Божко Т.С.'Досл1дження антид1а-бетичних засоб!в в ряду азагеторацишПчцих иох1днщ. сукцщ1ан1лово1 кислоти // iv конгрес cbitoboi федерац!! . укра1нських л1карських товариств: Тез.доп., Харк1в, 1992.- с.130.

11.Синтез и окисление дигидропроизводных азолопиримидинов / Орлов В.Д., Десенко С.М., Горбенко Н.И, и др.//. XVI Украинская конф. по органической химии, Тернополь,. 1992. ~\С. 150. ;