Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Фармакологическая характеристика новых производных тиазоло[5,4-b]индола

На правах рукописи

Гаврев Алексей Иванович

ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА НОВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ ТИАЗОЛО[5,4-Ь]ИНДОЛА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 14,00.20 - токсикология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург 2008

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова» МО РФ

Научные руководители:

доктор медицинских наук профессор Петр Дмитриевич Шабанов, доктор биологических наук Вера Васильевна Марышева

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Павел Васильевич Родичкин доктор медицинских наук профессор Виктор Васильевич Шилов

Ведущее учреждение ФГУН Институт токсикологии ФМБА

Защита диссертации состоится «13» января 2009 г. в 13.00 ч на заседании совета по защите докторских и кандидатских диссертаций Д 215.002.07 при Военно-медицинской академии им С.М.Кирова по адресу: 194044, Санкт-Петербург, ул. Акад. Лебедева, д. 6.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им С.М.Кирова.

Автореферат разослан «_» декабря 2008 г.

Ученый секретарь совета

доктор медицинских наук профессор

Борис Николаевич Богомолов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Хорошо известно, что гипоксический фактор лежит в основе множества патологических процессов (Проблемы гипоксии, 2004). За последние полвека целенаправленного изучения антигипоксан-тов выявлено большое количество соединений разнообразного химического строения, обладающих свойствами ликвидировать негативные последствия гипоксии или предупреждать их. Многие вещества нашли свое применение в медицинской практике, однако выбор их ограничен (Смирнов A.B., Криво-ручко Б.И., 1998; Смирнов B.C., 2003).

Неуклонная химизация нашей повседневной жизни приводит к тому, что ежегодно в России госпитализируют около 200 тыс. лиц с отравлениями различными химическими веществами, более 30 тыс. из них погибают. Широкое использование и накопление в огромных объемах на предприятиях мирной индустрии высокотоксичных веществ чревато, с одной стороны, возможностью формирования очагов массовых санитарных потерь при химических авариях и катастрофах, а с другой - возможностью применения химикатов с диверсионными и/или террористическими целями (Белевитин А.Б. и др., 2008).

В связи с тенденцией к сокращению численности личного состава ВС РФ на военнослужащего увеличивается нагрузка семантического и физического характера. На данном этапе развития военно-промышленного комплекса создаются новейшие устройства (например, самолеты), технические характеристики которых превышают физические возможности человека. С целью повышения выживаемости летного состава используются противопе-регрузочные, высотно-компенсирующие костюмы, но всего этого недостаточно. Кроме того, образцы техники нового поколения обладают повышенной сложностью и требуют повышения ответственности за эксплуатацию. Применение новых лекарственных средств адаптогенно-актопротекторного типа действия является эффективным и перспективным способом повышения физической и умственной работоспособности военнослужащих (Чиж И.М., 1997,1998; ГаналольскийВ.П., 2008).

При возникновении аварийных ситуаций на промышленных предприятиях и военных объектах реальными становятся условия сочетанного действия на человека вредных веществ и физических факторов. Наряду с широким использованием при авариях технических средств индивидуальной защиты все большую актуальность приобретает применение лекарственных средств. В настоящее время используются лекарственные препараты, корригирующие неблагоприятное воздействие на организм человека вредных веществ и физических факторов (антидоты, термо- и фригопротекторы, радиопротекторы). Перспективным можно считать направление изыскания лекарственных средств, повышающих устойчивость человека к сочетанному воздействию разных по природе неблагоприятных факторов (Лукичева Т.Д., 1996).

Антигипоксанты зачастую обладают поливалентной фармакологической активностью, являются препаратами вдирокого спектра действия. Среди новых, конденсированных с триазином, имидазолом производных индола, разрабатываемых на кафедре фармакологии Военно-медицинской академии, обнаружены высокоактивные антигипоксанты, обладающие противовоспалительным, противовирусным, противоотечным, гепатопротекторным, акто-протекторным действием (Томчин А.Б. и др., 1997, 1998). В развитие этих работ синтезированы производные еще одной конденсированной системы индола - тиазоло[5,4-Ь]индола, для которых выявлена высокая антигипокси-ческая активность при гипобарической гипоксии и противоотечное действие при остром токсическом поражении фосгеном (Марышева В.В. и др., 2002).

Целью работы явилось изучение фармакологической активности новых производных тиазоло[5,4-Ь]индола.

В задачи исследования входило:

1. Определение острой токсичности новых производных тиазоло[5,4-Ь]индола на мышах.

2. Изучение антигипоксической активности новых производных тиазо-ло[5,4 -Ь]индола в моделях гиперкапнической, гемической и гистотоксиче-ской гипоксии на мышах.

3. Исследование влияния новых производных тиазоло[5,4-Ь]индола на физическую работоспособность мышей и крыс в обычных и осложненных условиях.

4. Выявление геяатопротекторной активности новых производных тиа-золо[5,4-Ь]индола в модели острого токсического повреждения печени четы-реххлористым углеродом у крыс.

5. Изучение связи структура - активность в ряду новых производных тиазоло|5,4-Ь]индола.

Научная новизна. Впервые получены данные по острой токсичности новых соединений, которые позволяют отнести их в основном к 4 классу токсичности. Впервые изучено влияние оригинальных производных тиазолоин-дольного ряда на устойчивость мышей в условиях острой экзогенной гипоксии - гиперкапнической, гемической, гистотоксической. Установлена высокая активность указанных соединений в моделях гиперкапнической и гемической гипоксии, сопоставимая или превышающая для отдельных веществ действие эталонного антигипоксанта амтизола. По суммарным характеристикам наибольшими антигипоксическими свойствами обладают соединения с незамещенной аминогруппой и, в частности, 2-амино-4-ацетил-тиазоло[5,4-Ь] индол.

В модели острого токсического поражения печени четыреххлористым углеродом для изучаемых соединений выявлена гепатопротекторная активность на уровне и выше препарата сравнения эссенциале.

Впервые показано, что производные тиазоло[5,4-Ь]индола обладают актопротекторной активностью. Одни повышают физическую выносливость через 1 ч после введения, другие через 24 ч. Гидробромид 2-амино-4-

ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола, 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол и сукцинах 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола обладают способностью поддерживать высоки?! уровень работоспособности в течение суток. 2-Амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол, 2-сукцшшмид-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол, 2-ацетиламипо-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол оказались способны повышать выносливость и при осложнении гипоксическим фактором. Приоритетность исследования подтверждена 2 патентами РФ на изобретение и 2 положительными решениями по заявкам на патенты РФ. По результатам исследования внедрены 23 рационализаторских предложения.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Производные тиазоло[5,4-Ь]индола малотоксичны и активно защищают организм от гиперкапнической и гемической гипоксии.

2. Соединения тиазолоиндольного ряда обладают актопротекторными свойствами. Особенно это присуще структурам, обладающим полным электронным сопряжением в циклической системе, со свободной или частично замещенной терминальной аминогруппой.

3. Соединения тиазолоиндольного ряда повышают работоспособность в условиях гиперкапнии.

4. Во всех изучаемых структурах обнаружены вещества с гепатопро-текторпыми свойствами.

5. Производные тиазоло[5,4-Ь]индола обладают поливалентной фармакологической активностью и могут защищать от сочетанного действия негативных факторов физической (гипоксия) и химической (токсиканты) природы.

Научно-практическое значение. Изучение антигипоксической активности производных тиазоло[5,4-Ь]индола в модели гиперкапнической гипоксии выявило гидробромид 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола, который защищает организм на уровне эталонного препарата (амтизол), и его основание, значительно превышающее эталон по активности. Соединения тиазо-ло[5,4-Ь]индола со свободной аминогруппой, за исключением гидробромида бромсодержащего аналога, активно защищают мышей от гибели (выживаемость 50-80%) в модели гемической гипоксии, тогда как амтизол лишь увеличивает продолжительность жизни отравленных животных.

Выявлена актопротекторная активность в ряду тиазоло[5,4-Ь]индола. Производные структур, обладающих полным электронным сопряжением в циклической системе, со свободной или частично замещенной терминальной аминогруппой повышают работоспособность через час и/или сутки после введения, то есть могут поддерживать высокий уровень активности в течение суток, в чем превосходят препараты сравнения фенамин и бемитил. Так, гидробромид 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола увеличивает работоспособность крыс через 1 ч в два раза, а через сутки почти в 6 раз, а фенамин лишь в два раза через 1 ч. Производные тиазоло[5,4-Ь]индола повышают работоспособность в условиях гиперкапнии на уровне препаратов сравнения,

а гидробромид 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола превышает этот уровень.

В модели острого токсического отравления крыс четырёххлористым углеродом показано защитное действие производных тиазоло[5,4-Ь]индола на уровне и выше препарата сравнения. Наличие брома в молекулах соединений усиливало защитный эффект.

Соединения ряд а тиазоло[5,4-Ь]индола обладают поливалентной фармакологической активностью и способностью защищать организм от соче-танного действия физических (гипоксия) и химических факторов (токсикантов). Это позволяет рассматривать производные тиазоло[5,4-Ь]индола как перспективные средства защиты от гипоксии, отравлений гепатотоксически-ми ядами и чрезмерных физических нагрузок.

Апробация работы. Основные результаты работы доложены на 36 Всемирном конгрессе по военной медицине (Санкт-Петербург, 2005); научно-практической конференции «Современные проблемы военной и экстремальной терапии (Санкт-Петербург, 2005); 4-ой международной научной конференции «Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам» (Москва, 2006); 5-ом Всероссийском симпозиуме «Война и здоровье» (Москва, 2006); всеармейской научно-практической конференции «Инновационная деятельность в Вооруженных силах Российской Федерации» (Санкт-Петербург, 2006); научно-практической конференции «Актуальные вопросы повышения работоспособности и восстановления здоровья военнослужащих и гражданского населения в условиях чрезвычайных ситуаций» (Санкт-Петербург, 2006); научно-практической конференции «Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении» (Санкт-Петербург, 2007); XX съезде Физиологического общества им. И.П.Павлова (Москва, 2007).

Апробация работы прошла на совместном научном заседании кафедр фармакологии и токсикологии и медицинской защиты Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова МО РФ (2006).

Публикации. По теме опубликовано 23 работы, из них 1 статья в журнале, рекомендованном ВАК РФ, получено 2 патента РФ и 2 положительных решения по заявкам на патент, внедрено 23 рационализаторских предложения.

Связь задач исследования с проблемным планом. Работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ Военно-медицинской академии им. С.М.Кирова.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, обзора литературы и 4 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, научно-практических рекомендаций, списка литературы и приложений. Она изложена на 112 страницах компьютерного тек-

ста, содержит 14 таблиц, 12 рисунков. Библиографический указатель включает 256 источников литературы, их них 19 на иностранных языках.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

1. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Все экспериментальные фармакологические исследования проводились согласно «Руководству по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ» (2000).

Выбор животных. В соответствии с поставленными целью и задачами исследования опыты проведены на 920 белых беспородных мышах-самцах массой 19-25 г и 294 белых беспородных крысах самцах массой 200-300 г, полученные из питомника Рапполово РАМН (Ленинградская обл.).

Выбор препаратов. Для изучения были отобраны 12 новых соединений тиазолоиндольной структуры 4-7 (рис. 1), которые являются аналогами по строению и свойствам триазиноиндолов (структуры 1-2) и имидазоиндо-лов (структура 3) и содержащие такую же антигипоксическую фармакофор-ную группировку изотиомочевины в своем строении.

1 2 3

6 7

Рис. 1. Структурные формулы соединений 4а: Я -Н, п = 1; б: Я = Н, п = 0; в: 11 = Вг, п= 1; г: Я = Вг, п = 0; 5а: Я = Н, п = 1; б: Я = Н, п = 0; в: Я = Вг, п = 1; г: Я = Вг, п = 0; 6а: Я = Н; б: Я = Вг; 7а: Я1 = Ас, Я2 = СО(СН2)2СООН; б: Я1 = Ас, Я2 = Ас; в: Я1 = Н, Я2 = Ас.

В качестве препарата сравнения при изучении антигипоксических свойств новых соединений Фармакологическим комитетом рекомендован ам-тизол (Методические рекомендации, 1990). Его применяли в дозе 25 мг/кг.

При исследовании гепатопротекторного действия использовали эссен-циале в дозе 80 мг/кг (Венгеровский А.И. и др., 1987).

В настоящее время в качестве базового фармакологического средства с высокой актопротекторной активностью рассматривается препарат бемитил (Новиков B.C. и др., 1998), его использовали в дозе 25 мг/кг. Другим препаратом сравнения при исследовании физической выносливости служил фенамин, психомоторный стимулятор истощающего типа, в дозе 1,5-2 мг/кг.

Препараты и лекарственные средства сравнения растворяли в дистиллированной воде или в виде тонкой суспензии в твине-80 вводили внутри-брюшинно за 30-60 мин до воздействия экстремального фактора. Такой срок введения исследуемых веществ был избран потому, что максимальный положительный эффект лекарственных средств, как правило, достигается спустя 30-60 минут после внутрибрюшинного введения.

Животным контрольных групп тем же путем и в тот же срок вводили равный объем физиологического раствора.

Методы исследования биологической активности

I. Определение острой токсичности

Острую токсичность определяли на белых беспородных мышах самцах массой 18-22 г (Прозоровский В.Б., 1994), изучаемое соединение вводили внутрибрюшинно однократно в виде суспензии в воде с добавлением твина-80.

2. Методики исследования антигипоксического действия

Антигипоксическое действие оценивали в моделях гипоксии с гипер-капнией, гемической гипоксии, гистотоксической гипоксии на мышах [Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ. Москва, 2000, С.153-158].

Гипоксию с гиперкапнией исследовали на беспородных мышах самцах массой тела 18-20 г. Животных помещали в стеклянные банки объемом 250 мл с герметичными крышками, которые переворачивали вверх дном и опускали в поднос с водой во избежание подсоса воздуха. Препараты вводили внутрибрюшинно в объеме 0,2 мл за 30 мин до гипоксии. Регистрировали продолжительность жизни опытных животных.

Гемическую гипоксию изучали на мышах самцах массой тела 18-20 г. Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до инъекции 2%-ного раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг. Регистрировали продолжительность жизни опытных животных.

Гистотоксическую гипоксию изучали на мышах самцах массой 18-20 г. Исследуемые препараты вводили внутрибрюшинно за 30 мин до инъекции раствора нитропруссида натрия в дозе 20 мг/кг. Регистрировали время жизни животных. В каждую серию экспериментов включали контрольную группу. Животные контрольной группы получали инъекцию 0,9%-ного раствора хлорида натрия (физиологического раствора). Все соединения исследовали в эк-вимольных дозах к амтизолу.

Рассчитывали коэффициент защиты К3 (Урюпов О.Ю., 1991) по формуле: a/b + 1

К3 =-------------, где

c/d + 1

а и с - число животных, выживших в опыте и контроле соответственно, b и d - число животных в каждой группе.

3. Методика измерения ректальной температуры крыс Ректальную температуру у крыс измеряли с помощью ртутного термометра, который дезинфицировали спиртом, смазывали вазелином и помещали в прямую кишку на глубину 3 см. Значение температуры в градусах Цельсия регистрировали после полной остановки столбика ртути.

4. Методика исследования гепатопротекторного действия Токсическое поражение печени вызывали у крыс подкожным введением 50%-ного раствора четыреххлористого углерода в вазелиновом масле в дозе 0,4 мл/100 г массы тела в течение 4 суток ежедневно (Лазарев Н.В., 1954). На 7-й день эксперимента животных декапетировали, забирали кровь для биохимического анализа. Содержание в сыворотке крови аланинами-нотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсА'Г), общего билирубина, общего белка, глюкозы определяли на автоматическом биохимическом анализаторе Hitachi 917.

Наиболее широко при диагностике заболеваний печени применяется определение активности АлАТ и Ac AT (Slater T.F., 1978). Для оценки активности соединений вычисляли отношение соответствующего показателя контрольной группы животных к показателю опытной группы. Таким образом, влияние соединений на активность АлАТ и АсАТ характеризовали коэффициентами КАл и КАс. Для интегральной оценки характеризовали соединения величиной, названной нами Кз, которую вычисляли как среднеарифметическую величину: Кз = (Кал + КАс)/2. Для оценки изменения соотношения АсАТ и АлАТ используется также коэффициент де Ритиса, уменьшение которого от нормы говорит о заболевании печени (Чиркин A.A. и др., 1993).

5. Методики исследования физической выносливости Физическая выносливость по методике предельного плавания. Исследование проводили на мышах-самцах массой 16-22 г (в группах по 10 животных), которым вводится внутрибрюшинно однократно исследуемое соединение в виде тонкой суспензии в твине-20 объемом 0,2 мл в дозах 10, 25, 50 мг/кг, контроль получал инъекцию физиологического раствора. Через 30 мин животные с грузом 5% от массы тела плавали в бассейне с водой (24-26 °С) до утопления. Регистрировали время плавания «до отказа». Выносливость животных по отношению к контролю выражали в %. Методика применялась для подбора оптимальной дозы изучаемых веществ.

Физическая выносливость в обычных условиях по методике бега на трегпбане. Опыты проводилось на крысах массой 200-250 г, которые совершали бег на третбане до «отказа». С этой целью использовали четырехдоро-жечный третбан, скорость движения транспортерной ленты была равна 38-42 м/мин. На каждую беговую дорожку транспортерной ленты помещали по одной крысе, у которой лапки, живот и хвост предварительно смачивали водопроводной водой, что улучшало раздражение их электрическим током на «электрическом полу» третбана. На «электрический пол» подавали ток напряжением 20 В. После утомления крыса перемещается на «электрический пол», лапками или хвостом замыкает цепь и получает легкое раздражение током, что вынуждает её уходить с «электрического пола» и продолжать бег на беговой дорожке. При значительном утомлении животное не реагирует на раздражение лапок слабым электрическим током и остается на «электрическом полу». В этом случае напряжение тока увеличивается до 30 В, что побуждает крысу уходить на беговую дорожку и продолжать бег, при неэффективности силы раздражителя напряжение увеличивается до 40 В. Отсутствие реакции крысы на удар током 40 В служит критерием полного утомления животного. Регистрировали время окончания бега крысы и ее удаляли с транспортерной ленты. Этот замер служил контролем. Животные трое суток отдыхали, затем им внутрибрюшинно однократно в виде тонкой суспензии в твине-20 в выбранной оптимальной дозе вводили испытуемое вещество. Препаратами сравнения служили известный актопротектор бемитил в дозе 50 мг/кг и фенамин в дозе 1,5 мг/кг - активатор истощающего типа. Животные совершали повторный бег «до отказа» через 1 и 24 часа после введения препарата. Выносливость, выраженную в %, рассчитывали как отношение продолжительности повторного бега к продолжительности начального бега. В каждой группе по 8-10 животных.

Выносливость в условиях гтеркапнии. Выносливость в осложненных условиях изучали по методике предельного плавания мышей в условиях гипоксии с гиперкапнией (Самойлов H.H. и др., 2002). Для моделирования условий гипоксии с гиперкапнией использовали стандартные трехлитровые банки из прозрачного стекла высотой 240 мм. Банку до краев наполняли водопроводной водой с температурой плюс 28°С. В воду бассейна для снижения поверхностного натяжения и улучшения смачивания шерсти животных добавляли порошок моющего средства из расчета 100 мг/л. Из банки шприцем отсасывали 250 мл воды. После этого в банку помещали одну мышь с прикрепленным у корня хвоста грузом, равным 5% массы тела животного. Банку герметически закрывали термокрышкой после предварительного нагревания ее в горячей воде. Затем банку переворачивали вверх дном и помещали в поддон с водой, что исключает подсос воздуха. В образовавшемся воздушном пространстве объемом 250 см3 мышь плавала до гибели. Время плавания учитывали в минутах. Опыты проводились на мышах-самцах массой 18-22 г, в каждой группе по 8 животных.

Исследуемые соединения вводились в виде тонкой суспензии с твином-20 в объеме 0,2 мл, контрольные животные получали инъекцию физиологического раствора. Препаратом сравнения служил фенамин в дозе 2 мг/кг. Выносливость, выраженную в %, рассчитывали как отношение продолжительности плавания мышей под действием исследуемого соединения к продолжительности плавания контроля.

Выносливость в условиях гемической гипоксии. Выносливость в условиях острой гемической гипоксии изучали на модели предельного плавания мышей в бассейне при температуре 24-26 °С с грузом 5% от массы тела при воздействии раствора нитрита натрия в дозе 200 мг/кг. Исследуемые соединения вводились внутрибрюшинно в виде тонкой суспензии с твином-80 в объеме 0,2 мл, контрольные животные получали инъекцию физиологического раствора за час до воздействия раствора летальной дозы нитрита натрия. Препарат сравнения - амтизол в дозе 25 мг/кг. Интактным животным вводилась та же доза токсиканта без плавательной нагрузки.

6. Статистическая обработка данных Все полученные данные обрабатывали статистически на персональном компьютере с использованием стандартного пакета программ Statistica for Windows, версия 5.0.

2. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Изучение антигипоксической активности

2.1.1. Гиперкапническая гипоксия Гиперкапническая гипоксия - весьма распространенная форма гипокси-ческих состояний, возникающая в обыденной жизни, связана с замкнутыми пространствами, в которые по каким-то причинам прекращается доступ воздуха.

200 %

150 100 -50 0

X

И

№ № Ш т

-

i

«к

ш

■¿щ

SJt С'-:

р, н н ь 5 £

* р< 0,05; ** р< 0,01; *** р< 0,001 по отношению к контролю.

Рис. 2. Активность соединений в модели гиперкапнической гипоксии

Особенно эта проблема остра для подводников и космонавтов, имеет большое военно-медицинское значение.

Результаты исследования соединений в модели гиперкапнической гипоксии приведены на рис. 2. По убыванию активности в модели гиперкапнической гипоксии соединения можно выстроить в следующий ряд: 56 > амтизол > 5а > 7а = 76 > 4а. Наиболее активны соединения структуры 5, причем соединение 56 превышает по активности эталон.

2.1.2. Гемическая гипоксия

Модель гемической гипоксии отражает распространенное взаимодействие ядов с гемоглобином крови, вследствие чего затрудняется транспорт кислорода к тканям и органам. В повседневной жизни с такими явлениями приходится сталкиваться как при банальных бытовых отравлениях, так и при техногенных катастрофах различного характера. По роду деятельности такому виду гипоксии подвержены спасатели, пожарные, ликвидаторы.

Результаты изучения соединений в модели гемической гипоксии приведены на рис. 3.

200 J 50 100 50 0

В Продолжительность жизни животных по отношению к

контролю, % Ш Выживаемость животных, %

* р< 0,05; ** р< 0,01 по отношению к контролю Рис 3. Активность соединений в модели гемической гипоксии

Все представители структуры 5, за исключением 5в, обладали активностью, значительно превосходящей амтизол. Они защищали от гибели 50-80 % опытных животных, тогда как эталон лишь увеличивал продолжительность жизни. В структуре 5 активность проявили как бромсодержащее соединение 5г, так и структуры без него - 5а, б. По убыванию активности в модели гемической гипоксии соединения можно выстроить в следующий ряд: 56 > 5а > 5г > амтизол. Возможно, дальнейшее углубленное изучение препаратов проявит их перспективность в качестве антидотов к нитритным ядам.

2.1.3. Гистотоксическая гипоксия

Гистотоксическая (тканевая) гипоксия обусловлена снижением утилизации кислорода тканями. Развивается при отравлении некоторыми ядами. Для изучения в этой модели были отобраны два соединения. Препарат 56 проявил себя в предыдущих исследованиях как наиболее активное вещество, он представляет собой основание тиазоло[5,4-Ь]индола со свободной терминальной аминогруппой. Вторым препаратом выбрали 7а, как аналога по строению, отличающегося лишь замещением одного водорода в терминальной аминогруппе (рис. 1). Полученные результаты представлены на рис. 4.

о/о 200 ¡50 100 50 0

Рис. 4. Активность соединений 56 и 7а в модели гистотоксической гипоксии

Как видно из диаграммы, приведенной на рис. 4, соединение 56 увеличивает продолжительность жизни опытных животных на треть, однако уступает амтизолу, который увеличивает ее на Замещение в аминогруппе негативно сказывается на активности, 7а усугубляет действие токсиканта.

При изучении антигипоксической активности обнаружено доминирующее положение структуры 5, имеющей свободную терминальную аминогруппу в отличие от структур 6 и 7 и ароматическое строение конденсированных циклов в отличие от структуры 4.

2.1.4. Влияние соединений 56 и 5в на ректальную температуру крыс

Для этого эксперимента были отобраны два соединения структуры 5, проявившие высокую антигипоксическую активность. Полученные данные приведены в табл. 1. По данным табл. 1 контрольные животные, получившие инъекцию физиологического раствора, имели ректальную температуру 37,85±0,60 °С, что соответствует литературным данным (Трахтен-берг И.М. и др., 1991). Действие соединений 56 и 5в на ректальную температуру крыс показало достоверное её понижение на 3,5 и 2,5 градуса соответственно, что тоже совпадает с литературными данными. Явное торможение обменных процессов, проявившееся через 1 ч после введения изучаемых ве-

ществ (табл. 1), хорошо объясняет противогипоксический эффект как следствие экономизации ресурсов. Через сутки температура крыс не отличалась от исходной. Подобные температурные эффекты наблюдались у широко известных антигипоксантов амтизола и бемитила (Александрова А.Е., 1978), а также при изучении новых производных антигипоксанта 3-оксипиридина и витамина РР (Стратиенко E.H., 2003).

Таблица 1

Влияние соединения 56 и 5в на ректальную температуру крыс

Соединение Доза, мг/кг Ректальная температура, °С

через 1 ч через 24 ч

абс. % Р абс. % Р

Контроль - 37,85±0,60 100 37,28±0,44 100

56 50 34,32±0,99* 90,7 0,01 37,48±0,12# 100,5 0,01

5в 84,7 35,35±0,18* 93,4 0,002 37,40±0,75# 100,3 0,05

Примечание. * - по отношению к контролю; # - по отношению к значениям через 1 ч.

2.2. Влияние производных тиазоло[5,4-Ь]индола на физическую работоспособность

В условиях чрезвычайных ситуаций и при ликвидации их последствий личный состав различных формирований МО РФ, МВД РФ, МЧС вынужден совершать большую физическую работу. Физическая усталость препятствует успешному выполнению задач и создает угрозу для жизни личного состава. Во всех этих ситуациях сохранение высокой физической работоспособности и ее быстрое восстановление в последующий период возможно с помощью лекарственных средств, так называемых актопротекторов.

Прототипы из других рядов конденсированных индолов (рис. 1, структуры 1-3) обладают свойствами повышать работоспособность в обычных и осложненных условиях (Томчин А.Б. и др., 1997). Вначале исследования соединения новой структуры тестировали на этот вид активности на мышах в модели «предельного плавания».

2.2.1. Подбор эффективных доз препаратов на мышах в модели «предельного плавания»

Все изучаемые соединения тиазолоиндольной структуры были протестированы в модели «предельного плавания» на мышах в трех дозах: 10, 25 и 50 мг/кг. В результате проведенного скрининга у соединений выявлена способность повышать физическую выносливость мышей через 1 ч после внут-рибрюшинного введения. Также были определены эффективные дозы исследуемых веществ для изучения работоспособности, которые представлены в табл. 2.

Таблица 2

Результат отбора активных доз производных тиазолоиндола _для изучения работоспособности____

Шифр Наиболее Прирост Шифр Наиболее Прирост

соедине- эффектив- работо- соедине- эффектив- раоото-

ния ная доза, способно- ния ная доза, способно-

мг/кг сти, % мг/кг сти, %

5в 10 84 76 25 27 '

4а 10 48 7а 25 27

6а 10 46 66 25 12

4г 50 46 56 25 5

4в 50 30 46 10 3

5а 10 27 5г 25 3

2.2.2. Влияние производных тиазолоиндола на физическую работоспособность крыс в обычных условиях

На следующем этапе проводили изучение влияния препаратов в выбранных оптимальных дозах на выносливость крыс по методике бега на третбане «до отказа» через час и 24 ч после введения соединений и препаратов сравнения. Данные опыта представлены на рис. 5.

£ 500 - *

н 400 -

| 300 -

О Выносливость через 1 ч Ю Выносливость через 24 ч

*- р < 0,05, ** - р < 0,01, *** - р < 0,001 по отношению к контролю Рис. 5. Актопротекторная активность производных тиазоло[5,4-]индола у крыс по методике предельного бега «до отказа» на третбане по отношению к

контролю

По данным рис. 5 видно, что соединения ведут себя не однозначно: одни повышают выносливость только через час после введения - 76 - на 23%, другие только через 24 ч - 4а, в - на 204 и 16% соответственно. Из соединений с замещенной терминальной аминогруппой наиболее активна сукцини-миновая кислота 7а, которая увеличивает работоспособность через час в два

раза, а через сутки в 1,8 раза. Сукцинимиды 6а, б и ацетильное производное 76 через сутки действовали отрицательно. Результаты исследования показали, что наиболее активны структуры 4 и 5 в виде гидробромидов, причем гидробромид 5в, содержащий бром в бензольном кольце, выказал наибольшую активность: увеличивает выносливость через час в два раза, через сутки в 5,9 раза.

Под действием бемитила в условиях опыта через 1 ч выносливость составила 68% от исходного уровня, через сутки - повышение до 117%. Фенамин превышал выносливость через 1 ч в два раза, а через 24 ч понижал до 91% от исходного уровня. Таким образом, производные тиазоло[5,4-Ь]индола обладают актопротекторной активностью, причем она превосходит препараты сравнения фенамин и бемитил. Особенностью изучаемых веществ является то, что они могут поддерживать высокий уровень выносливости в течение суток - соединения 5а, в и 7а, а также в отставленные сроки (4а, 5а-г, 7а).

Актопротекторной активностью обладают соединения из всех рассматриваемых структур.

2.2.3. Повышение физической работоспособности в условиях гиперкапнии

Есть виды производственной деятельности при эксплуатации морской, авиационной и космической техники, когда военнослужащие выполняют задачи в условиях герметически замкнутого пространства. При нарушении штатной работы систем регенерации воздуха в обитаемых отсеках подводной лодки, самолета, космического объекта содержание кислорода уменьшается, а концентрация углекислого газа увеличивается, т.е. возникает острая гипоксия с гиперкапнией. В этих условиях быстро развивается физическая усталость, что затрудняет выполнение задания и в итоге создается угроза жизни.

Для этого этапа исследований были отобраны соединения, повышающие продолжительность жизни в условиях гиперкапнии - 4а, 5а-б, 7а-б и повышающие выносливость мышей 5в, 6а (табл. 2), и 66 для оценки влияния строения на активность. Препаратами сравнения были: фенамин, бемитил и амтизол. Контрольным животным вводили физиологический раствор. Результаты влияния производных тиазоло[5,4-Ь]индола на выносливость мышей в условиях гиперкапнии приведены на рис. 6 (часть В). Их сравнивали с контрольной группой, время плавания которой было принято за 100%.

По полученным данным, приведенным на рис. 6 (В), все исследованные соединения, кроме 66 и 7а, повышали выносливость в условиях гиперкапнии: соединения 5а и 5в на 22% и 15% соответственно; 6а, 76 и фенамин на 51-52%. Наибольший прирост выносливости в осложненных условиях достоверно дало соединение 56 - 73%, оно же лучше других защищало от гиперкапнии (см. рис. 2).

По убывающей активности соединения можно расположить в следующий ряд: 56 > ба = 76 = фенамин > 4а > бемитил > амтизол > 5а> 5в.

А. Увеличение продолжительности жизни под действием препаратов в модели гиперкапнической гипоксии у мышей

100

% 80 -60 40 20 -0

-20 I

I

ж и

5<?> ^ # ^ ^ ф ь<!у Ф

Б. Влияние препаратов на прирост работоспособности мышей в обычных условиях

100 % 80 60 40 20 -0

Г; —

ЕО

И 0

^ ^ Ф Ч" Ф ^ Ф

В. Влияние препаратов на прирост работоспособности мышей в условиях гиперкзпнии

80 - *

%60-

40

-

1 [ г : п • ; 1

20 > ^ # ^ Ф Ф Ф Ф Л* Ф

^ Ф

*- р < 0,05, ** - р < 0,01 по отношению к контролю Рис. 6. Сравнение действия препаратов на мышей в моделях гиперкапнической гипоксии, работоспособности в обычных и осложнённых гиперкапнией

условиях

На рис. 6 представлены диаграммы, на которых можно проследить влияние препаратов на продолжительность жизни мышей в условиях гипер-капнии (А), а также на работоспособность в обычных (Б) и гиперкапнических условиях (В). Что же влияет на работоспособность в условиях гиперкапнии? Например, препарат 56, который более других соединений активен в гиперкапнии, но повышает выносливость мышей через 1 ч только на 5% (табл. 2), -в модели работоспособности в гиперкапнии оказывается лидером (рис. 6 В). В этом случае явно влияет устойчивость животных к гиперкапнии под действием 56. Вещество 6а не защищает мышей в условиях гиперкапнии (рис. 2), однако повышает их выносливость через 1 ч после введения в 1,46 раза (табл. 2). Таким образом, на актопротекторную активность в условиях гиперкапнии влияет как наличие антигипоксической, так и актопротекторной активности.

Для обеспечения выживаемости и поддержания физической работоспособности в условиях гиперкапнии целесообразно применять лекарственные средства с антигипоксическим и актолротекторным действием.

2.2.4. Изучение физической работоспособности в условиях гемической гипоксии

В практической жизни, например, при авариях на химических производствах, могут быть условия воздействия на организм гемических ядов, однако спасателям при этом приходится выполнять большой объем работы.

120 -

%

100 -80 -60 40 -20 -0 -

Рис. 7. Работоспособность соединений 5а, 56, 5г в модели гемической гипоксии

Исследовали несколько соединений из изучаемой группы производных тиазолоиндола - 5а, 56, 5г, которые в модели острой гемической гипоксии проявили высокие защитные свойства (см. рис. 3). В качестве препарата сравнения использовали эталонный антигипоксант амтизол, который не защищал от гибели, а только увеличивал продолжительность жизни опытных животных (рис. 3). Полученные данные приведены на рис. 7. Применение изучаемых антигипоксических препаратов в этом тесте усугубило состояние

1

|

Щ: Ш ц 1 !

ш V [ л -- ш 0 ---- Я 1 н

ЙЯ 1 -

Контроль Амтизол 5а 56 5г

животных, причем исследованные соединения тиазолоиндольного ряда одинаково уменьшали продолжительность плавания мышей примерно на 20 %.

Осложнение условий опыта гемическим отравлением не выявило у активных гемических антигипоксантов положительного влияния на работоспособность мышей.

2.3. Исследование гепатопротекторного действия

В последнее время к угрозе применения химических веществ (в том числе химического оружия) в военных конфликтах, возрастающей вероятности химических аварий и катастроф, угрозам химического терроризма добавляются проблемы химического загрязнения окружающей среды, принимающего в некоторых регионах России катастрофические масштабы (Белевитин А.Б. и др., 2008). Поэтому разработка новых лекарственных средств, обладающих способностью защищать организма от воздействия токсикантов, является весьма актуальной.

Ранее, при изучении фармакологической активности производных других конденсированных систем индола с триазином (структуры 1 и 2 на рис. 1) и имидазолом (структура 3 на рис. 1), было показано, что во всех исследованных рядах найдены соединения, обладающие высокой гепатопротектор-ной активностью (Томчин А.Б. и др., 1998). Поскольку изучаемый ряд новых соединений тиазолоиндольной структуры (4-7 на рис. 1) обладает родственным строением и содержит общие фармакофорные фрагменты тио- или изо-тиомочевины в цикле, как вышеупомянутые структурные предшественники, мы также исследовали их гепатопротекторную активность.

^ ь1* 4>

13 Коэффициент защиты

& Ф

□ Коэффициент де Ритиса

Рис. 8. Гепатопротекторная активность соединений по коэффициентам защиты и де Ритиса

Для этой цели воспользовались известной моделью острого токсического поражения печени четыреххлористым углеродом, на которой ранее были исследованы другие конденсированные производные индола (Окови-тый C.B., 2004). Все вещества изучались в эквимольных дозах между собой для выявления эффектов структура-активность. Полученные данные приведены на рис. 8. ■

По данным, представленным на рис. 8, по коэффициенту защиты исследуемые соединения 4в, 4г, 56, 5в, 5г равны по действию или несколько превосходят препарат сравнения эссенциале. По коэффициенту де Ригиса соединения 4в и 4г превосходят препарат сравнения и практически равны показателю интактных животных; 56 и 5г равны по действию эссенциале.

Группа новых соединений тиазолоиндольной структуры обладает мощным защитным действием при остром токсическом поражении печени. Прямой корреляции с антигипоксической активностью не просматривается.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, исследование фармакологических свойств новых соединений показало наличие у них разнообразной активности. Являясь активными антигипоксантами, они защищают организм от воздействия различных вредных факторов физической и химической природы: гемических ядов, печень от отравления четыреххлористым углеродом, легкие от отека при затравке фосгеном (Марышева В.В., 2002). Соединения обладают ярко выраженными актопротекторными свойствами, они поддерживают высокий уровень работоспособности в течение суток, в отставленные сроки.

Численность вооруженных сил страны уменьшается в силу действия различных факторов, оставшийся личный состав несёт повышенную нагрузку, что приводит к нервному и физическому истощению. Для коррекции этих состояний на практике ничего не применяют. Разработка препаратов, обладающих комплексом защитного действия, могла бы действенно помочь людям в тяготах военного труда.

Несомненно, что последующее углубленное изучение препаратов ряда тиазоло[5,4-Ь]индола позволит осветить новые грани в их активности и механизмах действия. Однако уже сейчас можно сказать, что они найдут свое применение в практическом здравоохранении, медицине катастроф, военной и спортивной медицине.

ВЫВОДЫ

1. Исследованные 12 соединений ряда тиазоло[5,4-Ь]индола малотоксичны и относятся в основном к 4 классу токсичности.

2. Соединения, обладающие полным сопряжением электронных связей в циклической системе со свободной или частично замещенной терминальной аминогруппой, в модели гиперкапнической гипоксии значительно уве-

личивает продолжительность жизни опытных животных, причем 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол (56) по действию превосходит препарат сравнения амтизол.

3. Соединения, обладающие полным сопряжением электронных связей в циклической системе со свободной терминальной аминогруппой, за исключением гидробромида 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола, обладают мощными защитными свойствами в модели токсического поражения нитритом натрия (гемической гипоксии), в чем значительно превосходят препарат сравнения амтизол.

4. Актопротекторной активностью обладают вещества из всех исследованных структур тиазолоиндольного ряда. Наиболее активны соединения в виде гидробромидов, наличие брома в бензольном кольце увеличивает действие.

5. 2-Амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индол (56) повышает выносливость мышей в условиях гиперкапшш, в чем превосходит препараты сравнения фенамин и бемитил.

6. Соединениям ряда тиазоло[5,4-Ь]индола присуще гепатопротектор-ное действие, которое проявляется более выраженно при введении брома в бензольное кольцо структуры. Защитное действие соединений проявляется при токсическом поражении печени четыреххлористым углеродом.

7. Производные тиазоло[5,4-Ь]индола обладают поливалентной фармакологической активностью и защищают от сочетанного действия негативных факторов физической (гипоксия) и химической (токсиканты) природы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Перспективными для внедрения в практическую медицину в качестве средств широкого профиля являются соединения 4а, 5а, 56, 5г как наиболее активные антигипоксанты.

2. Соединения 4а, 5а-г и 7а обладают антигипоксическими и актопро-текторными свойствами, превышающими соответствующую активность эталонных препаратов. Они могут рекомендоваться как перспективные средства для внедрения в практику военной, гражданской и спортивной медицины.

3. Требуют более углубленного изучения в качестве защиты организма от токсикантов соединения со свободной терминальной аминогруппой как бромсодержащей гидратированной тиазолоиндольной системы (4в,г), так и с полным сопряжением электронных связей в циклической системе (5а-г), обладающие мощным эффектом в модели гемической гипоксии и гепатопро-текторным действием.

Список основных работ по теме диссертации: 1. Гаврев А.И. Антигипоксическая активность новых соединений / А.И. Гаврев, В.В. Марышева // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и кли-

нической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. - СПб.: ВМедА, 2004.-Вып. 35.-С. 73.

2. Гаврев А.И. Вещество, защищающее организм от гипобарической и гемической гипоксии и печень от отравления четыреххлористым углеродом / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. -СПб.: ВМедА, 2005. - Вып. 36. - С. 58-59.

3. Марышева В.В. Hepatoprotective effects of condensed derivatives of indole / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Мат. 36 Всемирн. конгр. по военной медицине. - СПб, 2005. - Р. 193.

4. Марышева В.В. Защитные свойства конденсированных производных индола при экстремальных факторах / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Современные проблемы военной и экстремальной терапии. Мат. науч. конф. - СПб., 2005 / Вестник Рос. Воен.-мед. академии. 2005. - Прил. 1(14).-С. 104-105.

5. Гаврев А.И. Определение актопротекторной активности производных тиазоло[5,4-Ь]индола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. - СПб.: ВМедА, 2006. - Вып. 37. - С. 20.

6. Гаврев А.И. Определение актопротекторной активности производных пиримидо[4,5-Ь]индола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. - СПб.: ВМедА, 2006. - Вып. 37. — С. 21.

7. Гаврев А.И. Изучение поведения крыс под действием новых антиги-поксантов / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Биологические основы индивидуальной чувствительности к психотропным средствам. Мат. 4-й междунар. науч. конф. - М., 2006. - С. 21.

8. Марышева В.В. Гепатопротекторное действие производных тиазо-ло[5,4-Ь]индола / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Психофарма-кол. и биол. наркология. - 2006. - № 4. - С. 1351-1354.

9. Марышева В.В. Корректоры стресса нового поколения / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Война и здоровье: боевой стресс. Сб. научных трудов (Под ред. И.Б.Ушакова, Ю.А.Бубеева) - М., 2006. - С. 192-193.

10. Марышева В.В. Антигипоксанты нового поколения для защиты от экстремальных факторов / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Актуальные вопросы повышения работоспособности и восстановления здоровья военнослужащих и гражданского населения в условиях чрезвычайных ситуаций. Мат. Всерос. научно-практ. конф. - СПб., 2006. - С. 206-207.

11. Гаврев А.И. Повышение работоспособности производными тиазо-ло[5,4-Ь]индола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Актуальные вопросы повышения работоспособности и восстановления здоровья военно-

служащих и гражданского населения в условиях чрезвычайных ситуаций. Мат. Всерос. научно-практ. конф. - СПб., 2006. - С. 202.

12. Гаврев А.И. Гепатопротекторные свойства антигипоксантов из ряда тиазоло[5,4-Ь]индола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Естествознание и гуманизм. - Томск, 2006. - Т. 3, № 4. - С. 28-29.

13. Гаврев А.И. Влияние производных тиазоло[5,4-Ь]индола на физическую выносливость / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Естествознание и гуманизм. - Томск, 2006. - Т. 3, № 4. - С. 70.

14. Гаврев А.И. Повышение физической выносливости новыми ангиги-поксантами / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, Шабанов П.Д. // Актуальные вопросы клиники, диагностики и лечения больных в многопрофильном лечебном учреждении. Мат. VIII Всерос. научно-практ. конф. - СПб., 2007. -Вестник Рос. воен.-мед. академии - 2007. - Прил. 1(17).-С. 237-238.

15. Гаврев А.И. Повышение работоспособности в обычных условиях производными тиазолоиндола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. - СПб.: ВМедА, 2007. - Вып. 38. - С. 71-72.

16. Гаврев А.И. Повышение работоспособности в осложненных условиях производными тиазолоиндола / А.И. Гаврев, В.В. Марышева // Усовершенствование методов и аппаратуры, применяемых в учебном процессе, медико-биологических исследованиях и клинической практике. Сб. изобретений и рацпредложений. - СПб.: ВМедА, 2007. - Вып. 38. - С. 72.

17. Гаврев А.И. Повышение работоспособности в условиях гипоксии / А.И. Гаврев, В.В. Марышева, П.Д. Шабанов // Мат. XX съезда Физиологического об-ва им. И.П.Павлова. Тез. Докл. - М.: Русский врач, 2007. - С. 187.

18. Марышева В.В. Синтез и фармакологическая активность производных тиазоло[5,4-Ь]индола / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.А. Торкунов, П.Д. Шабанов., С.Г. Григорьев // Обзоры по клин, фармакол. и лек. терапии. -2007.-Т. 5, вып. 2.-С.2-19.

19. Применение 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола для защиты организма от гипобарической и гемической гипоксии и/или печени от отравления четыреххлористым углеродом / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, П.Д. Шабанов // Патент РФ № 2318828. - Бюл. изобр. - № 7 от 10.03.2008.

20. Применение 2-амино-7-бром-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола гидробромида для повышения работоспособности / Марышева В.В., Гаврев А.И., П.Д. Шабанов // Патент РФ № 2335286. - Бюл. изобр. - № 28 от 10.10.2008.

21. Марышева В.В. Защитные свойства антигипоксантов тиазолоиндоль-ного ряда от поражающих химических факторов / В.В. Марышева, А.И. Гаврев, С.Н. Прошин, П.Д. Шабанов // Медикобиол. и социально-псих. проблемы безопасности в чрезвычайных ситуациях. - 2008. - № 3. - С. 37-40.

22. Применение гидробромида 2-амино-4-ацетилтиазоло[5,4-Ь]индола для повышения работоспособности / Марышева В.В., Гаврев А.И., П.Д. Шабанов П.Д. // Заявка на патент РФ № 2007109254 от 13.03.2007 г.

23. Применение гидробромида 2-амино-4-ацетил-8б-гидрокси-8б,За-дигидротиазоло[5,4-Ь]индола для повышения работоспособности / Марышева В.В., Гаврев А.И., П.Д. Шабанов // Заявка на патент РФ № 2007109255 от 13.03.2007 г.

Подписано в печать 20,11.08 Формат 60x84'/,

Объем 1 пл._Тираж 100 экз._Заказ №923

Типография ВМедА, 194044, СПб., ул. Академика Лебедева, 6