Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Фармако-биохимическое исследование "ТРИОИН"а

На правах рукописи

БАХРОМИ Мунаввара Тохирджановна

ФАРМАКО-БИОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ «ТРИОИИ»-А

(экспериментальное исследование)

14.03.06 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 С ,?ЕК /П10

Душанбе-2010

004618521

Работа выполнена в лаборатории фармакологии Института химии им. В .И. Никитина АН Республики Таджикистан и отделе клинической биохимии института гастроэнтерологии МЗ РТ

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор, академик АН РТ Хайдаров К.Х.

доктор химических наук, профессор Кадыров А.Х.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Асадуллаев С.Х.

доктор биологических наук, профессор чл.корр. Академии образования РТ Бобиев Г.М.

Ведущая организация:

Государственный научно исследовательский институт питания министерства энергетики и промышленности Республики Таджикистан

Защита диссертации состоится

Vt-if 2010г. в 13 часов

на заседании диссертационного совета КМ 047.003.01 при институте химии им. В.И. Никитина АН Республики Таджикистан по адресу: 734063, г. Душанбе, ул. Айни, 299/2.

Сайт института: www.chemistrv.ti. E-mail: rif52@mail.ru С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института химии им. В.И. Никитина АН Республики Таджикистан

Автореферат разослан « Й^ШЗ^А2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук

Рахимов И.Ф.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Проблема желчнокаменной болезни является сложной и многоплановой, связанной с прогрессирующим ростом уровня заболеваемости, экономическими потерями, временной утратой трудоспособности, а иногда и инвалидностью в трудоспособном возрасте.

Кроме того, вопросы соответствующей диагностики и лечения ее осложнений, опасных для жизни больных, остаются окончательно не решенными, привлекая внимание широкого круга практикующих врачей, клиницистов, биохимиков, фармакологов и других научных исследователей.

Только в странах СНГ по поводу острого и хронического холецистита ежегодно производится более 150000 оперативных вмешательств, в т. ч. 60% из них - у лиц пожилого и старческого возраста.

В таких случаях зачастую наблюдаются тяжелые сопутствующие заболевания, при большом операционном риске. Следовательно оперативные методы лечения резидуальных и рецидивных камней не лишены недостатков. На повторную операцию больные соглашаются с большим трудом, из-за состояний связанных с функциональными изменениями со стороны печени, а также наличия послеоперационного спаечного процесса. При наличии противопоказаний к выполнению папиллосфинктеротомии или неудачах, возникающих при удалении желчных камней через дренирующий общий проток, предпочтительными являются методы их растворения.

Вследствие этого, поиск наиболее эффективных и безвредных препаратов, растворяющих холестериновые и пигментные желчные камни, остается по прежнему одной из актуальных научных проблем, решению которых посвящено наше исследование.

Цель исследования: разработка оптимального метода получения литолитического препарата «Триоин» на основе производных жирных и желчных кислот и экспериментальное обоснование показаний к его применению в качестве гипотензивного и желчегонного средства.

Задачи исследования:

- разработка технологии получения «Триоин»-а;

-определить способность раствора «Триоин»-а растворять холестериновые камни в желчном пузыре и желчных протоках (in vitro);

- изучить литолитические свойства «Триоии»-а (in vivo);

- изучить влияние раствора «Триоин»-а на сердечно-сосудистую систему;

- изучить острую и хроническую Токсичность раствора «Триоин»-а;

- выявить действие раствора «Триоин»-а на функции отдельных органов в остром эксперименте.

Научная новизна.

Впервые разработан метод получения «Триоин»-а на основе производных желчных и высших жирных кислот.

Экспериментально установлено, что раствор «Триоин»-а является эффективным средством для растворения холестериновых и пигментных камней в желчном пузыре и желчных протоках (in vitro и in vivo).

Впервые дана полная фармако-биохимическая характеристика и экспериментальное обоснование для его клинического исследования в качестве желчегонного, гипотензивного и литолитического средства.

Практическая значимость.

1. Разработан метод синтеза «Триоин»-а, получен соответствующий патент № TJ 358 зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Республики Таджикистан от 30.07.2010г.

2. В экспериментальных условиях «Триоин» растворяет холестериновые и пигментные камни желчного пузыря и желчных протоков (in vitro) в 2 раза интенсивнее, чем препараты, использованные в медицинской практике.

Положения, выносимые на защиту:

- Синтезированный «Триоин» обладает желчегонным и литолити-ческим свойствами, не оказывает токсического действия на лабораторных животных и на окружающую среду.

- Исследовано влияние раствора «Триоин»-а на физико-химические свойства дестабилизированной желчи у лабораторных животных при холелитиазе.

Достоверность полученных результатов подтверждается следующим:

- высокой чувствительностью и специфичностью использованных биохимических, физико-химических и фармакологических методов исследования;

- проведением статистической обработки полученных экспериментальных результатов общепринятыми методами.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены: — на расширенном заседании лабораторий фармакологии, органического синтеза и гетероциклических соединений института химии АН РТ (Душанбе, 2008); - на заседании отдела клинической биохимии института гастроэнтерологии МЗ РТ (Душанбе, 2009); - на годичной научно-практической конференции молодых ученых «Современная медицина и новые технологии» (Душанбе, 2010); - на научно-практической

конференции, Республиканского медицинского колледжа (Душанбе, 2010).

. Публикации.

Материалы диссертации работы опубликованы в 9 изданиях: 5 — в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ, 4 — в трудах научно-практических конференций. Получен один патент Республики Таджикистан.

Личный вклад автора в работу.

Исследования проводились в соавторстве, личный вклад состоял в постановке задач исследования, определении путей и методов их решения, получении и обработке экспериментальных данных, анализе и обобщении результатов экспериментов, формулировки положений и основных выводов диссертации.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, основных результатов и выводов, списка использованной литературы из 147 источников. Общий объем — 102 страницы компьютерного набора, иллюстрированных 11 таблицами и 12 рисунками.

Материал и методы исследования

Эксперименты были проведены на 110 белых крысах обоего пола массой 140-205 г, 20 белых мышах массой 20-25 г, 10 морских свинках массой 260-300 г, 32 золотистых хомячках, 6 кроликах и 6 кошках. Поставлено 86 серий опытов, проведено более 160 анализов биологических проб.

Предметом исследования явился образец «Триоин»-а, синтезированный в Институте химии им. В.И. Никитина АН РТ.

Образцы холестериновых желчных камней взяты у больных при хирургическом вмешательстве. Количественное содержание холестерина, желчных и жирных кислот в составе камней определяли методом газожидкостной хроматографии.

Разработана оптимальная методика синтеза метиловых эфиров жирных и желчных кислот с целью определения их содержания в биологических объектах. Для определения степени чистоты исходных и различных фракций очищенных веществ использован метод тонкослойной хроматографии, для подтверждения их индивидуальности — метод газожидкостной хроматографии.

В сыворотке крови животных определяли ряд показателей, отражающих функциональное состояние печени и желчевыделительной системы: содержание. общего билирубина, жира, холестерина, жирных кислот, желчных кислот; изучали активность ферментов процесса переаминирования (АсАТ, АлАТ) и щелочной фосфатазы.

Содержание общего билирубина определяли по Иендрашику-Графу (Колб, Камышников, 2003).

Использовали биохимический анализатор АБ—ФК-02-(НПТТ-ТМ) и метод газожидкостной хроматографии. Содержание фосфолипидов в желчи определяли по методу (Марховского Ю.Х., 1985).

Индекс литогенности желчи и холатохолестериновый коэффицент рассчитывали математически как отношение суммарных желчных кислот к холестерину отдельно для каждой порции желчи. Содержание индивидуальных , желчных кислот в желчи изучали методом газожидкостной хроматографии на приборе «Хром-5» с использованием пламенно-ионизационного детектора (Кадыров А.Х., 2009).

Экспериментальный холелитиаз и сопутствующие гиперхолесте-ринемию и гиперлипидемию вызывали с помощью метода, разработанного Зубайдовой Т.М., (1993) т.е. применением сухой холелитогенно-гиперлипидемической диеты (ХГЛД).

Цифровые показатели исследований обработаны методом вариационной статистики. Для оценки достоверности различий использован критерий Стьюдента. Связь между признаками определялась вычислением коэффициента корреляции (Белоус А.К., Колодяжный В.И., 1971).

ПОЛУЧЕНИЕ «ТРИОИН»-А И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕГО ЛИТОЛИТЕСКИХ СВОЙСТВ

Разработка наиболее приемлемых способов некоторых производных стероидов, а также высших жирных кислот, на основе использования их карбоксильных и эфирных групп открывает новое направление в фармако-биохимической области, которое позволяет вести направленное создание новых препаратов, растворяющих холестериновые желчные камни.

Получспие и свойства «Триоин»-а

Получение «Триоин»-а в качестве препарата растворяющего холестериновые и пигментные камни желчного пузыря и желчных протоков, заключается в следующем. Брали смесь моноглицеринового эфира каприловой кислоты, моноглицериновый эфир хенодезоксихолевой кислоты и добавляли моноглицериновый эфир пеларгоновой кислоты, который синтезировали путем взаимодействия натриевой соли пеларгоновой кислоты с а-монохлорглицерином, осуществляемом при температуре 65-70°С в течение 12-13 ч.

В первую очередь был осуществлен синтез трех сложных эфиров на основе производных холановых и высших жирных кислот.

Поскольку природные желчные и высшие жирные кислоты могут являться средством лечения желчнокаменной болезни, исследование было

направлена поиск путей обоснования их применения в медицинской практике, а также через выявление взаимосвязи их структуры и биологической активности. При этом в качестве вторичного компонента для конденсации подбирали соединения, которые известны как составные части биологически активных веществ, в частности лекарственных препаратов.

При этом осуществлен синтез моноглицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты, который по структуре близок к известным холелитическим препаратам.

Нейтрализация хенодезоксихолевой кислоты осуществлена реакцией взаимодействия с метилатом натрия с последующим осаждением соли в насыщенном растворе хлористого натрия. Натриевую соль кислоты можно получить также с хорошим выходом путем взаимодействия хенодезоксихолевой кислоты с гидроксидом натрия в среде диоксана.

Проведенные нами исследования показали, что натриевая соль хенодезоксихолевой кислоты легко реагирует с а-монохлоргидрином глицерина при температуре 80-85°С в растворе абсолютного метилового и этилового спиртов в течение 3-4 ч. Выход целевого продукта моноглицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты составляет 86%.

Синтез моноглицидного эфира хенодезоксихолевой кислоты был осуществлен путем взаимодействия натриевой соли соответствующей кислоты с зггихлоргидрином в запаянной ампуле при 65°С в течение 5-6 ч.

Синтез препаратов, растворяющих холестериновые желчные камни в желчных протоках, осуществлен на основе реакции глицидного эфира и хенодезоксихолевой кислоты с использованием глицидной группы.

Изучено поведение эпоксидной группы в молекуле глицидного эфира хенодезоксихолевой кислоты. Реакция последнего с 20% раствором карбоната натрия показала, что при температуре 30-40°С за 2-3 ч наблюдается образование глицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты почти количественным выходом.

Полученные производные желчных кислот, обладают по сравнению с известными соединениями этой же группы наибольшей способностью растворять холестериновые камни. Как показывают эксперименты, глицериновый эфир хенодезоксихолевой кислоты способствует усилению активности ферментативной системы, что ведет к массивной утилизации холестерина в желчные кислоты.

Это, по-видимому, объясняется тем, что соединение под действием кишечной флоры подвергается гидролизу по сложноэфирной группе. При этом соответственно возрастает концентрация свободной хенодезоксихолевой кислоты в желчи. В свою очередь это приводит к ускорению растворения холестериновых желчных камней.

Поиск но изысканию новых биологически активных веществ в ряду функциональных производных пеларгоновой кислоты был проведен по

пути разработки препаративного метода синтеза глицеринового эфира пеларшновой кислоты.

Опытами было показано, что натриевая соль пеларгоновой кислоты легко реагирует с а-монохлоргидрином глицерина при 80°С в растворе абсолютного этилового спирта в течение 4-5 ч. Выход целевого продукта глицеринового эфира пеларгоновой кислоты составляет 83%.

Эксперименты показали, что значительно более эффективным растворителем холестериновых камней, чем производные холановой кислоты, является глицериновый эфир пеларгоновой кислоты.

Аналогичным образом нами был синтезирован глицериновый эфир октановой кислоты.

Нами найден оптимальный вариант получения «Триоин»-а на основе 45% глицеринового эфира пеларгоновой кислоты, 45% глицеринового эфира октановой и 10% глицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты, с целью изучения его на способность растворять холестериновые камни.

Таким образом, смеси этих трех веществ в работе идут под названием «Триоин».

Исследование литолитических свойств «Триоин»-а (in vitro)

Препарат «Триоин» разработан по специальной методике на основе сложных эфиров жирных и желчных кислот в Институте химии им. В.И. Никитина. Холестериновые желчные камни были изъяты у больных с желчнокаменной болезнью при хирургическом вмешательстве.

Анализировались многогранные камни диаметром 0,9-1,4 см, рассортированные по массе на 14 пар. Средняя масса камней была 250 мг и средняя процентная разница между массой камней была 16 мг (6,8%). Количественное содержание холестерина в камнях определяли методом газожидкостной хромотографии (рис. 1).

эжесяям. »»

Рис. 1. Хромограмма содержания холестерина в желчном камне

Среднее содержание холестерина составляло 86,5% от массы камней. При газохромотографическом анализе в качестве внутреннего стандарта использован раствор трикосана.

Проведено сравнительное изучение скорости растворения камней «Триоин»-ом и другими растворителями в пересчете на 100 мл.

В табл. 1 приводится количество растворенных холестериновых камней на 100 мл различных органических растворителей при температуре 37°С.

Учитывая токсичность органических веществ, для растворения холестериновых желчных камней лучше всего использовать «Триоин».

Таблица 5

Растворимость холестериновых камней при температуре 37°С в органических растворителях

Название растворителя г/¡09 мл

Диэтиловый спирт 13,7

Монооктаноин 11,7

Триоин 12,8

Олеиновая кислота 14,6

Октиловый спирт 17,2

Этиловый спирт 3,2

'Гриоктаноин 5,3

Для определения скорости растворения холестериновых камней в растворе «Триоина» проведены серии экспериментов в сравнении с используемым в зарубежной практической медицине препаратом 50%-ного раствора холата натрия и монооктаноина, выпускаемым под шифром (САМРЦЪ - 8210). (Рис. 2).

Название препарата 0 2 4 6

20 мл 50% -го раствора холата натрия и и ■к /шр- ' ш ш л -

20мл раствора монооктаноина (Сашри! 8210) ШШк г ; Ш Щг А, ЩШ Жгкь. ЯР ш фф

20 мл раствора «Триоин» ФФ ЧШГ ф ф # ¿ц Ж ё •

Рис. 2. Продолжительность растворения холестериновых камней в днях

9

Установлено, что холестериновые камни желчного пузыря в растворе монооктаноина растворяется на 8-й, в растворе «Триоии»-а - на 6-й день. Что касается 50% раствора холата натрия, то только на 48-й день началось их дробление.

От известных препаратов «Триоин» отличается своей индифферентностью к тканям, отсутствием раздражающего эффекта и воспалительной реакции при непосредственном введении в желчные пути. Раствор «Триоин» хорошо смачивает камни и в соединении с желчью образует мелкую диспергированную эмульсию.

Полученные результаты свидетельствуют, что «Триоин» превосходит известный препарат САМРЦЬ-8210 и лучше растворяет желчные холестериновые камни. (Рис. 3).

160 140 120 100 80 -60 40 20 О

Монооктаноик

"Триоин"

20

20

20

Рис. 3. Растворимость холестерина в растворе холате натрия, меиоактаиоин и

«триоин»-е

Поведение образца кристаллического холестерина в растворе известного монооктаноина, холата натрия и «Триоишьа, изучали с использованием дискового аппарата с большой скоростью взбалтывания. Растворение моногидрата холестерина намного быстрее происходило в монооктаноине и «Триоин»-е, чем в растворе 50% холата натрия.

Изучение литолитических свойств «Триоина» (ík vivo)

Свойства «Триоин »-а ингибировать синтез общих липидов, уменьшать концентрацию холестерина, триглицеридов, Р-липопротеидов, повышать количество желчных кислот, содержание фосфолипидов в желчи послужили основой для изучения активности его при экспериментальном холелитиазе.

Опыты проводились на 20 хомячках обоего пола массой тела от 55 до 70 г. Животные были распределены на следующие группы:

1. Животные интактные, находившиеся на обычном рационе вивария;

2. Животные нелеченые, получавшие в течение 6 мес сухую ХГЛД (контроль);

3. Животные, которым с целью растворения желчных камней вводили раствор «Триоина» непосредственно в желчные пути, через Т-образную дренажную трубку, вставленную в общий желчный проток

4. Животные, которым по той же схеме вводили «Моноактаноин» непосредственно в желчные пути через Т-образную трубку, вставленную в общий желчный проток.

Об эффективности изучаемых препаратов судили:

1. По количеству и проценту оставшихся живыми в течение 6 мес хомячков;

2. По числу и проценту животных с наличием конкрементов;

3. По изменению содержания основных желчных кислот;

4. По состоянию химизма собранной пузырной желчи у опытных и контрольных хомячков.

После забоя животных методом декапитации вскрывали брюшную полость, затем, после сбора желчи, производили подсчет и измерение конкрементов.

В желчном пузыре 4 (80%) из 5 хомячков, получавших в течение 6 мес сухую ХГЛД, обнаружены конкременты разного размера.

Их среднее число на одного животного составило 3,9±0,1 (р<0,001) против 0,12*0,01 у интактных животных (табл. 2, рис. 4).

Таблица 2

Темп развитая холелитназа и характер конкрементов желчного пузыря у шггактных и опытных золотистых хомячков, получавших в

течение 6 мес. ХГЛД

Серия опытов и дозы в мг/кг массы тела (число животных) Число и % животных с конкрементами в желчном пузыре Среднее число квпкремептов на 1 животное '

Всего Камнн от 2,3 до 5,5 мм Песок

Интактные (обычная диета) 1 (20%) 0,12±0,01 0,125±0,2 —1

Контроль+ХГЛД 4 (80%) 0,0002 1.5*0.06 0,0002 2,2±0,2

«Триоин» 0,5(10%) 0,012 0,012 -

Монооктаноин 0,75 (15%) 0.72±0.004 0,002 0.5±0.05 0,001 0.6±0.16 0,001

Холелитогенная диета в течение 6 мес.

Желтые и коричневые конкременты размером 2 - 2,2 мм были дифференцированы как песок.

В контрольной группе среднее число камней размером 2,3-5,5 мм составляло 3,97±0,08, среднее количество песка - 2,2±0,2.

Исследование желчного пузыря интактных хомяков только в 2 случаях (9,3% из 5) обнаружило наличие камней размером 2,3-5 мм, среднее количество которых составило 0,125±0,2 шт.

При дифференцировании конкрементов желчного пузыря, собранных у опытных контрольных животных в зависимости от их окраса, были обнаружены следующие закономерности: все (100%) конкременты желчного пузыря интактных животных имели черный окрас.

Конкременты желчного пузыря хомячков, получавших в течение 6 мес сухую ХГЛД, в 85% случаев имели бледно-желтый окрас. Конкрементов с коричневый окрасом было 9,6%.

В группе из 5 животных, которым «Триоин» вводили в течение 3 ч. через Т-образную дренажную трубку со скоростью 0,5-1 мл/ч, только в желчном пузыре у 1 из них (0,3%) обнаружен 1 камень размером 1,6 мм. Песок и мелкие камни во всех случаях отсутствовали.

Растворяющая способность «Триоин»-а усиливается за счет глицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты. Таким путем добились положительного результата при исследовании литолитических свойств «Триоина» (in vivo).

В другой группе животных, при таком же названном способе введения монооктаноина и ежедневно получавших в течение 6 мес. сухой

корм ХГЛД, в 85-86% случаев конкременты имели бледно-желтую окраску.

В данном случае у 1 животного в желчном пузыре (0,6%) из 5 был обнаружен 1 камень размером 2,1 мм. При этом песок и мелкие камни во всех случаях также отсутствовали.

Таким образом, растворяющая способность «Триоин»-а была в два раза выше, чем монооктаноина.

«Триоин» может быть эффективным при наличии холестериновых и пигментных камней в желчном пузыре и желчных протоках 80-90% случаев.

У хомячков, получавших в течение 6 мес. в качестве корма холелитогенную диету, резко нарушается химизм желчи в сторону повышения степени ее литогенности. Статистически достоверно повышалось количество холестерина и особенно билирубина (Р<0,001) в желчи (табл. 3).

Содержание суммарных желчных кислот уменьшалось в 3 раза (Р<0,001), концентрация фосфолипидов - почти в 2,5 раза (Р<0,001). Холатохолестериновый коэффициент у контрольных животных - в 2,5 раза (Р<0,01).

Таблица 3

Химизм желчи у золотистых хомячков, получавших в течение б мес.

холелэтогснно-гиперлипидемическую диету (среднее но 6 животных в каждой группе)

Серия опытов Показатели химизма желчи М±ш Р<

Общей холестерин, ммоль/л Общий билирубин, мкм оль/л Сумма желчных кислот мкмоль/л Общие фосфолнпиды ммоль/л Холато-холсстернновьш коэффициент (XX К)

Интактные 5,4±0,007 6,3±0,01 3,2±0,02 3,4±0,028 0,59±0,005

Контроль + ХГЛД 7,К±0,01б 0,08 3.2±0,001 0,001 1.02±0.01 0,001 1.4±0.001 0,011 0,13±0,019

Примечание: значение Р для контрольной серии даны по сравнению с интакптыми меивотньши.

С целью проведения достоверного биохимического исследования по изучению содержания желчных кислот в желчи у хомячков, получавших ХГЛД в течение б мес, по сравнению с интактными использовали метод газожидкосгной хроматографии.

В качестве иллюстрации приводим 2 примера.

На рис. 5 показаны хроматограммы метиловых эфиров желчных кислот в желчи интактных и контрольных животных до и после воздействия ХГЛД.

экспериментальных животных: (а) - до и (6) - после приема ХГЛД.

1 - ЛХК; 2 - ДХК; 3 - ХДХК; 4 - Дег.ХК; 5 - стандарт, 2,3-дигидрокси-12-кетометилхолат; 6 - ХК.

Как видно из хроматограммы, до кормления животных содержание дезоксихолевой кислоты (ДХК) составило 0,38, хенодезоксихолевой кислоты (ХДХК) - 0,98, холевой кислоты (ХК) - 0,88 мг/мл, при содержании литохолевой кислоты (ЛХК) - 0,26 мг/мл.

В желчи хомячков резко изменялось содержание желчных кислот в сторону повышения ее литогенности.

В группе контрольных животных количество ЛХК составило 0,41, ДХК - 0,63, ХДХК -1,11, ХК - 1,81 мг/мл.

В случае повышения степени литогенности желчи у животных увеличивалось содержание холевой кислоты (рис. 5).

Таким образом, сухая холилитогенная диета при длительном введении способствовала развитию холилитиаза не менее чем у 86% хомячков. Механизм образования желчных камней связан с повышением синтеза холестерина и билирубина, при резком повышении уровня холевой кислоты в желчи.

«Триоин» проявляет выраженную способность к растворению холестериновых и пигментных камней в желчном пузыре и протоках по сравнению с известным препаратом монооктонаином.

Влияние «Триоин»-а на сердечно-сосудистую систему

Влияние «Триоина» на сердечно-сосудистую и дыхательную системы изучено в опытах на 20 белых крысах массой 200-220 г. В дозах 50, 100, 200, 300 и 400 мг/кг массы, он, разведенный в подсолнечном масле в виде эмульсии, при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении не оказывал какого-либо изменения кровяного давления и ритма дыхания, в дозах до 1000 мг/кг массы кровяное давление падало на 43% и держалось на этом уровне в течение 2-2,5 ч, дыхание становилось глубоким, без изменения частоты дыхательного ритма.

Изучение влияния «Триоин»-а на артериальное давление и периферические сосуды проводили на кошках массой 3 - 4 юг под уретановым наркозом (1,2 г/кг). Препарат вводили в вену бедра. В дозе 20 мг/кг он вызывал повышение кровяного давления на 15-17 мм. рт. ст. продолжительностью 25-30 мин. с последующим снижением до исходного уровня и ниже. Частота сердечных сокращений становилась реже на 2022%, амплитуда пульсовой волны значительно увеличивалась, дыхательная деятельность оставалась без изменений. Доза 10 мг/кг вызывала едва заметное повышение коовяного давления, наблюдавшееся в течение 15-20 мин. Наблюдалось незначительное увеличение пульсовой волны и замедление темпа сердечной деятельности - на 8-10%. Через 3540 мин. заметно снижалось частота сердечных сокращений - на 25-30%, увеличивалась пульсовая волна в 1,4 раза (рис. 6), одновременно отмечено урежение дыхания с небольшим увеличением амплитуды.

1

Влияние «Триоин»-а на артериальное давление исследовали также на здоровых интактных кроликах и кроликах с экспериментально вызванным атеросклерозом. Содержание холестерина в сыворотке кровн достигало при этом в среднем до 840 мг % или 21,7 ммоль/л. У подопытных животных при вскрытии констатированы атеросклеротические бляшки в аорте и в крупных отходящих от нее сосудах. У здоровых животных «Триоин» в дозе 0,03-0,05 мг/кг вызывал повышение артериального давления на 10-13 мм. рт. ст.; у кроликов с атеросклерозом прессорная реакция была выражена больше, особенно в аспекте ее длительности, в среднем составивших 12,2 мин., у здоровых кроликов - 6,3 мин.

Латентная фаза действия «Триоин»-а у кроликов с атеросклерозом была длительнее и доходила до 26 с, в то время как у здоровых животных она равнялась 3-5 с. Эти особенности действия «Триоина» у кроликов с атеросклерозом можно связать с морфологическими изменениями в аорте,

Рис. 6. Изменение (а) - артериального давления и (б) - дыхание у кошки под влиянием «Трноин»~а в дозе 0,1 мг/кг: - до введения; 2- через 15 мин; 3 - через 20 мин; 4 - через 25 мин; 5 - через 35 мин после введения.

отходящих от нее сосудах и сердце, в частности в инрамуральных ганглиях, а также с изменениями общей реактивности сердечнососудистой системы.

Влияние «Триоин»-а изучали на изолированных по методу Штрауба сердцах кошек in Situ. Животные обоих полов находились под искусственным дыханием и уретановым наркозом (1,2 г/кг). «Триоин» в дозах 0,4-0,5 мг/кг, введенный в вену, увеличивал амплитуду сердечных сокращений в 2-3 раза, урежал частоту сердечных сокращений на 15-20 % (рис. 7).

Рис. 7. Изменение деятельности сердца in Situ у кошки под влиянием «Триоии»-а в дозе 0,5 мг/кг: t - до введения; 2 - через 4 мин; 3 — через 9 мая; 4 — через 20 мин; 5 - через 23 мин. после введения.

Доза 0,1 мг/кг сначала вызвала увеличение амплитуды сердечных сокращений, затем - урежение темпа сердечной деятельности на 20-25%, при последующем учащении. Наблюдалась также синюшность сердца, иногда перистальтизм и остановка его в фазе систолы (рис. 8). Замедление темпа сердечных сокращений, хотя и менее выраженное, отмечалось как при целых и неблокированных блуждающи?; нервах, так и после ваготомии и атропинизации их. Следовательно, урежение сердечных сокращений связано с влиянием «Триоин»-а на нервно-мышечный аппарат сердца и на центр блуждающих нервов.

Таким образом, «Триоин» избирательно действует на нервно-мышечный аппарат сердца различных животных, вызывает удлинение диастолы и усиление систолы подобно другим известным препаратам.

Рис. 8. Изменение деятельности сердца ш у кошев иод влиянием «Триоин»-а в дозе 0,1 мг/кг: !- до введения; 2 — через 4 мин; 3 - через 9 мин ; 4 - через 20 мин; 5 - через 23 мин. после введения. 16

Острая токсичность «Триоин»-а

Эксперименты проводили на 20 белых мышах массой 25-27 г и 16 беспородных белых крысах обоего пола массой 120-130 г. Раствор «Триоии»-а вводили в дозах от 10 до 50 мг/кг массы. Каждая доза «Триоина» испытывалась на 4 животных. Контрольные крысы получали соответствующий объем подсолнечного масла. Интервал наблюдения за подопытными животными при определении острой токсичности «Триоин»-а составил 10 сут. При внутрижелудочном его введении в дозах 10-50 мг/кг массы каких-либо изменений в общем состоянии животных не наблюдалось.

При увеличении дозы до 10-20 мг при парентеральном и оральном введении наблюдались единичные случаи летальных исходов, свыше 14 мг/кг для белых мышей и 30-50 мг/кг для белых крыс через 30-50 мин. (в зависимости от пути введения) у животных возникало двигательное возбуждение, учащение дыхания и повышение чувствительности к механическим, световым и звуковым раздражителям. Через 40 мин возбуждение сменялось угнетением. Гибель животных после введения токсических доз «Триоин»-а во всех случаях наступала вследствие остановки дыхания.

ЛД-50 «Триоин»-а при внутрижелудочном введении белым мышам равнялись 1320 мг/кг, белым крысам - 3300 мг/кг (табл. 4).

При подкожном введении «Триоин»-а общая картина отравления в сущности не отличалась от описанной выше, однако явления интоксикации развивались быстрее, приводя к гибели животных в более ранние сроки.

Таблица 4

Токсичность «Триоин»-а для лабораторных животных

Пути введения ЛД минимальная ЛД-50 ЛД-100

мг/кг массы мг/кг г/кг

Дня белых мышей

Внутрижелудочио 10300 1320 1739

Подкожно 8500 1160 1351

Для белых крыс

Внутрижелудочио 1690 3300 3466

Подкожно 1220 3680 2896

Примечание: «Триоин» из-за низкой степени, токсичности вводился в смеси с подсолнечным маслом (1:1) дробно по 1 мл на 25-30 г массы тела мышей или на 100 г массы тела нрыс через каждые 30-40 мин.

ЛД-50 «Триоин»-а при подкожном введении для белых мышей составляла 1160 мг/кг, для белых крыс - 3680 мг/кг массы.

ЛД-100 при внутрижелудочном введении составляла для белых мышей 1739 мг/кг, для белых крыс - 3466 мг/кг массы.

Следовательно, «Триоин» является более токсичным для белых мышей. Возможно, это связано с введением большого объема «Триоин»-а, причем его низкая токсичность - с тем, что он резко стимулирует потоотделение и диурез, при которых элиминируется из организма.

Результаты изучения хронической токсичности «Триоин»-а

Исследование безвредности раствора «Триоин»-а в условиях хронического (пятимесячного) эксперимента проведено на 20 белых беспородных крысах массой 120-150 г с использованием перорального способа введения.

Животные были распределены на 4 группы: 1-я - контрольные, получали подсолнечное масло в дозе 2 мг/кг; 2-я - «Триоин» в дозе 20; 3-я - в дозе 35; 4-я - в дозе 50 мг/кг массы.

«Триоин» вводили внутрижелудочно ежедневно 1 раз в сутки в течение 5 мес. Наблюдения за животными на протяжении хронического эксперимента показали, что «Триоин» в названных дозах не оказывал отрицательного влияния на поведение белых крыс.

Животные, получавшие «Триоин», по внешнему виду не отличались от контрольных, имели гладкий шерстный покров, сохраняли двигательную активность, охотно поедали корм.

У животных, получавших в течение 1 мес. «Триоин» в дозе 20, 35, 50 мг/кг, прирост массы в среднем составлял 13—14,3% против 3% у контрольных крыс. На протяжении 3 и 5 мес. прирост массы у опытных и контрольных животных во всех случаях был идентичным (табл. 5).

Таблица 5

Прирост массы крыс в течение пятимесячного внутрижелудочного введения различных доз «Триоин»-а (среднее по 6 животных в каждой группе)

Серия опытов и дозы в мг/кг массы Исходная массы, принятая за 100% Динамика массы, в г через в %

1 мес. 2 мес. Змее. 4 мес. 5 мес.

Интактное подсолнечное масло - 2 мг/кг 130±0„19 100 134±0,6 101 137±0.6 103 142.5±0,6 108 150.3±1.07 ИЗ 163±2,9 123

«Триоин»-20 мг/кг 136±0,6 100 169,7±0,4 ИЗ 169.7±0,4 118 174.1±0,8 122 185.2±0.86 131 : 205.8±1.1 144

«Триоин»-35 мг/кг 151±0,66 100 165„8±0,7 105,3 174.2±0.7 111 186.1±0,8 120 201.3±1.8 127 208.9±3.0 134

«Триоин» -50 мг/кг 127±0,54 100 158±0,7 125 169.5±0.7 134 179±0.7 140 189.7±0.8 150 211.3±1.9 167

Рримечание: числитель — масса в г, а знаменатель — показатель массы в % по отношению к соответствующему сроку у интактных групп животных.

Влияние «Триоин»-а на антитоксическую функцию печени определяли по продолжительности барбамнлового сна у животных.

Результаты экспериментов показывают, что внутрижелудочное введение «Триоина» в дозах 20, 35 и 50 мг/кг в течение 5 мес. вызывает достоверное (Р<0,01-0,001) уменьшение продолжительности барбамнлового сна у подопытных животных (табл. 6).

Показатели тимол-вероналовой пробы через 3 и 5 мес. у опытных и контрольных животных во всех случаях были идентичными.

В условиях хронического эксперимента скорость элиминации бромсульфалеина из организма, находится в зависимости от активности участия гепатоцитов. Данная проба имеет важное диагностическое значение для выявления разных признаков паренхиматозного поражения печени.

Таблица 6

Состояние антитоксической и экскреторной функции печени у белых крыс, получавших в течение 5 мес. виутрижелудочно «Триоин»

(среднее по 6 животных в каждой группе)

Серия опытов и дозы в мг/кг массы Антитоксическая функция - Экскреторная функция

Твмол-вераноловая проба, нм/л Барбамиловый сон (§0 мг/кг, в/б) в мин Бромсульфалеиновая проба в иг, через

10 мин | 30 мнн

Через 2,5-3 мес от начала внутрижелудочиого введения (весенний период)

Контрольные подсолнечное масло — 2 мг/кг 0,64±0,017 90,2±10,5 10,5±1,1 5,8±0,2

«Триоин» - 20 мг/кг 0,61±0,02 50,7±5,2 0,01 7.8±5.4 0,04 4.6±0.19 0,03

«Триоин» - 35 мг/кг 0,62±0,25 43,03± 0,009 6,9±1.5 0,01 3.9±0,48 0,0008

«Триоин» - 50 мг/кг 0,64±0,011 40,5±2,9 0,009 5,4±0,39 0,0007 3.6±0.5 0,0007

Через 5 мес от начала внутрижелудочиого введения (летний период)

Контрольные подсолнечное масло - 2 мг/кг 0,25±0,001 1,24±16)1 12,6±0,3 . 6,0±0,1

«Триоин» - 20 мг/кг 0,20±0,001 97.Ш.7 0,09 9.1 ±0.2 0,05 4,б±0.6 0,05

«Триоин» - 35 мг/кг 0,18±0,001 91.9±0,18 0,009 6.9±0.4 0,05 3.7±0,3 0,01

«Триоин» - 50 мг/кг 0,20±0,005 76.8±0.2 0,001 7.6±0.5 0,05 З.б±0.05 0,001

У подопытных крыс, получавших в течение 5 мес. разные дозы «Триоин»-а, наблюдалось статистически достоверное (Р<0,05-0,001). ускорение скорости элиминации бромсульфалеина из организма.

Экскреторная функция печени наиболее активно проявилась у животных (Р<0,001), получавших в течение 5 мес. «Триоин» в дозе 50 мг/кг массы.

выводы

1. Предложены оптимальные условия синтеза «Триоин»-а в реакции с участием карбоксильной группы высших жирных и желчных кислот новых биологически активных соединений с комплексом практически ценных фармакологических свойств.

2. Раствор «Триоин»-а (in vitro) обладает способностью растворять в желчном пузыре и желчных протоках, холестериновые и пигментные камни в 2 раза эффективнее, чем известный препарат монооктаноин.

3. «Триоин» отличается индифферентностью к тканям, отсутствием раздражающего эффекта и воспалительной реакцией при непосредственном введении в желчные пути.

4. «Триоин» оказывает желчегонное, гипохолестеринемическое, гиполипидемическое и литолитическое действие, повышает содержание хенодезоксихолевой кислоты и фосфолипидов желчи, избирательно действует на нервно-мышечный аппарат сердца животных, вызывая удлинение диастолы, усиление систолы, подобно другим известным препаратам.

5. «Триоин» является малотоксичным фармакологическим средством -внутрижелудочное ведение препарата в дозе 25, 35 и 50 мг/кг массы в течение 5 мес. не оказывает токсического воздействия на печень, нервно-эндокринную, сердечно-сосудистую, кроветворную и пищеварительную систему.

Основное содержание диссертации изложено в следующих публикациях:

1. Бахроми М.Т., Кадыров A.A. Исследование литолитических свойств «Триоин»-а // Годичная науч.-практ. конф. молодых ученых «Современная медицина и новые технологии», посвященная году образования и технической культуры. - Душанбе, 2010. - С. 210-213.

2. Бахроми М. Т., Кадыров А.Х., Хайдаров К X. «Триоин» - растворитель холестериновых желчных камней при желчнокаменной болезни. -Здравоохранение Таджикистана. - 2010 - №1- С. 69-72.

3. Бахроми М. Т., Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х. «Триоин» и его литолитические свойства (in vivo). -Изв. АН РТ. - 2010. - №1. - С. 74-78.

4. Бахроми М.Т., Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х. Литолитические свойства «Триоин»-а. - Здравоохранение Таджикистана. -2010 - №2. - С. 21-24.

5. Бахроми М.Т. Влияние сухой холелитогенной гиперлипидемической диеты на характер изменения содержания желчных кислот и других компонентов желчи у экспериментальных хомяков.-Вестник Авиценны. -2010-№3.-С. 21-24.

6. Бахроми M.T., Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х. Растворение желчных камней «Триоин»-ом (in vivo) // Науч:-теорет. конф. профессорско-

преподавательского состава и студентов, посвященная году образования и технических знаний. - Душанбе, 2010. - С. 192-193.

7. Бахроми М.Т., Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х. Синтез и исследование литолитических свойств «Триоин»-а // Науч.-теорет. конф. профессорско-преподавательского состава и студентов, посвященная году образования и технических знаний. - Душанбе, 2010. - С. 193-194.

8. Бахроми М.Т., Кадыров А.Х., Сайфудинов А.К. Определение содержания желчных кислот в желчи интактных и контрольных хомяков методом газожидкостной хроматографии // Науч.-теорет. конф. профессорско-преподавательского состава и студентов, посвященная году образования и технических знаний. - Душанбе, 2010. - С. 194-195.

9. Бахроми М.Т., Кадыров А.Х., Хайдаров К.Х. Влияние «Триоин»-а на сердечно-сосудистую систему. - Здравоохранение Таджикистана. - 2010. -№2 (приложение) - С. 151 -153.

Изобретения

«Триоин» в качестве препарата, растворяющего холестериновые и пигментные камни желчного пузыря и желчных протоков / Патент № Т1 358 зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Республики Таджикистан от 30.07.2010г. // А.Х. Кадыров, М.Т. Бахроми с соавт.

Сдано в набор 12.11.2010 г. Подписано в печать 15.11.2010 г. Формат 60x84 1/16. Тираж 100 экз.

Отпечатано в типографии ТНУ

Актуальность проблемы. Проблема желчнокаменной болезни является сложной и многоплановой, связанной с прогрессирующим ростом уровня заболеваемости, экономическими потерями, временной утратой трудоспособности, а иногда и инвалидностью в трудоспособном возрасте.

Кроме того, вопросы соответствующей диагностики и лечения ее осложнений, опасных для жизни больных, остаются окончательно не решенными, привлекая внимание широкого круга практикующих врачей, клиницистов, биохимиков, фармакологов и других научных исследователей.

Только в странах СНГ по поводу острого и хронического холецистита ежегодно производится более 150000 оперативных вмешательств, в т. ч. 60% из них - у лиц пожилого и старческого возраста.

В таких случаях зачастую наблюдаются тяжелые сопутствующие заболевания, при большом операционном риске. Следовательно, оперативные методы лечения резидуальных и рецидивных камней не лишены недостатков. На повторную операцию больные соглашаются с большим трудом, из-за состояний связанных с функциональными изменениями со стороны печени, а также наличия послеоперационного спаечного процесса. При наличии противопоказаний к выполнению папиллосфинктеротомии или неудачах, возникающих при удалении желчных камней через дренирующий общий проток, предпочтительными являются методы их растворения.

Вследствие этого, поиск наиболее эффективных и безвредных препаратов, растворяющих холестериновые и пигментные желчные камни, остается по прежнему одной из актуальных научных проблем, решению которых посвящено наше исследование.

Цель исследования: разработка оптимального метода получения литолитического препарата «Триоин» на основе производных жирных и желчных кислот и экспериментальное обоснование показаний к его применению в качестве гипотензивного и желчегонного средства.

Задачи исследования:

- разработка технологии получения «Триоин»-а;

- исследование раствора «Триоин»-а на растворяющую способность холестериновых камней в желчном пузыре и в желчных протоках (in vitro);

- изучить литолитические свойства «Триоин»-а (in vivo);

- изучить влияние раствора «Триоин»-а на сердечно-сосудистую систему;

- изучить острую и хроническую токсичность раствора «Триоин»-а;

- выявить действие раствора «Триоин»-а на функции отдельных органов в остром эксперименте.

Научная новизна.

Впервые разработан метод получения «Триоин»-а на основе производных желчных и высших жирных кислот.

Экспериментально установлено, что раствор «Триоин»-а является эффективным средством для растворения холестериновых и пигментных камней в желчном пузыре и желчных протоках (in vitro и in vivo).

Впервые дана полная фармако-биохимическая характеристика и экспериментальное обоснование для его клинического исследования в качестве желчегонного, гипотензивного и литолитического средства.

Практическая значимость.

1. Разработан метод синтеза «Триоин»-а, получен соответствующий патент № TJ 358 зарегистрировано в Государственном реестре изобретений Республики Таджикистан от 30.07.2010г.

2. В экспериментальных условиях «Триоин» растворяет холестериновые и пигментные камни желчного пузыря и желчных протоков (in vitro) в 2 раза интенсивнее, чем препараты, использованные в медицинской практике.

Положения, выносимые на защиту:

- Синтезированный «Триоин» обладает желчегонным и литолитическим свойствами, не оказывает токсического действия на лабораторных животных и на окружающую среду.

- Исследовано влияние раствора «Триоин»-а на физико-химические свойства дестабилизированной желчи у лабораторных животных при холелитиазе

Достоверность полученных результатов подтверждается следующим:

- высокой чувствительностью и специфичностью использованных биохимических, физико-химических и фармакологических методов исследования;

- проведением статистической обработки полученных экспериментальных результатов общепринятыми методами.

Апробация работы.

Основные положения диссертационной работы доложены: - на расширенном заседании лабораторий фармакологии, органического синтеза и гетероциклических соединений института химии АН РТ (Душанбе, 2008); - на заседании отдела клинической биохимии института гастроэнтерологии МЗ РТ (Душанбе, 2009); - на годичной научно-практической конференции молодых ученых «Современная медицина и новые технологии» (Душанбе, 2010); - на научно-практической конференции, Республиканского медицинского колледжа (Душанбе, 2010).

Публикации.

Материалы диссертации работы опубликованы в 9 изданиях: 5 — в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК РФ, 4 — в трудах научно-практических конференций. Получен один патент Республики Таджикистан.

Личный вклад автора в работу.

Исследования проводились в соавторстве, личный вклад состоял в постановке задач исследования, определении путей и методов их решения, получении и обработке экспериментальных данных, анализе и обобшении результатов экспериментов, формулировки положений и основных выводов 7 диссертации.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, основных результатов и выводов, списка использованной литературы из 147 источников. Общий объем — 102 страницы компьютерного набора, иллюстрированных 11 таблицами и 12 рисунками.

выводы

1. Предложены оптимальные условия синтеза «Триоин»-а в реакции с участием карбоксильной группы высших жирных и желчных кислот новых биологически активных соединений с комплексом практически ценных фармакологических свойств.

2. Раствор «Триоин»-а (in vitro и in vivo) обладает способностью растворять в желчном пузыре и желчных протоках, холестериновые и пигментные камни в 2 раза эффективнее, чем известный препарат монооктаноин.

3. «Триоин» отличается индифферентностью к тканям, отсутствием раздражающего эффекта и воспалительной реакцией при непосредственном введении в желчные пути.

4. «Триоин» оказывает желчегонное, гипохолестеринемическое, гиполипи-демическое и литолитическое действие, повышает содержание хенодезоксихолевой кислоты и фосфолипидов желчи, избирательно действует на нервно-мышечный аппарат сердца животных, вызывая удлинение диастолы, усиление систолы, подобно другим известным препаратам.

5. «Триоин» является малотоксичным фармакологическим средством -внутрижелудочное ведение препарата в дозе 25, 35 и 50 мг/кг массы в течение 5 мес. не оказывает токсического воздействия на печень, нервно-эндокринную, сердечно-сосудистую, кроветворную и пищеварительную систему.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Проблема желчнокаменной болезни и других болезней органов пищеварения является сложной, многоплановой и актуальной в связи с постоянно прогрессирующим ростом заболеваемости.

Проблема современной диагностики и лечение желчнокаменной болезни, ее многочисленных и тяжелых осложнений, опасных для жизни больных, остается оканчательно не решенной и продолжает привлекать внимание широкого круга практических врачей, клиницистов, биохимиков, фармакологов и исследователей.

Многие вопросы, связанные с бескровными методами удаления и растворения желчных камней, неизвестны широкому кругу практических врачей.

Желчнокаменная болезнь из-за большой распространенности во всех странах мира приобрела значение социальной проблемы.

В связи с этим разработка удобных методов создания новых литолитических препаратов, изучение их фармако-биохимических свойств представляет собой актуальную задачу как в плане развития фармакологии и биохимии, так и для практической медицины.

Поэтому освещение современного состояния изучения и использования , смеси лекарственных препаратов, созданной нами под названием «Триоин»; имеет не только теоретический, но и сугубо практический интерес.

Мы ознакомились с данными летературы, относительно растворения холестериновых камней в желчном пузыре и желчных протоках из чего можно сделать вывод о том, что растворение желчных камней является достаточно адекватным методом лечения. ' •

В первую очередь нами был осуществлен синтез трех сложных эфиров на основе холановых и высших жирных кислот, которые по своей структуре близки к известным холелитолитическим препаратам. При этом в качестве второго компонента для конденсации подбирали соединения, которые

80 I I известны как составные части биологически активных веществ, в частности лекарственных препаратов.

В результате проведения реакции конденсации, исходя из монохлоргидрина, глицерина, эпихлоргидрина и натриевых солей октановой, пеларгоновой и хенодезоксихолевой кислот, нами был синтезирован ряд соответствующих сложных эфиров: моноглицериновый эфир хенодезоксихолевой, моноглицериновый эфир пеларгоновой и моноглицериновый эфир октановой кислот, которые проявляют литолитические свойства.

Таким образом, нами был найден оптимальный вариант и количественный подбор этих трех сложных эфиров.

В результате смешения 10% глицеринового эфира хенодезоксихолевой; 45% глицеринового эфира октановой и 45% глицеринового эфира пеларгоновой кислоты нами получена смесь этих трех веществ и в работе идет под названием «Триоин».

Для определения скорости растворения холестериновых камней в растворе «Триоина» проведены серии-экспериментов (in vitro) в сравнении с используемым в зарубежной практической медицине препаратом 50%-ного раствора холата натрия и монооктаноина. В ходе наблюдения нами было установлено, что холестериновые камни желчного пузыря в растворе монооктаноина растворяются на восьмой день, а в растворе «Триоин» растворяется полностью на 6 день. Что касается 50%-ного раствора холата натрия, только на 48 день началось дробление холестериновых камней на осколки.

Таким образом, опыты показали, что при растворении холестериновых камней в желчном пузыре и скорость их дробления1 на осколки в- случае применения монооктаноина и «Триоина» имеются различия, однако наш препарат во много раз превосходит по эффекту 50%-ный раствор холата натрия.

Свойство «Триоина»'ингибировать синтез общих липидов; уменьшать

I 8*1 концентрацию холестерина, триглециридов, (3-липопротеидов, повышать количество желчных кислот, а также содержание фосфолипидов состава1 желчи побудило нас изучать его активность при экспериментальном холелитиазе.

При дифференцировании конкрементов желчного пузыря, собранных у опытных контрольных животных в зависимости от цвета и окраски были обнаружены следующие закономерности: все (100 %) конкременты желчного пузыря интактных животных имели черную окраску. Конкременты желчного пузыря хомячков, получавших в течение 6 мес сухую ХГЛД, в 85% случаев имели бледно - желтую окраску.

В группе животных, которым вводили через Т-образную дренажную трубку «Триоин», только в желчном пузыре одного животного из 6 был обнаружен 1 камень размером 1,6 мм.

Надо отметить, что растворяющая способность «Триоин»-а усиливается за счет глицеринового эфира хенодезоксихолевой кислоты.

Таким образом при определении растворяющей способности «Триоин»-а по сравнению с известным препаратом монооктаноином было и * выявлено, что «Триоин» в два раза превосходит эффект известного препарата.

Установлено, что «Триоин» может быть эффективен при наличии холестериновых и пигментных камней в желчном пузыре и желчных протоках. Эффективность «Триоина» достигает 90% в отличие от известного препарата монооктаноина. !

Используя газохромотографические и другие методы биохимического анализа желчи у экспериментальных животных, было установлено, что длительное применение сухой холелитогенной диеты, способствовало развитию холелитиаза более чем у 85% хомячков.

Таким образом, установлено, что механизм образования желчных камней связан с повышением синтеза холестерина, билирубина, а также1 с резким повышением содержания холевой кислоты в желчи. •

Триоин» относится к истиным литолитическим средствам.

Влияние «Триоин»-а на сердечно-сосудистую и дыхательную систему изучено в опытах на 20 белых крысах и 3 кошках. «Триоин» в дозах 50, 100, 200, 300 и 400 мг/кг массы, разведенной в подсолнечном масле в виде эмульсии при внутрижелудочном и внутрибрюшном введении не оказывал какого-либо изменения кровяного давления и ритма дыхания.

При повышении дозы «Триоин»-а до 50-100 мг/кг массы кровяное давление падало на 43% и держалось на этом уровне в течение 2-2,5 ч. Дыхание становилось глубоким, а частота дыхательного ритма почти не изменялась.

Влияние «Триоин»-а на артериальное давление исследовали также на здоровых (интактные) кроликах и кроликах с экспериментально вызванным атеросклерозом.

У здоровых животных «Триоин» в дозе 0,03-0,05 мг/кг массы вызвал повышение артериального давления на 10-13 мм. рт. ст. Так, если у кроликов с атеросклерозом длительность прессорного эффекта в среднем составляла 12,2 мин, то у здоровых кроликов она была равна в среднем 6,3 мин.

Исследование острой токсичности «Триоин»-а показало, что, судя по величине ЛД-50 и ЛД-100 он является более токсичным для белых мышей. Возможно, это связано с введением большого объема «Триоин»-а. Низкая токсичность «Триоин»-а для лабораторных животных, возможно, еще связано с тем, что «Триоин», резко стимулируя потоотделение и диурез, вместе с потом и мочой элиминируется из организма. . • • •

Таким образом, установлено, что ЛД-50 «Триоин»-а при подкожном введении для белых мышей составляла 12,6 г/кг, для белых крыс 56,8 г/кг массы. ЛД-100 при внутрижелудочном введении составляло для белых мышей 18,5 г/кг, а для белых крыс 52,3 г/кг массы.

Исследование безвредности раствора «Триоин»-а в условиях хронического (пятимесечного) эксперимента было проведено на 20'белых беспородных крысах массой 120-150 г с использованием перорального

83 способа введения. Как видно, при внутрижелудочном введении «Триоин» в дозах 20, 35 и 50 мг/кг массы в течение 5 мес не приводил к летальному исходу подопытных крыс. Наблюдение за животными на протяжении хронического эксперимента показали, что «Триоин» в испытываемых дозах не оказывала какого-либо существенного отрицательного влияния на поведение белых крыс.

У животных, получавших в течение 1 мес «Триоин» в дозах 20, 35 и 50 мг/кг, прирост массы в среднем составлял 13-14% против 3% у контрольных крыс.

У животных получавших в условиях хронического эксперимента «Триоин» в дозах 20, 35 и 50 мг/кг массы, возникло увеличение активности желчевыделительной функции печени, о чем свидетельствует достоверное, повышение объема секретируемой желчи.

Эти данные свидетельствуют о том, что длительное введение «Триоин»-а не оказывает отрицательного влияния на секреторную функцию печени, но наоборот, вызывает активизацию функции печени.

Одним из широко применяемых в фармакологии тестов при" установлении наличия нейротропных свойств новых средств является оценка характера их действия на снотворный эффект различных наркотических средств, снотворных и термогенных препаратов.

В качестве снотворных нами использованы барбамил и хлоралгидрат, на 20 белых крысах-самцах массой 160-180 г.

Барбамил и хлоралгидрат водили внутрибрюшинно соответственно5!в дозах 70-300 мг/кг массы.

Триоин» вводили внутрижелудочно в дозах 20, 35 и 50 мг/кг массы за 40 мин до введения снотворных.

Продолжительность снотворного эффекта определяли с момента нсатупления бокового положения • до момента пробуждения, показателем которого считали выход животного из бокового положения.

Усиление снотворного действия' барбамила и хлоралгидрата с

84 помощью «Триоин»-а в дозах 20, 30 и 50 мг/кг массы без сочетания со снотворными препаратами вызывал снотворный эффект.

Увеличение дозы «Триоин»-а до 50 мг/кг массы сопровождалось еще большим повышением снотворного действия барбамила и хлоралгидрата. Это свидетельствовало о том, что нейтропное действие «Триоин»-а зависит от велечины введенной дозы препарата, т.е. является дозозависимым.