Автореферат и диссертация по медицине (14.00.40) на тему:Факторы неоангиогенеза в дифференциальной диагностике заболеваний представительной железы

На правах рукописи

ГТУЛЬБЕРЕ СЕРГЕЙ АЛЕКСАНДРОВИЧ

ФАКТОРЫ НЕОАНГИОГЕНЕЗА В ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ

(14.00 40 -урология)

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва 2007

003176212

Работа выполнена на кафедре урологии и оперативной нефрологии ГОУ ВПО Российского университета дружбы народов и в лаборатории молекулярной биологии ГУЗ Московского научно-исследовательского института медицинской экологии Департамента здравоохранения г Москвы

Научные руководители:

доктор медицинских наук, профессор доктор биологических наук, профессор

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор кафедры нефрологии и гемодиализа ФПК ММАим И М.Сеченова доктор медицинских наук, профессор кафедры урологии и оперативной нефрологии ГОУ ВПО РГМУ

В П Авдошин А. И Глухов

В. В Борисов

А К Чепуров

Ведущая организация:

ГОУ ДПО « Российская медицинская академия последипломного образования Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится » xJl 2007 года в «//» часов на заседании диссертационного совета Д 212 203 01 в Российском университете дружбы народов по адресу: 117333, г. Москва, ул Фотиевой, д.6.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Российского университета дружбы народов (117198, г Москва, ул Миклухо-Маклая, д. 6)

Автореферат разослан «_»_

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук, профессор

2007 г

ИМ Ордиянц

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДГПЖ - доброкачественная гиперплазия предстательной железы МНКО - метод наименьших квадратов с предварительной ортогонализацией

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота. НДР- низкодифференцированый рак

ОТ/ПЦР - реакции обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции

ОЗМ - острая задержка мочеиспускания ПЖ - предстательная железа

ПИН - простатическая интраэпителиальная неоплазия

ПРИ - пальцевое ректальное исследование

ПСА - простатический специфический антиген

РПЖ - рак предстательной железы

ТРУЗИ - трансректальное ультразвуковое исследование

УДР- умереннодифференцированый рак

ХП - хронический простатит

Dul45 - андрогеннонезависимая клеточная линия рака предстательной железы

EGF- эпидермальный фактор роста

FLT-1- VEGF рецептор дифференцировки и формирования капилляра

IGF - инсулиноподобный фактор роста

KDR - VEGF рецептор пролиферации эндотелиоцитов

KGF - фактор роста кератиноцитов

LNCaP - андрогеннозависимая клеточная линия рака предстательной железы

PDGF - тромбоцитарный фактор роста

TGF - семейство факторов роста фибробластов

"V

VEGF- (vascular endothelial growth factor)-c|)aKTop роста эндотелия сосудов

Актуальность проблемы.

Заболевания предстательной железы являются самыми распространенными среди урологической патологии пациентов пожилого возраста, что вызвано развитием хронического простатита (ХП), доброкачественной гиперплазии (ДГПЖ) и рака предстательной железы (РПЖ), негативно влияющими на состояние мужского здоровья и продолжительность жизни. Гистологические признаки ДГПЖ отмечаются у 50% мужчин в возрасте 60 лет и в 90% случаев к 80 годам (Гориловский JIМ и соавт, 2003) По данным Devies М А (1999), клинически неопределяемые очаги злокачественного перерождения предстательной железы выявляются у 15-30% мужчин старше 50 и у 80% мужчин старше 80 лет

В России более 60% больных РПЖ при первичном обращении к врачу уже имеют отдаленные метастазы, у большинства пациентов изначально диагностируют местнораспространенные (38,5%) и метастатические (23,2%) опухоли (Матвеев Б П, 2001, Чиссов В И, 2003) В связи с этим одним из важных клинических вопросов остается ранняя диагностика этого заболевания, так как данные литературы свидетельствуют о низкой специфичности методов, используемых при обследовании пациентов, с подозрением на РПЖ Кроме того, при сочетании рака с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и хроническим простатитом снижается чувствительность и специфичность таких методов обследования, как определение уровня ПСА сыворотки крови, пальцевое ректальное обследование простаты, ТРУЗИ предстательной железы Дискутируется целесообразность и информативность биопсий для адекватной диагностики РПЖ (Лоран О Б и соавт, 1999, Oesterling J Е, 1993)

В настоящее время продолжается поиск клинически значимых диагностических маркеров РПЖ с целью уменьшения количества биопсий простаты и тем самым уменьшения частоты осложнений после них Кроме того, "отрицательная" биопсия далеко не всегда исключает РПЖ. И

остающееся подозрение на РПЖ даже при отрицательной первой биопсии заставляет выполнять повторные биопсии простаты По данным A.V Bono (2000) около 40% больных с отрицательной первой биопсией имеют показания для повторной биопсии. Однако, например, на третью биопсию соглашается только 33% пациентов, которым это исследование предлагается и то только в случаях появления клинических признаков заболевания простаты В настоящее время идёт накопление данных, подтверждающих участие факторов роста (IGF, EGF, TGF, PDGF и др) в развитии и прогрессировал™ РПЖ, поскольку это позволило бы пересмотреть принятые нормы для ранней диагностики, мониторинга лечения и прогнозирования отдаленных результатов у больных РПЖ (Planz В etal,2001, Campbell С. et al, 1999) Именно этому и посвящено наше исследование по определению уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (рецептора пролиферации эндотелиоцитов KDR и рецептора дифференцировки и формирования капилляра FLT-1) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы

Цель настоящего исследования — улучшить диагностику злокачественных новообразований предстательной железы путем определения уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) у пациентов, с

различными заболеваниями предстательной железы

Задачи исследования:

1. Дать сравнительную оценку диагностической информативности методов обследования больных с подозрением на рак предстательной железы

2. Изучить уровень экспрессии мРНК и оценить диагностическое значение фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы

3. Изучить уровни экспрессии мРНК и оценить диагностическое

значение рецепторов к фактору роста эндотелия сосудов человека (КОК, РЕЛЧ) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы

4. Провести сравнительный анализ соотношения и оценить диагностическое значение уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (\ТЮР) и рецепторов к нему (ЮЖ, РЬТ-1).

5. Определить информативность исследования фактора роста эндотелия сосуда, рецепторов к нему и их соотношений в дифференциальной диагностике заболеваний предстательной железы

Научная новизна исследования.

В работе впервые на клиническом материале проведено сравнительное исследование уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (УБвР) и рецепторов к нему (КОЯ, РЬТ-1) Подобный подход к изучению факторов ангиогенеза позволит с высокой степенью достоверности осуществлять дифференциальную диагностику заболеваний предстательной железы, таких как рак предстательной железы, простатическая интраэпителиальная неоплазия высокой степени, доброкачественная гиперплазия предстательной железы и хронический простатит.

Практическая значимость работы.

Описанный в настоящем исследовании анализ соотношения уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека и рецепторов к нему (КОЯ, РЬТ-1) позволяет более достоверно дифференцировать злокачественные новообразования предстательной железы, по сравнению с общепринятыми диагностическими методами, применяемыми в настоящее время, такими как пальцевое ректальное исследование, трансректальное ультразвуковое исследование и определение уровня простат-специфического антигена сыворотки крови, что дает возможность не только

диагностировать злокачественные новообразования предстательной железы, но и сократить число повторных мультифокальных биопсий предстательной железы.

Положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Наиболее диагностически значимым методом выявления рака предстательной железы является определение уровня ПСА сыворотки крови, его чувствительность и специфичность составляют 83% и 81% Диагностическая информативность ТРУЗИ составляет 69%, а пальцевого ректального исследования - 56%.

2 Раздельное определение относительных уровней экспрессии фактора роста эндотелия сосудов человека и рецепторов к нему (ЮЖ, И-,Т-1) не является достоверным ввиду отсутствия статистически значимых различий между исследуемыми группами пациентов с различными заболеваниями предстательной железы

3 Соотношение уровней экспрессии мРНК К1Ж/РЬТ1 и РЬТ-1/УЕОР являются перспективными диагностическими индексами для выявления РПЖ и ПИН высокой степени.

Апробация материалов диссертации.

Материалы диссертации апробированы на совместном заседании кафедры урологии и оперативной нефрологии РУДН и сотрудников I и II урологических отделений ГКБ№29, доложены и обсуждены на научно-практической конференции посвященной 300-летию основания Главного военного клинического госпиталя имени Н Н. Бурденко (Москва, 2006) и на третьей Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В И. Вернадского» (Москва, 2005).

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 135 листах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего в себя 26 отечественных и 218 зарубежных источников

Работа содержит 20 рисунков и 19 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ.

Для осуществления поставленных задач было обследовано 106 пациентов, которые находились на стационарном лечении в I и II урологических отделениях Городской клинической больницы № 29, с декабря 2004 по апрель 2007 года Возраст пациентов с заболеваниями предстательной железы, включенных в исследование, составил от 51 до 80 лет, средний возраст 68,7 лет

Всем пациентам было проведено комплексное обследование, включающее клиническое исследование, пальцевое ректальное исследование предстательной железы, ТРУЗИ предстательной железы, трансабдоминальное УЗИ печени, почек, мочевого пузыря и забрюшинных лимфатических узлов, определение уровня общего ПСА сыворотки крови, рентгенографию костей скелета, обзорную рентгенографию органов грудной клетки

При поступлении все пациенты предъявляли жалобы на дизурические явления, такие как никтурия, поллакиурия, странгурия, ишурия, 5 пациентов (5%) отмечали боли в пояснично-крестцовом отделе позвоночника и костях таза У 12 пациентов (11%) наблюдались явления макрогематурии По данным литературы известно, что макрогематурия чаще является осложнением ДГПЖ и встречается в 15-18% случаев (Гориловский Л М и соавт, 2003) Источником гематурии наиболее часто

становятся расширенные и варикозно измененные вены шейки мочевого пузыря. Значительно реже гематурия наблюдается при РПЖ В то же время появление болей в позвоночном столбе и костях таза связано с метастазированием РПЖ и не встречается при ДГПЖ и ХП В связи с этим, у пациентов, предъявляющих жалобы на боли в костях можно предположить наличие метастатического РПЖ. Однако, на основании жалоб заподозрить рак предстательной железы, особенно на ранних стадиях, не представляется возможным

При проведении ПРИ обращалось внимание на контуры железы, ее консистенцию, подвижность, наличие узловых образований, выраженность междолевой бороздки, смещаемость слизистой прямой кишки. Изменения предстательной железы, которые позволили заподозрить ее злокачественное перерождение, такие как бугристая поверхность, нечеткие контуры железы и наличие изолированных узлов наблюдалось у 57 (53%) пациентов

В ходе проведения ТРУЗИ обращалось внимание на искаженность контуров предстательной железы, неоднородность паренхиматозных сигналов, наличие пенетрации капсулы железы Такие изменения выявлены у 87 (81%) пациентов Таким образом, трансректальное ультразвуковое исследование оказалось более чувствительным по сравнению с пальцевым ректальным исследованием

При исследовании уровня ПСА в сыворотке крови обнаружено, что у 61 пациента (57%) уровень ПСА находился в пределах до 10 нг/мл, причем у 19 пациентов (18%) уровень ПСА составлял менее 4 нг/мл У 45 пациентов (42%) уровень ПСА был более 10 нг/мл, в связи с чем, с высокой степенью вероятности можно прогнозировать при последующей биопсии выявление у них РПЖ У 42 пациентов (40%) можно прогнозировать последующее выявление РПЖ при уровне ПСА в пределах 4,1-10,0 нг/мл с меньшей вероятностью Таким образом, при исследовании уровня ПСА выявлено, что у 89 пациентов (84%) уровень ПСА составил более 4 нг/мл, т е порогового значения, превышение которого является показанием к биопсии предстательной железы

Всем 106 пациентам с целью верификации диагноза и определения дальнейшей тактики лечения произведена мультифокальная биопсия предстательной железы трансректальным доступом с последующим патоморфологическим исследованием образцов При этом распределение больных по нозологическим формам заболеваний предстательной железы было следующим у 52 (49%) пациентов верифицирован РПЖ, у 21 (20%) пациента - ДГПЖ, у 23 (21%) пациентов - ПИН высокой степени и у 10 (10%) пациентов верифицирован ХП В зависимости от стадии развития РПЖ по системе ТММ распределение пациентов было следующим I стадия -3 (3%) пациента, П-я стадия — 19 (18%) пациентов, III стадия - 18 (17%) пациентов, IV- стадия - 12 (11%) пациентов 8 пациентам, у которых при мультифокальной биопсии предстательной железы верифицирована ДГПЖ произведена операция чрезпузырная аденомэктомия с последующим патоморфологическим исследованием макропрепаратов

Среди пациентов с морфологически верифицированным РПЖ при пальцевом ректальном исследовании подозрение на рак возникло у 29 (56%) пациентов

Как показывают результаты обследования пациентов с различными заболеваниями предстательной железы при помощи ТРУЗИ, большинство (70-87%) имели увеличенный объем предстательной железы В группе пациентов, страдающих РПЖ, ассиметрия железы (у 22 пациентов (42%)), наличие гипоэхогенных зон (у 27 пациентов (52%)) и нечеткие контуры простаты (у 15 пациентов (29%)) прослеживались чаще, чем в других исследуемых группах Таким образом, по данным ТРУЗИ подозрение на рак возникло у 36 (69%) пациентов

Результаты настоящих исследований показали, что уровень ПСА в сыворотке крови не является абсолютным показателем, позволяющим поставить диагноз, который может повышаться до значительных величин при таких заболеваниях, как ХП и ДГПЖ (табл 1)

Таблица №1.

Заболевания предстательной железы, диагностированные у пациентов в зависимости от уровня ПСА.

РПЖ РПЖ РПЖ РПЖ РПЖ

Уровень ПСАобщ нг/мл ХП (п=10) дгпж (п=21) ПИН (п=23) I ст. (п=3) Ист. (п=19) III ст. (п=18) IV ст. (п=12) всего, % (п=52)

0-2,5 2 (20%) 2 (10%) 2 (9%) 0 2 1 0 3 (6%)

2,5-4,0 0 2 (10%) 2 (9%) 0 3 2 1 6 (12%)

4,1-9,9 5 (50%) 10 (47%) 12 (52%) 2 6 5 2 15 (29%)

10-19,9 2 (20%) 3 (14%) 6 (26%; 1 6 6 2 15 (29%)

20-29,9 1 (10%) 3 (14%) 1 (4%) 0 1 3 3 7 (13%)

30-100 0 1 (5%) 0 0 1 1 2 4 (8%)

Более 100 0 0 0 0 0 0 2 2 (3%)

Для определения диагностической значимости произведен анализ чувствительности и специфичности определения концентрации ПСА в сыворотке крови, которые составили 83% и 81% соответственно Чувствительность метода недостаточна для определения низко- и высокодифференцированного рака простаты, этот показатель более информативен при умереннодифференцированном РПЖ, особенно в ТЗ-Т4 стадиях заболевания

Из биоптатов 18 пациентов, включенных в исследование, было выделено 46 образцов РНК с концентрацией не менее 0,1 мкг/мкл, для

которых были определены уровни экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), рецепторов к нему (FLT-1 и KDR), а также ß-актина (который как конститутивный ген использовался в качестве внутреннего стандарта) с помощью полуколичественного метода после проведения совмещенных реакций обратной транскрипции и полимеразной цепной реакции (ОТ/ПЦР) По типу патологии биоптаты были разделены на 5 групп ХП (п=12), ДГПЖ (п=10), ПИНЗ (п=8), умерено- (п=13) и низкодифференцированный (п=3) рак предстательной железы (УДР и НДР, соответственно) Группы УДР и НДР исследовались как по отдельности, так и были объединены в общую группу РПЖ По результатам

патоморфологического исследования из 18 больных у 4 (22%) пациентов выявлен ХП, у 4 (22%) пациентов - ДГПЖ, у 3 (17%) пациентов выявлена ПИН высокой степени и у 7 (39%) верифицирован РПЖ В зависимости от стадии РПЖ распределение пациентов было следующим I, II, III и IVct диагностирована соответственно у 1,3,2 и 1 пациентов

Для оценки уровней экспрессии исследуемых факторов неоангиогенеза были выбраны соотношения VEGF/ß-актин, FLT-l/ß-актин, KDR/ß-актин, FLT-1/VEGF, KDR/FLT-1, KDR/VEGF и KDR+FLT-1 /VEGF Этот выбор был сделан по двум причинам Во-первых, были определены отношения уровней экспрессии мРНК вышеуказанных факторов к уровню экспрессии мРНК гена, кодирующего ß-актин. Ген, кодирующий ß-актин, является конститутивным и его экспрессия в клетках имеет постоянный характер Таким образом, определение отношений уровней экспрессии VEGF, KDR, FLT-1 к ß-актину позволило понять, при каких исследуемых заболеваниях простаты и насколько изменяется уровень экспрессии исследуемых факторов относительно стандартного уровня экспрессии конститутивного гена. Во-вторых, необходимо было определить не только уровень экспрессии отдельных факторов, но и сравнить их между собой, поскольку важным для полноценной передачи сигнала и его физиологическим проявлением является определенное отношение между уровнями экспрессии лиганда (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1)

Для обработки полученных данных использовались несколько современных статистических методов. При статистической обработке данных выяснилось, что во многих группах отсутствует нормальное распределение выборки. Учитывая, также небольшой размер исследуемых выборок, для анализа результатов были использованы непараметрический I-критерий Манна-Уитни и метод наименьших квадратов. На рис. 1 показан пример электрофоретического разделения ПЦР-продуктов фрагментов генов, кодирующих УЕвИ (А), БЫЧ (Б), КГЖ (В) и р-актин (Г). 4 -

324 Ьр

170 Ьр

535 Ьр 403 Ьр

368 Ьр

Рис. 1. Анализ экспрессии генов ЫЖ (А), ПЯЧ (Б), УЕйЕ (В) и |3-актина (Г) методом ОТ/ПЦР в двух исследуемых образцах биоптатов предстательной железы. Стрелками указаны размеры специфических ОТ/ПЦР - продуктов в агарозном геле, окрашенным "8УВ1*Сгесп1".

Как показали результаты исследования, среднее значение относительного уровня экспрессии мРНК рецептора пролиферации К1Ж у больных с выявленной ПИН высокой степени было в 2,5 раза больше, чем у больных ДГПЖ, и было в 1,5 раза меньше, чем у больных РПЖ (р>0,05, рис.2).

2,5

ХП ДГПЖ ПИНЗ РПЖ

Патология

Рис.2. Средние значения относительного уровня экспрессии КОЯ для групп ХП, ДГПЖ, ПИНЗ и РПЖ.

Среднее значение экспрессии относительного уровня рецептора дифференцировки и формирования капилляра РЬТ-1 у больных, с выявленной ПИН в 2,3 раза превышало это значение, чем у больных ХП, в 2 раза больше у больных РПЖ, и в 2,2 раза было меньше, чем у пациентов, страдающих ДГПЖ р>0,05, рис.3).

1,91

Л-

П ПК

о.зя 0,49

Щ Л

ХП ДГПЖ ПИНЗ РГТЖ

Патология

Рис.3. Средние значения относительного уровня экспрессии

Н/М для групп ХП, ДГПЖ, ПИНЗ и РПЖ.

Однако, анализ уровня экспрессии мРНК КОЯ и РЬТ-1 не может являться методом дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы, в связи с отсутствием статистически значимых различий между исследуемыми группами.

У больных раком предстательной железы отношение уровней экспрессии мРНК КОЯЛ-ХТ-! больше в 23 раза, чем у больных хроническим простатитом, в 7 раз больше, чем у больных ДГПЖ и в 2 раза больше, чем у больных с выявленной ПИН высокой степени (рис.4, р<0,05).

Рис.4. Средние значения отношения уровней экспрессии КОК/ИЛ'-! для групп ХП, ДГПЖ, ПИНЗ и РПЖ.

Таким образом, последовательное увеличение

значений отношения уровней экспрессии КОЛ/БЬТ-! от группы ХП к группе РПЖ связано одновременно как с уменьшением экспрессии мРНК рецепторов ЕЬТ-1, так и с увеличением экспрессии мРНК рецепторов КОК. Это говорит о том, что последовательно от группы ХП к группе РПЖ происходит усиление процессов пролиферации эндотелиоцитов при одновременном уменьшении процессов дифференцировки и формирования капилляра. Ангиогенез ведет к формированию новой системы кровоснабжения, дающую возможность роста опухоли за пределы ее первоначальных размеров и возможность метастазирования, что происходит путем увеличения экспрессии рецепторов КОК и усилением процессов созревания капилляров. Следовательно, анализ уровня экспрессии мРНК соотношения КОК/МЛ"-1 является значимым критерием, для дифференциальной диагностики различных заболеваний предстательной железы.

Кроме того, при РПЖ и ПИН высокой степени уровень экспрессии соотношения мРНК ЕЬТ-1/УЕОЕ в 50 раз больше, чем у больных ДГПЖ и в 4 раза больше, чем у больных ХП (р<0,05, рис.5).

дгпж пин-з

Патология

РПЖ

Рис.5. Средние значения отношения уровней экспрессии ПЛ^/УЕвЕ для групп ХП, ДГПЖ, ПИНЗ и РПЖ.

Следовательно, анализ отношений уровней экспрессии

мРНК Р1Л-1/УЕОР и КОЯуТЪТ- I являются перспективными

диагностическими индексами для выявления РПЖ и ПИН высокой степени, когда риск последующего выявления РПЖ достаточно велик.

В то же время, анализ относительного уровня экспрессии мРНК УБвР показал отсутствие статистически значимых различий между всеми исследуемыми группами (р>0,05, рис.6).

Рис.6. Средние значения относительного уровня экспрессии мРНК УЕСР для групп ХП, ДГПЖ, ПИНЗ и РПЖ.

Это говорит о том, что процессы ангиогенеза происходят как при ДГПЖ, ХП, так и при ПИН и РПЖ, однако при злокачественных новообразованиях активность ангиогенеза выше. Следовательно, анализ уровня экспрессии УБвР не может являться критерием, для дифференциальной диагностики различных заболеваний предстательной железы.

При анализе относительного уровня экспрессии рецептора пролиферации КХЖ, отвечающего за пролиферацию эндотслиоцитов, и соотношения КЭШУЕСР в группе РПЖ (между пациентами с УДР и НДР) показали, что в группе НДР относительные уровни экспрессии КОЛ и КХ>К/УЕСР было выше, чем в группе УДР (в 1,7 и 3 раза, соответственно (р<0,05)). УБОР, подавляя созревание дендритных клеток, препятствует

нормальному противоопухолевому иммунному ответу. Так как УЕОБ является иммунносупрессором, опухоль с большей степенью злокачественности в меньшей степени экспрессирует УЕОБ, и, в большей степени рецептора пролиферации КХЖ, что в свою очередь, приводит к активизации процессов ангиогенеза в «опухолевом поле». Это приводит к более активному росту опухоли, требующему большего количества кислорода и питательных веществ. Таким образом, полученные результаты подтверждают предположение о том, что при низкодифференцированном раке предстательной железы уменьшается количество клеток, способных экспрессировать УЕОР, и, компенсаторно, на фоне уменьшения вышеуказанного стимулятора ангиогенеза, происходит увеличение экспрессии рецептора пролиферации эндотелиоцитов КХЖ

Последовательное увеличение значений отношения уровней экспрессии мРНК соотношения КОЯ+РЫЧ/УЕОР и КХЖ/УЕОР от группы ДГПЖ к группе РПЖ связано одновременно как с уменьшением экспрессии мРНК УЕОР, так и с увеличением экспрессии мРНК рецепторов КХЖ. При этом в большей мере происходит увеличение количества мРНК рецепторов, отвечающих за пролиферацию клеток эндотелия сосудов, чем экспрессия мРНК самого фактора роста эндотелия сосудов Таким образом, из полученных данных следует, что основным провоцирующим фактором ангиогенеза является не столько сам фактор роста эндотелия сосудов, сколько увеличение экспрессии его рецепторов КХЖ, находящихся на поверхности незрелых эндотелиоцитов.

При исследовании относительных уровней экспрессии мРНК УЕОР, БЫЧ, Ш и их соотношений РТЛЧ/УЕОР, КХЖ/ПЛЧ, Кт/УЕСР, ЫЖ+РЬТ-1Д7ЕСР в двух клеточных линиях РПЖ выявлено, что в гормонорезистентной линии РПЖ (Ои 145), в отличие от гормончувствительной линии (ЫЧСаР), определяется незначительная экспрессия мРНК рецептора К1Ж, ответственного за пролиферацию клеток эндотелия сосудов В то же время, уровень относительной экспрессии мРНК УБОР в линии БИ 145 в 2 раза меньше, чем в линии ЬИСаР. Таким образом,

возникновение гормонорезистентности, вероятно,

сопровождается уменьшением экспрессии УЕОР, и одновременным увеличением экспрессии рецептора КХЖ, ответственного за пролиферацию эндотелиоцитов (таб 2)

Таблица 2.

Средние значения уровней экспрессии ГЬТ-1, КЗЖ, УЕСР и их отношений в клеточных линиях гормоночувствительного, ЫЧСаР, и гормонорезнстентного, 011145, рака предстательной железы.

Г [лч/р- 1КТИН К Р11/ Р -актин V ЕОР/р- 1КТИН К ои/ р [ЛЧ Б ЬТ-1/ УЕОР' К 011/ V ЕйР К ОЯ+ И П-1/ V БвР К И 1Л-1 + УЕЙР '[3-актан К р [ЛЧ/ р- актин

РЫ СаР 0 0 2, 8 0 0 0 0 2, 8 0

Ш 145 0 0, 09 1, 27 0 0 0, 08 0 08 1, 27 0, 09

Проведенное нами исследование показывает значимость факторов неоангиогенеза, таких как УЕ6Р и рецепторов к нему (КОЯ, ЕЬТ-1) для развития и прогрессии РПЖ По данным настоящего исследования уровни экспрессии мРНК соотношений КТЖуТЪТ-1 и РЬТ-1/УЕОЕ у больных РПЖ достоверно превышают эти показатели у больных ДГПЖ, и могут являться критериями, для дифференциальной диагностики различных заболеваний предстательной железы Однако, анализ относительного уровня экспрессии УЕОР в биоптатах предстательной железы показал отсутствие статистически значимых различий между всеми исследуемыми группами Таким образом, определение уровня экспрессии УЕОР в биоптатах предстательной железы с целью выявления РПЖ (скрининга), по всей видимости, будет ограничено

Кроме того, при обработке результатов исследования методом наименьших квадратов с предварительной ортогонизацией получена

формула , У = 1,953 + 0,643Х4 где У - диагноз, а Х4 - уровень экспрессии отношения ЫЖЯЧЛЧ, полученный при анализе мРНК пациентов с заболеваниями предстательной железы, такими как ХП, ДГПЖ, ПИН высокой степени и РПЖ Для исследуемых групп пациентов с различными заболеваниями предстательной железы были получены следующие диапазоны значения У: 2,36 -2,55 - ХП, 2,56 -2,7 - ДГПЖ, 2,8-5,0 ПИН высокой степени; 5,1 и более - РПЖ. Как показали результаты метода наименьших квадратов с предварительной ортогонизацией, в зависимости от значения параметра ЫЖ/Р1М можно проводить дифференциальную диагностику РПЖ, с вероятностью правильного ответа до 95% (р<0,05)

Выводы.

1 Сравнительная оценка методов диагностики рака предстательной железы показала, что наиболее чувствительным и специфичным является метод определения уровня ПСА в сыворотке крови (83% и 81%), информативность ТРУЗИ 69%, а информативность пальцевого ректального исследования 56%

2. Анализ уровня экспрессии мРНК УЕвР и рецепторов к нему КЕЖ и РЬТ-1 не может являться критерием для дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы

3. Соотношение уровней экспрессии мРНК КГЖЛТТ-1 является критерием дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы: у больных раком предстательной железы это соотношение больше в 23 раза, чем у больных хроническим простатитом, в 7 раз больше, чем у больных ДГПЖ и в 2 раза больше, чем у больных с выявленной ПИН

4 При РПЖ и ПИН высокой степени уровень экспрессии соотношения мРНК БЫЧ/УБОР в 50 раз выше, чем у больных ДГПЖ и в 4 раза больше, чем у больных ХП

5. Информативность исследования соотношений уровней экспрессии мРНК ЫЖ/РЬТ-1 в выявлении РПЖ составляет 95%

Практические рекомендации:

1 Для диагностики рака предстательной железы на ранних стадиях рекомендуем осуществлять комплексное обследование больных, включающее пальцевое ректальное исследование, ТРУЗИ и определение уровня ПСА крови, с последующим определением показаний к проведению мультифокальной биопсии простаты

2 Рекомендуем для ранней диагностики злокачественных новообразований предстательной железы осуществлять исследование уровней экспрессии мРНК факторов ангиогенеза

3 Считаем целесообразным для дифференциальной диагностики различных заболеваний предстательной железы проводить анализ уровня экспрессии мРНК соотношений КЛЖМЛЧ и РЬТ-1/УЕОР

4 Для выявления новообразований предстательной железы рекомендуем использовать формулу расчета показателя У, позволяющую по значению параметра ЮЖ/ИМ производить дифференциальную диагностику

заболеваний предстательной железы с вероятностью правильного ответа 95 %

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ.

1 Пульбере С А , Крачун Г П Оценка вероятности

наличия нодулярной гиперплазии предстательной железы, стадии ее развития при массовых медицинских обследованиях // Матер1али до науково1 конференцц студентт та молодих вчених з мшнародною участю - Вшниця -2004-с261-262

2 Пульбере С.А. Особенности диагностики и выявляемость онкопатологии в г. Тирасполе в 2000г // Материалы республиканской научной конференции «Проблемы медицины и здравоохранения ПМР прошлое, настоящее, будущее» Тирасполь, РИО ПГУ.-2002 -сШ-187

3 Пульбере С А Гуцуляк А И Гошка AM К проблеме диагностики рака предстательной железы на ранних стадиях // Вестник Приднестровского университета - Тирасполь, РИО ПТУ - 2003 -№2-с 16-18

4 Гуцуляк А.И, Пульбере С А, Бондарь А А Структура онкопатологии мочеполовой сферы // Тезисы докладов международной научно-практической конференции «Медико-биологические проблемы Приднестровья» -Тирасполь, РИО ПГУ - 2004 - с. 165-166

5. Авдошин В П, Андрюхин М.И., Пульбере С.А , Михайликов Т Г , Барабаш М И Диагностика рака предстательной железы // Материалы Третьей Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернадского» - РУДН - Москва - 2005.- с.139-140

6. Авдошин В П., Андрюхин М И, Пульбере С А , Глухов А И, Апрятин С А Исследование перспективных онкомаркеров ранней диагностики рака предстательной железы // Сб науч статей научно-практической конференции, посвященной 300-летию основания Главного военного клинического госпиталя имени академика Н Н Бурденко -Москва -2006-с 142-146

7 Glukhov AI, Apryatm SA, Pulbere S.A, Koromyslova IA, Avdoshin V P Investigation of vascular endothelial growth factor (VEGF) and appropriate receptors (KDR, FLT-1) as perspective genetic markers of prostate cancer diagnostics // Proceedings of international scientific-practical interdisciplinary workshop «New technology in medicine and experimental biology» - Pattaya-Bangkok, Thailand - 2007 - p 6-7

8 Хомякова А В , Москалева E Ю , Пульбере С A , Авдошин В.П, Северин С Е Уровень апоптоза, лимфоцитов,

активированных in vitro с помощью дендритных клеток здоровых добровольцев и больных раком предстательной железы // Материалы V всемирного конгресса «Аллергология и иммунология», - Москва - 2007 -р 81

9 Хомякова А.В , Москалева Е.Ю , Пульбере С А, Авдошин В.П, Северин СЕ Позднякова JIП, Свешников ПГ Оценка состояния антигенспецифического клеточного иммунитета по уровню продукции ИФ-гамма лимфоцитами, индуцированными с помощью иммуногенных дендритных клеток m vitro, для прогноза эффективности противоопухолевой терапии // Тезисы докладов Российского медицинского форума «Фундаментальная наука и практика» - Москва - 2006 - с 103.

10 Хомякова А В., Москалева Е Ю , Пульбере С А, Авдошин В П, Северин С Е Изучение фенотипа опухолеспецифических лимфоцитов больных раком предстательной железы после стимуляции дендритными клетками // Тезисы научно-практической конференции, посвященной 40-летию Астраханского общества урологов «Актуальные вопросы современной урологии» -Астрахань —2007 - с 162-166

11 Апрятин С А, Зимник О В , Авдошин В П, Пульбере С А, Гордеев С А Глухов А И Исследование фактора роста эндотелия сосудов человека и рецепторов к нему как перспективных генетических маркеров диагностики новообразований предстательной железы // «Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии». - Москва - 2007 - №3 - с 32-38

ФАКТОРЫ НЕОАНГИОГЕНЕЗА В

ДИФФЕРЕНЦИАЛЬНОЙ ДИАГНОСТИКЕ ЗАБОЛЕВАНИЙ ПРЕДСТАТЕЛЬНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.

Работа посвящена одной из актуальных проблем урологии, улучшению диагностики злокачественных новообразований предстательной железы Проведено исследование уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) клетками, полученными из биоптатов предстательной железы пациентов с основными заболеваниями простаты (хронический простатит (ХП), доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ), простатическая интраэпителиальная неоплазия высокой степени (ПИН 2-3) и рак предстательной железы (РПЖ)) Проведен анализ соотношений уровней экспрессии мРНК исследуемых факторов к уровню экспрессии мРНК конститутивного гена р-актина (VEGF/p-актин, FLT-1/р-актин, KDR/p-актин, FLT-l+KDR/p-актин и FLT-1+KDR+VEGF/p-актин), а также соотношений уровней экспрессии мРНК исследуемых факторов друг к другу (VEGF/FLT-1, VEGF/KDR, FLT-1/KDR и FLT- 1+KDR/VEGF). Показано, что определение различных соотношений уровней экспрессии VEGF, KDR и FLT-1 является критерием дифференциального подхода к диагностике вышеуказанных заболеваний предстательной железы.

THE FACTORS OF NEOANGIOGENESIS IN DIFFERENTIAL DIAGNOSIS OF PROSTATIC DISEASES

The study is directed to the one of actual urologic problem - to improve diagnostic of malignant prostatic neoplasms. Cells have been obtained during biopsy in patients with general prostatic diseases (such as chronic prostatitis (CP), benign prostatic hyperplasia (BPH), prostatic intraepithelial neoplasia of high degree (PIN 2-3) and prostatic cancer (PC)), and study of level expression of mRNA of vessels endothelial growth factors and it's receptors with the cells was performed It was performed analysis of correlation of levels of the studied factors's mRNA expression to constitutive |3-actme gene's mRNA expresión (VEGF/p- actine, FLT-l/p- actine, KDR/p- actme, FLT-l+KDR/p- actme и FLT-1+KDR+VEGF/p- actine) and it was also performed analyses of correlation of levels of the studied factors's mRNA expression to each other (VEGF/FLT-1, VEGF/KDR, FLT-1/KDR и FLT-1+KDR/VEGF) It was demonstrated that detection of different correlations of VEGF, KDR и FLT-1 expression levels was criteria of different way to diagnose of above-mentioned prostatic diseases

Типография ООО «Аведа» 117342, Москва, ул Введенского, д 8, тел 332-50-94

Подписано в печать 08 10 2007г Формат 60x90 1/16. Тираж 100 экз 1,0 п л Бумага New SvetoCopy

Актуальность проблемы.

Заболевания предстательной железы являются самыми распространенными среди урологической патологии пациентов пожилого возраста, что вызвано развитием хронического простатита (ХП), доброкачественной гиперплазии (ДГПЖ) и рака предстательной железы (РПЖ), негативно влияющими на состояние мужского здоровья и продолжительности жизни. Гистологические признаки ДГПЖ отмечаются у 50% мужчин в возрасте 60 лет и в 90% случаев к 80 годам [6]. По данным М.А. Devies (1999), клинически неопределяемые очаги злокачественного перерождения предстательной железы выявляются у 1530% мужчин старше 50 и у 80% мужчин старше 80 лет [196]. В настоящее время проблеме РПЖ уделяется большое внимание. В странах Западной Европы и США РПЖ составляет третью часть от всех злокачественных новообразований у мужчин. В 2004 году в США диагностировано 231 тыс. новых случаев заболевания и около 30 тыс. человек умерли от РПЖ [42, 138]. В России в 2003 г. в структуре онкологической заболеваемости мужчин РПЖ находился на 4-м месте после рака легкого, желудка и кожи. Число вновь выявленных случаев достигло 13,9 тыс [1]. В России более 60% таких больных при первичном обращении к врачу уже имеют отдаленные метастазы, у большинства пациентов изначально диагностируют местнораспространенные (38,5%) и метастатические (23,2%) опухоли [15, 25]. Запущенность болезни, а также состояние онкоурологической помощи в стране более точно отражаются в показателе смертности на первом году с момента установления диагноза, которая составляет около 30% [22]. Как правило, симптомы рака предстательной железы появляются уже на поздних стадиях, для которых характерно прорастание капсулы и распространение опухоли в окружающие ткани; на этой стадии рак уже неизлечим. В связи с этим, одним из важных клинических вопросов остается ранняя диагностика этого заболевания, так как до сих пор высок процент его позднего выявления (в стадии распространенных метастазов) [117, 204]. Основная трудность ранней диагностики: дифференциальная диагностика рака предстательной железы с доброкачественной гиперплазией, простатитом и др. заболеваниями, сопровождающимися расстройствами мочеиспускания. Велик удельный вес сочетания рака простаты с доброкачественной гиперплазией предстательной железы (ДГПЖ) и хроническим простатитом, что снижает чувствительность, специфичность и точность таких известных методов обследования, как ПСА, пальцевое ректальное обследование простаты (ПРИ), УЗИ и/или ТРУЗИ, биопсии предстательной железы.

В настоящее время общепринятые методы диагностики РПЖ дополняются новыми параметрами, находящимися в состоянии изучения: плоидность ДНК, маркеры клеточной пролиферации, апоптоза, ядерные антигены пролиферирующих клеток, плотность микрососудов, округлость и размер ядер, состояние хроматина, топография зон в ядре окрашиваемых серебром и др. Широко обсуждаются факторы, основанные на результатах трансректальной мультифокальной биопсии предстательной железы. Продолжается поиск клинически значимых молекулярных маркеров при РПЖ с целью уменьшения количества биопсий простаты, и уменьшению частоты осложнений после них. По данным A.V. Bono (2000) около 40% больных с отрицательной первой биопсией имеют показания для повторной биопсии однако на третью биопсию соглашается только 33% пациентов, которым это исследование предлагается и то только в случаях появления клинических признаков заболевания простаты [43]. В настоящее время идёт накопление данных, подтверждающих участие факторов роста в развитии и ирогрессировании рака предстательной железы.

Рост и развитие ткани здоровой и поражённой раком предстательной железы тесно связаны с наличием кровеносных сосудов в ткани [47].

Адекватное кровоснабжение является решающим моментом при обеспечении тканей питательными веществами, и сосудистый эндотелий выделяет несколько активных веществ, которые ведут себя как паракринные нейромедиаторы роста клеток предстательной железы и в случае РПЖ способствуют прогрессированию рака [237].

В отсутствие кровоснабжения опухоли получают кислород и питательные вещества путем диффузии и обычно не достигают размеров более 1-2 мм в диаметре. В бессосудистых опухолях темпы клеточного роста равны темпам их гибели, поэтому опухоль остается в «спящем» состоянии до тех пор, пока в ней не начнется рост кровеносных сосудов из близлежащих капилляров - процесс, известный как ангиогенез [35, 142, 164]. Начало ангиогенеза ведет к формированию нового кровоснабжения и облегчает быстрый рост и метастазирование опухоли, ставшей благодаря этому активной. Хотя в опухолевом ангиогенезе участвует несколько ростовых факторов, установлено, что фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) является самым мощным и доминирующим медиатором этого процесса [35, 164]. После секреции опухолью VEGF связывается с рецепторами па близлежащих сосудистых эндотелиальных клетках, непосредственно стимулируя рост новых сосудов. Существует два разных, но структурно близких, рецептора VEGF, расположенных на поверхности эндотелиальных клеток сосудов. Эти рецепторы, известные как рецептор Flt-1 (VEGFR 1 типа) и рецептор KDR (VEGFR 2 типа) [164].

Рецептор KDR отвечает за пролиферацию клеток эндотелия сосудов, a FLT-1 за дифференцировку и формирование капилляра [51, 155, 164]. VEGF также играет ключевую роль в поддержании функционирования недавно сформировавшихся кровеносных сосудов опухоли, которые сохраняют черты незрелости даже по мере своего роста [164]. По мере прогрессировать опухолевого ангиогенеза, новые капилляры прорастают в опухоль, поддерживая ее рост и развитие [106, 107].

VEGF увеличивает проницаемость сосудов и оказывает митогенное действие на клетки сосудистого эндотелия. Показано, что увеличение количества VEGF в крови человека со статистически достоверной вероятностью указывает на развитие опухолевого процесса, в том числе новообразований предстательной железы [141, 153, 214].Важно отметить, что лабораторные исследования вышеуказанных маркеров и использование их в клинической практике в нашей стране находятся на начальной стадии. Напротив, за рубежом изучению этой научной проблемы уделяется много внимания.

В связи с этим проведение исследования, посвященного изучению уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) клетками новообразования при раке, доброкачественной гиперплазии предстательной железы и простатической интраэпителиальной неоплазии, является актуальной научно-практической задачей.

Цель настоящего исследования — улучшить диагностику злокачественных новообразований предстательной железы путем определения уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы.

Достижение указанной цели требует решении следующих задач:

1. Дать сравнительную оценку диагностической информативности методов обследования больных с подозрением на рак предстательной железы.

2. Изучить уровень экспрессии мРНК и оценить диагностическое значение фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы.

3. Изучить уровни экспрессии мРНК и оценить диагностическое значение рецепторов фактора роста эндотелия сосудов человека (KDR, FLT-1) у пациентов, с различными заболеваниями предстательной железы.

4. Провести сравнительный анализ соотношения и оценить диагностическое значение уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1).

5. Определить информативность исследования фактора роста эндотелия сосуда, рецепторов к нему и их соотношений в диагностике заболеваний предстательной железы.

Научная новизна исследования: В работе впервые на клиническом материале проведено сравнительное исследование уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека (VEGF) и рецепторов к нему (KDR, FLT-1). Подобный подход к изучению факторов ангиогенеза позволил с высокой степенью достоверности осуществлять дифференциальную диагностику заболеваний предстательной железы, таких как рак предстательной железы, простатическая интраэгштелиальная неоплазия высокой степени, доброкачественная гиперплазия предстательной железы и хронический простатит.

Практическая значимость работы.

Описанный в настоящем исследовании анализ соотношения уровней экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) позволяет более достоверно дифференцировать злокачественные новообразования предстательной железы, по сравнению с диагностическими методами, применяемыми в настоящее время, такими как пальцевое ректальное исследование, трансректальное ультразвуковое исследование и определение уровня простат-специфического антигена в сыворотке крови, что дает возможность не только диагностировать злокачественные новообразования предстательной железы, но и сократить число повторных мультифокальных биопсий предстательной железы.

Положения диссертации, выносимые на защиту.

1. Наиболее диагностически значимым методом выявления рака предстательной железы является определение уровня ПСА сыворотки крови, его чувствительность и специфичность составляют 83% и 81%. Диагностическая информативность ТРУЗИ составляет 69%, а пальцевого ректального исследования - 56%.

2. Раздельное определение относительного уровня экспрессии мРНК фактора роста эндотелия сосудов человека и рецепторов к нему (KDR, FLT-1) не является достоверным ввиду отсутствия статистически значимых различий между исследуемыми группами пациентов с различными заболеваниями предстательной железы.

3. Соотношение уровней экспрессии мРНК KDR/FLT1 и FLT-1/VEGF являются перспективными диагностическими индексами для выявления РПЖ и ПИН высокой степени.

Апробация материалов диссертации:

Материалы диссертации апробированы на совместном заседании кафедры урологии и оперативной нефрологии РУДН и сотрудников урологических отделений ГКБ №29, доложены и обсуждены на научно-практической конференции, посвященной 300-летию основания главного военного клинического госпиталя имени Н.Н. Бурденко (Москва, 2006) и на третьей Международной конференции «Болезни цивилизации в аспекте учения В.И. Вернадского» (Москва, 2005).

Публикации.

По теме диссертации опубликовано 11 научных работ. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 135 листах машинописного текста, состоит из введения, 4 глав, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы, включающего в себя 26 отечественных и 218 зарубежных источников. Работа содержит 14 рисунков и 19 таблиц.

ВЫВОДЫ.

1. Сравнительная оценка методов диагностики рака предстательной железы показала, что наиболее чувствительным и специфичным является метод определения уровня ПСА сыворотки крови (83% и 81%), информативность ТРУЗИ 69%, а информативность пальцевого ректального исследования 56%.

2. Анализ уровня экспрессии мРНК VEGF и рецепторов к нему KDR и FLT-1 не может являться критерием, для дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы.

3. Соотношение уровней экспрессии мРНК KDR/FLT-1 является критерием дифференциальной диагностики заболеваний предстательной железы: у больных раком предстательной железы это соотношение больше в 23 раза, чем у больных хроническим простатитом, в 7 раз больше, чем у больных ДГПЖ и в 2 раза больше, чем у больных с выявленной ПИН.

4. При РПЖ и ПИН высокой степени уровень экспрессии соотношения мРНК FLT-1/VEGF в 50 раз выше, чем у больных ДГПЖ и в 4 раза больше, чем у больных ХП.

5. Информативность исследования соотношений уровней экспрессии мРНК KDR/FLT-1 в выявлении РПЖ составляет 95%.

Практические рекомендации:

1. Для диагностики рака предстательной железы на ранних стадиях рекомендуем осуществлять комплексное обследование больных, включающее пальцевое ректальное исследование, ТРУЗИ и определение уровня ПСА крови, с последующим определением показаний к проведению мультифокальной биопсии простаты.

2. Рекомендуем для ранней диагностики злокачественных новообразований предстательной железы осуществлять исследование уровней экспрессии мРНК факторов ангиогенеза.

3. Считаем целесообразным для дифференциальной диагностики различных заболеваний предстательной железы проводить анализ уровня экспрессии мРНК соотношений KDR/FLT-1 hFLT-1/VEGF.

4. Для выявления новообразований предстательной железы рекомендуем использовать формулу расчета показателя Y, позволяющую по значению параметра KDR/Flt-1 производить дифференциальную диагностику заболеваний предстательной железы с вероятностью правильного ответа 95 %.