Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Естественный морфогенез и индуцированный патоморфоз клещевого энцефалита

гг: од

2 5 СЕН 1335

На правах рукописи

КОНЕВ

Владимир Павлович

ЕСТЕСТВЕННЫЙ МОРФОГЕНЕЗ И ИНДУЦИРОВАННЫЙ ПАТОМОРФОЗ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА

14.00.15 — патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

ОМСК 1995

Работа выполю ш в Омской государства шой медицинской академии и Омском 1|ИИприродасочашв1 ишфасций.

Научные консулышпъп чгаи-корреспсддентРАМН,

заслуженный деятель I ¡ауки РФ, докгор медщин'кихгаук, профессор ЗИНОВЬЕВ А.С.

застуженный деятель науки РФ, докгор медицинских наук, профессор КВЕГКОЬАЭ.А.

Официальные оппоненты: докгор медицинских наук,

профхсор САМОХИН П.А.

докгор медищ ¡неких наук, профессор ЯРОСЛАВСКИЙ ДЕ

доктор медицинских наук, профессор КОЧУТИНАЛ.Н.

Ведущая организация: Санкт-Пепербургская медицинская академия последипломного образования

За-цига состоится"_"_1995 г. на заседании диссертационного совета

Д. 084.04.03 при Челябинском государства том медицинском институте по адресу: 454092, г.Челябинас, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке инеппуш.

Автореферат разослан "_и_^_1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

профессор Бордуновский В.Н.

СтаЦАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Акиуажюсгъ проблемы, /лицевой энчефалчт vK?), несмотря на сушитвенные успехи в профилактике и дечечии болезни, остается до настоящего ьремеш: актуальной и зш'демсоло! ячести значимой инфекции! на террггории Рооап ч рад стран Зссгочнсш ¿гр^чь- ТТпоп А.Г., 1956; Шэторал Л.Н., 177ц Авцьш A.1I., 1383; Погодина В.З., 1970-1994; Лььоч Д.К., 1994). В отдельны, репюнах (Урал, Даш-ний Валок) остальное! о от КЭ превышает соттаеплвуощие показатели подрыт ¡ш инфегщкм (Ыихачша И М., 1990; Леонова Г.Н., 199?).

Несмотря на шгрекче кссгедования в облаем иммунологии, вирусологии, по-п^ежьему наибольшую сложность v проблеме КЭ представляют вопросы ранче£ диагностики, спепифччегкой теоапш и иммунокоррехцик. Современные работы по изученшо инвазивныг. свойств вируса, закономерностей имму;люго ответа, механизмов ¿ьедоровления и хронизации лагологеческого процесса ссвдали реальные предпосылки к пыщмглн.о пашгенеза и морфолнеза болелк на разных ■ровнях цслосгнолэ оргшепш, ооттшном.тканезом, клтгоччом (Ерман tí.A. 19"/1-1994; Погодина E.B, 1У7С-1994; Квепссча'ЭА, 1968-1995; Семенов С.Ф., 196^1992). РазргГюткч пршшчпиально новых концегпдщ репликаци вируса (В1шп Н.Е, Hiase А.Т., 198-J-; Heinz F., Kunz С., '9S3-199-), появление новых .«¡en дов сто распознания, основанных на опред:ше::ии постег.оратаъиоае?! клео гидоа в нуклеиновых :сислоГиХ (Кнорре Д.Г.. Плешес А.Г., 1984-1994), позволяют осуществил, комплексную о> распросгрднечия з^руса г. ррпитме, в частности, механизма прэникнозек-л его з мозг. Это, в свою очередь, дает возможность реидпь вопрос о чричииах неэффективности в ряд" случае лечебных воздействий на ¡глфездгвдчый г,ро;>ессл профнлахпг-ешк мероприятий.

Раскрытие мезмшзмоз взаимодействия ч х"де иифегагионного процесса ли:.к]/Оидиьтх органов мея^' собой л сгозгом позволит реамгь ооювныевопр-хы морфогенез? КЭ, в частности, причины и условия поврезденпя лимфокщгй п нервной ткани, происхождения вторичною иммунодефицита, об'.г.ио еэпуплвую'цего этой инфешгч, а "гшее морфонене-а восаленчи в мозт^е (Цшверличг A.B., 1991). Коппкжсная '-ощептюлогическач cae.ua взаимоотношений в системе "мозг - л'шфоггдиь.о орпиы даст возможность получшъ новые сведе. гия о гпецифичгист оагшиьг* морфодог ич-аезе признаков КЭ и тем самым разработать пут рационализпции щгагносгжи, тер-iin и ьроф'.ъакнжи Золезш.

Цгчь работы состоит в ¡пучения морфогенеза и патоморфоза инфекционного пооцесса ирг КЭ с позиций выявления вза.сшстшошамй мевду органами, репшцир}:ощимс: вирусом и его компс.галами. Заданы:

1. Изучил, морфогенез м межорга^тые рзаимоогюшения при остром 13 на МОДЕЛИ В0СПрИИМ"ИВ0ГО живот лого.

? Изучить морфогл:ео и межорганнне взпмослношения при КЭ на модели маловосприимчич>го животного.

3. Из^-чит1. ицпуцированныЛ патоморфоз и межорпшные взаимоотношения при Ю в условиях пассивной иммунизации.

4 Дать оценку патоморфоза и межоргснных взаимоотношений при КЭ в • условиях использование ативирусных химио- и биотехнологических препаратов (РНК-аза, ошионуклсотцщЛ

5. На основе дотаых анализа взаимоотношений в системе "мозг - лимфоипиые органы" обе д.овать ко:л1епщ_ю морфогенеза КЭ.

6. Разработал. рекомендации по лабораторной диагностике КЭ.

Научная иесшиа. В работе впервые дана сравнительная сценка ь&рфогенеза и межоргснных взаимоотношений при КЭ в восгриимчивом и маловосприимчивом организме. При этом установлено, що процесс репликации вируса в восприимчивом ооташзме происходят в лимфовдных оргагах со значительным повреждением их струетурноч^унюцональных зоч. 3 основе повоевдения лимфовдг.к органст леаагт агттез вирусной РНК и антигаюв, зрелые вирионы при этом не выявляются. Установлено, что в малов>.лприимчивом организме и у человел репликация вируса в периферических лимфовдных органах не сопровождайся значительной альтеративной реакцией, при этом в кликах с макрофагальньши функциями обнаруживаются зрелые вириоьы. Повреждения лимфоидных о;" . юв и последующий иммунодефицит ведут :: развитию акпгвного воспаления в мозге и бысгрой инвазии последнего чирусом. Степень повроцгдмя ,>11'мфочдных органов является важилм критерием прогноза развил л вирной инфекции.

В работе впервые проведай комплексна;. индикация элементов вирусной чаепщы в мозге и лимфоцпных органах, выявлена динамь.са появлс.шя в ни* гигпгенм, вирушой ''НК и вирионов. Исследование патоморфоза КЭ при пссиш; лЧ иммунизации указывает на модулирующую роль иммуноглобулинов ь регуляции иммунного ответа, подавления итгигепемкл при хом не исключает а и пеги вирусной РНК и возможностей развития заболевания в отдаленном периоде. Установлено, что синтетические олигонуклеощды и аморфная РНК-аза

создает минимальный риск ра^штшя заболевания в отдал^шом от згражениг лериоде.

На основе исследования распространения рируса в организме предложсн алгоритм диагностики Ю о применением Сиопгадологических приемов, позволяющей дать зрокговку феноменов, соидаляющих морфологическую картону КЭ.

Тсоретическгя и практическая тячшюыт работы. Использование дня анализа инфеш ганного процесса комплекса вирусологических и морфологи- .ет^лх методов, позволяющих щдатифицировать компоненты вируса (лирион, вирусную РНК, вирусный аншгрч), дало возможность существенна скорректировать имеющееся и получить новые данные о морфогенезе КЭ. Сформулированы новые положечия о дцссеминации вируса в организме и взаимоотношениях в системе "мозг - лимфоицные орга-ы".

Изучение пагчзморфоза 1<Э при пассивной иммунизации и применении дня лечения болезни олигонуюьлтцдов случаГлых посисчователыг>сгей, РНК-азы позволило выд винул» ряд полс.хишй о причинах неэффезс.тжкти используемых методов в раде случаев терапии и профшьлдда; Ю, и указать возможные пуш повышения эффективности лечебных мероприятий. Изучение межоргшоых взаимооп юшенин и их влияния на морфоглез позволило представить экспфименгально-теорегическую базу для комплексного лечения 1 азличных форм Ю.

Пракшч'жая значимость работы заключается в разработке комплексных подходов к дцап'эстше КЭ в различные периоды бстезни. На основанш положений работы возможно конструирование лечеблых прагартов с антивирусной аэтивносгыо и разработка модели их применения в различных фазах инфекционного процесса

Птожыия диссертации, вьоюсимыет защшпу.

1. При остром КЭ, разивающемся в посгриимчивом организме, происходит быстрое повревденне пфиффическич лимфоидных органов, обустоклишое синтезом випусного материала. Последний быстро поступает ч мозг, в котором на фоне прогрессирующего иммунодефицита развиваются воспалительные реакции, параллельно синтезу вирусных частиц п: :ейронах, с альтерацией нервной ткани.

2 При клещевом энцефалите в маловосприимчивом организме зрсше вирионы и вирусный материал шнтелфукпо? в макрофагах ¿шмфоузлов, ьг вызывая альтерации лимфоццных органов, и соответственно, развитич иммуноч,ефиц1Ггз. Это обсуловливаег отсу; лине повреждений мозга вирусным материалом

3. Прл лечении и грофшкиа-.ж; инсЬекиионного процесса препаратами иммуно:ж>Сулинов садаею. разьая степень защ.пь' мезга и влуфенней среда.1 в зависимости ш колиухгва аншгеп я грашрате г сосков применения. При этом иммобишрацгС вирусного штичена и решающийся иммунодефицит не npenmcmj.or проникнова-чю в готг вг*русьоЛ РпК, э^о создает возможность субхронической ?• патиеллшой инфещии с возможной клишнзжой манифестацией при разчшии чу-мунодорочм.

4. Лечение острого КЭ сингегичсскими антивирусными препаратами (РНК-аза, олигонугСпеотчдьО. действующими ла сшгп вируаьл паы'чуклео'щдов при КЭ, создает наикэяыиие вг-зможносш для хринизации индгащии в езязи с подифтгашчей i. изм(-нсаие.л свойств вирусной PHIC.

ВнеСраш: в фактику. 'Лагах'алы диссгрг'-йщш ьеоли в приложение N 2 к Пр:жэт'МЗСССР11 141 ат9г.прел;; 198Сг. "Диагаости.® клещевого энцефалита''. По ма^фиагки« работы подготовлено информационно-методическое письмо "Гибрнцюгция нуктаногых кислот как мп-^д быстрой диагностики клещевого энчефгшита", угверзденгие Госкомитетом санэпвднадзора при Президенте Российской Федера.^ш. Материглы исследования вн^рены в учебный процесс Омского, Томского меди-."лни<их инепп утл, Кацапского ГИ,ПУВг_

А;гроб~щт рябоьы Материалы диос^ртащи' дгчгожеиы на мтжинсгитугасой r-аучной конференции, пссвящснноч 80-лешю Томском НИИВС, Томск, 1586; на VIII Чсесопзним сызд. патогогоангпмов, г.Тбюпси. 1989г.; Всесоюзном симпозиуме "Современные ироб-^еми эгадашологии, дйиностики и профшкиоиии клещеюго зниефа^гги", г.Иркутск, 1990 г.; научно-г.рактческой кон&ернцли "Молодые уч-мьте - практическому здравоохранению", г.Ктаа.оя^ск, 1990г.; I к II межрегиональных конфер:нци.',х патолслоаштомол Урала, СпЗири и Дальнего Вое. ска, г.Тюмень, 1901г.. г.К^рган, 1993г.; Пленуме правления Российского Общества невропаюлгте, сект. ¡992 г. Иркутск; XIV конференции п^ электронной мш-ротчогии (биология, [медицина), гЛеркогшовка, .аоиъ 1992 г; конфетешдаях Сг,ердпот-ого НИИВИ, '.988, 1989; Омского НИИЬИ, 1988-1993 т., II р^ионалыюй гсу-шо-пракшческой к?т:ферелции "Вопросы кгдациьской проф^. мистики i. здоровья чеаозекав ГиЗири", г.Омск, 1993. .; юбилад.ой научной конферлщи.,, посвященной 70-лспл) Санет-Пегерб;ргского НКИ им. Л.Пасгера Санкт-Петербург, 1993; заседаниях Омского елдаеши общистга патоло"эанато;.гсв. 19í"4993n\

Oíh z.¡ и сгуу:тпура работы. Дисселтацчя изложена на 359 страницах машиноп.гчого .текста и cocioirr из ввода ira, обзора .итераторы, описания материала и методов исследования, 7 глав собственны,': ь.тлвдовглил, заключения,

выводос, прылтческкх риэдмендздш и списка м.еротурч кагоры!4 вютючаег "291 отечественныхи '85 зарубоитг; лсто'кяпсов.Текст .шгаоорироран 26таблицами и 285 рисунками.

МАТШ1ЛЛИМЕТЭД1ЛИСОадОЧЛ11ЬЯ

Е соагвеплтмш с поотчтен'о.ат задачами бьшо проведаю исследование дошмики течашч острою и хроническою КЭ с эксперименте 1ш модаш воспргамч-'шого и невосприимчивого жшотых, атшс.® пгюведены исследования мор<|>олошчесшх изменеим при воздействии на инфекционный процеос иммуинж '.ывороггок, специфических антивирусных сртгста на стандартной модели.

С целью экстраполяции экспернмиггашлплх данных нг. ченовека бьшо проверено ¡сучение 8 саснчонныхнаб^оде!«!!") по гтрштъ.^у л работе алгоритму.

1. Э::сп?рш ешпя'мые жимпьше. Остую ы::|>екци!с тоучяли на Сеспиродных белы мышах, приПшшгегыНО одного возраст, массой 9-10,0. Хроымескую инфекцию моделировали не сплдарпкш мода™ - сирийских (перс,ккх.зиахюи) хомячках массой 130-15и,0. Жчвогнме поступали га Ленинградского мггомника Рнллаьово. Перед введением в экспернмагг все животные проходили сосп 1!етгт«ую1 иле ветеринар .чые к« про ли.

2. Вирус. Для инфицирования живошыу. бьл использован п'.ьюапмГ: штамм вируса 1<Э "Софьин". Перед испаш.'.опаии^ шгамма были изучены гт> "сновиые генетические податели, кто р:л,- родгаердоши а оидс ничлосгь этажи 1у. С палью искль'чения имьфнопглалсгическнх рз'кций виру1; вводили жнвагнь'м в кулыу^альной форме. Был тбр-ш подокне,1Й п/1ь ттражеш'Я, как нан'чшее полно обсжтаклциГ; есестштыс услсв» ш ргппшкя I нф^кцпош юго процесса.

Вирус вводился жиношш- в дозе 10С0 ЬЭ/5и тгоопп. У мышеи эта диза чь'зьгзпет <хлруга <|юрму КЭ с легальным исходом ч финале чг 1"-12-е супа, с мо\.агга заражения. В опытах с коррекцией ыфеы^юнлого пропса биологи /ескими препаратами острую «шфслцио млд.?лигчучуш ведением 100 ЬОбО пмруса, согласно оснлоприз'ягому спиуцтау. У аалогньи этот фунпы ю»ияичеаа:е признаки энпефашгге полшшнсь га 11-12-°угки и до 11-х сукк погибало до 90% :кнвотны;-

3. Схелшо-И'люв.

а) При моделировании острой инфекции у мышей при дох вируса 100«) 1.0/50 наблюдение ад животными осущхтдпяли ежесуточно. При зюл на калл?цюк лсследсвалч по 10 гсквотных. Всего г. злом гкспериыешенеллльзоглло 120мыши1

б) При моделировали" хронической инфекции у сирийских хомячков наблюдение за животаыл л производилось на 2-е, 4-е, 6-е, &-е, 10-е, 21-е, 30-е, fO-e, 90-е сутки. В кавдом сроке исследовали по 15 животных, Еыбраных «лучайно, а заболевших иссиедомли немедленно. Всеш в этом эксперименте исследовано 135 хомячкез.

в) Для исследования межорганных взаилоотношалш и ищу! "ированного морфогенеза КЭ при профилактическом введении специфических иммуноглобулинов были поставлены д ве серии опытов по 80 животных л каждой, которые были заражены подожно вирусом КЭ в дозе 100 LD/50. При этом животным 1-й серии за 24 ч дз заражения была введена имму!юасщгт.неская жцпда гь еттромгемагпштнинов 1:160; животным

П-й серии указанный серопрепарэт был введен за 72 ч до заражения. Наблюдение за животными осуществляли в течение 300 суток. Для выявления ьирусной гзршегашии и регистрации ::роынескцх форм КЭ незаболевших животных исследовали на 30-50-е, 50-100-«;, 101-200«, 201-300^ сугкн.

г) Для исследования межорганных взаимоотношений и индуцированного морфогенеза и пагоморфоза Ю у животных, леченных серопришрагши, было поставлено 7 арий экспф12иенга i.o 80 животных в каждой. Трем сериям зграженных животных вводили иммунную сыворотку с ттрош шпигел 1:40 соответственно через 24 ч, 43 ч и 72 ч тосте инфицирования. R других трех сериях зараженным животным вводили иммунную сыворопсу с тигром антител 1:!б0 по той же схеме. Зараженным животным одной серии опытов (п=80) бьыа введена иммунная сыворотка с тигром шгпгтел 1:320 с TvMh же штгервалгми межау ирьекцгями. Вол животных во всех сериях опьгшв наблюдали до 300-х суп«. При лом материал от клинически здоровых животных забирали на 30-50-е, 50-100«, 101-20и-е, 201-300« супш.

д) Дня юучення влияния на развитие инфосциошкхо процесса препаратов олигонуклешидоа и их про1пвод)и.1х было поставлено 11 серии эксперимента по 20 живспных в кладом ora. гге. Животным всех серий петле инокуляции вируса (100 LP/50) п течение трех суток вводили один из испытуемых олигонуклеотицов по схеме Дозу раечтывали как 0,3 мкг на 1 кг веса жчвопного. Наблюдите осуществляли в течение 21 суток.

е) Для исследования влияния на инфекционный процесс РНК-азы и комплекс« "РИК-а^а - иммунная сыворотка" посгаалено две cepini опытов с использованием 40 животных в каждой. Животным 1-й серии опыгог в течачге 3 суток после заражения вводит препараг РНК-азы подкожно из расчет 0,5 мкг на 1 кг веса жиле тного; Животным Ii-й серии опьгшв, получавшим РНК-азу, - аналогично на

3-й сужи была введена внугрибрюшишо иммунная сыворотха с пггром шгпгтел 1:80. Наблюди п ю за животными продолжали 21 супш.

Опьпы сопровождались соотве^сгвующимп конгролями 1.0 сгацщ-ртюй методик" /Хивсгных забичаш с соблюдаи1ем правил, предусмотрен!га приказом МЗ СССР N 78. Все мероприятия, связанные с заражением и другими экспфиментами на животных, проводили с соблюдением требований по противоэпидемическог о режиму в соотвстсгаии с Инструкцией, упзфжденной Мишспрсгаом э^торвоохранения РФ. Все экспфименты на животных провосты на базе Омского НИИ прьродаоочаговых Ш1({хжц;1Й.

4. Паталогоанатамичеаое ииждовшшетругт лиц, умерши:, от КЭ, проводили в ранние сроки с момента констатации биолоп теской смерш. Помимо взятия материала для морфологического исследования и электронной микроскопа, производился весь комплекс иммунологического и вирусологического исследовашы малриала от умерших болыглх.

5. Вирусологические и шщчюпогтескье исследоимия были выполнены в лаборатории иммунэлоши и шпогенеза вирусных инфекций Омского НИИПИ под руководством заслуженного деятеля наугл РФ, доктора медацинсак наук, про<рессора Квеггковол Э.А. В эюпфчменте у животных определят! -ппр вируса КЭ в крови и мозге .ю общепринятым методикам. Динамику гуморального иммунного освега оцепивгши по данш/м РПГА (с дкфферешиизцией специфических антител по классам иммуноглобулинов), клеточный иммунитет регистрировали в реакции торможения миграции ли:тфощгтв и спленоцитов и по данным количественной и функциональной характеристики популяций Т-

Л.1МфоЦИГОВ.

5. Пптаморфачогичсзше методы. Для световой лтроскгпии кусочти мозга, лтафатических узлов, селезенки и тимуса фиксировали в 10%-ном нейтральном буффгом формалине Лилли, спирт-формшшне, ацетоне. Криосгагные и плраф.оювьп срезы окрашивали паноггшьгсхими, на1роп!сгг>логич^£ки\;и и гистохимическими методами. Прц.\.е!1яли окпаски препаратов гатгоксилин-эозгаюм, пикрофуксином по Ван-Гизону, азуо-И-эозином, ШИК-методом, пирогашом I» мегиювым зеле, илм по Бпаше, по Нисслю, по Мийагава-Алексацдровской, по Шпильмейфу, по Бильшовском>'-1рсосу, по Вейгергу на эластику, по Перлсу.

Для электронной лиодюгкотш кусочки мозга величиной 1x1 мм ш коры головного мозга, подкорковых гщ\ мозжечка, шейных сегментов спннгогэ мозга, лимфатических ухо в и селезенки фиксировали путем погруж:шя в 4%-пый забуференный параформ (рН=7,2). Проводили обезвоживание материала в

ашртлх с почждающсй затяпор в смесь эпон-аряцпиг. Шлуюнхие и ультра™ исе срам получали на ултрашме (¡игрмы ЬКВ, проема, ржали и фотографировали с помощью элеюрочкога микгюскопо:; Сумского завода ЭМ-100С.

Элоетрочная микроскопия прс.вод,ипсь и шборашрпи эле(«рс:шой микроскопии и .шхиокза К2; Екатериноургского НИИ в:фусньи инфекции сормесгчо с проф. Урманом Б. А и ст.н.с. Ту^чкиной Л.Г.

7. Нимучииамхимин. Для гцпнкаццч вирусного атнши. использовался прямой и непрямой метода.! игшуаофлуореецзтш. Сыворотки, меченные ЛИТЦ, нротчи амляхнов вируса КЭ, титрованные но эталонному шг«мму Софь"н, бьшг получили из Ср^дтовского КИИ шрусыпх инфеуций. . Криосппггые и парафиновые срезы после ншубчроватия с сывороткой просматривали и фтггографиповаш на микроскопах МБИ-15 и Л-омам-2М.

0 енка резуш та.ов проводилась по шкале градации свечения, предложенной Кармьпневой МЛ. (1971-)Ч7о).

& Метод маяекуяярной ¿ибр^.-осищи гуклеш^заых шзют т яШ (совместно с Шамашшым Ь.Л., Р^шовым А.А и Полшцук Т.И.) применялся с цепью ицщплции виоусчой РНК е глеяках хшовного и спинного мозга. В основе МГ НК т а*и лез&гг испстьзованне ^.гчгнных зондсв (фрагментов ДНК или РНК), •чжллемет арных гаучг^моа и-РПК. Широкие возможности этого метода и особенности его высокой спе ифичности г.сыюлшл причено м.ъ а о для решу.ня оаюг-лой задачи исслс"ованит - чьевления вирусной РНК как маркера

1 каплиц: 1ру;ощаосч видоа. (Глетев А.Г., 1984; Шачаьин Б.А., 1991; В1шп НС., Нааьо А.Т, 1984; МсАШ&г АА,

Радиохимические исследова.шя прочедишеь нами с лаборатории радиохимии Ногоо'бирского НИИБХ СХЭ АН СССР иод руководством доктора химических наук Плетнева

У. Мор^х, юпрн^лкие и етатчопит'сше методы. С и,елыо обьтспогаации морролошчажого исследования пями применились количественные, пс лука) и .ча лш и тыс и ¡.ачествеш гые метода.

Сцечго состоят,я отдельны,. оруюур яфиноч ткаш, лимфоузлов, селезенки, тимуса гцХ)Годила.ь с 1:спил.л'чг.нисм как счетных, та-: и мерных признаков, характеризующих с-руктурно-'^уньдиональныс зоны этих орпчюв, согласно рекоменпяциям I1 Международного конгресса но морфомефии (1982).

Сгарнис репр'тагпт.вных вь:3опок и анализ полученных результатов прочоддчгсъ сеопено рекомендациям Автш^дилоча Г.Г. (1973-1993).

Вычислили» сред ше ветчины, г.,х>вод,тся ксрреш:цкэнный анагиз.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

l.Etrecmsno.ui чорфогагснмежоргамвдтшпсотшшемт приКЭ в восприимчивом лмилоооспрюмлвоморпчипм.

Для анализа естественного м.ц^хленеи КЭ былм избраны 2 модели -воспршма,зое oicveonwoe (белая мышь) и шювосгцпипмвое (сирийский хомячок). Были проанализированы межоргаш'ые взаимоотношения d системе "мозг -лимфоцпцые ортны".

Лчмфоузлы Уже нг. 2-е сутки развития ociponi инфекционного процесса у белых мышеч в кортикальной зоне лимфоузлов све»лые центры практически отсугсшшплн. Определялись у тетки 1лзиса л1"мфоццтов Раракорпжалььля зона, напротив, увеычнвалась за счет олаеггра»^¡юрл-чулj лимфоцитов. Вирусный шпиген в кле.ках лимфоушпв в s луг период выявлен не сыл. Вируаия РНК была сарешсгриропаиа в клсгпссч краевое ашуса (т«б. 1). В дат иейшем ш коршкальной зоны исчезали фелликулярные структуры, а в ларакортикальноЕ зоне возникали некроты. Вокру! них скапливались макрофагали^ю эдеме гпл и лимфобласты. Посткапиллярные венулы были расшнра л окружены большим числом бласпрг.:;сформ1"ювшшых лимфощггов. Спеи»фи"еское свечение вирусного антигена в клетка:: синусов и паракоргикалььон зоны определялось, начиная с у-х сугск. Радиомстки В1фуа юй РНК чагде выявлялись над цитоплазмой макрофагов краеьых и ре..:е медуллярных синусов, а также над цитоплазмой клеток, окружающих тосткапнл^ярныовенулы в гюракоргпжалыюй 30iie(,Ti6.1). К 5ч>м слотам после заражения в лимфоуглпх происхолта смена реакщы клеточного tiта на iy? юральный. Синусы гохлгтешо расширялись, клеггчноегь их при этим падала. К 7-Ч-м супам радиомепи вирусной РНК были единичными пад цитоплазмой мш.рафалпв ciniycoD. Встречались гигангасне фоомы с уродливыми дырами и лириишюфилыюй цитоплазмой. В паракортнкальной зон?, по-прежнему, выделялись некрозы. Г [ад щнюшш-мой бласшых форм обнаруживались грубые рошюмелки вирусной РНК. 3aitM клеточгость ларысоршкалыюй зоны начал ! поталь, происходил^ "ойтцы^ание" (^ииясулов, что в общем сошчегавовало снижению напряженности клеточного пммушгтегт. Параллельно с шгволтоцииЧ паракортнкальной зош>1 началось увеличение числа плазматических клеток в ¡медушгярньгх таксах. Поиски вирусных ч.'спщ з раиичньг. структурах лимиту шоп к успеху не пртели (таб. 1). В финале инфекцг.и шблщпдлось i юегшешое истощен! г лимцитччешно узла.

Динамика выявления радиометок вирусноР. РНК. вирусных частиц и антигенов в мозге и лимфоидных органах при остром клещеьом энцефалите

Орган Структуры ви- Срок после заражения ( в сут)

органа рус.

эле- 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 И 12

мен.

МОЗГ 1. Сосуды РНК 4 44 +++ +++ + +Г -¡•4+ 44 44 44 44 4 4

! ВЧ - + < + 4 4 4 4 4 4 4 4

АГ - + + 4 4 4 4 4 4 - -

2. Нейроны РНК 4 44 +++ +++ 444 444 44 44 44 4 4

1 ВЧ - + + + + 4 4 4 4 4 4 4

АГ - - - 44 44 Н 44 444 44 4 4 4

ТИ-' 1. Корковый РНК - - + + ♦ 4 4 4 4 4 - -

МУС слой АГ - - + + + 4 4 4 4 - - -

2. Мозговой р;ж - - - + 4 4 4 4 4 - - -

слой АГ - - - + 4 44 4 4 4 - -

ЛИМ- 1. Краевой РНК 4 + ++ ++ -1 4 4 - - - -

ФОУЗ- сичус ВЧ

ЛЫ АГ - - + ++ 44 44 4 4 4 - - -

2. Корковый РНК - - + + ++ 44 44 4 - . -г - -

слой ВЧ - - - + + -

АГ - - - + + 4 4

3. Гаракор- РНК - 4 ++ 444 44 44 4 4 4 4 4

тикаль- ВЧ - - - 4 4

ная зона АГ - - •1 + +++ +++ 444 44 44 4 4 4 4

СЕЛЕ- 1. Белая РНК - - + ++ ++ 444 444 +4 4 4 4 -

ЗЕН- пульпа АГ - - + + + 1 44 44 4 4 4 4 -

КА 2. Красная РНК - - - + ++ 44 4 4 4 4 -

пульпп АГ - - ■ + + + 4 4 4 4 - - -

Таким образом, при остром КЭ в лимфоузлах животных в инкубационном периоде происходило формирование клеточного иммунного ответа, а в периода расернушго клинического течения на фоне некропг еской реагарт нарастал иммунодефицит. Вирусная РНК при этом была выявлена уже на 2-е суш«, а вирусный антиген - позднее, на 3-4-е сутки. Вирусные часгпгы зыполены не были. У кеч хомячков с хроническим КЭ исседованы в фиксированные сроки (2-, 4-, 6-, 8-, 10-, 21-, 30-, 60-, 90-е сутки) в п*мфатических узлах о тмечалась рь-раженная реакция на анпншный стимул. В краесых синусах лимфоузлов ;июлю/&лся периполепис, большое число свободных и фиксированных макрофагов. Па 2-8-е сутки в лимфоузлах были выявлены радиомстки в»фуслой РНК (таб. 2). Они располагались над цитоплазмой макрофагов. В дальнейшем )*а 10-е сутки в кортикальном слое лимфоузлов отмечено расширение а"ллых цлпров. В парркортикальной зоье продолжалась бласггрансформация лимфоцитов. По периферии венул выявлялась вирусная РНК, при этом в структурах л1шфоузш отсутствовали зоны деструкции клегок. В медуллярных тяжа", выявлялись единичные плазматическгг клетки. Начиная с 4-х суток, в макрофагах, гисгиопггах, плазмоцитах лимфоузла выявлялись зрелые вирионы типичней структуры, диаметром 37 нм. К 21-м суткам течения инфекции при небольших клинических проявлениях болезни морфологические изменения в лимфоузлах лишь количественно отличались от обнаруженных в лерлые 10 суток габлюден-м. Югеточносп. синусов снижалась. В 1шх, по-прежнему, регистрировалась з:фусная РНК, В11оуа ¡ые частицы уже ле выявлялись, вирусный антиген регистр! фовался га уровне (+), снижалась клего'зюсгь паракортикзлыюй зоны. В медуллярной зоне увеличивалось число плазмоциго£. В дальнашем на Л-е сухки опыгг в лим(1<оузлах происходило уменьшение клегочнлеги паракоотикаглюк зоны. Радиометкн вирусной РНК выявляли^ нзд цитоплазмой макрефагов и были единичными. Эксперимент по моделирование хронического КЭ «Зыл завершен на 90-е сутки с момента заражения животных. Картина изменений лимфоузлов лри этом мало отличалась аг слисанкой на-30-е супа;. Дшь у 1 жиьотною в паракоргикальной зоне мы зарегистр|фовали гируслую РЬК, что свидетельствовало о скрытой персисгенщ и 1 вируса.

Таким образом, в начальном периоде хрони кской инфекщш происходило активное заселение лимфоузлов вирусом КЭ. Вирусная РНК обнаруживалась во всех зонах лимфоузла, а начиная с 21-х суток, зарегистрирован процесс инволюции Т- и В-зависимых зон. Причем в!фусная РНК выявлялась только в паракортикальной зоне у отдельных живошых до конца экегте^шета. Вирусные частицы выявлялись только в остром периоде инфеида

Динамика выявления радиометок вирусной РНК, в>.русных частиц и антигенов в мозге и лимфоидных оргагах при хроническом клещевом энцефалите

Орган | Структуры Вирус- Срок после заражения (в сут)

органа ные

гле- 2 4 6 8 10 21 30 601 90

менты 1

МОЗГ 1. Сосуды РНК - - - + + - - - -

РЧ

ЛГ - - - - 4 - - - -

2. Нейроны РНК - - - - + + 4 4 4

ВЧ • - - - + + + 4 - -

АГ - - - - + - - - -

ТИМУС 1. Корковый РНК - + f + + + 4 - -

слой АГ - - + +

2. Мозговой РНК - - - + 4 - - - -

слой АГ

ЛЙМФО- 1. Краевой РНК + + 44 ++ + + - - -

УСЛЫ синус 34 - + + + + + - - -

АГ - - + + + + - - -

2. Корковый РНК - + + ++ + 4 - -

слой ВЧ - - -- - + + - -

АГ - - - + + 4 - - -

3. Паракор- РНК + + ++ ++ + X 4 4

тикаль- ВЧ - + + + + 4 - - -

ная зона АГ - - + +++ + 4 - - -

СЕЛЕ- 1. Белая РНК + + ++ ++ ++ 4 4 4 4

ЗЕНКА пульпа АГ - - + + + 4 - - -

2. Красная РНК - - - + + 4 4 4 4

пульпа АГ I * + + + - - - -

Сеиезаои В инкубационном периоде острого КЭ у белых мышеи быстро нарастала бласттраисформация лим^юиигов пфиартериолярных футлярог.. С 3-х суок опьпа у большинства ,кнвотных появились нс^ттческие очапз j> Т-зависимых зонах селезенки. Поля некрозов были окружены лимфоцитами и макролитами. Светлые ценгры лнмфозщиых фолликулов не определялись. Вирусный шпнген при этом выявлялся в пфиартериолярных лим^юидиых. фу1лярах и мнепоцдцой ткани. Вирусная РНК выявлялась не тольго е лнм(]юцшых образовашют, но и в мшфофгит ка1елоцщюй ткани (таб.1). Таким образом, в инкубационном пфиоде в селезенке определялась иммунная реакция клеточного -шла. В пфиоде разгара болезни зоны некрозов увеличивались. Миелоцдпая ткаш активно пртлнффировала с появлением большого чиеда мегакариобластов. В филане ин({)езкцш1 из селезенки постепенно исчезал вирусный антшш.азатем и вирусная РНК(таб. 1).

В 'жепернменге по моделированию хронического КЭ со 2-х по 10-е сутки после заражения живозных в селезенке щзоисхсдтан стру^рные изменения с выраженной (тасттрансформгцией лим^юшгтов пфиартериолярных лнмфоидных «футляров. Свеглые цетры лим<1юцщ!ых фолликулов постепенно расширялись. В красной пульпе наблюдалось резкое повышение активности макро<]>агалы1!.!Х элементов. Вирусная PI1K чьв.длялась со 2-3-х суток опьпа в клетках Т-злвиспмой зоны и мш^хфгах красной пульпы, вирусный aimiген -позднее, в тех же зонах на уровне (+) (таб.2). К 21-м суткам опьпа началось постепенное снижение активности структурно-функциональных зон схлепепки. В дальнейшем с 30-х по 90-е сутки после заражения животных, то есть в периоде собственно хронического течения инфекции, мы наблюдши инв0люц1"0 Т- и Ь-зависимых зон органа. Начнная с 30-х суток, нивелировалась напряженность клеточного иммунитета и наступила регенерация структур органа, связанная с элиминацией вирусного аншгена. Вирусная РНК при этом вьивляласыэллсо в Т-завназмой зоне. К 90-м суткам опьгга рапномепси вирусной РНК Сыли ешппзчзп.шзивдт.м^вдш'чпзскоштапзятизселеишиСтабЛ).

Таким образом, в хроническом периоде КЭ, в птлнчие от острого КЭ, имелись значительные структурные огличия. Это npoxjie вгего, прогрессивное развзпие В-снсгемы иммунного швега, которое, вероэтно, и защищает мозг. сирийских хомячков от инвазии вирусом.

Т.шус. Инициальные шмелечил в тимусе белых мышей при остром КЭ были выявлены уже через ';улш с момепн за4«азшшя. Корковый слой при этом постепенно расширялся с инфильтрацией лимфоцднымн зла .агами. Вирусная РНК ужена 3-й супа, инфекции выявлялась по пфиффни зосудои нар"жного слоя

коры. Лгруао.ш антиген выявлялся в этих же зонах в виде небольших участков (г«5.1). С момсыл кпишгаской манифестации болели прогиоыло значительное снижение содфжгшя ^лмфощтгав в 1оре органа. Внутренний слой при этом постепенно засешысп макрофапми. Граница коркового и мозгового зещрсша стиралась, à мозговом слое намсшлась инфильтрпщш лнмфощггами, томичесхие тльца увеличившись в размерах с .юявлением мелю« ккл. Вирусная РНК выялялаа вбтпи сосудов. Bi,pyun.iii гт.игш на уровне (+, +) выявлялся в наружном слос коры. Таким обр~эом, при остром КЭ в тимуое

накапливается значительное количилъо вирусного мтсриала, чаше всего в зонах, 1раничаи^к с сосудистым руслом, что указывает на возможную aœi этого ; рец"ркулчциеи Г-лимфотт». Начиная с пернем разгара, в тим^тж происходила якцдпент&.тьная трансформация органа, оц>ажаюшзя вторичный иммучодефицт.

Е пфвь-j 10 с/гок течения хронического КЭ у хомячксы отмечалось увеличение числа лимфоцитов в кирс и мозговом слое тимуса. Количество ai погожих таюц заменю нарастало, некоторые из ibix увеличивались в объеме и имели непрачильиу. форму. Вируггая РНК и шгшгеи выявлялись с 46-х суток в корковом a:се. В последующем (19-21-е cjtkh) происходили изменения отражающие егш.овлаше специфического иммунного ответа. В ко4 е органа ушивалась мшогочесхая активность. В собственно хроническом периоде в тимусе снизилась плотность клеток п несколько увеличивалось число тимических телец. На 30-60« сутки опыта начиналась регенерация далек тимуса В корковом ело- увеличивалось количество лимфощтез. В мевдольковой соединительной ткани появл.лись жировые кллки. Тимччоэсче тельца были правилы юй и iiTipaBH™jHOfi формы. Рздюметки вирусной РНК были единичными в корковом споеоргана.

Подвод* итог исследовав со лилгфоид'п.сх органов при остром и хроническом КЭ. следует констатировать что вируиый матер'-ал п гак накапливается с первых суток инфекции шбцргпцпло в клетках, имеющих макрофагалыг>ю фикцию и лимфощг-ах Т-зависиммх зон. Нскрмпгкская ретгадм, верояпю, связг-ш с wrronaronrmiM эффектом вируса. Отсутствие некрозов в лчмфоиплых органах сирийски ros.riKon it выяш1гс s в них зрелых вирио!юв яилясгся важш»м фактором, кот. эрьш, рерояп.о, определяет малую воспрнимчивоаь эли животных к вирусу.

М- • >■: У белых мышеи гри остром КЭ гируагая рНК bi 'явля-ись в сосудистых образованиях и же.удочковой avravr, начиная » 1-х супж -• ткния ип|>екцнн. В дальнейшем на фоне набухав л п разводам юыя мембран капилляров появалсь

вирноиы в югго<\ яо п.риферии ссудой и межклег очном всчряве. Одюврема ю появились и участи специ^тчесхло свечения вирусного шгшгема в сосудистых образовш вюх. После. кжрежпеш >я 7о-75% 1кГфет юв в I тдикяп^к «ых зонах мозга появились клинические проявления болезни. При этом у животных наблюдались повреждашя нейронов в вци£ в-лсуолгаацил, лизиса, крпиорекака. Появилась нейронофагичгскне узелки. Активировалась сягезиптшя нейроглия. Параллельно наблюдались в«иэ<утгп>1 с мфшырацией пер1^аасуляриьк пространств и стенок сосудов гсматогишыми ч нейргтплльныхи» клешами. Поражения мола быт мозаичными. Вирусная РНК выявлялась в сохранных и поврежденных нейронах. Радюмяки виру .ной РНК вс - -ались и над пшалыымч пролифератами. В финале кдфекции единичные радиомегки вирусной РНК наблюдала иаиц!П10пл.змой]Шруше«иТЬЕ. нейронов. Еирусчый ¡•чпга" га максимальном уровне выявлялся с 5-:: по 8-е суген после заражения. В дальнейшем выраженность специфического свечения вируак/го антигена падгла (габ. 1). Эрелыз вириэны наблюдались в периоде разгара, как внутрнклегочно (неирош,:), та., н гчислегочно (по псриффнн капилляров) 'га5.1). 3 (Ьииале ннфскши! на (¡юнгзначтгельных пов^еадаай мозга зрелые вирионы встречались редко.

Исследование мозга при хроническом КЭ показало ичую динамику. Пре»гз «сего, |) сосудах цадпопорных зон ыозга наблюдались с;:б"ха1ше и долруипи мембран капилляров. Начнная со 2-х суток, в мозге хомячков выявлялись |хщцомсга1 вирусной РНК ндц ювпками сосудистых обпг^опалий ^аб. 2). Позднее гвдюмегкн были выяатаг шнад нейронами ш-дикаюрных зон. На °-10-е супси й.ли зыямены вирусные частицы в раситра^1ь»х цистернах эгюогтазмат1гохкс Г|седш1ейроноа Пшальнысэлеменшк 10-21-м суткам аетивно пролнффир^вали, встречались единичные насхулиты. Вирусный аг л гат тосте 10-х суток опыта чаще всего г4 выявлялся (таб. 2).

Таким образом, в отличие от посприи*. плюй модели у сирчйскнх хэмячков каргша эщефа'нгта ч мозге не носила алысрггптнош характера. Здесь преобладали ^юдукшвьче реакции нейрошш, при зюм животмле не имели острой клиники, а тече»ию эш (а;);.,пггл не имело легального характера Возможно, именно пролиферация глналтных алемяггов защшдает на!,юны от разрункння при репликации вируса. На различных ш восприимчивости моделях выявляется н различный характер погреждения шиъ, динамика нммунногг ответа с мор] Х1Л0П г юиснмн эюивалентамн ь лимфоцдны,. органах. Верояпю, некртнческая реаиии в лим<}юушах способствует рглчтио имму!юдефнщгш и

аюивном/ п<, атласно в ЦНС, а шшш иприонов и лим<[к>нд!1ых органах Gei пх гэвреждапш ci нмулируег ело .и и]>и тесюипыму! н ндй oiuer.

2 Ицр^тс;jKire««ibi:i ::)]"'.те и" иашморфм 1СЭ lijui i тал визой нммунтацн«

¡Сак указывалось выше, для изучения тсченпл IO rpi пассивной иммунизации бьла избрана огкдарп'ач модель восприимчивою животного. Были проьздены различные napnairii.i коррскиц и ншккциошюго процесса: до заражения (ирофилакшка), после заражапя' (лечение) в различные сроки и с рагшинымп nnpitv.,1 oei-üniK.ianaion (габ. 3, t). Во восх сериях экспериментов бьчш выявлены больные жишшые, заболевшие в пределах двойного инкубационного пфиода(30 суток) п забо!"зиипе в дальнейшем в сроках наблюдения, сонзмфимые со сроком жшпи животных. Помимо больных, исследовались и здоровые жикошыч в фиксированные сроки наблюдатя. У всех животных проводилась иидикация вируса морфстэгачесюг ш и вирусологическими методами.

11атомо[>1хтопи. лют живопи.тх, заболевших в пределах первых 30 суток с мом<чгт заражения мало отличалась ог юяпроля, где вводился только вирус. Морфог лические изменения наблюдались в метипосос/,гястых и нейролстодермальных знсмсших. При этом васкулиты и участки повреждения нейронов локагаповались е оаювном в подкорковых отделах мозга, стволе, шинном моле и мозжечке. Струю ура васкултов и характер повреждения нейронов мало отличались от больных животных, которым введен только вирус. Однако, количественно у этих живошых бьша более Вогражсна пролнффация Глнальнмх элсмешов. Ра/пометки вирусной РНК наблюдались как над сосудистыми глсмапами, так и над цитоплазмой относительно сохранных н поврежденных нейронов (габ. 5). Вирусный аншгш выявлялся в сосудистых образованиях подкорки и ищщкагорных зон на уровне (•, +). При электроино-микроскоппческом исследовании иаходки вируа(ых чаешц бьш! относительно редкими. Вирусные частицы выявлялись чаще внутриклеточио и в виде единичных частиц.

Лимфэухы у 71 ой ipymibi животных также вполне сосгсетствовали контролю Только вирус" с той существенной разницей, что в них отсутлвовали зекрозы, определяемые на свеиютшческом уровне. Некробиозу и дистрофии лодвфгались лить едпшчные icucikii. Вирусная РНК у больных жнвотых выявлялась в тех же локализациях, что и в контроле "только вирус" (таб.5). Вирусный ¡umirai в

Характеристика профилактического применения ссропрепарата с титром антител 1:160

Срок вве дения препарата до заражен. Число ответных в эксп. Число заболев, шветнчх Количество выявленных больных животных (п) по срокам (в сутках)

п абс. % до 30 30-50 51-100 101-200 201-¿00

¿4 часа ео 37 46,3 23 9 5 0 0

72 часа 80 45 56,3 39 6 0 0 0

Таблица 4

Характеристика лечебного применения серопрепарата с различными титрами антитез

Срок-введения препарата после заражен. Титры иммунной сыворотки Число заоолев. ¡швотных Количество выявленных больных животных (п) по срокам (в сутках)

абс. % до 30 20-50 51-100 101-200 201-300

24 часа 1:40 31 о8,7 17 6 4 2 2

1:160 39 48,8 22 10 3 4 0

48 часов 1:40 54 67,5 41 6 4' 3,0 1:160 50 62.5 43 4 0 3 0

72 часа 1:40 1:160 1:320

57 71,3 57 0 57 71,3 57 0 33 41,3 27 2

ООО ООО 2 ? О

jutM<l«yi;^xi.',wuLr>raiiia значительно на ¡мнем уровне. Зрелые вирионы в клетках ,гим|х>уиов обнаружены не были.

Исследование селезавс выявило в псриаргериолярных лнмфоцщп>к футлярах многочисленные бласпрансформнроваппые лим(|ющтгы, в л»1мфоцлных фолликулах намечающиеся свшлые центры. В кгаспой пульпе установлена iipo.it фтацця лнепоцдион теа::н с большим числом пхшлских клеток. При иаледованни срезов селезенки мч-шдом иммунсшоминесцснцик специфическое стечение вируаюгэ аитштет наблюдали на ipaiu ще красной и белой пульты и в единичных клепсах красной пульпы. Радиомстки вирусной РНК обнаруживали над цитоплазмой клеток nq'Mmpitpiiojwpiibix лим1|юидных футляров и алемлпов красно! пушпы. Морфомефичгская характеристика селезе»1ки (таб 5) позволяет згишючип., чго у ьсех ъольных животных

наряду с регистрируемой активацией пролн^/ератнвных процессов, сохраняется акпшносп. макрофагальныхэлсмптшв.

В пмщге жниошых отмечаю изменение соотношения коркового и мозгового веществ», в пользу послецнего. В коре наблюдали расширение сосудов, ашжение клегочности. В мозговом слое увеличивалось число лимфоэпигелиальных клеток, лимЛхмцггов. Число тнмичесжих токи режо увеличилось. Среди imx появились дегенерапюные (]юрмы. Исследование среюв тимуса методом иммулолюмииесценцин выявило слабое специфическое свечале вирусного aimuuia на границе коркового и мозгового вещества. Методом Ml НК in situ вирусная РНК выявлялась в различных кликах коркового и мозгового вещества

Таким образом, под водя итог исследованию животных, заболевших до 30-х суток после заражения, можно закгаошпь, что у ши развивалась морфологически подтвержденная каршна энцефалит с несколько сниженным альтерагнвным компонентом. В лимфоцдных opianax при этом имели место гтроявлашя иммунцдепрессни. На фоне нммуннодефицита в мозге отмечено снижение щпопролифереливного действия вируса. В инфильтратах мо^га число ли\н]юцитов было меныиим, что может был. обусловлено снижением уролня клеточного им\п"а лета за счет иммунодспрессивного действия серопрепарага.

В периоде с 30-х по 300-е сутки опыта во всех 7 сериях эксперимента было выявла'о 57 больных ;кивошых.

При морфологическом исследовании мозга этих живалых обращал) га себя снимание менее вмражлшая сосудистая реакция, которая была достоверно шике показателей, полученных у животьокдо 30-х суток оль. (р<0,05). Повреждали нейронов локализовались, в основном, в шщикаторных зонах и были чстко локальными. Прирост шильных элементов в мозге этих животных был

Выявление радиометок вирусной РК'.С. вьрузиых частиц и антигенов в мозге и ::имфоидшлх органах у мьией, з?ражешшх вирусом КЭ и леченных серопрепаратамн с клиникой острого заболевания

Орган Вирус- НЫЬ элементы Срок после заражения (в сут)

до 30 х сутзк с 31-х по 300-е сутки

МОЗГ - сосуды - кзйроны РНК ВЧ АГ РНК ВЧ АГ + + + ++ + + + 4 +

ТИМУС РНК АГ + + + +

ЛИМФОУЗЛЫ РНК ВЧ ,АГ ++ + + +

СЕЛЕЗЕНКА РНК АГ + + + +

Таблица 6

Выявление радиометок вирусной РНК. вирусных частиц и антигенов в мозге и лимфоидных органах у мышей, зараженных вирусом КЭ. после лечебного введения иммунной сыворотки, клинически здоровых в различные сроки набя^ения

Орган Вирусные элементы Срок после заражения (в сут)

31-50 51-100 101-200 201-300

МОЗГ - сосуды - нейроны РНК ВЧ АГ РНК ВЧ АГ + + : + -

ТИМУС РНК АГ + - + -

ЛИМФОУЗЛЫ РНК ВЧ АГ - - —

СЕЛЕЗЕНКА РНК

АГ

дрсгов'-рно вьшзе, чем у заболсчших до 30-х суток. Особенностью пагоморфолопзи явилось появление споншозной дегенерации и деструкции миелина. Вирусная PI1K в мозге животных выявлялась в сосудистых образованиях и нейронах, но на значительно меньшем уровне, чем до 30-х суток (таб.5). Вирусный антиген Ьовгалялея лишь в нейронах каузальных иьдасатирных зон на уровне (+,+). В|зрноз.ы выявлялись толь в относительно сохранньзх нейронах ствола и слитно:« мьз. а (таб.5).

В лимфапмнеских узлах наблюдали резкое расширение синусов с появлением в них небольшого числа лзлзфощпов и макрофагов, отсутствие светльс; петров лимфои^зых фолликулов. В паракортакалызой зоне животных клеточносгь бьша значшпльн^ снижена, при этом лизззь вокруг расширенных посткапиллярных векуя наблюдались скопления лимфоцигоа В мякотньтх тяжах лежали плазмятическне клег.ки с пиронш'офззльззон щтоплазмой. При ззсследованззк сриов лимфоузлов методом МГНК in situ выявлены единнчззые клепаз, содержатцк- вззруазузо РНК. Исследовшзче' срезов методом ч?«му1"элюм:1Нссцешдзи позвагашо вьзявзпь редкое и непосгояшзое специфическое течение (таб. 5). Пои элекц ■■ iuioh клзкрос^опззи проб и? лззм<1)атззческих узлов были выявлены гхпззащ-п макрофагов с vrrnHnofi десгрукт'ей огделызьзх из них.

Р сакзаъя жззвопзых определялись несколько взщозззмененные периартхрззолярзтьп лимфоидззые футляры, заполненые темнь;мн клетками, в лимфатических фоллисулах б.,зли видны светлые ценфы. Краазая пульпа подвергалась мззслэзщиоГ. мегашш;ш с большим числом макрофагов (таб. 5). При о^>рабо.ке цгюв: зегодом МГНК in itu были выявлены едишзчные ращзомешз ■ вззруаюй ГНК над Н'попгазмой мшрофагев красной пульпы и в Т-зоче оргшза. Методом иммуноичомзшсснезсции выявлялось елгбое специфическое свечение вир/енгчо анп'.хиа на уровге (+).

В пптусе наблюдалось измененззе состнозгазм коркотоз и и мозгоього вещества долек. При этом ктегочность коп л бь'гза значзпепько сниженззой. В мозговом веществе мзпттшческая шгпзвностъ лнмфоэпигепиальных клеток бьша высокой. Число тъми-зоашх телец возросло по сравнению с контролем. При ззсследовашвз срезов тимуса методом MI НК in situ выявлазьз единззчззке радиомегки, в основном, над цигоппазмой клеток коркового слоя орпиза Обработка срезов методом иммуношошвносцацзвз обззаружила слабое и непостшнззое спсцнф'зческое свечение вирусного антигапу жззвапзых.выявтенз'ыхе 30-х по 50-е cyrw (ттб.5).

Такззи образом, в лзьмфовдзых опганах наблюдается присутствие следовых кашзчеепз вззруа КЭ на гранззце доступности для применяемьзх методов.

Структура органов иммуногенеза спид&елисгвует о [«mirniii умеренного иммунодефицита.

Оценивая межоогш лше взаимоотношения у животных, заболевших с 30-х по 500-е сутки опыта, можно констатировать, то на ipoire н.гз.о« илров вируса у животных в мозге и ндыгокого уровня нммучодефищтта происходит формирование фонического энцефалита, обострение которого, г.ртл.э, се~пшю с усилением репродукции вир^та. Именно сохранность гатфоадных органов одфживаетразвише острого процесса; гошунопагологическим ког..пнтгом, что создает определен! iyio локалы юсп. патологического гтроцехга в мозг—

Нш !болыш ш hi пфес представляет i тот йдовд! п х i кзаболишп к го<тп t.ix.

3 периоде с 31-х по 300-е сутки опыта в кажцоГ: jep«H отйиралас. гроба их 1 животных, которым вводился несптифический иммунодепрессор к:нштог-40 в соответствии с существующей меюдлсой выявлена тфуса, перWTipjкнцего у клинически здоровых животных. Вое» о исследовано 112 мышей. У большинства животных в мозге и внутренних органах вирус КЭ методом (Чклтробы на сосунках иыявлен не бьш (таб. б).

Морфомегрическое исследование мозга этих животных показало нобалыгие (тага от котроля. У 26 из ' 12 животных методом блопробы на зосунюл был выделе)! В1фус КЭ. Все эти животные бмли подтфгнугы тщательному патогисгологическому исследовшппо в соответствии с гриюиым алгоритмом В индикаторных зонах этих животных определись единич.{ые васкушны пролиферативного типа. Глмальные пролифераты были о^наружэп; по пфиффии желудочков мозга. Характерным для згой группы животных яаглегся присутствие очажков споншозной дегенерации которая локализуется в глубоких отделах коры или подкорковых образованиях. Е мозжечке найподг'ласъ пролиферация глиалшых клеток в молекулярном слое, на месте выпа"и">к грушевипльл нейроц;ггов пралиффировага» глиальиые кдетси. При обработке срезов мозга методом МГНК in situ выявлены единичные отдиомеки в:русной РНК над цитоплазмой неизмененных нейронов подкорки. Методом икмунолюминесценции шрусный ainirai выявлен не был. При электронной микроскогпш по пфиффии капилляров гпад'каторных зон наблюдали ковдентрическне структуры, набухание мембраны кагпщгяров, в глиальных к тетках по пфиффии капилляров многочислечные вакуоли. В нейронах полсорки определялись пикноз и разрушение адф, появление Езкуилей. увеличение l цитоплазме числа полисом г. гронул рибочукжопротеидов. Зренье вирионы обнаружены не быть

Иосмедьвшше ллкроузпов, согласно принятому в работе алгоритму, показало сохранность их морфологической струкгры. В краевых синусах наблюдался умеренный гкрипоикзис, в коре выявлялись неширокие светлые цешулл. В параг.ортикалыюй зоне плотно лежш;,1 темные лимфоцита, посгкапиллярные вшулы были paaioipau>i. Методом МГНК in situ вирусная РНК выявлена на была Вирусный рщиген также не выявлялся. При электронной микроскопии зрелы? шфиоиы не оЗнаружень. (rafi.6).

В селезгте мышей без гаменегвш в мозге и с гоменениями типа подрстрого латшпюго энцефа-irra выязлены показатели, отличающие их от здоровых ко1ггроль.1Ых животных лишь в п~ане более подчеркнутой пролиферации миеловдюй ткани, что сшщстелъсгауег о бывшей шлншшой стимуляции. Пфиартер»юляр1ые лимфоиалые футляры и фозиви-улы выглядели обычными и мало опличатись от. ко.проля. Вкусная РНК и вирусный антиген в селезенке обнаружен.! небыли.

В rwAtyce живать ъ наилюдались значительные отличия от контроля. Прежде всего, выявлялось истончение коркезош слоя и, соогщегсгеенно, увеличение мозгового. При этом в мозговом слое наблюдалась пролиферация репгулоэпитезшаты'ых клеток с увеличением числа цшических телец. Это евцтетельствуег о значительном воздействии ыфуса и серопреларата на тимус. При исследовании срезов тимуса методом МГНК in citu у 4 животных были вмявлены единичные радюь.лки шфуаюи РНК. В|фусный аншген не был обнаружен.

Подаода итог вышеюдожешому, можно заключить, что у всех клинически здоровьк мшогщых были об) пружены измена шя в тимусе, соответствующие неглубокой акциоапальней трансформатш. В периферических лимфэцдных органах выявлено обратное разшпие Т- и В-завистслх зон органов с перестройкой то гуморальному типу. Из мозга часш эгшотых методом биопробы был выдели вирус. В ряде случаев при вирусологическом исследовании материала отмечаю несовпадение полоаапепьных результатов биопробы, МГНК in situ н иммунсшюминесценпюй микроскопии. Наличие изменении у 26 мьоией из всех рассмотренных серм экспф^ита поваляет считать, что развитие хронического, подоогрого, латшпюго энцефалита »шло зависит от количества штггел, содержащихся в препарате, введенном экотфиматгальным животным, и or сдо -ы его гфименения. Исследование изалированньи штаммов вируса КЭ от заболсз!шх и незабалнвших животных позволяет полштпь, что серопрегарат юменягт антигегные садйетаа введенного вируса, что, вероятно, частично объясняет отсутствие вируоадушфаванной альтерации ткани при

сбалансированном имм^пим ответе и способствует персисгенции вируса в кликах. При этом погащигльный риск появления заболевания в манифестной форме остается высоким.

3. ?1цгугц1р.лл1П1ый йрфо1С1Ю п тголкцфп Ю при

лечьти аппетческимп агопопутстсэтццамн •( РНК-азой

С целыо исследования морфогаыа и ггатомерфоза КЗ при испашзогании апггешчесжлх амивнруеш тх средств были проведены экспфимлпы по изучению олитонуклеотЦдов случайных последовательностей и препарача аморфной рибонуклеазы. В каждом га тстф'шешов госледованшо подвф."ались больные жикяные н в конце экспф.шента по истечавш 2Í суток с момапа зараже.лш вое незаболевшие животные. Во всех экспериментах по изучению лечебного действия олигонуклаяцдов и аморфной "HK-азы было выявлено 185 больных животных. Все oíш бьши подвергнуты детальному пдгоморфологическому изучению (таб. 7, 8\

Исследование заболевших .итотых. В мозге морфалг>п;чрскчя картина энцефалта у заболевиих живашых была, в оаювном, однотипной. У большинства из них сосуды были полнокровны, отечны, В >гросвеге часта щ шп встречались стазы, красные тромбы. По пдшффчи набшсдтлась лимфоцлного типа инфильтрация. В т<анн мозга выявлялись пфи-, пан- и эндоваскутлы, чаще в сосудах венозного тала. Ниже контроля было число васкулнгов и объемная плотность пфиваскулярных муфг (р<0,05). Глиалы иле элеппы пролиффировали в л.озге как днффузно, так и по пфиффии сосудов и поврежденных нейронов. В пролиферагах наблюдали астрощпы, микроглиоцты и оляюденпроппющпы. Среддки прирост элементов щи у заболевших животных был досшвфно выше контроля (р<0,05). Оогбого внимания заслуживают изменення нейронов у заболевших животных. Прежде всего, дистрофические изменения их шблюдались в различных участках мозга, но чаще всего в зонах изменения сосудов. Оценка состояния нейронов проводилась по принятым в работе морфомегрическим показателям - объемной плшности выпав шчх нейронов и числу нейронофапш в ноле зрения. У жнютгьс., заболевших до 14-х суток, показатели повреждения нейронов были неотличимы от кошроля (р>0,05), у заболевших после 14-Х суток изменения нейронов были несколько ниже котроля, приче* i различи* были достовфны [C<OfS). Выявлсгие В!фупгой РНК в мозге прсшвсдилось с помощью МШК in sita Радиомзгкл В1фуаюй РНК были обнаружены над теми же структурами, что и у контрольных

Результаты опытов по лечению КЭ олнгонуклео.'ицами произвольных последовательностей

N Назва- Коли- Количество Длитель- Количество

п/п ние чество заболевших ность ла- незаболзвших

прела- живот- животных тентого животных

периода

ра^а ных абс. абс.

% (сут) %

1. СП 20 14 70 14.3+0,7 6 30

Нр 20 14 г<0 16.6+0,7 6 30

з! Э - 20 И 55 16.1+0.8 9 45

4. 20 14 70 12.5+0,7 6 30 .

5. "К" 20 13 65 13.3+0,7 7 35

6. ст 20 14 70 13,0+0.7 • 6 30

7. СТ--!1э1 20 13 65 16.7+0,7 7 35

В. 5-200ое 20 13 65 16/7+0.7 7 35

9. 11-01 20 12 60 13,7+0.7 8 40

10. РЬе 20 17 85 12, 5+0,6 3 15

11. А 20 18 90 12.5+0, 6 2 10

итого: 120 147 73

Таблица 8

Результаты эгеперименга по лечебному применению РНК-азы и «ссмплекса ГНК-азы с ичмукной сывороткой (титр 1:160)

Эксперимент Количество зевотных Количество заболевших животных Длительность ла-тентого. периода (сут) Количество незаболевших животных

або. 1 % абс. %

I сория Иеченье РНК-азой) 40 22 55. 16.5+2,0 18 45

II серия (лечение РнК-азой и иммунной сыгорог.сой) ■10 16 40 17.2+2.5 24 60

Контроль (аирус без лечзния) го- 18 90 12, 5+0,7 2 10

Контроль (РЖ азч - здоровым мивотним) го """ — 20

животных: сосуды, скоагятпя глиальных элемагшв, iraporbi индикаторных зон мозга У животных, которое -аСолспи пост,е 14-х <*упж от начала опьиа, радиомегки пируснол РНК встрсчатись значительно реже. V заболевших то 14-х с,ток вирусный ангчгеи в мозг? выяалчли па \рсине контроля, а у заболевших после 14-х суток течелня 1.л<1>е;шп1 - на зпачигелмю меньшем уровне. *.Х5наружепие зрелых виркогок у чпПолсишх/'о ¡4-х суток бьло непостоянным, в редких nefipoiiax иилдкаторнш зон; по-ле 14-х сути зрелые вирионы в клетках были единичны, хотя чащевсгрсчалто нуклеоиды.

Таким образе м, исследование м гиг. у ^аболещдих жз.потных, леченых олигонуклетц/щми, показало типичную кар л лгу эгцсфал>тта. Однако, необходимо подчеркнуть, ч'т» пролчферапшпый компонент при лом Сьш более вырачсашым у живопмх, заболевши:* в конце опыт. Тенденция к хронлзацич наблюдалась в опыггл с высокой длч.ель:кхлыо инкуба-тонного периода в случаях применения препаратов "Не", 'Э", "СТ-сЬоГ, "5-200г>е". В опытах с низкой средней длительностью латешнего периода "Phe", "А", "М", "К" гролнферг.птный компонент был наименее в-,.ражен.

Исследование лш/^ипических угт у жпнопл.к, заболевших как до 14-х суток опыта, так и позже, выяв. то определенные отличия от контроля ,1голько вирус". У всех животных были значительно расширены краегые синусы лимфоузлов, в них наблюдали большое тисло лим(1юц1ггов, ягленне периполезиса. В паракортикальпой зот наблюдалась ткплиая бласттртно?>ормацнч лимфоцитов с инфильтрацией паракортокш-ьной зо1Ъ1 юкрофшальнымн элементами, некрошчес;.ая реакция orq гствовала. В коре лимфоузлов свегаыс цешр: i не определялись, лим(]ю1|диые фолш.кулы состояли ш темных лимфоцитов. И|пермедиарпые и мезушяриые сииусы были значительно (дасширены. В мяшыых тяжах наблюдалось скопление плазматч^ескнх клеток. Методом МГНК in situ радномегки вирусной РНК выявляли, чаше всего у узпктпгых, заболевших до 14-х суток опыта, над ur.rroi шазыой мехрофагоз краевых синусов, а также лимфоцитов паракортнкалыюн зоны. При этом у животных, раболепии а после 14-х :угок опыта, радаомегки выявлялись над шпошшмой единичных клеток. Инкубирование срсвдв с сывороткой против вируса КЭ показало наличие слбого свечения на уровне (+) или (+) у животньс; заболевши до 14-х сугск, у заболевнв1Х в ' шее поздние сроки - СЕэтешге чаще рстт.лрнрсвали ти уровне (+). Для выявления зрелых вирионов использовали электронную микроскопию макрофагов а и усов и клеток паракортикалыюй зоны у 10 животных, заболевд тих до 14-х суток, и у 10 животных, заболевших после 14-х суток. Цельные зредыс • вирионы выявлены не были. Веротно, это связано с определенным проявлением

закономерности инфосциошюю процесса, установленный при туи им КЭ у восприимчивого животного.

Исследование сс.гтии у заболевших жпэотных во многом повторяет закономерности, выявленные п лимфоушах. В белой пульпе nepi шртер! клляр! 1ые лнмфоцдцые футляры были расширены за счет бластой трансформации лимфоцитов, некрозы их выя&пены не были Лимфо»щные фоллчкулы лиг-ены светлых центров и предсгаьлены базофнльными клетками. 3 красной пульпе наблюдали значительную акп-чизацию мгэюэдюГ: ткаш'. часто встречали^ тгшггекие ккзгакариощпы и мегакгриобласш. И;щикання вирусной РНК методом МГНК in situ показала наличие радиомсгок вирусной РНК шщ. цюхзплазмой клеток пернаририолярных лимфоцдиых футляров и клеток красной пульпы. При иикубироьании срезов с сывороткой прошв итшгенов вируса Ю слабое if нсгюсгояннос свечение выоляпи и макрофагах храсной пуллы а нериартериолярнг.и лимфоцдаых футляре».

H^aieaoBajjie тимуса у ааточны, заболеишк до и после 14-х ста те*ми л инфзшии, позволило успиюв-.ть обьпвшк* для КЭ формы акццценпшыюй трансформр'цш opnuia.

Так, у забопгзшихдо 14-х суток набредали значительное уменьшение коркового слоя органа. Лимфоцкгм, преиущественно темные, располагались в наружном и внутрелкл. спой Е мозговом ciwv орган?, отмечено появление крупных дегак-^ташнои (JiopMbi ишических телец. 3 некоторых зельцах имели место небольшие полости. Выявление вирусной РНК .ie годом МГНК in situ показало наличие ее в клетках наружного и Biiyrpauiaw слоег коры opiana. Елрусный антген регистр1 фовали в корковом и мозговом слс ях клеток периферии и в ста ;ках сосудов на уровне (s ) и (+У

V животных, заболеишнх после 14 х сук-к, наЬуиодалн солее глубокое иегсценне коркового слоя тимуса. В некоторых из них обнаружены пзпосш. В мозговом слое, выявлена умеренная инфильтрацн.. лнмфоцдными элементами. Исследование срезан метстрм МП IK in а ■ и показало наличие вирусной РК К как в mairoloii, так и в корко; эм оку орт? на г воде небольших асогтшиш клеток с . радюметчами. Инкубирование среюв тимуса с сывороткой проотш вируса (О . В' (явило ак мифическое свечение в мозговом и корковог i веществе на уровш* (+) или(+).

Таким обрезом, результата цосшдочаичя тимуса позволяют констатировать наличие типичной для КЭ вгорнчиш иммунадогичнай нецосппс.'шоот ш фоне вирусной репликации, маркированной присутствием в оршютнгрусной РНК.

Подводя итог исследованию животных, заболевших nocie введения им вируса н олнгонуклеощцов, к.эжио констатировать, что "арппга болезни у животных, забсквших л> 14-х суток, была типичной доя острого КЭ с морфолопчегчнми эквивалентами вторичной иммунологической недостаток юстн. У животных же, забалттшх после 14-х суток, мы наблюдали менее острый энцефаш.г оо значзггелыю более выраженной к^рлшой нс.эщашя оргтюв иммуногенез.', обуспо^ле'аюго большей длительностью ннфаавх^вюго процесса. Nio/юю полшыь, что у животных, заболепиих после 14-х суток, была более выражавш висцеральная фаг. инфсипи.

Иситаюванне изабаквшнх жипопых. Здоровые животныз fxn клинических прояш1пв1>< болеяп были заб'пы на 21-е сутки опыта и нсслсцавашл с испсип.зова1тием того жеалгортма, что и для больных животных.

При исследрваниг мозга основное ыошание уделяли ицдикагтрным зонам. У балшнчгва животных при этом морфологические юмененш в мозге ш вг лены не были. Мгрфомегрн-кская оценка ? кита пока ¡ала лишь некоторое увеличение соддмцщ^шя плиальных клеток, которое достоверно от.зтчалось от сосгтветтлБукищтчгк-ка^сленкозтгрши "здоровьеживопзью". .

Из общего "вкла незаболевшнх (п=73) бьию выявлено 5 животных га опытов с наиболее шпким cpenjnm шг-уСацнонным пегиодом, уко.орых морфологическая картой заслуж: тает особого ог.гкання. У эшх живот, .ьл в подкорковых сотэтах наблюдались васкушпы с небольшой инфильтрацией стенок венул лимфо.шными элементами. П[.т это: ; Пролиферация глин была более выраж пюн, чем в оетап"гых случаях. Набл'одались г дистрофические изменения опртничных нейронов. Итследовг»ше срезов л.озга у 68 незабалтзшнх животных методом МП-!К in situ не выявило вирусную РНК. В группе же ю 5 животных с морс] мл отческими зьмененетм-: были выявлены едюичные клсткл с рапюмепсами вирусной РНК, ч-э свидетельствует о наличии вирусной репликацш I у здоровых животных.

При ¿кавдцованни регионарных и отдаленныхлимфатииеалхузтв у клип пески здоровых ж.гоотных наблюдали карпов акптного иммуниге-еи. В коре лимфоузлов выявляли неботы не светлые центры лимфоцдных фолликулов. Паракортакальная зона была клеточной, г жЛ ззмели место находки мзюзхзчзкжнззьзх раенпзразззых зкхлкапззлтсгньзх венугз. У небольшой группы m 5 животных отмечены морфолопзческие изме ¡аптя в лим^юузлах, отшг ающиеся от опчсанноЛ выше картины а-тив-опо иммуногенеза у боль.оичегеа здоровых жчвотных. Так, в ;иракорп1каш»ноП эсчзе 1шело моего зти-шгельг-» больнгя содержшвзе бласп м элементов,; объемная потзюсть паракортшалызой зоны

была выше, 4tM у кошрольиых животных. Исследование срезов лимфоузлов методом МП {'.С in situ всех нстболаимк животных не выявило п.фустй РНК ни у одного из :шх, Иикуб|фование срезоь с сывор'лкон пропга лпигаюв вируса КЭ поле ж. оепьньк pejynu raroti таюке не д ло.

Исследование селезахи у веги ipjTinu клинически здоровых живспных также показало наличие активного иммуногенеза Tim, в белой пульпе лимфоцднь.е фоллгаулы содержит небольшие светлые цагтры. Пернартфполяриые лим(|юцплые футляры были рашшрешгыми за счет властной трансформации лимфоцитов. Мие.юцдна? ткань акптно прапи^хрировала, наблюдалось большое uiaio мегакариоцдгов и мегакариобласгов, Вируаия РНК в селезенке ни у одного животного выявлена не была. Инкубирование срезов с сывораякон против вируса КЭ также дало 1/ф.ща гельнын результат.

Исследоглиие nuiujui клинически эдороьок жнвопих позволило обнаружил, прилики напряженного иммуногенеза. В мозговом слое ошечеш выраженная проячферация лимфоjni 1 тешкиl<.пых клеток, наблюдалось наличие небольшого числа лимфоцитов. Химические теиьид были небольшими и кониешрировалт ь в цешре долек. Исследование срезов тимуса методом МГНК in situ и методом иммуначошиюсц?дции дало оггриидгелыгый результат.

Как показало исследование, использование алигонуклестщои и РНК-азы с терапевтической 1 зелыо у больип и 1ства животных вызывало подагла ше активного инфекционного п(к>цесса. В то же время, у этой группы живопгмх иируим 6i»ui шщуцирован напряженный специфический иммуногенез. Однако, у <шсти животных в мстге выявлены небольшие изменения. Это обстоятельство позволяет заключить, что именно в мозге мышей имеются зоны скопления клегок-мишагей для шфуса КЭ, недоступные действию противов1фуа11.1х препаратов и иммунологическому конгрсицо. Вместе в тем, способность препаратов олигонукшитщрв проявляй. антивирусное действие, не иокагсая специфического иммунного ответа, выгодно огличпепгх от других немногочисленных препаратов, используемых доя лечения КЭ. Перспективным является изучение возможности сочетшшого применения олигонуклеотцдов и РНК-азы с препаратами, имеющими датой механизм противовирусного датсгвш, что могло бы существенно повысить герапевтичеас ifi эф(|)екг.

4 Морфэгаго и патола ал •оггом1~*\1оя диалюсгш«аКЭу человека

Исавдовале лимфоцдньик ор.анов и мозга у лиц. умерших от КЭ, мм проводили соглаото принятому в работе ллгор этму. У всех 8 Солы 1ь:.\ ь латапном пфиоде после укуса клеш? наблюдалась шмфгденопатия (увеличение лимфоцитов в 2-3 зонах). Этот феномен мы сочли важным л пото.«1у особое внимание по секционному матер: илу уделили исследс.ва! гига лим^юузлов (таб. 9).

У всех умерших в г.фвые 2-7 суток болезни (таб.с) лшщюу..ъ1 бм"И почсеместно увеличены. В крревых гинула' наблюдаюсь скопление свободных и фиксированных макрсфтив, лимфоцитов. Светлые центры Сыт. непшро'имп. П паракоршкальной зокз чосткапилльрнгле велулы были распфены, лимфитпы вокруг них. бласггрансфсрмнрсзяны, однако, тСлхдалгсь и участки оголения реыкулярной стромы. Особешю п'Шфхнуто истощение па^акортикальной зоны было у лиц, унфших после 7-х суток болез!п. У в^ех больных над цитоплазме,Л бласшых клеток наракоршкалыюй зоны наблюдались рад,пометки вкусной РНК. Вирусный антиген выявлялся на уровне (+). При электронной микроскоши нафонеповреждешю макрсхТпгальных клеток были выявляв типичные в»фионы КЭ.

Селезегтг Средняя масса селезенки у всех 8 умфших сострзила 325^25.0 , что несколько выше, чем средние возрасполе покгзашш. В пфигргфиолярных лимфовдчьл футлярах определялись многочиошные бласгы в звде групп, встречались и зоны разрежения кяггк. Лим^кж/тые фолликулы выглядели округлыми, светлые центр л их были раашфены. Вирусная РНК выявлялась в бласпых клетках Т-завиашойзоны,аещшичны>»ряд[:омеш1раис1р1фОЕалии1 и над цитоплазмой макрофагов красной пуы.пы. Вкусный аншген гыявлялся в зонах скопления лимфоидны:; клеток в виде единичных точек в краа гой пульпе на уровне (+).

Приведя шые данные» гсзволяют ушерждз"»»*) что при КЭ возшжаюг измена дм органа, соответствующие фазе нмунодефицлта разгара болони, причем вирсная РНК и опиген выявлялись в диагностчеа л значил.ых кол! .чествах.

Тимус. Изменения, связал ые с вирусной инфекцией в тимусе, наблюдал' на фоне возрастных процессов. У пожилых тимус состоя" в основном го жировой ткани с ещяшччыми мелкими долькани прренхимы. Во внусреш.ем слое к;ры накапливались в значительном чг'сгв макрофагальные элеменпы. В мозговом веществе телец Гассаля было больше, чем обычно, причем они б; ши крупными, часто неправ! шыюй формы с кисгообраздаш тем. У 4 умфших в сроках течения

Клиническая характеристик-, секционных наблюдений умерших от острого КЭ

Секци-жныз наблюдения Возраст лет Длительность ТОЧЭ!:..Я болезни, в сутках Результаты этиологической прижизненной диагностик

Изоляция штамма Титр РПГА РТМЛ мгнк 1п Бро1з

1. К. 48 2 + 1:1280 + +

2. А. Ь8 5 - 1 320 - -

3. Я. 68 6 ■ + 1 640 + +

4. М. 21. 7 + 1 640 + +

5. с. 58 8 +. 1 640 + +

6. Б. 48 10 + 1 640 -

7. П. ЗС 24 + 1 640 + -

8. Г. 24 27 + • 1 640 + +

Таблица 10

Выявление радиомеюк вирусной РГОС, вирусных частиц и антигенов в мозге и мм5оидных органа/ у больных, погибших от острого КЭ

прган Структуры Вирусные Уровень индикации

органа элементы

МОЗГ 1. Сосуды РНК +++

ьч . +

АГ ++

2. Нейроны РНК +++

ВЧ +

АГ + г

ТИМУС 1. Корковый РНК ++

слой АГ +

2. М03Г0Е0Й РНК +

слой АГ +

ЛИМФО- 1. Краевой РНК +++

УЗЛЫ синус- ВЧ +

АГ +

2. Корковый РНК +

слог1 ВЧ +

АГ ++

3. Паракор- РНК ++

тикаль- ВЧ +

ная зона АГ +

СЕЛЕ- Белая РНК ++

ЗЕНКА пульпа АГ +

2. Красная РНК +

гульпа АГ +

болезни с 7-х до 30-х суток наблюдал ст. коллгпс далек, инверсия слоев деструктивные изменения. Вируиия РНК выявлялась в :слетках красзой зоны коры, иногда метки были вцдиы и в других отделах долж. В целом, в тт.мусе значительные скопления вирусной РНК и вирушпп> атигоп не выявлялись. Таким образом, у умерших от КЭ вьявлялись пменения в тглиусе 111™ акцвдеттшьной трансформации Ч!-1У степени, а пагшлельно сэл'м ¡фоилодщю развитие вторичного иммунодефицита, заоегистрироиачнсго в клго «же

Мозг. У всех погибших от КЭ наблюдались выраженные проивла.'я паса мозга в мяпсой мозговой оболочке преимущественно в базальных отделах. Микроскопическому исследованию подвергали кусочки материала га тецдгкаторных зон (шейный отдел епшшего мела, нфигигрнкулгргая 301л, мозжечок, ствол, аммонов рог, таламуг, кора мезга). Максимальные изменения наблюдались в сосудах шейного отдеш спнпюго кспга, ствола, губэгецшгмар! ых зон. Мембрана подвергалась наб^гашпо и разволокнаппо По пернффн сосудов наблюдались гематогенные клетки, эритроциты, плит лысые г»рол.<фераты. Околососудастые инфильтраты р ввде муфт также находи л г в шщгалгорных зонах. В шгх же определялись и участки гл.ильных прогафератов, слож_1ые глиальные комплексы. Вируош РНК выявлялась над щттлазмой нагроноь пфедних рогов спинного мозга, мозжечка, а^монова рога, реже в коре головного мозга (таб. 10). Вирусный аштюен выявлялся также в нейронах и сосудистых образованиях индикаторных зон на уровче (++). При электронной микроскопы участков ю этих же зон мозга находили широкий спаар повреждает": скудо", нейронов, глиалъных клеток, сосудов капиллярного ттх Зрелые вирионь» тишгчного вида габлюдались в расширенных канальцах эндогопзматической сет нейронов. Нередки были и находки вирионов вне клеток гю пфифергш капилляров (таб. 10).

Таким образом, исследование мозга умфших от КЭ демонтирует, 1трежде всего, прямую связь выражал юсти воспаления и длительности течения болеяш. В более поздних ямках шма!ашя захвашчакхг пракпгеески Езе дгигагельные зоны головного и спинного мо^га. Содфжсше вирусной РНК в позднге сроки не гагуе, чем у умфших в ранние сроки. Это свидетельствует об определенной адаптации вируса в организме. Развипге сосущгсго-мезагсатальных шменений после перьой недели болезни следует связать, с одной стороны, с кпеотяым иммунитетом, а с другой, сразвитием реанимационной гшелопш мозга.

РЫВОДМ

1. В эксперименте на -кивошых три КЭ устаношаи зависимость морфогенеза и межорг анных паимоотношешш в системе "мозг -лимфовдные органы" от степени восприимчивосп! оргшпдма хозяича к штоусу-возбудигегао. У восприимчивого живапюгс разливается некротическая реакция в лимфондных органах с последующим формированием энцеф&мга на фоне вторичною иммунодефицита. У маловосприимчтмых животнь'х повревдаше лимфовдных органов и, соответственно, иммунодефицит отсутствуют, и энцефаломиелт не развивается или появляется у едшлчных животных.

1 Актиный синтез РНК вируса КЭ з клетках с макрофагальлыми функциями лимфоузлов восприимчива животных приводит к повреждение перм^ричизсих лиифоцгцгых органов! Некротическая реакция в них коррелирует с быстрые . появлением вирусной РНК в структурах микроциркулягорного русла мозга, что и обусловливает его повреждение.

Деструкцгш Т-зависимых зон пфиффических лимфо:ццых органов у , инфицированных вирусом КЭ восприимчивых ялвошых нарушает функцию органов 1!ммунн0й системы, что реализуется развшием вторичного иммунодефицита по ютегохкому типу. С появлением клинических признаков болезни в микроцнркуляторном русле мозга, нарцду со значигельчым количеством вирусной РНК, регистрируется антиген и зред.ю в!фноны. Одновременно в струмурах мосга I.регрессирует воспалительная реакция. , 3. Основными компопапачи ссшггшшого морфогенел КЭ у восприимчивых животных являются повреждения лимфощтцых оргшюв, вторичный иммунодефит ггио типу ГТГ, морфологический эквивалагт которого представят в виде истощения пфиферических лимфочдаых ор1анов и акнддигатьной Трансформа'ши тимуса, которые (¡юрмпруют воспатдпельный процесс в мозге, сочетающийся с В1трус'щдуцировг.1шыми повревдешшми нейрээкгодфмальных элементов.

ч. В малоиоспршшчивсл! организме сшгга вирусного материала при КЭ начинается ч пфи(1>фичах.1х и центральном лим({юцдных органах, при этом в макро-гах и плазматических клепай зрелые в!фионы пояндлгатся уже в инкубационном периоде. Выяшке^остъ вирусной РНК и штгеиа _>нач1петьно уступает их содфжшшю в ш (алогичны:: условиях у роаф.ашчгш.гл, животных. Монологический эктиваалагг иммунодефицита при этом выражен умфечно, шпнвио ([юрмирушея клегочпип, а затем и гуморальный иммунный ответ Р стр^-пурах 1- 1ик;ю1 ц фкулчюр! 101 о русла мола ячмень регистрируемых

.»мпэненгов вируса (РНК, атгигеч, в.грисны) невелико, в -»клип мозга прысгичхки отсутствует альтфгд.м и проявления воспаления. Инфе; л тонный процесс у згой труппы животных б ёсльшиг.сле случаев oipmiirinr.jzra висцеральной фазой.

5. Оипга вирусных чзстт'ч в лимфэцщо.а органа; малсзоспрнимчпшлх жиасгных и раннее появление иммуноглобулинов в вьтхчаг: Tirrpa". а периферической кровк тормозит инигию ч.озга. Отсутствие в структурах тагкроциркуляггорного русла мосга достаточно болыш.х колкчосга гирушой РНК, ангагелов и вирушьл частиц спре^ляет отсутствие алттерацти и раэвкшя воспаления в ткани мозга. Замкну»ъш цикл синтеза вирусньгх частиц в лимфоидных оргшкл Ces развития нммулодафчцюа и его лторфологичеекчх эквивалентов является основой инфекционного протесы, ограниченного висцеральной фазой.

6. Емчшгапп-тй в рабоа, факт почьтаигя вирусной РНК в мозге И лчмфоидиых органах в рашем и.исубационнсм периоде требует изменения атгоригма диагностики КЭ у чгзтовека с переориаггацией на поиск вирусной РНК во вну грет лен среде оргачтгма iв частности, в мхероф^т различных локплтагчй.

7. Лимфогденопячы у челсвекз представляется чайным и рантчм сикиромог Ю. Сгабильгое выявление вирусного материала в клетках периферических лимфоузлов влага пно:/ периоде болезнт. позволяет рекомендовать использоваттче пугшэтов л(1М([ю/лоп для ранней и быстрой этиологической дцапюсшки с пр:1менашезимсгодопип,''"к;игиив1фусной РНК.

3. Наличии в патомо1х]юлогт1ческой картине энцефалита у людей, погибших от КЭ, гнпокагческих, гцфк/лтшрных и других вторичных изменений затрудняет поиск вирусного рдтигена я препаратах мозги СМ'фа.гивнслъ иссвд;ованти зттаыггешго повышается нри использовании мотергга-га и шадткаторных зок мозга1 шейный отдел спышэго мозга, периваггрикуляпг^я зона, мозжечо*<, ствол, аммоиов рог, таламус, корт мозга. Примсненче :жспрсса:ьп. методов репарации вирусом РНК (МГНК h situ и Li spots* обеспечивают рысо.'оспеарфич'ххуо дтгагноспгку КЭ в течение су гок от начала обследования.

9. Применение специфических ссропрепг'р.гтги для профилактики и ас тения КЭ ведет к папгомор<|хпу болезни, что связано с модуляцие*4 иммугього о»всга. Следствием этого является изменетше вз ишоотчоюапп втгоуса г. лкмф'игцгых органов. Отсутствие пиврезкдишч в них предсгавглется важным птгагыксм ютоморфоза Coram. В морс|югемезе этш^алил значительно опекается альтерапия сосудов и перигаскулярной нёгроглш. с подчеркнутой прслг"^гр£цл'*й последней. Это, в свою очередь, явлг.егся монологическим з.<вива1"этом

лашпной щьрекции в восприимчивом организме с возможной последующей манифестацией при развили иммунодефицита.

10. Коррекция инфекционного процесса при КЭ аншвирусными средствами, воздействующими на синтез вирусной РНК (олкгонуклеспицы) и на РНК-емлю (РНК-аза), показывает 1лсугагоие и морфологической картине болезни признаков протредиеншости, вирус при этом не выявляется. Морфологическая картина энцефгттта у заболевших животных, леченных этими группами препаратов, огра'чтчена менингососудистыми элементами без значтельной альтерациь ншроэкгодермальчы: структур. Применение этих трупп препаратов для леча ли КЭ следует призьдтъ перспекхивным вследствие минимального риска хронизации процесса.

11. При модуляции иммунного ответа пассивно введенными иммуноглобулинами, или изменениях д синтезе вкусного материала препаратами олигонуклеотидов и PriK-a3bi может развиваться пролиферативная реакция, являющаяо! основой хронизации инфекционного процесса. При этом лечебное применение препаратов, воздействующих на синтез вирусного материала (алигонуклеотиды тайных последовать д.носгей и рибонуклеаза аморфная), создает наименьшее возможности для хрошгзацич инфекционного процесса с соответстующнмн морфологическими эмгшалйггами.

12. Примените с»штетч°ских олигонуклеотидов и РНК-азы л/я лечения КЭ следует сочетать со средства.ли, воздействующими на иммунопатологический компонент воспалтгтельной реакции в мозге с цглыо модуляции иммунного воспаления. Использованге синтетических олигонгклеопщов дтя лечения КЭ целесообразно в раннем инкуб.иг'ошюм периоде К? при отсутствии значительных поирелденгй лимфоцдных органов. Лечение РНК-азой следует проводшъ при наличии РНК-емии и аншгенеквш в фазе клинического течения болезни.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМВВДАЦИИ

1. Для этиологической диагностики клещевого энцефалта на секционном и биопсийном материала рационально использовать, помимо метода нммуналюшшесодщш, метод молекулярной тибрвдоацин нуклеиновых кислот in situ, существенно повышающий информативность лабораторного исследования. Материал га мозга следует брать ш индикаторных зон: шегный отдел сшшного мозга, пфииаприкулярная зона, мозжечок, спюл, амыонов рог, таламус, кора мозга.

2 Для прижизненной морфологической диагностик! клпцтюго э.даралнга у человека в инкубационгом периоце и начале ргзгара болезни и-леоообразно ¡.сследование пункгатов i* биптгатов лчмсЧ узлов комплексом id иммучолюми::егценцга. и МГТИС Li situ.

3. Использование для л яения клещевого энцефалита nperu'.p£.ra специфического иммуноглобулина в различных формах требует серологического и клинического контроля за больными в связи с возможностью дпгтелыгаь -зерсисгенцчи инр'ла в организме переболевшего Необходнмосг- контроля обусловлена возможностью развитая клиническн манифесшого заболевания у тече::: ых иммуьоглоублинами, особенно при применени имлгунод.-прессанг®.

4. Применение синтетических агггиытрусных средш, интенсивно разрабатываемых в чоелвдвие годы, слео;^г считал наиболее перспективным методом лучения клещев( -го эн' '.ефалита.

Gr-леок1 работ, спубликовазпя-гс по теме лксс.тшвш

I. СуСоопгина Л.С., Белявская НА, Мапстина Л.В., Конев В.П., Косгерина J1Д Новшокин О.З. О возможности фор^шровани.; лерсистепзии ьируса клацевош энцефалита в услсь«лх лечебного rtpr../апшя серспр^паратш // Вирусные энцефалиты (этиология, эт д'-миолопл, юпника, патогенез, диагностика).Свердлгаск.-19S5.- С. 147-153.

2 Субботина JT.C, Бе^то-т НА, Мапохина Л.В., Конев В.ГТ, Костерила Л Д Алпатова Т.М., Коволокин О.В. О формировании nqOTcrenmot вируса клещечого энцефалпа в условия?. пассивной имм,ниэацпи // Магф. межинсг. пауч.конф., посвяш. 80-леп..о Томского НИИВС.- Итд-во ТГУ.- Томск,-198^.- С. 6(М>2

3. Субботина Л.С., Белявская НА. Колев Е.П., Косгерина ЛД Копылова Л.М. О формировании персис^атщп вируса клещевого злцефаклв в условиях пассивной иммуниза-щи // Актуалыг.п вопрсхы этиологии, патогенеза, диагностики, эпидемиологии и профшгакгаки вирусных инфекций. Одеоский НИИ чируоол. и эпвдемиал. им. И.М.Мечникорт,- Одесса. -1986,- С 81-83.

4. Конез В.П., Белявская НА, КвегкоздЭА, Кс^герига ЛД Морфог.лшческие аспекты хрошвации инфекционного процесса при клещевом энцефалите II Природа ичяговыеболезни «гло^еха.- Сыск,- ¡986,- С. 86-90.

5. Рычков А.А., Квегкота Э.А., Шьмапин В.А., Конев В.П., Косттргат ЛД, Пиценко НД, Полищук Т.И. Применение метода молекулярной гибридизации

для чссгэдминия локализации повреждений мозга при кшцеьом снцефэдит.: // Пр .под! 'оочатг ые бш.гл'я человека.- Омск -1987.- С. 40-44.

6. Конев В П., Квепсова Э.А., Косприча ЛД, Рычков A.A., Пплшцук 1.И., Пацеико И.Д. Глиальные pcariuiw в мерфо^езе хронического ютздевого энцефа «па // Прнродно-очгторые болсадч человект.- 0\.ск.-1988,- С. 76-79.

7. Конл В.П., Koc.cpfiia .ИД, Квгаоьа Э.А, F.wkob A.A., Погашу Т.И. Иммунодефицигы в к-орфогатае пейров'фусных инфекций // VIII Всес. Ci/тдл катологшпа.омоч. Гез.д(жп. г. Тбилиси,17-20 октября 1989 г.-М., 1989,-С. 208-2^.

8. Конев В.П. Косгерича ЛД, Рычков A.A., Шаманин В.А., Бепяжзсая H.A., iкишг^ук Т.И. Регенераторные процессы в мозге после осгрой нейровируснон ипфек-цш: цуги разв!лин, пдголенетическаь эцепка // Сгрукзурное обеспечение и Ст11^улшиыкокшча1сэторп('-воссга>юп1псз1ьнь!хреак1д.1й.-0мж.-1989,- С 47-50.

9. р.'чков A.A., 3:шош,~а A.C., Квсткова Э.А., Конев В.П., Костерина ЛД Репикр;иу1я лглн^адиы. органов при хроническом чнцефалше // Там же,- С. 5153.

10 Коне» В.П., Kbcikobí. Э.А., Костерина Л Д., Полшцук TIL Морфогенез осфых и хронччегких (}юр\1 клещевою энцефалита II Актуальные вопросы меди 1! 1С.,ой пирусолопи!.- Свердловск. М9,- С. 173-177.

J1. бычков А.Л., Зиноныч A.C., Квсп'ова Э.А., Плетнев A.I ., Конев В.П., Полишук Т.И. Геоморфология лимфатич-ских узлов у человека г.ри остром Кпещевочэнцеф!ы1п^//Пр11родаоч>чаговыебслстни человека,- Омск.- ¡989.-С. 79-S3.

12 Рычкгм /..А., Кона- В.Г1, Киеткова Э.А., Шаманит В.А. Лимфоцдные орпыы при остром а хроническом клещевом энцефилте: выявление вирусюй ÍPHK мср^ю-функцчоналонач оценка // Вопросы эпцде.чшло1 ии, иммунологии и диапк^тки в" ipyo :ых »поющий,- Свфцювск,-1990,- С. 42-46.

13. Полшцук Т.И., 3iu.oui.Q3 A.C., Конев В.П Выявление РНК В1фуса клещеасго эчнефш.итг. в а.судпсп ix образования". ? нага в остром ntpi юде бспемш Н boi .росы ■»гащемиологш!, и.»1муиологии ч /„пгьо'дтшн вирус!ли инфекций.- Свфдисвех-1990.- С. 46-50.

14. Конев ЗЛ. Кветгат Э.А., Пкии'цук Т.Н., Райков A.A., Пиценко ИД . Изучение ыэрфоюкла клацеьош энцефальта методом гибридизации

nyaiaiMOBbji .cciGv// Cixp. проблемы згтвдемиол., дчагчостжи и профшштЕси кжироопо энцефаагп. Tot. докл. bete, симпс. шума, i .Иркутск, 18-21 сенггчЗрл 1990 г.11ркуак.-1990,- С 114-115.

15. Рычкоц A.A., Хонев В.Г1., Полипук Т.Н., Тулакии Л.Г. Эитологнчеасая длапюсинса к. ¡eint ,'oi о анцсфашгга II Актуальные вопросы патологической

анатомии заболеваний населения Урала и Запал юй Сибири. Ты. докл. ' ме»фегиои.конф.па1ШОгоанагтомов.-Тюмень,- 1S91.-C 28-29.

16. Конев В.П., Рынков A.A., Полишук Т.И. Патологит сосудистых сплетений при остром клеигаю:« энцефглиге // Морфология оосутистой системы в норме, и патологии.- Томск.-1990,- С. 37-?8.

17. Полишук Т.Н., Шаманин В.А., Р^гасэв A.A., Конев СЛ. Ззшыооязи мг.рфолоппзезк. »смекасй в мозге л ли^фоидных органах при клодеаом энцефалите//Здоровье человека п Ойпри. Тез. 5-й научно-пракг. ксиф. "Молсдые ученые - практическому здравоохранению", 29 октгбря - 2 ноябрь 1990 г.Красноярск.- 1990.- С. 104-105.

18. Конев В.П., РЫчкос A.A., Полишук Т.Н., ¡С?тгкова ЭА Kpinwi.n патологе ai штомической диагностики клещевого этгц^фалта // Hpi фодиоочагозые болезни 'гелопека.- Омтк,- 1У9С.- С. 54-57.

19. Зиновьев АС., Рычков А.А, Кокез В.Г1, Kocrepjnn ЛД, Рохишук Т.И. Методы индикации вируса и оценка морфогечеза клене, юго энцефалита // Аюуальные вопросы патологической анатомии,- Харьков,-1990,- С 111-114.

20. Шиапсо В.Г., Конев В.П., Еретея С.И., Kccrepni.a ЛД Морфологически.; и иммунологичессиесотостгвгегпм при эпилепсии // Журл. невропатол. и паоаитр-1S91.-T. 91.-N ?.-С. 4/51.

21. Шматко Е.Г., КочезВ.П., КвегковаЗА, Мала"о:х"ая Л.Н., НишоваЛ.И. X вопросу о дсмиелчшгхшли в сстроч стадии клещегого энцефалита // Матер. Плазма правления Российского Общества невропазолзгов, сенг. 1902- г,-"Лр^тос.-1992.-С. 255-261.

22. Консз В.П., Квепсова ЭА, Полишук Т.Н., Тулакина Л.Г., Рычков АА Корреляционные егшшения повреждений мозга и лимфоидных opt «шв при остром клещевом энцефалите // 'Триродноочаговыг болезни человека- Омтс.-1991.-С 74-78. •

23. Ерман БА, Полгацук Т.И., Тулагзгна Л.Г., Конев З.П. Патология ЦНС р инкубационном периоде клодеголо энцефалита по денным эла.тро;:ной микроскопии и метода гчСридиицич нуклеиновых кислсг // TCW конф. по элешронной м:1крсскопчи (биология, мето^ч), г Черноголовка, июнь 1°92 г, Тез. докл.-М., 1992-С.

24.

24. КЕепсова ЭА, Пьценко НД, Kohtj В.П.. Рычля АА, Подгтцук Т.Н., Шаманин ЬА„ Плетнев АГ., Пуховасч Л.Г. Гг5р."уааою нуклеиновых кислот 1сак метод быстрой дитгнолики :слещевого энцефплтэ // Ичф0],мг.ц::0Н!10 методическое письмо Госкштегапо егтогсщнапзору. - Омск,- !9Г>2- 27с.

25.1Сонев В.П., Туллкина Л.Г., Полицук Т.И., Кветкова ЭА, Лукьяненко Д.Ф., Рынков АА Морфогенез инкубационного периода клещевого энцефалита: роль сосудов микрогаг..суля1грнош русла мозга, выделение вирусной РНК II Эпидемиология, клиника и профилактика вирусных инфекций.- Есатеринбург,-19S2.C. 151-157. •

26. Конев В.П., Квеп:ова Э.А., Рынков АА Клепси-мишени даявируса клещевого энцефалита в лимфовдиых органах // Матер, юбилейн. науч. конф., посртщ. 70-легию Саист-Пегероурпгсго КИИ им. Л.Пастера.- Санкт-Петербург.-1993.-С. 81.

77. Конев В.П., Полшцук Т.И., Бычков АА Проблемы мор<Ьологической диагностики клещевого энцефашпа II Вопр. диагностики, профилактики и реабилитации в работе врача-клинициста.Омск.-1993.- С. 75-77.

28. Конев В.П. Расселение вируса клещевого энцефалита в организме и od значение в диагностике заболевания // Актуальные вопросы патологической анатомии. Матер. И межрегион, науч.-пракг. конф. патологоанатомов Урала и Запддаой Сибири.Курган,-1993.-С. 18-19.

29. Конев В.П., Полшцук Т.И., Рычков A.A. Крчтерии диф<1)еренциальной диагностики острого к хронического клещевого энцефалита // Актуальные вопросы пятоло! пческой анатомии. Мггер. II межрегион, науч.-пракг. конф. геиологоашпомов Урала и Западной 01бири,- Курган,-1993,- С. 19-21.

30. Конев В.П, Воспалительные реакции в мозге при клещевом энцефалите: циготоксическое действие вируса. вгор!глтый иммунодефицит II Иммунопрсфшакгика, и шунодиагностика, иммунокоррекция,- Омск. - 19*4,- С. >5.

31. Конев В.П., Почищу: Т.И., Рычк г. A.A. Пути проникновения в мозг вируса клещевого энцефалита и' патология желудочковой системы II Структурно-функциональные механчзмы патологических и компечеаторно-воссганов1гтельныхреацтш.-Омск.- 1994.С. 32-34.

.32 Конев В.П. Межорганные взаимоотношения в морфогенезе острога клещевого энцефалита II Актуальные вопросы медицинской вирусологии.-Екаг,ериибург.-1994.-С. 123-127.

33. Тулаи:на Л.Г., Конев В.П., Полшцук Т.И., Рычков A.A., Пересшкова С.Н., Ермам Б.А. Ультраструаурная патология лимфатических узлос при клещевом энч,офалиге//Там же,- С 132-135.

34. Конев В.П., Полшцук Т.И., Рычков АА., Киепсова ЭА Патоморфология желудочковой системы мозга при остром клещевом энцефагапе II Там же,- С. 141145.