Автореферат и диссертация по медицине (14.00.34) на тему:Экспериментальное обоснование применения электромагнитного излучения миллиметрового диапазона с целью коррекции иммунитета при гиперпластических процессах эндометрия

!ЛНІСТ2?СТ20 0л0?0£і ЗДОРОВ'Я УКРАЇНІ УКРАЇНСЬНКЯ Е^КОБО-ДОСЛІдЩИ ІНСТИТУТ МЕДХЧНОІ Р2А5ІТАД11 ТА КУРОРТОЛОГ 11

‘ . і

. ...,ч іЖ:£18.14.-006.3.35.6:5.-343. ] 1 Г:0.і •• із правах рукопису

ЬУНІСБ ЬЗЛОДОІ? З'ЯЧЕСЛАЗОЗИЧ

ЕНСПЕгРПгїїНТАЛЬНЕ ОБГРУНТУВАННЯ ЗАСТОСУВАННЯ ЕЛЕКТРОМАГНІТНОГО ЕШІРОМІЕСЗАКНЯ МІЛІМЕТРОВОГО ДІАПАЗОНУ З МЕТОЮ КОРЕКЦІЇ ЇМУШТЕ ПРИ ГІІЕРШЇАСЇИЧНЙХ ПРОЦЕСАХ ЕВДІОМЕТРІЯ

14.00.34 - курортологія і фізіотерапія

/

. {

АВТОРЕФЕРАТ дисертації на здобуття наукового ступеня кандидата медичних наук

Одеса - 1996

Дисертацією є рукопис. .

Робота виконала и Одеському державному медичному університеті.

і

Науковий керівник: - доктор медичних наук, професор Валерій іисетлайошіч Загаршлн.

Офіцийиі опоненти: - доктор медичних наук, професор, ааслукв-' ний робітник народні освіти України

Ксад Ездкі Еалодігйграяігч

кандидат медичних наук, .

Падлоіга Олаїа Солоніша

Провідна установа: Київский деркавний Інститут удосконалення лікарів. '

Захист дисертації відбудеться —"—!-----------1996р.

_______ годині на засіданні Спеціалізованої Вченої ради '

Д.05.07.01. при Украінскому науково-дослідному інституті медичної реабшштації та курортології (270014, м.Одеса, Лермон-товскиЯ прв., 6). • .

Автореферат розіслан "__________"_________________ 1996 року

Вчений секретар СпеціалІаованної ради

д.и.н. К.Д. Еабол

- - 3 - •

. ЗАГАЛЬНА ХАРАКТЕРИСТИКА РОБОТИ

Актуальність проблеми. Проблема лікування гіперпластичних процесів ендометрія. представляв великий інтерес з наукової, так і практичної точки зору. Це обумовлено підвищенням захворюваності, появою нових лікарських засобів, а також одержанням нових даних про стан нейро-ендокринної та імунної систем при доброякісних захворюваннях матки (Л.Н.Васил'єва, 1982; К.М.Вих-лясва і співавт., 1989; Е.В.Коханевич, 1990). •

Зниження імунологічної реактивності при доброякісних процесах ендометрія, яке відмічалось багатьма авторами (О.В.Хаіт, 1989; В.М.Запорожан, 1987) може бути одним із сприяючих факторів розвитку хронічних 'запальних захворювань репродуктивної системи і злоякісних новоутворень (Ю.П.Вдовиченко, 1988; К.П.Тумасян, 1990).

Вибір методу лікування гіперпластичних процесів ендометрія залежить від стану гормональної системи, рецепторного апарату, віку хворих, типу доброякісної патології матки, присутності супутніх захворювань. Лікування цієї патології повинно бути етапним, з впливом на всі ланки патогенезу захворювання.' Так, на першому етапі можливо вживання гармонадьних препаратів і (або) інших консервативних методів лікування, на’' другому -кріохірургічне, а при неефективності останніх - консервативне лікування. . ,

_ Корекцію -імунних порушень при гіперпластичні«. процесах матки проводять за допомогою специфічних препаратів: гармонів

тімусу,' міслопіду (С.Д.Зудікова, 1988; В.М.Запорожан, 1990); інтерлейкінів і неспецифічних імуномодуляторів, похідних іміда-золу, пурину і пірімідіну, інших препаратів. .

Імуномодулюючий ефект, виявлений також у електромагнітних хвиль (випромінювання) надвисокої частоти (ЕМВ НВЧ) міліметрового діапазону. Лімфоцити, які опромінювали ЕМВ НВЧ в культурі' тканин, виділяли фактор, що стимулював проліферацію лімфоцитів. Під впливом ЕМВ НВЧ спостерігали підвищення р^ня Т-лімфоцитів і Т-хелперів,. нормалізацію кількості циркулюючих імунних комплексів (ЦІЮ (Т'.В.Головачова, 1989; В.М.Запорожан, • 1990). Застосування ЕМВ НВЧ при гіперпластичних процесах матки і яєчників проводилось в поодиноких роботах (М.Я.Чубей, 1992; О.П.Гадючен-1995), в яких автори відмічали імкномодудюючий вплив ЕМВ 1ВЧ та його ефективність.

Але до цього часу ще не вироблені критерії прогнозування дії міліметрових (мм) хвиль на імунні процеси при гіперпластич-них захворюваннях ендометрія з хронічною гіперестрогенемією, не з'ясовані взаємовідносини між ендокринною 1 Імунною системами, відсутні рекомендації щодо використання ЕМВ НВЧ при гіперплас-тичних процесах ендометрія. •

Мета роботи - з'ясувати деякі механізми дії ЕМВ НВЧ мм діапазону на Імунну систему 1 можливості корекції її порушень при гіперпластичних процесах ендометрія.

Основні завдання дослідження:,.

1. Вивчити дію ЕМВ НВЧ мм діапазону на імунну систему при експериментальній гіперплазії ендометрія в залежності від довжини хвилі, потужності 1 часу опромінення.'

2. Визначити вплив ЕМВ НВЧ на вміст Т-л1мфоцитів з рецепторами до Fan - 1 Fee - Фрагментів Імуноглобулінів. що виділені під впливом на них ЕМВ НВЧ в умовах "In vitro".

. 3. З'ясувати вплив ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм на

вміст гармонів, що регулюють репродуктивну функцію.

4. Вивчити вплив ЕМВ НВЧ мм діапазону з довжиною хвилі

6-7.1 мм на стан імунної систему у хворих з гіперпластичними процесами ендометрія. ' . ’

5. Виявити вйаємодію ЕМВ НВЧ мм діапазону з довжиною.хвилі

7,1 мм на стан Імунної системи у хворих з гіперпластичними процесами ендоменрія.

6. Визначити критерії прогнозування дії ЕМВ НВЧ на

Імунітет. • • .

Наукова новизна роботи. В експериментальних дослідженнях, на моделі експериментальної гіперплазії ендометрія 1 дослідженнях "in vitro" на ізольованих лімфоцитах встановлений імуномо-дулюючий ефект ЕМВ НВЧ, доведена його залежність від довжини хвилі і часу опромінення. Оптимальний імуномодулюючий ефект спостерігається при довжині хвилі 7,1 мм 1 тривалості впливу 40 хвилин при знижених вихідних показниках імунітету. Інгібітор білкового синтезу циклогексамід 1 інгібітор аеробного дихання азід натрію відміняли активуючий ефект міліметрових хвиль на експресію рецепторів лімфоцитів. Показана можливість корекції Імунітету за допомогою ЕМВ НВЧ у хворих з гіперплазією ендометрія. Виявлено нормалізацію показників клітинного 1 гуморального імунітету, пов’язану з нормалізацією вмісту гормонів та їх

співвідношення в I III фази менструального циклу. Доведена можливість використання показника гальмування міграції лейкоцитів для прогнозування ДІЇ ЕМВ НВЧ на Імунну систему.

Практична значимість роботи. Показана можливість застосування B.S НВЧ з метою корекції набутого Імунодефіциту у хворих з гіперпластичними процесами ендометрія. Експериментально доведена найбільша ефективність застосування ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм. З метою прогнозування ефективності дії ЕМВ НВЧ запропонований метод визначення ефекту дії ЕМВ НВЧ на лімфоцити в тесті реакції гальмування міграції лейкоцитів.

Основні положення дисертації, які виносяться на захист.

1. Вживання електромагнітного випромінювання мм діапазону

нетеплосої інтенсивності з довжиною хвилі 7,1 мм приводить до корекції імунних порушень у експерементальних тварин, а також в умовах "In vitro". '

2. Ефективність ЕМЗ НВЧ-терапІЇ залежить від вихідного стану імунної системи, ендокринної системи, довжини хвилі 1 кількості проведених сеансів (тривалості терапії). Найбільш ефективним при знижених вихідних показниках імунітету у хворих з гіперпластичними процесами ендометрія с вплив ЕМВ з довжиною ХВИЛІ 7.1 ММ. •

3. Реакція гальмування міградії. лейкоцитів може служити

прогностичним тестом ефективності 'вживання В® НВЧ при гіперплазії ендометрія. . ' , .. '

Апробація роботи. Основні положення дисертації викладені на міжнародному симпозіумі "Міліметрові хвилі нетеплової інтенсивності в медицині" (Москва, 1901), науковій конференції "Міліметрові хвилі в біології 1 медицині", X науковій конференції "Фактори клітинного і гуморального імунітету при різних фізіологічних 1 патологічних станах" (1993, 1989), обласному

товаристві акушерів-генекологів (Одеса, 1092-1995).

Впровадження в практику. Метод прогнозування дії ЕМВ НВЧ впроваджений в жіночій Консультації Мої м. Одеси, Міжнародному науково-медичному центрі здоров'я сім’ї (м.Одеса), учбовий процес ісафедри акунерства 1 генекології факультету удосконалення лікарів Одеського державного медичного університету МОЗ України.

Публікації- За темою дисертації опубліковано 5 наукових іраць.

Структура 1 обсяг дисертації. Дисертаційна робота скла-

дасться Із вступу, п’яти розділів, висновків, практичних рекомендацій, списку літератури Із 120 українських 1 російських, 1 90 іноземних джерел.

Робота виконана на 130 сторінках, Ілюстрована 10 малюнками 1 10 таблицями. .

Робота виконана на базі кафедри акушерства і гінекології ФУЛ Одеського державного медичного університету'(зав. кафедрою

- д.м.н., професор, академік АН КТ України В.М.Запорожан), лабораторно-діагностичного відділу Міжнародного науково-медичного центру здоров’я сім’ї (генеральний директор - к.м.н. В.В.Беспо-ясна). ‘ .

Декларація. Всі експериментальні роботи, які проводились на тваринах 1 клітинах крові людей, включаючи імунологічні, біохімічні і ендокринологічні дослідження, проводились автором.

' ЗМІСТ РОБОТИ,

. МАТЕРІАЛИ І МЕТОДИ ДОСЛІДЖЕННЯ •

Експериментальні дослідження проводились на 100 сг-місах морських свинок вагою 200-300 г.. Тварини утримовалпсь ізольовано від самців у звичайних умовах на однаковій дісті. Тварини були розподілені на чотири групи. Перша'група (контрольна) підлягала будь-яким впливам. Тваринам другої, третьої і четвертої груп вводили масляний розчин сінестролу (1 мг/ткддень) протягом 14 тижнів з метою отримання експериментальної моделі гіперплазії ендометрія, Друга група тварин ке отримувала лікування, морські свинки третьої групи підлягати впливу ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 5,6 мм, а тварини четвертої групи опромінювались електромагнітними хвилями з довжиною 7,1 мм. Вплив ВІВ НВЧ здійснювали щоденно, протягом 10 днів ' по 1 годині на праве стегно тварини.

В якості джерела електромагнітного випромінювання використовували прилади “Явь", що генерують хвилі з довжиною 5.6 мм 1

7.1 мм. Після введення сінестролу по 2 морські свинки з кожної групи використовували для одержання гістологічних препаратів ендометрія, з метою контроля за розвитком у тварин гілерплас-тичних' змін матки. '

Для проведення імунологічних досліджень у морських свинок забирали 5 мл крові із серця до початку опромінення, після 7 і 10 сеансів виливу. Одержані лімфоцити відмиг.:іли і иікорнсто-

вували для визначення показників Т- 1 В-систем імунітету. Визначали також стан фагоцитарної системи, вміст Імунних комплексів, концентрацію імуноглобулинів за Манчині. Після закінчення дослідження тварин забивали під ефірним наркозом, витягали 1 досліджували матку, печінку, селезінку.

Під наш™ спостереженням перебували 84 хворі з гіперплас-тичними процесами ендометрія. У всіх хворих вивчали скарги, анамнез захворювання, стан сексуальної, генеративної 1 менструальної функції, проводили традиційні клініко-лабораторні дослідження, вивчали стан ендокринної та імунної системи.

Всі хворі підлягали спеціальному дослідженню: їм проводили гістероскопію, ультрасонографію. У всіх хворих визначали вміст гармонів в крові 1 стан Імунної системи. З метою уточнення діагнозу хворим проводили гістологічне дослідження ендометрія.

• Визначали вміст в крові наступних гармонів: фолікулостиму-люючого гармону ($СГ), лютеїнізуючого гармону (ЛГ). прогестерону, естрадіолу, пролактіну 1 кортикостерону. Для визначення вмісту гармонів кров забирали в зазначені терміни на ЕДТА, зібрану плазму відбирали і заморожували при - 60°С. Гармони визначали методом, флуоресценції- за допомогою прилада "DELEІА" фірми "LKB PHARMACIA", з використанням стандартних наборів.' Результати досліджень обробляли за допомогою програм "FIACALC".

Для характеристики стану Імунної системи використовували тести, що відображують стан Т- 1 В-системи лімфоцитів, і'фагоцитарної системи. Визначали , загальну кількість Т-лімфоцитів (Тзаг), їх активну фракцію (Так), Т-л1мфоцити з рецепторами до Імуноглобуліну М (^-лімфоцити, переважно Т-хелпери) 1 Імуногло-буліну G- (Тг-лімфоцити, переважно Т-супресори), функціональну активність лімфоцитів в тесті гальмування міграції лейкоцитів (РГМЛ) периферичної крові, загальну кількість В-лІмФоцитів (Взаг), їх активну частину - Вм-лімфоцити (Вм). Визначали також нітросиній тетразолісвий тест (НСТ-тест), формулу крові.

Після виділення чистої популяції лімфоцитів їх умі піали в 06-ямочну мікропанель з плоским дном і проводили опромінення ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 5,6 1 7,1 мм. Відстань від рупору прилада до панелі дорівнювала 1 см. потужність потоку 10 мКт/см2. Тривалість впливу коливалась в залежності від умоп експерименту. Після опромінення лімфоцити змішували з аутолгйкошітами у співвідношенні 1:1 1 проводили звичайну реакцію РГМЛ з фітога-

. - 8 -

маглютинином (ФГА) 1 без нього для порівнення ефекту дії ЕМЗ НВЧ. .

Визначення функціональної активності лімфоцитів в цитофлю-орометричному тесті проводили за методом Е.В.Бененсона і співавт. (1991).

. Для підрахування результатів дослідження використовували методи варіаційної статистики. В кожній групі для оцінки достовірності різниці використовували методи параметричної і непа-раметричної статистики, в тому числі критерії Ст’юдента,' Фіше-ра. Колмогорова-Смірновд, Фрідмана, . Вілкоксона та інші. Для з'ясування взаємозв’язків між змінами різних параметрів і напрямку цього взаємовпливу використовували метоДи кореляційного.1 регресійного аналізу. З метою з’ясування ролі окремих факторів в змінах рівня показників імунітету, зокрема Т-лімфоцитів, використовували факторний аналіз. .

' Статистичну обробку результатів проводили за допомогою програми CSS/Complete statistical system with grafics and data management/, versla В 640; Inc. 1988. .

" РЕЗУЛЬТАТИ ДОСЛІДЖЕНЬ ТА ЇХ ОБГОВОРЕННЯ '

Експериментальне обгрунтування можливості застосування Е>.3 НВЧ нетеплової Інтенсивності з метою корекції Імунної системи проводили на моделі Індукованої гіперплазії ендометрія, одержа-' ної на морських свинках. - .

Вивчення вихідного стану імунітету при індукованій у морських свинок гіперплазії ендометрія показало, що під впливом ЕМВ НВЧ у порівнянні з контрольною групою відмічатись вірогідні зміни показників, що характеризують стан Т-- і В-системи Імунітету. Так при визначенні деяких показників клітинного імунітету в цій групі тварин було відмічено зменшення відносного вмісту загальної популяції Т-клітин (Тзаг) з £3,по,9% до 16,8*1.5% у порівнянні з контрольною групою, а також зниження абсолютних значень рівня Тзаг. Виявлено також вірогідне зниження Так-фракції лімфоцитів у порівнянні з контролем з 18,2±0,9% до 13,7*1,1%. в той час як абсолютне їх значення зменшилось відповідно з 1,98±0,18 Г/л до 1,41+0,16 Г/л.

В другій групі тварин зменшився також рівень Т-лімфоциті в, що утворюють розетки із стафілококом t'T-st •ліі.м.'житіи) до

15,4+1,87. проти 23,1+1,IX в контролі.

Виявлено вірогідне підвищення лімфоцитів, що несуть рецептори до Гст-фрагменту антитіл з 9,8±0,847. до 15,7+1,687., що, можливо, є відповіддю на зниження кількбсті циркулюючих Т-лІмфоцитІв. Відмічалось також підвищення відносних 1 абсолютних значень ауторозеткоутворвючих (А-РУК) лимфоцитїв до 4,9±0.5

7. в другій групі проти 8,7±0,9Х в контролі 1 0.5±0.06Г/л 1 0.87+0.14 Г/л відповідно. Вірогідно збільшився відсоток сегмен-тоядерних лейкоцитів з 14,0±1,47Я до 22,2 ±2,77. поряд з вірогід-шм зменшенням кількості лімфоцитів з 78,4±1,8Х до 71,3±1,27..

З боку гуморального Імунітету спостерігалось вірогідне зростання кількості В-л1мфоцит1в,' що утворюють розетки з еритроцитами миши (Вм), при цьому у вихідній (другій) групі їх вміст дорівнював 7,1±0,64Х, в контрольній - 11,1±1,2Х. Виявлено також зниження циркулюючого пула лімфоцитів 1 збільшення вмісту нейтрофільних лейкоцитів.

Таким чином, у морських свинок з Індукованою гіперплазією ендометрія відмічалось пригнічення клітинного І активізація'гуморального Імунітету, що відображувалось зміною відносних і абсолютних показників І- 1 В-лімфоцитів. . ■

Опромінення морських свинок з Індукованою гіперплазією ен-цометрія ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 5,6 1 7,1 мм, потужністю опромінення 10 мВт/см2 1 тривалістю 5-7 днів вірогідних змін в показниках клітинного 1 гуморального імунітету не викликало.

Збільшення тривалості'НВЧ-терапII до 10 днів при довжині свилі '7,1 мм 1 потужності 10 мВт/см2 супроводжувалось, у юрівнянні з контрольною групою, збільшенням абсолютних значень 'гаг 1 Так-лімфоцитїв, вірогідним збільшенням відносних показ-іиків вмісту Тзаг з 17.,0±0,ЗХ до 23,1+0,677. (Р<0,05),

'ак-лімфоцитів з 18,0±3,6Х до ’ 29,3±2,76£. Вірогідно у юрівнянні з другою групою підвищився відсоток А-РУК-лІмфоцитІв' 1 9,5+2,5Х до 20,8±4,57.,. а також зменлмлись відносні 1 абсо-ютні значення В-лімфоцитів, що утворюють розетки з еритроцита-и миши (19,3+3,9Х 1 37,2+4,71; Р<0,05). Нормалізувались

Ідносні 1 абсолютні значення ^-лімфоцитів. Зменшилась відносна Ількість нейтрофільних лейкоцитів 1 збільшився у порівнянні з ихідною групою вміст лімфоцитів (60,0±2,37. 1 75,8+8,057.).

Прй опроміненні ЕЫВ НВЧ з довжиною хвилі 5,6 мм 1 три-алістю впливу 10 днів змін в показниках клітинного 1 гумораль-

■ • - 10 -

ного Імунітету у порівнянні з вихідною групою практично не спостерігалось, зниження Взаг і Вм не було вірогідним.■ У порівнянні з .контрольною групою виявлено зниження відносних значень Так-фракції лімфоцитів з 13,5*0,71% до 9.5*1.2%.

' Таким чином, в експерименті з Індукованою гіперплазією єн- • дометрія у морських свинок виявлено імуномодулюючу дію ЕМВ НВЧ мм діапазону, найбільш виражену при довжині хвилі 7,1 мм, потужності 10 мВт/см2 1 тривалості впливу 40 хвилин.

Вивчення дії мм хвиль на експресію F cm,Fcg - рецепторів (Т; 1 Т^-лімфоцити відповідно), а також рецепторів до еритроцитів барана в умовах "in vitro” проводили на лімфоцитах, виділених від жінок з гІПерпластичними процесами ендометрія, при цьому змінювали час опромінення, потужність 1 довжину хвилі.

Дослідження впливу ЕМВ НВЧ йа лімфоцити в. Fcm- і Fcg- рецепторами проводили у 84 жінок. З цісї кількості у 40 пацієнток відмічено зниження вмісту Т-дімфоіштів 1 у 9 жінок - ‘Т-лімфо-цитів. . ' . ■ '

Показано, що при нормальних вихідних даних 1 Т-лімфо-цитів вплив на них ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7.1'і 5,6 мм з рівною потужністю 1 тривалістю впливу не приводило до вірогідних змін рівня цих лімфоцитів. При зниженому вихідному рівні ^-'лімфоцитів спостерігалась тенденція до збільшення кількості лімфоцитів, що несуть рецептори до Fcm-фрагментів імуног-лобулінів при впливі ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм, найбільш виражене при потужності опромінення 10 мВт/см2 1 тривалості впливу 40 хвилин (18,2*1,2% і 27,0*9,5%; Р+0,09). Вплив ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 5,6 мм на лімфоцити'"in vitro" супроводжувався рівноспрямованою реакцією 1 невірогідними змінами рівдя ■^лімфоцитів, . . *

Зміна умов постановки експерименту, що полягала у введенні предінкубації (18 годин, при 37°С) внаслідок впливу ЕМВ НВЧ з довжиною'хвилі 7,1 мм, потужністю 5 мВт/смг і тривалістю впливу 40 хвилин, супроводжувалось вірогідним зростанням кількості ■^лімфоцитів . з 21,0*0.4% до 25.0*0,07% (Р*0,01). Виявлений

ефект дії мм хвиль мав місце лише при зниженому вихідному рівні лімфоцитів з Fcni-рецепторами 1 застосування ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1. мм. При зменшенні часу впливу на лімфоцити до 5-10-20 хвилин ефект дії ЕМВ НВЧ,значно зменшувався.'

. ' Додавання азіду натрію в 0,1% концентрації до середовища

. - 11 -Інкубації лімфоцитів після їх опромінення ЕМВ НВЧ з до&хиною хвилі 761 мм. тривалістю впливу 40 хвилин.1 потужністю електромагнітного випромінювання 10 мВт/см2 відміняло ефект стимуляції експресії Fcm-рецепторів на лімфоцитах. Адід натрію є Інгібітором аеробного гліколізу 1 в даній-концентруй ї використовується для інгібіції "кепінг-ефекту" при активації лімфоцитів мітоге-нами (А.Пол. 1087). .

Подобну дію чинив також Інгібітор синтезу білка актидіон (циклогексамід), котрий в концентрації 100 мкг/мл також сприяв гальмуванню активуючого впливу електромагнітних хвиль мм діапазону на експресію рецепторі в на Т-лімфоцитах. Актидіон додавали в інкубаційне середовище одразу після опромінення лімфоцитів ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм 1 потужністю опромінення 10 мВт/см2. Актидіон є інгібітором синтезу білка на 80s рібосо-мах; одним з можливих шляхів його антагоністичної дії може бути блокування синтезу поліпептидних ланцюгів Fc^-рецепторів на рібосомах. Лані літератури свідчать про те, що актидіон гальмує проліферацію лімфоцитів, котра викликається мітогенами ФГА або Кон А (А.Сильвестрайн, 1988). Останній викликає блокування синтезу- ДНК 1 м-РНК за рахунок гальмування синтезу фізіологічно важливих білків, котрі є необхідними на ранніх етапах синтезу нуклеїнових кислот. Блокування, синтезу РНК актидіоном також може бути одним із шляхів, що відміняють дію ЕМБ НВЧ на лімфоцити. • . ’

Вплив електромагнітних хвиль' мм діапазону з довжиною хвилі

7,1 і 5,6 мм на експресію Fgc-рецепторів' лімфоцитів при дії "in vitro" був незначним 1 невірогідним, що, можливо, пов'язано з нормальними вихідними занченнями ТрЛІмфоцитів.

' ЕМВ НВЧ мм діапазону чинило стимулюючий ефект також на лімфоцити, що несуть рецептори до еретроцитів барана (Тзаг). Цей ефект проявлявся' лише при знижених вихідних показниках Тзаг-лімфоцитів, довжині хвилі 7,1 мм, .тривалості впливу 30-40 хвилин. В цих умовах значення Тзаг-лімфоцитів вірогідно підвищувались З 44,0±3,6Z ДО 55.4±3,1Х; Р-=0,02. ' - •

Вивчення впливу ЕМЗ НВЧ мм діапазону на функціональну активність лімфоцитів проводили в тесті реакції гальмування міграції лейкоцитів (РГМЛ) 1 при цитофлююориметркчному аналізі (ІГЇ'Д). В експериментах "in vitro" було показано, що вплив на лімфоцити ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм, . потужністю 10.

мВт/см2 і тривалістю 40 хвилин сприяло Збільшенню' РГМЛ у 37 жінок із 38 із зниженими її вихідними показниками (22,0*2.32 проти 53,0*1,22; Р=0,025).

Зменшення часу впливу супроводжувалось зниженням ефективності- дії міліметрових хвиль, і при 10 хвилинах показних РГМЛ дорівнював лише 34,0*6,4% (Р*=0,07). Зниження потужності ЕМВ НВЧ до 5 wBt/cm2 (t«=40xB.) супроводжувалось зменшенням показника РГМЛ у 35 хворих із 38 (Р=0.035). Вплив міліметрових хвиль з довжиною 5,6 на лімфоцити не супроводжувався вірогідними змінами значень РГМЛ. Функціональну активність лімфоцитів вивчали також за допомогою цитофлюориметричного аналізу. В перші години після взяття крові вимірювалі рівень флюорисценції ДНК і РНК ядерного хроматину при активації лімфоцитів мітогенами. В експериментах показано, що в лімфоцитах, ізольованих від здорових жінок, в перші години' після активації лімфоцитів ФГА виникає звільнення ДНК хроматину, що полягає в.посиленні флюоресценції акридинового оранжевого при 530 нм, що співпадає з даними інших авторів (Reggeti, 1986). При цьому індекс активації (ІА) складає 0,81±0,01 умовних одиниць. • . • '

. У хворих на гіперпластичні процеси ендометрія із зниженими показниками клітинного імунітету ІА дорівнював 0.54±0,009, що вірогідно менше, ніж в контролі (ІА=0.8*0.015; р=0,04). Застосування ЕМВ НВЧ з довжиною хвилі 7,1 мм і потужністю 10 мВт/см2 приводило до вірогідного підвищення Індексу активації лімфоцитів до 0,78*0,11 умовних одиниць (Р-0,035). .

Нами було проведено- також дослідження впливу ЕМ{3 НВЧ э довжиною хвилі. 7,1мм 1 потужністю 10 мВт/см2 на імунну і ендокринну систему у хворих з гіперпластичними процесами ендометрія. Вивчення імунологічних і ендокринних показників прово-' дили на 5-7 і- 20-22 дні менструального циклу до і після.опромінення хворих ЕМВ НВЧ. Водночас у цих хворих на^ 20-22 дні менструального циклу до впливу на них ЕМВ НВЧ. прводили опромінення виділених від них лімфоцитів "in vitro" з наступним визначенням функціональної активності лейкоцитів в тесті РГМЛ.

В першу фазу менструального циклу в третій групі хворих, у порівнянні э контролем, відмічалось зниження абсолютних показників клітинного імунітету: Тзаг .(0,56±0,09 Ґ/л, Р*0.02), ■(0,1710.04 Г/л, Р*0,045). А-РУК (0.3*0.01 Г/л, Р-0',03). Вміст Т-лімфоцитів з рецепторами до Fc-фрагментів I^G не відрізнявся

від контрольних значень. Відносні значення показників клітинного імунітету в першу фазу менструального циклу дорівнювали: Тзаг 55.5*0,34%; Т 10,1*0,12%, тобто не виходили за межі норми, хоча були дещо нижчими, ніж в контрольній групі. Відносні значення Т 1 А-РУК-лімфоцитїв були‘нижчими норми 1 вірогідно меншин, ніж в контролі (Р=0,03). Функціональна активність лейкоцитів в тесті РГМЛ в першу фазу менструального циклу не виходи-'ла за межі нормальних значень, але перевищувала таку в контролі (відповідно 85.0*5,8% 1 55,0±5,3%; Р«0,046).

Відмічено також зниження показників' В-клітинного імунітету. Так, абсолютні значення Взаг-лімфоцитів 1 Вм в перщу Фазу менструального циклу були вірогідно нижчими, ніж в контрольній групі .(Р=0,023) 1 нижчими норми. Рівень Імуноглсбулінів С І М

коливався в межах нормальних значень і не відрізнявся, від такого в контрольній групі. Абсолютне значення вмісту лімфоцитів у цих хворих було нижче норми 1 складало 1,03±0,15 Г/л. Поклг<н:!к;і НОТ-тесту були в межах норми.

В другу Фазу менструального, циклу відносні показники

ї-клітинного Імунітету Тзаг (51,513,3%) і у (10.0*0,1%). а також А-РУК -знаходились в межах норми, в той час як рівень ^-Лімфоцитів Суз ЗШЕіЄПИЙ V ПОРІВНЯННІ з контролем і ДОрІВНГ.Р'АИ £2.Ь±1.63Х (Р*0,1). Абсолютні значення Тзах-лімфоцитіг» були л ї-зках нор;;::, але кіїжчимл. нік в контролі, хоча ця різниця не була вірогішзи. Абсолютні значення Т-хелперів оули в межах норми і вірогідно не.відрізнялись від їх кількості в контрольній групі. Слід зазначити, що функціональна активність лейкоцитів в другу фазу менструального циклу була значно кютсп норми і складала 23.8*5,6% проти 53,3*2,4% (Р=0,03).

• 3 беку гуморального імунітету в другу фазу менструального

цяклу було виявлено, г.о абсолютні і відносні значення

Взаг-лімфоцитів (15,8*1,7%, проти 0,28*0,01 Г/л) і Вм-лімфоциті в (15,8*1,7% 1 8.5*0,5%, 0,28*0,01 Г/л 0,15*0,009 Г/л) були в межах норми 1 вірогідно не відрізнялись від таких показників в контрольній групі. Показники КСТ-тесту, концентрація імуног-лзбулинів С і М не відрізнялась від такої в контрольній групі. Деяке зниження рівня імуноглобуліну А було невірогідним.

В другій групі хворих відносні і абсолютні показники

клітинного і гуморального імунітету були в межах норми.

У хрорих контрольної, другої і третьої груп визначили та-

' ' • - 14 - .

кож вміст гормонів в крові в першу і другу фази менструального циклу до і пісоя НВЧ-терапії.' •

' Візначення рівня гармонів показало, що у хворих третьої групи, поряд з нормальним вмістом естрадіолу в крові вії II фази циклу, відмічалось зниження 4 концентрації прогестерону, особливо, в лютеїнову фазу у порівнянні з контрольною групою (8,5*3,5 нмоль/л і 34,0 нмоль/л відповідно). При цьому коефіцієнт співвідношення естрадіола до прогестерону в другу фазу менструального циклу складав 0,07*0,008 1 вірогідно відрізнявся від такого в контролі (0,02510,004, ' Р=0,036) 1 в нормі

(0,018*0,005). . ' •

Ч.Вміст гонодстропних гормонів в першу 1 другу фази циклу в цій групі хворих був у нормальних межах (ФСГ в фолікулярну фазу дорівнював 6,8*0.8 и/Ь, ' в лютеїнову фазу - 2,3*0,5 \І/Ь, ЛГ в фолікулярну фазу - 5,0±0,9 и/Ь, в лютеїнову фазу - 5,3±2,2 и/И. Вміст пролактину у цих хворих в середньому складав 10.1±0,14 нг/л. що дещо нижче норми (12,4*0,7.нг/л).

В другій групі хворих вміст естрадіолу в першу 1 другу фази менструального циклу (0,-47*0,17 нмоль/л і 0,5*0,15 нмоль/л) не відрізнявся від такого в контролі. Вміст прогестерону також коливався в межах нормальних значень 1 складав 2,2*1,7 нмоль/л в фолікулярну фазу і 21,8*6,7 нмоль/л в лютеїнову фазу менструального циклу. Ріеєнь пролактину коливався в межах 12:5±2,3 нг/л. ' . . . " . ’

Після проведення 'НВЧ-терапії у хворих третьої групи . із зниженими показниками Імунітету при довжині хвилі 7,і мм'1 потужності опромінення 10 мВт/см2 відмічалось зростання абсолютних показників'Т- 1 В-клІтинного Імунітету в першу фазу менструального циклу. Вміст Тзаг-лімфоцитів підвищився з 0.56±0,09 до 0,84*0,08 Г/л (Р-0,045): Т^лімфоцитів - з 0,17*0,04 Г/д до

0,33*0,04 Г/л (Р-0.041). Збільшення - рівня Т^лімфоцитів було невірогідним (Р-0,2). Кількість А-РУК збільшилось з 10,0*0,09 Г/л до 23,0*1,6 Г/л, ^лімфоцитів - 8 19,3*1,562 до 24,5*1,52 (Р-0,04). • ' ’

Зростання абсолютних' значень Т- • 1 Тзагілімфоцитів в фолікулярну Фазу циклу у. хворих цієї групи, супроводжувалось від’смниц зворотнім зв’язком Із зниженням рівня прогестерону в і крові (V -0,723, Р-0,018 ДЛЯ Т*лімфоцитІ8 1 І?--0.б07, Р=0,067

для Тзаг-лімфоцитів). Збільшення абсолютних значень субпопу-

ляції ^лімфоцитів у високому ступені корелювало Із зростанням абсолютних значень лімфоцитів (Р=+0,743, Р-0,016) і в ментону

ступені - з зростанням відносних показників Т^лімфоцитів (Р=+0,703, Р=0,023). "

В/З КВЧ ум діапазону сприяло також підвищенню пула циркулюючих В-лімфоцитів. Так. кількість Взаг-лікфоцитів збільшилась з 0:15±0,02 Г/л до-0.26*0,03 Г/л (Р=0 028); Вм-лімфоцитів - з

0,0710,009 Г/л до 0,1310,01 Г/л (Р=0,011). Відмічалась тенденція до підвівання абсолютних значень лімфоцитів з і.ОЗЮ.м до 1,34±0,11 Г/л. Середні значення абсолютної кількості лімфоциті в після КЗЧ-терапії знаходились в мехах норми, хоча у зв'язку із значними коливаннями вихідних показників зміна їх рівня по була вірогідною (Р=0,09). '

Виявлено також вірогідне підвищення функціональної активності лейкоцитів РГ.МЛ з 23,8*5,62 до 65,5*8,22 (Р=0,00я). :>[ *с т£::і;я показників РГї/Л корелювало в підвищенням рііш ЛТФ-.с активності лімфоцитів (£=+0 883, Р=0,004). IIІдр.;::••

функціональної активності лейкоцитів в II фазу циклу кор^л1 •. с<"> З Підвищенням абсолютної. КІЛЬКОСТІ ВМ-ЛІМфіОЦИТІИ (К-- *0,7 00, Р--0,011). Збільшення показників РГМЛ в лютеінову фазу у хворих третьої гру::л проходило • на - Фоні зниження концентрації с-ст-радюлу, причому ці печазникі пов’язані- від’ємним кореляційним зв’язком (К--0,824, Р-0,011)'. Гегресійний аналіз показ >■>

пі”’с?-,::кй взаємозв'язок цих показників (Ь=-0,864, Р<0,1).

обільсення Взаг-- і Ви-лімфоцитів в І Фазу менструального іазслу У високому ступні і корелювало із збільшенням Т, коефіцієнт кореляції скдадаз для Т -Взаг » +0,906, Р*0,С01; для Т

- Вм г=+0,954, Р=-0,001. Відмічений сильний пояитивкий взаємозв’язок між зміною абсолютних значень Т-лІмфсцитів і Тзаг, Взаг 1 Вм-лімфоцитами. Так, коефіцієнт регресії дорівкю-' вав Ь=+0,858, Р<0,01 для Тзаг, Ь=+0,906, Р<0,001 для Взаг;.

Ь=--+0,953, Р<0,001 для Вм-лімфоцитів. Факторний аналіз'проде-

монстрував сильний зв’язок рівня ^лімфоцитів в підвищенні абсолютних значень Вззг і Вм-лімфоцитів. .

Зміна абсолютних значень Взаг 1 Вм-лімфоцитів в фодікуляр-ну фазу менструального циклу знаходиться у від’ємному' зворотному зв'язку із зміною рівня прогестерону в крові, зниження якого нрньодидо до зростання кількості В-лімфоцитів №=-0,795,

Р п-гі;;,;-, Вм і Р----0,7.'-'Г,, Р = 0,007 для Взаг-лімфоциті в).

Відносні' значення Т-л1мфоцитів у хворих третьої групи вірогідно збільшувались після ЕМВ НВЧ з 19,3±1,05 до 24,5±0,95% (Р=0,04). . ' ■ •

З боку ендокринної системи спостерігалось зниження рівня прогестерону в І фазу циклу з 0,41±0,1 нмоль/л до 0,25±0,1 нмоль/л (Р=0,1) на фоні утримання рівня естрадіолу. в ПП. В другу фазу спостерігалось зниження рівня естрадіолу (Р=0.039), в той час, як вірогідних змін рівня прогестерону не відмічалось. Виявлено тенденцію до підвищення рівня гонадотропних гормонів гіпофізу - лютеінізуючого і фолікулостимулсючого в першу фазу циклу,' але ці зміни не були вірогідними. Зростання рівня пролактину в першу фазу циклу (з 10,1±1,2 нг/л до 14,5±1,7 нг/л. Р<0,025), за Фрідманом корелювало із збільшенням кількості Тм-лімфоцитів (R=+0,8l7. Р=0,0039), цо відповідає даним літератури щодо стимулюючого впливу пролактину на процеси дозрівання і диференціювання лімфоцитів. ■

В другій групі хворих вірогідних змін в показниках клітинного 1 гуморального Імунітету не виявлено.

Визначення впливу ЕМВ НВЧ на стан Імунної системи-при дії міліметрових хвиль в умовах "in vitro" і "in .vivo" здійснювалось у тих самих, хворих, тому ми маля можливість порівняти ефект дії мм хвиль в даних умовах. При кореляційному аналізі результатів - впливу ЕМВ НВЧ міліметрового діапазону з довжиною хвилі 7,1 мм при дії"in ,vitro"'1 "in vivo" за допомогою методу рангової кореляції за Спірманом виявлено сильний кореляційний взаємозв’язок показників РГМЛ при опроміненні лімфоцитів "in vitro" 1 "in vivo"- (г=+0,837, P=0,002). Кореляційний аналіз показав вищі значення: R^+0,906, Р=0,003.

■ . ' ВИСНОВКИ •

1.На моделі зксперементальної гіперплазії ендометрія вия-

лено імуномоделюючий ефект' BQ МВЧ, який залежав від довжини хвилі і часу впливу. Оптимальний Імуномодулюючий ефект досягався при довжині хвилі 7,1 мм, потужності опромінення 10 мВт/см2 і тривалості впливу 40 хвилин. ; .

2. В експериментах "in vitro" встановлено Імуномодулюючий

• ефект М3 НВЧ, котрий полягає в активізації експресії рецепторів -лімфоцитів (Fcm- 1 Е-РУК-рецептори) та їх функціональної

активності. Максимальний ефект спостерігався при довжині хвилі

7,1 мм 1 тривалості впливу.40 хвилин. Інгібітор синтезу білка циклогексамид 1 Інгібітор аеробного гліколізу азід натрію відміняли Імуномодуліюючий ефект ЕМВ НВЧ на рецепторний апарат лімфоцитів при впливі "In vitro".'

3. Модельні дослідження, на експеріментальній моделі гіперплазії ендометрія 1 дослідження "In vitro" встановили імуномодулюючий ефект ЕМВ.НВЧ з довжиною хвилі.7,1 мм 1 потужністю потоку 10 мВт/см2, котрий проявляється лише при знижених вихідних показниках Імунітету. ' 1

Доведена можливість використання ЕМВ НВЧ для корекції Імунних порушень у хворих з гіперплазією ендометрія при знижених вихідних показниках системи лімфоцитів та їх субпопуляцій (Тзаг, Т^, Взаг, Вм тощо). .

5. 'Факторно-кореляційний 1 регресійний анаНз результатів

показав залежність між змінами рівня гармонів 1 Імунологічних показників в різні фази менструального циклу після впливу W/B НВЧ. Збільшення рівня пролактику у.високому ступені корелювало з підвищенням рівня Т- 1 Вм-лімфоцитів; зниження рівня ест-радіолу 1 нормалізація співвідношення естрадіол/прогестерон в другу фазу менструального циклу пов’язано сильним від'ємним зворотнім зв’язком із зростанням функціональної активності лейкоцитів 1 АТФ-азно» активністю'. - .

6. Функціональна активність лімфоцитів і показник гальму-

вання міграції лейкоцитів, що характеризує її рівень, можуть служити тестом для прогнозування дії ЕМВ'НВЧ на Імунну систему. Виявлений сильний кореляційний зв’язок між показником РГМЛ "in vitro" 1 "in vivo" (r=+0,906, P=0,003). ' .

ПРАКТИЧНІ РЕКОМЕНДАЦІЇ '

Електромагнітне випромінювання міліметрового діапазону може ефективно використовуватись для стимуляції імунної системи при гіперпластичних процесах ендометрія. З цією метою можна використовувати різні апарати, що генерують електромагнітні хвилі нетеплової інтенсивності міліметрового діапазону ' ("Явь-1", "Електроніка НВЧ". "БРИЗ". "ОРІОН", тощо). Всі ці прилади дозволяють використовувати їх в клінічній практиці, причому деякі з них можуть генерувати ЕВМ в декілька* диапазонах. Прилади

•'Явь-Г' випускають у двох модифікаціях (з довжиною хвилі ЕМВ 5,6 і 7,1 м). потужність близько 10 мВт/см2. ' .

Опромінення пацієнтів здійснюють в ділянці грудини, на рівні другого ребра. Тривалість кожної процедури дорівнює 45 хвилин, загальна кількість- сеансів - 10. При проведнні процедури необхідно дотримуватись такого положення випромінювача, при якому тефлонова насадка торкається шкіри пацієнтки. Це є необхідним для зменшення розсіювання електромагнітних хвиль 1 втрат потужності. . .

З метою прогнозування дії мм хвиль на пацієнтку, перед опроміненням проголиться-дослідження крові для вивчення стану клітинного і гуморального імунітету; 3.одержаними лейкоцитами проводять тест гальмування міграції лейкоцитів на ФГА при опроміненні лейкоцитів "in vitro" ЕМВ НВЧ 8 довжиною хвилі 7,1 мм. Якщо показник РГМЛ при ФГА стимульованому тесті нижчий 40Z 1 під впливом ЕМВ НВЧ його значення збільшується більш ніж на оС-40%, такому хворому можна призначати ЕМВ НВЧ.в якості.моно-терапії. При низькій зворотній реакції ЕМВ НВЧ можна призначити в комплексі з імуномодуляторами. . ■ • ’

СШСОК НАДРУКОВАНИХ НАУКОВИХ ПРАЦЬ ЗА ТЕМОЮ ДИСЕРТАЦІЇ

1. Клініко-ІмунологІчні аспекти використання НВЧ-терапії в

післяопераційному періоді у хворих на міому матки/ЛІедІатрія. акушерство і гінекологія.-1994.-No 5.-С. 40-42 (Соавт. В.Н.За-

порожан; В.В.Беспоясная, 'А.П.Гадюченко).

2. Применение КВЧ-терапии у ббльных гинекологического про-

филя//Милиметровые волны в биологии и медицине.-1993.-No

2.-С.79-81 (Соавт.Б'.Н.Запорожан, В.В.Беспоясная). ‘

3. Имунологические. и ' биохимические механизмы взаимодейс-

твия мм волн с иммунокомпетентными клетками //Международный симпозиум "Миллиметровые волны нетепловой интенсивности в меди-цине'7Сборник докладов.-Москва, 1991.-Ч.2.-С.230. (Соавт. 0.В.Хаит, В.Н.Запорожан). - ■

4. Влияние КВЧ-излучения на иммунокомпетентные клет-ки//Тез.доюі.Х научной конф.: "Факторы■клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических ' и патологических состояниях".-1989.-С. 22 (Соавт.Л.П.Басок. Т.П.Тряпицына).

5. Застосування НВЧ-терапії у комплексному лікуванні за-

пальних захворювань жіночої статевої сфери//Інформаційний листок.-Одеса, ЦНТІЕІ, 1994.-.3 с. (Соавт.В.Н.Залорожан, В.В.Бес-гсоясная, А.П.Гадюченко).

V.V. Bubnov. Experimental basing of the' application of slectromagnetlc radiation of mlllimetral range for Immune system correction In- hyperplastic processes of endometrium.

Dissertation to get the science-degree of the candidate of nedlcal sciences. Speciality 14.00.34- curortology and physiat-"ics, Ukrainian'State Scientific Research Institute of Medical tehabilltatlon and Curortology, 0dessa,1996. '■ .

4 scletific works, 1 Information leaflet are to be defen-!ed, which contain the pilot study of Immune system in animals ilth endometrial hyperplasia effected with electromagnetic relation of extremely high frequency and the results of clinical isage with evaluation of the hormone and immune systems using lathlmatlcal treatment of data obtained as well. The pilot stu-ly results, as well as the clinical findings, show that the ipplicatlon of EMR of EHF develops lmmunomodulatlng effect, ’hlch can be mostly seen with wave length 7.1 mm, irradiation lme-40 min. and at the reduced initial stste of the Immunolo-Ical factors. The changes in hormone and Immune systems, ob-erved under the EHF EMR effects, are interdependant, and the hanges in concentration of estradiol, progesteron and their nterralatins play the main role, as well as prolactin. The re-ctlon of leukocyte-migration inhibition, which manifests the evel of functional activity of lyir,hocytes. can serve as a rognostlc test of the EHF EMR effects on immune system.

Бубнов В.В. Экспериментальное обоснование применения лектромагнитного излучения миллиметрового диапазона на иммун-ую систему при гиперпластических процессах эндометрия.

Диссертация на соискание ученой степени кандидата меди-• инских наук по специальности 14.00.34 - курортология и физио-эрапия. Украинский государсРвенный научно-исследовательский :ститут медицинской реабилитации и курортологии, г.Одесса, 396. . ’

Защищаются 4 научные работы, 1 информационный листок, ко-эрые содержат экспериментальные исследования иммунной системы животных с гиперплазией эндометрия на фоне воздействия элект-змапштного излучения крайне высокой частоты «.результаты кли-

нического применения с определением состояния гормональной и иммунной систем с математической обработкой данных. Установлено. что применение ШИ КВЧ Как в эксперименте, так и в клинике обладает иммуномодулирушим эффектом, наиболее выраженным при длине волны 7.1 мм. времени облучения 40 минут и при условии сниженного исходного состояния иммунологических показателей. Изменения гармональной и иммунной систем, наблюдается под влиянием ШИ КВЧ, взаимозависимы., при этом наибольшую роль играю1, изменения концентрации эстрадиола. прогестерона и их взаимоотношения. а также пролактина. Реакция торможения миграции лейкоцитов, отражающая уровень функциональной активности лейкоцитов, может служить прогностическим тестом влияния ШИ КВЧ на иммун--ную систему. ,

Підписано до друку 11.09.96 Формат 60x84/16 Папір газетний Друк офсетний. 1,16 ум.друк.арк.,1.25 обл.-вид.арк. Тираж 100 прим. Замовлення №/#?. . • .. ,

Одеський державний політехнічний університет,‘

270044,Одеса,пр.'Шевченка.'І