Автореферат и диссертация по медицине (14.00.21) на тему:Экспериментальное изучение отечественных биодеградирующих мембран для направленной регенерации костной ткани (экспериментальное исследование)

гЛ» л На правах рукописи

ъ -я»

> #

ДИАНОВА ЕКАТЕРИНА ЮРЬЕВНА УДК: 516.314-008.1 -089.834

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ОТЕЧЕСТВЕННЫХ БИОДЕГРАДИРУЮЩИХ МЕМБРАН ДЛЯ НАПРАВЛЕННОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОСТНОЙ ТКАНИ

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.21 - «Стоматология»

14.00.16 - «Патологическая физиология»

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА МЕДИЦИНСКИХ НАУК

МОСКВА-1998

Работа выполнена в Московском медицинском стоматологическом институте.

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

Доктор медицинских наук, профессор А.И. ВОЛОЖИН

Доктор медицинских на/к, профессор Г.М. БАРЕР

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ:

Доктор медицинских наук, профессор В.В.ГЕМОНОВ

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

Доктор медицинских наук, профессор B.C. ИВАНОВ

Доктор медицинских наук, профессор М.М. ПОЖАРИЦКАЯ

Ведущая организация - Тверская государственная медицинская

академия.

Защита состоится« » 1998 года в часов на заседании

диссертационного совета Д084.08.02 в Московском медицинском стоматологическом институте по адресу: 109021, Москва, ул. Долгоруковская, 4.

С диссертацией можно ознакомится в научной библиотеке Московского медицинского стоматологического института по адресу: 125206, Москва, ул. Вучетича, дом 10а.

Автореферат разослан« » 1998 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук, доцент

Н.В. ШАРАГИН

1. АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ.

В настоящее время общепризнано, что наиболее эффективным методом лечения воспалительных заболеваний пародонта является хирургический метод. На данный момент предложено большое чисто различных модификаций операций, отличающихся техническими деталями исполнения (Т.И.Лемецкая,1984; В.С.Иванов,1981; АЛ. Безрукова, 1987). Однако, следует признать, что эффективность этих операций недостаточна: часто возникают рецидивы. Поэтому в дополнение к традиционным методам предложены новые подходы к решению этой проблемы , например имплантация материалов, способствующих регенерации тканей пародонта и укреплению зубов. С этой целью используются различные трансплантаты, среди которых наиболее популярны материалы содержащие гидроксиапатит ( В.К. Леонтьев , А.И. Воложин и соавт., 1995; Ю.И Воробьев и соавт. ,1995; В.П. Зуев и соавт. 1995). Несмотря на улучшение результатов лечения при их использовании, все же не удается получить с помощью этого метода полноценную регенерацию тканей пародонта, в частности костной ткани и периодопта. Для повышения эффективности лечения заболеваний пародонта был разработан метод направленной регенерации ткани. В его основу положено применение специальных мембран, разобщающих слизистую оболочку с остальными тканями пародонта. Различными фирмами предложено 2 типа мембран : 1 - не рассасывающиеся, например из политетрафтортилена, которые по окончании лечения требуют удаления, что наносит дополнительную травму пародонту ; 2 - рассасывающиеся - из органических соединений: поливинилгликон, полилактон и др., которым также присущ ряд недостатков; из-за эластичности они не создают на длительное время пространства для регенерации тканей. Общим недостатком мембран, выпускаемых за рубежом, является их высокая стоимость. Это обстоятельство определило необходимость разработки отечественных мембран, обладающих заданными свойствами нужными для осуществления направленной регенерации костной ткани. В 1996 году с целью экспериментального изучения фирмой

"ПОЛИСТОМ" разработаны мембраны, которые планировались в дальнейшем к использованию в клинической практике. Эти мембраны отличаются заданной толщиной, низкой скоростью резорбции и необходимыми физическими свойствами. Для получения разрешения на клинические испытания необходимо было провести экспериментальное изучение возможности их применения в гародонтологии. Разработка этого направления является актуальной проблемой стоматологии.

2. ЦЕЛЬ РАБОТЫ. Провести экспериментальные, доклинические исследования резорбнруемых мембран, выполненных на основе коллагена и гидроксиапола для направленной регенерации костной ткани.

3. ЗАДАЧИ. 1. Исследовать реакцию целостного организма на имплантацию под кожу резорбируемой мембраны.

2. Изучить адгезивные свойства различных бактерий полости рта к исследуемой мембране по сравнению с другими материалами.

3. Изучить влияние резорбируемых мембран на регенерацию костной ткани челюсти в эксперименте, определить продолжительность резорбции мембран после их имплантации в область ветви челюсти .

4. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Впервые изучена в экспериментах на животных гидроксиапатит (ГАП) содержащая биорезорбируемая коллагеновая мембрана отечественного производства разработанная на фирме «ПОЛИСТОМ». Впервые показано отсутствие токсичности данной мембраны и способность к инициации построения костной ткани. Мембрана резорбируется в течение 1,5-2 месяцев, что достаточно для построения костной ткани в области костного дефекта умеренных размеров. Впервые показано, что применение мембраны способствует образованию

более зрелой кости по всему протяжению дефекта.

Впервые изучены адгезивные свойства бактерий полости рта к дайной мембране и установлено, что степень адгезии оральных бактерий к исследуемой мембране не превышает таковую к другим полимерным материалам предназначенным для НРТ.

5. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ работы заключается в том, что впервые иссследовалась биорезорбируемая мембрана отечественного производства для последующего применения в практике терапевтической и хирургической стоматологии. Отсутствие токсического влияния мембраны на организм в целом и высокий остеогенетический эффект позволяют рекомендовать ее для клинических испытаний.

6. ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНЕСЕННЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1 .Создание дефекта нижней трети ветЕи нижней челюсти у крыс и кроликов является адекватной моделью изучения осгеогенных свойств биорезорбируемых мембран для направленного остеогенеза. Мембрана не является токсичной для организма. 2. Содержащая гидрокстапатит коллагеновая мембрана инициирует построение костной ткани в зоне дефекта нижней челюсти, способствует более полному восстановлению кости на всем протяжении дефекта и образованию более зрелой структуры кости. Данную мембрану можно использовать для клинической апробации в качестве средства для Направленной регенерации тканей (НРТ). 3. При использовании с реконструктивной целью мембран из биокомпозиционных материалов у больных с гародонтитом обоснованным является использование ультразвуковой установки для воздействия на микробную флору (например аппарата "Пьезон Мастер").

7. ПУБЛИКАЦИИ: Материалы диссертации представлены в 4 -х печатных трудах, опубликованных в центральной печати.

8. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы исследования», главы собственно экспериментального исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы.

■ Изложена на 136-и страницах машинописного текста. Работа иллюстрирована 40-а рисунками и 3-я таблицами. Указатель литературы включает 102 источника, то которых 30 на русском языке и 72 на иностранном.

9. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения работы доложены на совместном заседании кафедр госпитальной терапевтической стоматологии и патологической физиологии стоматологического факультета Московского медицинского стоматологического института 18 нюня 1998 года.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ. ХАРАКТЕРИСТИКА МАТЕРИАЛА.

Исследования проведены в 3 этапа. На 1-ом этапе изучена токсичность мембраны по показателям реакции организма на ее имплантацию под кожу крыс. На 2-ом этапе исследована адгезивная способность мембраны по отношению к бактериям полости рта. На 3-ем этапе проведено изучение влияния мембраны на регенерацию костной ткани.

Исследования выполнены на 92 белых, половозрелых (6 мое), беспородных крысах массой 200-250 г. и 10 половозрелых (8мес.) кроликах, породы шиншилла массой около 3 килограмм. Все животные содержались на обычном рационе вивария, питание -брикетированное, сбалансированное.

На первом этапе исследования проведены на 30 крысах. Животные были разделены на 2 равные группы: контрольную и опытную. Опытной группе под гексеналовым наркозом под кожу спины между лопатками вводили мембрану размером 1X1,5 см. Животных забивали под наркозом декапшацией на 15-е, 30-е, и 60-е сутки после

операции. В каждый срок забито по 10 животных: 5 контрольных и 5 опытных. Кровь использовалась для исследования.

На втором этапе были использованы следующие виды полимерных материалов: пленки, состоящие из одного коллагена (без ГАП); пленки регенеративные, содержащие полимерное волокно (GORE-TEX,USA); пленки Диплсн Дента, содержащие гликопротеидные комплексы (Норд-Ост, РОССИЯ).

Проводили изучение адгезивных свойств представителей факультативно-анаэробной микрофлоры, выделенных со слизистой оболочки полости рта здоровых людей в возрасте 18-20 лет: Staphilococcus epidermidis; Streptococcus facialis (энтерококк). Исследовалась так же адгезия двух пародонгопатогенных видов, полученных у больного пародонтигом: Streptococcus sanguis; Fusobacterium nucleatum. Исследования проведены совместно с профессором кафедры микробиологии ММСИ В.Н. Царевым. Третий этап включал эксперименты на 62 крысах и 10 кроликах. Исследования на крысах.

Было проведено 2 серии опытов: в 1-ой cepim (20 крыс) исследовалась регенерация кости при использовании мембраны без применения антибиотиков, во 2-ой серии (42 крысы) - регенерация кости при использования мембраны с применением антибиотиков до и после оперативного вмешательства.

В обеих сериях животные были разделены на кошрольную и опытную группы. Всем крысам создавали прямоугольный дефект ветви нижней челюсти в области утла размером 0,4X0,4см с помощью фиссурного бора.

У крыс контрольной группы мышцы и кожу ушивали сразу после нанесения дефекта. Крысам опытной группы накладывали мембрану на переднюю поверхность дефекта губчатой структурой внутрь. Размеры мембраны на 2 мм превышали площадь дефекта. Мембрана достаточно плотно приклеивалась к кости и поэтому не требовалось дополнительной фиксации. Б 1-ой серии опытов антибиотик не вводили, а во 2-ой его вводили до и после оперативного вмешательства (бензилпенициллин по 500 тыс. единиц внутримышечно, в течение 3-х дней один раз в день). Контрольных и опытных

животных забивали методом декапитации: в первой серии забой проводили на 15-е п 30-е сутки, во второй на 15, 30 , 60 , 90-е сутки. В каждой группе одного срока исследования было взято по 4-5 животных.

Для большей наглядности результатов было решено использовать более крупных животных - кроликов, у которых строение костной ткани больше напоминает человеческую. Им создавали аналогичный дефект нижнего края нижней челюсти, размером 0,8X0,8см. Пять кроликов были контрольными (дефект ушит сразу), пять -опытными (дефект закрыт мембраной, после чего ушит). Забой осуществлялся в сроки 15, 30, 45, 60, 90 суток путем введения воздуха в вену уха.

МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО ИССЛЕДОВАНИЯ.

В работе использовали следующие методы исследования: оценки реакции организма на мембрану, микробиологический, рентгенологический, гистологический.

Метод оценки реакции организма на мембрану.

При забое крыс была взята кровь для подсчета лейкоцитарной формулы и форменных элементов. В сывортке крови определяли активность ферментов: аспартатаминотрансферазы ( ACT ) (КФ.2.6.1.2), аланинаминогрансферазы (AJTT) (КФ 2.6.1.1), гамма-глютамшпранспептадазы (11111), щелочной фосфатазы (ЩФ) (КФЗ.1.3.1). Активность указанных ферментов определялась спекгрофотомегричесшм методом на аппарате ФП-901 (Финляндия).

Микробиологический метод исследования.

Эксперименты по изучению процесса адгезии микроорганизмов к полимерным материалам (пленкам) осуществляли в двух вариантах: с обработкой ультразвуком и без него, когда удаление не прилипших бактерий производили механическим встряхиванием.

ВАРИАНТ 1 состоял из следующих этапов.

1-ый этап. Культуры микробов, выращенные на сердечно-мозговом агаре (Staphilococcus epidermidis, Streptococcus facialis) или кровяном гемин-агаре (Streptococcus sanguis, Fusobacterium nucleatum), использовали для приготовления взвеси в стерильном физиологическом растворе (pH 7,2) с концентрацией микробных клеток 10 в 10-ой степени CFU/ МЛ по оптическому стандарту мутности.

Затем в стерильных чашках Петри на пленки из исследуемых материалов размером 5Х5мм наносили 0,05 мл микробной взвеси (5*10 в 9-ой степени CFU). Инкубировали в холодильнике 10 минут при 4*С, так как ямкая температура способствует сохранению жизнеспособности анаэробных бактерий (Р.В.Ушахов., В.Н.Царев 1997).

2-ой этап. Пленки помещали в стерильный раствор (10 мл) и обрабатывали ультразвуком с частотой 60 кщ на аппарате Wagner (Финляндия) в течении 5-и минут для удаления несвязавшяхся бактериальных клеток.

3-й этап. После промывания пленки переносили на плотную питательную среду и выполняли двусторонний отпечаток с последующим механическим распределением на три сектора чашки Петри по Гольду, в модификации В.Г.Мельникова (1990).

С целью изучения количества прилипших клеток факультативно-анаэробных бактерий использовали сердечно-мозговой агар (инкубация в термостате при 37*С 24 часа), а для пародонтстшогснных - 5% кровяной гемин-агар (инкубация в термостате при 37*С 48 часов; газовая смесь: 80% N2,10% С02,10% Н2).

4-ый этап. По завершении срока инкубации подсчитывали количество выросших колоний в "последнем" секторе (где определяли рост) и подсчитывали количество прилипших к пленке микробов, сохранившихся на ней после промывания ультразвуком. Затем результат пересчитывали на 1 см2 площади поверхности полимерной пленки. Окончательное выражение показателя адгезии микробов проводили по формуле Pa=Na\NolOO%, где Ра- показатель адгезии в %, No- количество клеток до начала эксперимента (на 1 см2), Na - количество клеток после промывания (на 1см2).

Вариант 2.

Методика эксперимента отличалась проведением 2-го этапа, когда промывание стерильным физиологическим раствором проводили без ультразвука путем простого механического встряхивания на шюггель-аппарате в течение 10 минут. Последующие этапы и расчет показателя адгезии Ра осуществляли так же, как и в варианте I.

Рентгенологический метод.

Для рентгенологического исследования у животных после забоя выделяли нижнюю челюсть, освобовдапи ее от мягких тканей и фиксировали в 10% растворе формалина. Рентгенографию проводили контакгным методом с помощью аппарата ТУР-60, на пленке "МИКРАТ 300". Применяли следующий режим съемки: напряжение на трубке 25 кв; анодный ток 10 ма, время экспозиции 1 мин 30 сек. Рентгенограммы проявляли в стандартном проявителе, фиксировали в кислом фиксаже, а затем промывали и высушивали. Режим съемки и обработки рентгенограмм были одинаковыми во всех сериях опытов.

Гистологический метод исследования.

Нижняя челюсть очищалась от мягких тканей и фиксировалась в 10 % нейтральном формалине. Для декальцинации применяли раствор ЭДГА. После удаления минеральной фазы материал промывали в проточной воде. Обезвоживали в спиртах восходящей концентрации и заливали в целлоидин по общепринятой методике. Из приготовленных блоков получали гистологические срезы толщиной 8-10 мкм, которые окрашивали гематоксилин - эозином. Препараты консультированы зав. кафедрой гистологии проф. В.ВХсмоновым.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ.

Необходимость изучения реакций целостного организма на мембраны обосновано тем, что в имплантируемых материалах, остающихся в ткани или рассасывающихся, могут быть компоненты, оказывающие токсическое влияние на организм. В результате

экспериментов было установлено, что имплантация мембран под кожу не повлияла на такие показатели периферической крови как концентрация гемоглобина, число эритроцитов и тромбоцитов. Отмечено развитие умеренного лейкоцитоза, который сопровождался небольшим регенеративным сдвигом, о чем свидетельствует возрастание числа палочкоядсрных нейтрофилов без заметных изменений других показателей лейкоцитарной формулы. Что касается исследования активности ферментов, то выяснилось, что в результате имплантации под кожу спины крысы резорбируемой мембраны происходит достоверное увеличение в крови активности фермента АЛГ на 15-е и 30-е сутки опыта. Менее значительные изменения были зафиксированы при определении активности ACT, однако они имели ту же направленность, что и АЛТ.

Не было изменений в активности II111 и ЩФ. Существенное увеличение в крови активности таких ферментов как ACT и АЛГ можно объяснить усилением энергетических затрат организма, для которых требуется мобилизация компонентов белка. Обеспечение такой мобилизации возможно путем усиления синтеза аминотрансферазы, в первую очередь участвующей в глюкогенезе. Таким образом, процесс активного разрушения компонентов мембраяы, несмотря на то, что она состоит из биосовместимых веществ, требует энергетического обеспечения, что отражается на умеренном усилении синтеза участвующих в этом процессе ферментов. Эти изменения не свидетельствуют о токсичности мембраны, а характеризуют слабо выраженную системную реакцию организма на имплантацию материала, который предназначен для направленной регенерации костных тканей и пародонта.

При исследовании адгезии микроорганизмов на мембранах установлено, что в условиях обработки ультразвуком имеются различия в степени адгезии не только в отношении разных полимерных материалов, используемых для изготовления пленок, но и различных видов микробов.

При встряхивании в шютгель-алпарате в течение 10 минут показатели адгезии значительно превышали таковые при использовании ультразвука и составляли от 10 до70%, т.е. отличались более широким диапазоном (в 7 раз, в то время как при использовании ультразвука - только в 3-4 раза), ко для разных видов микробов получены различные данные. При сравнении показателя адгезии к исследуемой в нашей работе мембране и к мембранам уже использующимся в клинической практике, в частности фирмы "GORE", определили, что пленки этой фирмы мало отличаются от исследуемых в нашей работе мембран «Пародонкол». Причем в отношении энтерококка показатель адгезии к нашей мембране был даже ниже, чем к пленкам фирмы GORE. Весьма важные с практической точки зрения полученные нами данные свидетельствуют о возможности снижения адгезии оральных бактерий к используемым полимерным материалам в условиях обработки этих материалов (мембран) ультразвуком. Таблица.

Сравнительная характеристика степени адгезии различных бактерий полости рта к полимерным материалам (% по отношению к

исходному количеству клеток до эксперимента - 5 млрд. \ см2)

Тест - культуры S. epidermid. Str.faec. Str. sang. F. nucleat.

Режим Материал ( Р*\ - Р) % CP+V - Р) % ( Р+\ - Р) % ( P+V - р) %

Вариант 1 Ультразву к 1. Исслед. 6 +\ - 0,4 2,4 + \ -0,2 3 +\ - 0,4 4+\ - 0,4

2. Gore ; 2 +\ -•4),25 ^ 4 +\ - 0,4 2 +\ - 0,2 у +\ - 0,2

3. Диплен. 5+\ - 0,4 2 +\ - 0,25 2 +\ - 0,2 - 0,2

Вариант 2 Шюттель 1. Исслед. 70 +\ - 6,5 50 +\ - 4 50 +\ - 4 40 +\ - 4

2. Gore 70 +\ - 6,5 ^ 70+\ - 5 60+\ - 5 40-Н - 5

3. Диплен. 70 +\ - 6,5 V12+\ -»2,5 *;ю+\ - «2,5 *;ю+\ е,5

Примечания:

* Р 1\2 0,05 по вертикали для соответствующего

варианта

*"Р 1\2 0,05

Результаты микробиологического исследования позволили сформулировать следующие рекомендации:

В состав исследуемых мембран целесообразно введение антибактериальных компонентов, перекрывающих своим спектром действия как облигатно-анаэробную флору, так и факультативно-анаэробные виды, колонизирующиеся в полости рта (стафилококк, энтерококк).

Анализируя специфическое действие мембраны, то есть ее способность инициировать построение костной ткани можно наблюдать, что регенерация ветви нижней челюсти по данным рентгенологического исследования идет в три фазы: 1- деструктивная, когда края раны подвергаются резорбции. Продолжительность этой фазы составляет приблизительно 15 дней. Затем происходит образование костной ткани и почти полная минерализация дефекта к 60-90 дню. В результате использования мембран выраженность резорбтивного процесса уменьшилась, значительно усилилось образования костной ткани и ее минерализация, которая достигает наибольшей выраженности к 60 дню. Интересен тот факт, что по данным гистологического исследования и полная резорбция мембраны происходит к этому сроку (1,5-2 месяца). А это очень важно для достижения полного цементо- и остеогеиеза в клинике, так как процессы заживления связки зуба завершаются к этому сроку.

Морфологические исследования репаративного остеогенеза в условиях применения биомембран так же позволили установить некоторые аспекты их влияния на данный процесс. Полученные данные свидетельствуют о том, что использование биомембран способствует более полному восстановлению костного дефекта. При этом влияние биомембран отнюдь не связано с ускорением процесса остеогенеза. Сравнивая течение процесса регенерации у подопытных (с использованием биомембран) и контрольных (без мембран) животных, обнаружено, что биомембраны влияют на процессы

клеточной дифференцировки, происходящей в ходе репаративного посправматического остеогенеза. Оказалось, что биомембраны способствуют активизации клеток остсобласгического ряда. Это особенно заметно в обширных дефектах, когда у животных контрольной группы в этих же условиях преобладает активность фибробластов. В результате, в ходе регенерации зона дефекта подопытных животных в значительной части оказывалась заполненной волокнистой соединительной тканью. Эти данные хорошо согласуются с результатами исследований регенерации костной ткани Гололобова В.Г. (1986, 1992), где автор развивает положения о взаимодействии клеточных дифферонов в составе регенерата. Согласно этому положению полипотекгные клетки дают начало фибробластическому или осгеобластическому клеточным дифферонам с образованием, соответственно, соединительной или костной ткани. При этом сдвиг в ту или другую сторону, соответственно, влечет за собой уменьшение клеток противоположного дифферона.

Таким образом, анализ характера и течения регенерации в условиях применения биомембран позволяет говорил, об их влиянии на клеточные механизмы формирования регенерата. Согласно современным данным, полипотентным клеткам, располагающимся вблизи или в составе стенок сосудов, принадлежит основная роль источника остеогенных клеток (Гололобов В.Г., 1986,1996; Колокольчикова Е.Г., 1990, 1997; Климов A.A., Данилов Р.К., Гололобов В.Г. 1990). В этой связи интересно отметить, что именно вокруг сосудов часто начинали формироваться костные островки.

Особое место занимает формирование в составе регенерата хрящевой ткани. Согласно полученным данным, образование хряща напрямую связано со степенью взскуляризации зоны травмы. Как правило, гиалиновый' хрящ образовывался в участках с малым содержанием кровеносных сосудов. В последующем такие хрящевые островки впаивались в состав регенерата. Таким образом, хрящевая ткань в ходе регенерации конкурирует с костной тканью в условиях пониженного кровоснабжения. Другая особенность течения репаративного процесса в условиях использования

биомембраны - это выравнивание оетеогенеза по всему протяжению зоны травмы. У контрольных животных градиент новообразования кости довольно резко понижается от краев к центру. В результате при массивных дефектах центральная его часть остается заполненной волокнистой соединительной тканью. С этих позиций биомембраны можно расценить как своеобразные индукторы остеогснных клеточных элементов. Об этом косвенно может свидетельствовать и то обстоятельство, что у подопытных животных активизация осгеогенных элементов захватывает большую площадь, чем у контрольных животных вовлекая сюда и межбалочковые промежутки соседних с травмой отделов.

Другим важным моментом посттравматической регенерации костной ткани являются процессы перестройки и ремоделирования кости с образованием остеонов. Этот этап связан с деятельностью остеокластоз. В свою, очередь подключение к активной функцни по-видимому связано с темпами и объемами образования молодой костной ткани, а также ее сосудистым обеспечением. В этот период отмечалось увеличение в участках, прилежащих к зове травмы, моноцитов.

Таким образом, регенерация костной ткани является результирующей сложных взаимодействий различных клеточных дифферонов.

В этом отношении биомембраны способствуют активизации оетеогенеза, а также васкулогенеза, что влечет за собой изменение клеточного состава регенерата и способствует более полному восстановлению костной ткани.

Обобщая полученные данные в целом можно сделать заключение о том, что рассасывающаяся ГАП-содержащая мембрана может быть испытана в качестве средства для хирургического лечения заболеваний пародонта.

ВЫВОДЫ.

1. Имплантация коллагеновых ГАП-содержащих мембран под кожу в эксперименте не повлияла на показатели периферической крови такие как концентрация гемоглобина, число эритроцитов и тромбоцитов. Умеренный лейкоцитоз

свидетельствует о неспецифической реакции организма на продукты деструкции компонентов мембран.

2. Имплантация мембран под кожу не приводит к изменению активности в крови таких ферментов как 111П и ЩФ. Увеличение активности АЛТ и ACT объясняется усилением энергетических затрат организма для разрушения компонентов мембраны.

3. Степень адгезии к биорезорбирусмой коллагеновой мембране оралькых микроорганизмов зависит от их видов: более высокой степенью адгезии обладают стрептококки, стафилококки и фузобактерии, менее высокой - энтерококки.

4. Обработка коллагеновой ГАП-содержащей мембраны ультразвуком частотой бОкгц, 10 минут является эффективным средством «отмывания» от микробов in vitro.

5. Использование мембран для направленного остеогенеза способствует более полном)' восстановлению костного дефекта, что обусловлено процессами клеточной дифференцировки, происходящей в ходе регенеративного постгравматического остеогенеза, период резорбции' мембраны (1,5-2 мес.) соответствует времени регенерации костной ткани.

6. Образование хрящевой ткани в ходе остеогенеза связано со степенью васкуляризации зоны травмы. Гиалиновый хрящ, как правило, образовывается в участках с малым содержанием кровеносных сосудов, а затем включается в состав регенерата. Использование мембраны способствует возникновению остеогенеза по всему протяжению зоны травмы.

7. Активизация остеогенеза и васкулогенеза под влиянием мембраны влечет за собой изменение клеточного состава регенерата, индуцируя остеогенные элементы, что способствует более полному восстановлению костной ткани.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

1. Создание дефекта нижней трети ветви нижней челюсти у крыс и кроликов является

адекватной моделью изучения остеогенных свойств биорезорбируемых мембран для

направленного остеогенеза.

2. Коллагековая, ГАП-содержащая мембрана не является токсичной для организма при имплантации под кожу.

3. ГАП - содержащую коллагеновую мембрану можно использовать для клинической апробации в качестве средства для Направленной регенерации костной ткани (НРКТ), так как ока инициирует построение костной ткани в зоне дефекта нижней челюсти в эксперименте.

4. В состав исследуемых мембран целесообразно введение антибактериальных компонентов, перекрывающих своим спектром действия как облигатно-анаэробную флору, так и факультативно-анаэробные виды колонизирующиеся в полости рта (стафилококк, энтерококк).

СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ.

1. Адгезия различных бактерий полости рта к мембранам для направленной регенерации пародонта и костных тканей.- 5-й Российский национальный конгресс «Человек и лекарство».-Москва, 1998. (соавт. В Н. Царев, М М. Мустафаев).

2. Особенность регенерации костной ткани челюсти при ее инфицировании,- в сб.: Применение биокомпозиционных материалов в челюстнолицевой хирургии и стоматологии,- МОНИКИ. -Москва,1997 (соавт. А.И. Воложин, В.В. Гемонов).

3. Использование биодеградирующих мембран для стимулирования регенерации нижней челюсти после травмы в эксперименте,- в сб.: Применение биокомпозяционных материалов в челюстнолицевой хирургии и стоматологии,-МОНИКИ. -Москва,1997 (соавт, В.В. Гемонов, М.Ш. Мустафаев, Л.П. Истранов, P.A. Дружинина).

4. Разработка отечественных биорезорбирующихся мембран для направленной регенерации костной ткани,- Международная научно-практическая конференция «Новые технологии в стоматологии»,- Москва, 1998 (соавт. А.И. Воложин, Г.М. Барер, В.В. Гемонов, М.Ш. Мустафаев).