Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Экспериментально-клиническое исследование фармакологической активности и безопасности афалы

На правах рукописи

Савельева Ксения Викторовна

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И БЕЗОПАСНОСТИ АФАЛЫ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

Автореферат диссертации на соискание учен™ гтаттяни кандидата медицинских

□031747^^

Старая Купавна, 2007

003174732

Работа выполнена во Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ, Научно-производственной фирме «Материа Медика Холдинг»

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор

Сергеева Светлана Александровна Эпштейн Олег Ильич

Березовская Ирина Владимировна Воронина Татьяна Александровна

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится « ¿/3 » 2007 г. в часов на заседании

диссертационного совета Д 217.004 01 при Всероссийском научном центре по безопасности биологически активных веществ (ВНЦ БАВ) по адресу: 142450 Московская область, Старая Купавна, ул. Кирова, 23

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВНЦ БАВ. Автореферат разослан « » 2007 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук, профессор

Корольченко Л В.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) является одним из наиболее распространенных заболеваний у мужчин пожилого возраста (Bruskewitz R.C., 2003, Rosen R, 2003) Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин в возрасте 50 лет и более чем у 90% мужчин старше 80 лет Те или иные клинические симптомы заболевания отмечаются у большинства мужчин старше 50 лет (Barry МJ et al, 1992, Bruskewitz RC, 2003, Lepor H, 2004) Эпидемиологические исследования, проведенные в России, указывают на постепенное возрастание частоты ДГПЖ с 11,3% в возрасте 40-49 лет до 81,4% в возрасте 80 лет (Гориловский JIM., 1999) Таким образом, распространенность данного заболевания у мужчин является достаточно высокой и увеличивается с возрастом Социальная значимость и актуальность проблемы подчеркиваются демографическими исследованиями ВОЗ, свидетельствующими о значительном росте населения планеты в возрасте старше 60 лет, темпы которого существенно опережают рост населения в целом

Основными симптомами ДГПЖ являются симптомы нижних мочевых путей, которые могут значительно беспокоить больных и снижать качество их жизни (Bruskewitz R С, 2003, Lepor Н, 2004, O'Leary М Р, 2005) В тяжелых случаях заболевание может сопровождаться развитием осложнений, таких как острая задержка мочи, инфекции мочевыводящих путей, гематурия, почечная недостаточность (Степанов В Н, 1999, Jacobsen S.J, 1997; Lepor Н, 2004) ДГПЖ также ассоциирована с развитием эректильной дисфункции у пациентов (Bruskewitz R.C, 2003, Daly MP, 2005) Высокая значимость заболевания для пациентов мужского пола (нарушение мочеиспускания, эректильная дисфункция, снижение качества жизни) в сочетании с его широкой распространенностью обосновывают актуальность разработки высокоэффективных и безопасных методов лечения ДГПЖ

Среди существующих на сегодняшний день способов лечения ДГПЖ выделяют оперативное лечение, физиотерапевтические метода и медикаментозную терапию (Лоран О Б, 2000; Roefarborn С G, 2005; Levy А, Samraj G Р., 2007) Хирургическое лечение является высокоэффективным (Roehrborn CG, 2005), однако, в связи с тем, что ДГПЖ является преимущественно заболеванием пожилых мужчин, хирургический способ лечения может быть противопоказан ввиду наличия у пожилых пациентов сопутствующих заболеваний и высокого риска оперативного вмешательства. Поэтому в последние годы все большую популярность завоевывает медикаментозная терапия (Kaplan S А, 2006). Фундаментальные открытия последних десятилетий в области исследований этиологии и патогенеза ДГПЖ позволили применить в лечении больных ДГПЖ различные фармакологические препараты. Успехи этого вида лечения оказались настолько высоки, что в наступившем XXI веке подавляющая часть больных ДГПЖ, возможно, будет лечиться медикаментозно с обеспечением высокого качества жизни (Мазо ЕБ, 2003) Применение различных

фармакологических препаратов позволило значительно сократить количество оперативных вмешательств (Andersen J Т et al, 2007)

Несмотря на наличие большого количества лекарственных препаратов, предназначенных да лечения ДГПЖ, ни один из них не является идеальным и требует определения своего места в структуре лечения заболевания (Сивков А В., 1999). Выбор того или иного препарата и метода лечения в конкретном клиническом случае определяется балансом факторов эффективности и безопасности, в совокупности обеспечивающих поддержание необходимого уровня качества жизни пациента (Bruskewitz R С, 2003, O'Leary M Р, 2005).

В последние годы наблюдается возрастающий интерес исследователей к действию сверхмалых доз биологически активных веществ В том числе получен ряд данных о фармакологической активности малых и сверхмалых доз лекарственных средств (Ашмарин И П и др, 1992, Подколзин А А, Гуревич К Г, 2002, Benveniste J et al, 1988, Epstein О J et al, 2006) Эффекты сверхмалых доз описаны для разнообразных групп биологически активных веществ гормонов, эндогенных регуляторных пептидов, некоторых непептидных веществ (Сергеев ПВ и др., 1999) В последние годы проведен ряд исследований, показавших, что эффекты сверхмалых доз присущи и таким биологически активным молекулам, как антитела Показано, что антитела в сверхмалых дозах модифицируют эффекты эндогенного регулятора, к которому они выработаны, а не подавляют его активность, как это свойственно антителам в физиологических концентрациях (Эпштейн О И, 1999) К настоящему времени разработан и внедрен в клиническую практику ряд препаратов сверхмалых доз антител, предназначенных для профилактики и лечения различных заболеваний Каждый из этих препаратов был изучен в экспериментальных и клинических исследованиях, в которых было продемонстрировано регулирующее влияние СМД антител на функциональную активность соответствующего им антигена (Эппгтейн О Л и др, 2005)

Цель исследования. Провести экспериментальное и клиническое исследование фармакологической активности и безопасности афалы (сверхмалые дозы антител к лростатоспецифическому антигену)

Задачи исследования.

1 Исследовать влияние афалы на предстательную железу неполовозрелых крыс-самцов и неполовозрелых гонадэктомированных крыс-самцов

2 Исследовать фармакологическую активность афалы при остром и хроническом воспалении предстательной железы (на моделях острого и хронического асептического воспаления простаты у крыс).

3 Изучить фармакологическую активность афалы в условиях экспериментальной ДГПЖ (на модели гормон-индуцированного воспаления простаты у крыс)

4 Изучить безопасность (общетоксическое действие, репродуктивную токсичность, мутагенность, аллергизирующие и иммунотоксические свойства) афалы у различных видов животных

5 Исследовать клиническую эффективность афалы у пациентов с ДГПЖ

6 Оценить безопасность клинического применения афалы у пациентов с ДГПЖ.

Научная новизна. Впервые проведено экспериментальное и клиническое изучение

фармакологической активности и безопасности препарата афала Для препарата показано простатотропное действие, противовоспалительная активность, эффективность на модели ДГПЖ у животных Изучены токсические свойства препарата у различных видов животных Показана клиническая эффективность афалы у пациентов с ДГПЖ, а также его безопасность при назначении пациентам Простатотропное действие афалы показано у неполовозрелых крыс-самцов, а также у гонадэкгомированных неполовозрелых крыс-самцов, получавших тестостерона пропионат Введение афалы неполовозрелым крысам-самцам и гонадэктомированным неполовозрелым крысам-самцам, получавшим тестостерона пропионат, приводило к увеличению весового коэффициента вентральной доли простаты Противовоспалительное действие афалы изучено на моделях острого и хронического асептического воспаления простаты у крыс Введение препарата способствовало уменьшению гиперемии и отека ткани железы, увеличению содержания в ней ионов цинка, снижению выраженности атрофических изменений, улучшению показателей половой активности животных На модели ДГПЖ у крыс-самцов показано, что афала способствовала снижению весового коэффициента боковой доли простаты, уменьшала выраженность гистологических изменений в ткани железы Эффективность афалы была сопоставима с эффективностью экстракта Serenoa Repens

Введение афалы не вызывало гибели экспериментальных животных, не нарушало функционального состояния и морфологии их внутренних органов, препарат не обладал репродуктивной токсичностью, мутагенностью, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами

Клиническая эффективность афалы изучена у пациентов с ДГПЖ и умеренными нарушениями мочеиспускания. Назначение афалы пациентам способствовало улучшению показателей уродинамики, уменьшению выраженности симптомов нарушения мочеиспускания, повышению качества жизни пациентов Показана безопасность применения афалы у пациентов с ДГПЖ Прием препарата не сопровождался развитием нежелательных побочных реакций.

Практическое значение работы. Материалы экспериментальных и клинических исследований афалы вошли в комплект документов, представленных в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ с целью получения разрешения на медицинское применение препарата Препарат афала разрешен к медицинскому применению на территории РФ (регистрационное удостоверение N 000371/01 от 13 10 2006 года)

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на IV Национальном научно-медицинском конгрессе «Здоровье человека» (Ереван, Армения, 2005); IV Международном конгрессе «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» (Хабаровск, 2005), на ХШ Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2006), на V Региональной научно-практической конференции урологов Сибири (Томск, 2006)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 14 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на -/УЗ? страницах машинописного текста и состоит из введения, 4 глав, выводов, списка литературы Библиографический указатель включает источников, из них ¿У отечественных и

'/<£'/ иностранный

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Фармакологическая активность афалы изучена на 56 белых нелинейных крысах-самцах в возрасте 23-25 дней, 45 белых нелинейных крысах-самцах массой 350-400 г, 71 белых нелинейных крысах-самцах и 26 крысах-самках массой 250 г, 80 белых нелинейных крысах-самцах позднего репродуктивного возраста массой 450-500 г Токсичность афалы изучена на 20 белых нелинейных крысах (10 самцах и 10 самках) массой 210-450 г, 90 белых нелинейных крысах (45 самцах и 45 самках) массой 230-280 г, 378 белых нелинейных крысах (101 самце и 277 самках) массой около 250 г, 20 белых нелинейных мышах массой 28-40 г (10 самцах и 10 самках), 37 мышах (27 самцах и 10 самках) линии СВА массой 18-20 г, 240 мышах-самцах гибридах Б1 (СВА/С57В1/6) массой 18-20 г, 30 мышах-самцах линии Ва1Ь/с массой 18-20 г, 60 мышах-самцах линии СВА/СаЬас массой 18-20 г, 80 морских свинках обоего пола массой 200-250 г, 14 кроликах породы шиншилла (7 самцах, 7 самках) массой 2 кг Животные содержались в стандартных условиях вивария со свободным доступом к пище и воде в условиях контролируемого освещения (свет/темнота - 12 ч/12 ч) и температуры (20-22°С) При проведении экспериментальных исследований также были использованы самки ШворМа те1аш^аз1ег линии пдаИ и самцы ОговорЫа те1аш^айег линии йгЗ

Афала - аффинно очищенные антитела к простатоспецифическому антигену, смесь гомеопатических разведений С12, СЗО и С200. Лекарственная форма - таблетки В экспериментальных исследованиях использовался водный раствор гомеопатических разведений антител При проведении исследования фармакологической активности афалы препарат вводили в наиболее эффективной терапевтической дозе, ранее установленной на модели острого простатита, при исследовании простатотропного действия препарата - в максимально допустимой дозе соответственно способу введения Так как препарат обладает низкой токсичностью, то при проведении токсикологических исследований его вводили в максимальной дозе, допустимой соответственно способу введения, а также в терапевтической дозе. В связи с тем, что активным компонентом препарата являются антитела в сверхмалых дозах, привычные правила фармакокинетики и фармакодинамики

(связь доза - концентрация - эффект), для афалы не применимы Существующие физико-химические и иммунологические методы исследования не позволяют регистрировать концентрации препарата в биологических средах организма Поэтому действующие дозы препарата для применения его в клинике были подобраны эмпирически

Простатотропное действие на модели неполовозрелых животных Исследование проведено на 28 инфантильных крысах-самцах в возрасте 23 дней, 14 животных составили опытную группу, 14 - контрольную Опытной группе вводили афалу внутрижелудочно ежедневно в дозе 5 мл/кг в течение 10 дней Контрольной группе животных вводили дистиллированную воду в эквивалентном объеме в те же сроки На 11-й день животных забивали, определяли массу семенников, вентральной доли предстательной железы, семенных пузырьков, вычисляли их весовые коэффициенты

Простатотропное действие на модели гонадэктомированных инфантильных крыс-самцов в условиях андрогенной недостаточности, стимулированной тестостерона пропионатом Исследование проведено на 28 инфантильных крысах-самцах в возрасте 23-25 дней Начиная со следующего дня после гонадэктомии, животным вводили афалу внутрижелудочно в дозе 5 мл/кг в течение 7 дней Также животным вводили тестостерона пропионат (подкожно в оливковом масле, в дозе 0,5 мг/кг, в те же сроки) Опытные животные получали афалу и тестостерона пропионат (п=10), контрольные животные получали тестостерона пропионат и дистиллированную воду (контроль 3) (п=6) или оливковое масло (контроль 2) (п=5), часть животных оставалась интактной (контроль 1) (п=7) Через 24 ч после последнего введения препаратов животных забивали, проводили визуально ревизию внутренних органов, определяли массу и весовые коэффициенты органов-мишеней (вентральной доли предстательной железы и семенных пузырьков) Весовые коэффициенты вычислялись как отношение массы органа-мишени к массе животного

Острое воспаление предстательной железы (острый простатит') Исследование проведено на 45 белых нелинейных крысах-самцах массой 350-400 г, из них 20 животных составили опытную группу, 20 - контрольную, 5 - фоновую Острое асептическое воспаление предстательной железы вызывали путем прошивания ее шелковой нитью (Вертапетов Б А и др, 1970) Животным опытной группы вводили афалу в дозе 7,5 мл/кг внутрижелудочно в течение 3-х Дней до операции и 7 дней после операции Животные контрольной группы получали в те же сроки дистиллированную воду в дозе 7,5 мл/кг внутрижелудочно Животные фоновой группы оставались иягактными На 7-й день после операции всех животных забивали, визуально проводили ревизию внутренних органов, исследовали гистологические изменения в предстательной железе (Автандилов Г.Г, 1990; Милованов А П и др, 1986) Учитывая, что важная роль в связывании андрогенов предстательной железой принадлежит цинку (С1шгщ а1, 1986), определяли содержание ионов цинка в

ткани предстательной железы методом эмиссионного спектрального анализа (Кашкан Г В и др,1988)

Хроническое воспаление предстательной железы (хронический простатит') Исследование проведено на 45 белых нелинейных крысах-самцах массой 250 г. 20 животных составили опытную группу, 20 - кошрольную и 5 - фоновую Хроническое воспаление предстательной железы моделировали путем прошивания железы шелковой нитью (Вертапетов Б А и др, 1970) Опытной группе животных через 1 месяц после операции начинали водить афалу (внутрижелудочно ежедневно в дозе 7,5 мл/кг массы тела (в течение 1 и 1,5 мес ); контрольной группе животных - дистиллированную воду (ежеденевно по 7,5 мл/кг в течение 1 и 1,5 мес), фоновую группу составили интактие животные Через 2 и 2,5 мес после операции (через 1 и 1,5 мес введения препарата) забивали по 10 животных из опытной и контрольной группы, 5 животных фоновой группы (инясактные) забивали в сроки, соответствующие 2,5 мес после операции, проведенной у опытных и контрольных животных Визуально проводили ревизию внутренних органов; определяли массу, объем, весовой коэффициент, плотность вентральной доли предстательной железы, проводили ее гистологическое исследование (Автандилов Г Г, 1990, Милованов А П и др, 1986), у части животных определяли содержание ионов цинка в ткани предстательной железы (Кашкан Г В и др, 1988) Дополнительно (на 26 крысах-самцах и 26 крысах-самках) было проведено исследование половой активности животных по методике, предложенной Буреш Я (Буреш Я идр, 1991)

Модель гормон-индуцированного воспаления простаты (Coppenolle VF. et al, 2001) Исследование проведено на 80 нелинейных крысах-самцах позднего репродуктивного возраста (массой 450-500 г) Животным вводили группа I (п=20) - сульпирид (ежедневно, внутрибрюшинно в дозе 40 мг/кг) и экстракт Serenoa Repens (пермиксон, ежедневно, внутрижелудочно в дозе 50 мг/кг) в течение 30 и 60 дней, группа П (п=20) - сульпирид (ежедневно, внутрибрюшинно в дозе 40 мг/кг) и афалу (ежедневно, внутрижелудочно в дозе 7,5 мл/кг) в течение 30 и 60 дней, группа Ш (п=20) - сульпирид (ежедневно, внутрибрюшинно в дозе 40 мг/кг) и дистиллированная вода (ежедневно, внутрижелудочно по 7,5 мл/кг) в течение 30 и 60 дней, группа IV (п=20) - интактные животные Через 30 и 60 дней введения препаратов половину животных из каждой группы забивали, определяли массу и весовые коэффициенты передней, боковой и задней долей предстательной железы, проводили гистологическое исследование боковой доли простаты (Автандилов Г Г, 1990), определяли уровень пролакпта в плазме крови методом ИФА

Исследование токсичности афалы проведено согласно рекомендациям Фармакологического государственного комигета РФ (Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ, 2000,2005)

Острая токсичность В исследовании использованы половозрелые белые неинбредные лабораторные животные 2-х видов мыши (п=20, масса 28-40 г) и крысы (п=20, масса 210-450 г) обоего пола. Афалу вводили утром до кормления, дважды с интервалом в 3 ч, в максимально допустимом объеме в зависимости от пути введения внутрижелудочно - 1фысе в дозе 15,0x2=30,0 мл/кг (п=10), мыши в дозе 25,0x2=50,0 мл/кг (п=10), внутрибрюшинно -

крысе в дозе 25,0x2=50,0 мл/кг (п=10), мыши в дозе 50,0x2=100,0 мл/кг (п=10) Наблюдение за животными осуществляли в течение 2 недель Следили за поведением, внешним видом, двигательной активностью, реакцией животных на внешние раздражители, массой тела

Хроническая токсичность Исследование проведено на 90 крысах (45 самцах, 45 самках) массой 230-280 г и 14 кроликах породы Шиншилла (7 самцах, 7 самках) массой 2 кг Крысы были разделены на 9 групп - по 10 животных (5 самцов и 5 самок) в каждой группе Афалу вводили внутрижелудочно в дозах 7,5 и 15,0 мл/кг ежедневно в течение 3 и 6 месяцев, контрольной груше животных вводили дистиллированную воду в дозе 15,0 мл/кг в те же сроки. Обследование животных проводили через 3 и 6 месяцев введения препарата, а также через 2 недели после окончания 6-ти месячного курса введения Исследовали влияние препарата на общее состояние и массу животных, показатели периферической крови и костного мозга, функцию печени, почек, ЦНС и сердечно-сосудистую систему Проводили патоморфологическое исследование внутренних органов Кролики были разделены на 2 группы опытная группа (4 самца, 4 самки) получала афалу в дозе суточной нормы питья - 50 мл/кг ежедневно в течение 6 мес, контрольная группа (3 самца, 3 самки) получала дистиллированную воду в том же объеме в те же сроки Обследование кроликов проводили через 3 и 6 мес введения препарата оценивали общее состояние, массу животных, исследовали показатели периферической крови и костного мозга, функции печени и почек Патоморфологическое исследование внутренних органов проводили через 6 мес введения препарата

Местнораздражаюшее действие Являлось частью исследования хронической токсичности препарата Нелинейным белым крысам обоего пола (п=30, массой 230-280 г) вводили афалу в дозах 7,5 мл/кг (5 самцов, 5 самок) и 15,0 мл/кг (5 самцов, 5 самок) массы тела внутрижелудочно один раз в день в течение 6 месяцев Животным контрольной группы (5 самцов, 5 самок) вводили дистиллированную воду в количестве 15 мл/кг массы тела внутрижелудочно в те же сроки По окончании введения препарата животных забивали, проводили макро- и микроскопическое исследование стенки желудка

Репродуктивная токсичность Исследование проведено на 378 нелинейных крысах (101 самце и 277 самках) репродуктивного возраста (массой около 250 г) При изучении генеративной функции крыс-самок животным (крысам-самкам) вводили афалу в дозах 7,5 мл/кг (п=24) и 15,0 (п=26) мл/кг массы тела ежедневно в течение 15 дней, контрольной группе животных в те же сроки вводили дистиллированную воду в дозе 15 мл/кг (п=25) По окончании введения препарата крыс-самок подсаживали к интактным самцам (п=30) в отношении 2 1 на 10 дней (продолжительность 2-х астральных циклов) Оплодотворение регистрировали с помощью вагинальных мазков На 17-20-й день беременности половину животных забивали и подсчитывали количество желтых тел в яичниках, мест имплантации и живых плодов в матке (из расчета на одну самку), вычисляли индексы плодовитости, беременности, показатели пре- и постимплантационной смертности Вторую половину беременных самок оставляли до родов, после которых наблюдали за физическим развитием

потомства (индекс выживаемости, динамика массы тела) до окончания периода вскармливания.

При изучении генеративной функции крыс-самцов афалу вводили крысам-самцам в дозах 7,5 мл/кг (п~10) и 15,0 мл/кг (п=10) массы тела ежедневно в течение 60 дней (продолжительность сперматогенеза у крыс, контрольные животные получали в те же сроки дистиллированную воду в дозе 15 мл/кг массы тела (п=11). По окончании введения препарата самцов рассаживали в клетки по одному и подсаживали к ним интакхных самок (п=62) в отношении 2 1 на 10 дней. Оплодотворение регистрировали с помощью вагинальных мазков На 17-20-й день беременности половину самок забивали и регистрировали количество желтых тел в яичниках, мест имплантации и живых плодов в матке (из расчета на одну самку), вычисляли ивдексы плодовитости, беременности, показатели пре- и постимплантационной смертности Вторую половину самок оставляли до родов, после которых наблюдали за физическим развитием потомства Самцов, получавших препарат, также забивали и проводили морфологическое исследование семенников.

При изучении эмбриотоксического и фетотоксического действия афалы, регистрируемого в антенатальном периоде развития, препарат вводили беременным зфысам-самкам внутрижелудочно 1 раз в сутки в дозе 15 мл/кг массы тела (высшая доза) с 1 по 6 (период имплантации) (п=20), с 6 по 16 (период органогенеза) (п=1б), с 16 по 20-й (период фетогенеза) (п=16) день беременности и в дозе 7,5 мл/кг с 6 по 16 день беременности (п=17) Животные контрольной группы (п=50) получали в те же сроки эквивалентный объем дистиллированной воды. На 20-й день беременности всех животных забивали, определяли количество желтых тел в яичниках, мест имплантации в матке, число живых плодов (из расчета на 1 самку); вычисляли показатели пре- и постимплантационной смертности Плоды взвешивали, определяли их 1фанио-каудальный размер, распределяли по полу, проводили макроскопический осмотр плодов и плацент, у половины плодов проводили исследование внутренних органов (по методу Вильсона в модификации Дыбана А П ), у другой половины -исследование скелета (Дыбан А П. и др., 1970)

При изучении антенатального повреждающего действия препарата, регистрируемого в постнатальном периоде развития, афалу вводили беременным крысам-самкам в дозе 15 мл/кг ежедневно внутрижелудочно с 6 по 20-й день беременности Контрольные животные получали в те же сроки эквивалентный объем дистиллированной воды Регистрировали день родов, число крысят в помете, распределение их по полу На 4, 7, 14 и 21-й день жизни крысят определяли индекс выживаемости, измеряли массу тела В течение 2-х месяцев наблюдали за развитием крысят

Мутагенность Мутагенное действие афалы изучено на 37 мышах (27 самцах и 10 самках) линии СВА массой 18-20 г (методом учета хромосомных аберраций в клетках костного мозга) и мухах ВгоэорШа текпояайег (в тест-системе соматического мозаицизма клеток крыла) Афалу вводили однократно внутрижелудочно в максимально возможной по объему дозе (25 мл/кг массы тела животного) (5 самцов) и курсом (в течение 5 дней) в дозе 10

и

мл/кг массы тела животного (5 самцов, 5 самок) Контрольная группа животных получала дистиллированную воду внутрижелудочно в эквивалентном объеме в те же сроки (однократно (5 самцов) и курсом в течение 5 дней (5 самцов, 5 самок)) В качестве положительного контроля на мутагенность 5 самцам вводили циклофосфан в дозе 20 мг/кг (1/10 LD50) однократно внутрибрюшинно При изучении мутагенных свойств афалы у Drosophda melanogaster препарат добавляли в питательную среду в количестве 500 мкл на 2 мл среды

Иммунотоксичность и аллергенность Исследование проведено на 330 мышах-самцах массой 18-20 г (240 мышей-самцов гибридов F] (СВА/С57В1/6), 30 мышей-самцов линии Balb/c, 60 мышей-самцов линии CBA/CaLac) и 80 морских свинках обоего пола массой 200250 г При исследовании иммунотоксичности афалы препарат вводили мышам внутрижелудочно в дозе 10 мл/кг (терапевтическая доза) в течение 5 дней, морским свинкам - в дозе 50 мл/кг (однократная максимально переносимая доза) также в течение 5 дней Контрольные животные (как мыши, так и морские свинки) получали дистиллированную воду в эквивалентном объеме в те же сроки Дополнительно в качестве контроля использовали группу интактных животных Определяли массу и клеточность центральных и периферических органов иммунной системы, фагоцитарную активность нейтрофилов и перитонеальных макрофагов, интенсивность реакций гиперчувствительности замедленного типа и реакций антителообразования, уровень спонтанной пролиферации спленоцитов, индуцированной митогенами При исследовании аллергенности афалы у морских свинок определяли выраженность анафилактической реакции в ответ на введение препарата, проводили конъюнктивальную пробу, накожные аппликации препарата У мышей исследовали интенсивность реакции пшерчувствительности замедленного типа и реакции непрямой дегрануляции тучных клеток, анафилактическую реакцию кожи при внутрикожном введении препарата

Клиническое исследование эффективности и безопасности при ДГ11Ж При проведении клинического исследования афала применялась в виде таблеток (производство ООО «НПФ «Материа Медика Холдинг», per уд N000371/01-2001 от 05 042001, N000371/01-2001 от 05.04 2006) В качестве препаратов сравнения было использовано плацебо, идентичное по внешнему виду и составу вспомогательных веществ афале, и экстракт Serenoa Repens (простамол уно 320 мг, капсулы)

В клиническое исследование включались амбулаторные пациенты в возрасте от 40 до 75 лет, с диагнозом ДГПЖ, объемом предстательной железы более 25 см3 и умеренно выраженными симптомами нарушения мочеиспускания (суммарный балл IPSS от 8 до 20, максимальная объемная скорость потока мочи от 5 до 15 мл/с, объем остаточной мочи менее 150 мл) Уровень общего простатоспецифического антигена (ПСА) сыворотки крови пациентов при включении в исследование не должен был превышать 4 нг/мл Все пациенты перед включением в исследование и назначением каких-либо диагностических или лечебных процедур подписывали информированное согласие на участие в исследовании Наличие

подписанного пациентом информированного согласия являлось одним из критериев включения в исследование

Дизайн исследования - простое слепое плацебоконтролируемое с открытой группой сравнения Пациентов, включенных в исследование, рандомизировали в три группы 1-й группе назначалась афала в дозировке 8 таблеток в сутки (по 2 таблетки 4 раза в день) в течение 16 недель, 2-й группе назначалось плацебо также в дозировке 8 таблеток в сутки (по 2 таблетки 4 раза в день) в течение 4 недель, 3-й группе назначался экстракт Serenoa Repens (по 1 капсуле 1 раз в день) в течение 16 недель

Оценку клинической эффективности и безопасности терапии осуществляли через 4, 8,12 и 16 недель лечения (в группе плацебо только через 4 недели лечения) Эффективность лечения оценивали по динамике показателей опросника IPSS (International Prostate Symptom Score) - суммарного балла IPSS и индекса качества жизни QoL, данных урофлоуметрии (максимальной объемной скорости потока мочи Qmax), данных трансректального ультразвукового исследования (ТРУЗИ) (объема и размеров предстательной железы, объема остаточной мочи), у части пациентов проводили исследование гормонального статуса (тестостерон общий, тестостерон свободный, дигидротестостерон) Безопасность терапии оценивали по срокам и частоте возникновения нежелательных явлений, их характеру и связи с проводимой терапией Оценивали общее состояние пациентов (проводили осмотр пациента, оценку жалоб, измеряли артериальное давление, частоту сердечных сокращений, частоту дыхания), определяли основные лабораторные показатели (общий анализ крови, общий анализ мочи, глюкоза крови, печеночные ферменты (АлАТ, АсАТ), мочевина, креатинин, общий и свободный ПСА сыворотки крови).

Статистическая обработка результатов Обработка полученных данных проводилась с использованием программы Statistica 6.1 Для параметрических критериев вычисляли среднее значение, ошибку среднего и стандартное отклонение Сравнение средних значений осуществляли с помощью 2-стороннего t критерия Стьюдента для зависимых и независимых переменных (при п>20 и нормальном распределении признака) или W-критерия Вилкоксона и U-критерия Манна-Уитни (при п < 20 или отличном от нормального распределении признака) Определяли CI 95% Для непараметрических критериев вычисляли доли Сравнение долей осуществляли с помощью теста х2

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Фармакологическая активность афалы изучена на ряде моделей, основной мишенью для лекарственного воздействия в которых являлась предстательная железа Данные модели были выбраны исходя из предположения наличия у афалы избирательного воздействия на предстательную железу При проведении экспериментальных исследований для афалы было показано простатотропное действие у неполовозрелых крыс и неполовозрелых гонадэктомированных крыс, противовоспалительное действие при остром и хроническом воспалении предстательной железы, эффективность на модели ДГПЖ

Простатотропное действие афалы изучено у неполовозрелых крыс-самцов, а также у неполовозрелых гонадэктомированных крыс-самцов в условиях андрогенной недостаточности, стимулированной тестостерона пропионатом

У неполовозрелых крыс-самцов введение афалы в течение 10 дней вызывало избирательное увеличение массы и весовых коэффициентов вентральной доли предстательной железы, тогда как масса и весовые коэффициенты семенников и семенных пузырьков не отличались от таковых в контрольной группе животных, получавших дистиллированную воду (табл 1)

Таблица 1. Влияние афалы на массу органов репродуктивной системы инфантильных крыс-

самцов (через 10 дней введения препарата)

Показатель Диет, вода Афала

Весовой коэффициент вентральной доли простаты М±ш, мг/г 0,23±0,02 0,33±0,04 #

% от контроля 100,0 143,5

Весовой коэффициент семенных пузырьков М±т, мг/г 0,12±0,01 0,11±0,01

% от контроля 100,0 91,6

Весовой коэффициент семенников Mtm, мг/г 0,27±0,03 0,23±0,03

% от контроля 100,0 85,2

Примечание: # р<0,05 от труппы контроля (диет вода)

У гонадэктомированных инфантильных крыс-самцов, получавших тестостерона пропионат, введение афалы в течение 7 дней вызывало избирательное увеличение массы и весового коэффициента вентральной доли предстательной железы по сравнению с животными, получавшими только тестостерона пропионат (табл 2)

Таблица 2. Влияние афалы на андрогенный эффект тестостерона у гонадэктомированных

инфантильных крыс-самцов (через 7 дней введения препаратов).

Показатель Интактные животные (контроль 1) Гонадэктомированные животные

Оливковое масло (контроль 2) Диет, вода + тестостерон (контроль 3) Афала + тестостерон (опыт)

Весовой коэффициент вентральной доли простаты М±т, мг/г 0,21±0,02 0,09±0,03 * 0,17±0,02 л 0,23±0,01 #

%ОТ контроля 1 100,0 42,8 81,0 109,5

Весовой коэффициент семенных пузырьков М±т, мг/г 0,12±0,01 0,08±0,01 * 0,28±0,01 л 0,29±0,02

%ОТ контроля 1 100,0 66,6 233,3 241,7

Примечание: * р<0,05 от контроля 1,А р<0,05 от контроля 2, # р=0,05 от контроля 3

Введение афалы крысам-самцам с острым асептическим воспалением предстательной железы способствовало уменьшению гиперемии и отека в ткани железы (уменьшение

плотности железы, уменьшение относительной площади сосудов в гистологических срезах железы) (табл 3), а также уменьшению выраженности спаечного процесса между железой и окружающими тканями Кроме того, у животных опытной группы в вентральной доле простаты отмечалось более высокое содержание ионов цинка, чем у животных контрольной группы (табл 3), что, учитывая роль цинка в связывании андрогенов предстательной железой, свидетельствовало об улучшении ее функционального состояния.

Таблица 3. Фармакологическая активность афалы при остром асептическом воспалении

предстательной железы (М±т, на 7-й день после операции)

Показатель Интактные Диет, вода Афала

Плотность железы, г/см3 1,01±0,01 1,ю±0,03 1,02±0,02 #

Сосудистая площадь, % 3,00±0,61 1,80±0Д5 #

Содержание Znz+, мг% 0,49±0,11 2,01±0,37 #

Примечание: # р<0,05 от группы контроля (диет вода)

При хроническом воспалении простаты введение афалы приводило к уменьшению атрофических процессов в ткани железы, развивающихся на фоне воспаления в группе животных, получавших афалу в течение 1,5 мес, наблюдалось менее значительное снижение относительной площади секреторного эпителия, чем в группе контрольных животных (табл 4) Также как и на модели острого воспаления, у животных, получавших афалу на фоне хронического воспаления простаты, наблюдалось увеличение содержания ионов цинка в вентральной доле предстательной железы (табл 4), свидетельствовавшее об улучшении ее функционального состояния Изучение полового поведения животных показало, что крысы-самцы, получавшие афалу, имели более высокие показатели половой активности, чем крысы-самцы, получавшие дистиллированную воду (табл 5)

Таблица 4.Фармакологическая активность афалы при хроническом асептическом воспалении предстательной железы (М±т, через 30 и 45 дней введения препаратов)

Показатель Длит-ть Интактные Диет вода Афала

введения

Площадь эпителия концевых 30 дней 23Д0±1,55 19,20±2,80 21,80±2,07

отделов желез, % 45 дней 16,б0±0,9б* 19,20±0,48*#

Содержание Ъп2 , мг% 30 дней 0,60±0,10 1,99±0,27#

45 дней 0,56±0,06 2,09±0ДЗ#

Примечание- * р<0,05 от группы интактных животных # р<0,05 от группы контроля (диет вода)

Фармакологическая активность афалы при гиперплазии предстательной железы изучена на модели гормон-индуцированного воспаления простаты (Соррепо11е V Р е1 а1, 2001) Введение сульпирида крысам-самцам вызывало гиперпролактинемию и развитие

гиперплазии простаты, выражавшейся в увеличении весового коэффициента латеральной доли простаты и изменении гистологической структуры железы (увеличение относительной площади железистого эпителия и уменьшение просвета концевых отделов желез, увеличение толщины соединительнотканных прослоек между ацинусами)

Таблица 5. Влияние афалы на половое поведение крыс-самцов с хроническим воспалением предстательной железы (М±т, после 45-кратного введения препарата)

Показатель половой активности Интактные Диет, вода Афала

Латентный период садки, сек 231,9±8,9 189,0±11,9 114,9±16,0 *

Количество ухаживаний, абс. 10,3±1,5 6,4±1,7 6,9±0,9

Количество садок, абс. 7,5±2,4 5,9±1,6 11,8±2,1 #

Количество спариваний, абс. 1,7±0,7 1,3±0,4 2,4±0,3

Примечание: * р<0,05 от группы интактных животных # р<0,05 от группы контроля (диет вода)

К 30-му дню введения препаратов весовые коэффициенты передней, боковой и задней долей простаты в группах животных, получавших афалу и экстракт Б Керепв, не отличались от соответствующих весовых коэффициентов долей простаты животных, получавших сулышрид, а также интактных животных К 60-му дню введения препаратов масса и весовые коэффициенты передней, боковой и задней долей простаты в группе животных, получавших афалу, были достоверно снижены по сравнению с таковыми у животных, получавших сулышрид (табл 6) В группе животных, получавших экстракт в Лерепз, также наблюдалось достоверное снижение массы и весовых коэффициентов долей простаты к 60-му дню введения препарата (по сравнению с группой животных, получавших сулышрид) (табл 6)

Сравнение эффективности афалы и в й-ерем показало, что по способности снижать весовой коэффициент боковой доли предстательной железы на фоне введения сульпирида афала обладала в 1,7 раза большей эффективностью, чем экстракт в Яереш (весовые коэффициенты латеральной доли простаты к 60-му дню введения сульпирида составили 0,07±0,01 мг/г в группе афалы и 0,12±0,01 мг/г в группе в Яерепэ (р<0,05) при весовом коэффициенте у контрольных животных 0,18±0,02 мг/г) (табл 6)

При просмотре гистологических препаратов предстательной железы интактных крыс практически в каждой группе обнаружено несколько животных (20-25%) с явлениями спонтанной узловой доброкачественной гиперплазии (пролиферация эпителия ацинусов с образованием папиллярных структур, увеличение толщины соединительнотканных прослоек между концевыми отделами желез), что согласуется с данными литературы (Портной А С и др, 1984) и соответствует повышению частоты возникновения ДГПЖ у мужчин пожилого возраста При введении сульпирида элементы узловой доброкачественной гиперплазии предстательной железы наблюдались у всех крыс, получавших препарат Возрастало количество ацинусов с папиллярными разрастаниями эпителия Иногда сосочки заполняли

весь просвет ацинуса, эпителий при этом становился высоким кубическим Введение сулышрида вызывало также развитие очаговой клеточной инфильтрации интерстиция простаты (нейтрофилами, макрофагами, лимфоцитами, тучными клетками) и появление отдельных ацинусов с расширенным просветом, заполненным нейтрофильными лейкоцитами

Таблица б.Влшние афалы и S Repens на массу и весовые коэффициенты долей предстательной железы крыс, получавших сулышрид в течение 60 дней (М±т)

Показатель Иитактные Диет, вода + сулышрид S. Repens + сулышрид Афала + сульпирид

Вес животных, г 532,0±8,4 514,4±8,5 501,2±19,0 509,3±16,0

Передняя доля Масса, мг 207,2±14,5 196,0±7,5 75,2±5,2 *# 112,3±9,0#л

Весовой коэффициент, мг/г 0,39±0,03 0,38±0,01 0,16±0„02 *# 0,22±0,02*#А

Боковая доля Масса, мг 47,4±3,1 90,2±11,5* 67,5±8,8 # 38,2±5,8#л

Весовой коэффициент, мг/г 0,09±0,01 0,18±0,02 * 0,12±0,01 0,07±0,01 #л

Задняя доля Масса, мг 50,4±4,5 83,4±4,9 * 41,0±8,8 # 38,4±1,9 #

Весовой коэффициент, мг/г 0,10±0,01 0,16±0,01 * 0,08±0,02 # 0,08±0,01 #

Примечание: * р<0,05 от группы интактных животных

# р<0,05 от группы контроля (диет вода + сулышрид) л р<0,05 от группы сравнения (Б Лерепв + сулышрид)

Полуколичественный анализ гистологической структуры боковой доли простаты показал, что изменение соотношения структурных элементов в ней наблюдалось через 60 дней введения сулышрида достоверно по сравнению с интактными животными увеличивалась относительная площадь эпителия концевых отделов и интерстиция, уменьшалась относительная площадь просвета ацинусов Введение как афалы, так и в герега приводило к снижению выраженности изменений структуры простаты, обусловленных введением сулышрида наблюдалось достоверное уменьшение относительной площади эпителиальных структур и увеличение относительной площади просвета концевых отделов желез (рис 1), толщина соединительнотканных прослоек между ацинусами не изменялась, уменьшалось количество концевых отделов желез, содержащих в просвете лейкоциты

Таким образом, введение афалы экспериментальным животным уменьшало выраженность изменений в предстательной железе, вызываемых сулышридом Эффективность афалы при этом была сопоставима с эффективностью экстракта 8 Лереад, а

по уменьшению массы и весового коэффициента боковой доли превышала эффективность препарата сравнения в 1,7 раза.

При исследовании острой токсичности афалы введение препарата крысам и мышам внутрижелудочно и внутрибрюшинно в максимально допустимой дозе дважды в течение дня не влияло на общее состояние животных. Как у мышей, так и у крыс прирост массы тела к окончанию 2 недели наблюдения был одинаковым в опытной и контрольной группах. Летальность у животных, получавших препарат, отсутствовала, что не позволило установить параметры острой токсичности исследуемого препарата (ЛД16, ЛД50, ЛД84). Таким образом, ЛД5о афалы при введении крысам и мышам (самцам и самкам) внутрижелудочно и внутрибрюшинно была условно принята за величину, превышающую максимально допустимые дозы препарата соответственно способу его введения.

Рисунок 1. Влияние афалы и 8. Керепв на морфологию боковой доли предстательной железы крыс, получавших сульпирид в течение 60 дней.

Эпителий концевых Просвет концевых отделов желез отделов желез

Н Интактные

■ Диет, вода +

сульпирид □ в. Керепв + сульпирид В Афала + сульпирид

Примечание: * р<0,05 от группы интактных животных

# р<0,05 от группы контроля (диет, вода + сульпирид)

При исследовании хронической токсичности введение афалы крысам и кроликам (самцам и самкам) в течение 3 и 6 месяцев не влияло на общее состояние животных, прирост массы тела, показатели периферической крови и костного мозга, функции печени, почек, ЦНС и сердечно-сосудистой системы. Патоморфологическое исследование показало, что длительное введение препарата животным не изменяло структуры внутренних органов: все органы имели обычное строение и не отличались (при макроскопическом и микроскопическом осмотре) от органов контрольных животных, получавших дистиллированную воду. Препарат не оказывал также местнораздражающего действия: после ежедневного внутрюкелудочного введения афалы крысам в течение 6 мес. слизистая

оболочка желудка (шифовно-ямочный эпителий, железы и просветы желез) имела нормальное строение

Исследование репродуктивной токсичности показало, что введение афалы крысам не оказывало влияния на генеративную функцию самцов и самок, не нарушало развития потомства (не оказывало эмбриотоксического и тератогенного действия) как в антенатальном, так и в постнатальном периоде наблюдения Введение препарата как самцам, так и самкам не снижало индексы плодовитости и беременности, число желтых тел в яичниках, мест имплантации в матке, количество живых плодов (из расчета на 1 самку), не влияло на показатели пре- и постимплантационной смертности Введение препарата самкам на различных сроках беременности не оказывало эмбриотоксического и тератогенного действия, регистрируемого в антенатальном периоде развития не приводило к возрастанию показателей эмбриональной гибели и постимплантационной смертности, не влияло на размер и массу плодов Макроскопический осмотр живых плодов, полученных от самок опытной (п=691) и контрольной (п=491) групп, не выявил грубых аномалий развития ни у одного из плодов Патологические изменения плаценты также отсутствовали Аномалий развития скелета у плодов (п=344) обнаружено не было. При осмотре внутренних органов плодов не было выявлено каких-либо нарушений и аномалий развития Строение и расположение внутренних органов соответствовало норме и не отличалось от такового у плодов, полученных от самок контрольной группы Препарат не обладал также антенатальным повреждающим действием, регистрируемом в постнатальном периоде развития Роды регистрировались в одни и те же сроки (на 22-23 день беременности) у самок, получавших афалу, и самок, получавших дистиллированную воду Число крысят в помете, их распределение по полу, индекс выживаемости были одинаковыми в опытной и контрольной группах животных Масса тела крысят опытной группы на 4-й день жизни была достоверно снижена по сравнению с контрольной группой животных, однако в последующие сроки наблюдения сравнялась с массой тела крысят контрольной группы. Развитие крысят (сроки отлипания ушной раковины, появления волосяного покрова, прорезывания резцов, открытия глаз, влагалища, опускания яичек, двигательная и эмоциональная активность, формирование рефлексов) в опытной и контрольной группах было одинаковым

Изучение мутагенных свойств афалы показало, что препарат не обладал мутагенностью как при однократном, так и при курсовом введении Однократное внутрижелудочное введение афалы в максимально возможной по объему дозе не увеличивало количества хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей (табл 7) При курсовом введении исследуемого препарата частота хромосомных аберраций в клетках костного мозга мышей также не отличалась от соответствующих значений контрольной группы (табл 8) Добавление афалы в питательную среду для БпворМа те^и^айег не вызывало увеличения частоты появления мозаичных пятен на крыло (2,05) по сравнению с контрольными значениями (1,82) (различия между группами недостоверны, = 0,42)

Таблица 7. Влияние афалы на цитогенетические показатели клеток костного мозга мышей

линии СВА при однократном введении препаратов (М±т)

Группа Количество исследованных клеток Аберрантные хромосомы, на 100 клеток Клетки со множественными аберрациями, % Доля поврежденных клеток, %

Афала 25 мл/кг 500 1,00±0,44 л 0,00±0,00 Л 1,00±0,44 А

Диет, вода 25 мл/кг 450 1,20±0,80 л 0,00±0,00 л 1,20±0,80 Л

Циклофосфан 20 мг/кг 500 61,00±5,03 1,60±0,50 33,00±2,20

Примечание:л р<0,05 от группы позитивного контроля (циклофосфан)

Таблица 8. Влияние афалы на цитогенетические показатели клеток костного мозга мышей

линии СВА при курсовом введении препаратов (М±т)

Группа Пол животных Количество Аберрантные Доля

исследованных хромосомы, на поврежденных

клеток 100 клеток клеток, %

Афала Самцы 500 1,40±0,74 1,40±0,74

25 мл/кг Самки 500 1,60±0,40 1,60±0,40

Диет, вода Самцы 400 0,85±0,26 0,85±0,26

25 мл/кг Самки 450 1,40±0,40 1,40±0,40

Исследуемый препарат не обладал также иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами Введение афалы мышам и морским свинкам не влияло на массу и клеточность центральных и периферических органов иммунной системы, не приводило к изменению фагоцитарной активности нейтрофилов и перитонеальных макрофагов Выраженность реакций гиперчувствительности замедленного типа и антителообразования, а также уровень спонтанной пролиферации спленоцитов, индуцированной митогенами, были одинаковыми у опытных и контрольных животных При введении морским свинкам препарат не вызывал анафилактической реакции, коньюнктивальная проба была отрицательной, при накожных аппликациях препарата покраснение и отек кожи отсутствовали При введении мышам препарат не изменял интенсивность реакции гиперчувствительности замедленного типа и реакции непрямой дегрануляции тучных клеток, при внутрикожном введении анафилактическая реакция кожи имела одинаковую интенсивность в опытной и контрольной группах мышей

Таким образом, исследование фармакологической активности афалы показало, что препарат обладает избирательным воздействием на предстательную железу крыс, а именно, проявляет простатотропную активность у неполовозрелых и гонадэктомированных животных, противовоспалительное действие при остром и хроническом воспалении

предстательной железы, фармакологическую активность на модели гормон-индуцированной гиперплазии простаты.

Результаты исследования токсичности препарата показали, что он является безопасным для различных видов животных, как при однократном (острая токсичность), так и при курсовом (хроническая токсичность) введении, не влияет на репродуктивную функцию животных (как самцов, так и самок), не оказывает эмбриотокснческого и тератогенного действия, не обладает мутагенными, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами.

Клиническое исследование афалы проведено у 241 пациента с диагнозом доброкачественной гиперплазии предстательной железы (ДГПЖ) и умеренно выраженными нарушениями мочеиспускания. Пациенты были распределены в следующие группы: 132 пациента включены в группу афалы, 54 - в группу Б. герепв, 55 - в группу плацебо. Средний возраст пациентов составил 63,7±0,5 лет, продолжительность заболевания на момент включения в исследование - 5,2±0,2 лет.

К окончанию 4 недели лечения в группе пациентов, принимавших афалу, наблюдалось достоверное улучшение клинических показателей (рис. 2): максимальная объемная скорость потока мочи увеличивалась на 10,8% (р<0,01), суммарный балл ГРЭв, отражающий выраженность нарушений мочеиспускания, снижался на 12,9% (р<0,001), качество жизни пациентов улучшалось на 13,5% (р<0,01). При продолжении лечения клинический эффект нарастал и достигал своего максимального значения к окончанию 16 недели терапии: за 16-ти недельный курс лечения афаяой максимальная объемная скорость потока мочи увеличилась на 45,1%, суммарный балл ¡РЗБ снизился на 44,2%, качество жизни (индекс <2оЬ) улучшилось на 54,1% (для всех показателей р<0,001 от их исходных значений).

Рисунок 2. Динамика клинических показателей эффективности афалы на фоне проводимого

лечения.

16

10

14

12

□ Исходно Щ 4 недели 9 8 недель

8

И 12 недель Я 16 недель

6

4 —

2 -

О

(Зтах, мл/с РЭв, суммарный <Зо1_, баллы балл

Примечание: ** р<0,01, ** * р<0,001 от исходных значений показателя

По данным ТРУЗИ к окончанию лечения регистрировалось достоверное уменьшение объема остаточной мочи (на 58,4%, р<0,001), а также незначительное, но достоверное уменьшение объема предстательной железы (на 6,1%, р<0,05). Отмечено достоверное снижение концентрации ПСА общего и ПСА свободного в сыворотке крови: концентрация ПСА общего снижалась на 17,6% (исходно 1,87^0,10 нг/мл, после лечения 1,54±0,11 нг/мл, р<0,01), концентрация ПСА свободного снижалась на 21,7% (исходно 0,60±0,04 нг/мл, после лечения 0,47±0,03 нг/мл, р<0,01). При этом коэффициент ПСАсоо6одный/ПСА06щ1й не изменялся и находился в пределах нормальных значений (Лоран О.Б., 1999), составив в среднем 36,6±2,1% в начале лечения и 35,7±1,9% после его окончания. Изменений гормонального статуса (концентраций тестостерона общего, тестостерона свободного, дигидротестостерона в сыворотке крови) при лечении афалой не наблюдалось. Все перечисленные параметры гормонального статуса к окончанию 16 недели лечения находились на том же уровне, что и перед началом терапии.

АФАЛА

ПЛАЦЕБО

□ Исходно

В Через 4 недели терапии

Примечание: ** р<0,01, *** р<0,001 от исходных значений показателя

Динамика (Зтах

Рисунок 3. Клиническая эффективность афалы в сравнении с плацебо.

Динамика суммарного балла 1РЭЗ

Динамика индекса <2о1.

АФАЛА ПЛАЦЕБО

АФАЛА ПЛАЦЕБО

В группе пациентов, принимавших плацебо, к окончанию 4-й недели лечения наблюдалось незначительное снижение показателей опросника ГРвв, в то же время

объективный показатель (максимальная объемная скорость потока мочи) не изменялся (рис. 3). Снижение суммарного балла IPSS в группе плацебо составило 6,7%, индекса QoL - 6,1%. В группе афалы к окончанию 4-й недели терапии суммарный балл IPSS и индекс QoL снижались более значительно (на 12,9% и 13,5% соответственно, р<0,01) и, кроме того, наблюдалось достоверное увеличение максимальной объемной скорости потока мочи (на 10,8%, р<0,01).

Клиническая эффективность афалы была сравнима с результатами, полученными в группе пациентов, принимавших экстракт Serenoa Repens (рис. 4). В группе Serenoa Repens к окончанию 16-ти недельного курса лечения изменения клинических показателей составили: прирост максимальной объемной скорости потока мочи — 35,6%, снижение суммарного балла IPSS - 43,7%), снижение индекса QoL - 40,0% (для всех показателей р<0,001 от их исходных значений). По влиянию на максимальную объемную скорость потока мочи, а также на суммарный балл IPSS, афала была сопоставима с экстрактом Serenoa Repens, в то же время качество жизни пациентов (индекс QoL) к окончанию лечения было достоверно выше (р<0,05) в группе афалы, чем в группе Serenoa Repens.

Рисунок 4. Клиническая эффективность афалы в сравнении с S. Repens.

Динамика суммарного балла IPSS

16 с 14

I 12 | 10

я 8

1

I 6

и

« 4

И - 2

О

—S— fgfjlj 1 т

*** ***

■

АФАЛА

S. Repens

Динамика Qmax

АФАЛА

S. Repens

4

3,5 3

2

I 2-5 S 2

j 1,5 1

0,5 0

Динамика индекса QoL

i- х..

АФАЛА

S. Repens

□ Исходно

S Через 16 недель терапии

Примечание: *** р<0,001 от исходных значений показателя, # р<0,05 афалы от S. Repens

Нежелательных побочных реакций, связанных с приемом афалы, зарегистрировано не было Препарат хорошо переносился пациентами, не вызывал негативных изменений показателей общего анализа крови и мочи, биохимического анализа крови, не влиял на показатели артериального давления, частоту сердечных сокращений, частоту дыхания и данные осмотра пациента

В проведенном клиническом исследовании была показана высокая эффективность и безопасность афалы при ее применении у пациентов с ДГПЖ и умеренно выраженными нарушениями мочеиспускания Клиническая эффективность афалы была сопоставима с эффективностью S Repens, а по влиянию на качество жизни пациентов превосходила эффективность препарата сравнения

ВЫВОДЫ

1 Афала обладала простатотропным действием у неполовозрелых крыс-самцов и неполовозрелых гонадэктомированных крыс-самцов, получавших тестостерона пропионат. Введение препарата способствовало увеличению весового коэффициента вентральной доли простаты

2 Противовоспалительное действие афалы показано на моделях острого и хронического асептического воспаления предстательной железы у крыс Введение препарата способствовало уменьшению выраженности воспалительных и атрофических изменений в ткани простаты, улучшению функционального состояния железы, повышению половой активности животных

3 На модели гормон-индуцированного воспаления простаты у крыс установлено, что введение афалы препятствовало развитию гиперплазии боковой доли предстательной железы, снижало выраженность патологических изменений в ткани простаты, не влияло на уровень пролактина в плазме крови Афала превосходила Serenoa Repens по способности препятствовать увеличению боковой доли простаты

4 Изучение безопасности афалы у животных констатировало, что препарат не вызывал общетоксического действия, не обладал репродуктивной токсичностью, мутагенностью, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами

5 Клиническое исследование афалы у пациентов с ДГПЖ и нарушениями мочеиспускания показало, что препарат обладал выраженной клинической эффективностью улучшал показатели уродинамики, уменьшал выраженность симптомов нарушения мочеиспускания, повышал качество жизни пациентов

6 Назначение афалы пациентам с ДГПЖ не сопрововдалось развитием нежелательных побочных реакций

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Экспериментальное изучение эффективности применения препарата афала в условиях гормон-индуцированного воспаления простаты. // Тез докл Пятой международной

конференции «Клинические исследования лекарственных средств» - Москва, 2005. - С 69-70 (в соавт с Дугиной Ю JI, Хейфец ИЛ, Боровской Т Г, Мартюшевым-Покладом А.В, Сергеевой С.А., Эпштейном О.И.).

2 Афала - новое эффективное средство для лечения ДГПЖ // Тез докл Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» -Москва, 2005 - С. 149-150 (в соавт. с Тарасовым СА, Фроловым М.Ю., Мухиным А Б. Мартюшевым-Покладом А В, Дугиной Ю Л, Сергеевой С А)

3. Афала - новое средство терапии доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Тез докл Пятой международной конференции «Клинические исследования лекарственных средств» - Москва, 2005 - С 166-168 (в соавт с Юрмазовым ЗА, Дугиной Ю JI, Сергеевой С.А, Удутом В.В ).

4 Новый российский препарат пероральных антител для лечения ДГПЖ первые данные контролируемого клинического исследования II Тез докл 2-й Всероссийской конференции «Мужское здоровье» -Москва, 2005 -С. 290-291 (в соавт с Мартюшевым-Покладом А В , Петровым В И, Павловым В Н, Казихинуровым Р А, Дугиной Ю Л, Эпштейном О И., Сергеевой С А)

5 Применение нового препарата афала при лечении пациентов с доброкачественной гиперплазией предстательной железы // Сборник материалов IV национального научно-медицинского конгресса «Здоровье человека» - Ереван, Армения, 2005 - С 107 (в соавт с Тарасовым С.А, Мартюшевым-Покладом А В, Сергеевой С А, Эпштейном О И)

6 Экспериментальное изучение эффективности применения препарата афала в условиях гормон-ицдуцированного воспаления простаты // Тез докл IV Международного конгресса «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» -Хабаровск, 2005 - С 88 (в соавт с Душной ЮЛ, Хейфец ИЛ, Боровской Т.Г., Мартюшевым-Покладом А В, Сергеевой С А, Эпштейном О И)

7 Клиническое исследование афалы - нового препарата на основе антител для лечения доброкачественной гиперплазии предстательной железы. // Тез докл IV Международного конгресса «Доказательная медицина - основа современного здравоохранения» -Хабаровск, 2005. - С 167-168 (в соавт с Мартюшевым-Покладом АВ, Хейфец ИА, Фроловым MJO., Мухиным АБ, Тарасовым С А, Дугиной ЮЛ, Сергеевой СА, Эпштейном О И)

8 Сравнительное исследование эффективности препарата афала в терапии доброкачественной гиперплазии предстательной железы II Тез докл ХШ Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - Москва, 2006 - С 436-437 (в соавт с Петровым В И, Павловым В Н, Фроловым М Ю., Пушкаревым А.М., Мухиным А Б, Казихинуровым РА, Тарасовым С А, Мартюшевым-Покладом АВ, Сергеевой С А, Эппггейном О И)

9 Экспериментальное изучение эффективности применения препарата афала в условиях гормон-индуцированного воспаления простаты // Тез докл ХШ Российского

национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2006 - С. 127-128 (в соавт. с Дугиной ЮЛ, Хейфец И А, Боровской ТГ, Бородавкиной МВ, Марпошевым-Покладом А В, Сергеевой С А, Эпштейном О И ).

10 Афала в лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы. // Врачебное сословие. - №8, 2006. - С 47-49 (в соавт с Мартюшевым-Покладом А В, Качановой М.В., Дугиной Ю Л, Тарасовым СА, Эпштейном О И., Сергеевой С.А)

11 Клиническое исследование препарата афала в терапии доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Материалы V национального научно-медицинского конгресса «Здоровье человека» - Ереван, Армения, 2006 - С 219-220 (в соавт с Павловым В Н, Казихинуровым Р А, Фроловым MJO, Мухиным А Б, Удутом В В, Юрмазовым 3 А, Тарасовым С А, Сергеевой С А, Эпштейном О И)

12 Новые методологии в лечении доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Сборник научных трудов V региональной научно-практической конференции урологов Сибири - Томск, 2006 - С 252-254 (в соавт с Юрмазовым ЗА, Сергеевой С А, Эпштейном О И, Удутом В.В)

13 Результаты мультицентрового клинического исследования эффективности и безопасности афалы при доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Тез докл XIV Российского национального конгресса «Человек и лекарство» - Москва, 2007 - С 773 (в соавт с Павловым В Н, Удутом В В, Казихинуровым Р А, Юрмазовым 3 А, Фроловым М Ю, Мухиным А Б, Тарасовым СЛ, Сергеевой С А)

14 Новые возможности лекарственной терапии доброкачественной гиперплазии предстательной железы // Signatura. - №2, 2007 - С 81-86 (в соавт. с Качановой М В , Дугиной Ю JI, Тарасовым С.А, Эпштейном О И, Сергеевой С А)

Актуальность проблемы

Доброкачественная гиперплазия предстательной железы (ДГПЖ) является одним из наиболее распространенных заболеваний у мужчин пожилого возраста [71, 148]. Гистологические признаки ДГПЖ обнаруживаются более чем у 40% мужчин в возрасте 50 лет и более чем у 90% мужчин старше 80 лет. Те или иные клинические симптомы заболевания отмечаются у большинства мужчин старше 50 лет [61, 71, 117, 118]. Эпидемиологические исследования, проведенные в России, указывают на постепенное возрастание частоты ДГПЖ с 11,3% в возрасте 40-49 лет до 81,4% в возрасте 80 лет [14]. Таким образом, распространенность данного заболевания у мужчин является достаточно высокой и увеличивается с возрастом. Социальная значимость и актуальность проблемы подчеркиваются демографическими исследованиями ВОЗ, свидетельствующими о значительном росте населения планеты в возрасте старше 60 лет, темпы которого существенно опережают рост населения в целом.

Основными симптомами ДГПЖ являются симптомы нижних мочевых путей, которые могут значительно беспокоить больных и снижать качество их жизни [71, 117, 140]. В тяжелых случаях заболевание может сопровождаться развитием осложнений, таких как острая задержка мочи, инфекции мочевыводящих путей, гематурия, почечная недостаточность [47, 111, 117, 118]. ДГПЖ также ассоциирована с развитием эректильной дисфункции у пациентов [71, 81]. Высокая значимость заболевания для пациентов мужского пола (нарушение мочеиспускания, эректильная дисфункция, снижение качества жизни) в сочетании с его широкой распространенностью обосновывают актуальность разработки высокоэффективных и безопасных методов лечения ДГПЖ.

Среди существующих на сегодняшний день способов лечения ДГПЖ выделяют: оперативное лечение, физиотерапевтические методы и медикаментозную терапию [28, 119, 147]. Хирургическое лечение является высокоэффективным [147], однако, в связи с тем, что ДГГОК является преимущественно заболеванием пожилых мужчин, хирургический способ лечения может быть противопоказан ввиду наличия у пожилых пациентов сопутствующих заболеваний и высокого риска оперативного вмешательства. Поэтому в последние годы все большую популярность завоевывает медикаментозная терапия [112]. Фундаментальные открытия последних десятилетий в области исследований этиологии и патогенеза ДГПЖ позволили применить в лечении больных ДГПЖ различные фармакологические препараты. Успехи этого вида лечения оказались настолько высоки, что в наступившем XXI веке подавляющая часть больных ДГПЖ, возможно, будет лечиться медикаментозно с обеспечением высокого качества жизни [32]. Применение различных фармакологических препаратов позволило значительно сократить количество оперативных вмешательств у пациентов [57].

Несмотря на наличие большого количества лекарственных препаратов, предназначенных для лечения ДГПЖ, ни один из них не является идеальным и требует определения своего места в структуре лечения заболевания [45]. Выбор того или иного препарата и метода лечения в конкретном клиническом случае определяется балансом факторов эффективности и безопасности, в совокупности обеспечивающих поддержание необходимого уровня качества жизни пациента [71, 140].

В последние годы наблюдается возрастающий интерес исследователей к действию сверхмалых доз биологически активных веществ. В том числе получен ряд данных о фармакологической активности малых и сверхмалых доз лекарственных средств [5, 37, 63, 91, 92]. Эффекты сверхмалых доз описаны для разнообразных групп биологически активных веществ: гормонов, эндогенных регуляторных пептидов, некоторых непептидных веществ [44]. В последние годы проведен ряд исследований, показавших, что эффекты сверхмалых доз присущи и таким биологически активным молекулам, как антитела. Показано, что антитела в сверхмалых дозах модифицируют эффекты эндогенного регулятора, к которому они выработаны, а не подавляют его активность, как это свойственно антителам в физиологических концентрациях [51, 52]. К настоящему времени разработан и внедрен в клиническую практику ряд препаратов сверхмалых доз антител, предназначенных для профилактики и лечения различных заболеваний. Каждый из этих препаратов был изучен в экспериментальных и клинических исследованиях, в которых было продемонстрировано регулирующее влияние сверхмалых доз антител на функциональную активность соответствующего им антигена [53].

Цель исследования

Провести экспериментальное и клиническое исследование фармакологической активности и безопасности афалы (сверхмалые дозы антител к простатоспецифическому антигену).

Задачи исследования

1. Исследовать влияние афалы на предстательную железу неполовозрелых крыс-самцов и неполовозрелых гонадэктомированных крыс-самцов.

2. Исследовать фармакологическую активность афалы при остром и хроническом воспалении предстательной железы (на моделях острого и хронического асептического воспаления простаты у крыс).

3. Изучить фармакологическую активность афалы в условиях экспериментальной ДГПЖ (на модели гормон-индуцированного воспаления простаты у крыс).

4. Изучить безопасность (общетоксическое действие, репродуктивную токсичность, мутагенность, аллергизирующие и иммунотоксические свойства) афалы у различных видов животных.

5. Исследовать клиническую эффективность афалы у пациентов с ДГПЖ.

6. Оценить безопасность клинического применения афалы у пациентов с ДГПЖ.

Научная новизна полученных результатов

Впервые проведено экспериментальное и клиническое изучение фармакологической активности и безопасности препарата афала. Для препарата показано простатотропное действие, противовоспалительная активность, эффективность на модели ДГПЖ у животных. Изучены токсические свойства препарата у различных видов животных. Показана клиническая эффективность афалы у пациентов с ДГПЖ, а также его безопасность при назначении пациентам.

Простатотропное действие афалы показано у неполовозрелых крыс-самцов, а также у гонадэктомированных неполовозрелых крыс-самцов, получавших тестостерона пропионат. Введение афалы неполовозрелым крысам-самцам и гонадэктомированным неполовозрелым крысам-самцам, получавшим тестостерона пропионат, приводило к увеличению весового коэффициента вентральной доли простаты. Противовоспалительное действие афалы изучено на моделях острого и хронического асептического воспаления простаты у крыс. Введение препарата способствовало уменьшению гиперемии и отека ткани железы, увеличению содержания в ней ионов цинка, снижению выраженности атрофических изменений, улучшению показателей половой активности животных. На модели ДГПЖ у крыс-самцов показано, что афала способствовала снижению весового коэффициента боковой доли простаты, уменьшала выраженность гистологических изменений в ткани железы. Эффективность афалы была сопоставима с эффективностью экстракта Serenoa Repens.

Введение афалы не вызывало гибели экспериментальных животных, не нарушало функционального состояния и морфологии их внутренних органов, препарат не обладал репродуктивной токсичностью, мутагенностью, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами.

Клиническая эффективность афалы изучена у пациентов с ДГПЖ и умеренными нарушениями мочеиспускания. Назначение афалы пациентам способствовало улучшению показателей уродинамики, уменьшению выраженности симптомов нарушения мочеиспускания, повышению качества жизни пациентов.

Показана безопасность применения афалы у пациентов с ДГПЖ. Прием препарата не сопровождался развитием нежелательных побочных реакций.

Практическое значение работы

Материалы экспериментальных и клинических исследований афалы вошли в комплект документов, представленных в Федеральную службу по надзору в сфере здравоохранения и социального развития РФ с целью получения разрешения на медицинское применение препарата. Препарат афала разрешен к медицинскому применению на территории РФ (регистрационное удостоверение N 000371/01 от 13.10.2006 года).

Положения, выносимые на защиту

1. Афала обладает простатотропным действием (способствует увеличению весового коэффициента предстательной железы) у неполовозрелых крыс-самцов, а также у гонадэктомированных неполовозрелых крыс-самцов на фоне введения тестостерона пропионата.

2. Афала обладает противовоспалительным действием при остром и хроническом асептическом воспалении предстательной железы у крыс.

3. Афала препятствует увеличению боковой доли простаты, а также изменению ее гистологической структуры у крыс с экспериментальной ДГПЖ, индуцированной введением сульпирида.

4. При однократном введении животным в максимально допустимой по объему дозе, а также при хроническом введении в терапевтической и максимальной дозах афала не оказывет токсического воздействия.

5. Афала не обладает репродуктивной токсичностью, мутагенностью, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами.

6. При применении у пациентов с ДГПЖ и нарушениями мочеиспускания афала способствует улучшению клинического течения заболевания.

7. Назначение афалы пациентам с ДГПЖ не сопровождается развитием нежелательных побочных реакций.

ВЫВОДЫ

1. Афала обладала простатотропным действием у неполовозрелых крыс-самцов и неполовозрелых гонадэктомированных крыс-самцов, получавших тестостерона пропионат. Введение препарата способствовало увеличению весового коэффициента вентральной доли простаты.

2. Противовоспалительное действие афалы показано на моделях острого и хронического асептического воспаления предстательной железы у крыс. Введение препарата способствовало уменьшению выраженности воспалительных и атрофических изменений в ткани простаты, улучшению функционального состояния железы, повышению половой активности животных.

3. На модели гормон-индуцированного воспаления простаты у крыс установлено, что введение афалы препятствовало развитию гиперплазии боковой доли предстательной железы, снижало выраженность патологических изменений в ткани простаты, не влияло на уровень пролактина в плазме крови. Афала превосходила Serenoa Repens по способности препятствовать увеличению боковой доли простаты.

4. Изучение безопасности афалы у животных констатировало, что препарат не вызывал общетоксического действия, не обладал репродуктивной токсичностью, мутагенностью, иммунотоксическими и аллергизирующими свойствами.

5. Клиническое исследование афалы у пациентов с ДГПЖ и нарушениями мочеиспускания показало, что препарат обладал выраженной клинической эффективностью: улучшал показатели уродинамики, уменьшал выраженность симптомов нарушения мочеиспускания, повышал качество жизни пациентов.

6. Назначение афалы пациентам с ДГПЖ не сопровождалось развитием нежелательных побочных реакций.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Препарат афала может быть рекомендован для назначения пациентам с доброкачественной гиперплазией предстательной железы и умеренно выраженными нарушениями мочеиспускания с целью уменьшения выраженности симптомов заболевания и повышения качества жизни пациентов.