Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Действие лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона на популяцию тучных клеток и микроциркуляцию в ткани рога матки крысы (экспериментальное исследование)
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.16
Автореферат диссертации по медицине на тему Действие лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона на популяцию тучных клеток и микроциркуляцию в ткани рога матки крысы (экспериментальное исследование)
На правах рукописи
Шевцова Елена Юрьевна
Действие лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона на популяцию тучных клеток и микроциркуляцию в ткани рога матки (экспериментальное исследование)
14.00.16. - патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Челябинск•2004
Работа выполнена в Челябинском государственном институте лазерной хирургии Южно-Уральского научного центра Российской академии медицинских наук
Научный руководитель: Заслуженный деятель науки, доктор медицинских наук, профессор Попов Геннадий
Константинович
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор Юшков Борис
Германович
доктор медицинских наук, профессор
Брюхин Геннадий Васильевич
Ведущее учреждение:
Омская государственная медицинская академия
2004 г.
в_часов на заседании Диссертационного Совета Д 208.117.02.
в Челябинской государственной медицинской академии по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии Автореферат разослан «
2004 г.
Ученый секретарь диссертационного совета:
доктор медицинских наук, профессор
Кривохижина Людмила Владимировна
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы
В 70-90 годы в гинекологической практике начато широкое использование низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) для лечения острых и хронических воспалительных заболеваний женской половой сферы (Стрижаков А. Н. с соавт., 1989; Баранов В. Н. 1999; Далгат Д. М. с соавт., 1989; Корепанов В. И. 1995; Плетнёв С. Д. (ред.) 1996; Каплан М. А. с соавт. 1992). Авторы в этих работах применяют разные локализации, экспозиции, дозы облучения, продолжительность лечебного курса проводимого с использованием НИЛИ (Толстых П. И. с соавт., 1999 год). НИЛИ применяется также как и дополнение к традиционным консервативным и хирургическим методам лечения воспалительных процессов органов женской половой сферы. Анализ механизмов действия НИЛИ, накопленных в клинике и эксперименте, (Л. В. Тимошенко с соавт, 1985; Н. Ф. Гамалея, 1996; Л. Д. Заплавнова, 1996; В. И. Корепанов, 1995), связывает биологический эффект НИЛИ на ткань с активацией в ней энергообразующих процессов, различных ферментных систем, в том числе подавляющих липопереокисление и интенсивность свободнорадикальных реакций в клетках и клеточных органеллах. При действии НИЛИ на ткани улучшается их кровоснабжение. Воздействие НИЛИ на эрозию шейки матки у крыс, вызывает у подопытных животных гиперпродукцию эстрогенов, что объясняется воздействием НИЛИ на кожную рефлексогенную зону, вызывающим выброс либеринов из гипоталамуса, активацию ими секреции гонадотропинов гипофизом, стимулирующих фолликулярный аппарат яичников и продукцию эстрогенов (Тимошенко Л. В. с соавт., 1985).
Однако возможность реакции ТК популяции как источника биологически активных веществ, влияющих на регенерацию ткани, её трофику, поддержание кровотока, метаболизм и др. при воздействии НИЛИ на репродуктивную ткань у здоровых животных, также как и у животных с экспериментальной патологией внутренних половых органов практически не привлекала внимания исследователей. Между тем, исследования разных авторов (В. М. Черток с соавт., 1989; Г. К. Попов с соавт., 1998-2002; Л. И. Соловьёва, 2001; Т. П. Романова с соавт., 1993) убедительно доказали, что ТК брыжейки крыс вызывают интенсивную де-грануляцию на действие НИЛИ.
В доступной нам литературе мы встретили единичные работы по распределению тучных клеток в париетальной брюшине малого таза и маточных тру-
бах женщин, рогах матки у крыс и реагирование
низкоинтенсивного и высокоинтенсивного лазерного излучения (ВИЛИ) в указанных тканях животного в разные фазы астрального цикла. Эти знания могли бы послужить дополнительным экспериментальным обоснованием применению НИЛИ и ВИЛИ с лечебной целью в гинекологической практике, что и стало предметом исследования в нашей работе.
Цель исследования
Изучить влияние различных экспозиций и разных способов воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения на реакцию тучных клеток, состояние микроциркуляционного русла, активность металлсодержащих протеиназ в ткани рога матки и брюшине в различные фазы эстрального цикла у крыс с целью теоретического обоснования использования лазерного излучения при лечебных воздействиях в гинекологической практике.
Задачи исследования
1. Оценить реакцию тучных клеток в эндометрии и серозно-мышечном слое рога матки до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения в разные фазы эстрального цикла при облучении рога матки со стороны серозной оболочки, а также со стороны эндометрия.
2. Оценить сосудистую реакцию эндометрия и серозно-мышечного слоя рогов матки до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения в разные фазы эстрального цикла при воздействии НИЛИ на рог матки со стороны серозной оболочки, а также при воздействии НИЛИ со стороны эндометрия.
3. Провести исследование корреляционной зависимости между процентным содержанием, выраженностью дегрануляции тучных клеток и сосудистой реакцией ткани эндометрия и серозно-мышечного слоя маточных рогов крыс в разные фазы эстрального цикла после облучения рогов матки со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия.
4. Оценить в ткани париетальной брюшины реакцию тучных клеток в разные фазы эстрального цикла при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения на брюшину и при облучении рога матки со стороны эндометрия.
5. Оценить активность матриксных металлопротеиназ в ткани рогов матки и брюшины до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения при облучении брюшины и рогов матки со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия.
6. Разработать модель экспериментальной облитерации маточных рогов у крыс для создания возможности проведения операции реканализации маточных рогов с помощью высокоинтенсивного лазерного излучения.
7. Изучить ответ тучно-клеточной популяции и состояния капиллярного кровотока с помощью лазерной допплеровской флоуметрии до и после реканализации воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения облитериро-ванного маточного рога.
Научная новизна работы
Впервые установлены ответы тучно-клеточной популяции, сосудистого русла, активности матричных металлопротеиназ в ткани эндометрия и серозно-мышечном слое рогов матки, а также брюшины после воздействия на них низкоинтенсивного лазерного излучения со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия, произведённого в фазы пролиферации и секреции у здоровых крыс. Полученные данные показывают высокую корреляционную связь между интенсивностью дегрануляции тучных клеток и активации кровотока в тканях эндометрия и серозно-мышечного слоя рогов матки, как в фазу пролиферации, так и секреции. Максимальный эффект наблюдался в течение первых 5 минут воздействия НИЛИ. Увеличение экспозиции НИЛИ до от 10 до 20 минут снижало интенсивность этих процессов.
Реканализация облитерированного в эксперименте маточного рога с помощью ВИЛИ сопровождалась синхронным увеличением интенсивности дегра-нуляции тучных клеток и капиллярного кровотока. Снижение интенсивности дегрануляции тучных клеток к 30 дню наблюдения сочеталась с нормализацией кровотока в реканализированном маточном роге.
Практическая значимость работы
Экспериментально определена продолжительность экспозиции при облучении рога матки со стороны серозной оболочки и эндометрия в фазу секреции и пролиферации эстрального цикла, вызывающая наибольшую активацию тучно-клеточной популяции, изменение кровотока и секреции тканевых металло-протеиназ. Экспериментально обосновано значение реакции тучно-клеточной популяции при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения на ткань рога матки.
Предложена модель экспериментальной асептической облитерации маточного рога, и метод её реканализации с помощью высокоинтенсивного лазерного излучения.
Поданы заявки на два патента Российской Федерации: способ операции реканализации облитерированного маточного рога с помощью высокочастотного лазера (в эксперименте); способ усиления микроциркуляции в эндометрии с помощью низкоинтенсивного лазерного излучения. Результаты диссертационного исследования могут служить теоретической основой для более широкого внедрения низкоинтенсивного лазерного излучения в лечении воспалительных заболеваний женских половых органов, а также для, восстанавливающих проходимость маточных труб, операций с использованием высокоинтенсивных лазеров в клиническую практику.
Внедрение результатов исследования
Результаты исследований опубликованы в периодической медицинской печати, в тематических сборниках, используются в научно-исследовательской работе Челябинского государственного института лазерной хирургии. На основе теоретических положений диссертации предложены рекомендации по оптимальному применению низко-интенсивных и высокоинтенсивных лазеров в гинекологии в работе клинического отделения Челябинского государственного института лазерной хирургии; внедрены в учебный процесс кафедры хирургии УГМАДО в курс лекций по эндоскопии в гинекологии; в качестве экспериментальной модели внедрено в работу ПНИЛ экспериментальной и экологической физиологии системы крови, иммунологии и цитогенетики ЮУНЦ РАМН.
Апробация работы
Результаты исследований были доложены на III и IV научно-практических конференциях Челябинского государственного института лазерной хирургии, 2000, 2003; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные аспекты лазерной медицины» Москва - Калуга, 2002 г.
Основные положения, выносимые на защиту
1) Действие НИЛИ на ткань рога матки крысы вызывает быстро возникающую дегрануляцию ТК, ускорение тканевого кровотока и активацию
ферментов, обладающих коллагеназной активностью.
2) Выраженность дегрануляции тучных клеток и усиление кровотока в се-розно-мышечном слое и в эндометрии рога матки крысы под действием НИЛИ более выражена в фазу пролиферации, чем в фазу секреции.
3) Воздействие ВИЛИ восстанавливает просвет стенки облитерированного рога матки в пределах функционального слоя эндометрия, без нарушения его базального слоя.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ. Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы о полученных результатах, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, содержащего 49 отечественных и 108 зарубежных источников, приложения. Работа представлена на 158 страницах машинописного текста, иллюстрирована 57 рисунками и 38 таблицами.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.
Работа проведена на 182 половозрелых беспородных крысах-самках, в возрасте от 6 до 12 месяцев с массой тела 150-250 г, содержащихся в условиях вивария. Эвтаназия животных проводилась согласно приказу МЗ СССР №755 (Шалимов С. А. с соавт., 1989).
У всех исследованных животных определяли фазу эстрального цикла по гистологическим препаратам эндометрия рогов матки. Проэструс и эструс соответствовал фазе пролиферации, а метаэструс и диэструс - фазе секреции. Морфологическая картина вышеперечисленных стадий определялась в соответствии с морфологическими признаками, установленными для этих фаз цикла у мышей и крыс (Лагучев С. С, 1970).
Исследование тучных клеток маточных рогов и париетальной брюшины проводилось у 30 крыс группы интактного контроля (без воздействия лазера); у крыс, подвергнутых действию НИЛИ как со стороны серозной оболочки маточного рога (первая группа, 30 особей), так и со стороны эндометрия (вторая группа, 30 особей).
В работе использовали лазерный терапевтический аппарат «Улей-2 КМ», работающий в инфракрасном диапазоне и в импульсном режиме, длиной волны 890 нм. Дозы облучения (энергия) составили: 0,375Дж; 0,75Дж; 1,5Дж;7,5Дж; 15Дж; 30Дж. Экспозиции излучения составили 15, 30, 60 секунд, 5,10,20 минут. Лазерная энергия доставлялась после лапаротомии на неэкранированный рог матки и брюшину в указанном режиме через излучатель аппарата, расположенный перпендикулярно поверхности левого маточного рога и париетальной брюшины. Правый рог матки, кишечник и брюшину экранировали листом фольги (экранированная ткань-контроль).
При воздействии НИЛИ со стороны эндометрия на маточный рог использовали лазер «ALTO», с длиной волны 980 нм. Применялся импульсный режим воздействия. Дозы облучения (энергия) составили: 0,375Дж; 0,75Дж; 1,5Дж;7,5Дж; 15Дж; 30Дж. Экспозиции 15, 30, 60 секунд, 5, 10 и 20 минут. Лазерная энергия доставлялась через кварц - кварцевый световод с полиимид-ным покрытием, который вводился в рог через подготовленное в нём перфорационное отверстие. Световод фиксировали и осуществляли облучение слизистой эндометрия рога матки.
После воздействия НИЛИ излучатель и световод (в первой и второй группах животных) убирали и в брюшную полость заливали 10% раствор нейтрального формалина, где ткани фиксировались в течение 5 минут.
Крысам группы интактного контроля в брюшную полость заливали 10% раствор нейтрального формалина через 15, 30, 60 секунд, 5 10 и 20 минут после лапаротомии. Рога матки и париетальную брюшину извлекали, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин и изготавливали гистологические срезы толщиной 5 мкм, которые окрашивали гемотокси-лин-эозином, а толуидиновым-синим при РН=2,0 - для выявления тучных клеток и степени их дегрануляции.
Моделирование облитерации просвета маточных труб 27 крысам производили под наркозом после лапаротомии. Выделяли маточные рога и накладывали на каждый рог по 2 лигатуры на расстоянии 0,3 см друг от друга. Первая лигатура накладывалась на расстоянии 0,5-0,7 см от тела матки. Брюшную полость ушивали послойно наглухо. Через 30 суток достоверность облитерации маточного рога подтверждали гистологически и производили операцию рекана-лизации облитерированных маточных рогов. С этой целью рога матки выделяли из спаек, лигатуры с маточных рогов распускали и затем удаляли. Выше места облитерации на 0,5 см через перфорационное отверстие, в просвет рога
вводили световод. Реканапизацию считали достигнутой, когда световод проникал в свободную полость рога матки. Лазерное воздействие осуществляли диодным лазером, с длиной волны 980 нм с плотностью мощности 4,3 Вт/мм2 в импульсном режиме работы лазера (10 мс импульс, 40 мс пауза). Продолжительность действия лазерного луча на облитерированную ткань для рассечения спаек составила от 30 до 40 сек. После операции исследовали проходимость рогов матки и распределение в их тканях ТК, состояние сосудистого русла непосредственно сразу-же, через 24, 72 часа, на 15 и 30 сутки. О восстановлении проходимости рогов матки после реканализации судили по возможности рождения потомства у оперированных крыс. Спаривание проводили на 7-10 сутки после реканализации. Критерием восстановления проходимости маточных рогов явилось рождение потомства у 7 крыс из 10. Беременность протекала 22-23 дня.
Активность матриксных металлопротеиназ (ММП) в маточных рогах и брюшине у интактных крыс; 1 и 2 групп животных оценивали методом прямой зимографии после предварительного электрофореза белков гомогената тканей с использованием прибора для вертикального электрофореза «Хеликон» (Россия) в течение 2-х часов при напряжении постоянного тока 200 В. В качестве субстрата полиакриламидный гель с додецил-сульфатом натрия содержал 0,01% желатина. Затем гели инкубировали в 50mM Tris-CI буфере (рН 7,5) с добавлением CaCI2 при t370 в течение 16 часов. Полосы лизиса выявляли окраской 0,005% Cumassl бриллиантовым синим.
С помощью лазерного анализатора капиллярного кровотока ЛАКК-01, в основе которого лежит метод лазерной допплеровской флуорометрии, исследовали характер микроциркуляции (по В. И. Козлову с соавт., 2002 г.) в ткани рога матки у интактных крыс, а также у животных до реканализации рога матки и после реканализации: непосредственно сразу же после воздействия ВИЛИ и через 1, 3,15, 30 суток (исследовалось всего 35 животных).
Оценка каждого гистологического препарата производилась при помощи светового микроскопа DMRXA фирмы Leica, работающего как в иммерсионном режиме при увеличении хЮОО, так и при увеличениях х200, х400 без иммерсии. Обработка изображения гистологических препаратов производилась по пакету компьютерной программы Диаморф Цито®.
Тучные клетки подсчитывались в 100 полях зрения при увеличении х1000, их «целые» (недегранулированные) и дегранулированные формы с учётом выраженности степени дегрануляции. Выделялись следующие формы тучных
клеток: 1) недегранулированные тучные клетки; 2) слабодегранулированные ТК (количество выделившихся гранул до 10, тип дегрануляции апокриновый, 1 степень); 3) выраженная дефануляция (количество выделившихся гранул более 10, преобладает апокриновый, но встречается и голокриновый тип дегрануляции, 2 степень); 4) тотальная дефануляция (3 степень) (Соловьёва Л. И. с соавт., 1998). Определяли характеристики тучных клеток: площадь тучных клеток; показатели интефальной плотности и оптического пропускания оценивали по пакету комплекта компьютерных профамм Microsoft Excel 2000, Диаморф Цито®. Общий индекс дегрануляции ТК и индекс дефануляции по её степеням определяли по формулам.
С целью объективизации морфологических критериев в гистологических препаратах с помощью комплекта компьютерных профамм Microsoft Excel 2000, Диаморф Цито®, Диаморф Ипсо® определяли среднюю площадь сосудов всех слоев стенки рога матки, а также относительную площадь сосудистого русла в этих слоях в различные фазы эстрального цикла.
Полученные результаты исследования подвергали статистической обработке и осуществлялись с помощью комплекта компьютерных программ Microsoft Excel 2000, Диаморф Цито®, Диаморф Ипсо®., т. е. определялись среднее значение признаков М, среднеквадратичное отклонение а, средняя ошибка сравниваемых величин ml и т2, коэффициент достоверности t, доверительная вероятность Р, доверительный интервал Ip. Каждая фуппа количественных характеристик содержала не менее 5 значений. Различия между группами считали достоверными при р < 0,05.
Для изучения взаимосвязи между количественными характеристиками клеточных популяций использовался корреляционный анализ. Вычислялся показатель линейной корреляционной связи Пирсона г с использованием z поправки. Степень корреляции считалась сильной при величине коэффициента корреляции от 0,8 до 1,0, средней - от 0,5 до 0,8, слабой - от 0 до 0,5. Для определения статистической значимости полученных результатов был использован од-нофакторный дисперсионный анализ (Гланц С, 1998).
Результаты собственных исследований
Результаты проведённых нами исследований показали, что ответ на НИЛИ тучно клеточной популяции и микроциркуляции рогов тканей матки имеет существенные особенности в разные фазы эстрального цикла.
Так, процентное содержание ТК в тканях всех слоев маточных рогов в фазу пролиферации у интактных животных значительно отличается от распределения ТК в фазу секреции (рис. 1).
Рис. 1. Состав популяции тучных клеток маточных рогов интактных крыс в зависимости от фазы эс-трального цикла.
В фазу пролиферации процентное содержание недегранулированных ТК достигало 50%, а в фазу секреции оно оказывалось уменьшенным вдвое с одновременным увеличением доли дегранулированных ТК второй и третьей степени. Вероятно, в силу этих особенностей, ответ на действие НИЛИ тучно-клеточной популяции также различается: выраженность дегрануляции ТК оказывается больше у интактных животных в фазу секреции, чем в фазу пролиферации.
Рис. 2. Динамика процентного соотношения неде-гранулированных и дегранулировн-ных тучных клеток в облучённом маточном роге в фазу пролиферации.
КОКфОНЬ
время лазерного воздействия
Д яедеграиул О I стслсиь □ 2 степень Ш 3 стспс>о»
Рис. 3. Динамика процентного соотношения неде-гранулированных и дегранулировн-ных тучных клеток в облучённом маточном роге в фазу секреции.
Так, уменьшение содержания недегранулированных форм ТК в фазу секреции отмечается уже через 15 секунд воздействия и к 30 секунде содержание недегранулированных уменьшается почти до 5%. В фазу пролиферации ответ ТК популяции регистрировался лишь на 30 секунду воздействия НИЛИ и характеризовался уменьшением недегранулированных ТК до 5 минуты воздействия НИЛИ (рис. 2; рис. 3).
Столь же характерными были различия в изменении средней площади ТК после воздействия НИЛИ в фазу пролиферации и секреции (рис. 4; рис. 5).
Рис. 4. Средняя площадь тучных клеток в облучённом маточном роге в фазу пролиферации в зависимости от времени лазерного воздействия.
интахтный 15 секунд 30 секунд 1 минута 5 минут 10 минут 20 минут контроль
время лазерного воздействия
' Я недегранул. □ 1 степень □ 2 степень ■ 3 степень |
Рис. 5. Средняя плошадь тучных клеток в облучённом маточном роге в фазу секреции в зависимости от времени лазерного воздействия.
Так, в фазу секреции увеличение средней площади недегранулированных ТК, ТК 1-й и 2-й степени дегрануляции отмечалось уже через 15 секунд лазерного воздействия и было больше выражено, чем в фазу пролиферации: увеличение средней площади ТК после воздействия НИЛИ в фазу пролиферации отмечалось лишь через 1 минуту и только для ТК 3-й степени.
Общий индекс дегрануляции ТК в ткани маточных рогов у интактных крыс также различается в разные фазы цикла: в фазу секреции он составил 0,73±0,03, а в фазу пролиферации 0,49+0,02. После воздействия НИЛИ его увеличение до 30 сек было более выражено в фазу секреции, в дальнейшем вплоть до 20 минуты наблюдения в обе фазы цикла его значения оставались высокими.
Исследование сосудистой реакции в ответ на НИЛИ, в эндометрии и серозной оболочке в разные фазы эстрального цикла показало что в эндометрии средняя площадь сосудов с 30 по 5 минуту увеличивалась и в фазу пролиферации, и в фазу секреции (рис. 6; рис. 7).
Рис. 6. Средняя площадь сосудов эндометрия при воздействии НИЛИ на серозную оболочку в разные фазы эстрального цикла при заданных экспозициях.
Рис. 7. Средняя площадь сосудов серозно-мышечного слоя при воздействии НИЛИ на серозную оболочку в разные фазы астрального цикла при заданных экспозициях.
В промежутке с 10-й по 20-ю минуту действия НИЛИ сосудистая реакция в эндометрии в обе фазы астрального цикла оказывалась синхронно сниженной по сравнению с интактным контролем. В серозной-же оболочке рога матки сосудистая реакция в фазу пролиферации была значительней выражена, чем в фазу секреции: после первой минуты действия НИЛИ средняя площадь сосудов серозной оболочки маточных рогов в фазу пролиферации достигло 3500,8±176 мкм2, а в фазу секреции - 1357,7±66 мкм2. Такая же разница в реакции сосудистой сети серозной оболочки на действие НИЛИ сохранялась на 5-ю минуту и в фазе секреции, и в фазе пролиферации.
Относительная площадь сосудистой сети увеличивалась при коротких сроках облучения НИЛИ (от 30 с до 1 минуты) независимо от фазы цикла и в эндометрии, и в серозно-мышечном слое, а затем начинала постепенно уменьшаться до значений ниже интактных образцов. Исключение составила реакция сосудов эндометрия в фазе пролиферации, где происходило неуклонное нарастание этого показателя до 20 минуты воздействия.
Уменьшение средней площади по-видимому, связано с увеличением кровотока в делятированных мелких кровеносных сосудах. Соответственно, увеличение относительной площади сосудистого русла связывается с дилятацией сосудов более крупного калибра.
Таким образом, наиболее выраженные ответы, обнаруживающие высокую корреляционную связь между тучно-клеточной популяцией и сосудистым руслом тканей рогов матки при воздействии НИЛИ проявляются в фазу пролиферации (рис. 8).
Рис. 8. Корреляционные связи между площадью сосудов эндометрия, облученного НИЛИ маточного рога со стороны серозной оболочки и относительным количеством тучных клеток во второй степени де-грануляции в фазе пролиферации.
Ответ сосудов эндометрия на действие НИЛИ в фазу секреции не коррелируют с изменениями в содержании ТК, что позволяет предположить наличие и других механизмов, регулирующих кровоток в эндометрии, и включающихся при действии НИЛИ в эту фазу эстрального цикла.
Воздействие НИЛИ на ткани рога матки со стороны эндометрия вызывало разный ответ в составе популяции ТК в фазе пролиферации и секреции. В фазу пролиферации имело место нарастание выраженности дегрануляции ТК в облучённых тканях маточного рога (рис. 9, рис. 10).
Рис. 9. Процентный состав популяции тучных клеток в облученном НИЛИ маточном роге со стороны эндометрия в фазу пролиферации.
2500 45
1 2000 • 1500 1000 ■ / ✓ А --— О • 40 ■ 35 ■ 30 20 - 15
500 • ■ 10 - 5
иктястшй 15свкуед ЗОсвкуид 1 минута Ьмл'уТ Юмту* 20шмут контроль экспозиция лазерного воздействия
|— — средняя площадь сосудов —•— % ТК 2-й степени дегранутоции |
интактный 15 секунд 30 секунд 1 минута 5 минут 10 минут 20 минут контроль
экспозиция лазерного воздействия
00 недегранул Р 1 степень П 2 степень ■ 3 степень I
Рис 10 Процентный состав популяции тучных клеток в облученном НИЛИ маточном роге со стороны эндометрия в фазу секреции
Напротив, в фазу секреции облучение рога со стороны эндометрия вызывало увеличение процентного содержания недегранулированных ТК в облученном маточном роге практически на протяжении всего воздействия НИЛИ. Одновременно, снижалась и выраженность дегрануляции ТК 2-й и 3-й степени.
Средняя площадь сосудов маточного рога при воздействии НИЛИ со стороны эндометрия в фазу пролиферации в ткани эндометрия нарастала с 5-й минуты воздействия НИЛИ и до 20-й мин эксперимента превосходила уровень интактного контроля. В фазу секреции средняя площадь сосудов в эндометрии, с 1-й по 20-ю минуту действия НИЛИ, в 2-2,5 раза была меньше, чем у интактного контроля (рис. 11)
Рис 11. Средняя площадь сосудов эндометрия в облученном НИЛИ маточном роге со стороны эндометрия в разные фазы эст-рального цикла
5000
Рис. 12. Средняя плошадь сосудов серозно-
4000
гЬ
1
3000
мышечного слоя в облучённом
2000
1000
Е
НИЛИ маточном роге со стороны эндометрия в
о
ингактмый 15свк>нд 30е«кумд 1 минуп 5 минут 10 минут 20 минут контроль
экспозиция лазерного воздействия
разные фазы астрального цикла.
В пролиферация О секреция ]
Для сосудов серозно-мышечного слоя (рис. 12), напротив, преобладающим в течение всего эксперимента, проводимого в фазу пролиферации, было характерным уменьшением средней площади сосудов, особенно выраженное на 20 минуту действия НИЛИ. Однако расчёт отношения площади сосудистой сети к площади гистологического препарата обнаружил увеличение значений показателя в промежутке с 10-й по 20-ю минуты эксперимента, что свидетельствует не об уменьшении кровонаполнения, а об увеличении числа сосудов мелкого калибра, через которые осуществляется кровоток в этой ткани.
Напротив, величина средней площади сосудов в серозно-мышечном слое в фазу секреции характеризовалась значительным нарастанием с 15 сек воздействия НИЛИ, и в 2-3 раза превышавшим интактный контроль.
В фазу пролиферации при воздействии НИЛИ со стороны эндометрия были получены высокие значения корреляционных взаимосвязей: положительных между ТК 1 -й и 2-й степенью дегрануляции и площадью сосудов серозно- мышечного слоя (рис. 13) (при уменьшении количества ТК 1-й степени средняя площадь сосудов возрастает) и отрицательных между ТК 1-й и 3-й степенью дегрануляции и площадью сосудов серозно-мышечного слоя и эндометрия.
Рис. 13. Корреляционные взаимосвязи между относительным содержанием тучных клеток 2-й степени дегрануляции и средней площадью сосудов эндометрия при лазерном воздействии на маточный рог со стороны эндометрия в фазу проли-- ферации.
В фазу же секреции не было выявлено значимых корреляционных зависимостей между разной степенью дегрануляции ТК и изменением площади сосудов, как в эндометрии, так и в серозной оболочке при воздействии НИЛИ со стороны эндометрия.
Исследования популяции ТК в ткани брюшины подтвердило тканево-специфическое распределение ТК в ткани рогов матки крыс, так как в отличие от ткани брюшины процентное распределение ТК не зависело в разные фазы эстрального цикла. Вместе с тем, как непосредственно воздействие НИЛИ на париетальную брюшину, так и воздействие НИЛИ на рог матки со стороны эндометрия, также вызывало дегрануляцию ТК с отчётливым нарастанием процентного содержания ТК 2-й и 3-й степени дегрануляции, увеличивало среднюю площадь ТК.
Это наблюдение позволяет, на наш взгляд, сделать вывод о том, что воздействие НИЛИ вызывает сходное действие на ТК популяцию не зависимо от её тканевого распределения.
В целом ответ популяции ТК на воздействие НИЛИ на рог матки со стороны эндометрия был менее выражен, чем при облучении рога матки со стороны серозной оболочки. Возможно, это связано с частичным поглощением энергии излучения НИЛИ тканями эндометрия рога матки.
Изучение активности матриксных металлопротеиназ показало, что воздействие НИЛИ на ткань рога матки, как со стороны серозной оболочки, так и со стороны эндометрия, вызывало активацию матриксных металлопротеиназ, в том числе латентных фракций ММП2. Сходные изменения активности ММРП наблюдались и в ткани брюшины при обеих вариантах воздействия НИЛИ на
ткань рога матки. Это позволяет полагать, что эффекты ММП, стимулируемые воздействием НИЛИ и связанные с их коллагеназной активностью, участием в репаративных процессах и неоангиогенезе, могут быть важным элементом положительного действия НИЛИ при лечении воспалительных заболеваний придатков матки.
Таким образом, полученные нами данные позволяют утверждать, что важным звеном действия НИЛИ на ткань рогов матки крыс в здоровом животном организме является активация функции ТК популяции, характеризующаяся быстро возникающей дегрануляцией ТК и секрецией ими соединений, ускоряющих тканевой кровоток и активирующих ферменты, обладающие коллагеназной активностью. Наиболее выраженное действие НИЛИ на тучно-клеточную популяцию проявляется при его воздействии на рог матки со стороны серозной оболочки, чем со стороны эндометрия. Скорее всего это связано с большим содержанием ТК в рыхлой соединительной ткани серозно-мышечного слоя матки, чем в эндометрии. Кроме того, при внутриполостном облучении рога матки, лазерный пучок, идёт параллельно слою эндометрия, при этом может иметь место своеобразное «экранирование» низкоинтенсивного лазерного излучения тканью эндометрия и мышечным слоем места локализации основой массы ТК в роге матки. В то же время при воздействии НИЛИ со стороны серозной оболочки в фазу пролиферации, т. е. в период наибольшей секреции эстрогенов выраженность согласованного ответа ТК популяции и сосудистого русла как в се-розно-мышечном слое, так и в эндометрии была выражена ярче, чем в фазу секреции. Вероятно, насыщение тканей рога матки эстрогенами повышает чувствительность ТК и, возможно, сосудов микроциркуляционного русла к НИЛИ.
При воспроизведении операции реканализации облитерированного маточного рога с помощью ВИЛИ нами ставилась задача исследовать эффективность данного излучения (мощность, экспозиция) при реканализации рога, но одновременно мы изучили влияние данного лазерного воздействия на распределение ТК и характер капиллярного кровотока в реканализированном маточном роге. Результаты наших наблюдений показывают, что после воздействия ВИЛИ на стенки облитерированного рога, восстановившего его просвет, начиная с 1-й минуты по 30 сутки после действия ВИЛИ, наблюдается выраженная ТК реакция, характеризующаяся нарастанием в ткани процентным содержанием ТК 2-й и 3-й степени дегрануляции на протяжении всего этого периода. Общий индекс ТК в стенке маточного рога восстанавливался к 30 суткам, когда происходило относительное восстановление эндометрия реканализированного
рога. В нем восстанавливалось строение эпителия, соответствующее разным фазам астрального цикла, но ткань маточного рога характеризовалась ещё полнокровием серозно-мышечного слоя. У 7 крыс из 10 животных, которым проводилась реканализация, родилось потомство. Беременность протекала 22-23 дня.
Восстановление регуляции капиллярного кровотока по данным лазерной доплеровской флуометрии наблюдалось к 30 суткам после реканализации рога матки.
Таким образом, важной особенностью воздействия ВИЛИ на ткань облите-рированного рога матки являлось поражение тканей в пределах функционального слоя эндометрия, без нарушения базального слоя с одновременной стимуляцией регенераторных процессов.
ВЫВОДЫ
1) Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на ткань маточных рогов в здоровом организме животного вызывает быстро возникающую дегра-нуляцию тучных клеток и секрецию ими соединений, ускоряющих тканевой кровоток и активацию ферментов, обладающих коллагеназной активностью. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на тучно-клеточную популяцию наиболее выражено проявляется при его воздействии на рог матки со стороны серозной оболочки, чем со стороны эндометрия.
2) При воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения со стороны серозной оболочки или эндометрия в фазу пролиферации выраженность де-грануляции тучных клеток и усиление кровотока и в серозно-мышечном слое, и в эндометрии была выражена ярче, чем в фазу секреции.
3) Ответ сосудов эндометрия на действие низкоинтенсивного лазерного излучения в фазу секреции не коррелируют с изменениями в содержании тучных клеток, что указывает функционирование и других механизмов, регулирующих кровоток в эндометрии, и включающихся при действии низкоинтенсивного лазерного излучения в эту фазу эстрального цикла.
4) В брюшине процентное распределение тучных клеток остаётся постоянным в разные фазы эстрального цикла и отличается от процентного распределения тучных клеток у интактных животных в ткани маточного рога.
5) Создана модель облитерации маточного рога у крыс, что позволит применять этот метод в дальнейшем для проведения научных исследований в эксперименте.
6) Важным достоинством воздействия высокоинтенсивного лазерного излучения на ткань облитерированного рога матки является поверхностное поражение тканей эндометрия рога матки лазерным пучком, т. е. в пределах функционального слоя эндометрия, без нарушения его базального слоя с одновременной стимуляцией восстановления его ткани.
7) После воздействия высокоинтенсивного лазерного излучения, восстанавливающего просвет стенки облитерированного рога, возникает выраженная тучно-клеточная реакция, характеризующаяся высоким процентным содержанием тучных клеток в ткани 2-й и 3-й степени дегрануляции.
8) Снижение интенсивности дегрануляции тучных клеток в ткани рога после воздействия высокоинтенсивным лазерным излучением закономерно сопровождалась возвращением частотных ритмов, характеризующих кровоток, к значениям, зарегистрированных у интактных животных.
9) Оптимальные эффекты действия лазерного излучения на тучные клетки, протеолитическую активность и микроциркуляцию репродуктивной системы крыс представляют собой базис для апробации данного метода в лечении различного вида патологии в гинекологии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1) Полученные в эксперименте данные дают нам основание считать, что действие низкоинтенсивного лазерного излучения усиливает кровообращение в эндометрии путём дегрануляции тучных клеток. Чёткая зависимость между реакцией тучно-клеточной популяции и микроциркуляции прослеживается только в фазу пролиферации, что позволяет рекомендовать проводить лечение низкоинтенсивным лазерным облучением с целью усиления кровотока в органах малого таза в фазу пролиферации.
2) Под действием высокоинтенсивного лазерного излучения осуществляется реканализация облитерированного маточного рога с восстановлением функционального слоя эндометрия и реакцией тучно-клеточной популяции.
3) Созданная модель облитерации маточного рога применима для проведения научных исследований в эксперименте.
СПИСОК НАУЧНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Захарова Е. Ю. О воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения на популяцию тучных клеток в здоровых тканях маточных рогов крыс /Е. Ю. Захарова // Лазерные технологии в медицине: Сб. науч. работ сотр. Челяб. гос. ин-та лазер хирургии, - Челябинск, 2001, - Вып. 3 -С. 144-151.
2. Реакция тучных клеток половой ткани у крыс на воздействие низкоинтенсивного лазерного излучения / Е. Ю. Захарова, Г. К. Попов, Ж. А. Голощапова // Актуальные аспекты лазерной медицины: Материалы Всерос. науч -практ. конф. Москва - Калуга, 2002. - М , 2002. -С. 419-421.
3. Захарова Е. Ю. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на характеристику тучных клеток в серозных оболочках брюшины и маточных рогов у крыс / Е. Ю. Захарова, Ж. А. Голощапова, Л. В. Астахова/Лазерные технологии в медицине: Сб. науч. работ сотр. Челяб. гос. ин-та лазер. хирургии, - Челябинск, 2003, - Вып. 4 - С. 242-249.
4. Шевцова Е. Ю. Реакция тучно-клеточной популяции и микроциркуляции в эндометрии маточных рогов крысы на действие лазера в ближнем инфракрасном диапазоне в разные фазы астрального цикла / Е. Ю. Шевцова, Ж. А. Голощапова, Л. В. Астахова // Известия Челябинского научного центра УрО РАН. - 2004. - №2. -http ://www.sci. urc.ac. ru/news/2004/.
5. Шевцова Е. Ю. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на активность матриксных металлопротеиназ ткани рогов матки и париетальной брюшины крысы / Е. Ю Шевцова, Г. К. Попов, Е. С. Головнева// Вестник Южно-Уральского государственного университета. - 2004. -№ 6. - С.50-55.
На правах рукописи
Шевцова Елена Юрьевна
Действие лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона на популяцию тучных клеток и микроциркуляцию в ткани рога матки (экспериментальное исследование)
14.00.16. - патологическая физиология
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Подписано в печать 31 03.04. Формат 60x84 1Лб Печать оперативная. Печ. л. 1 Заказ 431 Тираж 100 экз.
Отпечатано в издательском центре НТЦ-НИИОГР ИД 00365 от 29.10.99 454080, Челябинск, пр. Ленина, 83-408 Тел.: (351-2) 653-652
»-8 192
Оглавление диссертации Шевцова, Елена Юрьевна :: 2004 :: Челябинск
Принятые сокращения.
Введение.
Глава 1. Обзор литературы.
1.1. Терапевтическое использование низкоинтенсивного лазерного излучения и хирургическое использование высокоинтенсивного лазерного излучения при воспалительных заболеваниях женских половых органов.
1.1.1. Биологические эффекты НИЛИ и ВИЛИ.
1.2. Морфофункциональная характеристика тучных клеток.
1.2.1. Локализация тучных клеток в тканях и органах.
1.2.2. Влияние продуктов секреции тучных клеток на пролиферацию, ангиогенез, иммунитет, аллергические реакции, воспаление и другие процессы.
1.2.3. Локализация и роль тучных клеток в репродуктивной системе женского организма.
Введение диссертации по теме "Патологическая физиология", Шевцова, Елена Юрьевна, автореферат
Актуальность проблемы
В 70-90 годы в гинекологической практике начато широкое использование низкоинтенсивного лазерного излучения (НИЛИ) для лечения острых и хронических воспалительных заболеваний матки и придатков (эндометриты, сальпингоофориты, сальпингиты, пельвиоперитониты) (Стрижаков А. Н. с соавт., 1989), т. к. эта проблема является по-прежнему актуальной в современной гинекологии: страдания этой группы занимают 1 место в структуре гинекологической заболеваемости (Медведев Б. И. с соавт., 2001). Опыт указанных лечебных мероприятий накоплен в различных лечебных учреждениях России (Баранов В. Н. 1999 год; Далгат Д. М. с соавт., 1989; Корепанов В. И. 1995; Плетнёв С. Д. (ред.) 1996; Каплан М. А. с соавт., 1992). Вместе с тем, в этих работах обращает на себя внимание разнообразность применяемых разными авторами локализаций, экспозиций, доз облучения, продолжительность проводимого с использованием НИЛИ лечебного курса при указанных заболеваниях (Толстых П. И. с соавт., 1999 год). НИЛИ применяется также как дополнение к традиционным хирургическим и консервативным методам лечения воспалительных процессов органов женской половой сферы. Анализ механизмов действия НИЛИ, накопленного в клинике и эксперименте (Л.В. Тимошенко с соавт, 1985; Н.Ф. Гамалея, 1996; Л.Д. Заплавнова, 1996; В.И. Корепанов, 1995), связывает биологический эффект НИЛИ на ткань с активацией в ней энергообразующих процессов, различных ферментных систем, в том числе подавляющих липопереокисление и интенсивности свободнорадикальных реакций в клетках и клеточных органеллах. Характерным ответом тканей на действие НИЛИ являются улучшение их кровоснабжения. Данные экспериментов, полученные при облучении НИЛИ эрозии шейки матки у крыс обнаружили не только локальные изменения в облучённой части ткани подопытных животных, но сочетанную с ней гиперпродукцию эстрогенов, что объясняется воздействием НИЛИ на кожную рефлексогенную зону, вызывающим выброс либеринов из гипоталамуса, активацию ими секреции гонадотропинов гипофизом, стимулирующих фолликулярный аппарат яичников и продукцию эстрогенов (Тимошенко Л. В. с соавт., 1985).
Однако возможность реакции тучно-клеточной популяции как источника биологически активных веществ, влияющих на регенерацию ткани, её трофику, поддержание кровотока, метаболизм и др. при воздействии НИЛИ на репродуктивные органы у здоровых животных, также как и у животных с экспериментальной патологией органов внутренней половой сферы практически не привлекала внимания исследователей. Между тем, исследования (В.М. Черток с соавт., 1989; Г. К. Попов с соавт., 2002; Л.И.Соловьёва, 2001; Т. П. Романова с соавт., 1993) убедительно доказали, что ТК брыжейки крыс отвечают интенсивной дегрануляцией на действие НИЛИ. Для неё характерен выраженный экзоцитоз гранул ТК, степень выраженности которого зависит от мощности НИЛИ. Оптимум этой реакции проявляется при лазерном облучении мощностью 18-25 мВт и при продолжительности облучения 15-120 сек (Соловьёва Л.И., 2001). Этим же автором установлено, что дегрануляция ТК представляет собой Са2+ зависимый процесс, который опосредуется через активацию Са2+каналов и как следствие освобождения Са2+ из саркоплазматического ретикулума.
В доступной нам литературе мы встретили единичные работы по распределению тучных клеток в париетальной брюшине малого таза и маточных трубах женщин, рогах матки у крыс и реагирование этих клеток на воздействие низкоинтенсивного и высокоинтенсивного лазерного излучения (ВИЛИ) в указанных тканях животного в разные фазы эстрального цикла. Не установлены эффекты НИЛИ и его оптимальные дозы, способные воздействовать на различные функции этих клеток в тканях внутренних половых органов экспериментальных животных. Так, в имеющихся в литературе материалах, отсутствует описание закономерностей тучно-кпеточной реакции различных тканей внутренних половых органов животных, в частности, эндометрия и серозно-мышечного слоя рогов матки у крыс, возникающей как реакция на воздействие НИЛИ. Отсутствует описание данной реакции при разной экспозиции НИЛИ, разных доз облучения, произведённого в разные фазы эстрального цикла. Отсутствуют представления о характере ответов тучно-клеточной популяции различной направленности действия НИЛИ на ткань рогов матки как со стороны серозной оболочки, так и со стороны эндометрия, что может иметь значение для ослабления лазерного излучения, действующего на ткань (Александров М.Т. с соавт., 2000). В литературе отсутствуют экспериментальные данные о возможном сочетанном характере ответа тучно-клеточной популяции, микроциркуляции, активности ферментов в различных тканях рогов и теле матки крыс после воздействия НИЛИ и особенность таких ответов данных тканей в разные фазы эстрального цикла животного. В литературе отсутствует также, оценка возможного сочетанного характера ответа тучно-клеточной популяции, кровотока и метаболизма в маточных рогах крысы, подвергнутого действию высокоинтенсивного лазерного излучения (ВИЛИ), применённого с целью реканализации облитерированного рога матки. Эти знания могли бы послужить дополнительным экспериментальным обоснованием применению НИЛИ и ВИЛИ с лечебной целью в гинекологической практике. Эти вопросы и стали предметом исследования в нашей работе.
Цели исследования
Изучить влияние различных экспозиций и разных способов воздействия лазерного излучения на реакцию тучных клеток, состояние микроциркуляторного русла, активность металлосодержащих протеиназ в ткани рога матки и париетальной брюшине в различные фазы эстрального цикла у крыс с целью теоретического обоснования использования лазерного излучения при лечебных воздействиях в гинекологической практике.
Задачи исследования
1. Оценить реакцию тучных клеток в эндометрии и серозно-мышечном слое рога матки до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения в разные фазы эстрального цикла при облучении рога матки со стороны серозной оболочки, а также со стороны эндометрия.
2. Оценить сосудистую реакцию эндометрия и серозно-мышечного слоя рогов матки до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения в разные фазы эстрального цикла при воздействии НИЛИ на рог матки со стороны серозной оболочки, а также при воздействии НИЛИ со стороны эндометрия.
3. Провести исследование корреляционной зависимости между процентным содержанием, выраженностью дегрануляции тучных клеток и сосудистой реакцией ткани эндометрия и серозно-мышечного слоя маточных рогов крыс в разные фазы эстрального цикла после облучения рогов матки со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия.
4. Оценить в ткани париетальной брюшины реакцию тучных клеток в разные фазы эстрального цикла при воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения на брюшину и при облучении рога матки со стороны эндометрия.
5. Оценить активность матриксных металлопротеиназ в ткани рогов матки и брюшины до и после воздействия низкоинтенсивного лазерного излучения при облучении брюшины и рогов матки со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия.
6. Разработать модель экспериментальной облитерации маточных рогов у крыс для создания возможности проведения операции реканализации маточных рогов с помощью высокоинтенсивного лазерного излучения.
7. Изучить ответ тучно-клеточной популяции и состояния капиллярного кровотока с помощью лазерной допплеровской флоуметрии до и после реканализации воздействием высокоинтенсивного лазерного излучения облитерированного маточного рога.
Научная новизна работы
Впервые установлены ответы тучно-клеточной популяции, сосудистого русла, активности матричных металлопротеиназ в ткани эндометрия и серозно-мышечном слое рогов матки, а также брюшины после воздействия на них НИЛИ со стороны серозной оболочки и со стороны эндометрия, произведённого в фазы пролиферации и секреции у здоровых крыс. Полученные данные показывают высокую корреляционную связь между интенсивностью дегрануляции тучных клеток и активации кровотока в тканях эндометрия и серозно-мышечного слоя рогов матки, как в фазу пролиферации, так и секреции. Максимальный эффект наблюдался в течение первых 5 минут воздействия НИЛИ. Увеличение экспозиции НИЛИ до 10-20 минут снижало интенсивность этих процессов.
Реканализация облитерированного в эксперименте маточного рога с помощью ВИЛИ, сопровождалась синхронным увеличением интенсивности дегрануляции ТК и капиллярного кровотока. Снижение интенсивности дегрануляции ТК к 30 дню наблюдения сочеталась с нормализацией кровотока в реканализированном маточном роге.
Практическая значимость работы
Экспериментально определена продолжительность экспозиции при облучение рога матки со стороны серозной оболочки и эндометрия в фазу секреции и пролиферации эстрального цикла, вызывающая наибольшую активацию тучно-клеточной популяции, изменение кровотока и секреции тканевых металлопротеиназ. Экспериментально обосновано значение реакции тучно-клеточной популяции при воздействии НИЛИ на ткань рога матки.
Предложена модель экспериментальной асептической облитерации маточного рога, и метод её реканализации с помощью ВИЛИ. Получена приоритетная справка на изобретение: способ восстановления проходимости маточных труб с применением лазерного излучения №2004113586/14(014474) от 30.04.2004. Результаты диссертационного исследования могут служить теоретической основой для более широкого внедрения низкоинтенсивного лазерного излучения в лечении воспалительных заболеваний женских половых органов, а также для, восстанавливающих проходимость маточных труб, операций с использованием высокоинтенсивных лазеров в клиническую практику.
Внедрение результатов
Результаты исследований опубликованы в периодической медицинской печати, в тематических сборниках, используются в научно-исследовательской работе Челябинского государственного института лазерной хирургии. На основе теоретических положений диссертации предложены рекомендации по оптимальному применению низкоинтенсивных и высокоинтенсивных лазеров в гинекологии в работе клинического отделения Челябинского государственного института лазерной хирургии; внедрены в учебный процесс кафедры хирургии УГМАДО в курс лекций по эндоскопии в гинекологии; в качестве экспериментальной модели - в работу ПНИЛ экспериментальной гематологии ЮУНЦ РАМН.
Апробация работы
Результаты исследований были доложены на III и IV научно-практических конференциях Челябинского государственного института лазерной хирургии, 2000, 2003; Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные аспекты лазерной медицины» Москва - Калуга, 2002 г.
Основные положения, выносимые на защиту
1) Действие НИЛИ на ткань рога матки крысы вызывает быстро возникающую дегрануляцию тучных клеток, ускорение тканевого кровотока и активацию ферментов, обладающих коллагеназной активностью.
2) Выраженность дегрануляции тучных клеток и усиление кровотока в серозно-мышечном слое и в эндометрии рога матки крысы под действием НИЛИ более выражена в фазу пролиферации, чем в фазу секреции.
3) Воздействие ВИЛИ восстанавливает просвет стенки облитерированного рога матки в пределах функционального слоя эндометрия, без нарушения его базального слоя.
Публикации
По материалам диссертации опубликовано 5 научных работ.
Объем и структура диссертации
Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы о полученных результатах, обсуждения результатов, выводов, практических рекомендаций, указателя литературы, содержащего 49 отечественных и 106 зарубежных источников, приложения. Работа представлена на 164 страницах машинописного текста, иллюстрирована 55 рисунками и 38 таблицами.
Заключение диссертационного исследования на тему "Действие лазерного излучения ближнего инфракрасного диапазона на популяцию тучных клеток и микроциркуляцию в ткани рога матки крысы (экспериментальное исследование)"
ВЫВОДЫ
1) Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на ткань маточных рогов в здоровом организме животного вызывает быстро возникающую дегрануляцию тучных клеток и секрецию ими соединений, ускоряющих тканевой кровоток и активацию ферментов, обладающих коллагеназной активностью. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на тучно-кпеточную популяцию наиболее выражено проявляется при его воздействии на рог матки со стороны серозной оболочки, чем со стороны эндометрия.
2) При воздействии низкоинтенсивного лазерного излучения со стороны серозной оболочки или эндометрия в фазу пролиферации выраженность дегрануляции тучных клеток и усиление кровотока и в серозно-мышечном слое, и в эндометрии была выражена ярче, чем в фазу секреции.
3) Ответ сосудов эндометрия на действие низкоинтенсивного лазерного излучения в фазу секреции не коррелируют с изменениями в содержании тучных клеток, что указывает функционирование и других механизмов, регулирующих кровоток в эндометрии, и включающихся при действии низкоинтенсивного лазерного излучения в эту фазу эстрального цикла.
4) В брюшине процентное распределение тучных клеток остаётся постоянным в разные фазы эстрального цикла и отличается от процентного распределения тучных клеток у интактных животных в ткани маточного рога.
5) Создана модель облитерации маточного рога у крыс, что позволит применять этот метод в дальнейшем для проведения научных исследований в эксперименте
6) Важным достоинством воздействия высокоинтенсивного лазерного излучения на ткань облитерированного рога матки является поверхностное поражение ткани эндометрия рога матки лазерным пучком, т. е. в пределах функционального слоя эндометрия, без нарушения его базального слоя с одновременной стимуляцией восстановления его ткани.
7) После воздействия высокоинтенсивного лазерного излучения, восстанавливающего просвет стенки облитерированного маточного рога, возникает выраженная тучно-клеточная реакция, характеризующаяся высоким процентным содержанием тучных клеток в ткани 2-й и 3-й степени дегрануляции.
8) Снижение интенсивности дегрануляции тучных клеток в ткани рога после воздействия высокоинтенсивным лазерным излучением закономерно сопровождалась возвращением частотных ритмов, характеризующих кровоток, к значениям, зарегистрированных у интактных животных.
9) Оптимальные эффекты действия лазерного излучения на тучные клетки, протеолитическую активность и микроциркуляцию репродуктивной системы крыс представляют собой базис для апробации данного метода в лечении различного вида патологии в гинекологии.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1) Полученные в эксперименте данные дают нам основание считать, что действие низкоинтенсивного лазерного излучения усиливает кровообращение в эндометрии путём дегрануляции тучных клеток. Чёткая зависимость между реакцией тучно-клеточной популяции и микроциркуляции прослеживается только в фазу пролиферации, что позволяет рекомендовать проводить лечение низкоинтенсивным лазерным облучением с целью усиления кровотока в органах малого таза в фазу пролиферации.
2) Под действием высокоинтенсивного лазерного излучения осуществляется реканализация облитерированного маточного рога с восстановлением функционального слоя эндометрия и реакцией тучно-клеточной популяции.
3) Созданная модель облитерации маточного рога применима для проведения научных исследований в эксперименте.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2004 года, Шевцова, Елена Юрьевна
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия / Г.Г. Автандилов //. М.: «Медицина», 1990. С. 384.
2. Баранов В. Н. Низкоэнергетические лазеры в рефлексотерапии хронических сальпингоофоритов /В. Н. Баранов // Челябинск: «Иероглиф», 2000. 112с.
3. Бережная Н.М., Л.П. Бобкова, И. А. Петровская. Аллергология. Словарь-справочник. Киев: «Наукова думка», 1986., 447 е.),
4. Большаков И.Н. Нарушения иммунитета и их коррекция с применением полимиксинового сорбента при разлитом стафилококково-синегнойном перитоните / И. Н. Большаков, Д. В. Кулаев, О. В. Силантьева, Ю. М. Лопухин // Иммунология. -1991.-№ 3.-е. 40-43.
5. Быков. В.Л. Развитие и гетерогенность тучных клеток / В.Л Быков // Морфология. 2000. - т. 117. - №2. - с.86-89.
6. Воложин А.И. Программа осуществления воспалительного процесса и его дезрегуляция. В кн. Дизрегуляционная патология (под ред. Г.Н. Крыжановского) М. Медицина. - 2002.- с.407-419.
7. Гамалея Н.Ф. Лазеры в эксперименте и клинике. М: «Мир», 1971. -232 с.
8. Глуховец Б.И. Циклические изменения тучно-клеточной реакции и кровеносных капилляров в стенке маточных труб у женщин / Б.И. Глуховец // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. -1980. №9.-с. 55-58.
9. Головнёва Е.С. Патофизиологические механизмы неоангиогенеза, индуцированного воздействиемвысокоинтенсивного лазерного излучения на ткани (экспериментальное исследование) / Е.С. Головнёва // Автореферат. 2003. - с. 38.
10. Граевская Е.Э. Влияние холодового стресса и адреналовой нагрузки на дегрануляцию перитонеальных тучных клеток крыс / Е.Э. Граевская, М.Я. Ахалая, Е.М. Гончаренко // БЭБМ. 2001. -т.131. - №4. - с.396-398.
11. Грачёва Л.А. Цитокины в онкогематологии /Л.А. Грачёва // «Алтус», Москва, 1996. С. 100.
12. Далгат Д.М. Опыт лапароскопической ультрафиолетовой лазеротерапии в лечении острых воспалительных заболеваний придатков матки /Д.М. Далгат // Акушерство и гинекология. -1989.-№2.-С.66-67.
13. Западнюк И. П. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте / И. П. Западнюк, В. И. Западнюк, Е. А. Захария // Киев «Вища школа». 1983. - С. 58.
14. Заплавнова Л. Д. Неповреждающие лазеры в гинекологии / Л. Д. Заплавнова // Акушерство и гинекология. 1989, - №2. - С. 1718.1
15. Каплан М.А. Использование низко интенсивного инфракрасного импульсного лазерного излучения для лечения различных гинекологических заболеваний / М. А. Каплан, Л. И. Гусева, В. С. Карпицкая // Акушерство и гинекология. - 1992, -№2. - с. 52 - 54.
16. Козлов В. И. Фотобиологические основы лазерной терапии / В. И. Козлов // Конспект лекций высших международныхуниверситетских курсов по фундаментальным аспектам лазерной медицины и биомедицинской оптики. 1995. - С.52 -60.
17. Корепанов В. И. Руководство по лазерной терапии: часть первая / В. И. Корепанов. Москва, 1995. - с. 217.
18. Лагучев С. С. Гормональная регуляция пролиферации эпителия матки, влагалища и молочных желёз / С. С. Лагучев // М.: Медицина. 1970. - С. 160.
19. Линднер Д. П. Тучные клетки как регуляторы тканевого гомеостаза и их место в ряду биологических регуляторов / Д. П. Линднер, Э. М. Коган //Архив патологии, 1976. т. 38. - № 8. - с. 3-14.
20. Малиновская В. В. Особенности системы интерферона в онТОкгенезе. В. В Малиновская В кн.: Ф.И.Ершов. Системе интерферона в норме и при патологии. М., «Медицина», 1996, с. 117-135.
21. Манухин И. Б. Роль трипсиноподобных и химотрипсиноподобных протеаз в генезе воспалительных заболеваний органов малого таза женщин / И. Б. Манухин // Проблемы репродукции. 1999. - №1. - С.27-29.
22. Маянский Д.Н. Лекции по клинической патологии. Руководство для врачей / Д. Н. Маянский, И.Г. Урсов // Новосибирск; 1997.-С.249.
23. Медведев Б. И. Воспалительные заболевания матки и придатков: патогенез, клинико-морфологическая характеристика, диагностика, лечение / Б. И. Медведев, В. Л.
24. Коваленко, Э. А. Казачкова, Е. Л. Казачков // Челябинск: РИО ЧелГМА, 2001.-283с.
25. Панасюк Е. Н. Внешний натриевый и калиевый котранспорт в эритроцитах при воздействии излучения гелий неонового лазера / Е. Н. Панасюк, А. М. Мороз, И. Д. Цюпко // Советская медицина. 1991. - №1. - С.31 -34.
26. Плетнёв С. Д. Лазеры в клинической медицине. Руководство для врачей / Под ред. С. Д. Плетнёва. М.: «Медицина», 1996. -432 с.
27. Покровский В. М. Хронобиологические параметры функциональной активности тканевых базофилов / В. М. Покровский, Л. В. Шульженко // Кубанский мед. Вестник. 2000. - №2. - с.86-88.
28. Пол У., Иммунология. М. Мир.т.З. 1989.- С. 130.
29. Попов Г. К. Универасальный механизм неоангиогенеза в ишемизированных тканях в ответ на воздействие высокоинтенсивного лазерного излучения / Г.К.Попов, Е.С.Головнёва // Материалы 2 Всероссийского конгресса патофизиологов,- Москва,2000,-с.298-299.
30. Порядин Г. В. Способ количественной оценки дегрануляции тучных клеток / Г. В. Порядин, Л. И. Зеличенко, Л. М. Хитин // Иммунология. 1991.- № 3. - с. 59-61.
31. Проценко В. А. Тканевые базофилы и базофильные гранулоциты крови / В. А.,Проценко, С. И. Шпак, С. М. Доценко. -М.: Медицина, 1987.-128 с.
32. Серов В. В. Воспаление. Руководство для врачей / под ред. В. В Серова, В. С. Паукова. М.: Медицина, - 1995 - С. 640.
33. Соловьёва Л. И. Действие низкоинтенсивного лазерного излучения на некоторые популяции клеток кроветворной системы (экспериментальное исследование) / Л. И. Соловьёва // Автореферат. 2001. - с.22.
34. Спивак С. М. Содержание гистамина в перитонеальных тучных клетках при введении бактериальных препаратов / С. М. Спивак, И. А. Гукасян, В. И. Огарков // Патофизиология и экспериментальная терапия. 1986. - № 1. - с. 25-27.
35. Стрижаков А. Н. Тактика лечения гнойно-воспалительных заболеваний придатков матки / А. Н. Стрижаков // Акушерство и гинекология. 1990. - №8. - с.68-72.
36. Тимошенко Л. В. Применение лучей лазера в акушерстве и гинекологии / Л. В. Тимошенко, И. В. Лопушан, Г. Г. Джвебенава. К.: Здоровье, С. 1985. - 128.
37. Толстых П.И. Маленькие секреты использования лазерного излучения для профилактики и лечения гнойных ран / П. И. Толстых, А. Н. Иванян, А. В. Гейниц // Москва: изд - во, 1999. -С. 57.
38. Хамадьянов У. Р. Консервативно-эндохирургическое лечение в сочетании с внутриполостной лазеротерапией у больных с гнойно-воспалительными заболеваниями придатков матки / У.
39. Р. Хамадьянов, E. Л. Харисова // Вестник акушерства и гинекологии. 1999. - №4. - С.51-54.
40. Чернух A.M. Воспаление (Очерки патологии и экспериментальной терапии). М; 1979.-448с.
41. Черток В. М. Гистофизиология тканевых базофилов твёрдой мозговой оболочки при лазерном облучении / В. М. Черток, А. Е. Коцюба, А. В. Ларюшкина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1989. - Т.10. - С. 493 - 495.
42. Шабалин В. Н. Иммунологические и физико-физические эффекты действия лазера на биологические объекты / В. Н. Шабалин, Т. В. Иваненко, Т. В. Скокова, А. Я. Ольшанский // Иммунология. 1990. - № 6. - с. 30-32.
43. Шалимов С. А. Руководство по экспериментальной хирургии / С. А. Шалимов, А. П. Радзиховский, Л. В. Кейсевич // М. Медицина, 1989.-С.272.
44. Юрина Н. А. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани / Н. А. Юрина, И. А. Радостина // М.; Изд-во УДН, 1990.
45. Agis Н. Monocytes do not make mast cells when cultured in the presence of SCF / H. Agis, M. Wilheim, W. R. Sperr et al // J. Immunol. 1993. - P.151:4221.
46. Amenta F. Localization of 5-hydroxytryptamine-like immunoreactive cell and nerv fibers in the rat female reproductive system / F. Amenta et al //Anat Rec. 1992. - 223, 478-484.
47. Anderson D. M. Molecular cloning of mast cell growth factor, a hematopoietin that is active in both membrane bpund and solubleforms / D. M. Anderson, S. D. Liman, A. Baird et al // Cell. 1990. -P. 63:235.
48. Bardding P. Immunolocalization of cytokines in the nasal mucosa of normal and perennial rhinitic salyicts / P. Bardding, I. H. Feather, S. Wilson et al // J. Immunol/ 1993. - 151:1853.
49. Bolton P. Effect of low level Laser on calcium uptake by macrophage / P. Bolton, S. Young // Laser therapy. 1990. - V. 2 (2). - P. 53 -57.
50. Brading P. Interleukin 4 is localized to and released by human mast cells / P. Brading, I. H. Feather, P. H. Howarth et al // J Exp Med. -1992. -176:1381.
51. Brunning R. D. Systemic mastocytosis, extracutaneous manifestations / R. D. Brunning, R. W. McKenna, J. Rosai et al // Am J Surg Pathol. 1983. - 7:425.
52. Costa J. J. The cells of the allergic response. Mast cells, basophils and eosinophils / J. J. Costa, P. F. Weller, S. J. Galli // JAMA. -1997.-278:1815.
53. Costa J. J., Galli S. J. // Mast cells and basophils. In Rich R., Fleisher T. A., Schwartz B. D., Shearer W. Т., Strober W(eds). // Clinical Immunology: Principles and Practice. Mosby Year Book In., St. Louis, MO. - 1996. - p.408.
54. Crow J. The mast cells of the human uterus / J. Crow, L. More, S. Howe //APMIS. 1988. - 96: 921-926.
55. Dastych J Stem cell factor induces mast cell adhesion to fibronectin / J. Dastych, D. D.Metcalfe//J. Immunol. 1994. - 152:213.
56. Dastych J. Aggregation of low affinity Ig G receptors induces mast cell adherence to fibronectin: requirements for the common FcR gamma chain / J. Dastych, M. C. Hardison, D. D. Metcalfe // J. Immunol.-1997. 158: 1803.
57. Dastych J. Mast cell adhesion to fibronectin. Immunol / J. Dastych, J. J. Costa, H. L. Thompson, D. D. Metcalfe //- 1991. P. 73:478.
58. Elhage A. Proximal tubular recanalization by endoluminal laser probe. I. Anatomic results in the female rat / A. Elhage, C. Dargier, S. Mordon et al // J Gynecol Obstet Biol Reprod. 1992. - V.21(2). -P. 143-9.
59. Elhage A. Proximal tubular recanalization by endoluminal laser probe. I. Anatomic results in the female rabbit / A. Elhage, C. Dargier, S. Mordon et al // J Gynecol Obstet Biol Reprod. 1992. -V.21(2).-P. 151-4.
60. Enerback L. Mast cells in rat gastro-intestinal mucosa 1. Effects of fixation. / L. Enerback // Acta path, microbiol. Scand. 1966. -66:289-302.
61. Enerback L. Mast cells in rat gastro-intestinal mucosa 2. Dye-binding and metachromatic properties / L. Enerback // Acta path, microbiol. Scand. 1966. - 66:303-312.
62. Enerback L. Mast cells in rat gastro-intestinal mucosa 3. Reactivity towards Compound 48/80 / L. Enerback // Acta path, microbiol. Scand. 1966. - 66:312-322.
63. Enerback L. Mucosal mast cells in the rat and man / Enerback L. // Int. Archs. Allergy appl. Immun. 1987. - 82:249-255.
64. Enerback L. Properties and function of mucosal mast cells. In: Gannelin C.R. and Schwartz J.C. (Eds.): Frontiers in Histamine Research. / L. Enerback // Pergamon Press. Oxford; 1985. - P. 289.
65. Enerback L. Ultrastructure of mucosal nast cells in normal and compound 48/80-treated rats / L. Enerback, P. M. Lundin // Cell Tiss. Res. 1974. - 150:95-105.
66. Espey L. Ovulation as an reaction a hypothesis / L. Espey // Biol. Reprod. - 1980. - Vol. - 22. - P.73-106.
67. Galli S. J. Basophils and mast cells: morphological insights into their biology, secretory patterns and function / S. J. Galli, A. M. Dvorak, H. F. Dvorak// Prog Allergy. 1984. - 34:1.
68. Galli S. J. New concepts about the mast cell / S. Galli // J. NEJM. -1993.-Vol.-328.-P. 257.
69. Gaytan F. Estrous cycle-related changes in mast cell numbers in several ovarian compartments in the rat. Biology of reproduction / F. Gaytan, J. Aceitero, C. Bellido et al // Biology of reproduction. -1991. N45. - P. 27-33.
70. Geissler E. N. The dominant-white spotting (W) locus of the mouse encodes the c-kit protooncogene / E. N. Geissler, M. A. Ryan, D. E. Housman // Cell. 1988. - 55:185.
71. Ghidyal N. Transcriptional regulation of the mucosal mast cell protease, MMCP-2, by IL-3, IL-4, and IL-10 / N. Ghidyal, H. P. McNeil, M. F. Gurish et al // J. Allergy Clin Immunol. 1992. - P. 89:245.
72. Guo С. B. Immunophenotyping and functional analysis of purified human uterine mast cells / С. B. Guo, A. Kagey-Sobotka, M. Lawrence, J. .M. Lichtenstein, B. S. Bochner // Blood. 1992. - 79, №3: 708-712.
73. Guo C. Unique phenotypic characteristics of human uterine mast cells (UMC) / C. Guo, A. Kagay-Sobotka, L. M. Lichenstein, B. S. Bochner // J. Allergy Clin Immunol. 1991. - P. 87:303.
74. Gurish M. F. Expression of murine (37a4 and (31 integrin genes by rodent mast cells / M. F. Gurish, A. F. Bell, T. J. Smith et al // J. Immunol. 1992. - P. 149:1964.
75. Haak-Frendscho M. Human recombinant granulocyte macrophage colony-stimulating factor and interleukin-3 cause basophil histamine release release / M. Haak-Frendscho, N. Arai, K. Arai et al // J. Clin. Invest. 1988. - Vol. - 82. - P. 17.
76. Haak-Frendscho M. Recombinant human interleukin-1 beta causes histamine release from human basophils / M. Haak-Frendscho, C. .
77. Dinarello, A. P. Caplan // J. Allergy Clin Immunol. 1988. -Vol. -82. - P. 218.
78. Henderson W.R. Eosinophil peroxidase indused mast cell secretion / W. R. Henderson, E. Y. Chi, S. J. Klebanoff // J. Exp Med. 1980. -152:265-279.
79. Hirai K. Regulation of the function of eosinophils / K. Hirai, M. Miyamasu, T. Takaishi, Y. Morita. // Crit. Rev. Immunol. 1985. -17:325.
80. Horny H. P. Bone marrow findings in systemic mastocytosis / H. P. Horny, M. R. Parwaresch, K. Lennart Hum Pathol. 1985. - 16: 808.
81. Huang E. The hematopoietic growth factor KL is encoded at the S1 locus and is the ligand of the c-kit receptor, the gene product of the W Locus / E. Huang E, K. Nocka, D. R. Beier et al // Cell. 1990. -P. 63:225.
82. Irani A. A. Two types of human mast cells that have distinct neutral protease compositions / A. A. Irani, N. M. Schechter, S. S. Craig et al // PNAS. 1986. - P. 83:4464.
83. Jeffrey J.J. Serotonin: an inducer of collagenase in myometrial smooth muscle cells / J. J. Jeffrey, L. S. Ehlich, W. T. Roswit // J. Cell Physiol. 1991. - 146, 399-406.
84. Jones R. E. Rat ovarian mast cells: distribution and cyclic changes / R. E. Jones, D. Duvall, LJ. Ir. Guillene // Anat. Rec. 1980. -197:489-493.
85. Kirshenbaum A. S. Effect of IL-3 and stem cell factor on the appearance of human basophils and mast cells from CD34+pluripotent progenitor cells / A. S. Kirshenbaum, J. P. Goff, S. W. Kesseir et al // J.Immunol. 1992. - Vol. - 148. - P. 772-777.
86. Kitamura Y. Decrease of mast cells in W/Wv mice and their increase by bone marrow transplantation / Y. Kitamura, S. Go, S. Hatanaka // Blood.-1978.-52:447.
87. Knol E. F. The role of basophils in allergic disease / E. F. Knol, F. P. L. Mul, W. L. Lie et al//Eur Respir J. 1996. - 9 (suppl 22): p. 126.
88. Krishna A. Alterations in mast cell degranulation and ovarian histamine in the proestrous hamster / A. Krishna, P. F. Terranova // Biol. Reprod. 1985. 32:1211-1217.
89. Krishna A. Histamine mast cells and ovarian function / A. Krishna, K. Beesley, P. F. Terranova//J. Endocrinol. 1989. - 120:363-371.
90. Kubes P. Histamine induces leukosyte rolling in post -capillary venules. A P-selectin-mediated event / P. Kubes, S. Kanvar // J. Immunology. 1994. - 152(7): 3570 - 3577.
91. Kurimoto Y. lnterleukin-3 dependent mediator release in basophils triggered by C5a / Y. Kurimoto, A. L. de Week, C. A. Dahinden // Exp. Med.-1989. 170:467.
92. KGther K. Bovine mast cells: diatribution, density, heterogeneity and . influence of fixation techniques / K. KGther, L. Audige, P. Kube et al // Cell Tissue Res. 1998. - 293:111-119.
93. Laemmli U.K. Cleavage of structual proteins during the assembly of the head of bacterofage T4 / U.K.Laemly.// Nature.-1970.-Vol.227.-P.680-685.
94. Lawrence J. B. Hematologic manifestations of systemic mast cell disease: a prospective study of laboratory and morphologic features and their relation to prognosis / J. B. Lawrence, G. B. Friedman, W. D.Travis et al//Am J Med. 1991. - 91:612.
95. Marone G. Pathophysiology of human basophils and mast cells in allergic disorders / G. Marone, V. Casolaro, R. Cirillo et al // Clin. Immunol Immunopathol. 1989. - Vol. - 50.-P. 524.
96. Martin F. H. Primary structure and functional expression of rat and human cell factor DNAs / F. H. Martin, S. V. Suggs, К. E. Langley et al // Cell. 1990. - P. 63:203.
97. Massey W.A. Human uterine mast cells / W. A. Massey, С. B. Guo, A. M. Dvorak, W. C.Hubbard, В. C. Bhagavan, V. L. Cohan, J. A. Warner, A. Kagey-Sobotka, J. M. Lichtenstein // The Journal of Immunol. 1991. - 147: 1621-1627.
98. Mecori Y. A. IL-3 dependent mast cells undergo apoptosis upon removal of IL-3: prevention of apoptosis by c-kit ligand / Y. A. Mecori, С. K. Oh, D. D. Metcalfe // J. Immunol. 1993. - P. 151:1775.
99. Meininger C. J. The c-kil receptor ligand functions as a mast cell chemoattractant / C. J. Meininger, H. Yano, R. Rottapel et al // Blood.-1992.-P. 79:958.
100. Metcalfe D. D. Clinical advances in mastocytosis-conclusions / D. D. Metcalfe // J.Invest Dermatol. 1991. - Vol. - 96. - P. 64.
101. Metcalfe D. D. Mast cells / D. D. Metcalfe, D. Baram, Y. A. Mecori // Physiol. Rev. 1997. - Vol. - 77. - P. 1033.
102. Mican J. M. Hepatic involvement in mastocytosis: clinicopathologic correlations in 41 cases / J. M. Mican, A. M. Di Bisceglie, T. L. Fong et al // 1995. - Hepatol 22:1163.
103. Nakano T. Genetically mast cell-defecient W/Wv mice as a tool for studies of differentiation and function of must cells / T. Nakano, Y. Kanakura, T. Nakahata et al // Fed Proc. 1987. - 46:1920.
104. Nolte H. The role of mast cells and basophils in immunoregulation. / H. Nolte//Allergy Asthma Proc. 1996. - 17:17.
105. Padilla L. Histamine content and mast cells distribution in mouse uterus: the effect of sexual hormones, gestation and labor / L. Padilla et al // Cell Mol Biol. 1990. - 36, 93-100.
106. Plaunt M. Mast cell lines produce lymphokines in response to cross-linkage of Fc, Rl or to calcium inophores / M. Plaunt, J. H. Pierce, C. J .Watson et al // Nature. 1989. - 339: 64.
107. Plaut M. Mast cell lines produce lymphokines in response to cross -linkage of Fc Rl or to calcium ionophores / M. Plaut, J. H Pierce, C. J. Warson et al // Nature. 1989. - Vol. - 339. - P. - 64-67.
108. Pruzansky J. J. Limiting concentrations of human basophil bound Ig E antibody required for histamine release / J. J. Pruzansky, R. Patterson // Immunol. 1998. - Vol. - 64. - P. 307.
109. Rudolph M. I. Mast cells mediators evoke contractility and potentiate each other in mouse uterine horns / M. I. Rudolph et al // Gen Pharmacol. 1992. - 23, 833-836.
110. Sandvei R. Mast cells in the tubal wall in woman using an intrauterine contraceptive device / R. Sandvei, A. L. Wollen, P. R Flood , C. Anker // Br J Obstet Gynaecol. 1986. - 93 (7): 758 - 64.
111. Schmidt G. Cellular localization of ovarian histamine, its cyclic variations and histaminergic effects on ovulation in the rat ovary perfused in vitro / G. Schmidt, Ch. Owamn, N. O. Sjoberg // J. Reprod. Fertil. 1988. - 82:409 - 417.
112. Schmidt G. Histaminergic effects on the isolated rat ovarian artery and lung during the estrous cycle / G. Schmidt, P. Kannisto, Ch. Owman // Biol. Reprod. 1990.-42:762 - 768.
113. Schonbeck U. Regulation of matrix metalloproteinase expression in human vascular smooth muscle cells by lymphocytes / U. Schonbeck, F. Mach, G. K. Sukhova, C. Murphy, J. Y. Bonnefoy, R. P. Fabunmi, P. Libby // Circ Res. 1997. - 81:448 - 454.
114. Schulman E. S. Differential effects of the complement peptides C5a and C5a Des Arg on human basophil snd lung mast cell histamine release / E. S. Schulman, T. Post, P. M. Henson, P. C. Giclas // J. Clin Invest. 1988. - Vol. - 81. - P. 918.
115. Schwartz L. B. Structureand function of the clinical mediators of mast cells / L. B. Schwartz, K. F. Austen // Prog. Allergy. 1984. -34:271.
116. Shinohara H. Mast cells in the ovarian bursa of the golden hamster. / H. Shinohara, T. Nakatani, S. Morisawa T. Matsuda, Y. Naruse // Biol. Reprod. 1987. - 36:445 - 450.
117. Sommers S. C. In: Velardo J. T. The Endocrinology of Reproduction / S. C. Sommers // Oxford Un. Press. N. Y., 1958. P.500.
118. Sonoda T. Mast cell precursors in various hematopoietic colonies of mice produced in vivo and in vitro / T. Sonoda, Y. Kitamura, Y. Haku et al // Br. J. Hematol. 1983. - 53-611.
119. Spaziani E. Accessory reproductive organs in mammals: control of cell and tissue transport by sex hormones / E. Spaziani // Pharmacol. 1975. - Rev 27, 207-286.
120. Tanaka S. A role for histamine receptors in rheumatoid arthritis / S. Tanaka, S. Sohen, K. Tukuda // Semin. Arthritis Rheum. 1997. -26(6): 824 - 833.
121. Tchernitchin A. N. The role of eosinophils in the action of estrogens and other hormones / A. N. Tchernitchin, M. A. Mena, J. Solol, C. Unda // Med Sci Res. -1989. Vol. - 17,- P.5-10.
122. Thompson H. L. Identification of an amino acid sequence in the laminin A chain mediating mast cell attachment and spreading / H. L. Thompson, P. D. Burbelo, Y. Yamada et al // Immunol. 1991. - P. 72:144.
123. Thompson H. L. Laminin promotes mast cell attachment / H. L. Thompson, P. D. Burbelo, B. Sequi-Real et al // J. Immunol. 1989. - P.143:2323.
124. Thompson H. L. Mast cells chemotax to laminin with enhancement after IgE-mediated activation / H. L. Thompson, P. D. Burbelo, Y. Yamada et al//J. Immunol. 1989. - P. 143:4188.
125. Thompson H. L. Regulation of adhesion of mouse bone marrow-derived mast cells to laminin / H. L. Thompson, P. D. Burbelo, D. D. Metcalfe//J. Immunol. 1990. - P. 145:3425.
126. Thompson-Sneips L. lnterleukin-10: a novel stimulatory factor for mast cells and their progenitors / L. Thompson-Sneips, V. Dahr, M. W. Bond et al // J Exp. Med. 1991. - P. 173:507.
127. Travis W D. Pathology of the lymph node and spleen in systemic mast cell disease / W. D. Travis, C. Y. Li // Modern Pathol. 1988. -1:4.
128. Tsai M. Induction of mast cell proliferation, maturation and heparin synthesis by the rat c-kit ligand, stem cell factor / M. Tsai, T. Takashi, H. Thompson et al // Proc Natl Acad Sci USA. 1991. - P. 88:6382.1.к
129. Tyagi S. С. Direct extraction and estimation of collagenase activity by zymography in microquantities of rat myocardium and uterus / S. C. Tyagi, L. Matsubara, K. Weber // Clinical biochemistry. 1993. -V. 26.- P.35-39.
130. Vasek A. Increase in colony forming capacity of the haemopoietic stem cells in bone marrow exposed to the He - Ne laser radiation in vitro / A. Vasek, A. Bartonickova, Z. Vasela, F. Petru // Folia Biol. (Praha). - 1982. - V. 28(6). - P. 426 - 430.
131. Vliagoftis H. Characterization of adhesive interactions between mast cells and laminin isoforms: evidence of a principle role for a6 integrin / H. Vliagoftis, D. D. Metcalfe // Immunol. 1998. - P. 92:553.
132. Wessler I. Non neuronal acetylcholine, a locally acting molecule, widely distributed in biological systems: expression and function in humans /1. Wessler, C. J.Kirkpatrick, K. Racke // Pharmacol. Ther. -1998. - Vol. 77, N 1. - P. 59 - 79.
133. Wessler I. The biological role of non neuronal acetylcholine in plants and humans / I. Wessler, H. Kilbinger, F. Bittinger, C. J. Kirkpatrick // Jpn, J. Parmacol. - 2001. - Vol. 85, N 1. - P. 2 - 10.
134. Woodbury R.G. Immunofluorescent localization of a serine protease in rat small intestine / R. G. Woodbury, G. M. Gruzenski, D. Lagunoff // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1978. - 75:2785-2789.
135. Yang D. Mammalian defensins in immunity: more than just microbicidal / D. Yang, A. Biragyn, L. W. Kwak et al // Trends Immunology. 2002. - 23(6): 291-296.
136. Yang D. The role mammalian antimicrobial peptides and proteins in awakenings of innate host defenses and adaptive immunity / D. Yang, O. Chertov, J. .J Oppenheim // CMLS. -2001. 978-989.