Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Биомолекулярные маркеры как факторы прогноза при серозном раке яичников III - IV стадии
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.00.14
Оглавление диссертации Полушкина, Ирина Николаевна :: 2003 :: Москва
Введение
Глава 1. Молекулярно-биологические маркеры, характеризующие апоптоз, пролиферацию и ангиогенез при раке яичников (обзор литературы)
Глава 2. Материалы и методы
2.1 Общая характеристика клинического материала
2.2. Иммуногистохимические методы
Глава 3. Значение факторов апоптоза и пролиферации при серозном раке яичников III-IV стадии
3.1. Экспрессия р53 при раке яичников
3.2. Экспрессия Вс1-2 и Вах Г
3.3. Экспрессия FasL
3.4. Экспрессия Ki
3.5. Зависимость эффективности химиотерапии от экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации
3.6. Зависимость выживаемости больных серозным раком яичников от экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации
Глава 4. Значение факторов ангиогенеза при серозном раке яичников
4.1. Экспрессия маркеров ангиогенеза (VEGF, Flk, Fit, тимидин фосфорилаза, тромбоспондин)
4.2. Экспрессия маркеров ангиогенеза и эффект химиотерапии, зависимость времени до прогрессирования и общей выживаемости от экспрессии маркеров ангиогенеза
4.3. Соотношение маркеров ангиогенеза и апоптоза
Введение диссертации по теме "Онкология", Полушкина, Ирина Николаевна, автореферат
Актуальность проблемы состоит в необходимости разработки новых методов лечения больных раком яичников на основе достижений фундаментальной науки.
Во всем мире имеется тенденция к увеличению заболеваемости и смертности от рака яичников. Ежегодно в мире регистрируется 165 тыс. новых случаев рака яичников и 101 тыс. смертей [90]. Среди больных с впервые установленным диагнозом на долю III и IV стадии приходится 37,2% и 27% соответственно [91].
Современная химиотерапия рака яичников в последнее время достигла определенных успехов [49]. В результате использования наиболее эффективных режимов химиотерапии цисплатин/ карбо-платин + Паклитаксел/Доцетаксел в I линии химиотерапии частота полной и частичной ремиссии достигла 73-78% [3, 4, 18, 48, 100, 110].
Частота лечебного эффекта и длительность ремиссии существенно различаются у многих больных.
Между тем, клинико-морфологические характеристики болезни (гистологическое строение опухоли, уровень опухолевого маркера и др.) являются недостаточными для оценки прогноза рака яичников и эффекта химиотерапии.
За последнее десятилетие достигнут значительный прогресс в понимании молекулярной биологии клетки [1]. Стали известны многие механизмы контроля клеточного деления и смерти, поддержания генетической стабильности, путей передачи сигнала от рецепторов в ядро.
Одним из современных путей совершенствования прогнозирования течения рака яичников и выработки лечебной тактики является изучение молекулярно-биологических маркеров в ткани опухоли.
Необходимо найти понимание клинической ситуации, когда сравнимые по распространенности и гистологической структуре опухоли различаются по агрессивности течения заболевания.
Особое внимание привлекают сведения о нарушениях механизмов пролиферации, апоптоза, ангиогенеза в опухолевых клетках.
Ключевыми белками, участвующими в управлении апоптозом, являются белки семейства Вс1-2 и белок -супрессор опухолевого роста - р53. Мутации в гене, кодирующем рецептор Fas/apol, индуцируют процесс образования опухоли.
Супрессор опухолевого роста, р53, известен как один из главных белков, контролирующий прохождение клеткой клеточного цикла. Активность белка р53 требуется для активации некоторых форм апоптоза, и его мутации могут быть ассоциированы с агрессивностью течения заболевания и устойчивостью опухолевых клеток к химио-или лучевой терапии.
Неоангиогенез, или формирование новых микрососудов на основе уже существующей в ткани сети сосудов, является необходимым для pocia опухоли и развития метастазов. Фактор роста эндотелия сосудов (VEGF) является главным фактором, индуцирующим образование новых сосудов в опухоли путем стимулирования деления и миграции эндотелиальных клеток близлежащих сосудов. Экспрессия VEGF в злокачественных опухолях сочетается с усилением метастатической ее активностью и укорочением безрецидивной выживаемости.
Комплексное изучение маркеров апоптоза, пролиферации и ангиогенеза при раке яичников с целью поиска новых факторов прогнозирования течения болезни ранее не проводилось.
Клиническая характеристика диссеминированного рака яичников с использованием новых возможностей изучения молекулярно-биологических маркеров может дать информацию о прогнозе течения заболевания, содействовать назначению рационального и эффективного лечения, что и определяет актуальность данного исследования,
ЦЕЛЬ РАБОТЫ
Комплексное изучение клинических и молекулярно-биологических факторов (показатепи апоптоза, пролиферации и ангиогенеза) при серозном раке яичников III-IV стадии и оценка их прогностической значимости при определении эффективности химиотерапии.
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
1. Определить экспрессию молекулярно-биологических маркеров апоптоза (р53, Bcl-2, Вах, FasL), пролиферации (Ki-67) и ангиогенеза (VEGF, Flk, Fit, тромбоспондин, тимидин фосфорилаза) при серозном раке яичников III-IV стадии.
2. Установить взаимосвязь экспрессии маркеров апоптоза, пролиферации и ангиогенеза и результатов химиотерапии при раке яичников III-IV стадии.
3. Изучить выживаемость больных при раке яичников III-IV стадии в зависимости от экспрессии маркеров апоптоза, пролиферации, ангиогенеза.
4. Провести многофакторный анализ взаимосвязи клинико-морфо-логических и молекулярно-биологических характеристик рака яичников и результатов противоопухолевого лечения.
НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ
Впервые проведено комплексное изучение биомолекулярных маркеров апоптоза, пролиферации и ангиогенеза при серозном раке яичников III-IV стадии. Исследование направлено на разработку и внедрение в медицинскую практику новых прогностических факторов течения болезни и определения рациональных методов химиотерапии. Результаты, полученные в ходе исследования, позволили выявить несомненное значение апоптоза в развитии рака яичников. Впервые показана роль изученных биомолекулярных маркеров как факторов прогноза при серозном раке яичников LU-IV стадии. Использование в практике определения молекулярно-биологических маркеров позволит прогнозировать течение рака яичников и назначение лекарственной терапии. Оценка экспрессии Вах имеет важное прогностическое значение для выявления группы повышенного риска больных серозным раком яичников III-IV стадии.
Заключение диссертационного исследования на тему "Биомолекулярные маркеры как факторы прогноза при серозном раке яичников III - IV стадии"
выводы
1. Экспрессия мутантного р53 обнаружена в 54% случаев серозного рака яичников и была выше у больных с низкой степенью дифференцировки (65%) по сравнению с высокой (42% случаев). Уровень экспрессия р53 был ниже (25%) у больных, проживших более 5 лет. чем у больных, проживших менее 2 лет (59%).
2. Экспрессия Вс1-2 была найдена в 39% случаев, экспрессия Вах- в 56% случаев у больных серозным раком яичников, наблюдалась прямая корреляция между экспрессиями двух белков. Показано, что только 22% больных имеют предрасположенность к резистентности апоптоза (Bci-2 : Вах >1).
3. Экспрессия сосудистого эндотелиального фактора роста (VEGF) была найдена в 65°о случаев \ больных серозным раком яичников. Обнаружено, что опухоли положительные по Вс1-2 имеют высокую экспрессию VEGF (k=0.27; р=0007). Экспрессия VEGF не коррелировала с присутствием р53 и тромбос-пондином.
4. Экспрессия тимидин фосфорилазы на опухолевых клетках обнаружена в 48° о случаев, на клетках с гром ы в 65° о случаев у больных серозным раком яичников. Окрашивание стромальных клеток обратно коррелировало с дифференцировкой опухоли к = - 0.22; р=0.03).
5. Экспрессия Вах в опухоли больных серозным раком яичников предсказывает эффективность химиотерапии. Больные, в опу-холя\ которых определялась экспрессия Вах. чаще имели полную регрессию в первой линии химиотерапии и более яти гельное время до прогрессирования. Больные с отсутствием Вах. имели короткое время до прогрессирования. 6. Экспрессия Вах в опухоли является благоприятным прогностическим факюром выживаемости больных серозным раком яичников. Медиана выживаемости больных при наличии высокой экспрессии Вах в опухоли составила 85 месяцев, а при ее отсутствии - 32 месяца.
7. Экспрессия маркеров ангиогенеза: VEGF и его рецепторов Fit и Flk. тимидин фосфорилазы. тромбоспондина не влияли на эффективность 1 линии химиотерапии и выживаемость у больных серозным раком яичников.
8. Группу повышенного риска с низкой выживаемостью составляют больные Вс1-2 голожительные VEGF отрицательные при серозном раке яичнтков (медиана выживаемости 19 месяцев).
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Анализ экспрессии молекулярно-биологических маркеров и их связи с различными клинико-морфологическими особенностями опухоли и прогнозом течения заболевания был проведен у 96 больных серозным раком яичников III-IV стадии.
Экспрессия р53 была обнаружена в 54,2% (52 из 96) случаев рака яичников. Экспрессия р53 в опухолях с высокой дифференцировкой составила 41,6%, с умеренной дифференцировкой - 50% и с низкой дифференцировкой - 65,2% . Окрашивание наблюдалось в ядрах опухолевых клеток, при этом нормальные клетки (стромаль-ные и эндотелиальные клетки, лимфоциты, инфильтрирующие опухоль) не окрашивались антителами к общему р53. Присутствие р53 в ткани серозного рака яичников не было связано с клинико-патологическими характеристиками опухоли или с экспрессией других маркеров апоптоза.
Белки семейства Bcl-2 (Вс1-2 и Вах) являются одними из основных эффекторов апоптоза в клетке. Экспрессия Вс1-2 нами была найдена в 37 (38,5%) случаев, экспрессия Вах - в 54 (56,25%) случаев серозного рака яичников. Обнаружено, что накопление Вс1-2 и Вах происходит в цитоплазме опухолевых клеток. Инфильтрирующие опухоль лимфоциты всегда были сильно окрашены антителами к Вс1-2 и расценивались как внутренний положительный контроль.
Экспрессия Вс1-2 и Вах была прямо связана друг с другом (р=0,028 по результатам yj1 - статистики). Опухоли, отрицательные по одному белку, чаще не содержали и другого белка. Экспрессия Вс1-2 и Вах не зависела от различных клинических характеристик болезни: стадии, дифференцировки. возраста, размера остаточной опухоли.
Мы определили соотношение Вс1-2:Вах в опухоли, т.к. часто именно соотношение уровня экспрессии этих двух белков определяет готовность клеток к апоптозу. Только в 1А случаев серозного рака яичников имеется предрасположенность к резистентности апоптоза. У 21,9% больных при раке яичников имелся высокий уровень Bcl-2 и низкий уровень Вах (Bcl-2:Bax > 1), у 35,4% больных наблюдалось равное соотношение Вс1-2 и Вах (Вс1-2:Вах=1) и у 42,7 % больных - низкий уровень экспрессии Вс1-2 и высокий Вах (Bcl-2:Вах < 1).
Экспрессия FasL обнаружена в 67,7% случаев серозного рака яичников. Отмечена положительная корреляция между экспрессией FasL и Вс1-2 при раке яичников (р=0,0076). Опухоли, положительные по Вс1-2, были положительными по FasL в 83,8%.
Экспрессия VEGF на опухолевых клетках была найдена в 64,6% опухолей, экспрессия двух рецепторов к VEGF -Flt-1 (VEGFR-1) в 37,2% случаев и Flk-1 (VEGFR-2) - 28,7%. При этом окрашивание опухоли антителами к Flt-1 (VEGFR-1) коррелировало с присутствием VEGF-положительных опухолей (к=0,2; р=0,048). Опухоли, отрицательные по VEGF, были отрицательными по Flt-1 в 75.8% случаев, а положительные по VEGF в 55,7% случаев (р=0,055 по статистике х2)
Экспрессия VEGF в опухолевых клетках не зависела ог присутствия в них р53, но в опухолях, положительных по Вс1-2, экспрессия VEGF была намного выше (к=0,27; р=0,007). Так, экспрессия VEGF в Bcl-2-положительных опухолях составила 81,1%, а в Вс1-2-отрицательных опухолях - 54° о.
Экспрессия тромбоспондина - ингибитора ангиогенеза - была обнаружена только в небольшом количестве опухолей (в 9.4%) случаев. При этом она не коррелировала с присутствием р53 и VEGF.
Экспрессия ТФ обнаружена как на опухолевых клетках в 47.9% случаев, так и на клетках стромы (фибробластах, опухоле-ассоциированных макрофагах и др.) в 64,6% случаев. Экспрессия ТФ на опухолевых клетках не зависела от экспрессии VEGF и других маркеров апоптоза.
Присутствие окрашивания стромальных клеток обратно коррелировало с дифференцировкой опухолей (к= -0,22; р=0.03). Низко-дифференцированные опухоли содержали окрашивание стромы в 73,9% случаев, а высокодифференцированные - только в 39.1% случаев
Средняя пролиферативная активность серозного рака яичников по индексу Ki-67 составила 43,4^32.4% (медиана - 40%). Опухоли III и IV стадии не различались по индексу Ki-67. (44.2 и 38.5 соответственно). Индекс Ki-67 коррелировал со степенью дифференцировки опухоли (kpearson=0.3, р=0.002: анализ корреляции по Пирсону). Опухоли с высокой степенью дифференцировки имели более низкую пролиферативную активность.
Анализ показап. что индекс Ki-67 значимо не отличался \ больных с разными показателями биомаркеров. Опухоли, положительные и отрицательные по изученным У1аркерам. имели одинаковую пролиферативную активность по индексу Ki-67. Однако среди опухолей с индексом Ki-67 <10%, экспрессия р53 составила 36.4° о. а среди опухолей с индексом Ki-67 > 80° о - 68.2° Ь; р=0.07. Это означает, что очень высокая пролиферативная активность опухоли часто сочетается с экспрессией мутантного р53.
Проведен анализ экспрессии маркеров апоптоза у больных, имевших различную эффективность химиотерапии
После 4-10 курсов химиотерапии 56 больных имели полную клиническую регрессию (ПР). 26 больных - частичную регрессию
ЧР), у 12 больных отмечено прогрессирование (ПРГ) на фоне лечения, 1- стабилизация, у 1 больной эффект терапии не оценен Эффективность химиотерапии коррелировала с размером остаточной опухоли (р=0,00058), но не со стадией или степенью дифференци-ровки опухоли
Отмечено, что больные, имевшие полный эффект от терапии, были чаще положительными по Ва\ (62.5°о случаев), чем больные с прогрессированием во время I линии химиотерапии, где экспрессия Вах составила 33.3° о
Размер остаточной опухоли и экспрессия Вах ассоциировались со временем до прогрессирования болезни Больные. у которых остаточная опухоль была менее 2 см. имели более длительное время до прогрессирования после химиотерапии первой линии, чем те. у которых остаточная опухоль была более 5 см (медиана ВП составила 19 мес и 12 мес соответственно) Вах положи гельные больные имели прогрессирование в 75.5°о случаев ^медиана времени до прогрессирования 17 мес ). а Вах отрицательные больные - в 86.8°о случаев (медиана времени до прогрессирования 12 мес )
Эффективность химиотерапии не зависела от экспрессии маркеров ангиогенеза
Было оценено влияние экспрессии маркеров апоптоза и пролиферации, связанных с апоптозом, на общую выживаемость больных серозным раком яичников.
51,6% больных умерли за время наблюдения, 48,4% больных были живы. Средняя выживаемость составила в группе умерших больных - 28,4+19,1мес. (медиана - 23 мес.), среднее время наблюдения в группе живущих больных составило 38,1+24,8мес. (медиана ЗЗмес.).
Экспрессия р53 была ниже (25%) у больных, проживших более 5 лет, чем у больных, умерших б течение 2 лет (58,8%).
По данным однофакторного анализа, наличие прогрессирова-ния, размер остаточной опухоли более 5 см и отсутствие Вах в опухоли являются маркерами укорочения общей выживаемости больных. Так, Вах положительные больные имели медиану выживаемости 85 мес., по сравнению с Вах отрицательными больными - 32 мес.
Анализ совместной экспрессии маркеров показал, что низкая пролиферативная активность опухоли/присутствие Вах является благоприятным прогностическим признаком (общая выживаемость составила 68%, медиана выживаемости - 85 мес.). Группой низкой выживаемости больных была группа с высокой пролиферативной активностью/отсутствием Вах (общая выживаемость составила 39,1%), медиана выживаемости - 33 мес.).
Анализ влияния маркеров ангиогенеза на время до прогресси-рования и общую выживаемость больных не выявил их прогностической значимости.
Взаимоотношение факторов апоптоза и ангиигенеза является полезным в исследовании по раку яичников.
Оказалось, что больные, положительные по Вс1-2 и отрицательные по VEGF, имеют самую низкую выживаемость (медиана 19 месяцев), тогда как больные, положительные по Вс1-2 и VEGF, имеют самую высокую общую выживаемость (медиана 57 мес.) (р=0,019). В группе Вс1-2 отрицательных экспрессия VEGF не оказывала влияния на выживаемость больных раком яичников.
Комбинация Вах и Flk-1 также дает информацию о выживаемости больных. Экспрессия в опухоли Вах и Flk-1 коррелировала с благоприятным прогнозом для больных (медиана общей выживаемости 85 месяцев) по сравнению со всеми другими комбинациями (медиана 36 месяцев) (р=0,002).
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2003 года, Полушкина, Ирина Николаевна
1. Барышников А.Ю., Шишкин Ю.В. Программированная клеточная смерть (апоптоз) Российск. Онколог, журнал 1996, №1, с. 58-61.
2. Белушкина Н.Н., Северин С.Н. Молекулярные основы патологии апоптоза. Архив патологии 2001, том 63, №.1, с.51-60.
3. Горбунова В.А., Гарин A.M. Новое в химиотерапии злокачественных опухолей. Таксол, Таксотер. Вопр. Онкологии, 1994. том 40, с.259-266.
4. Горбунова В.А. Таксол при раке яичников // Таксол в клинической практике / Под ред. Н. И. Переводчиковой.-М„ 2001с.168-184.
5. Карамышева А.Ф. Ангиогенез опухоли: механизмы, новые подходы к терапии Канцерогенез. 2000: с. 298-309 (обзор)
6. Комарова Е.А., Гудков А.В. Супрессия р53: новый подход к преодолению побочных эффектов противоопухолевой терапии (обзор) 2000 Биохимия 65 с.48-56.
7. Копнин Б.П. Мишени действия онкогенов и опухолевых супрес-соров: ключ к пониманию базовых механизмов канцерогенеза (обзор). 2000 Биохимия 65 с.5-33.
8. Чумаков П М. Функция гена р53: выбор между жизнью и смертью (обзор). 2000. Биохимия 65 с. 34-47.
9. Abu-Jawdeh G., Faix J. Niloff J. et al. Strong expression of vascular permeability factor (vascular endothelial grow th factor) and its receptors in ovarian borderline and malignant neoplasms. Lab. Invest 1996, 74. p. 1105-1115.
10. Allan 1,. Campbell M. Milner et al. The significance of p53 mutation and overexpression in ovarian cancer prognosis. Int. J. Gynecol Cancer 1996, 6, p. 483-490.
11. Anttila M., Kosma V., Li H. et al. Clinical significance of -catenincjllagen IV, and Ki-67 expression in epithelial ovarian cancer. J. Clinical Oncology 1998, 16, p.2591-2600.
12. Anttila M., Kosma V, Hongxiu J. et al. p21/WAFl expression as related to p53, cell proliferation and prognosis of ovarian cancer. Br.J. Cancer 1999,79, p. 11-12.
13. Baekelandt M, Kristensen G., Nesland J. et al. Clinical significance of apoptosis related factors p53. Mdm2 and bcl-2 in advanced ovarian cancer. J. Clin. Oncology 1999, 17(7), p. 2061-2068.
14. Baekelandt M., Holm R., Nesland J. et ai. Expression of apoptosis-related proteins is an independent determinant of patient prognosis in advanced ovarian cancer J. Clin Oncol. 2000, 18, p.3775-3781.
15. Ben-Hur H., G»ire> icli P., Vus/ar M. et al. Apoptosis and apoptosis related proteins in epitelium of human ovarian tumors immunohisto-chemical and morphometric studies. Eur. Gynaecol. Oncol. 1999, 20(4), p.249-253.
16. Воососк С., Charnock- Jones D, Sharkey A. et al. Expression of vascular endothelian growth factor and its receptors fit and KDR in ovarian cancer J. Natl. Cancer Inst 1995, 87, p. 506-516.
17. Bosari S., Via'.^ G., Radaelli U. et al. p53 accumulation in ovarian carcinomas and its prognostic implications. Hum. Pathol. 1993, 24(11), 1175-1179.
18. Brown R., Clugston C., Burns P. et al. Increased accumulation of p53 protein in cisplatin-resistant ovarian cell lines. Int. J Cancer 1993, 55; p. 678-684.
19. Brustmann H.,Riss P., Naude S. The relevance of angiogenesis in benaingn and malignant epithelial tumors of the o\ary a quantitative histologic study. Gynecol. Oncol 1997, 67, p.20-27.
20. Buttitta F., Maivhetti A., Gadducci A. et al. p53 alterations are predictive of chemoresistance and aggressivenes in ovarian carcinomas: a molecular and immiunohistochemical smady. Br J.Cancer 1997, 75. p 230-235
21. Caduff R., Svoboda-Newman S. Ferguson A. et al. Comparison of mutations of Ki-ras and p53 immunoreactivity in borderline and malignant epithelial ovarian tumors. Am .J. Surg Patol. 1999, 23(3), p.323-328
22. Cao Y., Linden P. Farnebo J. et al. Vascular endothelial growth factor С induces angiogenesis in vivo Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. 95, p.14389-14394
23. Chan W., Cheung K„ Huang L., et al. Bcl-2 and p53 protein expression, apoptosis, and p53 mutation in human epithe'ial ovarian cancers. Am. J. Pathol. 2000, 156(2) p. 409-417.
24. Christine A., Boocock D., Chanock-Jones.J. Expression of vascular endothelial growth factor and its receptors fit and KDR in ovarian carcinoma. J. Nat. Canser Ins. 1995, V 87. p 506-516.
25. Daponte A., Guidozi F„ Tiltman A. et al. p53 as a prognostic factor for stage III serous adenocarcinoma of the ovary. Anticancer Res 1999, 9, p.2387-2389.
26. Diebold J., Barretton G., Felchner M„ et al. Bel -2 expression. p53 accumuialion and apoptosis in ovarian carcinomas. Am. J. Clin. Pathol. 1996, 105: p. 341-349
27. Dameron K., Volpert O, Tainsky M. et al. Control of angiogenesis in fibroblasts by p53 regulation of thrombospondin 1 . Science 1994, 265, p.1582-1584.
28. Davidson В., I. Goldberg, Kopolovic J. Expression of angiogenesis -related genes in ovarian carcinoma-a clinicopathologic study. Clin. Exp. Metastasis 2000, 18 p. 501-507
29. Dong Y., Walsh M., Mc Guckin M. et al. Reduced expression of retinoblastoma gene product (pRB) and high expression of p53 are associated with poor prognosis in ovarian cancer. Int J. Cancer 1997, 74; p. 407-414.
30. Eltabbakh G., Belinson J., Kennedy A. et al. p53 overexpression is not an independent prognostic factor for patients with primary ovarian epithelial cancer. Cancer 1997, 80 (5) p.892-898
31. Ferrandina G., Fagotti A., Salerno M. et al. p53 overexpression is associated with cytoreduction and response to chemotherapy in ovarian cancer. Br. J. Cancer 1999, 81. p.733-740
32. F. iTara N., Alitalo K. Clinical applications of angiogenic growth factors and their inhibitors. Nat. Med 1999. 5, p. 1359-1364.
33. Ferrer F., Miller L., Lindquist R. et al. Expression of vascular endothelial growth factor receptors in human prostate cancer. Urology, 1999, 54, p. 567-572.
34. Folkman J. Tumor angiogenesis therapeutic implications N. Eng. J. Med. 1971,285 p.l 182-1186
35. Ferrara N., Davis Smyth T. The biology of vascular endothelial growth factor. Endocr. Rev., 1997, 18, p. 4-25.
36. Firestein G., Echeverri f., Yeo M. et al. Somatic mutations in the p53 tumor suppressor gene in rheumatoid arthritis synovium. Proc. Natl. Acd. Sci USA, 1997, 94, p. 10895-10900.
37. Fujimoto. J., Sakaguchi H., Aoki 1. et al. Clinical implications of expression of vascular endothelial growth factor in metastatic lesion of ovarian cancer Br. J. of Cancer 2001 85(3), p. 313-316.
38. Fujiwaki A., Hata R„ Nakayama K. et. al. Thymidylate synthase expression in epithelial ovarian cancer; relationship with thymidine phos-phorylase expression and prognosis. Oncology 2000, v. 59, 2, p. 152157.
39. Garcia J., Piris M., Lioret E., et al. p53 exspression in CMV infected cells: association with the alternative expression of the p53 transactivated genes p21/WAFl and mdm2 .Histopatology, 1997, 30. p. 120-125.
40. Garzetti G, Ciavattini A., Lucarini G. Vascular endothelian growth factor expression as a prognostic index in serous o\arian cystoadenocar-cinomas relationship with M1B 1 nunostaining. Gynecol. Oncol. 1999,73(3)p.396-401.
41. Garzetti G., Ciavattini A., Lucarini G. et al. Expression of Vascular endothelial growth factor relatied to 72-kilodalton metalloproteinase imnunostaining in patients with serous ovarian tumors. Cancer 1999 ,85 (10)2219-25.
42. Oasparini G. Barbareschi V., Doglioni C. Apoptosis and pathology. Clin. Cancer Res. 1995, v. 1, p. 1189-1198.
43. Geisler J., Geisler H., Wiemann M. et al. Quantification of p53 in epithelial ovarian cancer. Gynecol. Oncol. 1997, 66, p.435-438
44. Geisler H.,Geisler J., Miller G. et al. p21 and p53 in ovarian carcinoma Cancer 2001, 92, p.781 -786.
45. Mc Guire W., Hoskins W., Brady M. et al. Cyclophoshamide and cisplatin compared with paclitaxel and cisplatin in patients with stage III and IV ovarian cancer. New England J. Med., 1996, v.334, p. 1-6.
46. Mc. Guire W. III. Epithelial ovarian cancer // Proc. ASCO.-2000. Educational Book p.541-546.
47. Hartmann L., Podratz K, Keeney G. et al. Prognoslic significance of p53 immunostaining in epithelial ovarian cancer. J Clin. Oncol. 1994, 12, p.64-69.
48. Harlozinca A., Bar J., Sedlaczek P. et al. Expression of p53 protein and Ki-67 reactivity in ovarian neoplasms. Correlation with histopathol-ogy. Am. J. Clin. Pathol. 1996, 105 (3) p. 334-340.
49. Hata K., Fujiwaki R., Nakayama K. et al. Expressoon of thymidine phosphorylase and vascular endothelial growth factor in epithelial ovarian cancer correlation with angiogenesis and progression of the tumor. Anticancer Res, 2000. 20, p. 3941-3949.
50. Hata K., Fujiwaki R., Nakayama K. et al. Expression of TP and TIE2 genes in normal ovary with corpus luteum and in ovarian cancer: correlation with ultrasound-derived peak systolic velocity. 2000. Mol. Hum. Reprod V6, (4), p.319-323.
51. Hata K., Nagami H., Iida et al. Expression of thymidine phosphorylase in malignant ovarian tumors: correlation with microvessel density and an ultrasound-derived index of angiogenesis. Ultrasound Obstet. Gynecol 1998, VI2(3), p.201-206.
52. Hendriksen R, Strang P, Wilander R. et al. p53 expression in epithelial ovarian neoplasms: relationship to clinical and pathological parameters, Ki-67 expression and flow cytometry. Gynecol. Oncol. (1994), 53 p.301-306.
53. Henriksen R.,Wilander E., Oberg K. Expression and prognostic significance of bcl-2 in ovarian tumours. Br. J. Cancer 1995 73(5) p. 13241329.
54. Herod J., Eliopoulos A., Warwick J. et al. The prognostic significance of Bcl-2 and p53 expression in ovarian carcinoma. Cancer Res. 1996 56: p.2178-2184.
55. Kamesaki S., Kamesaki H., Jorgensen T. et al. Bcl-2 protein inhibits etoposide-induced apoptosis through its effects on events subsequent to topoisomerase II induced DNA strand breaks and their repair. Cancer Res., 1993, 53, p. 4251-4256.
56. Katsaros D., Levesque M., Genta F et al. Prognostik and predictive value p53 and waf-1 expression in epithelian ovarian cancer. Proc. Am Ass Cancer Res. 1998, 39 (abstract 1355).
57. Kim J., ChoY , Kvvon D. et al. Aberrations of the p53 tumor suppressor gene in human epithelial ovarian carcinoma. Gynecol. Oncol. 1995, 57, p. 199-204
58. Kiykawa T. Alteration of p53 in ovarian cancer its occurrence and maintenance in tumor progression. Int. J. Gynecol. Pathol. 1994. 13. p. 311-318.
59. Klerni P., Pylkanen L., Kiilholma P. et al. p53 protein detected b\ imnuinohistochemistry as a prognostic factor in patients with epithelial ovarian carcinoma. Cancer 1995. 76. p. 1201-1208.
60. Klerni P.,Takahashi S., Joensuu H. et al. Immunohischemical detection of p53 protein in borderline and malignant serous ovarian tumors. Int. J Gynecol. Patol. 1994, 13, p.228-233.
61. Kohler M.F, Kerns B.M, Humphrey P.A. et al. Mutation and over-expression of p53 in early stage epithelial ovarian cancer. Obstet. Gynecol. 1993, 81, p. 643-650.
62. Koomagi R., Volm M. Expression of Fas ( CD95/APO-1) and Fas-ligand in lung cancer, its prognostic and predictive relivance. Int. J. Cancer 1999, 84(3), p.239-243.
63. Korsmeyer S., bcl-2 initiates a new category of oncogenes regulators of cell death Blood 1992, 80, p. 879-886.
64. Krohler M., Kerns В., Humphrey P.et al. Mutation and overexpres-sion of p53 in early stage epithelial ovarian cancer. Obstet. Gynecol. 1993, V.81 p.643-650
65. Kupryjanczyk J. Bell D., Yandell D., et al. p53 expression in ovarian borderline and stage 1 carcinomas. AM J. Clin Pathol. 102: p.671-676.
66. Kupryjanczyk J., Thor A., Beauchamp R. et al. p53 gene mutations and protein accumulation in human ovarian cancer. Proc Natl Acad Ski USA. 1993, 90: p.4961-4965.
67. Kupryjanczyk J., Dansonka-Mieszkowska A. Szvmanska Т. et al. Spontaneus apoptosis in ovarian carcinomas: a positive association with p53 gene mutation is dependent on growth fraction. Br. J. Cancer (Scotland) 2000, 82, p. 79-83.
68. Lawler J. The structural and functional properties of thrombospondin. Blood, 1986, 67, p. 112-113.
69. Levesque M.A, Katsarods D. Yu H. et al. Mutant p53 protein over^xpression is associated with poor outcome in patients with well or moderately differentiated ovarian carcinoma. Cancer 1995, 75. p. 13271338.
70. Li Y., Chopp M„ Zhand Z. et al. P53 immunoreactive protein and p53 mRNA expression after transient middle cerebral artery occlusion in rats. Stroke 1994, 25, p. 849-855.
71. Mac. Callum D„ Hupp Т., Midgley C.et al. The p53 response to ionizing radiation in adult and developing murine tissues. Oncogene, 1996, 13, p. 2575-2587.
72. Mano Y., KiuchiY, Yamamoto K. et al. Bcl-2 as a Predictor of chemosensitivity and prognosis in primary epithelial ovarian cancer. Eur. J. Cancer 1999, 35(8), p. 1214-1219.
73. Makhija S.,Taylor D., Gibb R. et al. Taxol-induced bcl-2 phosphori-lation in ovarian cancer cell monolayer and spheroids. Int. J. Onco1. 1999, 1493, p. 515-521.
74. Marks J , Davidoff A., Kerns B. et al. Overexpression and mutation of p53 in epithelial ovarian cancer. Cancer Res 1991, 51, p. 2979-2984.
75. Marx D., Meden H„ Ziemek T. et al. Expression of the p53 tumor suppressor gene as prognostic marker in platinum treated patients \ч ith ovarian cancer. EUR J. Cancer 1998. 34, p. 845-850.
76. Marx D., Binder C., Meden H. et al. Differential expression of apoptosis associated genes bax and bcl-2 in ovarian cancer. Anticancer Res 1997, 17(3), p. 2233-2240.
77. Mazars R., Pujol P., Maudelonde T. et al. p53 mutation in ovarian cancer: Oncogene 1991. 6, p. 1685-1690.
78. Masood R., Cai J., Zheng T. et al. Vascular endothelial growth factor (vascular permeability factor is an autocrine growth factor for AIDS-Kaposi Sarcoma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997, 94, p. 978-984.
79. Milner В., Allan L., Eccles D. et a' p53 mutation is common genetic event in ovarian carcinoma . Cancer Res. 1993. 53 p.2128-2132.
80. M'lauerb., Wizigmann-voos S., Schnurch H. et al. High affinity VEG< binding and developmental expression suggest Flk-1 as a major regulator of vasculogenesis and angiogenesis Cell, 1993, 72, p. 835-846.
81. Minchenko A., Bauer Т., Salceda S. et al.: Hypoxic stimulation of vascular endothelial growth factor expression in vitro and in vivo. Lab. Invest., 1994, 71, p.374-379.
82. Munakata S., Enomoto Т., Tsujimoto M. et al. Expressions of fas ligand and other apoptosis-related genes and their prognostic significance in epithelial ovarian neoplasms Br. J. Cancer 2000, 82(8), p. 1446-1452.
83. Okomoto A., Sameshima Y., Yokoyama S. et al. Frequent allelik losses and mutationis of the p53 gene in human ovarian cancer. Cancer Res 1991 (51), p. 5171-5176.
84. Paley P., Staskus K., Gebhard K. et al. Vascular endothelial growth factor expression in early stage ovarian carcinoma. Cancer Jul. 1 1997. 80(1) p.98-106.
85. Paley P., Goff В., Gown A. et al. Alterations in SPARS and VEGF immunoreactiv ity in epithelial ovarian cancer. Gynecol. Oncol. 2000. 78, p336-341.
86. Parkin D., Pisani P., Ferlay J. Global Cancer Statistic. Ca Cancer J. Clin. 1999, 49, p.33-64.
87. Partridge E., Basnes \1., Epr Ovarian Cancer: Prevention, diagnosis, and treatment. Ca Cancer J. Clin. P.1999, p.49297-3 .'J.
88. Pilotti S., Cjllini P., Rilke F. et al. Bcl-2 protein expression in carcinomas originating from the follicular epithelium of the thyroid gland. J. Pathol., 1994. 172, p.337-342.
89. Reitmaier M., Rudlowski C., Biesterfeld S. et al. Comparative studies on the biological significance of the marker for proliferation Ki-67 Antigen and PCNA in primary ovarian carcinoma. Zentralbl Gynakol. 2000, 122(7), p. 361-367.
90. Reles A., Press M., Schunborn ' et al. Overexpression of p53 protein in ovarian carcinomas correlation with histopathologic data and clinical course .Gynaecol. Geburtshlf. Rund. 1995, 35, p. 93-97.
91. Sakai K, Kaku T, Kamura T. et al. Comparison of p53, Ki-67, and CD44v6 expression between primary and matched metastatic lesions in ovarian cancer. Gynecol. Oncol. 1999, 72(3) p. 360-366.
92. Schwarting R., Little miser markers and Ki-67. Lab. Invest., IS93, 68, p. 597-599.
93. Sheridan E., Silcocks P., Smith J, Hancock B. et al. p53 mutation in series of epithelial ovarian cancers from the U.K., and its prognostic significance. Eur. J Cancer 1994 30A p. 1701-1704.
94. Solary E., Micheau O., Dimanche-Boitrel M. Role of the Fas Fas-1 system in immune response to tumors and the resistance cytotoxic drags Bulletin du Cancer 1998 , 85t p.685-694.
95. Sorensen S., Koxren J., Holm к v 1 Therapy effect of either pacli-taxel or cyclophosphamide combination treatment in patients with epithelial ovarian cancer and relation to TP 53 gene status Br. J. Cancer 1998 78(3) г 375-381.
96. Strobel Т. Tai Y., Korsmeyer S. et al. Bad partly reverses pacli-taxel resistance in human ovarian cancer cells. Oncogene 1998. 17. p. 2419-2427.
97. S'robel Т., Swanson L. Korsmeyer S. et al. Bax enhancer pacli-taxel-induced apoptosis through a p53 independent pathway Hroc. Natl. Acad. Sri USA 1996, V 93. p. 14094-14099
98. Sumi/awа Т., Fukukawa Т., Haraguchi M. et al.: Thymiline pho-shorylase activity associated with platelet-derived endothelial cell growth factor. J. Biochem., 1993, 114. p. 9-14.
99. Tai Y„ Lee S., Niloff E. et al. Bax protein expression and clinical outcome in epithelial ovarian cancer. J. Clin. Oncol. 1998, 16, p. 25832590.
100. Takahashi Т., Tanaka M., Ogasavara J. et al. Swapping between Fas and G-CSF receptor. J. Biol. Chem. 1996, 29, p. 17555-60
101. Takebayashi Y., Yamada K., Maruyama I et al. The expression of thymidine phosphorylase and thrombomodulin in human colorectal carcinomas. Cancer Lett., 1995, 25, r>. 1-7.
102. Takebayashi Y„ Akiyama S., Akiba S. et al. Clinicopathologic and prognostic significance of an angiogenic factor thymidine phosphor)-lasein human colorectal carcinoma. J. Natl. Cancer Inst. 1996, 88. p. 1110-1117.
103. Thompson C., Ames В., Gold L. Too many rodent carcinogens mi-togenesis. Science 1990.V. 249. p. 970-971.
104. Velasco A., Gomez Bernal F., Carrasco Carrascal T. et al. Pacli-taxel(P) plus carboplatin with AUC- 7 as first line treatment of advanced ovarian cancer. Proc. ASCO 1998 Ab' 1396.
105. Viale G., Maisonneuve P., Bonoldi E. et al. The combined evaluation of p53 and of Ki-67 (MIBl) labeling index provides independent information on overall survival of ovarian carcinoma patients. Ann. Oncol.1997, 8(5) p. 469-476.
106. Walton M, Whysong D., Connor P. et al. Constitutive expression of human bcl-2 modulates nitrogen mustard and camptothecin induced apoptosis. Cancer Res., 1993, 53, p. 1853-1861.
107. Wernes В., Freedman A., Piver M. et al. Prognostic significance of p53 and p21 (Wafl/cipl) immunoreactivity in epithelial cancers of the ovary. Gynaecol. Oncol. 1999, 75, p. 413-8.
108. Witty J., Jensen R., Johnson A. Exspression and localization of Bcl-2 related proteins in human ovarian cancers. Anticancer Res. 1998, 18, p. 1223-1230.
109. Zabrenetzky V., Harris C., Steeg P. et al. Expression of the extracellular matrix molecule thrombospondin inversely correlates with malignant progression in melanoma, lung and breast carcinoma cell lines. Int. J. Cancer 1994, 59, p. 101-195.