Автореферат и диссертация по медицине (14.02.02) на тему:Безопасность, реактогенность и иммуногенные свойства отечественной вакцины против краснухи при иммунизации детей и взрослых

На правах рукописи

005002629

Цаап Андрей Александрович

БЕЗОПАСНОСТЬ, РЕАКТОГЕННОСТЬ И ИММУНОГЕННЫЕ СВОЙСТВА ОТЕЧЕСТВЕННОЙ ВАКЦИНЫ ПРОТИВ КРАСНУХИ ПРИ ИММУНИЗАЦИИ ДЕТЕЙ И ВЗРОСЛЫХ

14.02.02 «Эпидемиология» 14.03.09 «Клиническая иммунология, аллергология»

1 7 НОЯ 2011

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь-2011

005002629

Работа выполнена в государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пермская государственная медицинская академия им. академика Е.А. Вагнера» Министерства здравоохранения и социального развития

Российской Федерации.

Научные руководители: доктор медицинских наук,

профессор И.Б. Фельдблюм

доктор медицинских наук, А.Н. Миронов

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор И.И. Львова

к.м.н., O.A. Перминова

Ведущая организация:

Федеральное бюджетное учреждение науки

Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии

и микробиологии им. Г. Н. Габричевского Роспотребнадзора.

Защита состоится «__»_2011 г. в «_» часов на заседании

диссертационного совета Д 208.067.04 при ГБОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России по адресу: 614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России (614000, г. Пермь, ул. Петропавловская, 26) и с авторефератом на сайте http://vak.ed.gov.ru.

Автореферат разослан «_»_2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.м.н., профессор

Е.А. Сандакова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Эпидемиологическая и социальная значимость краснухи в современных условиях обусловлена повсеместным распространением инфекции и высоким тератогенным действием вируса, его способностью формировать врожденные дефекты развития, которые завершаются смертельным исходом или инвалидностью [Л.Л. Нисевич и др., 1998; И.В. Фельдблюм и др., 2008; И.Н. Лаврентьева и др., 2008].

Наибольшую опасность представляет краснуха в первом триместре беременности. Особенно высокая частота поражений плода отмечена при инфицировании в первые 4 недели беременности, составляющая 81,0 % , во второй и третий месяцы она снижается и составляет 26,4 % и 7,9 %, соответственно [Н.Т. Тихонова и др., 2000; В.В. Зверев и др., 2004]. Данное обстоятельство подчеркивает актуальность борьбы с этой инфекцией.

Большинство исследователей в области эпидемиологии выделяют вакцинопрофилактику краснухи как единственный эффективный и экономически оправданный метод борьбы с этой инфекцией и ее последствиями [Н.Т. Тихонова, 1998; В.В. Семериков, 2002; О.В. Цвиркун, 2008]. Данные о снижении уровня заболеваемости краснухой и СВК как в нашей стране, так и в других странах, где проводится полноценная иммунизация населения против этой инфекции, подтвердили эффективность вакцинопрофилактики [.1.Р. 1сепо£1е е1 а1., 2005; Л.В. Феклисова, 2008].

Первый опыт применения вакцины против краснухи на основе штамма ИА-27/3, выращенного на культуре клеток человеческого фибробласта, датируется 1971 годом, после того как вакцина была зарегистрирована в Европе [РагкиЬаг .Ш., 1969; Р1оИап вА, е1 а1., 1972]. В России в конце 80-х годов был получен безопасный и высокоиммуногенный вакцинный штамм «Орлов» [В.Н. Мешалова, 1979; И.Н. Лаврентьева, 2009]. Однако, в силу ряда причин, промышленного производства вакцины против краснухи на основе штамма «Орлов» по настоящее время не осуществляют.

В России массовая вакцинация населения против краснухи начала проводиться после включения этой прививки в Национальный календарь профилактических прививок в 1997 году. По причине отсутствия отечественного препарата в целях вакцинопрофилактики краснухи до настоящего времени используют препараты зарубежного производства.

Применение живых аттенуированных вакцин против краснухи в России привело к существенному снижению уровня заболеваемости и обозначило проблему ликвидации этой инфекции [И.П. Бурашникова, 2006; Бутаев Т.М., 2007].

Между тем, несмотря на массовую иммунизацию населения планеты против краснухи, до 20 % женщин репродуктивного возраста не имеют защитного титра антител к вирусу краснухи, что свидетельствует о сохранении риска возникновения СВК в условиях проведения широкомаштабной вакцинопрофилактики [БепнгсЫ Т и др., 2009].

Вышеизложенное свидетельствует о необходимости дальнейшего проведения качественной вакцинопрофилактики и поддержания высокого охвата профилактическими прививками против краснухи детей и женщин детородного возраста.

Необходимость обеспечения эпидемического благополучия по краснухе в РФ с ее последующей элиминацией и отсутствие отечественного иммунобиологического препарата для профилактики краснухи явились основанием для разработки ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России вакцины против краснухи культуральной живой, на основе штамма 11А-27/3. Был получен новый отечественный препарат для профилактики краснухи - вакцина против краснухи культуральная живая (Вакцина против краснухи (Россия)) с активностью аттенуированного вируса не менее 1000 ТЦД5о в одной дозе (0,5 мл). Примечательным является отсутствие в составе вакцины следовых количеств антибиотика.

Применение отечественного препарата для профилактики краснухи позволит избежать значительных экономических затрат государства на закупку зарубежной вакцины, а также избавит здравоохранение России от

зависимости в поставках зарубежных препаратов. Разработка нового отечественного препарата потребовала проведения исследований для научного обоснования использования вакцины в практическом здравоохранении.

В свете вышеизложенного, целью настоящего исследования явилась оценка безопасности, реактогенности и иммунологической эффективности отечественной вакцины против краснухи при иммунизации детей и взрослых.

Задачи исследования:

1. Изучить общетоксические, аллергизирующие, иммунотоксические свойства вакцины, местное и местно-раздражающее действие, а также влияние препарата на морфологические, гистологические и гематологические показатели в условиях эксперимента на лабораторных животных.

2. Изучить нейровирулентные свойства, контагиозность и иммуногенность производственного штамма и посевного вируса вакцины на приматах.

3. Оценить реактогенность, безопасность и иммунологическую эффективность вакцины против краснухи культуральной живой при иммунизации девушек детородного возраста.'

4. Изучить реактогенность и безопасность вакцины против краснухи культуральной живой при ревакцинации детей в возрасте 6 лет.

5. Оценить реактогенность, безопасность и иммунологическую эффективность вакцины против краснухи культуральной живой при иммунизации детей в возрасте 12-24 месяцев.

6. Провести сравнительную оценку отечественной вакцины против краснухи, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России, с зарубежным аналогом по профилям реактогенности, безопасности и иммунологической эффективности при иммунизации детей в возрасте 1224 месяцев.

Научная новизна:

1. Впервые в экспериментальных исследованиях на животных доказана безопасность и иммуногенность отечественной вакцины против краснухи, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России, установлено отсутствие нейровирулентных свойств и контагиозности производственного штамма и посевного вируса

2. В условиях эпидемиологических экспериментальных исследований научно обоснована низкая реактогенность, безопасность и иммунологическая эффективность отечественной краснушной вакцины при иммунизации различных возрастных групп (девушки 18-25 лет, дети 6 лет и 12-24 месяцев) презентированных в Национальном календаре профилактических прививок.

Практическая значимость

На основании проведенных исследований:

1. Новая отечественная вакцина против краснухи зарегистрирована в РФ;

2. Разработана нормативная документация на новый отечественный препарат для профилактики краснухи (фармакопейная статья предприятия, инструкция по применению, пусковой регламент производства), утвержденная генеральным директором ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России;

3. Введен в действие регламент производства отечественной вакцины против краснухи.

Научные положения, выносимые на защиту

1. Вакцина против краснухи культуральная живая, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России не оказывает негативного действия на лабораторных животных, не обладает токсическими, нейровирулентыми, иммунотоксическими, контагиозными свойствами, не проявляет аллергизирующего, местного и местно-раздражающего действия на экспериментальных животных.

2. Вакцина против краснухи культуральная живая, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России безопасна, низкореактогениа при иммунизации как детей, так и девушек детородного возраста.

3. Новая отечественная вакцина против краснухи обладает выраженными иммуногенными свойствами при иммунизации как взрослых, так и детей. Показатели иммунологической эффективности отечественной краснушной вакцины сопоставимы с таковыми у зарубежного аналога -вакцины против краснухи хорватского производства, используемого в России в рамках реализации Национального календаря профилактических прививок.

Внедрение результатов работы

Результаты исследования явились основанием для разработки Научно-технической документации (ФСП, инструкция по применению, регламент производства) на отечественную вакцину против краснухи. Результаты, полученные в эпидемиологических экспериментальных исследованиях, позволили зарегистрировать вакцину против краснухи культуральную живую, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России в Российской Федерации в установленном порядке. В Московском подразделении по производству бактерийных препаратов начат выпуск коммерческих серий вакцины для использования ее при иммунизации детей и взрослых.

Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры эпидемиологии с курсом гигиены и эпидемиологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России и используются при чтении лекций и проведении практических занятий со студентами всех факультетов и врачами эпидемиологами на циклах общего и тематического усовершенствования.

Апробация работы и публикации

Результаты исследования обсуждены на следующих научных конференциях:

- 8-я Российско-Итальянская конференция «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций» (г. Санкт-Петербург, 17-18 декабря 2009 г.);

- Научная конференция с международным участием «Этиологические, эпидемиологические и клинические аспекты инфекционных болезней» (г. Иркутск, 15-17 сентября 2010 г.);

- 9-ая Российско-Итальянская конференция «Актуальные вопросы социально-значимых вирусных инфекций» (г. Вологда, 30 сентября-2 октября 2010 г.);

- Всероссийский ежегодный конгресс «Инфекционные болезни у детей: диагностика, лечение и профилактика» (г. Санкт-Петербург, 5-6 октября 2010

г.);

- Первый конгресс Евро-Азиатского общества по инфекционным болезням (г. Санкт-Петербург, 1-3 декабря 2010 г.);

- Всероссийская научно-практическая конференция «Вакцинология 2010. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (г. Москва, 9-10 ноября 2010 г.);

- Конференция «Вакцинопрофилактика: проблемы и перспективы развития» (г. Пермь, 28 октября 2010 г.).

По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ, включая 5 в изданиях, рекомендуемых ВАК.

Личный вклад автора

Автором диссертационного исследования был разработан план проведения доклинических и эпидемиологических экспериментальных исследований препарата, осуществлялось его организационное, методическое и консультационное сопровождение. Автор принимал

непосредственное участие в проведении лабораторных и клинических исследований. Статистическая обработка результатов исследования и анализ полученных данных проводился лично автором. Автору принадлежит также непосредственное участие в разработке стратегии практического применения нового отечественного МИБП - живой культуральной вакцины против краснухи. Личное участие автора настоящей работы составляет 85 %.

Структура н объем диссертации

Диссертация изложена на 140 страницах машинописного текста и содержит следующие разделы: введение, обзор данных литературы, глава материалы и методы, две главы собственных исследований, заключение, выводы, список литературы, включающий 201 источников, из них 147 отечественных и 54 зарубежных. Работа иллюстрирована 7 рисунками, 40 таблицами.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на базе кафедры эпидемиологии с курсом гигиены и эпидемиологии ФПК и ППС ГБОУ ВПО ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера Минздравсоцразвития России.

Исследования вакцины против краснухи провели в два этапа: доклиническое изучение безопасности препарата в экспериментах на животных и оценка безопасности, реактогенности и иммунологической эффективности в эпидемиологических экспериментальных исследованиях (рандомизированные клинические испытания) на взрослых и детях.

Исследования проводились в строгом соответствии с Федеральным законом о лекарственных средствах от 22.06.1998 г. № 86-ФЗ, Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 267 «Об утверждении правил лабораторной практики», Приказом Минздрава РФ от 19.06.2003 г. № 266 «Правила клинической практики в Российской Федерации», Национальным стандартом Российской Федерации ГОСТ Р52379-2005 «Надлежащая клиническая практика», Европейским Предписаниям по вСР и Хельсинкской Декларации.

Лабораторными базами для проведения первого этапа исследования являлись: ФГУЗ «Волгоград НИПЧИ» Роспотребнадзора, Филиал «48 ЦНИИ Минобороны России - ВЦ», ФГУН «Институт токсикологии» ФМБА России.

Доклинические исследования отечественной вакцины против краснухи проводили на лабораторных животных: белых мышах (п= 218), морских свинках (п= 192), кроликах породы Шиншилла (п= 6), яванских макаках (п= 24), на которых изучили острую, хроническую токсичность, иммунотоксичность, аллергизирующие свойства (гиперчувствительность замедленного и немедленного типов), местное и местно-раздражающее действие, нейровирулентные, иммуногенные и контагиозные свойства препарата, а также влияние вакцины на гематологические, морфологические

и гистологические показатели. В качестве препарата сравнения использовали «Живую Аттенуированную Вакцину против Краснухи (Лиофилизированную)», производства SERUM INSTITUTE OF INDIA LTD (Вакцина против краснухи (Индия)). Воду для инъекций вводили контрольным группам экспериментальных животных.

Второй этап исследования проводили на клинической базе ГБОУ ВПО Пермская государственная медицинская академия им. ак. Е.А. Вагнера (ПГМА им. ак. Е.А. Вагнера), в качестве дополнительной базы использовали клинику Муниципального лечебно-профилактического учреждения «Клиническая больница №1», областной центр аллергологии и иммунологии» г. Смоленска.

Эпидемиологические экспериментальные исследования осуществили в виде рандомизированного клинического испытания с участием серонегативных к вирусу краснухи девушек в возрасте 18-25 лет (п= 40), а также детей в возрасте 6 лет (п= 80) и 12-24 месяцев (п= 160). Среди детского контингента в возрасте 12-24 месяцев провели сравнительные исследования. В качестве препарата сравнения использовали зарубежный аналог - Вакцину против краснухи культуральную живую аттенуированную, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России из субстанции, производства «Института Иммунологии, Инк», Республика Хорватия.

Возрастные группы добровольцев были определены в соответствии с Национальным календарем профилактических прививок РФ.

Реактогенность вакцины оценивали по результатам клинического наблюдения за привитыми в течении первых 7 дней после иммунизации, с последующим заполнением привитыми или их родителями дневников самонаблюдения. При этом изучали количество и выраженность местных и системных поствакцинальных реакций в течение всего периода наблюдения.

Период наблюдения за вакцинированными девушками 18-25 лет составил 42 сут., за детьми - в течение 28 сут. после иммунизации.

Изучение динамики гематологических, биохимических показателей крови, показателей мочи, а также неспецифических иммуноглобулинов у

привитых до введения препаратов и на 28 сут. после вакцинации проводили с целью оценки безопасности отечественной вакцины. Иммунологическую эффективность изучали по уровню сероконверсии (процент лиц, у которых наблюдается выработка специфических антител после введения вакцины), а также фактору сероконверсии (кратность прироста специфических антител после вакцинации).

Забор крови и мочи для проведения лабораторных исследований производили до вакцинации и на 28-30 сут. после иммунизации.

Уровень специфических антител в крови добровольцев изучали методом ИФА с использованием зарегистрированной в РФ тест-системы «Эколаб - краснуха - ^в».

Статическую обработку материалов проводили с помощью статистической программы 81аи8Йса, версия 6, с использованием параметрических и непараметрических методов. Для каждого показателя определяли среднее значение М, а также отклонение от среднего (± а) (в доклинических исследованиях) и ошибку среднего (± ш) (в эпидемиологических экспериментальных исследованиях).

Достоверность различий сравниваемых значений оценивали с помощью I - критерия Стьюдента. Разность результатов считали статистически значимой при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Характеристика безопасности и иммуногенности вакцины против краснухи при иммунизации экспериментальных животных

Наблюдение за однократно иммунизированными животными в течение

8 сут. выявило положительную динамику массы тела, как у белых мышей, так и у морских свинок во всех группах. Прирост массы экспериментальных животных, которым вводили Вакцину против краснухи (Россия) и Вакцину против краснухи (Индия) достоверно не отличался от прироста массы животных, которым вводили воду для инъекции, что свидетельствует об отсутствии какого-либо специфического воздействия отечественной вакцины на массу тела белых мышей и морских свинок.

Изменений массы внутренних органов лабораторных животных в динамике наблюдения не выявлено, что указывает на отсутствие системного воздействия исследуемого препарата на организм экспериментальных животных при однократном введении.

Таким образом, наблюдаемая положительная динамика массы тела экспериментальных животных, а также отсутствие достоверно значимых изменений в массе внутренних органов белых мышей и морских свинок, свидетельствуют об отсутствии у отечественной вакцины выраженного токсического действия в остром опыте.

Многократное (десять инъекций) введение препарата белым мышам и морским свинкам также не оказывало негативного влияния на динамику массы тела животных и отмечали прирост массы тела во всех группах. Изучение массы внутренних органов экспериментальных животных в хроническом опыте не выявило каких - либо особенностей, указывающих на токсическое влияние вакцины. (Таблицы 1-2).

Таблица 1

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ МАССЫ ТЕЛА МЫШЕЙ ПОСЛЕ МНОГОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

Группы животных в зависимости от введенного препарата Масса животных, г. М±ст *

Исходная На 11 сут. после иммунизации На 18 сут. после иммунизации Прирост массы па 18 сут. после иммунизации

Вакцина (Россия) 1 доза п/к 19,7±0,2 21,3±0,3 22,1±0,2 2,4±0,03

Вакцина (Индия) 1 доза п/к 19,7±0,2 21,3±0,3 22,1 ±0,3 2,4±0,02

Вода для инъекций 0,5 мл п/к 19,7±0,2 21,3±0,3 22,1 ±0,2 2,4±0,03

М± с * - средние значения с отклонением от среднего

Таблица 2

ДИНАМИКА ИЗМЕНЕНИЯ МАССЫ ТЕЛА МОРСКИХ СВИНОК ПОСЛЕ МНОГОКРАТНОГО ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

Группы животных в зависимости от введенного препарата Масса животных, г. М± с *

Исходная На 11 сут. после иммунизации На 18 сут. после иммунизации Прирост массы на 18 сут. после иммунизации

Вакцина (Россия) 1 доза п/к 232±7,7 251±12,7 255±7,3 23±0,4

Вакцина (Индия) 1 доза п/к 232±7,3 251±12,4 255±7,1 23±0,2

Вода для инъекций 0,5 мл п/к 232±7,5 251±12,4 255±7,3 23±0,2

М± а * - средние значения с отклонением от среднего

Гематологические и биохимические показатели крови животных после иммунизации не имели достоверных отличий этих показателей в сравнении с фоновыми значениями во всех группах, как в остром, так и в хроническом опыте. У всех экспериментальных животных наблюдали незначительные колебания анализируемых показателей крови, какой-либо определенной тенденции изменения показателей крови в процессе наблюдения не выявлено.

Результаты, полученные при изучении хронической токсичности вакцины подтвердили безопасность отечественного препарата и в хроническом эксперименте.

В опытах на животных показано отсутствие местного и местно-раздражающего действия вакцины, а также способности препарата индуцировать аллергические реакции немедленного и замедленного типов, что позволяет минимизировать риски появления анафилактических реакций (анафилактический шок, отек Квинке, крапивница и т.д.) на введение вакцины при иммунизации детей и взрослых.

Иммунотоксические свойства отечественной вакцины изучали путем определения влияния препарата на активность перитонеальных макрофагов у лабораторных животных, а также на образование АОК в селезенке белых мышей.

Данные, представленные в таблице 3 свидетельствуют, что применение вакцины не вызывает достоверно значимых изменений фагоцитарной активности макрофагов в опытной группе по сравнению с контрольной группой экспериментальных животных, что доказывает отсутствие влияния вакцины на естественную резистентность иммунной системы белых мышей. В ходе исследования была показана выраженная стимуляция препаратом АОК в селезенке мышей (Таблица 4).

Таблица 3

ПОКАЗАТЕЛИ ФАГОЦИТАРНОЙ АКТИВНОСТИ ПЕРИТОНЕАЛЬНЫХ МАКРОФАГОВ МЫШЕИ ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ПРЕПАРАТОВ

Экспериментальные группы Оптическая плотность И± о *

Опытная 0,606 ±0,012

п=16

Контрольная 0,584 ±0,011

п=16

^критерий Стьюдента 0,54

Вероятность (р) >0,05

*М± о - средние значения с отклонением от среднего

Таблица 4

КОЛИЧЕСТВО АОК В СЕЛЕЗЕНКЕ МЫШЕИ ПОСЛЕ ИММУНИЗАЦИИ

Группа животных Число АОК на 106 ядросодержащих клеток селезенки М±о * Число АОК на весь орган М±ст

Контрольная п=10 7,9±1,3 1000±94

Опытная 15,8±1,5 3162±127

п=10

* М± а - средние значения с отклонением от среднего

Таким образом негативного влияния отечественной вакцины на иммунную систему животных не обнаружено, что доказывает отсутствие иммунотоксических свойств у препарата.

Изучение нейровирулентных свойств производственного штамма и посевного вируса показало, что в течение всего периода наблюдения за животными, иммунизированными производственным штаммом и посевным вирусом вакцины против краснухи, каких-либо отклонений в соматическом и неврологическом статусе обезьян не обнаружено.

Морфологические и гистологические исследования головного мозга и внутренних органов обезьян, после интрацеребрального введения препаратов также не выявило каких либо патологических изменений (Рис. №№ 1-2). Отмечалось сохранение формы нейронов головного мозга обезьян.

■■и М| ' .....

11 ■ 1 " ."V. ■ -Л;-.'

ЩЯШаш

■ИНРШ ■ - :

шЯШНЛ

. >. * - * 4 < ' * ' ' 1 ' ' '- > . '.1 '

Рисунок 1 - Сохраненные нейроны Рисунок 2 Нсповреяедеиный хориоплексус таламуса желудочков мозга

Полученные результаты позволяют говорить об отсутствии у производственного штамма и посевного вируса вакцины против краснухи нейровирулентных свойств.

Иммуногенные свойства препаратов изучали путем

определения прироста величины титра антител к вирусу краснухи после подкожного введения обезьянам посевного вируса и производственного штамма вакцины против краснухи.

Определение специфических антител в сыворотках крови животных до иммунизации и в различные сроки после введения препаратов (7-е, 21-е, 28-е сут.) позволило выявить положительную динамику величины уровня антител к вирусу краснухи. На 28 сут. после вакцинации концентрация антител (IgG) к вирусу краснухи в сыворотках крови обезьян как после введения производственного штамма, так и после иммунизации посевным вирусом, составила 33,68 ME/мл, что свидетельствует о высокой иммуногенности изучаемых препаратов.

Результаты, полученные в рамках доклинического изучения вакцины на экспериментальных животных, позволили нам приступить ко II этапу исследований - рандомизированным клиническим исследованиям.

Изучение реактогенности, безопасности и иммунологической эффективности вакцины против краснухи среди девушек в возрасте 1825 лет

В исследовании приняли участие 40 серонегативных к вирусу краснухи девушек в возрасте 18-25 лет, которые были рандомизованы в две группы: 20 девушек были вакцинированы производственным штамом вакцины, 20 добровольцев - непосредственно вакциной.

Результаты, полученные в ходе наблюдения за привитыми свидетельствуют о низкой реактогенности как производственного штамма RA-27/3, так и вакцины, приготовленной из этого штамма при иммунизации девушек в возрасте 18-25 лет. Была выявлена всего одна реакция у одной привитой в виде артралгии слабой степени выраженности на 13-е сут. после введения вакцины, которая купировалась самостоятельно. Процентное соотношение количества реакций к общему числу вакцинированных девушек составило 5,0, что находится в пределах допустимого количества поствакцинальных реакций для вакцин на основе штамма RA - 27/3.

Изучение динамики гематологических, биохимических

показателей крови и показателей мочи не выявило достоверных отличий этих показателей на 28 сут. в сравнении с фоновыми значениями. Динамика неспецифических иммуноглобулинов также не претерпела достоверных изменений. На основании результатов лабораторных исследований был сделан вывод о безопасности производственного штамма и вакцины, произведенной на основе этого штамма при вакцинации девушек 18-25 лет.

Иммуногенные свойства производственного штамма и вакцины, произведенной из этого штамма представлены на рисунке 3.

Уровень сероконверсии Фактор сероконверсии

В Производственный штамм □ Вакцина против краснухи

Рисунок 3. Иммунологическая эффективность производственного штамма и вакцины на его основе у девушек 18-25 лет на 28 сут. после

иммунизации

Анализ данных по изучению иммунологической эффективности препаратов показал, что на 28 сут. после однократной иммунизации уровень сероконверсии достиг 100 % в обеих группах. При этом, кратность прироста величины титров антител после иммунизации в группе добровольцев, привитых производственным штаммом, составила 6,2, в группе добровольцев, которым вводили вакцину — 4,1. Индукция антител к вирусу краснухи у всех привитых добровольцев, а также высокий уровень кратности

прироста свидетельствуют о высокой иммунологической

эффективности производственного штамма и вакцины против краснухи, приготовленной из этого штамма.

Результаты, полученные в рандомизированных клинических исследованиях среди девушек 18-25 лет свидетельствуют о низкой реактогенности, безопасности и выраженной иммунологической эффективности производственного штамма и вакцины против краснухи отечественного производства.

Оценка реактогенности и безопасности вакцины против краснухи среди детей в возрасте 6 лет

Наблюдение за привитыми детьми 6 лет в поствакцинальном периоде

выявило одну местную реакцию в виде гиперемии в месте инъекции через 30 минут после введения вакцины. Реакция была слабой степени выраженности и исчезла самостоятельно на 4-е сут., что позволяет говорить о низкой реактогенности препарата для детей 6 лет. Изменений показателей крови и мочи вакцинированных детей 6 лет в динамике не наблюдали - на 28 сут. после вакцинации все показатели находились в пределах нормальных величин. При оценке неспецифических иммуноглобулинов классов А, М, в в крови привитых детей 6 лет каких либо особенностей в динамике также не выявлено, что свидетельствует о безопасности отечественной вакцины против краснухи в отношении иммунной системы детей 6 лет. Изучение содержания ^Е в сыворотках крови детей 6 лет на 28 сут. после вакцинации не выявило увеличения концентрации относительно исходных значений, что свидетельствует об отсутствии аллергизации организма после введения вакцины против краснухи.

Хотя средний уровень иммуноглобулинов класса Е был изначально повышен (что объясняется региональной особенностью содержания ^Е у населения г. Перми), на 28 сут. отмечали снижение этого показателя до нормальных величин. (Таблица 5).

Таблица 5

СОДЕРЖАНИЕ ^Е В СЫВОРОТКАХ КРОВИ ДЕТЕЙ 6 ЛЕТ ДО ИММУНИЗАЦИИ И НА 28 СУТ. ПОСЛЕ ВВЕДЕНИЯ ВАКЦИНЫ,

МЕ/мл

Содержание IgE

M±m *

Норма До На 28 сут. после

вакцинации вакцинации

<70 94,25±12,2** 11,6±21,67**

* М±ш - средние значения с ошибкой среднего **р< 0,05 - различия достоверно значимы

В соответствие с полученными результатами в группе вакцинированных детей 6 лет, был сделан вывод о низкой реактогенности и безопасности вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России при вакцинации детей 6 лет.

Сравнительная оценка реактогенности, безопасности и иммунологической эффективности отечественной вакцины против краснухи и вакцины против краснухи, произведенной из хорватской субстанции при вакцинации детей 12-24 месяцев

В сравнительном исследовании среди детей в возрасте 12-24 месяцев

80 человек вакцинировали отечественной вакциной против краснухи и 80 участников были иммунизированы препаратом сравнения - вакциной против краснухи полученной из субстанции, производства «Института Иммунологии, Инк», Республика Хорватия.

Клиническое наблюдение за детьми в первые 7 дней после иммунизации и изучение дневников самонаблюдения, заполненных родителями вакцинированных детей, поствакцинальных реакций не выявило. Во время всего периода наблюдения, изменений в состоянии здоровья привитых детей обеих групп, не наблюдалось.

Отсутствие местных и системных реакций после вакцинации свидетельствует об ареактогенности изучаемой вакцины у детей в возрасте 12-24 месяцев.

Достоверно значимых изменений гематологических и биохимических показателей крови на 28 сут. относительно исходных значений не выявлено как в опытной группе, так и в группе сравнения. Статистически значимых отличий значений гематологического и биохимического анализов крови в сравниваемых группах у детей 12-24 месяцев также не выявлено, что свидетельствует о равнозначности групп по гематологическим и биохимическим показателям.

Изучение динамики неспецифических иммуноглобулинов в сыворотке крови добровольцев на 28 сут. после иммунизации позволило выявить рост по всем показателям, в обеих группах, однако все значения оставались в пределах нормальных величин. Достоверно значимых колебаний в показателях сывороточных иммуноглобулинов после иммунизации относительно фоновых значений не обнаруженно ни в одной из групп.

Иммунологическую эффективность отечественной вакцины против краснухи у детей 12-24 месяцев изучили путем сравнительного анализа нарастания уровней антител к вирусу краснухи на 28 сут. после иммунизации детей отечественной вакциной и вакциной против краснухи полученной из субстанции, производства «Института Иммунологии, Инк», Республика Хорватия.

Уровень сероконверсии на 28 сут. после вакцинации отечественной вакциной достиг 81,3 %, при введении вакцины из хорватской субстанции -80,0 % (рисунок 4). В каждой группе привитых выявили по 12,0 % иммунотолерантных детей, которые оставались серонегативными, что возможно, объясняется неполной сформированностью функциональных механизмов иммунной системы ребенка в возрасте 12 - 24 месяцев.

Анализ полученных результатов показал отсутствие достоверного отличия в показателях иммунологической эффективности отечественной

вакцины и препарата сравнения, что доказало сопоставимость

иммуногенных свойств препаратов.

Результаты, полученные в клиническом исследовании вакцины среди детей в возрасте 12-24 месяцев свидетельствуют об ареактогенности, безопасности и высокой иммунологической эффективности новой отечественной вакцины у детей раннего возраста.

-4746-

164

81.3% 80%

уровень фактор

сероконверсии сероконверсии

Вакцина против краснухи (Россия) | | - Вакцина против краснухи (Хорватия)

Рисунок 4. Иммунологическая эффективность Вакцины против краснухи (Россия) и Вакцины против краснухи (Хорватия) у детей 12-24 месяцев на 28 сут. после иммунизации

Таким образом, в эпидемиологических экспериментальных исследованиях установлен высокий уровень безопасности и

иммунологической эффективности новой отечественной вакцины против краснухи при иммунизации девушек 18-25 лет, а также детей в возрасте 6 лет и 12-24 месяцев.

Результаты исследования, изложенные в настоящей работе, явились научным обоснованием для внедрения в медицинскую практику отечественного препарата для профилактики краснухи, что позволило зарегистрировать в установленном порядке отечественную вакцину в Российской Федерации.

ВЫВОДЫ

1. В условиях эксперимента на лабораторных животных показано отсутствие токсичности, аллергизирующих и иммунотоксических свойств, выраженного местного и местно-раздражающего действия, негативного влияния на морфологические, гистологические и гематологические показатели вакцины против краснухи культуральной живой отечественного производства, что свидетельствует о безопасности препарата для экспериментальных животных.

2. Изучение производственного штамма и посевного вируса отечественной вакцины против краснухи на низших приматах выявило отсутствие нейровирулентных (повреждающего действия вакцины на нейроны не отмечали), контагиозных (отсутствие антител к вирусу краснухи у контактных животных) свойств препаратов, а также индукцию иммунного ответа (концентрация противокраснушных антител в ИФА на 28-е сут. как после вакцинации производственным штаммом, так и после введения посевного вируса составила 33,68 МЕ/мл) введенными препаратами, что свидетельствует о безопасности для окружающих и высокой иммуногенности производственного штамма и посевного вируса. Производственный штамм и посевной вирус пригодны для приготовления коммерческих серий вакцины против краснухи.

3. Однократное введение отечественной вакцины против краснухи девушкам в декретируемом возрасте (18-25 лет) выявило, низкую реактогенность (1 системная реакция слабой степени выраженности - 5 % от общего числа привитых), безопасность (отсутствие каких-либо патологических отклонений в показателях общего анализа крови, биохимического анализа крови, общего анализа мочи и содержания ^ Е в динамике иммунизации) и высокую иммунологическую эффективность препарата (сероконверсия - 100 %, фактор сероконверсии - 6,2).

4. При ревакцинации детей в возрасте 6 лет отечественная вакцина против краснухи не оказывала негативного влияния на самочувствие и здоровье

привитых детей на протяжении всего периода наблюдения,

низкореактогенна - одна местная реакция слабой степени выраженности, безопасна - изменений лабораторных показателей крови, мочи и неспецифических иммуноглобулинов в динамике не выявлено.

5. Оценка профилей безопасности и эффективности вакцины против краснухи у детей в возрасте 12-24 месяцев позволила выявить ареактогенность (местные, системные реакции не отмечали), безопасность (патологические изменения лабораторных показателей не зафиксированы) и высокую иммунологическую эффективность (сероконверсия - более 80 %, фактор сероконверсии - 164) отечественного препарата.

6. Изучение свойств отечественной вакцины против краснухи культуральной живой, в сравнительном эпидемиологическом экспериментальном исследовании установило сопоставимость вакцин по профилям безопасности, реактогенности и иммунологической эффективности с зарегистрированным в РФ зарубежным аналогом - вакциной против краснухи, произведенной из хорватской субстанции.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Доклиническое исследование Вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ / А.Н. Миронов, A.A. Цаан, Д.С. Бушменков [и др] // Детские инфекции. - Москва: 2010 г. - №2, С. 38-41;

2. Результаты клинического изучения эффективности Вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ у детей / A.A. Цаан, А.Н. Миронов, И.В. Фельдблюм [и др.] //Детские инфекции. - Москва: 2011 г. - №1, С. 3437;

3. Изучение иммунотоксичности вакцины против краснухи, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ / A.A. Цаан, А.Н.

Миронов, Д.С. Бушменков [и др.] // Сибирский медицинский журнал. - 2010 г. - № 8, С. 100-103;

4. Результаты изучения нейровирулентных свойств культуральной живой вакцины против краснухи / А.Н. Миронов, A.A. Цаан, Д.С. Бушменков [и др.].// Педиатрическая фармакология. - 2010 г. - №4, С. 125-128;

5. Результаты клинического изучения вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ / А.Н. Миронов, A.A. Цаан, И.В. Фельдблюм [и др.) Н Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2011 г. - №1, С. 74-78;

6. Доклиническое изучение вакцины против краснухи культуральной живой / С.А. Коровкин, А.Н. Миронов, A.A. Цаан [и др.] // Аллергология и иммунология. - 2008 г. - том 10. - №2, С. 297;

7. Оценка безопасности вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ / С.А. Коровкин, А.Н. Миронов, A.A. Цаан [и др.] // сб. тр. X Международного Конгресса «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии». - г. Казань. - 2009 г., С. 7-8;

8. Доклиническое изучение вакцины против краснухи культуральной живой / А.Н. Миронов, Е.С. Сидоренко, A.A. Цаан [и др.] // Материалы научно-практической конференции с международным участием «Инфекционные и паразитарные заболевания в практике клинициста: лечение, диагностика и профилактика». - г.Харьков. - 2010г.,С.231-232;

9. Доклиническое изучение вакцины против краснухи культуральной живой / А.Н. Миронов, A.A. Цаан, Д.С. Бушменков [и др.] // Журнал инфекционной патологии. - 2010 г.- №3, С.181-182;

10. Изучение безопасности вакцины против краснухи культуральной живой, производства ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ на лабораторных животных / С.А. Коровкин, А.Н. Миронов, A.A. Цаан [и др.] // Материалы 7-й Российско-итальянской научно-практической конференции:

«Актуальные вопросы социально- значимых инфекций». - г. Санкт-Петербург. - 2009 г., С. 81.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

АОК - антителобразующие клетки

ВАК Высшая аттестационная комиссия

ГОСТ - Государственный стандарт

ИФА - иммуноферментный анализ

МИБП - медицинский иммунобиологический препарат

OAK Общий анализ крови

РФ - Российская Федерация

СВК - Синдром врожденной краснухи

Сут. - сутки

ФГУП «НПО «Микроген» Минздравсоцразвития России - Федеральное государственное унитарное предприятие «Научно-производственное объединение по медицинским иммунобиологическим препаратам «Микроген» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

ФСП - Фармакологическая статья предприятия

GCP - Good Clinical Practice, Надлежащая клиническая практика

Подписано в печать:

25.10.2011

Заказ № 6138 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferat.ru