Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Аутореактивность у больных бронхиальной астмой на фоне персистенции вирусов семейства Herpesviridae

003488990

На правах рукописи

КОНИЩЕВА АННА ЮРЬЕВНА

Аутореактивность у больных бронхиальной астмой на фоне персистенции вирусов семейства НЕЯРЕБУтШАЕ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ДЕК 2009

Москва - 2009

003488990

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ:

доктор медицинских наук профессор В. Б. Гервазиева

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор медицинских наук

Г.Л.Осипова, доктор медицинских наук профессор Ю.Л.Мизерницкий

ВЕДУЩЕЕ УЧРЕЖДЕНИЕ:

ГНЦ Институт иммунологии ФМБА России

Защита состоится « 24 » декабря 2009 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 001.035.01 при ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН по адресу: 105064, г. Москва, Малый Казенный пер., 5а.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН.

Автореферат разослан « 24 » ноября 2009 г. Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат биологических наук

Актуальность проблемы. Эпидемиологические исследования указывают на рост численности больных бронхиальной астмой (БА) во всем мире, особенно выраженный в течение последних десятилетий (Beasley R. 1998, Чучалин А.Г. 2004, Балаболкин И.И. 2003).

Согласно современным представлениям, ведущими механизмами формирования практически всех форм данного заболевания признаны атопия и связанное с ней IgE-опосредованное иммунное воспаление дыхательных путей, которое реализуется не только при контакте с экзоаллергеном, но и продолжается в межприступном периоде (Lärche М. 2003). В результате хронической альтерации бронхиального эпителия происходит выделение внутриклеточных протеинов и продуктов деградации межклеточного вещества (Holgate S.T., Montefort S. 1992), которые под воздействием факторов, способствующих срыву иммунологической толерантности, распознаются в качестве аутоантигенов (Valenta R. 2000, Seiberler S. 1999).

Феномену аутореактивности при хронических аллергических заболеваниях уделяется повышенное внимание. Так, имеются данные о наличии аутоантител (AT) к различным тканевым белкам, большинство из которых являются структурными элементами бронхиальной стенки (Nahm D.H., Lee Y.E. 2002, 2006, Mittermann I. 2002, 2008). Появление этих AT в ряде случаев объясняют наличием перекрестно-реагирующих эпитопов в структуре экзоаллергенов и тканевых антигенов (Bünder R. 2004).

В то же время все более пристальное внимание исследователей привлекает герпесвирусная инфекция в связи с ее убиквитарным распространением и пожизненным инфицированием людей в любом возрасте (Кологривова E.H. 2000, Morrison L.A. 2002, Шульженко А.Е. 2003). В ряде случаев длительная персистенция вируса простого герпеса (ВПГ) сопровождается продуктивной инфекцией практически во всех видах клеток иммунной системы, что проявляется их функциональной недостаточностью и

i

способствует формированию иммунодефицита (Баринский И.Ф. 1990, Хаитов P.M. 1995).

Спектр заболеваний, прогрессирование которых связывают с участием герпесвирусов, существенно расширяется от хронической сердечнососудистой патологии и атеросклероза до психических расстройств (Воробьев A.A. 2003). Однако результаты исследований роли вирусов семейства Herpesviridae при аллергических заболеваниях имеют противоречивый характер. Одни авторы показывают, что инфицированность ВПГ, вирусом Эпштейн-Барра (ВЭБ) и цитомегаловирусом (ЦМВ) ассоциируется с усилением проявлений атопии и увеличением содержания общего IgE (Огородова JIM. 2002, Sidorchuk А. 2003). Другие исследователи не подтверждают связи этих вирусов с формированием аллергических заболевании (Ohnishi Е. 1997, Nilsson С. 2009). При этом, имеющиеся данные не в полной мере отражают механизмы воздействия данных вирусов на иммунопатогенез атопии, в особенности при таком заболевании как бронхиальная астма.

Цель исследования

Выявить особенности аутореактивности и иммунного ответа к вирусам семейства Herpesviridae (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ) у больных с бронхиальной астмой различного течения.

Задачи исследования

1. Сформировать группы больных БА с учетом возраста и клинического течения заболевания и оценить содержание интерлейкинов ИЛ-4, ИЛ-10, общего IgE и аллергенспецифических IgE-AT.

2. Определить IgE- и IgG4-AT к тканевым антигенам (АГ) - кератину, коллагену III и VI типов, миозину и эластину в сыворотках крови больных с разным клиническим течением БА и здоровых лиц.

3. Выявить особенности иммунного IgG ответа к вирусам семейства Herpesviridae в исследуемых ipynnax.

4. Определить с помощью адаптированного метода ИФЛ IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ у больных БА и здоровых.

5. Оценить взаимосвязь между выраженностью атонии, показателями гуморального противовирусного и аутоиммунного ответа у больных БА.

Научная новизна:

1. Впервые показана связь между IgE аутореактивностью и клиническим течением БА, характеризующаяся увеличением содержания и частотой выявления IgE-AT к тканевым АГ в период ремиссии и при длительном течении заболевания (более 5 лет). Наибольшая частота выявления IgE-аутоАТ отмечена при Б А тяжелого течения (59%-81%).

2. Впервые установлено повышенное содержание IgG4-AT к тканевым АГ: кератину, коллагену III и VI типов, эластину и миозину у больных БА, детей и взрослых, в сравнении со здоровыми лицами, уровень которых снижался по мере утяжеления заболевания. Показана обратная корреляция между IgE- и IgG4-ayroAT (г=-0,55) и прямая корреляция между содержанием IgG4-ayToAT и уровнем ИЛ-10 (г=+0,7) в сыворотке крови больных БА легкой и средней степеней тяжести.

3. Впервые показано сниженное содержание IgE-аутоАТ и повышенный уровень IgG4-ayroAT на фоне применения ингаляционных глюкокортикостероидов (ИГКС) у пациентов с клинически контролируемым течением БА, что подтверждает иммунологическую эффективность используемой терапии.

4. Установлено, что у больных Б А в большинстве случаев (80-100%) выявляются IgG-AT к герпесвирусам - ЦМВ, ВПГ и ВЭБ - в высоких титрах (1:800 -1:2000) в сравнении со здоровыми лицами (1:200-1:400), причем

уровень этих AT существенно возрастал у больных БА тяжелого течения. Впервые выявлена прямая связь между содержанием IgG-AT к герпесвирусам и IgE-AT к коллагену III и VI типов (г=+0,8) и обратная связь между противовирусными IgG-AT и IgG4-ayroAT. Кроме того, содержание IgG-AT к ЦМВ находилось в обратной корреляции с содержанием ИЛ-10 (г=-0,81).

5. Впервые у больных БА с помощью адаптированного метода ИФА выявлен IgE ответ к герпесвирусам, преобладающий у взрослых пациентов в сравнении с детьми, причем выраженность его существенно возрастала по мере утяжеления заболевания. Впервые выявлена прямая ассоциация между противовирусными IgE-AT и IgE-аутоАТ. Уровень IgE-AT к герпесвирусам прямо коррелировал с содержанием ИЛ-4 и общего IgE (г=+0,51), при этом корреляция между общим IgE и IgE-AT к ВПГ составила г=+0,94.

Практическая значимость

Определение содержания IgG4- и IgE-аутоАТ к указанным тканевым антигенам в сыворотке крови больных БА может быть одним из иммунологических критериев эффективности проводимой терапии.

Оценка количественного содержания IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ одновременно с определением титров противовирусных IgG-AT в рамках комплексной аллергодиагностики у пациентов с БА может быть основанием для дополнительного назначения противовирусных препаратов и индукторов интерферона больным БА, особенно при тяжелом течении заболевания.

Апробация материалов диссертации и публикации

Материалы диссертации доложены на XI Всероссийском форуме с международным участием имени академика В.И. Йоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» (г. Санкт-Петербург, 2007 г.), на конференции молодых ученых ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН (2008 г.), на объединенном иммунологическом форуме в г. Санкт-Петербург (2008 г.), на Всемирном

Конгрессе аллергологов (\УАС) в г. Бангкок, Таиланд (2007 г.), на Конгрессе Европейского респираторного общества, г. Вена, Австрия (сентябрь 2009).

Апробация диссертации состоялась 16 октября 2009 г. на научной конференции отделов аллергологии и иммунологии ГУ НИИВС им. И.И. Мечникова РАМН.

Основные положения диссертации изложены в 8 печатных работах, в том числе в 3 журналах, рекомендованных ВАК.

Объем и структура диссертации

Материалы диссертации изложены на 130 страницах машинописного текста, иллюстрированы 22 таблицами 8 рисунками.

Диссертация состоит из введения, четырех глав обзора литературы, четырех глав собственных исследований, обсуждения полученных результатов и выводов. Список цитируемой литературы включает 125 работ отечественных и зарубежных авторов.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Нами было проведено обследование 142 больных БА, которые наблюдались в клинико-диагностическом центре НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН, в аллергологическом кабинете ГУ Поликлиники ФНПР и находились на лечении в клинике ГУ НИИ пульмонологии МЗ и СР РФ. Исследуемая группа включала 59 детей (средний возраст 12±2,7 лет) и 83 взрослых (средний возраст 49±17 лет), группу контроля составили 30 условно здоровых лиц в возрасте от 4 до 37 лет.

Клинико-функциональные критерии диагноза БА соответствовали программе вША (2006). Легкое интермиттирующее течение заболевания отмечалось у 21 человека, легкое персистирующее - у 28, среднетяжелое - у 58, в 35 случаях течение БА оценивалось как тяжелое. На момент обследования 85

пациентов (58,8%) находились в межприступном периоде БА, в то время как у 57 (41,1%) больных отмечалось обострение заболевания легкой и средней степеней тяжести.

Общее клиническое обследование пациентов включало методы объективного осмотра и функционального исследования (ФВД), оценку данных аллергологического анамнеза, а также наличия в анамнезе клинических проявлений и частоты рецидивов герпесвирусной инфекции. Все пациенты с признаками хронической герпесвирусной инфекции (87 человек) находились в межрецидивном периоде заболевания.

Материалами для лабораторного исследования служили образцы сывороток крови больных и здоровых лиц.

Определение уровня общего и специфических IgE-AT. сывороточных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10, IgG-AT к вирусам ВИГ, ЦМВ, ВЭБ семейства Herpesviridae проводили с помощью отечественных коммерческих ИФА -наборов в соответствии с Инструкцией по применению.

Определение количественного содержания IgE-AT к вирусам семейства Herpesviridae выполняли в адаптированном методе ИФА с использованием конъюгата моноклональных анти-IgE-AT и сорбированной антигенами вирусов твердой фазы («Эколаб», Россия). Количественную оценку IgE-AT вели с помощью IgE-AT референс-реагентов фирмы «Dr. Fook» (Германия).

Определение IgE и IgG4 аутоАТ к тканевым антигенам осуществляли в твердофазном методе ИФА, адаптированном в лаборатории аллергодиагностики ГУ НИИ вакцин и сывороток им. И.И.Мечникова РАМН (П.В. Самойликов 2005, В. Б. Гервазиева 2005, 2009).

Статистическую обработку количественных данных проводили с помощью методов вариационной статистики с использованием пакета прикладных программ "Statistica 6,0" (StatSoft, USA).

Результаты исследования и их обсуждение

Среди обследованных 142 больных БА у 132 пациентов (92,6%) методами кожного тестирования и определения специфических ^Е-АТ подтверждена атопическая форма заболевания. При этом была выявлена сенсибилизация к бытовым, пыльцевым и бактериальным аллергенам, которая в большинстве случаев - 88,6% (117 человек) характеризовалась как поливалентная, а у 15 больных (11,3%) имела моповалентный характер. У 10 взрослых пациентов (6,5%) отмечалась неатопическая форма БА, характеризующаяся отсутствием клинико-лабораторных признаков экзогенной сенсибилизации.

Уровень контроля над симптомами БА соответствовал критериям полного контроля у 28 пациентов (19,7%), частичного контроля - у 58 (41,5%), тогда как у 56 больных (39,4%) отмечалось неконтролируемое течение заболевания. Следует отметить, что в последних двух группах возрастала доля взрослых пациентов (76,7%) в сравнении с детьми (13,3%). Неконтролируемому течению БА соответствовал более продолжительный анамнез заболевания, который у 44,6% пациентов превышал 5- летний барьер.

Содержание общего 1§Е, ИЛ-4 и ИЛ-10 у взрослых и детей больных Б А было достоверно выше, чем у здоровых лиц (табл.1). Однако средние их значения не имели достоверных различий между группами пациентов с разной степенью тяжести заболевания, за исключением ИЛ-10, содержание которого было ниже у тяжелых больных.

В этой связи следует отметить ведущую роль ИЛ-10 как фактора физиологической супрессии иммунного ответа (ВопзЬ Ь, 1998 г.), повышенное содержание которого у больных БА отражает состояние гомеостаза -подавление избыточных реакций иммунного воспаления и продолжающейся клеточной активации. При этом уменьшение его содержания может свидетельствовать об истощении регуляторных иммунных механизмов при тяжелом течении БА.

Содержание общего ^Е, ИЛ-4 и ИЛ-10 в группах больных Б А.

Показатели [Ме(25%;75%)] Тяжесть течения БА Здоровые

Легкая Перси стир Легкая интермит Средняя Тяжелая

^Е (МЕ/мл) 199 (125;300) 127 (65;255) 230 (130;500) 280 (100; 1100) 55 (43;215)

ИЛ-4 (пг/мл) 8,45 (4,85; 10,9) 11 (5;15,8) 8 (2;13,5) 7(5;73) 3 (3;14)

ИЛ-10 (пг/мл) - - 35* (8;800) 15* (8;212) 2(1;17)

Кол-во (п) 21 28 58 35 30

* р<0,05- различия между группами пациентов со среднетяжелым и тяжелым течением БА.

Различия между возрастными группами были достоверны только в отношении сывороточного содержания ИЛ-4, увеличение которого отмечалось у больных БА детей [13,9 (7,85 ;26) пг/мл] в сравнении со взрослыми пациентами [5 (1,7;7,5) пг/мл], при этом его уровень возрастал в стадии ремиссии заболевания [9,7 (5; 15,8) пг/мл]. Увеличение содержания ИЛ-4, по-видимому, отражает активацию ТЬ2-имму1шых реакций, что подтверждается выявленной нами положительной корреляцией (г=0,38) между уровнями общего 1§Е и ИЛ-4.

Далее мы исследовали 1«Е аутореактивность у больных БА, определяя в сыворотках крови количественное содержание ^Е-АТ, специфичных к тканевым АГ, входящим в состав цитоплазмы и межклеточного вещества структур бронхиального дерева, которые повреждаются в процессе хронического аллергического воспаления и ремоделирования при БА.

Выявленное нами содержание ^Е - АТ ко всем исследуемым аутоАГ у больных БА всех степеней тяжести (табл. 2) было достоверно выше в сравнении со здоровыми лицами, за исключением ^Е-АТ к миозину, уровень которых у больных с легким интермиттирующим течением заболевания не отличался от такового у здоровых.

Содержание 1»Е-АТ (МЕ/мл) к тканевым АГ у больных БА (М ± т).

Антигены Степень тяжести БА Здоровые

Легк. интермит. Легк. персист. Средняя Тяжелая

Кератин 1,91±0.48* 1,61±0.1* 2,8±0,96* 1,85±0.37* 1,3±0.04

Коллаген 6 2,54±0.7* 1,81±0.1* 1,55±0.09* 1,42±0.02* 1,4±0.06

Эластин 1,63±0.32* 1,47±0,08* 1,35±0,03* 1,57±0,15* 1,2±0,01

Коллаген 3 1,41±0,1* 1,44±0,07* 1,63±0,3* 1,42±0,06* 1,2±0,004

Миозин 1,66±0,14 2,02±0,2* 1,94±0,2* 3,92±0,7* 1,6±0,1

* р<0,05- различия между группами больных БА и здоровых лиц.

Следует отметить, что достоверной зависимости между количественным содержанием противотканевых 1§Е-АТ и тяжестью течения БА выявлено не было.

л. интермит л. перс средняя тяжелая

Рис. 1 Частота выявления (%) повышенного уровня 1§Е-АТ к тканевым АГ у больных с БА разного течения.

При этом частота выявления повышенного содержания ^Е-аутоАТ ко всем тканевым АГ возрастала по мере утяжеления БА (рис.1), достигала наибольших значений у тяжелых больных, достоверно превышая таковую у пациентов с легким и среднетяжелым течением БА (р=0,02).

При легком интермиттирующем течении заболевания IgE-AT определялись в наименьшем проценте случаев, главным образом к коллагену III типа и эластину (25%). Обращало на себя особое внимание увеличение уровня IgE-AT к миозину, которое достигало максимальных значений (3,92±0,7 ME/мл) у 81% больных с тяжелым течением БА.

Этот факт может отражать более глубокую степень повреждения бронхиального дерева при хронизации аллергического воспаления с вовлечением в процессы ремоделирования не только бронхиального эпителия, но и гладкомышечного слоя. Таким образом, миозин, являясь структурным белком гладкомышечных клеток, представляет собой один из наиболее значимых аутоАГ в IgE аутореактивности при тяжелом течении астмы.

Содержание и частота повышенного уровня IgE-аутоАТ в отдельных возрастных группах не имели достоверно значимых различий.

При анализе выраженности IgE аутореактивности в зависимости от длительности течения БА (рис.2) оказалось, что уровень IgE ответа ко всем исследуемым АГ был достоверно выше при БА с более чем 5 летним стажем заболевания, в сравнении с пациентами, у которых БА установлена в ближайшие 6 месяцев (р<0,005).

Более 5 лет

О 0,5 1 1,5 2 2,5 3 3,5 МЕ/мл

Рис.2. Уровень IgE-AT к тканевым АГ (ME/мл) у больных в зависимости от продолжительности заболевания(М ± т).

До 6 мес

ИКератин

□ Коллаген VI ИЭ ластин

□ Коллаген III 11 Миозин

Этот факт, по-видимому, отражает более длительную антигенную стимуляцию иммунной системы на фоне прогредиентно текущего аллергического воспаления в бронхах.

Вклад IgE-аутоАТ в поддержание атопии подтверждается выявленными положительными корреляциями между уровнем общего IgE и содержанием IgE-аутоАТ к коллагену III типа (г=+0,3), эластину (г=+0,43) и миозину (г=+0,39) у взрослых больных астмой.

Кроме того, IgE-аутоАТ к кератину (г=+0,4), эластину (г=+0,57), коллагену III типа (г=+0,6) и миозину (р=+0,34) прямо коррелировали с содержанием ИЛ-4 в сыворотках крови детей и взрослых с БА легкой персистирующей и средней степенью тяжести.

□ О бострение

ЕЭ Р емиссия

Кератин Коллаген VI Эластин Коллаген III Миозин

Рис.3. Частота встречаемости повышенного содержания IgE-AT- к тканевым антигенам у больных БА с различным течением заболевания.

Дальнейший анализ результатов показал, что частота встречаемости повышенного уровня IgE-AT к 4 из 5 АГ возрастала среди больных БА в стадии ремиссии заболевания (рис.3) в совокупности с достоверным увеличением уровня IgE-AT' к АГ кератина (7,65±0,23 ME/мл), эластина (1,51±0,06 ME/мл) и коллагена III типа (1,62±0,21 ME/мл), в сравнении с пациентами, которые находились в стадии обострения заболевания (1,52±0,15 ME/мл, 1,36±0,08 ME/мл, 1,33±0,04 ME/мл, соответственно).

В период обострения БА, вероятно, противотканевые IgE-аутоАТ, связывая АГ, формируют иммунные комплексы, вследствие чего в сыворотке крови выявляется их сниженное содержание в сравнении с периодом ремиссии заболевания.

Следует отметить, что в научной литературе сообщалось также о формировании IgG аутореактивности при БА (Wallucat G 1991, Nahm D.H 2001, Bunder R 2004). В плане дальнейшего исследования представляло интерес выявить в сыворотках крови больных аутоАТ IgG4 субкласса, поскольку известно, что специфический IgG4 ответ развивается при аутоиммунном панкреатите, буллезном пемфигоиде, сахарном диабете 1 типа (Hamano Н 2001, Futei Y 2001, Kamisawa Т 2006) в ответ на длительную низкодозовую стимуляцию аутоАГ.

Таблица 3

Содержание IgG4-AT (нг/мл) к тканевым АГ у больных с различным

течением БА [Ме(25%;75%)].

Антиген Легк. интермит. Легк. персист. Средне-тяжелое Тяжелое Здоровые

Кератин 4375* (2600;5220)** 4780* (3540;6460)** 4380* (2840;6260) 4150* (2090;5650)** 3150 (2725;4070)

Коллаген 6 3880 (2940;4600) 5087* (2640;5770)** 3840* (2940;5940) 3200 (2540;4500)** 3040 (2000;4100)

Эластин 5118* (3100;6340)** 4420* (2260;6240)** 4380* (2980;7320) 3820* (2720;5980)** 3020 (2000:3960)

Коллаген 3 4480* (2980;4780) 3620 (2420;5130) 4060* (3000;5800) 3720* (3000:7140) 2540 (2360;4100)

Миозин 4080* (2980;4520) 4708* (2900;6020)** 4934* "(2880;5560) 3750* (2960:5100)** 2700 (2460;4460)

* р<0,05 - различие между больными БА и здоровыми лицами

** р<0,05 - различие между группами больных БА с тяжелым и легким течением заболевания.

В адаптированном нами методе ИФА были определены средние значения ^С4-аутоАТ к исследуемым тканевым АГ в сыворотках здоровых лиц. В сравнении с ними, у больных БА содержание ^04 ауто-АТ было достоверно

выше, за исключением IgG4-AT к коллагену VI типа у больных легкой персистирующей и тяжелой БА и коллагену III типа у пациентов с легким интермитирующим течением заболевания (табл. 3).

При оценке уровней аутоАТ в зависимости от степени тяжести заболевания, было отмечено уменьшенное содержание IgG4-AT ко всем аутоАГ у пациентов с БА тяжелой степени, в сравнении с легким интермиттирующим и персистирующим течением заболевания (р< 0,02). При этом уровень IgG4-AT к кератину, коллагену VI типа и эластину был достоверно выше у больных при легком течении БА, чем при среднетяжелом течении.

Частота повышенного уровня IgG4-ayroAT была также значительно выше среди пациентов с легким течением заболевания, у которых чаще обнаруживались IgG4-AT к АГ миозина (85% пациентов), коллагена III типа и эластина (69%), в сравнении с больными БА тяжелого течения (60%, 53% и 46%, соответственно).

При сравнении уровня и частоты выявления IgG4-ayToAT в зависимости от обострения заболевания только AT к АГ кератина были существенно выше у пациентов в стадии ремиссии БА (р=0,03).

3-7 лет 8-17 лет 18-40 л 50-81 г

Рис.4.Частота выявления IgG4-ayroAT (%) у больных БА в зависимости от возраста.

У пациентов разных возрастов отмечались достоверные различия в увеличении содержания и частоты выявления ^04- аутоАТ в группах детей в

сравнении со взрослыми больными БА (рис.4, табл. 4).

Таблица 4.

^в4-АТ (иг/мл) у больных БА разного возраста [Ме(25%;75%)].

Антигены Дети Взрослые

3-7 лет 8-17 лет 18-54 л 55-81 г

Кератин 4960* 4730* 3420* 4260

(3580;6920) (3960;6480) (3420;1680) (2560)

Коллаген 4480* 3730 3380* 3200

VI (2940;6300) (2760;4860) (2660;4660) (2530;5890)

Эластин 5280* 5310* 3460* 3840*

(3100; 17700) (3340;6740) (2720;4960) (2380;8400)

Коллаген 6260* 4720* 3200* 3540*

III (3460;12940) (3320;6480) (2640;4440) (2400;4960)

Миозин 5920* (4020;8200) 4880* (3800;6140) 3260* (2880;4060) 3710* (2640;5010)

* р<0,05 - различия между группами детей и взрослых больных БА.

Данные, отражающие состояние 1§04 аутореактивности (табл.5) у больных с легкой астмой, позволили предположить, что эти аутоАТ имеют защитный эффект в отношении тканевых АГ, и их содержание может изменяться на фоне терапии ИГКС. Действительно, количественное содержание 1§04-АТ к эластину, миозину и коллагену III и VI типов на фоне базисной ИГКС терапии (группа 1) достоверно превышало показатели этих АТ у больных, не принимавших ИГКС (группа 2). Напротив, содержание 1§Е-АТ к данным аутоАГ у пациентов 1 группы было снижено.

Нами были выявлены достоверные отрицательные корреляции между ^Е

и ^С4-АТ к коллагену VI типа (г=-0,5), коллагену III типа (г=-0,38), эластину

(г=-0,55) и миозину (г=-0,61) у больных БА всех возрастных групп. Важно

отметить также, что у больных БА легкого и среднетяжелого течения

содержание ^С4-АТ к кератину и миозину (г=+0,6) и к коллагену VI типа

(г=+0,7) положительно коррелировало с уровнем ИЛ-10, который является

14

ведущим цитокином, переключающим В лимфоциты на синтез 1§04-АТ.

Таблица 5

Содержание 1«С4 и ^Е ауто-АТ у больных БА в зависимости от объема проводимой терапии.

Антиген Кератин КоллагснУ! Эластин Коллаген III миозин

IgG4-AT (нг/мл) Группа 1 5510 (4520;7180) 4860 (3720;7000) 7090 (7022;22600) 9180 (4540; 16020) 7280 (5000; 13960)

Группа 2 3700 (3100;4400) 2940 (2640;4480) 6100 (2840;4320) 3420 (2500;4180) 4520 (1020;4920)

Р 0,09 0,02 0,04 0,01 0,05

IgE-AT (МЕ/мл) Группа 1 1,3±0,8 1,6±0,19 1.36±0.1 1.36±0.08 1,76±0,29

Группа 2 1,7±0,2 2,3±0,3 1.7±0.19 1.6±0.2 2.6±0.7

Р 0,1 0.05 0,02 0,02 0,09

Полученные результаты опосредованно подтверждают протективную роль IgG4-ayToAT при БА и согласуются с данными зарубежных авторов Karagiannidis С., Akdis М., (2004), связавших механизм терапевтического эффекта ИГКС с их способностью повышать функциональную активность ИЛ-10 - продуцирующих Tregl клеток, свидетельством чему является усиление экспрессии Foxp3+ и ИЛ-10 у больных БА на фоне приема ИГКС.

Одним из экзогенных факторов, нарушающих механизмы регуляции иммунного ответа на системном уровне, в том числе к аутоАГ, являются хронические вирусные инфекции. Наибольший интерес в этой связи представляют вирусы семейства Herpesviridae, которые, благодаря способности к инфицированию иммунокомпетентных клеток и программируемым механизмам иммунного обхода (Weslow-Schmidt JL. 2007, Novak N. 2005), могут влиять на течение атопических заболеваний (Docke WD. 2003, Hussain I. 2003) и аутоиммунных состояний (Harley JB. 2006).

На основании анализа анамнестических данных обследуемых пациентов нами было установлено, что у 87 (61,2%) из 142 больных БА отмечались

рецидивы герпетических высыпаний, среди которых у 18 человек (21,4%) имелась типичная локализация процесса, соответствующая критериям часто рецидивирующей ВПГ инфекции, тогда как у остальных пациентов проявления герпетической инфекции расценивались как редкие. Особенность клинического течения БА среди пациентов с частыми рецидивами ВПГ инфекции выражалась в преобладании неконтролируемого течения заболевания (73%) в сравнении с лицами, страдающими редкими проявлениями герпетической инфекции (46%), в группе которых чаще отмечался частичный уровень контроля над симптомами БА (87%).

Следующая часть работы была посвящена исследованию гуморального иммунного ответа к герпесвирусам, выраженность которого оценивали по содержанию противовирусных 1§0-АТ с помощью полуколичественного метода ИФА.

Таблица 6

1§0-АТ к герпесвирусам у больных с разным течением БА.

здоровые Тяжесть течения БА

легкая интермит легкая персистир средняя тяжелая

ВПГ 1:835* (1оё2=9,7) 1:676 (1с^2=9,4)** 1:1350* (1с^2=10,4)** 1:1270* (1(^2=10,3) 1:1560* (1с^2=10,6)**

ЦМВ 1:388* (1082=8,6) 1:549 (1с^2=9,1)** 1:779 (1(^2=9,1)** 1:1270* (1оё2=10,3) 1:1350* (1(^2=10,4)**

ВЭБ 1:479* (1оЁ2=8,9) 1:835* (1оё2=9,7)** 1:891* (1(^2=9,8)** 1:1024* (1с^2=10)** 1:1560* (1(^2-10,6)**

*р<0,05 - различия между больных БА и здоровыми лицами **р<0,05 - различия между группами больных БА с различным течением заболевания.

Результаты сравнительного исследования средних значений титров 1§С-АТ характеризуются достоверно более низким титром ^в-АТ к ВПГ и ЦМВ в группе контроля в сравнении с БА среднетяжелого и тяжелого течения (табл.

6). При этом, выявлено увеличенное содержание АТ к герпесвирусам в группе пациентов с тяжелой астмой, особенно 1§С-АТ к ВЭБ (р <0,001).

Следует отметить, что в группе детей с легким течением БА, выявлены отрицательные и низкие значения титров 1§0-АТ к ВПГ и ЦМВ в 100% и 87,5%) случаев, соответственно. При этом у детей, страдающих тяжелой формой БА, не было выявлено ни одного пациента серонегативного в отношении 1§0-АТ к ВПГ и ЦМВ.

Иммунный ответ к ВЭБ при легкой астме в равной степени (37,5%) характеризовался серонегативностью и высокими титрами ^С-АТ (1:800 и выше), тогда как у 50 % детей с тяжелой астмой он был отрицательным.

У взрослых пациентов с БА (рис.5) в большинстве случаев определялись высокие титры ^в-АТ к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ (1:800 и выше), тогда как в группе здоровых лиц были выявлены преимущественно средние (1:200-1:800) и низкие титры противовирусных АТ. При этом встречаемость серонегативных лиц среди взрослых пациентов была в 1,5-2 раза ниже, чем в группе детей.

0 впг ацмв в вэб

Легкая шпермит. Легкая перепет. Средняя Тяжелая

Рис.5.Частота выявления ^в-АТ (%) к герпесвирусам у больных с различным течением БА.

Корреляционный анализ зависимости между противовирусными IgG-AT и показателями аутореактивности у больных БА выявил наличие прямой связи между IgG-AT к ВПГ и IgE-AT к коллагену III и VI типов (г=+0,8), между IgG-AT к ВЭБ и IgE-AT к коллагену VI типа (г=+0,39), тогда как достоверных корреляций между противовирусными IgG-AT и содержанием общего IgE получено не было.

В то же время содержание IgG4-ayToAT находилось в обратной зависимости от выраженности противовирусного IgG ответа. Так, у больных БА, вне зависимости от возраста, отмечалась отрицательная корреляция между уровнями IgG4-AT к эластину и IgG-AT к ВПГ и ЦМВ (r=-0,9), IgG4-AT к коллагену III типа и IgG-AT к ЦМВ (г=-0,9), а также между содержанием IgG-AT к ВЭБ и IgG4-AT к кератину (г=-0,61) и миозину (г=-0,31). Также была выявлена обратная связь (г=-0,81) между уровнем IgG-AT к ЦМВ и содержанием ИЛ-10 у взрослых больных Б А.

Полученные нами корреляции свидетельствуют о том, что герпесвирусы не только способствуют утяжелению течения атопических заболеваний и увеличению уровня аллергенспецифических IgE-AT (Огородова Л.М. и Козина О.В., 2002), но и определенным образом участвуют в поддержании IgE-аутореактивности. Так, на фоне вирусной персистенции пропорционально уменьшается содержание IgG4-ayroAT к тканевым АГ, что связано, прежде всего, с влиянием вирусов на функциональное состояние Treg 1 типа и продукцию ими ИЛ-10, оказывающего регулирующее действие на баланс Thl/Th2 иммунных реакций и предотвращающего развитие аллергических и аутоиммунных процессов.

В этой связи представляло интерес выявить способность герпесвирусов индуцировать и поддерживать вирусспецифический IgE ответ. Для этого мы адаптировали метод ИФА детекции AT класса IgE к герпесвирусам (ВПГ, ЦМВ и ВЭБ) и определили их значения у здоровых лиц. Повышенное содержание противовирусных IgE-AT было выявлено у больных БА (табл.7),

18

за исключением 1§Е-АТ к ВПГ и ЦМВ при легком течении заболевания. Наибольшее содержание 1§Е-АТ выявлено у тяжелых больных, особенно выраженное к ВПГ (13±2 МЕ/мл), в сравнении с больными среднетяжелым и легким течением заболевания (р =0).

Таблица 7

^Е-АТ (МЕ/мл) к герпесвирусам у больных БА.

здоровые Тяжесть течения БА

Легкая ингермит Легкая персистир Средняя Тяжелая

ВПГ 1,8± 0,1* 2,94±0,9 ** 2,4±0,45 ** 5±0,9*, ** 13±2*,**

ЦМВ 1.7 ±0,1* 1,6±0,11** 2,8±0,6*,** 5,5±1,9*,** 5,0±1,6*,**

ВЭБ 2,2± 0,2* 3,4±1,3*,** 3,6±0,5*,** 3,1±0,6*,** 6,3±1,5*,**

*р<0,05 - различия между больных БА и здоровыми лицами **р<0,05- различия между группами больных БА с разным течением заболевания.

Подобным образом, частота выявления 1§Е-АТ к герпесвирусам повышалась по мере утяжеления БА (рис 6) и в 1,5-2 раза превышала данные показатели у пациентов с легким течением заболевания (р<0,001).

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10%

0%

Легкая

и итрпмит

Легкая Средняя Тяжелая

ПРПГ

Рис.6. Частота (%) повышенного уровня ^Е-АТ к герпесвирусам у больных с разным течением БА.

При этом особенно обращает на себя внимание высокий процент выявления ^Е-АТ к ВПГ- 97,1%, а также к ЦМВ - 88% при тяжелом течении астмы. Сравнительный анализ показателей ^Е-АТ к герпесвирусам во время и вне обострения заболевания не выявил достоверных различий.

Возрастные различия в содержании герпесвирусных 1§Е-АТ были статистически значимыми только в отношении ВПГ и ЦМВ и отражали увеличение количественного содержания и частоты выявления высокого уровня ^Е-АТ у взрослых пациентов в сравнении с детьми (рис.7 и табл.8).

Таблица 8

IgE-AT (ME/мл) к герпесвирусам у больных БА разного возраста.

дети взрослые

3-7 лет 8-17 лет 18-54 л 55-81 г

ВПГ 3,66 ± 1,44* 3,53 ± 0,9* 6,26 ± 1,43* 9,7 ± 1,5*

ЦМВ 3,6 ±0,9* 1,98 ±0,32* 3,28 ±0,87* 5,23 ± 1,1*

ВЭБ 2,68±0,41 3,59 ±0,73 3,28 ±0,8 5,23 ±1,1

*р<0,05 - различие между средними значениями содержания противовирусных ^Е-АТ у детей и взрослых больных БА.

Важно отметить, что в группе детей повышенное содержание IgE-AT к ВПГ ассоциировалось с высоким уровнем общего IgE [Ме=525 (220; 1500) ME/мл], тогда как у серонегативных пациентов содержание общего IgE было достоверно ниже [Ме=117(90;280) ME/мл ] (р< 0,02).

При исследовании взаимосвязи противотканевого и противовирусного IgE иммунного ответа нами были выявлены корреляции между IgE-аутоАТ к кератину и IgE-AT к ВПГ (г=+0,37), ЦМВ (г=+0,42) и IgE-AT к ВЭБ (г=+0,49), прямые корреляции между IgE-AT к ЦМВ и IgE-аутоАТ к коллагену VI типа (г=+0,45), эластину (г=+0,44), коллагену III типа (г=+0,42) и миозину (г=+0,35), а также между IgE-AT к ВЭБ и IgE-аутоАТ к коллагену VI типа (г=+0,63), эластину (г=+0,69) и коллагену III типа (г=+0,61).

100% 90% 80% 70% 60% 50% 40% 30% 20% 10%

□ В 11 (

□ ЦМВ 0ВЭБ

0%

3-7 лет

8-17 лет

18-54 л

55 -81 г

Рис.7. Частота (%) повышенного уровня 1§Е-АТ к герпесвирусам у больных БА разных возрастных групп.

Полученные данные подтверждают способность герпесвирусов индуцировать гиперпродукцию ^Е при аллергических заболеваниях и свидетельствуют об их участии в поддержании атопического фенотипа и аутореактивности у больных БА.

Таким образом, хроническая герпесвирусная инфекция является одним из факторов, приводящих к утяжелению БА, развитию ее неконтролируемого течения и может участвовать в формировании и поддержании не только характерного для атопии ТЬ1 /ТЬ2 дисбаланса, но и аутореактивности в результате апоптоза инфицированных клеток, высвобождения внутриклеточных антигенов и нарушения функции регуляторного Т клеточного звена иммунитета.

Выводы:

1. При клшшко-иммунологическом анализе 142 больных БА установлено, что среди пациентов с неконтролируемым течением БА преобладают взрослые старше 18 лет (77,6%) и лица с анамнезом заболевания более 5 лет (44,6%). Уровень ИЛ-4 в сыворотке крови исследуемых лиц превышал норму, коррелировал с уровнем общего ^Е и возрастал в стадии обострения заболевания, тогда как содержание ИЛ-10 было снижено при тяжелом течении БА.

2. Установлено, что у больных Б А, детей и взрослых, в отличие от здоровых лиц, формируется 1§Е аутореактивность к тканевым антигенам: кератину, коллагену III и VI типов, эластину, миозину, количественное выражение которой не зависит от тяжести заболевания, однако частота выявления повышенного содержания 1§Е-аутоАТ достоверно выше при тяжелом течении БА (р<0,05).

3. Выраженность ^Е ответа ко всем исследуемым аутоАГ возрастает в период ремиссии заболевания, коррелирует с уровнем общего ^Е и ИЛ-4 и зависит от длительности течения БА.

4. У больных БА установлено повышенное содержание ^С4-аутоАТ к исследуемым тканевым АГ, уровень и частота выявления которых выше у детей, чем у взрослых пациентов, и преобладает при БА легкого течения.

5. Корреляционный анализ выявил обратную связь между ^Е- и 1§04-АТ к тканевым АГ (г= от-0,38 до -0,61) и прямую связь между содержанием ^С4-АТ к кератину, миозину, коллагену VI типа (г=+0,6;+0,7) и уровнем ИЛ-10 у больных БА легкого и среднетяжелого течения. При этом у пациентов, получавших ИГКС, отмечалось повышенное содержание ^04-АТ к эластину, миозину и коллагену III и VI типов при низких уровнях 1§Е-АТ к данным аутоАГ.

6. У взрослых больных БА, в сравнении с группой здоровых, выявлено преобладание высоких титров IgG-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ (1:800 и выше). Встречаемость IgG-AT к герпесвирусам возрастала по мере утяжеления заболевания у взрослых пациентов. Среди детей с БА легкого течения преобладали лнца серонегативные по IgG-AT к ВПГ и ЦМВ, тогда как при тяжелой астме отмечались высокие титры IgG-AT к указанным вирусам. В группе больных с тяжелым течением БА IgG-AT к ВЭБ встречались у 100% взрослых и у 50 % детей.

7. Повышенное содержание IgG-AT к вирусам семейства Herpesviridae ассоциировалось с высоким уровнем IgE-AT к коллагенам III и VI типов и находилось в отрицательной связи с IgG4-AT к коллагену III типа, кератину, эластину и миозину. При этом высокий уровень IgG-AT к ЦМВ обратно коррелировал с содержанием ИЛ-10 у взрослых больных Б А.

8. С помощью адаптированного метода ИФА обнаружено повышенное содержание IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ в сыворотках крови больных БА, уровень и частота выявления которых существенно возрастали по мере утяжеления заболевания и преобладали у взрослых пациентов в сравнении с детьми.

9. Влияние перечисленных вирусов семейства Herpesviridae на иммунопатогенез БА подтверждается наличием прямых ассоциаций между IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ и повышенным содержанием общего IgE и ИЛ-4 в сыворотке крови больных БА, а также достоверными положительными корреляциями меяаду IgE-AT к герпесвирусам и IgE-аутоАТ ко всем исследуемым тканевым АГ.

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Коншцева А.Ю. Определение IgG-антител к тканевым антигенам у больных аллергическими заболеваниями. / Самойликов П.А., Штерншис Ю.А., Гервазиева В.Б. // Аллергология и иммунология.- 2009.- Т.10. - №1.- Стр. 17-23

2. Кошпцева А.Ю. Гуморальный иммунный ответ к некоторым тканевым антигенам у больных атопической бронхиальной астмой. / Гервазиева В.Б. // Материалы II Национального конгресса по аллергологии, иммунологии и иммунореабилитации,- 2007.- Кишинев.-Стр.213-221.

3. Конищева А.Ю. IgE аутоантитела у больных атопической бронхиальной астмой. / Штерншис Ю.А., Гервазиева В.Б. // Медицинская иммунология.-2007.-Т.9.-№2-3,- Стр. 181.

4. Konischeva A. IgE and IgG4 autoreactivity in bronchial asthma. / Gervasieva V. // Abstracts of World Allergy Congress, WAC 2007,- 2-6 December- Bangkok, Thailand.- Abs 204.

5. Конищева А.Ю. Противотканевые IgG4-AT и цитокины у больных бронхиальной астмой. / Гервазиева В.Б. // Российский иммунологический журнал,- 2008.- Т.2.- №2(11).- Стр. 121-122

6. Konischeva A. Autoantibodies and cytokines in bronchial asthma. / Gervasieva V. // XIX World Congress of Asthma, Monte-Carlo.- 2008,- November 5-8,- P.163-167

7. Конищева А.Ю. Особенности иммунного ответа к вирусам семейства Herpesviridae у больных бронхиальной астмой. / Гервазиева В.Б. // Материалы X Международного Конгресса "Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммупофармакологии".- 2009.- стр.184

8. Konischeva A. Detection of IgG and IgE-Abs to herpesviruses in asthmatic patients. / Gervasieva V. // European Respiratory Society (ERS) Annual Congress.-Vienna.- 2009.- September 12-16.- Abs 3939.

Подписано в печать 23 ноября 2009 г. Объем 1,0 п.л. Тираж 100 экз. Заказ № 1121 Отпечатано в Центре оперативной полиграфии ООО «Ол Би Принт» Москва, Ленинский пр-т, д.37

Эпидемиологические исследования указывают на рост численности больных бронхиальной астмой во всем мире, особенно выраженный в течение последних десятилетий (2,18,23). Согласно современным представлениям, атопия и связанное с ней IgE-опосредованное иммунное воспаление дыхательных путей признаны ведущими иммунопатологическими механизмами формирования практически всех форм данного заболевания (10,11,22,90). Однако зачастую БА дебютирует в отсутствии предшествующего аллергического анамнеза и наследственной предрасположенности, как правило, характеризуясь более тяжелым неблагоприятным течением и отсутствием экзогенной сенсибилизации при наличии морфологических признаков аллергического характера воспаления в бронхиальном дереве (75).

Локальный патологический процесс в бронхах при БА сопровождается хронической альтерацией тканевых структур с последующим выделением внутриклеточных протеинов и продуктов деградации межклеточного вещества, которые под воздействием факторов, предрасполагающих к срыву иммунологической толерантности, способны распознаваться в качестве аутоАГ с последующей активацией механизмов аутореактивности (84,100).

Исследования зарубежных и отечественных авторов свидетельствуют об участии аутоиммунного компонента в патогенезе хронических аллергических заболеваний, в т.ч. атопического дерматита и БА, что в ряде случаев, объясняется наличием перекрестно-реагирующих эпитопов в структуре экзоаллергенов и тканевых антигенах (50,102,114). В то же время отсутствуют определенные выводы о триггерах, запускающих и поддерживающих процессы аутореактивности при БА.

Кроме того, данные экспериментов свидетельствуют о том, что при бронхиальной астме выявляются IgG- и IgE-аутоАТ, специфичные не только к структурам бронхиального эпителия, но и к тканям других паренхиматозных органов (почки, печень, желудок, сердце) (100,113,115). По-видимому, подобный полиорганный характер аутореактивности при БА, не ограничивающийся пределами респираторного тракта, обусловлен нарушенем иммунологической толерантности в результате дефекта регуляторного звена иммунной системы при хронических формах аллергопатологии.

Латентно персистирующие вирусные инфекции, широко распространенные в популяции, сформировали множество механизмов влияния на иммунокомпетентные клетки макроорганизма и уклонения от иммунного ответа (5,13,14,85). Наибольший интерес для нас представляют вирусы семейства Herpesviridae (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ), которые благодаря способности к инфицированию иммунокомпетентных клеток и нарушению функции эффекторных и регуляторных механизмов иммунитета (6,28,92,99), могут определенным образом влиять на течение атопических заболеваний (16,45,91,94) и аутоиммунных состояний (17,29,53,68).

Цель исследования:

Выявить особенности аутореактивности и иммунного ответа к вирусам семейства Herpesviridae (ВПГ, ЦМВ, ВЭБ) у больных с бронхиальной астмой различного течения.

Задачи исследования:

1. Сформировать группы больных БА с учетом возраста и клинического течения заболевания и оценить содержание интерлейкинов ИЛ-4, ИЛ-10, общего IgE и аллергенспецифических IgE-AT.

2. Определить IgE- и IgG4-AT к тканевым антигенам (АГ) - кератину, коллагену П1 и VI типов, миозину и эластину в сыворотках крови больных с разным клиническим течением БА и здоровых лиц.

3. Выявить особенности иммунного IgG ответа к вирусам семейства Herpesviridae в исследуемых группах.

4. Определить с помощью адаптированного метода ИФА IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ у больных БА и здоровых.

5. Оценить взаимосвязь между выраженностью атопии, показателями гуморального противовирусного и аутоиммунного ответа у больных БА.

Научная новизна:

1. Впервые показана связь между IgE аутореактивностью и клиническим течением БА, характеризующаяся увеличением содержания и частотой выявления .IgE-AT к тканевым АГ в период ремиссии и при длительном течении заболевания (более 5 лет). Наибольшая частота выявления IgE-аутоАТ отмечена при БА тяжелого течения (59%-81%).

2. Впервые установлено повышенное содержание IgG4-AT к тканевым АГ: кератину, коллагену III и VI типов, эластину и миозину у больных БА, детей и взрослых, в сравнении со здоровыми лицами, уровень которых снижался по мере утяжеления заболевания. Показана обратная корреляция между IgE- и IgG4-ayToAT (г=-0,55) и прямая корреляция между содержанием IgG4-ayToAT и уровнем ИЛ-10 (г=+0,7) в сыворотке крови больных Б А легкой и средней степеней тяжести.

3. Впервые показано сниженное содержание IgE-аутоАТ и повышенный уровень IgG4-ayToAT на фоне применения ингаляционных глюкокортикостероидов (ИГКС) у пациентов с клинически контролируемым течением БА, что подтверждает иммунологическую эффективность используемой терапии.

4. Установлено, что у больных БА в большинстве случаев (80-100%) выявляются IgG-AT к герпесвирусам - ЦМВ, ВПГ и ВЭБ - в высоких титрах (1:800 -1:2000) в сравнении со здоровыми лицами (1:200-1:400), причем уровень этих AT существенно возрастал у больных БА тяжелого течения. Впервые выявлена прямая связь между содержанием IgG-AT к герпесвирусам и IgE-AT к коллагену III и VI типов (г=+0,8) и обратная связь между противовирусными IgG-AT и IgG4-ayToAT. Кроме того, содержание IgG-AT к ЦМВ находилось в обратной корреляции с содержанием ИЛ-10 (г=-0,81).

5. Впервые у больных Б А с помощью адаптированного метода ИФА выявлен IgE ответ к герпесвирусам, преобладающий у взрослых пациентов в сравнении с детьми, причем выраженность его существенно возрастала по мере утяжеления заболевания. Впервые выявлена прямая ассоциация между противовирусными IgE-AT и IgE-аутоАТ. Уровень IgE-AT к герпесвирусам прямо коррелировал с содержанием ИЛ-4 и общего IgE (г=+0,51), при этом корреляция между общим IgE и IgE-AT к ВПГ составила г=+0,94.

Практическая значимость:

Определение содержания IgG4- и IgE-аутоАТ к указанным тканевым антигенам в сыворотке крови больных БА может быть одним из иммунологических критериев эффективности проводимой терапии.

Оценка количественного содержания IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ одновременно с определением титров противовирусных IgG-AT в рамках комплексной аллергодиагностики у пациентов с БА может быть основанием для дополнительного назначения противовирусных препаратов и индукторов интерферона больным БА, особенно при тяжелом течении заболевания.

Положения, выносимые на защиту:

1. У больных БА всех возрастных групп, вне зависимости от клинического фенотипа заболевания, выявлено повышенное содержание противотканевых IgE- и IgG4-AT, находящихся между собой в обратной зависимости. Функциональная активность данных аутоАТ подтверждается изменением их содержания в стадии обострения заболевания, а также на фоне базисной терапии ИГКС. При этом выраженность IgE ответа увеличена при тяжелом и более длительном течении БА. В то же время IgG4 аутореактивность выше при легком течении заболевания и достоверно снижается по мере утяжеления астмы у взрослых пациентов в сравнении с детьми, отражая снижение регуляторных иммунологических механизмов в процессе хронизации аллергического воспаления. IgE аутореактивность, усиливая локальное повреждение бронхиального эпителия, способствует интенсификации процессов ремоделирования бронхиального дерева и ухудшению прогноза БА.

2. Больные БА характеризуются повышенным содержанием IgG-AT к ВПГ, ЦМВ, ВЭБ в сравнении со здоровыми лицами, при этом частота встречаемости высоких титров IgG-AT к герпесвирусам существенно увеличивается при тяжелом течении заболевания. В сыворотках крови обследованных лиц обнаружено повышенное содержание IgE-AT к герпесвирусам, уровень и частота выявления которых выше у взрослых пациентов в сравнении с детьми и существенно возрастают по мере утяжеления заболевания, прямо коррелируют с общим IgE и IgE-аутоАТ, что подтверждает вклад данных вирусов в поддержание атопического фенотипа. При этом противовирусные IgG- и IgE-AT напрямую связаны с высоким уровнем IgE-аутоАТ и ИЛ-4, а также обратно коррелируют с IgG4-аутоАТ и содержанием оппозитного (регуляторного) ИЛ-10. Полученные данные свидетельствуют о влиянии герпесвирусов на иммунопатогенез БА, которое реализуется через усиление дисбаланса цитокинов Thl/Th2 профиля и нарушение регуляторных механизмов с последующей активацией аутореактивности.

Выводы:

1. При клинико-иммунологическом анализе 142 больных Б А установлено, что среди пациентов с неконтролируемым течением БА преобладают взрослые старше 18 лет (77,6%) и лица с анамнезом заболевания более 5 лет (44,6%). Уровень ИЛ-4 в сыворотке крови исследуемых лиц превышал норму, коррелировал с уровнем общего IgE и возрастал в стадии обострения заболевания, тогда как содержание ИЛ-10 было снижено при тяжелом течении БА.

2. Установлено, что у больных БА, детей и взрослых, в отличие от здоровых лиц, формируется IgE аутореактивность к тканевым антигенам: кератину, коллагену III и VI типов, эластину, миозину, количественное выражение которой не зависит от тяжести заболевания, однако частота выявления повышенного содержания IgE-аутоАТ достоверно выше при тяжелом течении БА (р<0,05).

3. Выраженность IgE ответа ко всем исследуемым аутоАГ возрастает в период ремиссии заболевания, коррелирует с уровнем общего IgE и ИЛ-4 и зависит от длительности течения БА.

4. У больных БА установлено повышенное содержание IgG4-ayToAT к исследуемым тканевым АГ, уровень и частота выявления которых выше у детей, чем у взрослых пациентов, и преобладает при БА легкого течения.

5. Корреляционный анализ выявил обратную связь между IgE- и IgG4-AT к тканевым АГ (г= от-0,38 до -0,61) и прямую связь между содержанием IgG4-AT к кератину, миозину, коллагену VI типа (г=+0,6;+0,7) и уровнем ИЛ-10 у больных БА легкого и среднетяжелого течения. При этом у пациентов, получавших ИГКС, отмечалось повышенное содержание IgG4-AT к эластину, миозину и коллагену III и VI типов при низких уровнях IgE-AT к данным аутоАГ.

6. У взрослых больных БА, в сравнении с группой здоровых, выявлено преобладание высоких титров IgG-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ (1:800 и выше). Встречаемость IgG-AT к герпесвирусам возрастала по мере утяжеления заболевания у взрослых пациентов. Среди детей с БА легкого течения преобладали лица серонегативные по IgG-AT к ВПГ и ЦМВ, тогда как при тяжелой астме отмечались высокие титры IgG-AT к указанным вирусам. В группе больных с тяжелым течением БА IgG-AT к ВЭБ встречались у 100% взрослых и у 50 % детей.

7. Повышенное содержание IgG-AT к вирусам семейства Herpesviridae ассоциировалось с высоким уровнем IgE-AT к коллагенам III и VI типов и находилось в отрицательной связи с IgG4-AT к коллагену III типа, кератину, эластину и миозину. При этом высокий уровень IgG-AT к ЦМВ обратно коррелировал с содержанием ИЛ-10 у взрослых больных БА.

8. С помощью адаптированного метода ИФА обнаружено повышенное содержание IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ в сыворотках крови больных БА, уровень и частота выявления которых существенно возрастали по мере утяжеления заболевания и преобладали у взрослых пациентов в сравнении с детьми.

9. Влияние перечисленных вирусов семейства Herpesviridae на иммунопатогенез БА подтверждается наличием прямых ассоциаций между IgE-AT к ВПГ, ЦМВ и ВЭБ и повышенным содержанием общего IgE и ИЛ-4 в сыворотке крови больных БА, а также достоверными положительными корреляциями между IgE-AT к герпесвирусам и IgE-аутоАТ ко всем исследуемым тканевым АГ.