Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Роль герпесвирусной инфекции в развитии аллергических заболеваний

На правахрукописи

БНИКЕЕВА ЕКАТЕРИНА ГУМЕРОВНА

РОЛЬ ГЕРПЕСВИРУ СНОЙ ИНФЕКЦИИ В РАЗВИТИИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

14.00.36 - аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

УФА -2004

Работа выполнена на кафедре пропедевтики внутренних болезней с курсом физиотерапии Башкирского государственного медицинского упиверситета

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор

Бикбулатова Альфия Наджиховна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Еникеева Светлана Ахметовна

доктор медицинских наук, профессор Хайруллина Раиса Масгутовна

Ведущее учреждение:

НИИ вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова РАМН

Защита диссертации состоится 2004г. в Х^'часов на

заседании Регионального Диссертационного совета КМ 002.124.01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Уфимского научно-исследовательского института вакцин и сывороток им. И.И. Мечникова филиала ФГУП «НПО «Микроген» МЗ РФ в г. Уфе «Иммунопрепарат» по адресу: 450014, г. Уфа, ул. Новороссийская, 105.

у

Автореферат разослан

Ученый секретарь Диссертационного совета, доктор медицинских наук

Лукманова К.А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В последние десятилетия аллергия стала одной из наиболее актуальных медико-социальных проблем в связи с глобальной распространенностью и интенсивным ростом аллергических заболеваний. Атопические болезни уверенно занимают ведущее место среди других форм патологии по различным критериям (распространенность, тяжесть течения, сложность диагностики и терапии, реабилитация, затраты на лечение и др.) [P.M. Хаитов, 1998]. Согласно статистическим данным, атопическими заболеваниями страдают 10-30% населения всего земного шара, а в промышленно развитых странах -до 50% [S.M. Brooks, 1998]. На развитие аллергических заболеваний влияют множество факторов, среди которых одно из ведущих мест занимает вирусная инфекция [Т.И. Долгих, В.А. Чершенев, 1999; Р.И. Ершов, Н.В. Касьянова, 2002]. К числу вирусов, влияющих на аллергический процесс относятся прежде всего вирусы гриппа, парагриппа, герпесвирусы.

По данным ВОЗ, среди инфекционной патологии в будущем определяющее место будет занимать герпетическая инфекция. Это связано с многообразием клинических проявлений, особенностями возбудителей и возможностью их распространения практически всеми известным путями [В.М. Гранитов, 2001]. Персистирующая герпесвирусная инфекция вызывает выраженные иммунологические изменения, в связи с чем, крайне актуальными становятся исследования по установлению роли герпесвирусов в развитии аллергических заболеваний [Е.Н. Кологривова, 2000].

Несмотря на то, что роль вирусной инфекции в патогенезе атопических заболеваний обшепризнана [Л.А. Вишнякова, 1997; И.М. Ганджа, 1999; Е. Нег-son et al. 1999], исследований, посвященных выявлению непосредственной связи формирования этой патологии с ДНК-содержащими вирусами, немногочисленны [А.В. Александровский, 2000; Н.Г. Глинских, 2002; T.R. Mosmann, 2000]. Недостаточно изучены патогенетические, иммунологические и клинические особенности герпесиндуцированных, герпеспотенциированных аллергических заболеваний.

КИБЛВОТЕКА

о во

Выше изложенное обуславливает необходимость детального изучения патогенеза влияния герпесвирусной инфекции на формирование и течение аллергических заболеваний.

Предпосылками исследования роли герпесвирусной инфекции на развитие аллергических заболеваний послужило следующее:

- тропность герпесвирусов к лимфоцитам [А.Ф. Бочаров, 1982],

- наличие у герпесвирусов рецепторов к экто- и эндодермальным тканям (кожа и слизистые оболочки) [И.Ф. Баринский с соавт., 1986];

- длительная персистенция герпесвирусов в организме, увеличивающая риск развития атопии [В.Ш. Вотяков, А.Г. Коломиец,1988];

- характерная для герпесвирусов способность к митогенному действию, активация В-лимфоцитов, синтезирующих иммуноглобулины [W. Shelly, Е. Shelly, 1998];

- цитотоксическое действие вирусов на клетки слизистой оболочки с нарушением ее целостности и увеличением проницаемости для различных аллергенов;

- блокада бета-рецепторов, приводящая к развитию бронхоспазма [Н.М. Бережная с соавт., 1986]

Цель работы - оценка роли персистирующих герпесвирусов в формировании и течении аллергических заболеваний.

Задачи исследования:

1. Определить уровень противовирусных антител к персистирующим вирусам: простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эп-штейна-Барр у аллергических больных и у лиц контрольной группы.

2. Определить фрагменты ДНК вируса простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр в обследуемых группах с использованием молекулярно-генетических методов.

3. Исследовать состояние клеточного и гуморального иммунитета у аллергических больных на фоне герпесвирусной инфекции.

4. Установить особенности течения отдельных нозологических форм аллергических заболеваний в зависимости от типа герпесвируса.

Научная новизна работы состоит в разработке перспективного направления по изучению рати герпесвирусов в развитии аллергических заболеваний.

Для этого впервые в сравнительном аспекте определены характер и особенности клинических проявлений аллергических заболеваний при персистен-ции основных представителей группы герпеса (вируса простого герпеса-1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр). Установлена связь между титром противогерпетических антител и уровнем общего, специфических IgE в зависимости от нозологических форм атопии.

Проведена оценка иммунного статуса больных, страдающих вирусинду-цированными аллергическими заболеваниями.

Практическая значимость работы. Разработанные схемы диагностического поиска позволили определить влияние герпесвирусной инфекции на ход течения, клинические проявления и тяжесть аллергических заболеваний.

Положения, выносимые на защиту:

1. Персистенция герпесвирусов у аллергических больных вызывает повышение уровня как противовирусных антител класса G, так общего и специфических

2. Свидетельством персистенции герпесвирусов у аллергических больных при отсутствии острого инфекционного процесса является обнаружение фрагментов ДНК вирусов.

3. Важным звеном патогенеза персистирующей герпесвирусной инфекции является способность ее подавлять некоторые этапы иммунного ответа, а также ингабировать митоген- и антиген потенцииро-ванный бластогенез.

4. В развитии атопического дерматита преобладает влияние цитомега-ловирусной инфекции, способной индуцировать как гиперчувстви-телыюсть замедленного типа, так и вызывать поликлональную активацию В-лимфоцитов с гиперпродукцией антител.

5. Избирательная тропность вируса Эпштейна-Барр к В-лимфоцитам и эпителию верхних дыхательных путей способствует формированию респираторных аллергозов - бронхиальной астмы и поллиноза.

Внедрение в практику

Разработанные схемы обследования аллергических больных, включающие оценку вирусной нагрузки, уровня иммунологической реактивности внедрены в практику аллергологического отделения ГКБ №21 (г. Уфа).

Теоретические и практические рекомендации по материалам диссертации включены в программу обучения врачей-терапевтов на кафедре терапии с курсом подготовки врачей общей практики Института последипломного образования БГМУ.

По материалам работы издано информационно-методическое письмо «Роль герпесвирусной инфекции в развитии аллергических заболеваний», утвержденное МЗ РБ, 20 октября 2003 г.

Апробация работы

Апробация диссертации проведена, на межкафедральном заседании Башкирского государственного медицинского университета.

Основные положения диссертации представлены на научно-практической конференции «Современные проблемы атопического дерматита» (Новосибирск, 2000), VII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000), V Съезде Иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2000), IV Конгрессе РЛАКИ (Москва, 2001), \Ш Съезде Всероссийского Общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002), XIII Национальном Конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

По материалам исследования опубликовано 11 научных работ в журналах и сборниках.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на ПО страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 таблицами, 13 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, данных собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы, включающего в себя 193 работы (115 отечественных и 78 зарубежных авторов).

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

В соответствии с поставленной целью и задачами было проведено обследование 190 больных аллергическими заболеваниями. Контрольную групп) составили 24 практически здоровых лиц. Возраст обследованных был от 15 до 39 лет.

Среди больных 44,2+2,4% составляли мужчины, 55,7+3,0% - женщины. Контрольная группа была по возрасхно-лоловому составу идентична обследуемым больным.

Всем больным и лицам контрольной группы выполнялись общепринятые клинические и специальные методы исследования, проведенные в несколько этапов:

- на первом этапе верифицировали диагноз, для чего использовали сбор аплергологического анамнеза и клиническое обследование больных: общий и биохимический анализы крови (проведены 214 обследованным), постановка кожных проб (58 больным), определение уровня общего обследованным) и специфических 1дЕ (175 обследованным), спирография (95 больным);

- на втором этапе исследования оценивали роль герпесвирусов в развитии аллергических заболеваний и контрольной группы. Для решения этой задачи устанавливались уровни противовирусных антител к вирусам: простого герпеса-1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр (214 обследованных), также производилось выявление ДНК вирусов (214 обследованных);

- на третьем этапе в обследуемой и контрольной группах исследовалось состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета. С этой целью оп-

ределялось обшее число лимфоцитов, субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с мо-ноклональными антителами к дифференцировочным антигенам (СДЗ, СД4, СД8, СД22, СД16, ИЬА-БК) (72 обследованных), иммуноглобулинов класса А,М,СЦИК (214 обследованных).

Статистическая обработка результатов исследования проводилась методом вариационной статистики с вычислением средней величины (М), средней ошибки (м) и уровня значимости (Р) по-Стьюденту [И.М. Харисова, 1999].

Результаты исследования и их обсуждение

При клиническом обследовании бронхиальная астма была установлена у 31.0+1,6% больных, поллиноз - у 25,0+1,4%, обследованных, крапивница выявлена в 23,0+1,2% случаев и атопический дерматит - в 21,0+1,1 % случаев.

У 82,5+4,4% больных с помощью кожных проб подтверждена сенсиби-лшация к тем или иным аллергенам: при бронхиальной астме в 77.8+1,4% случаев выявлена бытовая и эпидермальная сенсибилизация, в 22,2+1,2% случаев - пыльцевая. Положительные кожные пробы с пыльцевыми аллергенами выявлены у 84,0+4,5% больных поллинозом: наиболее часто пыльцевая сенсибилизация проявлялась на пыльцу деревьев (61,0+3,2%), реже к пыльце луговых (22,2+1,2%) и сорных (16,0+0,4%) трав. При кожных проявлениях аллергии у 10 больных определна пищевая сенсибилизация (к белку к>риного яйца, рыбе и молоку). Положительные кожные пробы имели прямую корреляционную зависимость с уровнем специфических Так, при бытов.ой и эпидермальной сенсибилизации индекс корреляции составил +0,8 (сильная прямая), при пыльцевой + 1,0 (полная прямая), при пищевой +0,5 (средняя прямая корреляционная зависимость).

11ри обследовании у аллергических больных острый инфекционный процесс был исключен по клиническим симптомам и по уровню противовирусных антител класса М. Так, уровень к герпесвирусам соответствовал контрольным: при персистенции вируса простого герпеса (ВПГ-1,2) 1цМ составлял 0,1+0,0030П (в контроле - 0,4+0.0040П), при персистенции цитомегало-впрусной инфекции (ЦМВИ) уровень 1§М составлял 0,17+0,10П (в контроле-

0,15±0,ООЗОП), при персистенции вируса Эпштейна-Барр (ВЭБ)- 0,09±0.0ЮП (в контроле-0,08±0,010П).

В то время, как установлены высокие уровни противовирусных антител класса G к изучаемым герпес вирусам, значительно превышающие показатели контрольной группы. Так, к ВПГ-1,2 у аллергических больных в зависимости от нозологических форм колебался от 1,0 до 1,7±0,20П (р<0,001), к ЦМВот 1,2 до 1,8+0,2ОЩр<0,001),кВЭБ-1,24-1,56+0,ЗОП(р<0,001).

У 73,5+3,9% аллергических больных посредством полимеразно-цепной реакции (ПЦР) были выявлены ДНК вируса простого герпеса 1,2 типа, у 68,8+3,7% больных -ДНК цитомегаловируса и у 17,7+0,9% - ДНК вируса Эп-штейна-Барр.

При этом, между обнаруженными фрагментами ДНК герпесвирусов и уровнем противовирусных антител класса G к соответствующим вирусам была определена прямая корреляционная зависимость. Так, индекс корреляции между данными показателями персистирующего вируса простого герпеса 1,2 типа в зависимости от нозологических форм аллергии колебался от +0,6 до +0,9, при цитомегаловирусной инфекции составил +0,7, при персистенции вируса Эпштейна-Барр - +0,7.

Интенсивность антителообразования была оценена по титрам противо-герпетических антител класса G. Установлено, что у 40,7+2,2% обследованных титры к вирусу простого герпеса 1,2 типа определены в разведении 1:800, у 48,0+2,6% больных - в разведении 1:400, тогда как в контроле у 51,8+2,7% обследованных были выявлены низкие титры (табл. 1).

В наших исследованиях была выявлена прямая сильная корреляционная связь между уровнем противовируснных антител класса и общим, а

также специфическими ^Е. На фоне высоких противовирусных антител класса О, обший ^Е в среднем составлял 1024,0+97,0 МЕ/мл (р<0,001), специфические ^Е преимущественно соответствовали высокой (3-4) степени выраженности сенсибилизации.

Таблица

Уровень выявленных титров противовирусных антител класса G к ВПГ-1,2 в обследованных группах (%)

Титры антител Группа обследованных больных Контрольная группа

Высокие титры 1:800 40,7+2,2 -

Средние титры 1:400 48,0±2,6 48,2±2,6

Низкие титры 1:100-1:200 11,1 ±0,6 51,8±2,7

Так, к бытовым' аллергенам - домашней пыли в обследуемой группе у 25,0±1,3% больных выявлена 3 степень сенсибилизации, у 12,5±0,7% - 4 степень. К клещу домашней пыли у 37,5±2,0% больных установлена 3 степень выраженности сенсибилизации и у 12,5+0,7% - 4 степень выраженности сенсибилизации. Таким образом, герпес вирусная инфекция может усиливать уже имеющуюся сенсибилизацию организма с одной стороны, и вызывать независимую аллергическую реакцию с другой, протекающую по 1 (атопическому) или по 2 (цитотоксическому) типу.

Согласно полученным данным, в обследуемой группе при персистенции ВПГ-1,2 преобладает реагиновый тип гиперчувствительности с высоким уровнем общего и специфических IgE. Наиболее высокие концентрации общего и специфических были установлены при бронхиальной астме -

1112,0±60,0МЕ/мл, несколько ниже - при рецидивирующей крапивнице -993,0±53,6 МЕ/мл.

Особенностью течения аллергических заболеваний на фоне ЦМВИ является его способность к иммуносупрессии [Е.Б. Жибурт с соавт., 1997; Н.В. Ка-ражас, 1997; S.M. Hammer et a!., 2000; T.R. Mosmann, S. Sad, 2000]. У аллергических больных было отмечено уменьшение числа Т-лимфоцитов преимущественно за счет Т-супрессоров а также подавление киллерного звена иммунитета. Содержание естественных киллеров (СД16) у обследованных

больных было в 4 раза меньше, чем в контроле. В работах В.А. Исакова [1999]. Е. Pelton et al. [1980], S. Plaeger-Marshall, S.W. Smith [1978], S.L. Shore, A.S.Nahmias [1982] показано, что первым звеном зашиты от герпесвирусов являются естественные киллеры, активируемые интерферонами. Позже против инфицированных клеток начинают работать цитотоксические лимфоциты (СД8), включаются механизмы антителозависимой цитотоксичности (СД16). Длительная персистенция вирусов способствует развитию стойких иммуноде-фицитных состояний, приводящих к еще большему ослаблению местных барьеров и разбалансировке системного иммунитета в целом.

Функциональная недостаточность Т-системы иммунитета сопровождается усилением пролиферации В-лимфоцитов с тенденцией к росту СД22 и гиперпродукцией иммуноглобулинов. Так, в обследуемой группе больных отмечено достоверное повышение содержания обшего

(870,0+46,9 МЕ/мл), которое коррелировало с высоким уровнем ЦМВ-антител класса G (г=+0,9). При этом, наиболее высокие титры антител к ЦМВ были установлены у больных с атопическим дерматитом: в 80,0+43% случаев у данной группы больных титр противовирусных антител соответствовал разведению 1:800 (табл. 2).

Таблица2

Уровень выявленных титров противовирусных антител класса G к ЦМВ в обследованных группах (%)

1 . Титры антител Бронхиальная астма Крапивница Атопический дерматит Контрольная группа

; Высокие титры ! 1:800 37,5±2,0 50,0±2,7 80,0±4,3 -

! Средние титры 1 1:400 50,0±2,7 42,8±2,3 12,0±0,6 21,6±1,2

! Низкие титры I 1:100-1:200 12,5±0,6 7,2±0,3 8,0+0,5 78,4±4,2

Учитывая гетерогенную теорию развития атопического дерматита с участием как !§Е-зависимого, так и клеточного механизмов, а также доказанных

фактах о репликации цитомегаловируса в Т-лимфоцитах (хеллеры, супрессоры) и в некоторых случаях - в В-лимфоцитах [В.М. Гранитов, 2001], можно объяснить механизм иммунной перестройки при вирусиндуцированном атопическом дерматите. Внедрение ЦМВ приводит к угнетению пролиферативной активности лимфоцитов и, прежде всего тропных Т-лимфоцитов. В свою очередь, Т-иммунная недостаточность усиливает пролиферацию В-лимфоцитов [А.А. Ми-хайленко, В.И. Покровский, 1998; СВ. Прозоровский, И.С. Тарковский, 1998].

Наиболее выраженные сенсибилизирующие свойства из группы герпес -вирусов установлены у вируса Эпштейна-Барр [Р. Яеижег, 1994; 8. Romagnani, 1999], что объясняется тропностью его к эпителию верхних дыхательных пу-гей и к В-лимфоцитам. Среди межэпителиальных лимфоцитов иммунорегуля-юрной зоны миндалин и лимфоцитов в составе покровного эпителия слизистой оболочки преобладают Т-клетки киллерного типа, дифференцирующие ТЬ2, что предполагает к сенсибилизации [В.П. Быкова, 2002; М.А. Пальцев, А.А. Иванов, 1995]. Так, при исследовании интенсивности антителообразова-ния в группе обследованных больных нами были установлены высокие (разведение 1:800) и средние (1:400) титры противовирусных антител, в контроле преобладали низкие титры (1:100-1:200) (табл. 3).

Таблица 3

Уровень выявленных титров противовирусных антител класса С к ВЭБ в обследованных группах (%)

Титры антител Группа обследованных больных Контрольная группа

Высокие титры 1:800 38,4±2,1 -

Средние титры 1:400 43,5±2,3 25,0±4,1

Низкие титры ! 1:100-1:200 17,4±0,4 75,0±],4

Высокий уровень антител класса ко всем исследованным герпесвирусам является с одной стороны показателем защиты и предупреждает рецидив латентной формы инфекции. С другой стороны, противовирусные антитела могут

играть роль блокаторов, препятствуя адекватному распознованию антигенов, подавляя активацию таких механизмов иммунитета как фагоцитоз, цитолиз, киллинг-эффект, осуществляемый натуральными киллерами (ЫК) и сенсибилизированными СД8-цитотоксическими лимфоцитами [В.А. Исаков с соавт., 1999]. Противовирусные антитела наряду с ограничением инфекционного процесса, обеспечивают длительную персистенцию герпесвирусов в организме.

Не обладающие прямым сенсибилизирующим действием герпесвирусы, активно пролиферируя в организме аллергических больных, прямо или опосредованно через иммунокомпетентные клетки способствуют развитию аллергического процесса.

Изменение иммунной реактивности у аллергических больных при перси-стенции вируса Эпштейна-Барр происходит за счет достоверного (р<0,001) повышения содержания В-лимфоцитов, ответственных за выработку ^Е (табл. 4).

Таблица 4

Показатели уровня моноклональных антител в обследованных группах на фоне персистенции ВЭБ (%)

Иммунологические показатели Группа обследованных больных Контрольная группа Достоверность (р)

сдз 61,0±3.2 69,0±3,7 <0.05

СД4 28,0±1,5 42,0±2,2 <0.001

СД8 21,0±1,1 28,0±1,5 <0,01

"СД22 11,9±0,6 12.0±0,6 >0,05

СД16 8,5±0,4 16,0+0,8 <0,001

Ш-А-ОЯ 32,5+1,7 27,0±1,4 <0.01

У 14,1+2,1% больных бронхиальной астмой и у 13,6+1,3% больных пол-линозом на фоне персистенции ВЭБ отмечается некоторое увеличение содержания СД22 (р<0,01) (табл. 5).

Число активированных лимфоцитов также повышено и составляет 33,4+1,8% у больных с поллинозом и 32,8+1,7% - при бронхиальной астме (в контроле-27,0+1,4% р<0,01).

Таблица 5

Показатели уровней моноклональных антител у больных рассматриваемых нозологии на фоне персистенции ВЭБ (%)

Нозологические формы сдз СД4 СД8 СД22 СД16 HLA-DR

Бронхиальная астма 59,0+3,1 30,2±1,6 21,4± 1,1 14,1 ±0,7 10,2+0,5 32,8±1,7

Р <0,001 <0,001 <0,001 <0,05 <0,001 <0,01

Поллиноз 59,5+3,2 27,4±1,5 16,2±0,8 13,6+0,7 7,0+0,3 33,4+1,8

р <0,001 <0,001 <0,001 >0,05 <0,001 <0,01

Атопический дерматит 62,0±3,3 27,0±1,4 20,8+1,1 9,8+0,5 7,0+0,3 32,4±1,7

Р <0,01 <0,001 <0,001 <0,01 <0,001 - <0,01

Кот роль 69,0±3,7 42,0±2,2 28,0±1,5 12,0+0,6 !6,0±0,8 ' 27,0+1,4

При респираторных аллергических заболеваниях (бронхиальная астма, полли-ноз) повышение содержания активированных лимфоцитов происходит за счет В-лимфоцитов (СД22 и HLA-DR), а при атопическом дерматите за счет активированных Т-лимфоцитов, что определяется снижением СД22 и повышением (табл. 5).

Необходимо отметить, что пролиферация В-лимфоцитов при персистен-ции вируса Эпштейна-Барр происходит на фоне снижения числа гаплоспеци-фических, цитотоксических лимфоцитов с фенотипом СД8 (р<0,001). В наших исследованиях были отмечены особенности влияния герпесвирусов на течение отдельных нозологических форм аллергических заболеваний. Так, при респираторных аллергозах (бронхиальная астма, поллиноз) преобладало влияние вируса Эпштейна-Барр. В 41,6±2,2% случаев были отмечены высокие титры антител класса G к ВЭБ (1:800), коррелирующие с показателями общего и специфических Интенсивность антителообразования имела прямую корреляционную зависимость с репликационной активностью ВЭБ

При атопическом дерматите наиболее высокие уровни противовирусных антител класса G были выявлены при персистенции ЦМВИ.Угнетение проли-феративной активности Т-лимфоцитов, прежде всего Т-супрессоров, вызывало стимуляцию В-лимфоцитов с гиперпродукцией антител.

При рецидивирующей крапивнице наиболее высокий уровень антител класса G определен к ВПГ-1,2 и составил 1,3±0,ЮП. При этом, в 52,0±2,8% случаев титры антител выявлены в разведении 1:800 и коррелировали с повышенной концентрацией общего IgE (941,О±51,0МЕ/мл). У 69,0± 1,3% больных рецидивирующей крапивницей обнаружены фрагменты ДНК ВПГ-1,2.

Полученные нами данные подтверждают рать герпесвирусов в формировании и течешш аллергических заболеваний. Одним из вероятных механизмов поли-клоналыюй активации В-лимфоцитов является воздействие на них вирусных глико-протсинов, обладающих митогсшюй активностью [А.А. Кущ, Л.Н. Хахалин, 1998].

К настоящему времени доказано, что герпесвирусы in vitro могут как подавлять некоторые этапы иммунного ответа в организме, так и ингибировать

митоген- и антигенидуцированный бластогенез [S. Plaeger-Marshall, 1978; Е.К. Pelton, 1980]. Механизм этой иммуносупрессии до конца не установлен. Однако известно, что герпес вирусы могут размножаться во всех субпопуляциях Т-лимфоцитов при условии их активации каким-либо антигеном или мито-геном [S.M. Hammer, 1982; S.M. Hammer, 1983]. Таким образом, рассматриваемые герпесвирусы обладают способностью выступать как в роли первопричины развития иммунодефицита и формировать атопию, так и усугублять течение атопических заболеваний на фоне имеющихся иммунодефицитных состояний.

ВЫВОДЫ

1. При персистенции герпесвирусов у аллергических больных определен повышенный уровень противовирусных антител класса G, преимущественно в средних (1:400) и высоких титрах (1:800).

2. Доказательством персистенции герпесвирусов у аллергических больных является обнаружение фрагментов ДНК вирусов в реакции ПЦР: вирус простого герпеса-1,2 определен у 73,5% больных, цитомегаловирус - у 68,8%, вирус Эпштейна-Барр - у 17,4% обследованных больных.

3. Свидетельством влияния герпесвирусной инфекции на аллергический процесс является прямая сильная корреляционная связь между высоким уровнем противовирусных антител класса и повышенным содержанием общего, специфических

4. Важным звеном патогенеза персистирующих герпесвирусов в развитии ато-пии является их способность как подавлять некоторые этапы иммунного ответа, так и ингибировать митоген- и антигениндуцированный бластогенез.

5. В развитии атопического дерматита преобладает влияние цитомегаловиру-са, снижающего пролиферативную активность гропных Т-лимфоцитов и вызывающих поликлональную активацию В-лимфоцитов.

6. Избирательная тропность вируса Эпштейна-Барр к В-лимфоцитам и к эпителию верхних дыхательных путей способствует формированию респираторных аллергозов - бронхиальной астмы и поллиноза.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется по-этапное обследование аллергических больных с затяжным и резистентным к традиционным методам лечения течением заболевания, включающее изучение аллергологического анамнеза, кожное тестирование, определение общего и специфических 1|зД; при респираторных аллергозах - спирография; при аллергодерматозах - ФГДС, УЗИ органов брюшной полости, анализ кала на дисбактериоз.

2. Идентификация герпесвирусов методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР), позволяющим выявить единичные копии вирусной ДНК и доказывающим наличие данного персистирующего вируса: определение противовирусных антител класса О - показателя наличия хронического инфекционного процесса (метод иммуноферментного анализа (ИФА)).

3. Для углубленной диагностики иммунной недостаточности, выявления конкретного звена в иммунной системе, где имеется поражение, необходимо определение общего числа лимфоцитов, субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с моноклональными антигенами к дифференцировочным антигенам : СДЗ, СД4, СД8, СД22, СД16, НЬА-БЯ, иммуноглобулинов класса А,в,М.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бикбулатова А.Н., Мавзютов А.Р., Еникеева Е.Г., Нигматуллина Г.Н., Га-шимова Д. Т. Влияние персистирующей вирусной инфекции на течение ато-пического дерматита // «Современные проблемы атопического дерматита» : сб.трудов.- Новосибирск, 2000. - С. 12-13.

2. Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н., Мавзютов А.Р., Еникеева Е.Г. Роль вирусной инфекции в развитии аллергических заболевани // Аллергология и иммунология.- 2000.- т.1.-№2.- С.37.

3. Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н., Еникеева Е.Г. Персистирующие вирусы и их патогенетическое значение в развитии атлергических заболеваний // Аллергология и иммунология.- 2000.- т.1.-№2.- С.41.

4. Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н., Еншсеева Е.Г. К вопросу диагностики и профилактики аллергических заболеваний // Тезисы докладов IV Национального конгресса РААКИ «Современные проблемы аллергологии, иммунологии и иммунофармакологии» - М., 2001.- Т.2.-С.132.

5. Еникеева Е.Г., Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н. Современные подходы к профилактике и лечению аллергических заболеваний // Тез. докладов 8-го российского национального конгресса «Человек и лекарство».- М,

2001.-С.261.

6. Бикбулатова А.Н., Еникеева Е.Г., Нигматуллина Г.Н. Патогенетические механизмы влияния вируса Эпштейна-Барр на развитие аллергических заболеваний // Материалы 8-го съезда всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.-М., 2002.- Т.1.-С.13.

7. Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н., Еникеева Е.Г. Роль вируса Эпштей-на-Барр в развитии аллергических заболеваний // Материалы 8-го всероссийского общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов.- М.,

2002.-т. 1.-С. 14.

8. Бикбулатова А.Н., Мавзютов А.Р., Нигматуллина Г.Н., Еникеева Е.Г. Роль вируса Эпштейна-Барр в развитии БА // Пульмонология.- С.-Пб., 2003.- С.48.

9. Бикбулатова А.Н.. Нигматуллина Г.Н., Еникеева Е.Г. Вирусиндуцирован-ные заболевания органов дыхания//Пульмонология.- С.-Пб., 2003.- С. 106.

10. Еникеева Е.Г., Бикбулатова А.Н., Нигматуллина Г.Н. Роль герпесвирусной инфекции в развитии аллергических заболеваний. Информационно-методическое письмо.- МЗ РБ от 20.10.2003.-12 с.

11. Еникеева Е.Г., Бикбулатова А.Н., Мавзютов А.Р., Нигматуллина Г.Н. Роль вирусов простого герпеса 1,2 типа в развитии аллергических заболеваний // «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии»: Мат. Всеросс. науч. конф.-Уфа, 2004.- С. 53-55.

ЕНИКЕЕВА ЕКАТЕРИНА ГУМЕРОВНА

РОЛЬ ГЕРПЕСВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ В РАЗВИТИИ АЛЛЕРГИЧЕСКИХ ЗАБОЛЕВАНИЙ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Издательская лицензия № 06788 от 01.11.2001 г. ООО «Издательство «Здравоохранение Башкортостана» 450077, РБ, г. Уфа, ул. Ленина, 3, тел. (3472) 22-73-50, факс 22-37-51. Отпечатано на ризографе. Подписано в печать 23.04.2004 г. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Бумага офсетная. Усл. печ. л. 1,16. Уч.-изд. л. 1,25. Тираж 100. Заказ №107.

$15196

Актуальность проблемы

В последние десятилетия аллергия стала одной из актуальных медико-социальных проблем в связи с глобальной распространенностью и интенсивным ростом аллергических заболеваний. Атопические болезни уверенно занимают ведущее место среди других форм патологии по различным критериям (распространенность, тяжесть течения, сложность диагностики и терапии, реабилитация, затраты на лечение и др.) [104]. Согласно статистическим данным, атопическими заболеваниями страдают 10-30% населения земного шара, в промышленно развитых странах - до 50% [130].

На развитие аллергических заболеваний влияют множество факторов, среди которых одно из ведущих мест занимает вирусная инфекция [28, 30]. К числу вирусов, влияющих на аллергический процесс относятся прежде всего вирусы гриппа, парагриппа, герпесвирусы.

По данным ВОЗ (1997г.), среди инфекционной патологии в будущем одно из первых мест будет занимать герпетическая инфекция. Это связано с многообразием клинических проявлений, особенностями возбудителей и возможностью их распространения практически всеми известным путями [25]. Персистирующая герпесвирусная инфекция вызывает выраженные иммунологические изменения, в связи с чем, крайне актуальными становятся исследования по установлению роли герпесвирусов в развитии аллергических заболеваний [50].

Несмотря на то, что роль вирусной инфекции в патогенезе атопических заболеваний общепризнана [17, 23, 169], исследований, посвященных выявлению непосредственной связи формирования этой патологии с ДНК-содержащими вирусами, немногочисленны [3, 24, 158]. Недостаточно изучены патогенетические, иммунологические и клинические особенности герпесиндуцированных, герпеспотенциированных аллергических заболеваний, вследствие чего не разработаны эффективные лечебные и профилактические мероприятия.

Вышеизложенное обуславливает необходимость детального изучения патогенеза влияния герпесвирусной инфекции на формирование и течение аллергических заболеваний, что позволит разработать адекватные методы их профилактики и лечения.

Предпосылками исследования роли герпесвирусной инфекции в развитии аллергических заболеваний послужило следующее:

- тропность герпесвирусов к лимфоцитам [13];

- наличие у герпесвирусов рецепторов к экто- и эндодермальным тканям (кожа и слизистые оболочки) [6];

- длительная персистенция герпесвирусов в организме, увеличивающая риск развития атопии [20];

- характерная для герпесвирусов способность к митогенному действию, активация В-лимфоцитов, синтезирующих иммуноглобулины [188];

- цитотоксическое действие вирусов на клетки слизистой оболочки с нарушением ее целостности и увеличением проницаемости для различных аллергенов;

- блокада бета-рецепторов, приводящая к развитию бронхоспазма [9]. s Цель работы - оценка иммунного статуса больных аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, атопический дерматит, крапивница, поллиноз) на фоне персистенции герпесвирусов (вирус простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловирус, вирус Эпштейна-Барр).

Задачи исследования

1. Исследовать состояние клеточного и гуморального звеньев иммунитета у больных аллергическими заболеваниями на фоне персистенции герпесвирусной инфекции.

2. Определить уровень противовирусных антител к вирусам простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр у больных аллергическими заболеваниями и у лиц контрольной группы.

3. Определить фрагменты ДНК вирусов простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр в обследуемых группах с использованием молекулярно-генетических методов.

4. Определить характер и особенности клинических проявлений аллергических заболеваний при персистенции основных представителей группы герпеса.

Научная новизна

1. Впервые в сравнительном аспекте определены характер и особенности клинических проявлений аллергических заболеваний при персистенции основных представителей группы герпеса (вирусов простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр).

2. Впервые предложена комплексная схема оценки иммунного статуса больных аллергическими заболеваниями, у которых выявлены антитела к герпесвирусам.

3. Установлена связь между титром противогерпетических антител и уровнем общего ^Е, специфических ^Е в зависимости от нозологических форм атопии.

Практическая значимость работы

Разработанные схемы позволяют рекомендовать практическому здравоохранению оценку иммунного статуса больных различными аллергическими заболеваниями (бронхиальная астма, атопический дерматит, крапивница, поллиноз) на фоне инфицированности вирусами простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловируса, вируса Эпштейна-Барр, что в дальнейшем, позволит корректировать лечение больных аллергическими заболеваниями, не поддающихся традиционным схемам лечения.

Положения, выносимые на защиту

1. Влияние персистирующих герпесвирусов у больных аллергическими заболеваниями связано с нарушением иммунорегуляции, проявляющейся снижением функциональной активности Т-звена иммунитета (вирусы простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловирус), либо со стимулирующим действием на В-лимфоциты (вирус Эпштейна-Барр).

2. Персистенция герпесвирусов у больных аллергическими заболеваниями сопровождается повышением уровня противовирусных антител (^С), коррелирующее с высоким уровем общего ^Е и специфических (г=+0,9, р<0,001).

3. Обнаруженные фрагменты ДНК вирусов, посредством полимеразно-цепной реакции, свидетельствуют о наличии герпесвирусов у больных аллергическими заболеваниями при отсутствии острого инфекционного процесса.

4. Выявлены особенности влияния различных типов герпесвирусов на аллергические заболевания. В развитии атопического дерматита преобладает влияние цитомегаловирусой инфекции, способной индуцировать как гиперчувствительность замедленного типа, так и вызывать активацию В-лимфоцитов с гиперпродукцией антител.

5. У больных респираторными аллергозами (бронхиальная астма, поллиноз) выявлена связь с персистенцией вируса Эпштейна-Барр, тропного к В-лимфоцитам и эпителию верхних дыхательных путей.

Внедрение в практику

По материалам работы издано информационно-методическое письмо «Роль герпесвирусной инфекции в развитии аллергических заболеваний», утвержденное МЗ РБ 20 октября 2003 года.

Разработанные схемы обследования аллергических больных, включающие оценку уровней противовирусных антител, сыворотки крови, показателей иммунологической реактивности, внедрены в практику аллергологического отделения ГКБ №21 (г. Уфа).

Теоретические и практические рекомендации по материалам диссертации включены в программу обучения врачей-терапевтов на кафедре терапии с курсом подготовки врачей общей практики Института последипломного образования БГМУ.

Апробация работы

Апробация диссертации проведена на межкафедральном заседании Башкирского государственного медицинского университета совместно с кафедрой микробиологии с курсом иммунологии 01 июля 2003 года и на расширенном заседании Регионального Диссертационного Совета КМ 002. 124. 01 при Президиуме Академии наук Республики Башкортостан от 04 марта 2004 года.

Основные положения диссертации доложены на научно-практической конференции «Современные проблемы атопического дерматита» (Новосибирск, 2000), VII Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000), V Съезде иммунологов и аллергологов СНГ (Москва, 2000), IV Конгрессе РААКИ (Москва, 2001),VIII Съезде Всероссийского Общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов (Москва, 2002), XIII Национальном Конгрессе по болезням органов дыхания (Санкт-Петербург, 2003), на Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные вопросы инфекционной патологии человека, клинической и прикладной иммунологии» (Уфа, 2004).

По материалам исследования опубликовано 11 научных работ в журналах и сборниках.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 106 страницах машинописного текста, иллюстрирована 29 таблицами, 12 рисунками. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, данных собственных исследований, обсуждения

ВЫВОДЫ

1. Персистенция герпесвирусов у больных аллергическими заболеваниями связана с нарушением иммунорегуляции, проявляющимся снижением функциональной активности Т-звена иммунитета (вирусы простого герпеса 1,2 типа, цитомегаловирус) и стимуляцией В-лимфоцитов (вирус Эпштейна-Барр).

2. У больных аллергическими заболеваниями на фоне персистенции герпесвирусов определен высокий уровень противовирусных антител (1§0), преимущественно в средних (1:400) и высоких титрах (1:800).

3. Доказательством персистенции герпесвирусов является обнаружение фрагментов ДНК вирусов в реакции ПЦР: вирусы простого герпеса-1,2 определены у 73,5% больных, цитомегаловирус — у 68,8%, вирус Эпштейна-Барр - у 17,4% обследованных больных.

4. Свидетельством влияния герпесвирусной инфекции на аллергический процесс является прямая сильная корреляционная зависимость между высоким уровнем противовирусных антител (^в) и повышенным содержанием общего ^Е, а также специфических 1§Е (г=+0,9, р<0,001).

5. У больных с респираторными аллергозами (бронхиальная астма, поллиноз) выявлена связь с персистенцией вируса Эпштейна-Барр, а у больных с атопическим дерматитом преобладает влияние цитомегаловирусной инфекции.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Рекомендуется поэтапное обследование аллергических больных с затяжным, резистентным к традиционным методам лечения течением заболевания, включающее изучение аллергологического анамнеза, кожное тестирование, определение общего и специфических при респираторных аллергозах - спирография; при аллергодерматозах -ФГДС, УЗИ органов брюшной полости, анализ кала на дисбактериоз.

2. Идентификация герпесвирусов методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР), позволяющим выявить единичные копии вирусной ДНК и доказывающим наличие данного персистирующего вируса: определение противовирусных антител (^О) (метод иммуноферментного анализа (ИФА)).

3. Для углубленной диагностики иммунной недостаточности, выявления конкретного звена в иммунной системе, где имеется поражение, необходимо определение общего числа лимфоцитов, субпопуляций Т- и В-лимфоцитов с моноклональными антигенами к дифференцировочным антигенам : СЭЗ+, СБ4+, СБ8+, СВ22+, СЭ16+, НЕА-ОК+, иммуноглобулинов класса А,С,М.