Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Антитоксические свойства биологически активной добавки детоксал

На правах рукописи

Р Г Б ОД

САВЧЕНКО Ольга Владимировна V

- 4 НО/1 шз

АНТИТОКСИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНОЙ ДОБАВКИ ДЕТОКСАЛ

14.00.25 - фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Владивосток - 1999

Работа выполнена во Владивостокском государственном медицинском универагтете

Научный руководитель: доктор биологических наук,

профессор Хотимченко Ю.С. Научный консультант: доктор медицинских наук,

доцент Кропотов A.B.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук

Ведущав организацня: Институт фармакологии Томского научного центра Сибирского отделения РАМН

диссертационного совета К 084.24.02 при Владивостокском государственном медицинском университете по адресу: 690002, г. Владивосток, пр. Острякова, 2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Владивостокского государственного медицинского университета

Кириллов О.И.

доктор медицинских наук,

профессор Мирошниченко В. А.

Защита состоится

1999 года в

часов на заседании

Автореферат разослан

1999 года

Ученый секретарь

диссертационного совета к.м.н.

е.в. Елисеева

О

г

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы. Создание, изучение и применение в медицинской практике биологически активных добавок к пище (БАД) составляют широко развиваемое в настоящее время научное направление -фармаконутрициологию, занимающую пограничное положение между фармакологией и наукой о питании. Применение БАД является эффективной формой первичной и вторичной профилактики, а также лечения таких широко распространенных хронических заболеваний как ожирение, атеросклероз, злокачественные новообразования и иммунодефицитные состояния (Тутельян, 1996; Лоранская, 1997). К числу БАД-нутрицевтиков относят группу природных высокомолекулярных соединений, объединенных термином пищевые волокна. Эти вещества обладают способностью абсорбировать и выводить из организма токсические метаболиты, желчные кислоты, электролиты, токсины, а также ионы тяжелых металлов (Беляков, 1991; Погожева 1998).

Эти свойства пищевых волокон вызывают большой интерес в связи с неуклонным ростом частоты острых и хронических экзогенных отравлений, обусловленных широким использованием во всех сферах человеческой деятельности огромного числа различных химических соединений (Трахтенберг и др., 1994). Повышенный уровень таких веществ в воздухе, воде, почве негативно сказывается на деятельности всех жизненно важных органов и систем и обуславливает общую высокую заболеваемость населения, проживающего и работающего в экологически неблагоприятных условиях (Кунцевич и др., 1983; Даутов, Яруллин, 1993; Вельтищев, 1995). Свинец вызывает интерес как приоритетный загрязнитель окружающей среды, угрожающий здоровью миллионов людей, особенно детей (Авцын и др., 1991; Картинок и др.. 1996).

Решение проблемы профилактики экологически обусловленных заболеваний составляет сложную социальную задачу. Одним из перспективных медицинских направлении решения данной проблемы является поиск и

внедрение в практику безвредных биологически активных добавок к пище, уменьшающих резорбцию токсикантов и способствующих их выведению из организма человека.

Цель работы. Цель работы состояла в экспериментальном обосновании применения биологически активной добавки детоксал, как безопасного и эффективного средства, обладающего антитоксическими свойствами.

Задачи работы:

1. В токсиколого-гигиеническое эксперименте исследовать острую и подострую токсичность биологически активной добавки детоксал.

2. Определить в экспериментах in vitro сорбционную емкость детоксала и других сорбентов по отношению к ионам свинца

3. На модели свинцовой интоксикации лабораторных животных оценить эффективность антитоксического действия детоксала.

4. Доказать способность детоксала выводить свинец из внутренних органов экспериментальных животных.

5. Изучить эффекты детоксала при экспериментальном токсическом гепатите.

6. Оценить энтеросорбционные свойства детоксала у человека.

Научная новизна.

1. В токсиколого-гигиеническом эксперименте доказана безопасность применения детоксала

2. Впервые на моделях свинцовой интоксикации и острого токсического гепатита у экспериментальных животных показана антитоксическая активность детоксала.

3. На модели свинцовой интоксикации лабораторных животных выявлена способность альгината кальция сорбировать тяжелые металлы в кишечнике и уменьшать содержание металлов во внутренних органах.

Практическая значимость. На основании проведенных экспериментальных исследований разработана нормативная документация на производство биологически активной добавки «Детоксал». Разработаны, согласованы и

зарегистрированы в установленном порядке технические условия на БЛД «Детоксал» ТУ 9284-019-27028268-97, регистрационное удостоверение № 001055.Р.643.09.99. Произведенный препарат реализуется населению через аптечную сеть. На основании результатов клинических наблюдений БАД «Детоксал» внедрен к применению в детской городской больнице № 1, в центре медицинской экологии для реабилитации детей с техногенными полигипермикроэлементозами.

Основные положения, выносимые на защиту;

1. Биологически активная добавка детоксал безопасна и нетоксична при применении.

2. Детоксал - препарат, обладающий .наибольшей способностью связывать ионы свинца по сравнению с другими сорбентами.

3. Детоксал препятствует нарушению функций печени при экспериментальном токсическом гепатите.

4. Детоксал оказывает профилактическое и лечебное действие при свинцовой интоксикации у лабораторных животных.

5. Назначение детоксала устраняет избыточное содержание свинца в организме детей.

Апробация работы. Основные результаты исследования доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Здоровье и болезни человека на Дальнем Востоке» (Владивосток, 1993), на 2 съезде физиологов Сибири и Дальнего Востока (Новосибирск, 1995). на 3 международном симпозиуме стран юго-восточного Тихоокеанского региона (Осака, Япония, 1995), на 5 Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998), на конференции «Состояние здоровья населения Дальнего Востока. Новые медицинские технологии с использованием биоресурсов» (Владивосток, 1999).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания

материалов и методов исследования, 5 глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, списка литературы. Работа содержит 7 рисунков и 22 таблицы. Библиография состоит из 108 отечественных и 138 иностранных источников.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Эксперименты были проведены на 617 белых нелинейных растущих крысятах самцах и самках и взрослых крысах-самцах, а также на 120 белых мышах-самцах.

Общая характеристика изученных препаратов. В работе были исследованы: детохсал - таблетки, содержащие 300 мг альгината кальция (НПФ «Востокфарм», Владивосток); анкир-Б - таблетки целлюлозы микрокристаллической (АО «Эвлар» и АО «Полиэкс», Бийск); полифепан -грануляг (ТОО «Сти-Медика» и Институт молекулярной генетики РАН, Москва); гумивит-К - порошок (ООО НПК «Ково», Владивосток); морская капуста - порошок (НПФ «Востокфарм», Владивосток); уголь активированный - таблетки (ОАО «Ай Си Эн Лексредства», Курск); хитозан - порошок (НПФ «Востокфарм», Владивосток); сплат - таблетки микроводоросли спирулина (НПО «Биосоляр» МГУ, «АРЕАЛ LTD», МКПФ «Вега», Москва).

Экспериментальные методы. В опытах по изучению эффектов детоксала при свинцовой интоксикации лабораторным животным внутрижелудочно через зонд вводили водный раствор ацетата свинца в дозах 50 и 100 мг/кг/сут и суспензию детоксала в дозах 0,5, 1 и 2 г/кг/сут. Контрольная группа животных получала обычную виварную диету.

Для изучения острой и подострой токсичности животным внутрижелудочно вводили суспензию детоксала в дозах 0,2 и 0,25, 0,5, 1, 2, 4 г/кг соответственно.

Острый токсический гепатит моделировали 7-днсвным внутрнжелудочным введением беспородным белым мышам-самцам или крысам 10% раствора тетрахлорметана в оливковом масле в дозе 3 мл/кг. После этого подопытным

животным за 30 минут до еды энтерально один раз в сутки вводили детоксал в дозе 150 мг/кг массы в течение 14 дней. Острый свинцовый гепатит вызывали 3-х недельным введение крысам-самцам ацетата свинца в дозе 50 мг/кг. В последующие 3 недели животным экспериментальной группы вводили детоксал в дозе 1 г/кг. Интактные животные получали обычную виварнун> диету.

Физиологические методы исследования. Двигательную активность животных исследовали в «открытом поле». В течение 2-х мин регистрировали число вставаний на задние лапки и количество пересеченных линий в «открытом поле» (Буреш и др., 1991).

Мышечную работоспособность исследовали с помощью плавательной пробы (Рылова, 1964), с грузом вес которого составлял 10% от массы тела животного. Животное помещали в стеклянный аквариум высотой 70 см. Высота столба воды была 30 см, температура воды 28-32°С.

После вскрытия животных определяли вес внутренних органов. Массу внутренних органов пересчитывали на 100 г массы тела животного.

Физико-химические и биохимические методы. Содержание элементов (свинца, кальция, магния) в моче и кале детей, содержание свинца во внутренних органах животных (костях, печени, почках, семенниках) и в растворах различных сорбентов определяли атомно-абсорбционным методом (Славин, 1971; Прайс, 1976;Брицке, 1982).

Количество калия и натрия в сыворотке крови животных измеряли методом пламенной фотометрии (Портяная и др., 1990).

Содержание первичных продуктов перекисного окисления - диеновых коныогатов ненасыщенных жирных кислот оценивали по характерному спектру поглощения раствора липидов в смеси изопропан-гексан при длине волны 232 мм (Владимиров, Арчаков, 1972).

Количество малопоного диальдегида определяли по реакции с 2-пюбарбт уроном кислотой с образованием триметинового комплекса с максимумом поглощения при 532 им (Гаврнлов, Мсшкорудная, 1983).

Состояние антиоксидантной системы оценивали по содержанию а-токоферола (Черняускене и др., 1984) и восстановленного глутатиона (Moron, Depierre, 1979).

Количество белка устанавливали, измеряя оптическую плотность раствора, образовавшегося при реакции с бромфеноловым синим (Greenberg, Gaddock, 1982).

Уровень глюкозы в крови определяли орто-толуидиновым методом (Портяная и др., 1990).

Количество мочевины, активность аланин- и аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови животных измеряли с помощью набора реактивов «Биолахема-тест».

Определение остаточного азота производили с реактивом Несслера (Бородин, 1989).

Содержание ß-липо протеидов оценивали, измеряя оптическую плотность раствора, образующегося в результате реакции сыворотки крови с гепарином и 0,27% раствором СаС1, при 630 нм (Бородин, 1989).

Определение экскреции креатинина с мочой производили на биохимическом анализаторе фирмы Ля Рош «Cobas Mira plus».

Для определения общего холестерина в сыворотке крови крыс измеряли интенсивность окрашивания при реакции с уксусной кислотой и хлорным железом в присутствии концентрированной серной кислоты (Портяная и др., 1990).

Содержание общих липидов в сыворотке крови и печени в печени животных оценивали, измеряя оптическую плотность образовавшихся в ходе реакции эмульсий при длине волны 434 нм (Портяная и др., 1990).

Уровень гликогена в печени измеряли по Ван Ханделу (Van Handel, 1967), используя глюкозу в качестве стандарта.

Для определения содержания фосфора (Портяная и др., 1990), кальция (Вишневская, Ляшевская, 1974), железа и магния (Унифицированные

методы..., 1977) в сыворотке крови крыс, измеряли оптическую плотность растворов, образующихся в ходе специфических реакций для каждого элемента, при определенной длине волны.

Гематологические методы. Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов в крови животных производили под микроскопом в камере Горяева.

Концентрацию гемоглобина в крови крыс определяли с помощью диагностического набора «Биоконт гемоглобин», выпускаемого ИЧП «Агат» г.Москва.

Морфологические методы. Для гистологических исследований материал фиксировали в жидкостях Буэна или 4% формалине и заключали в парафин по общепринятым методикам. Срезы толщиной 5 мкм, приготовленные на санном микротоме, окрашивали гематоксилином Эрлиха и эозином.

Свинец в тонкой кишке и семенниках выявляли гистохимическим методом с сульфидом серебра (Луппа, 1980). О количестве свинца в тканях судили по числу зерен сульфида свинца на единицу площади среза.

Оценку статистической достоверности различий между группами проводили, используя 1-кригериЙ Стьюдента для малых выборок.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Для выяснения безопасного воздействия биологически активной добавки детоксал на организм человека провели токсиколого-гигиенические эксперименты на животных по определению его острой и подострой токсичности.

В остром эксперименте крысам-самцам однократно энтерально вводили волную суспензию детоксала в дозах 0,25, 0,5, 1. 2. 4 г/кг. Наблюдение за животными проводили на протяжении 14 дней. В первые 24 ч эксперимента и в последующие дни все животные опытных групп оставались живы. Динамика увеличения массы тела крыс и показатели двигательной активности животных, получавших детоксал, были идентичны контролю. В конце эксперимента внутренние органы крыс были обычных размеров и не имели внешних

признаков отклонений от нормы во всех экспериментальных группах. Масса внутренних органов животных, получавших детоксал в разных дозах, достоверно не отличалась от контрольных значений.

В подосгром токсиколого-гигиеническом эксперименте крысам-самцам на протяжении трех месяцев ежедневно энтерально вводили водную суспензию детоксала в дозе 0,2 г/кг/сут. Наблюдение за внешним видом и поведением животных проводили ежедневно, а углубленное изучение состояния животных — через один и три месяца после начала эксперимента. Соответственно были выделены два периода опыта - первый и второй.

В первом периоде эксперимента поведение животных опытной группы и их внешний вид не отличались от крыс контрольной группы. Масса тела у животных, получавших детоксал, была больше, но разница значений с контрольной группой не являлась статистически достоверной. Показатели двигательной активности и мышечной работоспособности у животных контрольной и опытной групп были идентичными. В конце первого периода эксперимента количество эритроцитов и лейкоцитов, содержание гемоглобина, уровень холестерина, мочевины, (З-липопротеидов, глюкозы, остаточного азота, экскреция креатишша с мочой, активность аланин- и аспартатаминотрансферазы, содержание кальция, фосфора, магния, железа, натрия и калия в сыворотке крови животных контрольной группы достоверно не отличались от аналогичных значений опытной группы.

Макроскопическая картина и масса внутренних органов у животных контрольной и опытной групп в конце первого периода эксперимента были сходными.

В конце второго периода токсикологического эксперимента поведение, внешний вид, двигательная активность и мышечная работоспособность у животных опытной группы не отличались от аналогичных показателей животных контрольной группы. Масса тела у крыс, получавших детоксал, была такой же как в контрольной группе. Количество эритроцитов, лейкоцитов,

гемоглобина в крови, уровень глюкозы, мочевины, Р-липопротеидов в сыворотке крови, экскреция креатинина с мочой, активность аланин- и аспартатаминотрансферазы, содержание железа и калия в сыворотке крови оказались сходными у животных контрольной и опытной групп. Уровень натрия в сыворотке крови достоверно снизился на 13,5% (Р<0,05), магния - на 12% (Р<0,05), а уровень фосфора и кальция, наоборот, повысился сответственно на 6,5% и 12,9% (Р<0,05). Уровень холестерина в сыворотке крови крыс, получавших детоксал, достоверно снизился на 10,3% (Р<0,05).

Масса внутренних органов не имела существенных различий у крыс всех экспериментальных групп. Макроскопическая и гистологическая картина внутренних органов не отличалась у животных контрольной и опытной групп, патологических изменений не обнаружено.

В ходе эксперимента был установлен ряд положительных эффектов детоксала. Выявлено, что детоксал не оказал влияния на минеральный обмен в организме животных, уровень микроэлементов при длительном употреблении препарата не снижался, за исключением мапшя и натрия. Содержат« кальция в сыворотке крови животных опытной группы было достоверно повышено. Это свидетельствовало о том, что детоксат не выводит кальций из организма. Вероятно, ионы кальция освобождаются из детоксала и, поступая в кровь, являются дополнительным источником кальция для организма. После 3-х месячного приема у детоксала выявлен гипохолестеринемический эффект. Эти эффекты заслуживают внимания с точки зрения расширения показаний для назначения детоксала.

Таким образом, детоксал при длительном применении не оказывает токсического действия на организм.

Определение сравнительной сорбционной способности различных энтеросорбентов

В эксперименте in vitro определяли сорбционную способность ряда препаратов, применяемых в медицине в качестве сорбентов. Было установлено,

что 1 г целлюлозы сорбирует 0,069+0,016 г свинца. 1 г полифепана связывает 0,10±0,012 г свинца. 1 г активированного угля сорбирует 0,11+0,024 г свинца. 1 г хитозана сорбирует из раствора 0,11±0,009 г свинца. 0,20±0,043 г свинца связывается с 1 г сплата, а с 1г морской капусты - 0,29±0,033 г. 1г пектата кальция сорбирует из раствора, содержащего ионы свинца 0,48±0,009 г металла. 1 г гумивига связывает 0,57±0,036 г свинца. Наибольшее связывание наблюдается у детоксала - 1 г сорбирует 0,79±0,036 г свинца. Можно сделать вывод, что детоксал обладает наибольшей сорбщюнной способностью среди исследуемых сорбентов.

Эффекты детоксала при экспериментальном токсическом гепатите

Изучение влияния детоксала на течение экспериментального тетрахлорметанового токсического гепатита показало, что детоксал, вводимый в дозе 150 мг/кг в течение 14 дней препятствовал усилению процессов перекисного окисления мембранных липидов гепатоцитов и активировал антиоксидантные защитные механизмы. Уровень малонового диальдегида и диеновых коньюгатов в печени мышей, получавших детоксал, был достоверно ниже (в 1,5 и 2,3 раза соответственно), а уровень сс-токоферола был больше в 1,2 раза, чем у нелеченных животных. Одновременно детоксал способствовал нормализации функций печени, в частности, усиливая процессы синтеза гликогена. У мышей, получавших детоксал, уровень гликогена был в 1,6 раза выше по сравнению с нелеченными животными. Количество общих липидов в сыворотке крови и в печени в опытной группе было снижено в 1,4 раза. Детоксал достоверно уменьшал активность аланинамииотрансферазы в сыворотке крови животных в 1,8 раза по сравнению с группой полеченных животных.

В следующих экспериментах на модели токсического гепатита, вызванного 3-х недельным введением животным ацетата свинна в дозе 50 мг/кг массы, при назначении детоксала в течение 3-х недель, уровень малинового диальдегида в

печени стал достоверно меньше в 1,9 раз, содержание восстановленного глутатиона увеличилось в 1,9 раз, а количество сульфгидрильных групп возросло в 1,8 раз по сравнению с нелеченными животными с гепатитом (табл. 1). Описанные эффекты обусловлены связывшшем в кишечнике экспериментальных животных продуктов перекисного окисления и эндогенных токсических продуктов метаболизма.

Таблица 1

Влияние детоксала на содержание малонового диальдегнда (МДА), восстановленного глутатиона (TSH) и сульфгидрильных групп (Sil) в

печени крыс при свинцовом гепатите

Группы животных МДА, нмоль/мг белка (М±ш) TSH, мкг/мг белка (М±гп) SH-группы, мкг/мг белка (М±ш)

Первый период эксперимента

Интактные 1 4,44 ±0,18 12,25 ±0,63 42,97 ± 1,98

Контроль (гепатит) 1 11,10 ±0,48 4,62 ± 1,07 23,18 ±0,54

Второй период эксперимента

Интактные 2 4,53 ± 0,36 13,42 ±0,15 51,1 ±2,78

Контроль (гепатит) 2 11,46 ±0,40 5,79 ± 0,36 22,60 ± 0,55

Гепатит + детоксал, 1 г/кг 5,95 ±0,19* 11,2 ±0,6* 40,13 ± 1,57*

* - (Р<0,001) изменения достоверны по сравнению с группой контроль 2.

Защитное действие детоксала при свинцовой интоксикации экспериментальных животных Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что детоксал оказывает защитное действие при свинцовой интоксикации лабораторных животных В проведенных опытах изучались как профилактические, так и лечебные эффекты препарата на растущих крысятах самцах и самках и

взрослых крысах-самцах. Наибольшее токсическое воздействие свинца проявлялось в экспериментах, выполненных на растущих крысятах массой 3085 г. Во всех опытах первые признаки свинцового отравления животных, получавших только свинец, были отмечены через 7-10 суток и заключались в отказе от приема пищи. Пищевое поведение животных, получавших с солью свинца детоксал, не отличалось от поведения контрольных животных. Крысята, получавшие ацетат свинца, в течение первых трех недель медленнее прибавляли в весе, в то же время динамика увеличения массы животных, получавших одновременно с ацетатом свинца детоксаз, существенно не отличалась от таковой контрольной группы (рис. 2).

Изменения двигательной активности животных, получавших свинец, наблюдали в среднем через 2-3 недели. Число вставаний на задние лапки в

□ Контрольная

■ Свинец, 50 мгУкг

□ Свинец, 50 иг/кг * детоксал, 1 г/кг

1 недзля

Рис. 1. Динамика увеличение массы растущих крысят при энтеральном введении ацетата свинца и дстоксапа.

* - изменения достоверны по сравнению с контрольной группой(Р<0,05). ** - изменения достоверны по сравнению с группой животных, получавших ацетаг свинца(Р<0,05).

«открытом поле» за 2 мин у растущих крыс, получавших ацетат свинца, было в среднем на 62,5%, а количество пересеченных линий на 66% меньше, чем в контрольной группе. У взрослых животных число пересеченных линий в группе, получавшей ацетат свинца, было в среднем снижено на 47%, а количество пересеченных линий на 58%. Показатели двигательной активности у животных, получавших ацетат свинца и детоксал, достоверно не отличались от контрольных значений.

Определение массы внутренних органов показало, что у взрослых животных наиболее чувствительны к хроническому воздействию свинца эндокринные органы. К концу экспериментов достоверно уменьшалась масса щитовидной железы в среднем в 1,6 раза, надпочечников в 1,3 раза, семенных пузырьков 1,7 раза и семенников 1,3 раза. У растущих крысят воздействие свинца привело к уменьшению массы щитовидной железы и к гипертрофии селезенки и печени (табл. 2). Во всех экспериментах показатели массы внутренних органов у крыс, получавших, кроме ацетата свинца детоксал, не отличались от контрольных значений.

У животных, получавших ацетат свинца в дозах 50 и 100 мг/кг массы через 18-39 дней эксперимента содержание свинца увеличилось в печени в среднем в 5,4 раза, в почках - в 12,8 раза, в костях - в 9,5 раза, в семенниках - в 5,9 раза. При одновременном введении детоксала и токсиканта, уровень свинца был достоверно ниже в костях в 1,4-2,5, почках - в 2,1-2,3, печени - в 1,4-2,5, семенниках - в 2,4-3,0 раза (табл. 3).

Гистохимическое выявление свинца в кишечнике экспериментальных животных показало, что зерна сульфида свинца, свидетельствующие о присутствии данного металла, располагаются, главным образом, в гликокаликсе и межклеточных пространствах эпителиального пласта. Количество металла, оцененное по числу зерен на единицу площади гистологического препарата, в топком кишечнике у животных, которым

Масса органов крыс при энтеральном введении ацетата свинца и детоксала (М ± ш)

Группа животных, препарат Масса органов мг/100 г веса

Щитовидная железа Надпочечники Семенные пузырьки Семенники Печень Селезенка

Первый эксперимент (взрослые крысы-самцы)

Контрольная 9,1 ±0,9 18,8 ±1,5 363,9 ± 37,3 1160,5 ±41,9 3636,5 ± 96,5 522,0 ±41,1

Ацетат свинца, 50 мг/кг 6,7 ± 0,6* 14,0 ±1,1* 215,9 ±25,0» 839,2 ± 93,6* 3147,2 ± 115,2* 452,2 ±30,1

Ацетат свинца, 50 мг/кг + детоксал, 0,5 г/кг 7,3 ±0,4 18,0 ±2,5 345,7 ±54,6 1016,7 ± 110,7 3244,0 + 122,1 452,9+47,4

Второй эксперимент (взрослые крысы-самцы)

Контрольная 9,7 ± 0,9 19,3 ±1,1 233,3 ±31,4 1310,0 ±46,8 4251,9 ± 139,3 450,3 + 31,5

Ацетат свинца, 100 мг/кг 5,4+1,5» 14,5 ±0,5» 406,8 ± 99,2 998,2 ± 82,5* 4333,4 ± 140,4 474,1 ±29,2

Ацетат свинца 100 мг/кг + детоксал, 1 г/кг 8,6 ± 0,5 17,6 ±1,1 204,1 ±40,8 1152,0+ 100,7 4550,6 ± 147,1 504,8 ±53,1

Третий эксперимент (растущие крысята-самки)

Контрольная 12,0 + 0,6 29,6 ± 1,7 - - 4848,7 ± 125,9 646,6 ± 42,3

Ацетат свинца, 50 мг/кг 8,8 + 0,7* 34,8 ±2,6 - - 5355,2 ±161,2* 948, 8 ±112,6*

Ацетат свинца 50 мг/кг + детоксал, 1 г/кг 10,5 ±0,9 26,3 ±0,9 - - 4791,0 ± 124,0 817,3 ±91,2

* - изменения достоверны по сравнению с контрольной группой (Р<0,05).

Содержание свинца во внутренних органах экспериментальных животных (мкг/г сухой массы) (М ± ш)

Группа животных Печень Кости Почки Семенники

Первый эксперимент (взрослые крысы)

Контрольная 2,2 ± 0,4 20,4 ± 0,8 2,2 ± 0,4 0,5 ± 0,2

Ацетат свинца, 100 мг/кг/сут 10,1 ± 1,3 196,5 ±23,6 39,1 ±5,5 3,6 ± 1,3

Ацетат свинца, 100 мг/кг/сут + детоксал, 1 г/кг 6,7 ± 0,6* 136,2 ±11,0* 18,0 ±4,8* 1,5 + 0,9

Второй эксперимент (растущие крысята)

Контрольная 2,3 ± 0,5 38,2 ±4,3 10,7 ±2,6 -

Ацетат свинца, 50 мг/кг/сут 9,6 ± 1,3 364,7 ± 43,7 60,9 ± 8,4 -

Ацетат свинца, 50 мг/кг/сут + детоксал, 1 г/кг/сут 3,7 ± 0,6* 141,5 ±26,5* 26,2 ± 9,5* -

Третий эксперимент (растущие крысята)

Контрольная Л- и,~1 1С Л 1 "> ■¿.-»,-т 1 8,4 ± 2,3 \ Л ±. А П 1 ± О, !

Ацетат свинца, 50 мг/кг/сут 18,3 + 4,8 239,3 ± 36,6 126,9 ±27,8 5,5 ± 1,2

Ацетат свинца, 50 мг/кг/сут + детоксал, 2 г/кг/сут 10,8 ±2,3 116,6 ±23,0* 57,0+ 10,1* 1,8 ±0,6*

* - изменения достоверны по сравнению с группой, получавшей ацетат свинца (Р<0,05)

вводили ацетат свинца, было в 2-4 раза больше по сравнению с группой животных, которые получали ацетат свинца и детоксал. Количество зерен сульфида свинца в семешшках крыс, получавших свинец и препарат было в среднем в 3 раза меньше, чем у животных, получающих только ацетат свинца.

Результаты экспериментов показывают, что при свинцовой интоксикации детоксал способен оказать лечебное и профилактическое действие.

Применение детоксала для энтеросорбции свинца у детей Для оценки уровня накопления свинца в организме было обследовано 35 детей 6-7 лет, проживающих в г. Владивостоке и посещающих дошкольное учреждеьше в месте своего проживания. Исследование проведено с согласия родителей, разрешения районных отделов народного образования и согласовано с Комитетом по этике ВГМУ. Свинец определяли в волосах, моче и фекалиях. У 57,1% детей обнаружено повышение содержания свинца в волосах. Дети были разделены на две группы: основную - с содержанием свинца в волосах больше допустимого уровня - 8 мг/г, и группу сравнения - с содержанием свинца в пределах нормы. Группы не различались по возрастному и половому составу.

Содержание свинца в моче не превышало допустимый уровень у всех обследованных детей, но его количество было в 5 раз выше у детей основной группы по сравнению с группой сравнения. Статистически значимые различия были обнаружены в содержании свинца в фекалиях детей основной и группы сравнения (Р<0,01) (табл. 4).

При изучении ретроспективной заболеваемости по данным из историй развития ребенка было обнаружено, что дети основной группы в 72,7%, а дети группы сравнения в 37,5% случаев рождались от матерей, у которых беременное!ь протекала с токсикозом. При оценке стенени резистентности организма но кратности острой заболеваемости выявлено, что среди детей с повышенным уровнем свинца в организме часто болеющих было и 1,6 раз больше, чем в труппе сравнения, с частотой заболеваний в основной группе

Таблица 4

Содержание свинца в моче (мкг/л) и кале (мкг/г) у обследованных детей

(М ±ш)

Допустимый уровень свинца в моче Фактическое содержание свинца в моче у детей Фастическое содержание свинца в фекалиях у детей

40,0 8,6 ±1,1 12,1 ±0,5

Основная группа Группа сравнения Основная группа Группа сравнения

14,2 ± 2,8* 2,9 ± 0,4 13,5 ±0,6* 10,4 ± 0,5

*- изменения достоверны по сравнению с группой сравнения (Р<0,01)

4,1±0,21, а в группе сравнения 2,6+0,28 случаев в год (Р<0,05). Острые заболевания в подавляющем большинстве случаев были представлены патологией респираторного тракта. У детей основной группы в 45,5% случаев, а группе сравнения в 12,5% случаев наблюдали изменения в анализах мочи. Наиболее часто встречалась кристалл урия, лейкоцитурия, реже протеинурия и микрогематурия. При исследовании периферической крови обнаружено снижение количества эршроцитов и гемоглобина у 63,6% детей с повышенным содержанием свинца в организме и у 22,2% детей группы сравнения. Уровень гемоглобина у детей основной группы составил 104,2±2,2 г/л, а у детей группы сравнения - 121,4±1,9 г/л. Нарушения деятельности желудочно-кишечного тракта, проявляющиеся в виде снижения аппетита, тошноты, периодической рвоты, болями в эпигастрии и околопупочной области, наблюдались у детей основной группы в 2 раза чаще, чем у детей группы сравнения. По результатам УЗИ дискинезия желчевыводящих путей была обнаружена у 27,3% детей с повышенным содержанием свинца и не наблюдалась у детей группы сравнения. Со стороны нервной системы дети основной группы чаще предъявляли жалобы на приступы головной боли, головокружения, трудности запоминания. Изучение историй развития обследованных детей показало, что в основной

группе удельный вес детей, которые в течение 1-2 лет после рождения наблюдались у невропатолога по поводу энцефалопатии, был в 1,6 раз больше, чем в группе сравнения.

Комплексная оценка состояния здоровья позволила выявить следующее: детей с первой группой здоровья в основной группе было 9,1% , в группе сравнения 12,5%. Вторую группу здоровья имели 36,3% детей с повышенным уровнем свинца в организме и 62,5% детей группы сравнения. Третья группа здоровья была определена у 54,6% детей основной группы и 25,0% детей группы сравнения. Таким образом, можно сделать вывод, что уровень здоровья детей с повышенным содержанием свинца в организме был значительно ниже, чем у детей группы сравнения. Выявленные значительные изменения в состоянии здоровья детей, имеющих повышенное содержание свинца в организме, несомненно, имеют многофакторную этиологию. Одним из таких факторов, вероятно, является длительное поступление в организм детей избыточного количества свинца.

Для демонстрации возможности выведения свинца из организма, детям с повышенным содержанием свинца в волосах проведена энтеросорбционная терапия, назначение которой согласовано с Комитетом по этике Владивостокского государственного медицинского университета. Дети получали детоксал в дозе 1,0 г за 40-60 мин до еды, запивая 100-150 мл воды. Полный курс составил 6 недель. При наблюдении за детьми в процессе лечения и после его окончания побочных эффектов от проводимой терапии выявлено не было. Дети чувствовали себя удовлетворительно.

При проведении курса энтеросорбционной терапии через неделю наблюдали уменьшение уровня свинца в моче с 14,2+2,4 мкг/л до 8,0+1,4 мкг/л. Через три недели концентрация свинца в моче составляла 28,1+3,2 мкг/л. К шестой неделе наблюдали постепенное снижение концентрации свинца до 8,2±0,8 мкг/л. Уменьшение содержания свинца в моче через неделю после начала энтеросорбционной терапии и его последующее повышение, вероятно, связано с тем, что сначала свинец сорбируется из желудочно-кишечного тракта,

и только после этого происходит его выведение из других органов, вследствие чего уровень свинца в моче вновь повышается. К окончанию курса энтеросорбции у всех детей выявлено уменьшение выделения свинца с мочой и фекалиями на 42% по сравнению с исходными данными (табл. 5, рис.2). У детей группы сравнения уровень свинца в моче и в фекалиях в течение шести недель был одинаковым.

Таблица 5

Изменение содержания свинца в моче и кале детей, принимавших

детоксал (М ± ш)

Дни лечения Содержание свинца в моче детей основной группы (мкг/л) Содержание свинца в моче детей группы сравнения (мкг/л) Содержание свинца в феканиях детей основной группы (мкг/г) Содержание свинца в фекалиях детей группы сравнения (мкг/г)

0-й день 14,15 ±2,39 2,95 ± 0,34 13,26+0,56 10,94 ±0,45

7-й день 8,0 ± 1,44

14-й день 24,25 ±2,96 3,4 ± 0,57 19,38 ± 1,52 9,87 ± 0,68

21-й день 28,08 ±3,17

35-й день 13,44 ±1,33 2,89 ± 0,37 13,92 ±0,82 9,23 ± 0,52

42-й день 8,20 ±0,80 2,81 ±0,52 7,62 ± 0,94 9,14 ±0,83

Одновременно с исследованием количества свинца в моче определяли уровень кальция и магния. Элиминация кальция и магния в процессе лечения детоксалом не превышала норму (табл. 6).

В течение всего курса энтеросорбционной терапии в среднем у каждого ребенка основной группы с мочой из организма вывелось в 7 раз больше свинца, чем у детей контрольной группы (695,7+32,6 мкг и 98,6±7,3 мкг соответственно). С фекалиями из организма каждого ребенка в среднем вывелось в основной группе в 2 раза больше свинца, чем у детей контрольной группы (!21,5±11.8 мг и 61,9±6,9 мг соответственно).

Рис. 2. Динамика изменения содержания свинца в моче детей в процессе лечения детоксалом.

Таблица 6

Содержание кальция и магния в моче детей опытной группы, принимавших детоксал (¡VI ± т)

Дни лечения Уровень кальция в моче (мг-экв/л) Уровень магния в моче (мг-экв/л)

0-й день 2,84±0,29 5,86±0,86

7-й день 2,60+0,17 7,11 ±0,68

14-й день 3,36+0,81 5,62±0,85

21-й день 2,29±0,49 3,76±0,72

35-й день 1,66+0,14 5,40+1,31

42-й день 1,72±0,35 4,32±0,60

Проведенные исследования показали, что детоксал эффективно выводит из организма человека свинец, о чем свидетельствуют данные по динамике

удержания этого металла в моче и фекалиях детей, принимавших препарат. По-видимому, детоксал уменьшает всасывание свинца в кишечнике и увеличивает поступление металла из внутренних органов в кровеносное русло л из него в просвет кишечника. Существенного влияния на баланс в организме <альция и магния детоксал не оказывает.

ВЫВОДЫ

1. Биологически активная добавка детоксал по критериям токсиколого--игиенической оценки является безопасной. Назначение препарата в дозе 0,2 -/кг в течение 90 суток не приводит к изменениям пищевого поведения, хвигательной активности, физиологических, гематологических, биохимическим i морфологических показателей нормального состояния экспериментальных кивотных

2. В условиях in vitro при рН=7,0 1 грамм детоксала способен связать 790 лг свинца. По сорбционной емкости детоксал превосходит большинство трименяемых в медицине энтеросорбентов.

3. В условиях in vivo детоксал уменьшает поступление экзогенного свинца ю внутренние органы при одновременном пероральном применении с ацетатом ;винца и способствует выведению депонированных во внутренних органах и состях ионов свинца

4. На модели свинцовой интоксикации экспериментальных животных leroKcai оказывает профилактическое и лечебное действие, проявляющееся в соррекции пищевого поведения, двигательной активности и нормализащии юказателей физического развития.

5. На моделях тетрахлорметанового и свинцового гепатита детоксал жазывает антитоксическое действие, подавляет процессы перекисного жисления липидов, активирует антиоксидантные механизмы и нормализует тлсводный и жировой обмен в печени.

6. Клинические наблюдения показали, что детоксал в дозе 1 г/сут ювышает выведение свинца с фекалиями в среднем в 2 раза и с мочой в 7 раз.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Савченко О.В. Влияние альгината кальция на токсические эффекты уксуснокислого свинца // Тез. докл. научно-практической конференции «Здоровье и болезни человека на Дальнем Востоке». - Владивосток, 1993. - С. 22.

2. Савченко О.В., Кропотов A.B., Хотимченко Ю.С. Защитное действие альгината кальция при свинцовой интоксикации лабораторных животных // Биология моря. - 1994. - №2. - С. 163-167.

3. Савченко О.В., Ковалев В.В., Янкнна Т.А., Степанов Д.Ю., Шевцове О.И., Хотимченко Ю.С. Профилактика свинцовой интоксикации альгинатами у пектинами у крыс // Тез. докл. 2 съезд физиологов Сибири и Дальнего Востока

- Новосибирск, 1995. - С. 382-383.

4. Савченко О.В., Ковалев В.В., Степанов Д.Ю., Шевцова О.И., Янкинг Т.А., Хотимченко Ю.С. .Энтеросорбенты из морских гидробионтов // Тез. докл 3 международный симпозиум стран Юго-Восточного Тихоокеанского региона

- Осака, Япония, 1995. - С. 23.

5. Хотимченко Ю.С., Хасина Э.И., Шевцова О.И., Савченко О.В. Тюпелеев П.А., Охотина C.B., Хотимченко М.Ю., Кропотов A.B. Лечебно! действие полисахаридов го морских гидробионтов при экспериментальнеол токсическом гепатите // Дальневосточный медицинский журнал. - 1997. - №4. -С. 58-59.

6. Хотимченко Ю.С., Ковалев В.В., Савченко О.В., Кропотов А.В Детоксицирующие свойства альгината кальция при свинцовой интоксикацш экспериментальных животных // Тез. докл. конгресс «Человек и лекарство». -Москва, 1998.-С. 632.

7. Савченко О.В., Шевцова О.И. Применение биологически активно! добавки детоксал-75 для энтеросорбции свинца у детей // Тез. докл конференции «Состояние здоровья населения Дальнего Востока. Новы медицинские технологии с использованием биоресурсов». - Владивосток, 199'--С. 98-100.