Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Выделение и химическая модификация природных ксантовых соединений

На правах рукописи

МИХАЙЛОВА Татьяна Михайловна

ВЫДЕЛЕНИЕ И ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ ПРИРОДНЫХ КСАНТОНОВЫХ СОЕДИНЕНИЙ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Улан-Удэ - 2004

Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН

Научный руководитель доктор химических наук,

профессор

Бодоев Николай Васильевич

Официальные оппоненты доктор фармацевтических наук,

профессор

Маняк Виктор Андреевич

доктор химических наук Могнонов Дмитрий Маркович

Ведущая организация Иркутский государственный

медицинский университет

Защита состоится " 3 " ноября 2004 г. в Ю00 час. на заседании диссертационного совета К 003.028.01 в Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г.Улан-Удэ, ул.Сахьяновой, 6

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан "_ У " октября 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат биологических наук ^СоЛ. Хобракова В.Б.

2005^ 12571

£Ш1/9

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Развитие химии природных соединений в последнее двадцатилетие привело к получению целого ряда биологически активных веществ. Ксантоны являются объектом многочисленных исследований химиков-синтетиков и фармакологов, так как обладают широким спектром фармакологической активности. Химическая модификация природных веществ часто приводит к образованию ' трансформированных природных соединений по активности "значительно превосходящих нативные вещества. Поэтому наряду ' с получением ксантоновых производных из природных источников1 большой интерес для практики представляет разработка методов химической модификации ксантоновых соединений с целью получения-бийлогически активных веществ.

В'Лаборатории химико-фармацевтических исследований Института общей и экспериментальной биологии СО РАН проводятся комплексные химические и фармакологические исследования ксантоновых соединений. Разработаны способы получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона, обладрмЦих желчегонным и гепатопротекторным действием. В на£горцей работе приводятся результаты разработки рациональных способов выделения указанных соединений, а также материалы по химической модификации их структуры, приводящей к получению фармакологически более активных соединений.

Поддержка данного исследования грантом Федеральной Целевой Программы «Интеграция» (грант № Ь 0022) и при финансовой поддержке интеграционных проектов СО РАН (№43 и №146) также свидетельствует о новизне и перспективности представленного исследования.

Цель и задачи исследования. Целью исследований является выделение доступных 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона из растительного сырья (надземной части галении рогатой На1ета согтсиШа) и их химическая модификация.

В задачи исследования входило:

-разработать рациональные способы выделения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона из надземной части галении рогатой;

-получить модифицированные ксантоновые производные на оснЬве 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-три^еТоксиксантона и установить их строение;

^-определить количественное содержание доминирующих у-пиройовых соединений в надземной части галении рогатой;

-разработать методику для стандартизации надземной части галении рогатой, как источника получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона;

-разработать и составить проекты нормативной документации на стандартные образцы 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона.

Научная новизна работы. Разработаны рациональные способы выделения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона из надземной части галении рогатой. В результате химической модификации получено три производных 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и четыре производных 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона. Все соединения являются новыми.

Определено количественное содержание 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона, 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона и лютеолина в надземной части галении рогатой.

Разработана методика количественного хромато-спектрофотометрического определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой.

Практическая значимость работы. Разработана методика хромато-спектрофотомстрического определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой.

Разработаны и оформлены: 1) проект Фармакопейной статьи предприятия на стандартный образец 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона; 2) проект Фармакопейной статьи предприятия на стандартный образец 1 -гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона; 3) способ получения средства, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием (Заявл. № 2004120445/15(021847)).

В лаборатории химико-фармацевтических исследований ИОЭБ СО РАН проведены доклинические испытания химически модифицированных ксантонов. Установлено, что синтетическая трансформация природных ксантонов позволяет получить соединения с большей фармакологической активностью.

Апробация работы. Результаты исследований были представлены и доложены на IV Международной конференции "Биоантиоксидант" (Москва, 2002); Всероссийской научной конференции "Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах" (Улан-Удэ, 2002); научно-практической конференции "Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине" (Улан-Удэ, 2003); VI Международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2004); 2 Международном симпозиуме "Natural Products and Physiologycaly Active

. м 4

Substances (ICNPPAS-2004)" (Новосибирск, 2004), научно-практической конференции "Развитие традиционной медицины в России" (Улан-Удэ, 2004).

По результатам исследований опубликовано 10 работ, включающих тезисы "и материалы международных, всероссийских и региональных конференций, статьи' и оформлен патент, которые отражают основное содержание диссертационной работы.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Настоящая работа выполнена в лаборатории химико-фармацевтических исследований в соответствие с программой и планом научно исследовательских работ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по теме: "Создание информационного банка данных по тибетской медицине и разработка новых лекарственных препаратов" (№ гос.рег. 01.9.40003183).

На защиту вынося+ся результаты разработки способов выделения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона и их химической модификации, определения количественного содержания 1 -гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона, 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона и лютеолина в надземной части галении рогатой методами ВЭЖХ, ГХ/МС, разработки методики количественного определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой хромато-стгектрофотометрическим методом.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа йзложена на 171 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов пяти глав экспериментальной части, общих выводов и приложений, 27 таблиц, 52 рисунков, списка литературы, включающего 304 источника, из которых 250 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектом исследования служили образцы Halenia corniculata (L.) Cornaz, собранные в 2001 - 2004 гг. в Прибайкальском, Закаменском и Кабанском районах республики Бурятия. Высушенное воздушным способом сырье измельчали и просеивали через сито с диаметром отверстий 0.5-1.0 мм. Для выделения индивидуальных соединений применяли хроматографию на силикагеле (L 100/400) и полиамиде. Для хроматографического контроля на этапе предварительной оценки извлечений, при разделении веществ на колонках и контроля чистоты полученных соединений применяли метод восходящей хроматографии на бумаге марки FN-12, а также тонкослойную хроматографию на пластинах Silufol. Хроматографирование на бумаге проводили в следующих

системах растворителей: I бутанол/уксусная кислота/вода (4:1:5); II -15% уксусная кислота. Для тонкослойной хроматографии использовали следующие системы растворителей: III - хлороформ; IV -гексан/этилацетат (7:3); V - гексан/этилацетат (8:2), VI гексан/этилацетат (6:4), VII - хлороформ/метанол (9:1), VIII -хлороформ/метанол (8:2). Обнаружение ксантоновых соединений проводили после просушивания хроматограмм в Течение 10 мин при комнатной температуре и дополнительном 10 минутном выдерживании в токе теплого воздуха, обработки хроматограмм 5 % спиртовым раствором алюминия хлорида (ГОСТ 3759-85); ксантоны дают желтое окрашивание. Температуру плавления определяли на аппарате Kofler. Для определения молекулярных масс и элементного состава использовали масс-спектрометр высокого разрешения (Finnigan МАТ 8200). ИК-спектры записывали на спектрометре Vector 22 в таблетке с КВг. УФ-спектры поглощения регистрировали на приборах СФ-26 (Россия), HP 8453 UV-Vis в этаноле (С=10** моль/л) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Спектры ЯМР получали на спектрометре Bruker АС 200 (рабочая частота 200.13 МГц для 'Н и 50.32 МГц для ПС) в растворе CDCI3. Мультиплетность сигналов в спектрах ЯМР |3С определяли по стандартным методикам снятия спектров в режиме J-модуляции (JMOD). ВЭЖХ проводили с использованием микроколоночного жидкостного хроматографа «Милихром-4» Орловского ПО «Научприбор». Условия хроматографирования: стальная колонка 2x64 мм, сорбент Nudeosil С-18 (5 мкм), температура ~20 С, скорость элкжрования 100 мкл/мин, УФ-детектирование при 360 нм. Спектры выделенных и модифицированных ксантоновых соединений были сняты в НИОХ (г. Новосибирск). Построение графиков и спектров проводили с использованием графического пакета Advanced Grapher Version 2.07 (1998-2003 Alentum Software, Inc.). Метрологический анализ проводили согласно рекомендациям Государственной Фармакопеи XI. • -

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выделение фенольных соединения надземной части галении рогатой

Спиртовое извлечение из надземной части галении рогатой подвергали жидко-фазной экстракции хлороформом и этилацетатом. Выход экстрактивных веществ составляет 6.64 и 3 54% для хлороформной и этияацетатной фракций, соответственно.

Хлороформное извлечение. Для выделения индивидуальных ксантоиов разработан способ разделения хлорофомного извлечения, которое подвергали хроматографированию на силикагеле

(гексан/этилацетат (7:3) хлороформ хлороформ/этанол). Выход индивидуальных ксантонов (К1 и К2) из хлороформного извлечения составляет 0.25 и 0.]5%, соответственно. Чистота К1 и К2, определенная методом ВЭЖХ, составляет 95.22 и 96.87%, соответственно.

Этилацетатное извлечение хроматографировали на силикагеле (хлороформ—этилацетат—этанол). Фракции, полученные элюированием хлороформом, не исследовались из-за следового содержания веществ. Из фракций, элюированных этилацетатом получен индивидуальный флавон Ф1, выход которого составляет 0.21% от массы абс.-сух. сырья. Чистота полученного соединения, определенная методом ВЭЖХ, составляет 96.81%. Фракции, полученные элюированием этанолом, содержали смеси веществ, и поэтому и не исследовались.

По данным температуры плавления, УФ-, ИК-, ЯМР 'Н и ЯМР '3С спектроскопии выделенные соединения идентифицированы как 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон (К1), 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон (К2) и 5,7,3',4'-тетрагидроксифлавон (лютеолин, Ф1).

Разработка способов получения стандартных образцов ксантонов

Для разработки методики количественного определения ксантонов в надземной части галении рогатой целесообразно использовать в качестве стандартных образцов 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон исходя из следующих соображений:

1. 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон содержатся в надземной части галении рогатой в значительных количествах;

2. указанные соединения представляют собой стабильные соединения и обладают характерными для всех ксантоновых соединений максимумами поглощения;

3. максимум поглощения при 265 нм является общим для ксантонов и флавонов, что может быть использовано для количественной оценки суммарного содержания у - пироновых соединений.

4. 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон и 1-гидрокси-2,3.5-триметоксиксантон обладают желчегонной и гепатопротекторной активностью.

На основании вышеизложенною, в одну из задач исследований входила разработка способов получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона-стандарта и 1 -гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона-стандарта из надземной части галении рогатой

Известно несколько способов получения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона (Танхаева

(1997), Dhasmana (1989), Ghosal (1975), Recio-lglesias (1992), Stout (1969, 1970). Недостатками описанных способов является низкий выход целевого продукта (0.003-0 13%), длительность и трудоемкость технологического процесса, поэтому одной из задач исследований являлось повышение выхода целевых продуктов из надземной части галенйи" рогатой и разработка способов получения указанных соединенйй.

Результаты исследования приведены, в таблице 1.

{< Таблица 1 1

Выход 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксчксантона (К1) и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантоиа (К2) в зависимости от метода выделения

Выход

ксантонов,

ч о Основная % от массы

характеристика абс.- ■сух.

и СЫ| рья

К1 К2

1 Экстракция сырья 96% этанолом, жидкофазная ! экстракция хлороформом, КХ на СГ хлороформного извлечения (элюент - хлороформ) 0.04 0.02

2 Экстракция сырья 96% этанолом, жидкофазная экстракция хлороформом, КХ на СГ хлороформного извлечения (элюен'г -гексан/ этилацетат 7:3) 0.25 0.15

3 Экстракция сырья 96% этанолом, жидкофазная экстракция хлороформом, КХ на СГ хлороформного извлечения (элюент -гексан/этилацетат 8:2) ' 0.12 0.01

4 Экстракция сырья 96% этанолом, жидкофазная экстракция хлороформом, КХ на СГ хлороформного извлечения (элюент -гексан/этилацетат 6:4) 0.04 0.10

5 Экстракция сырья 2% раствором соляной кислоты в 96% этаноле с гидролизом, жидкофазная экстракция хлороформом, КХ на СГ хлороформного извлечения (элюент - хлороформ) 0.02 0.01

Наибольший выход целевого продукта (0.25 и 0.15% от массы абс.-сух. сырья, соответственно для К1 и К2) достигается с применением метода 2.

С применением метода 2 получено по три серии 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона. Качество полученных соединений контролировали с помощью ТСХ, данных температуры плавления, УФ, ЯМР 'Н-спектроскопии. Полученные данные показывают, что физико-химические показатели конечного продукта аналогичны таковым химически чистых соединений. Модификация природных ксантововых соединений Реакциями ацетилирования, аллилирования, эпоксидирования и аминолиза природных ксантонов (1-гидрокси-2,3,4,5-

тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона), выделенных из надземной части галении рогатой, были химически модифицированы соединения ксантоновой природы.

Модификация 1 -гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона привела к образованию трех ксантоновых соединений (МК1, МК2 и МКЗ). Данные исследований этих веществ позволили охарактеризовать их как 1 -ацетокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон, 1 -аллилокси-2,3,4,5-

тетраметоксиксантон и 1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,4,5-

тетраметоксиксантон, соответственно.

Модификацией другого природного ксангона (1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона) были получены четыре ксантоновых соединений (МК4, МК5, МК6 и МК7). Исследование структур этих веществ позволили охарактеризовать их как 1-ацетокси-2,3,5-триметоксиксантон, 1-аллилокси-2,3,5-триметоксиксантон, 1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,5-триметоксиксантон и 1-(3-бензиламино-2-гидрокси)-пропокси-2,3,5-триметоксиксантон, соответственно (рис.1).

Строение модифицированных ксантонов устанавливали с помощью ТСХ, температуры плавления, УФ-спектров, ИК-спектров, масс-спектров, спектров ЯМР 'Н и ЯМР 13С.

R1 ОМе

МК1: R,=OMe, R=CH3CO

МК2: R|=OMe, R=CH2CH=CH2

МКЗ: R,=OMe, R=CH2CHOCH2

MK4: RpH, R=CH3CO

MK5: R|=H, R=CH2CH=CH2

MK6: R|= H, R=CH2CHOCH2

MK7: R,=H, R=CH,CHOHCH2NHCH2C6H5

Рис.1

Структуры химически модифицированных ксантонов

Соединение МК1. Желтые кристаллы состава С19Н|808. Тпл 139141 С (EtOH). Rf 0.22 (система IV), Rf 0.42 (система VI). Вещество хорошо растворимо в хлороформе, ацетоне, этилацетате, диэтиловом эфире, бензоле. Мало растворим в метаноле, этаноле. Практически не растворим в гексане, гептане, бутаноле, воде.

Масс-спектр, m/z (%): 374 (5.17), 362 (25.39), 347 (27.95), 332 (93), 317 (100), 43 (19.57). C^H^Og. Расч. m/z: 374.10016. Эксп. m/z: 374.09640.

УФ-спектр, Xnlax(MeOH), нм (lg е): 240 (4.18), 252 (4.56), 289 (4.08), 355 (3.62).

ИК-спектр, V, см"1: 736, 752, 877, 985, 1500, 1596 (С=С), 1654, 1771 (С=0).

Спектр ЯМР 1Н (5С, м.д.): 2.49 (ЗН, с, СН3СО), 3.86 (ЗН, с, ОСН3), 3.99 (ЗН, с, ОСНз), 4.10 (ЗН, с, ОСН3), 4.12 (ЗН, с, ОСН3), 7.17 (1Н, д.д„ J 7.8, 1.5, Н-6), 7.23 (1Н, д.д., J 7.8, 7.5, Н-7), 7.77 (1Н, д.д„ J 7.5, 1.5, Н-8).

Спектр ЯМР ,3С (5С, м.д.): 20.82 (СН3, ацет.), 56.35 (ОСН3), 61.47 (ОСНз), 61.66 (ОСН3), 61.72 (ОСН3), 95.76 (С-4), 106.05 (С-8а), 115.16 (С-6), 117.04 (С-7), 122.50 (С-10а), 123.46 (С-8), 138.00 (С-4а), 139.34 (С-3), 142.05 (С-9а), 145.51 (С-5), 147.40 (С-2), 151.89 (С-1), 169.49 (СЮ), 175.11 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных физико-химических данных соединение МК1 имеет структуру 1-ацетокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

Соединение МК2. Бледно-желтые кристаллы состава С2оН2007. Тпл 118-120 С (ЕЮН). Rf 0.30 (система IV), Rf 0.59 (система VI). Вещество хорошо растворимо в хлороформе, ацетоне, этилацетате, диэтиловом эфире, бензоле. Мало растворим в метаноле, этаноле, бутаноле. Практически не растворим в гексане, гептане, воде.

Масс-спектр, m/z (%): 372 (36.38), 357 (100), 343 (19.60), 331 (63.26), 329 (17,01), 303 (37.11), 275 (15.49), 273 (17.99), 260 (12.74), 245 (34.25), 41 (16.46). С20Н20О7. Расч. m/z: 372.12089. Эксп. m/z: 372.11934.

УФ-спектр, Х|гах, нм (lg 6): 240 (4.12), 253 (4.35), 293 (3.83), 356

(3.36).

ИК-спектр, V, см-1: 723, 747, 780, 895, 927, 986, 1500, 1586, 1600 (С=С), 1658 (С=0).

Спектр ЯМР 'Н (CDC13, 6, м.д, J, Гц): 3.91 (ЗН, с, ОСН3), 4.00 (ЗН, с, ОСНз), 4.06 (ЗН, с, ОСНз), 4.10 (ЗН, с, ОСН3), 4.62 (2Н, д, J 6.0, СН,), 5.23 (1Н, м, СН2=), 5.42 (1Н, м, СН,=), 6.15-6.33 (1Н, м, СН=), 7.17 (1Н, д.д., J 7.8, 1.5, Н-6), 7.23 (1Н, т, J 7.8, Н-7), 7.84 (1Н, д.д„ J 7.8, 1.5, Н-8).

Спектр ЯМР ,3С (5С, м.д.): 56.34 (ОСН3), 61 46 (ОСНз), 61.66 (ОСН3), 61.57 (ОСН3), 96.06 (С-4), 75.52 (СН2), 105.68 (С-8а), U4.84 (С-

6), 117.29 (С-7), 117.61 (СН2=), 122.97 (С-10а), 123.21 (С-8), 134.23 (СН=), 137.61 (С-4а), 147.54 (С-9а), 148.44 (С-5), 149.48 (С-3), 151.97 (С-2), 155.79 (С-1), 175.37 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных физико-химических данных соединение МК2 имеет структуру 1-аллилокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона.

Соединение МКЗ. Белые кристаллы состава С2оН2о08. Тпл 101 -103 С (ЕЮН).

Масс-спектр, m/z (%): 388 (31), 371 (43), 347 (31), 341 (22), 332 (55), 327 (20), 317 (100), 287 (13), 259 (14), 245 (19). С20Н20О8. Расч. m/z: 388.11580. Эксп. m/z: 388.11527.

УФ-спектр, А-nax, нм (lg е): 245 пл. (4.06), 254 (4.18), 292 (3.75), 357

(3.82).

ИК-спектр, v, см"1: 747, 911, 1500, 1592, 1610 (С=С), 856, 989, 1057, 1096, 1275 (С-О-С), 1657 (С=0).

Спектр ЯМР 'Н (CDC13, б, м.д, J, Гц): 2.73 (1Н, м, J 10.5, Н-3'), 2.87 (1Н, м, J 10.5, Н-3'), 3.55 (1Н, м, Н-2' для (5)-МКЗ), 3.73 (1Н, м, Н-2' для (Я)-МКЗ), 3.92, 3.98, 4.05, 4.09 (четыре с по ЗН, ОСНз для (5)-МКЗ), 3.89, 3.94, 4.04, 4.11 (четыре с по ЗН, ОСН3 для (Д)-МКЗ), 4.10 и 4.28 (2Н, м, Н-Г для (S)-MK3), 4.30 и 4.50 (2Н, м, Н-Г для (Я)-МКЗ), 7.20 (2Н, м, Н-6, Н-7), 7.80 (1Н, д.д., J 7.8, 1.8, Н-8).

Из данных спектра ЯМР 'Н следует, что соединение МКЗ - это смесь диастереоизомерных эпоксидов. В спектре ЯМР 'Н имеются сигналы трех ароматических протонов кольца В - 7.20, 7.20, 7.80 м.д. и сигналы четырех метоксильных групп - 3.92, 3.98, 4.05, 4.09 м.д. (для (S)-МКЗ) и 3.89, 3.94, 4.04, 4.11 м.д. (для (Д)-МКЗ). Спектр ЯМР !Н продуктов (5)-МКЗ и (Ä)-MK3 содержит набор однопротонных мультиплетных сигналов протонов Н-Г (2Н) и Н-2' (1Н) с центрами при 4.10, 4.28 и 3.55 м.д., соответственно, для 2'-(5')-диастереомера и при 4.30, 4.50 и 3.73 м.д., соответственно, для 2'-(/?)-диастереоизомера, а также имеет два однопротонных мультиплетных сигнала протонов Н-3' (2Н) с центрами при 2.73 и 2.87 м.д.

Спектр ЯМР ,3С (5С, м.д.): для (5VMK3: 44.52 (С-3'), 50.45 (С-2'), 56.34 (OCH,), 61.54 (ОСН3), 61.74 (ОСН3), 75.66 (С-1'), 96.65 (С-4), 112.43 (С-8а), 114.86 (С-6), 117.39 (С-1), 122.87 (С-10а), 123.34 (С-8), 137.85 (С-4а), 143.09 (С-9а), 145.37 (С-5), 147.39 (С-3), 148.47 (С-2), 152.04 (С-1), 175.47 (С-9);

для Ш-МКЗ: 43.85 (С-3'), 50.45 (С-2'), 55.69 (ОСН3), 61.36 (ОСН3), 61.74 (ОСН,), 75.66 (С-1'), 95.86 (С-4), 111.98 (С-8а), 115.16 (С-6), 117.43 (С-7), 122 59 (С-10а), 123 53 (С-8), 137 85 (С-4а), 143.09 (С-9а), 145.37 (С-5), 147.48 (С-3), 147.96 (С-2), 151.64 (С-1), 175.07 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных спектральных данных соединение МКЗ имеет структуру (25)- и (2/?)-1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,4,5-тетраметоксиксантонов (S)-MK3 и (Л)-МКЗ.

Соединение МК4. Белые кристаллы состава Ci8H|607. Тпл 168-169 С (EtOH). Rf 0.15 (система IV), Rf0.30 (система VI). Вещество хорошо растворимо в хлороформе, ацетоне, этилацетате, диэтил'овом эфире, бензоле. Мало растворим в метаноле, этаноле. Практически не растворим в гексане, гептане, бутаноле, воде.

Масс-спектр, m/z (%): 344 (6.83), 302 (100), 287 (92.95), 273 (17.26), 259 (40.72), 216 (13.48), 151 (13.14), 93 (17.84), 43 (20.62), 28 (25.34). С18Н|607. Расч. m/z: 344.08959. Эксп. m/z: 344.08804.

УФ-спектр, ^(МеОН), нм (lg г.): 222 пл. (4.09), 248 (4.75), 267 (4.21), 300 (3.45), 343 (3.24).

ИК-спектр, v, см"1: 721, 752, 791, 988 (Аг), 1567, 1595, 1610, 1622 (С=С), 1650, 1760 (С=0).

Спектр ЯМР 'Н (6С, м.д.): 2.51 (ЗН, с, CHjCO), 3.84 (ЗН, с, ОСИ,), 3.96 (ЗН, с, ОСН3), 3.98 (ЗН, с, ОСН3), 6.95 (1Н, с, Н-4), 7.20 (2Н, м, Н-6,7), 7.77 (1Н, д.д., 1=7.5, 1.5, Н-8).

Спектр ЯМР |3С (5С, м.д.): 20.90 (СН,, ацет.), 56.29 (ОСН3), 56.33 (ОСН3), 61.37 (ОСН3), 98.26 (С-4), 109.08 (С-8а), 114.78 (0-6), 117.25 (С-7), 122.79 (С-10а), 123.32 (С-8), 138.80 (С-4а), 142.69 (С-3), 145.53 (С-9а), 148.05 (С-5), 153.82 (С-2), 158.53 (С-1), 169.27 (С=Ю), 174.79 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных физико-химических данных соединение МК4 имеет структуру 1-ацетокси-2,3,5-триметоксиксантона.

Соединение МК5. Бледно-желтые кристаллы состава C|9H|g06. ТП1 154-156 С (EtOH). Rf 0.21 (система IV), Rf 0.44-{система VI).' Вещество хорошо растворимо в хлороформе, ацетоне, этилацетате, диэтиловом эфире, бензоле. Мало( растворим в метаноле, этаноле, бутаноле. Практически не растворим в ^ексдне, гептане, воде.

Масс-спектр, m/z (%): 342 (16-79,), 327 (100), 311 (22.78), 299 (44.55), 285 (29.25), 122 (14.41), 107 (12.22), 93 (46.93), 77 (17.45), 41 (41.60), 28 (37.31). С,9Н,806. Расч. m/z: 342.11033. Эксп. m/z: 342.10978.

УФ-спектр, Хпих, нм (lg е): 222 (4.ф, 249 (4.44), 270 пл. (3.69), 285 (4.32), 344 (3.68) - имеются четыре основных максимума поглощения, характерных для ксантоновых соединений.

ИК-спектр, v, см"': 735, 790, 993 (Аг), 1567, 1604, 1619 (С=С), 1655 (С=0). /и-

Спектр ЯМР 'Н (CDC1,, 5, м.д, J, Гц): 3.87 (ЗН, с, ОСН,), 3.94 (ЗН, с, ОСН3), 4.09 (ЗН, с, ОСН,), 4.66 (2Н, м, СН2), 5.22 (1Н, м, СН,=), 5.40 (1Н, м, СН2=), 6.15-6.34 (1Н, м, СН=), 6.38 (1Н, с, Н-4), 7.13 (1Н, дд„ J 7.5, 1.8, Н-6), 7.22 (1Н, т, J 7.5, Н-7), 7.83 (IH, д.д., J 7.5, 1.8, Н-8).

Спектр ЯМР 13С (бс, м.д.): 56.22 (ОСН3), 56.27 (ОСН.,), 61.29 (ОСНз), 75-47 (СН2), 96.36 (С-4), 110.85 (С-8а), 114.37 (С-6), 117.47 (С-7), 117.76 (СН2=), I23jl 1 (С-8), 123.21 (С-10а), 134.18 (СН=), 139.76 (С-4а), 145.29 (С-9а), 147.91 (С-5), 151.86 (С-3), 154.15(С-2), 158.45 (С-1), 175.06 (С-9). -

Таким образом, на основе приведенных физико-химических данных, соединение МК5 имеет структуру 1-аллилокси-2,3,5-триметоксиксантона.

Соединение МК6. Белые кристаллы состава С^Н,^. Tm 147-149 С (ЕЮН).

Спектр ЯМР 'Н (CDC13,8, м.д, J, Гц): 2.72 (1Н, м, J 10.3, Н-3'), 2.85 (1Н, м, J 10.3, Н-3'), 3.55 (Ш, м, Н-2 для (5)-МК6), 3.73 (1Н, м, Н-2' для (R)-MK6), 3.90, 3.95, 3.99 (три с по ЗН, ОСНз для (S)-MK6), 3.86, 3.96, 3.99 (три с по ЗН, ОСНз для (Д)-МК6), 4.16 и 4.30 (2Н, м, H-l' для (5)-МК6),4.33 и 4.56 (2Н, м, Н-1 для (Л)-МК6), 6.85 (1Н, с, Н-4), 7.22 (2Н, м, Н-6, Н-7), 7.88 (1Н, д.д„ J 7.8, 1.8, Н-8).

Из данных спектра ЯМР 'Н следует, что соединение МК6 - это смесь диастереоизомерных эпоксидов. В спектре ЯМР 'Н имеются сигналы четырех ароматических протонов кольца В - 6.85, 7.22, 7.22 и 7.88 м.д. и сигналы трех метоксильных групп - 3.90, 3.95, 3.99 (для (R)-МК6) м.д. и 3.86, 3.96, 3.99 (для (Я)-МК6). Спектр ЯМР 'Н продуктов (Л)-МК6 и (Л)-МК6 содержит набор однопротонных мультиплетных сигналов протонов H-l' (2Н) и Н-2' (Ш) с центрами при 4.16, 4.30 и 3.55 м.д., соответственно, для 2'-(5)-диастереомера и при 4.33, 4.56 и 3.73 м.д., соответственно, для 2'-(Я)-днастереоизомера. Соотношение диасте{*еомеров в продуктах реакции определяли по соотношению интегральных интенсивностей сигналов указанных протонов. Спектр имеет также два однопротонных мультиплетных сигнала протонов Н-3' (2Н) с центрами при 2.72 и 2.85 м.д.

Спектр ЯМР ,3С (5С, м.д.): для Ш-МК6: 44.51 (С-3'), 50.39 (С-2'), 56.20 (OCHO, 56.27 (ОСН3), 61.33 (ОСН3), 75.49 (С-1'), 96.59 (С-4), 110.46 (С-8а),'114.41 (С-6), 117.28 (С-7), 123.06 (С-10а), 123.13 (С-8), 139.64 (С-4а), 145.25 (С-9а), 147.90 (С-5), 151.66 (С-3), 154.09 (С-2), 158.47 (С-1), 174.99 (С-9);

для (7?)-MK6: 43.83 (С-3'), 50.39 (С-2'), 56.27 (ОСН3), 60.91 (ОСН3), 61.33 (ОСНз), 75.44 (С-1'), 96.24 (С-4), 109.20 (С-8а), 114.72 (С-6), 117.51 (С-7), 122.76 (С-Юа), 123.30 (С-8), 138.94 (С-4а), 145.25 (С-9а), 147.80 (С-5), 152.20 (Ó-3), 154.2.8 (С-2), 158.93 (С-1), 176.25 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных спектральных данных соединение Мкб' ,И1^еет структуру (25)- и (2/?)-1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,5-триметоксиксантонов (5)-МК6 и (Л)-МК6.

Соединение МК7. Коричневые кристаллы состава СгбН^ОуИ. Т„„ 116-118 С(ЕЮН).

Масс-спектр, т/г (%)• 345 (30.44) [М-С6Н,СН2МСН2], 303 (37.09), 302 (100), 287 (63.67). 259 (18.50), 91 (53,93). Найдено, %: С 64.51; Н 5.81; N 3.12. С26Н27081М. Вычислено, %. С 64.86; Н 5.61; N 2.91.

УФ-спектр, Х1шх, нм е): 225 пл. (4.16), 250 (4.81), 289 (4.04), 346

(3.64).

ИК-спектр, V, см"1: 701, 752, 792, 898, 981, 1500, 1599, 1635 (С=С), 1097 (С-О-С), 1660 (СЮ), 1563, 1635, 3200, 3320 (С-ЫН-С), 3441, 3538 (ОН).

Спектр ЯМР 'Н (СЭСЬ, 5, м.д, Гц): 2.88 (2Н, м, Н-3'), 3.85 (ЗН, с, ОСН3), 3.90 (2Н, м, СН2 С6Н5), 3.94 (2Н, м, Ш, ОН), 3.95 (ЗН, с, ОСН3), 4.01 (ЗН, с, ОСН3), 4.14 (1Н, д.д., I 4.8, 1.2, Н-1'), 4.17 (1Н, м, Н-2'), 4.51 (1Н, д.д., I 4.8, 1.2, Н-Г), 6.85 (1Н, с, Н-4), 7.17-7.40 (2Н, м, Н-6,7 и 5Н, РЪ), 7.83 (1Н, д.д., } 7.8, 1.8, Н-8).

Спектр ЯМР ,3С (8С, м.д.): 51.07 (С-5'), 53.65 (С-3'), 56.31 (ОСН3), 56.31 (ОСН3), 61.04 (ОСНз), 68.66 (С-2'), 77.91 (С-1'), 96.24 (С-4), 109.83 (С-8а), 114.83 (С-6), 117.68 (С-7), 122.95 (С-10а), 123.32 (С-8), 126.99 (С6Н5, С-4"), 128 27 (С(,Н5, С-5",6"), 128.31 С6Н5, С-2",3"), 139.09 (С6Н5, С-1"), 139.14 (С-4а), 145.41 (С-9а), 147.93 (С-5), 152.34 (С-3), 154.39 (С-2), 158.99 (С-1), 176.28 (С-9).

Таким образом, на основе приведенных спектральных данных соединение МК7 имеет структуру 1-(3-бензиламино-2-гидрокси)-пропокси-2,3,5-триметоксиксантона.

Количественное определение у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой методами ВЭЖХ, ГХ/МС и хромато-спектрофотометрии

ВЭЖХ

Условия: Милихром А-02; колонка 2x75 мм, сорбент РгогйоБЦ.-120-5-С-18 АО (№ 0322, 5 мкм), температура 35°С, давление - 3.2 МПа, скорость элюирования - 150 мкл/мин, УФ-детектирование при 244, 260, 3^0 им. Флюент: 0.1% раствор трифторуксусной кислоты в метаноле.

Гексановая фракция. В ходе исследований с помощью ВЭЖХ в гексановой фракции обнаружено 13 соединений (рис.2). Из 13 соединений идентифицированы два преобладающих компонента:

1) пик 8 - 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон, составляет 43.07% от массы гексановой фракции (время удерживания 9.59 минут);

2) пик 6 - 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон, составляет 22.20% от массы гексановой фракции (время удерживания 8 65 минут).

II ) , . -

12 3

6 7

I

V1

-тГ-,' 8 9

Рис.2

1« И

244пш 260пт 3)4пт ЗбОпщ

12 13

10 11 12 13 14 15 мии>

ВЭЖХ хроматограмма гексаиовой фракции

Хлороформная фракция. В хлороформной фракции обнаружено 17 соединений (рис.3) Из 17 соединений идентифицированы два соединения:

1) пик 15 - 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон, составляет 6.26% от массы хлороформной фракции (время удерживания 9.58 минут);

2) пик 14 - 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон, составляет 4.22% от массы хлороформной фракции (время удерживания 8.65 минут).

Таким образом, в надземной', части галении рогатой содержание в гексановой и хлороформной фракциях 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона составляет 1.64%, а 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона - 0.87% (от массы абс.-сух. сырья).

244пп4

260 ШП;

314пт! ЗбОпт

1

3.5

2

» к

Лз

л» 1,6 "

--Г Г I " "I--Г1^-1---Т----Г-Г~1-Г*- 1 - Г _ -Г ""Г'Т----г

1 2 3 4__5___б 7 8 9 10 11 12 13 14 15 мин

Рис.3

ВЭЖХ хроматограмма хлороформной фракции

~Т

9

I

О

0.00 10.00 Тите (шт) 20.00

260 280 360

Рис.4

ВЭЖХ хроматограмма этилацетатной фракции 16

Этилацетатная фракция. При исследовании этилацетатной фракции методом ВЭЖХ обнаружили 14 соединений (рис. 4), среди которых идентифицировали одно соединение - пик 10 - лютеолин, содерЖайиё: которого составляет 68.26% от массы этилацетатной фракции (время удерживания 10.03 минут). В надземной части галении рогатой содержание лютеолина составляет 2.41% (от массы абс.-сух. сырья).

ГХ/МС

Условия: ' Hewlett-Packard G 1801 А, включающем газовый хроматограф HP 5890 серии II и МС-детектор HP 5971. Капиллярная колонка «HP-5MS», 30м х 0.25мм х 0.25 мкм. Газ-носитель гелий - 1 мл/мин. РежиМ повышения температуры колонки: 2 мин при 50°С, от 50 до 300°С со скоростью 10 град/мин, 30 мин при 300°С. Температура испарителя 280°С. Температура источника ионов 175°С. Сканирование проводилось в области масс от 30 до 650 m/z.

Хлороформная фракция. При исследовании хлороформной фракции обнаружено 13 компонентов, среди которых идентифицировано три компонента (табл.2). В надземной части галении рогатой содержание 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона составляет 2.11%, а 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона - 1.08% (от массы абс.-сух. сырья).

Таблица 2

Результаты идентификации хлороформной фракции методом ГХ/МС

Время выхода, мин Содержа ние в смеси, % ^таи ИМ m/z доя (М+Н+) Примечание

11.53 16.28 245, 253, 272, 306, 360 303.0 1-Гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон

11.94 17.34 244, 260,314, 378 333.1 1-Гидрокси-2,3,4,5-тетрам етоксиксанто н

12.11 21.58 236, 270, 306, 392 333.1+ 363.1 1 -Гидрокси-2,3,4,5-гетраметоксиксантон и примесь (2:1)

14.05 19.56 273, 327, 409, 507, 536 439.3+ 457.3 Олеаноловая кислота

Этилацетатная фракция. При исследовании этилацетатной фракции обнаружено 8 компонентов, среди которых нами идентифицировано три компонента (табл.3). В надземной части галении

рогатой содержание доминирующего флавоноида - лютеолина составляет 2.49% (от массы абс.-сух. сырья).

Таблица 3

Результаты идет ификации этилацетатной фракции методом

гх/мс

Время выхода, мин Содержа ние в смеси, % Я-пих, НМ т/г для (М+Н+) Примечание

3.898 5.74 253, 267, 349 449.0 Цинарозид

9.634 70.37 253, 265, 291, 347 287.0 Лютеолин

10.37 10.64 267, 338 271.0 Апигенин

Разработка методики хромато-

спектрофотометрического определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой

Установлено, что надземная часть галении рогатой содержит в своем составе у-пироновые соединения (ксантоны и флавоноиды), которые являются основными действующими веществами. Определено, что доминирующими соединения надземной части галении рогатой являются 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон, 1 -гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон и лютеолин, поэтому, контроль качества сырья решено проводить по содержанию в них у-пироновых соединений.

Для количественного определения суммарного содержания у-пиронов использовали широко известный и применяемый в настоящее время хромато-спектрофотометрический метод. В качестве стандартного вещества выбран 1 -гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон - доминирующий компонент суммы у-пиронов, максимум поглощения УФ-спектра которого (260±1) близок с максимумами поглощения второго доминирующего ксантона - 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона (257±3) и лютеолина (253±1), а также с максимумом поглощения спиртового извлечения галении рогатой после гидролиза (254±1) (рис.5). В качестве аналитической длины волны была выбрана точка при 254 нм, располагающаяся между значениями экстремальных точек УФ-спектров ксантонов, флавона и спиртового извлечения.

!

I

Длина полны, нм

Рис. 5

Спектры поглощения ксантонов, лютсолина н извлечения

1 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантон (с 0.004 мг/мл); 2-1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантон (с 0.004 мг/мл); 3 - лютеолин (с 0..004 мг/мл); 4 - спиртовое извлечение из надземной части галении рогатой после гидролиза

Для разработки методики количественного определения в надземной части галении рогатой было изучено влияние различных техноЛогиЧёских параметров на выход у-пироновых соединений. В результате проведенных исследований установлены оптимальные , условия экстракции: экстрагент 60% этанол, температура экстракции 90°С, степень измельчения сырья (0.5-1 мм), соотношение сырье : экстрагент (1:60), время и кратность экстракции (I - 60 минут, II - 60 минут, III - 45 минут).

, Для очистки суммы флавонов и ксантонов от сопутствующих веществ применяли хроматографическое разделение экстракта на колонке с полиамидным сорбентом. Балластные вещества (зона с голубым свечением в УФ-свете) предварительно элюировали водой, а у-пироновые соединения (зона поглощающая в УФ-свете) - 96% этанолом. Однако, было установлено, что при предварительном элюировании водой

балластных веществ в водный элюат попадают О-гликозиды у-пиронов (контроль - БХ, ТСХ) Для предотвращения отмеченных потерь (до 4%) экстракцию растительного материала проводили 60% этанолом, содержащим 5% хлороводородной кислоты. Установлено, что полное разрушение гликозидных связей проходит в течение 1 часа (БХ, ТСХ).

Метрологические характеристики разработанной методики приведены в таблице 4.

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы у-пиронов в траве галении рогатой

и / X 5 ' 5Х Р ±Лх Е

10 9 6.53 0.1156 0.34 0.1075 95 2.26 0.24 3.72

Отсутствие систематической ошибки разработанной методики доказано серией опытов с добавками 1-гидрокси-2,3,4,5-тетрагидроксиксантона-стандарта (табл.5).

Таблица 5

Результаты опытов с добавками 1-гидрокси-2,3,4,5-тетрагидроксиксантона

Содержание у-пиронов в 25 мл экстракта, мг Добавлено 1-гидрокси-2,3,4,5-тетрагидрокси-ксантона, мг Должно быть, мг Найдено, мг Относительная ошибка, %

6.62 0.40 7.02 6.83 -2.71

6.62 0.60 7.22 7.33 +1.52

6.62 0.80 7.42 7.23 +2.56

Установлено, что общее содержание у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой варьирует от 6.07 до 6.95% (от массы абс.-сух. сырья).

ВЫВОДЫ

1. Разработаны рациональные способы выделения 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона из надземной части галении рогатой с выходом 0.25 и 0.15%, соответственно.

2. Получены химической модификацией и идентифицированы новые ксантоновые производные на основе

1 -гидрокс и-2,3,4,5 -тетраметоксиксантона:

- 1-ацетокси -2.3.4,5-тетраметоксиксантон;

- 1-аллилокси -2,3,4,5-тетраметоксиксантон;

- 1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,4,5-тетраметоксиксантон; 1-гидрокси-2.3,5-триметоксиксантона:

- 1-ацетокси -2,3,5-триметоксиксантон;

- 1-аллилокси -2,3,5-триметоксиксантон;

- 1-(2,3-эпоксипропокси)-2,3,5-триметоксиксантон;

-1-(3-бензиламино-2-гидрокси)пропокси-2,3,5-триметоксиксантон.

3. Определено количественное содержание доминирующих у-пироновых соединений: 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона, 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона и лютеолина в надземной части галении рогатой методами ВЭХЖ (1.64, 0.87 и 2.41%, соответственно) и ГХ/МС (2.11, 1 08 и 2.49%, соответственно)

4. Разработана высокочувствительная методика хромато-спектрофотометрического определения суммарного содержания у-пироновых соединений в надземной части' - галении рогатой (относительная ошибка методики 3 72%). Установлено, что общее содержание у-пироновых соединений в надземной части галении рогатой варьирует от 6.07 до 6.95% (от массы абс.-сух. сырьй). '

5. Разработана и составлена нормативная документация на стандартные образцы 1-гидрокси-2,3,4,5-тетраметоксиксантона и 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона.

По теме диссертации опубликованы следующие работы:

1. Николаев С.М., Бодоев Н.В., Цыренжапов A.B., Михайлова Т.М , Николаева Г.Г., Танхаева JT.M. Антиокислительные свойства фитосредств из надземной части Halenia corniculata (L.) Comaz // Тез. док. VI Международной конференции «Биоантиоксидант»,-М., 2002.- с.417-418.

2. Николаев С.М., Михайлова Т.М., Бодоев Н.В., Цыренжапов А В., Танхаева JI.M. Аналоги природных ксантоновых соединений как лекарственное средство при заболеваниях печени // Тез. док. Всероссийской научной конференции «Актуальные проблемы адекватного питания в эндемичных регионах».- Улан-Удэ, 2002.-с.91-93

3 Михайлова Т.М., Николаева Г.Г., Танхаева J1.M., Бодоев Н.В. Перспективы синтеза пентазамешенных ксантонов Н Тез док.

А

научно-практической конференции «Биологически активные добавки в профилактической и клинической медицине»,- Улан-Удэ, 2003.-с. 107-109.

4. Михайлова Т.М., Бодоев Н.В., Николаева Г.Г., Танхаева JI M., Цыренжапов A.B., Раднаева Л.Д. Основные методы синтеза окси- и метоксизамещенных ксантонов как перспективных лекарственных веществ // Вестник Бурятского Университета. Медицина. Серия 11. Вып. 3,- Улан-Удэ, 2003.- с.73-77.

5. Михайлова Т.М., Танхаева JT.M., Бодоев Н.В. Фенольные соединения Halenia corniculata |L.) Coniaz // Тез. док. VI Симпозиума по фенольным соединениям.- М., 2004,- с. 102.

6 Tat'yana M. Mikhailova, Elvira' 'В.' Shults, Larisa M. Tankhaeva, Galina G. Nikolaeva, Nikolai VI' Bodoev, Zinaida G. Sairibueva, Arsen V. Tsyrenzhapov, Sergey M. Nikolaev, and Genrikh A. Tolstikov. Xanthones from Halenia corniculata. Synthesis and biological activity of some derivatives // II Международный симпозиум "Natural Products and Physiologycaly Active Substances (ICNPPAS-2004)".- Новосибирск, 2004,- c.203.

7. Михайлова T.M., Танхаева JI.M., Николаева Г.Г., Бодоев H.B. Методы модификации природных ксантонов. 1. Реакции алкилирования и деалкилирования (обзор литературы) II Вестник Бурятского Университета. Медицина. Серия 11.- Улан-Удэ, 2004,- с.66-77.

8. Михайлова Т.М, Шульц Э.Э., Танхаева JI.M., Николаева Г.Г., Бодоев Н.В, Толстиков Г.А. Фенольные соединения галении рогатой Halenia corniculata (L.) Cornaz II Химия в интересах устойчивого развития.- 2004.- №5.- с.87-93.

9. Михайлова Т.М. Синтез и желчегонное действие некоторых ксантоновых производных // Мат-лы научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России»,-Улан-Удэ, 2004,- с.60-61.

10. Михайлова Т.М., Танхаева JIM., Самбуева З.Г., Олейников Д.Н., Цыренжапов A.B., Николаева Г.Г., Николаев С.М., Бодоев Н.В. Способ получения 1-гидрокси-2,3,5-триметоксиксантона, обладающего желчегонным и гепатопротекторным действием. Заявл. № 2004120445/15(021847).

Подписано в печать 04.10.2004 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,4 печ. л. Тираж 100. Заказ № 166.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670047 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.

»18402

РНБ Русский фонд

2005-4 12571