Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого для профилактики простатита
- Ученая степень
- кандидата фармацевтических наук
- ВАК РФ
- 15.00.02
Автореферат диссертации по фармакологии на тему Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого для профилактики простатита
На правах рукописи
Гармаева Елена Анатольевна
003067630
Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого для профилактики простатита
15.00.02-фармацевтическая химия и фармакогнозия
Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук
Улан-Удэ - 2006
003067690
Работа выполнена в Институте общей и экспериментальной биологии Сибирского отделения Российской академии наук.
Научный руководитель: доктор фармацевтических наук
Николаева Галина Григорьевна
Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук,
профессор
Маняк Виктор Андреевич кандидат фармацевтических наук Лыгденова Баирма Баторовна
Ведущая организация: Иркутский государственный
медицинский университет Министерства здравоохранения и социального развития РФ
Защита состоится «26» января 2007 года в 10 часов на заседании диссертационного совета К 003.028.01 при институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой,6
С диссертацией можно ознакомиться в центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН
Автореферат разослан «26» декабря 2006г.
Ученый секретарь
диссертационного совета К 003.028.01 кандидат биологических наук
Хобракова В.Б.
Общая характеристика работы
Актуальность темы. Хронический простатит - наиболее частое воспалительное заболевание половой сферы мужчин. Согласно статистическим данным, простатитом болеют 25-40 % мужчин (по некоторым данным до 80 %) в наиболее трудоспособном возрасте (25-40 лет) (Л.Г. Кругляк, 2000г., Щетинин В.В и соавт. 2002г.,). В последнее время простатит все чаще встречается у лиц более молодого возраста до 20 лет, а так же у лиц старше 50 лет (Юнда И.Ф. 1984, Тиктинский О.Л. 1984).
В последние годы отмечается увеличение заболеваемости хроническим простатитом, что связано с мало подвижным образом жизни, бесконтрольным приемом лекарственных средств, аллергизацией населения, ростом числа венерических заболеваний, экологией и др. (Кругляк Л.Т. 2000г.). Многообразие и тяжесть клинических проявлений болезни, нерешенность многих вопросов ее распознавания и неудовлетворительный результаты лечения, негативно влияющие на такие показатели как рождаемость, частота разводов, инвалидация и смертность в молодом возрасте и др., придают хроническому простатиту все возрастающую социальную значимость и требуют дальнейшего изучения и скорейшего решения этой актуальной проблемы современной медицины (Маждраков 1980г., Тареев 1983г, ТкачукВ.Н. и соавт. 1989г.).
Одной из наиболее актуальных, но пока, к сожалению, нерешенных проблем лекарственной терапии больных является выбор препарата той или иной группы, который будет наиболее эффективным и безопасным для пациента. В настоящее время очень много препаратов синтетического происхождения с выраженным фармакологическим действием. Однако все большее значение для лечения и профилактики хронического простатита приобретает фитотератия - лечение лекарственными травами (Щетинин В.В. и соавт. 2002г., Ефремов А.П. 1999г., Елисеев Ю.Ю. и соавт. 2000г) Растительные препараты отличаются низкой токсичностью, широтой терапевтического действия, малой стоимостью. В связи с этим поиск и создание новых эффективных комплексных средств, полученных из растительного сырья, предназначенных для профилактики хронического простатита, доступных широким массам населения, безопасных в применении является актуальной задачей.
Целью настоящих исследований является разработка состава и стандартизация пищевой добавки из лекарственных растений в виде сбора, сухого экстракта и гранул, условно названных «Фитопрост», рекомендуемых для профилактики простатита.
Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие основные задачи:
обосновать и разработать состав многокомпонентной растительной композиции для профилактики простатита;
провести фармакогностическое изучение исходной растительной композиции;
провести исследования по подбору оптимальных параметров экстракции биологически активных веществ из растительной композиции для разработки рациональной технологии получения сухого экстракта и гранул;
изучить химический состав экстракта и гранул на наличие биологически активных веществ;
разработать методики количественного определения по доминирующим веществам;
разработать нормативные документы на рекомендуемые пищевые добавки к пище с целью внедрения их в производство (технические условия, технические инструкции и рецептуры).
Научная новизна.
Подобран и обоснован рациональный состав исходной растительной композиции, обеспечивающий определенную фармакологическую активность.
Установлены критерии подлинности, числовые показатели на сбор, внесенные в нормативные документы.
Базируясь на теоретических основах экстрагирования суммы биологически активных веществ в зависимости от типа экстрагента, степени измельчения, соотношения сырье - экстрагент, выявлена возможность получения сухого экстракта и на его основе гранул со стабильными физическими и технологическими показателями.
Методами избирательной экстракции в сочетании с методом ВЭЖХ идентифицировано наличие веществ: аминокислот, флавоноидов, фенологликозидов, фенолкарбоновых кислот и тритерпеноидов.
Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин спектрофотометрическим методом в сборе и сухом экстракте, суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин в гранулах.
На основании полученных данных составлены нормативные документы: рецептура, технически е условия (ТУ), технические инструкции (ТИ).
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены:
- Технические условия ТУ 99373-013-03533369-02, технологическая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде сбора.
- Технические условия ТУ 9197-013-03533369-02, технологическая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде сухого экстракта.
- Технические условия ТУ 9197-015-03533369-02, техническая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде гранул «Гранулы Фитопрост», РУ №77.99.20.919.Б.000677.05.04. от 13.05.04.
Сбор внедрен в производство (акты о внедрении Центра восточной медицины республики Бурятия, 2004)
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:
- 60-ой региональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2005);
- научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);
Основное содержание диссертации опубликовано в 5 научных работах; ТУ на БАД к пище сбор; ТИ сбор; ТУ на экстракт сухой; ТУ на «Гранулы Фитопрост».
Связь задач исследования с проблемным планом научного совета по фармакологии и фармации. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по программе: «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на период 1986 -2006 гг. и в соответствии с проектом №146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным президиумом СО РАН.
На защиту выносятся:
- обоснование растительной композиции и возможности создания БАД к пище в виде сбора, сухого экстракта и гранул, рекомендуемых для профилактики простатита;
- результаты фитохимического изучения сбора, сухого экстракта и гранул на содержание действующих веществ, результаты исследований по установлению показателей подлинности, доброкачественности и количественного определения биологически активных веществ;
- разработка способа получения сбора, сухого экстракта и готовой формы гранул «Фитопрост».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа выполнена на 155 страницах машинописного текста: состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (3 главы), 35 таблиц и 14 рисунков, общих выводов и списка литературы (включено 142 источника, из которых 7 - на иностранном языке) и приложений.
Во введении раскрыта актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, приведены научная новизна и практическая значимость работы.
В первой главе сделан обзор литературы и проведен анализ ассортимента растительных средств, применяемых современной медициной для профилактики и лечения простатита. Обоснован состав растительной композиции. Дана характеристика компонентов растительной композиции.
Вторая глава посвящена установлению оптимального соотношения ингредиентов в исходной растительной композиции, разработке технологической схемы получения, товароведческому, фотохимическому изучению сбора и его стандартизации.
Третья глава содержит данные по определению оптимальных условий экстракции, способа получения сухого экстракта. Дана фотохимическая характеристика сухого экстракта и обоснованы методы стандартизации.
Четвертая глава содержит данные по разработке, фотохимическому анализу гранул, а также обоснованы методы их стандартизации.
Содержание работы
Объекты и методы исследования. В качестве объектов исследования служило растительное сырье: листья ортосифона тычиночного (Folia orthosiphonis staminei) - ГФ XI изд., вып.2. ст. 21; листья толокнянки обыкновенной (Folia Arctostaphylos uva ursi L.) - ГФ XI изд., вып.2. ст. 26; цветки ноготков лекарственных (Flores Calendula officinalis L.) - ГФ XI изд., вып.2. ст. 5; корни солодки (Radices Glycyrrhizae) -ГФ X изд., ст. 573; трава горца птичьего (Herba Polygonum aviculare L.) - ГФ XI изд., вып.2. ст. 56.
В исследованиях использовали различные варианты композиций сбора, сухие экстракты, гранулы. Отбор средней и аналитических проб проводили согласно - ГФ XI изд., вып.1. С.273.
Микроскопические исследования в сборах проводили по методике, описанной в - ГФ XI изд., вып.1. стр.277, невооруженным глазом, под лупой и микроскопом.
Исследование качественного состава проводили методом одномерной и двумерной хроматографии на бумаге марки «Ленинградская-М», FN-16, FN-13 (Германия), а также тонкослойной хроматографии на пластинках
«Kieselgel 60, F-254» размером 20x20 см, фирмы Merck (Германия) и «Silufol» в следующих системах растворителей: н-бутанол-уксусная кислота- вода (4:1:2); уксусная кислота 15 %; этилацетат-метилэтилкетон-муравьиная кислота - вода 50:30:10:10; этанол-вода-фосфорная кислота 40:60:0,5; натрия ацетат-фосфорная кислота-триэтиламин-вода-ЭДТА 19%:6-7%:1-2%:72-73%: 0,1 %; ацетонитрил; вода; изопранол-муравьиная кислота-вода 70:6:24;
Хроматографирование выполняли в определенной системе растворителей при температуре 19-23 °С в герметически закрытых стеклянных камерах.
Нанесение исследуемых растворов на хроматографические пластины и бумажные полосы осуществляли при помощи капилляров.
Соотношение растворителей учитывали в объемных частях. Все величины Rf обнаруженных соединений являются средними из пяти измерений.
Растворители для хроматографии и реактивы для получения производных использовали марки ХЧ или ЧДА.
Электронные спектры соединений в УФ - и видимой областях записывали на приборах СФ-26 (Россия), UV-V1S (Германия) и Hitachi (Япония), Gelios - ГФ XI изд., вып.2. ст. 56 в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см.
Качественный и количественный анализ фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ на высокоэффективном жидкостном хроматографе Gilston с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы «Мультихром» для Windows.
При разработке методик количественного определения биологически активных веществ были использованы хроматографически чистые вещества - стандартные образцы: арбутин -Fluka, кат. №10960, СО ВИЛАР (ТУ 9363-133-048668-44-01), галловая кислота - Fluka, кат. №48630, кофейная кислота - Sigma, кат. № 0625, хлорагеновая кислота-Sigma, кат. №3378, апигенин- Fluka, кат. №10748, гесперидин- - Sigma, кат. № 04125, глицирризиновая кислота - Fluka, кат. №50531, ВИЛАР ТУ 9369-148-04868244-02, лютеолин ГСО - ФС 42-3130-95, лютеолин-7-гликозид ГСО - ФС 42-3130-95, кверцетин - ФС 42-290-79 ВИЛАР ТУ 9369-128-04868244-03, рутин - ФС 42 -2508-87, ВИЛАР ТУ 9369-141 -048668244-02, гиперозид ГСО - ФС 42-0106-03.
Разработка способа получения сбора и его фармакогностическое изучение.
На основании анализа данных литературы по лекарственным растениям, их химическому составу, содержанию биологически активных веществ, применению, сделан подбор растительной композиции, которая оказывает влияние на все факторы возникновения простатита.
На основании фармакологического скрининга и результатов анализа определено оптимальное соотношение растений: толокнянки обыкновенной листья - 20 %, почечного чая листья - 30 %, горца птичьего трава — 35 %, календулы обыкновенной цветки - 5 %,солодки корни -10%.
Проведена оценка исходного растительного сырья по действующей нормативной документации. По числовым показателям образцы сырья соответствуют требованиям НД.
Разработанная схема получения БАД к пище включает следующие основные стадии технологического процесса:
ВР. 1. Подготовка персонала, производственных помещений и оборудования к работе.
ТП. 1. Подготовка, измельчение и просеивание лекарственного растительного сырья.
ТП. 2. Получение готового продукта (сбора).
УМО. 1. Фасовка и упаковка сбора
Проведен товароведческий анализ сбора и определены числовые показатели: влажность не более 13 %, экстрактивных веществ не менее 20 %, золы общей не более 11 %, органической примеси не более 0,5 %, минеральная примесь не более 0,5 %.
Проведены макро- и микроскопические исследования сбора и установлены диагностические признаки. В результате микроскопического исследования сбора выявлено достоверное присутствие в смеси неоднородных частиц пяти видов лекарственного растительного сырья (кусочков листьев, стеблей, цветков) различной формы желтовато-бурого цвета с желтыми, желто-оранжевыми, серовато-зелеными, светло-зелеными и беловатыми вкраплениями.
Микроскопические исследования позволили установить диагностические признаки сбора, которые соответствуют описанию в ГФ XI издания, наиболее значимыми являются: форма клеток эпидермиса, тип устьичного аппарата (горец птичий); характерной формы железки, волоски, устьица (почечный чай); сосуды, лубяные волокна (солодка); устьица, кристаллы, волоски (толокнянка); хромопласты, волоски, пыльца (календула).
Химический состав сбора идентифицирован с использованием общеизвестных и принятых качественных реакций и различных методов хроматографии (ТСХ, БХ, ВЭЖХ). Обнаружено наличие флавоноидов, дубильных веществ, сапонинов, фенологликозидов и др.
Методом тонкослойной хроматографии подтверждено наличие рутина, хлорагеновой кислоты, арбутина, галловой кислоты, кверцетина.
Для подтверждения наличия в составе сбора веществ полифенольной природы использовали метод хроматографии на бумаге и идентифицировали: кверцетин ~ 0,82 , апигенин Яг ~ 0,86; рутин ~ 0,29 , хлорагеновую кислоту И* ~ 0,36; лютеолин ~ 0,76; арбутин ~ 0,55; галловую кислоту ~ 0,75; гиперозид Яг ~ 0,42.
Методом ВЭЖХ идентифицированы по времени удерживания апигенин, арбутин, гиперозид, лютеолин-7-гликозид, галловая, кофейная, хлорагеновая кислота, кверцетин, рутин. Наряду с этим на хроматограмме ВЭЖХ обнаружены глицирризиновая кислота и ликурозид, являющиеся основными действующими веществами корней солодки. Полученные данные приведены в таблице 1.
Таблица 1
Результаты исследования сбора методом ВЭЖХ
Наименование СОВС Время удерживания, Идентифициров
сек ано
Апигенин 874,4 +
Арбутин 216,3 +
Гиперозид 518,4 +
Лютеолин-7 гликозид 940,1 +
Галловая кислота 238,5 +
Кверцетин 244,4 +
Кофейная кислота 355,0 +
Рутин 1109 +
Хлорагеновая кислота 296 +
Глицирризиновая кислота 1047 +
Гликурозид 1605 +
Изучен аминокислотный состав сбора методом ВЭЖХ. Результаты приведены на рисунке 1.
Хроматограмма ВЭЖХ водного извлечения сбора
it
к п
3 " 5 Ц 7 « Al "1 Vf
in i? is г) :n :i î: ы m з; к it га it зо л з: зз з-i з< з< j7 за и -w 4i д: .и
№ Время Высота Пло ФО Конц. Конц. назва-
мин mV щадь MV сек нмоль % ние
3 17.99 0.62 1.31 87.760 22.99 6.46 Se
4 20.83 0.91 4.51 9.983 9.001 2.53 Arg
5 21.19 0.47 1.21 17.867 4.308 1.21 Thr
6 22.63 2.09 13.48 32.203 86.79 24.38 Ala
7 24.41 0.38 0.39 188.021 14.64 4.11 Туг
8 26.23 0.69 4.47 9.412 8.42 2.37 HYL1
9 27.34 0.65 4.48 7.612 6.815 1.91 HYL2
11 30.17 1.90 11.10 36.008 79.96 22.46 Met
12 30.46 11.69 82.12 5.763 94.66 26.59 Lys
13 30.67 1.88 11.12 5.059 11.26 3.16 Ile
14 30.67 5.28 37.11 2.309 17.14 4.81 Phe
11 35.58 26.57 171.30 2.078 356 100.00 70
Рис. 1. Идентификация свободных аминокислот.
Получены данные, что в сборе содержатся свободные и связанные аминокислоты: серин, аргинин, треонин, тирозин, аланин, метионин, лизин, фенилаланин, гидроксипролин, пролин, аспарагиновая кислота, глицин.
Из свободных аминокислот методом внутренней нормализации определено, что превалирует лизин-26,59 % и аланин-24,38 % , а среди связанных: серин -31,48 % и аспарагиновая кислота-28,42 %.
Установлено присутствие незаменимых аминокислот: треонина, тирзина, валина, лизина, фенилаланина, которые не синтезируются в организме человека, или синтезируются со скоростью недостаточной для обеспечения физиологических потребностей человека
Разработка методик количественного определения содержания флавоноидов, фенологликозидов в сборе.
Принимая во внимание данные о широком спектре фармакологического действия фенольных соединений, в том числе флавоноидов и фенологликозидов, стандартизацию сбора проводили по содержанию суммы флавоноидов, по содержанию суммы фенологликозидов.
Количественное определение флавоноидов сбора проводилось методом дифференциальной спектрофотометрии. Метод базируется на реакции комплексообразования флавоноидов с алюминия хлоридом, сопровождающийся батохромным сдвигом первой полосы поглощения флавоноидов. В качестве стандартного образца выбран рутин на основании совпадения дифференциальных спектров поглощения извлечений сбора и стандарта, (рис. 2)
Дифференциальные спектры поглощения
1 - PCO рутина с добавлением алюминия хлорида 2- извлечения из сбора с алюминия хлорида в 70 % спирте Рис.2
Метрологические характеристики методики представлены в таблице 2.
Таблица 2
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы флавоноидов в сборе в пересчете на PCO рутина
п f X S2 S р,% 1(Р.О Дх Е,%
5 4 1,86 0,00025 0,016 95 2,78 0,024 ±1,33
Как видно из данных таблицы, относительная ошибка единичного определения с 95 % доверительной вероятностью составляет ±1,33 %. Согласно проведенным исследованиям в сборе количественное содержание флавоноидов, пересчете на рутин колеблется в пределах от 1,71 % до 2,06%.
На основании результатов в сборе содержание флавоноидов регламентируется не менее 1,0 %.
Содержание фенологликозидов ; в сборе определяли хроматоспектрофотометрическим методом. В качестве стандартного образца выбран арбутин, как доминирующий компонент в составе исходного сырья (рис.3). ;
УФ - спектры поглощения извлечения из сбора и PCO арбутина
1-РСО арбутина в спирте 60 %
2-извлечение сбора в спирте 60 % Рис.3
Метрологические характеристики методики представлены в таблице 3.
Таблица 3
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина
F X S5 S Р,% V,«) Дх Е, %
10 2,21 0,0111 0,025 95 2,78 0,0308 ±1,39
Как видно из данных таблицы, относительная ошибка единичного определения с 95 % вероятностью составляет ±1,39%.
Согласно полученным данным, содержание фенологликозидов в сборе в пересчете на арбутин составляет от 2,12 % до 2,31 %.
Исходя из полученных данных, содержание суммы фенологликозидов в сборе регламентируется не менее 2,0 %.
Нами проведено исследование по установлению срока годности. При хранении в обычных условиях при температуре 20 °С показатели качества (описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов, фенологликозидов) определяются через 6 месяцев. Показатели качества регламентируются ТУ на биологически активную добавку к пище в виде сбора.
На основании полученных данных установлено, что БАД к пище в виде сбора выдерживает хранение в течении 2 лет в обычных условиях.
Разработка способа получения сухого экстракта.
Растительная композиция содержит комплекс биологически активных веществ (флавоноиды, витамины, фенологликозиды, дубильные вещества, тритерпены и др.), в связи, с чем предстояло разработать рациональную технологию получения сухого экстракта, которая обеспечила бы полноценный перевод действующих веществ из растительного сырья.
Выбор оптимальных параметров экстрагирования сырья контролировали по выходу экстрактивных веществ и сумме флавоноидов в них в пересчете на рутин - стандарт.
Изучены основные факторы, которые оказывают влияние на полноту и скорость экстракции: степень измельчения сырья, тип и концентрация экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, кратность экстракции.
Экспериментально было установлено, что максимальное извлечение биологически активных веществ из сырья осуществляется при следующих параметрах: оптимальная степень измельчения для листьев толокнянки и ортосифона 0,5-1,0 мм, горца травы 2,0-3,0 мм, для корней солодки и
цветков календулы 4,0-5,0 мм; экстрагент - горячая вода (80°С); соотношение сырья и экстрагента 1:10(12); равновесное состояние при 1 контакте фаз достигается за 60,0 минут, при 2 контакте фаз за 30,0 минут.
По установленному оптимальному режиму экстракции разработана технологическая схема получения сухого экстракта (рис.4).
Технологическая схема производства экстракта сухого
Рис.4
По технологической схеме получено пять партий сухого экстракта.
Экстракт представляет собой аморфный порошок от коричневого цвета до темно-коричневого цвета, со специфическим запахом, гигроскопичен, комкуется. Насыпная масса экстракта при свободной засыпке 0,385 г/см 3, при уплотнении 0,65-0,69 г/см 3. Угол естественного откоса 35-45 сыпучесть 1,1-1,5 г/с. Потеря в массе при высушивании не должна превышать - 5,0 %.
Растворим в горячей воде, в водно - спиртовых смесях- 20-40 %.
Изучение химического состава и стандартизация сухого экстракта.
Изучен фотохимический состав с применением современных физико-химических методов анализа: тонкослойная, бумажная хроматография и ВЭЖХ. Было установлено наличие в сухом экстракте флавоноидов (кверцетина, рутина, апигенина, лютеолина), фенологликозидов (арбутина), дубильных веществ, фенолкарбоновых кислот (галловая и хлорагеновая).
Хроматограмма ВЭЖХ раствора сухого экстракта представлена на рисунке 5.
Хроматограмма ВЭЖХ сухого экстракта
341 тУ 1 1 ; • ; !
• : :
: : ; :
: ; : :
: :
; ; :
2 • ■ ■ I : 13 :
> . ; ;
1 3 г.: ; :
к ; ! :
д М\1. .)Ц 14 15 ■гу ?о- 22:
4 6 8 10 1: 14 1« 18 20 22 24 26 28 30 32 34 3« 38 40 ми»
№ Время, мин
Площадь, Площадь,
Название
1
2
4
5 10
13
14 21 22
216.3 238.5
296 355
581.4 874.4 940.1 1605 2444
МУ*сек %
1256.21 8.86
1964.06 12.83
1796.08 11.74
2496.48 16.31
31.94 0.21
674.70 4.41
2.04 0.01
297.35 1.94
9.83 0.06
Арбутин
Галловая кислота Хлорагеновая кислота Кофейная кислота Гиперозид Апигенин Ллютелин7гликоз Гликурозид Кверцетин_
Рис.5
Методом внутренней стандартизации определено, что наибольшее количество среди флавоноидов в процентном отношении приходится на апигенин (4,41 %), среди фенолкарбоновых кислот - на галловую кислоту (12,830 %); кофейную (16,32 %); и 8,86 % среди обнаруженных веществ занимает арбутин.
Из действующих веществ солодки, входящих в состав сухого экстракта идентифицированы глицциризиновая кислота и гликурозид.
Стандартизацию сухого экстракта проводилась по разработанным ранее методикам количественного определения суммы флавоноидов и фенологликозидов. Дифференциальные спектры поглощения раствора экстракта и PCO приведены на рис.6
Дифференциальные спектры поглощения раствора экстракта _и PCO рутина_
0.8-
«1 ЯР _mn ИГ) nm_дц_in^rtrqh fr ■
Рис. 6
Метрологические характеристики методик представлены в таблице 4, 5.
Таблица 4
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте в пересчете на рутин
F X S S Р,% ^p.f) Дх Е,%
10 2,32 0,00086 0,02932 95 2,23 0,06539 ±2,82
Таблица 5.
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина в сухом экстракте
F X S S Р,% Дх Е, %
10 4,23 0,0172 0,13105 95 2,23 0,09 ±2,13
Как видно из данных таблицы, относительная ошибка определения с 95 % вероятностью составляет для определения суммы флавоноидов ±2,82 %, для определения фенологликозидов ±2,13 %. Отсутствие систематической ошибки методики доказано при помощи опытов с добавками. Результаты анализа представлены в таблице б и 7.
Таблица 6
Результаты опытов с добавками PCO рутина
№ Содержание Добавлено Должно Найде- Абсо- Относи-
суммы PCO быть, мг но, мг лютная тельная
флавоноидов рутина, мг ошибка, ошибка,
, мг мг %
1 23,07 5,8 28,87 29,77 -0,9 +3,11
2 23,07 11,6 34,67 33,65 1,02 -2,94
3 23,07 16,5 39,57 38,75 0,82 -2,07
Таблица 7
Результаты опытов с добавками PCO арбутина
№ Содержание Добав- Должно Найде- Абсо- Относи-
суммы лено быть, г но, г лютная тельная
феноло- арбутин ошибка, ошибка, %
гликозидов, г а, г г
1. 0,00032 0,00008 0,00040 0,00041 -0,00001 +2,5
2. 0,00032 0,00016 0,00048 0,00047 0,00001 -2,08
3. 0,00032 0,00024 0,00056 0,00054 0,00002 -3,57
На основании "опытов с добавками" можно сделать вывод, что относительные ошибки методик находятся в пределах случайной ошибки.
Отсутствие систематической ошибки методики доказано при помощи опытов с добавками при помощи PCO арбутина в навеску сырья.
Согласно полученным данным, содержание флавоноидов в пересчете на рутин составляет от 2,20 % до 2,37 %, содержание фенологликозидов в пересчете на арбутин составляет от 3,57 % до 4,58 %.
Исходя из полученных данных, содержание суммы флавоноидов в сухом экстракте регламентируется не менее 2,0 %, а фенологликозидов в экстракте регламентируется не менее 3,0 %.
Нами проведено исследование по установлению сроков годности экстракта, регламентируемых ТУ. При хранении в обычных условиях при температуре 20 °С показатели качества (описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов и фенологликозидов) определяются через каждые шесть месяцев. На основании полученных данных установлено, что экстракт сухой выдерживает хранение в течение 2 лет при хранении в обычных условиях.
Разработка готовой лекарственной формы - гранул.
Так как сухой экстракт имеет ряд недостатков и практически не используется в качестве готовой лекарственной формы, разработана технологическая схема получения готовой формы - гранул «Фитопрост».
В качестве вспомогательных веществ для оптимизации процесса грануляции вводили: сахар молочный для улучшения показателей прессуемости и сыпучести, крахмал картофельный как разрыхлитель, раствор поливинилпирролидона в качестве связывающего средства.
Расход ингредиентов гранул БАД «Фитопрост» на 1 кг:
1. Экстракта - 0,020 кг
2. Сахара молочного (ОСТ 4963-85) - 0,500 кг
3. Сахара - рафинад (ГОСТ 22-78, ФС 42-77-72) - 0,450 кг
4. Поливинилпироллидона - 0,022 кг
5. Воды очищенной (ГОСТ 2374-82) - 0,088 кг
Разработка методик стандартизации гранул «Фитопрост».
Изучен качественный состав фенологликозидов, флавоноидов и фенолкарбоновых кислот методом высокоэффективной жидкостной хроматографии. В гранулах «Фитопрост» содержатся апигенин, арбутин, гиперозид, геспередин, галловая кислота, кверцетин, рутин, кофейная кислота, лютеолин и его 7 гликозид, идентифицированные по времени удерживания стандартных растворов. Методом внутренней стандартизации определено, что наибольшее количество среди флавоноидов в процентном отношении приходится на лютеолин (15,12 %), среди фенолкарбоновых кислот - на галловую -(12,90 %), кофейную кислоту (10,00 %); 16,40 % среди выделенных веществ занимает арбутин.
В связи с тем, что фармакотерапевтический эффект экстракта сухого в основном обусловлен наличием в нем фенологликозидов, по содержанию этих веществ и ведется стандартизация гранул.
За основу приняли хроматоспектрофотометрический метод количественного определения суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин.
Метрологическая характеристика приведена в таблице 8.
Таблица 8
Метрологическая характеристика методики количественного определения суммы фенологликозидов в пересчете на PCO арбутина
F X S2 S Р,% l(p.f) Дх Е, %
6 0,96 0,00018 0,01342 95 2,45 0.03288 ±3,43
Как видно из данных таблицы, относительная ошибка единичного определения с 95 % вероятностью составляет ±3,43 %. Отсутствие систематической ошибки методики доказано при помощи опытов с добавками при помощи арбутина в навеску сырья. Результаты анализа представлены в таблице 9.
Таблица 9.
Результаты опытов с добавками арбутина
№ Содержание Добавле- Должно Найде- Абсолют- Относи-
суммы но быть, г но, г ная тельная
феноло- арбутина, ошибка, г ошибка, %
гликозидов, г г
1. 0,00032 0,00008 0,00040 0,00041 -0,00001 +2,5
2. 0,00032 0,00016 0,00048 0,00047 0,00001 -2,08
3. 0,00032 0,00024 0,00056 0,00054 0,00002 -3,57
Согласно полученным данным, содержание фенологликозидов в пересчете на арбутин составляет от 0,91 % до 0,98 %.
Нами проведено исследование по установлению сроков годности гранул, регламентируемых ТУ. При хранении в обычных условиях при температуре 20°С показатели качества (описание, подлинность, потеря в массе при высушивании, содержание суммы флавоноидов и фенологликозидов) определяются через каждые шесть месяцев. На основании полученных данных установлено, что гранулы из экстракта сухого выдерживают хранение в течение 2 лет при хранении в обычных условиях. Наблюдения продолжаются.
Выводы
1. На основании данных литературы о химическом составе растений, применении их в научной и традиционной медицине, их фармакологической направленности и состояния сырьевой базы составлена рациональная растительная композиция, в виде БАД к пище для профилактики простатита.
2. На основании фармакогностического изучения выявлены диагностические признаки пяти компонентов сбора при их совместном присутствии. Установлены числовые показатели, исследован качественный состав методом хроматографии, ВЭЖХ и идентифицированы: флавоноиды: апигенин, лютеолин, кверцетин, рутин, гиперозид, мирицетин; фенолкарбоновые кислоты: хлорагеновая, галловая, кофейная; фенологликозиды: арбутин, тритерпеноид глицирризиновая кислота. Установлено содержание свободных и связанных аминокислот. Разработаны методики количественного определения действующих веществ по сумме флавоноидов в пересчете на рутин и фенологликозидов в пересчете на арбутин методом спектрофотометрии. Разработан способ получения сухого экстракта. Исследовано влияние основных факторов на процесс экстракции биологически активных веществ из сбора. Установлены оптимальные условия экстракции: тип экстрагента - горячая вода 80-90 °С, соотношение сырья и экстрагента 1:10(12), кратность-2, время первой экстракции 1 час, второй-30 минут.
3. Изучен качественный состав сухого экстракта методом ВЭЖХ, при этом идентифицированы апигенин, лютеолин, кверцетин, рутин, гиперозид, мирицетин, хлорагеновая, галловая, кофейная, арбутин, глицирризиновая кислота. Разработаны методики стандартизации сухого экстракта по сумме флавоноидов в пересчете на рутин, по сумме фенологликозидов в пересчете на арбутин.
4. Проведен качественный и количественный анализ биологически активных веществ в гранулах «Фитопрост».
5. Разработаны нормативные документы ТУ, ТИ, рецептура на сбор, сухой экстракт, гранулы «Фитопрост».
По теме диссертационной работы опубликованы следующие работы:
1. Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Российская Г.И., Маркарян A.A., Сокольская Т.А. Разработка способа получения сухого экстракта //Развитие традиционной медицины в России: Материалы научно-практической конференции.-Улан - Удэ: «Вита Магистра» РЦМП, 2004,- С. 65-67.
2. Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Маркарян A.A. Количественное определение действующих веществ в сухом экстракте методом ВЭЖХ // Сибирский медицинский журнал,-2004.-№8.-С. 69-71.
3. Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Маркарян A.A. Фитохимическое изучение и стандартизация БАД к пище в виде сухого экстракта//Сибирский медицинский журнал.-2005.-№1.-С.65-67.
4. Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Маркарян A.A. Разработка способа получения сухого экстракта //Материалы 60-ой региональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»,- Пятигорск, 2005. С.92-95.
5. Гармаева Е.А., Николаева Г.Г., Мантатов В.В., Даргаева Т.Д., Маркарян A.A. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в гранулах «Фитопрост» //Материалы 60-ой региональной конференции по фармации и фармакологии «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции»,- Пятигорск, 2005.-С. 198201.
Подписано в печать 25.12.2006 г. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,4 п.л. Тираж 100. Заказ № 71.
Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН 670042 г. Улан-Удэ, ул. Сахьяновой, 6.
Оглавление диссертации Гармаева, Елена Анатольевна :: 2007 :: Улан-Удэ
Введение
Глава 1. Обзор литературы
Современные принципы и средства профилактики и лечения простатита. Разработка и стандартизация полифитоэкстрактов
1.1. Современные представления об этиологии и патогенезе простатита
1.2. Фитотерапия в профилактике и лечении простатита
1.3. Анализ номенклатуры, состава, фармакологического действия лекарственных растений, применяемых для профилактики и лечения простатита
1.4. Анализ номенклатуры лекарственных средств и биологически активных добавок к пище, применяемых для профилактики и лечения простатита
1.5. Современные подходы к разработке новых лекарственных средств растительного происхождения
1.6. Подбор оптимальной композиции лекарственных растений
1.6.1. Толокнянка обыкновенная (Arctostaphylos Uva-Ursi (L.) Spreng.)
1.6.2. Почечный чай (Orthosiphon stamineus Benth.)
1.6.3. Горец птичий (Polygonum aviculare L.)
1.6.4. Солодка голая (Glycyrrhiza glabra L.), солодка уральская (Glycyrrhiza uralensis Fisch.)
1.6.5. Календула лекарственная (Calendula officinalis L.)
1.7. Современные аспекты технологического процесса производства сухих экстрактов, гранул.
Выводы к главе
Экспериментальная часть 54 Пояснения к эксперименту
Глава 2. Разработка способа получения сбора и его стандартизация
2.1. Обоснование состава комплексного сбора и разработка технологической схемы получения
2.1.1. Выбор оптимального соотношения ингредиентов растительной композиции
2.1.2. Разработка технологической схемы получения сбора
2.1.3. Товароведческий анализ растительного сырья и сбора
2.2. Изучение внешних признаков
2.3. Микроскопическое изучение сбора и входящих ингредиентов
2.4. Фитохимическое изучение сбора 82 2.4.1 Качественный анализ сбора
2.4.2. Хроматографическое исследование сбора
2.4.3. Идентификация веществ фенольной природы методом ВЭЖХ
2.4.4. Идентификация глицирризиновой кислоты методом ТСХ
2.4.5. Определение содержания аминокислот
2.5. Стандартизация сбора
2.5.1. Результаты количественного определения глицирризиновой кислоты
2.5.2. Результаты количественного определения апигенина, арбутина, глицирризиновой кислоты методом ВЭЖХ
2.5.3. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов
2.5.4. Разработка методики количественного определения суммы 105 фенологликозидов
Выводы к главе
Глава 3. Разработка схемы получения экстракта сухого и его стандартизация по биологически активным веществам
3.1. Разработка способа получения экстракта сухого
3.1.1. Подбор оптимальных параметров экстрагирования биологически активных веществ исследуемого сырья
3.1.2. Корреляция размеров частиц составных компонентов
3.1.3. Определение параметров соотношения сырья и экстрагента, температуры и кратности экстракции
3.1.4. Разработка технологической схемы получения экстракта сухого
3.2. Фитохимическое изучение и стандартизация экстракта сухого 119 3.2.1 Идентификация фенольных соединений экстракта сухого методом ВЭЖХ
3.2.2. Разработка методики количественного определения флавоноидов
3.2.3. Разработка методики количественного определения фенологликозидов
Выводы к главе
Глава 4. Создание лекарственной формы - гранул «Фитопрост» н их стандартизация
4.1. Создание лекарственной формы - гранул «Фитопрост»
4.1.1. Выбор оптимального состава вспомогательных веществ
4.1.2. Технология изготовления гранул
4.2. Фитохимический анализ гранул и количественное определение флавоноидов в пересчете на рутин 131 Выводы к главе 4 135 Общие выводы 136 Литература
Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Гармаева, Елена Анатольевна, автореферат
Актуальность темы. Хронический простатит - наиболее частое воспалительное заболевание половой сферы мужчин. Согласно статистическим данным, простатитом болеют до 25-40 % мужчин, а по некоторым данным до 80 % (К. ВобО-ош) в наиболее трудоспособном возрасте (25-40 лет) [72,124,86,127]. В последнее время простатит все чаще встречается у лиц молодого возраста до 20 лет. а также у лиц старше 50 лет. [72,124,86,127].
В последние годы отмечается увеличение заболеваемости хроническим простатитом, что связано с малоподвижным образом жизни, бесконтрольным приемом лекарственных средств, аллергизацией населения, ростом венерических заболеваний, неблагоприятной экологией и др. Многообразие и тяжесть клинических появлений заболевания, нерешенность многих вопросов его выявления, неудовлетворительные результаты лечения негативно влияют на такие показатели как рождаемость, частота разводов, а также инвалидация в относительно молодом возрасте. Они придают хроническому простатиту все возрастающую медико-социальную значимость и требуют дальнейшего изучения и решения этой актуальной проблемы [86,114,118].
Одной из наиболее актуальных, но пока, к сожалению, не решенных проблем лекарственной терапии больных является выбор препарата той или иной группы, который будет наиболее эффективным и безопасным для пациента. В настоящее время много препаратов синтетического происхождения с выраженным фармакологическим действием, без которых, безусловно, не обойтись в урогентной урологии. Однако в случаях, не требующих экстренного вмешательства, все большее значение для лечения и профилактики хронического простатита приобретает фитотерапия - лечение лекарственными травами [55, 85, 124]. Растительные препараты отличаются низкой токсичностью, широтой терапевтического действия, малой стоимостью. В связи с этим, поиск и создание новых эффективных комплексных средств, полученных из растительного сырья и предназначенных для профилактики хронического простатита, доступных широким массам населения, безопасных в применении является актуальной задачей фармации.
Целью настоящих исследований является разработка состава и стандартизация биологически активной добавки к пище из лекарственных растений в виде сбора, экстракта сухого, а также гранул, условно названных «Фитопрост». рекомендуемых для профилактики хронического простатита.
Для достижения поставленной цели планировалось решить следующие основные задачи:
- обосновать и разработать состав многокомпонентной растительной композиции для профилактики простатита;
- провести фармакогностическое изучение исходной растительной композиции;
- провести исследования по подбору оптимальных параметров экстракции биологически активных веществ из растительной композиции для разработки рациональной технологии получения сухого экстракта и гранул;
- изучить химический состав экстракта и гранул на наличие биологически активных веществ;
- разработать методики количественного определения по доминирующим веществам;
- разработать нормативные документы на рекомендуемые биологически активные добавки к пище с целью внедрения их в производство (технические условия, технологические инструкции и рецептуры).
Научная новизна.
Подобран и обоснован рациональный состав исходной растительной композиции, обеспечивающий фармакотерапевтическую эффективность при экспериментальном простатите.
Установлены критерии подлинности, числовые показатели на сбор, внесенные в нормативные документы.
Базируясь на теоретических основах экстрагирования суммы биологически активных веществ в зависимости от типа экстрагента, степени измельчения, соотношения сырье - экстрагент. выявлена возможность получения экстракта сухого и на его основе гранул со стабильными физическими и технологическими показателями.
Методами избирательной экстракции и методом ВЭЖХ идентифицировано наличие веществ: аминокислот, флавоноидов, фенологликозидов. фенолкарбоновых кислот и тритерпеноидов.
Разработаны методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин и суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин спектрофотометрическим методом в сборе и экстракте сухом, суммы фенологликозидов в пересчете на арбутин в гранулах.
На основании полученных данных составлены нормативные документы: рецептура, технические условия (ТУ), технологические инструкции (ТИ).
Практическая значимость работы. На основании проведенных исследований разработаны и утверждены:
- Технические условия ТУ 9373-013-03533369-02. технологическая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде сбора.
- Технические условия ТУ 9197-013-03533369-02, технологическая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде экстракта сухого.
- Технические условия ТУ 9197-012-03533369-03, технологическая инструкция (ТИ) по производству биологически активной добавки к пище в виде гранул «Гранулы Фитопрост», РУ №77.99.20.919.Б.00677.05.04. от 13.05.04.
Сбор внедрен в производство (акты о внедрении Центра восточной медицины республики Бурятия, 2004).
Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на:
- 60-ой региональной конференции по фармации и фармакологии (Пятигорск, 2005);
- научно-практической конференции «Развитие традиционной медицины в России» (Улан-Удэ, 2004);
Основное содержание диссертации опубликовано в 5 научных работах; ТУ на БАД к пище сбор; ТИ сбор; ТУ на «Экстракт сухой»; ТУ, ТИ на «Гранулы Фитопрост».
Связь задач исследования с проблемным планом научного совета по фармакологии и фармации. Работа выполнена в соответствии с планом научных исследований Отдела биологически активных веществ Института общей и экспериментальной биологии СО РАН по программе: «Лекарственные растения Сибири и Дальнего Востока», являющейся разделом (6.3) Государственной программы «Сибирь» на период 1986 -2005 гг. и в соответствии с проектом №146 «Разработка лекарственных и профилактических препаратов для медицины. Фундаментальные основы и реализация», утвержденным президиумом СО РАН.
На защиту выносятся:
- обоснование растительной композиции и возможности создания БАД к пище в виде сбора, экстракта сухого и гранул, рекомендуемых для профилактики простатита;
- результаты фитохимического изучения сбора, экстракта сухого и гранул на содержание действующих веществ, результаты исследований по установлению показателей подлинности, доброкачественности и количественного определения биологически активных веществ;
-разработка способа получения сбора, экстракта сухого и готовой формы гранул «Фитопрост».
Объем и структура диссертации. Диссертационная работа выполнена на 155 страницах машинописного текста: состоит из введения, обзора литературы (глава 1), экспериментальной части (3 главы), 38 таблиц и 15 рисунков, общих выводов и списка литературы (включено 142 источника, из которых 14 - на иностранном языке) и приложений.
Заключение диссертационного исследования на тему "Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого для профилактики простатита"
ОБЩИЕ ВЫВОДЫ
1. На основании данных литературы о химическом составе растений, применении их в научной и традиционной медицине, их фармакологической направленности и состояния сырьевой базы обоснован состав многокомпонентной растительной композиции в виде БАД к пище для профилактики простатита.
2. На основании фармакогностического изучения выявлены диагностические признаки пяти компонентов сбора при их совместном присутствии. Установлены числовые показатели, исследован качественный состав современными методами хроматографии. ВЭЖХ. идентифицированы: флавоноиды: апигенин, лютеолин, кверцетин, рутин, гиперозид, мирицетин; фенолкорбоновые кислоты: хлорогеновая, галловая, кофейная; фенологликозиды: арбутин, тритерпеноид глицирризиновая кислота. Установлено содержание свободных и связанных аминокислот, с целью установления наличия незаменимых.
3. Исследовано влияние основных факторов на процесс экстракции биологически активных веществ из сбора. Установлены оптимальные условия экстракции: тип экстрагента - горячая вода 8090 °С, степень измельчения для каждого вида сырья (листья толокнянки и ортосифона 0.5-1,0 мм. трава горца птичьего 2,0-3,0 мм, корни солодки и цветки календулы 4,0-5,0 мм), соотношение сырья и экстрагента 1:10(12), кратность-2, время первой экстракции 1 час, второй-30 минут. На основании данных исследования разработаны рациональные технологии получения экстракта сухого и гранул.
4 Изучен качественный состав экстракта сухого и гранул с использованием общепринятых реакций, а методом ВЭЖХ подтверждено наличие тех же веществ, что и в исходной композиции.
5. Разработаны методики количественного определения по доминирующим веществам, в сборе и экстракте сухом по сумме флавоноидов в пересчете на рутин и по сумме фенологликозидов в пересчете на арбутин, в гранулах по флавоноидов в пересчете на рутин.
6. Разработаны нормативные документы Технические условия (ТУ), Технологические инструкции (ТИ), рецептура на БАД к пище в виде сбора, экстракта сухого, гранул «Фитопрост».
Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2007 года, Гармаева, Елена Анатольевна
1. Ажгихин И.С., 'Генцова А.И. Лекарственная форма и терапевтическая эффективность лекарств.- М.-1974. 256 с.
2. Азизов И.К. Анализ и контроль качества лекарственных веществ с использованием спектральных методов анализа в видимой области спектра. Дисс. на соиск. уч. степ. докт. фарм. наук. - М., 1993. - 222 с.
3. Александров Н.П., Александров В.Н., Александров А.Н. Болезни предстательной железы. СПб.: ИД «Весь», 2003.- 96 с.
4. Александрова B.C. Методы гранулирования фармацевтических материалов и их влияние на свойства гранул и таблеток: (Обзор).- Информ. Серия Хим.-фармац. пром-ть: ЦБНТИ. М-во Мед про-ти.-М.-Вып. 10.-25 с.
5. Алюшин М.Т., Артемьев А.Н. Астраханова М.М. и др. Технология лекарственных средств на фармацевтических производственных предприятиях. //Сб. трудов НИИ фармации МЗ РФ MJ994.-C. 100-137.
6. Амосов A.B. Лечение некоторых форм простатита //Урология и нефрология,-1989.- №5.- С.22-24.
7. Арнольди Э.Г. Хронический простатит. Ростов-на-Дону, 1999.
8. Асеева Т.А., Блинова К.Ф., Яковлев Г.П. Лекарственные растения тибетской медицины. Новосибирск, «Наука», 1985. - 160 с.
9. Багирова В.Л. Государственная экспертиза нормативных документов как основа совершенствования системы стандартизации лекарственных средств. Дисс.докт. фарм. н., М.-1997.-50 с.
10. Баев О.М., Шепель Ф.Г., Сорочинская Т.Г. и др. Особенности влияния степени измельчения растительного сырья на процесс экстракции БАВ //Тез. докл. VI Росс. нац. конгресса «Человек и лекарство» М.- 1999. - С.384.
11. Бакуридзе А.Д., Патудин A.B., Эриашвили В.М. Количественное содержание фенолкарбоновых кислот в траве горечавки желтой методом ВЭЖХ //Научные труды ВНИИ фармации. 1988. - т. 26. - С. 153-156.
12. Баторова С. М., Яковлев Г.П., Николаев С.М. и др. Растения тибетской медицины. Новосибирск, 1989. -159 с.
13. Батюк B.C., Колесников Д.Г., Соколова В.Е. и др. Способ получения суммы флавоноидов, обладающих гипоазотемическим действием A.C. 457476 //Бюллетень: открытия, изобретения М., 1975,- №3.- С.12.
14. Башмурин А.Ф. Фармакологическое исследование галеновых и новогаленовых препаратов толокнянки. //Сб. науч. тр. Ленингр. института усовер. врачей.- 1951, вып. 7.-е. 174-177.
15. Безменов А .Я., Грахов В.П., Четверня Е.А. Анализ свободных фенолкарбоновых кислот лекарственных растений методом ВЭЖХ //Тезисы докладов: 2 респ. конф. по медицинской ботанике. Киев. - 1988. -с. 67.
16. Беликов В.В., Точкова Т.В., Колесник Н.Т. Некоторые особенности спектрофотометрического метода анализа флавоноидных соединений //Тез. докл. IV съезда фармацевтов. Казань.-1986. С.514-515.
17. Беликов В.В., Точкова Т.В., Шатуиова JI.B., Колесник Н.Т., Баян-дина И.И. Количественное определение основных действующих веществ у видов Hypericum L. //Раст. ресурсы.- 1990.- Т. 26.- Вып. 4.- С. 571-578.
18. Беликов В.В., Точкова Т.В., Колесник Н.Т. Проблемы стандартизации и контроль качества лекарственных средств. М.-1991,- Е.2, ч.2.-С.13-14.
19. Белов В.В. Микробиологические требования к нестерильным препаратам. 1984. С.230-240.
20. Биологически активные добавки и перспективы их применения в здравоохранении: тез. докл. Улан-Удэ: Издательство БНЦ Со РАН, 2001.-85 с.
21. Биологически активные добавки к пище. Полная энциклопе-дия./Сост.Н.П. Натарова. СПб.: ИД «Весть», 2001-384 с.
22. Богданова Г.А., Муратов Ю.М., Мухина В.Ф. Брусника и толокнянка в лесах Сибири //Актуальные вопросы исследования Сибири Красноярск, 1981.-С. 26-30.
23. Бондарев А.Н., Зарудий Ф.С., Русаков И.А. Солодка (обзор) // Химико-фармацевтический журнал.-1995, №10. С.33-39.
24. Боровиков С.А., Власенко C.B., Плюшкин С.А. Гранулирование лекарственных веществ //Тез. докл. Межд. конф. «Фармация в XXI веке: инновации и традиции» СПб, 1999.-С 49.
25. Вальтер М.Б. Процессы и аппараты химико-фармацевтических производств. М.,1990.- С.28- 41.
26. Васильченко Е.А. Регулирующее влияние флавонондов на обменные процессы //Фармакология: состояние и перспективы. Тезисы докладов 4 съезда фармакологов УССР Харьков.1990 - С.45.
27. Виноградов Т.А., Гажев Б.Н. Практическая фитотерапия.- М.:-«Олма Пресс», Издательный дом «Нева», 1998.- С.640.
28. Высокоэффективная жидкостная хроматография в биохимии //М.: Мир. 1988 (под ред. Хейшена А., Хунса К.Л., Лотшнайха Ф.).
29. Высочина Г.И. Динамика содержания и компонентного состава флавоноидов Polygonum aviculare L. //Растительные ресурсы.- 1999.- Вып. 3.- С. 67-74.
30. Высочина Г.И. Содержание суммы некоторых основных флавоноидов в надземной части Polygonum aviculare L., произрастающего в Сибири // Растительные ресурсы.- 1998.- Вып. 4.- С. 47-54.
31. Гаппаров М.П. Влияние биологически активных добавок к пище на энергетический обмен и массу тела человека //Вопросы фармак.- 1999.-№1.- С.12-16.
32. Георгиевский В.П., Комиссаренко Н.Ф., Дмитрук С.Е. Биологически активные вещества лекарственных растений. Новосибирск, 1990.-333с.
33. Георгиевский В.П., Конев Ф.А. Технология и стандартизация лекарств.- X.: ООО «Рирер» ,1996.-779 с.
34. Герчиков А.Я., Гарифуллина Г.Г., Хайруллина Л.Т., Муртазина Ф.К. Оценка антиоксидантной активности трех видов солодки //Итоги биологических исследований.- 2000, вып.6.-Уфа.-2001- С.38-41.
35. Глызин В.И., Масюк И.М., Гуляев В.Г. Способ получения экстракта из леспедеци. А.С. № 1I62438.-M.-I985.
36. Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. Сан. Пин. 2.3.2. 560-96.-М.: 1997.-С. 269.
37. Головкин Б.Н., Руденская Р.Н., Трофимова И.А., Шретер А.И. Биологически активные вещества растительного происхождения. В трех томах. М. 2001.- Т.1.- 350 с. Т.П. - 764 С.-2002, Т.Ш. - 216 с.
38. Гомелла Л.Г., Фрайд Д.Д. Простатит и другие заболевания предстательной железы./Пер. с англ. В.Г. Яковлева.-М.: Крон-Пресс, 1995.- 224 с.
39. Государственный реестр лекарственных средств. Издание официальное (по состоянию на 1 февраля 2002 г.).- Т. 1.- М., 2002.- 1300 с.
40. Государственная фармакопея СССР XI изд. Вып 1. - Вып. 2 -М.- 1989.- 398 с.
41. Гуськова Т.А., Фисенко В.П. Методические указания по оценке безопасности применения лекарственных средств в клинике на основании результатов доклинических токсикологических экспериментов. М., 2000 -С. 105-107.
42. Даргаева Т.Д. Теоретическое и экспериментальное обоснование технологии и стандартизации многокомпонентных растительных препаратов, применяемых при заболеваниях пищеварительной системы. Дисс. докт. фарм. наук. М., 1994. - с. 36.
43. Доржбал Э., Ермакова В.А. Изучение аминокислотного состава сбора и сухого экстракта //Мат-лы V межд. съезда «Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов растительного происхождения». СПб. 2001, С.375-379.
44. Доржбал Э., Ермакова В.А. Количественное определение фе-нольных соединений антимикробного сбора и сухого экстракта методом ВЭЖХ //Мат-лы научн. Конф., посвящ. 10-летию фирмы «Монос» Улан-Батор, 2000.- С. 17-18.
45. Дощинская Н.В., Колесникова Н.С. Фитохимическая оценка Томских образцов сырья толокнянки и брусники.//Растит. ресурсы Южной Сибири, их рациональное использование и охрана. — Томск: 1982. — С. 65-68.
46. Дрожжина E.B. Разработка малокомпонентных биологически активных пищевых добавок на основе растительных экстрактов //Тез. докл. Межд. научн. конф. //Фармация в XXI веке: инновации и традиции. СПб. -1999.-С. 153.
47. Дугаржапов А.М. Экспериментальная фармакотерапия экстрактом толокнянки обыкновенной повреждений почек. Автореф. дисс.к. м. н. - Улан-Удэ, 2000. - 23 с.
48. Егоров В. А., Машкова JI.B. и др. Фармакоэкономические аспекты исследования новых фитопрепаратов //Тез. докл. VIII Рос. нац. конгресса "Человек и лекарство". М. - 2000. - С. 460.
49. Простатит / Елисеев Ю.Ю., Гольбрайх Е.Б., Суворов А.П., Гельбрайх Г.Е.-М.: Крон-Пресс, 2000.-160 с.
50. Ермакова В.А. Фармакогностическое изучение и стандартизация сборов, брикетов, растительных порошков: Автореф. дисс. на соиск. уч. степ. докт. фарм. наук. М. -1999. - 46 с.
51. Ефремов А.П. Фитотерапия заболеваний предстательной железы. М.: Старко, 1999.- 120 с.
52. Запрометов М.Н. Фенольные соединения. М.-1993-271с.
53. Зенкевич И.Г., Косман В.М. Методы количественного хромато-графического анализа лекарственных веществ. Пособие для фармацевтических работников. СПб: СПХФА,1999. - 81 С.
54. Зинкевич И.Г. Пименов A.A., Макаров В.Г. и др. Количественное определение содержания флавоноидов в комплексных жидких спиртосодержащихся препаратах //Мат-лы VII конгресса «Человек и лекарство», М. 2000. - С.610.
55. Карпенко Е.И. Профилактика простатитов. 1986.
56. Кискина Л.П., Долгополова В.А., Плетнева Т.В. и др. ККСА метод прогнозирования биологической активности химических веществ //Мат. 2 межд. конф. «Здоровье и образование в XXI веке».- М.- 2001-С.95-96.
57. Кирютина В.И. Действие почечного чая и полевого хвоща на функцию почек и сердечно-сосудистую систему. Автореф. дисс. канд. мед. наук. - Иваново, 1961. - 22 с.
58. Ковалев В.Н., Журавлев Н.С., Хованская П., Ильина Т.В. Совершенствование методов количественной оценки природных веществ в растительном сырье и препаратах //Фармацевтический журнал. 1991. - № 4. -С. 11-15.
59. Ковалев Ю.Н., Ильин И.И., Зиганшин O.P., Ковалев А.Ю. К клиническим особенностям и патогенезу хронического простатита //Вестник дерматологии и венерологии. 1995. - № 2.- С.5—52.
60. Колхир В.К., Трумпе Т.Е., Глазова Н.Г и др. Простанорм новое средство для лечения простатитов //Тез докл. У Вснроссийского национального конгресса «Человек и лекарство» - М.-1998.- С.374.
61. Комиссаренко А.Н., Точкова Т.В. Биологически активные вещества листьев Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. и их количественное содержание //Растительные ресурсы.- 1995,- Т. 31.- Вып. 1.- С. 37-43.
62. Коновалова О. А., Рыбалко К.С. Биологически активные вещества Calendula officinalis L . (Обзор) //Растительные ресурсы.- 1990.- № 3. -С.448-463.
63. Корик Г.Г. Хронический простатит. Л., «Медицина», Ленингр. Отд-ние, 1975.
64. Корсун В.Ф., Суворов П.П. Фитотерапия мочеполовых болезней.-Санкт-ГТетербург, Диля, 1999.- С. 5-7.
65. Кравченко Н.В., Муравьев И.А., Пшуков Ю.Г. Выбор оптимальных размеров частиц при совместном экстрагировании различных видов растительного сырья, входящего в состав сборов //Фармация. 1976. -№ 6. -С. 9-13.
66. Кругляк Л. Г. Простатит: Как определить. Как предупредить. Как вылечить. СПб: Весь, 2000.-94 с.
67. Краснов К.А., Березовская Т.П., Алексюк Н.В. Выделение и анализ природных биологически активных веществ //Томск. 1987. - 184 с.
68. Куваев В.Б., Жуков В.М., Николаев А.Б. Растения и средства для профилактики и лечения аденомы предстательной железы / Растит. Ресурсы. 1988. - Т. 24, вып. 4. - С.615-621.
69. Ладыгина Е.Я., Самылина И.А. Роль нормативно-технической документации в повышении качества лекарственного растительного сырья //Сб. научн. трудов "Актуальные проблемы современной фармации". М. -1996.-С. 119-122.
70. Лекарственные растения Государственной фармакопеи: фармакогнозия. /И.А. Самылина, В.А. Северцев, A.A. Сорокина, В.А. Ермакова и др. М.: АНМИ, - 1999. - 488 с.
71. Лекарственные растения Государственной фармакопеи: фармакогнозия. /И.А. Самылина, В.А. Северцев, A.A. Сорокина, В.А. Ермакова и др. М.: АНМИ,-2003.-534 с.
72. Лекарственные растения Бурятии. Улан-Удэ, 1974. - 207 с.
73. Лекарственные растения Сибири для лечения сердечнососудистых заболеваний. /Н.В. Казаринова, М.Н. Ломоносова, В.М. Триль и др. Новосибирск: Наука. Сиб. отд., 1991. - 240 с.
74. Литвиненко В.И., Черных H.A., Попова Т.П. Анализ качества растительного сырья и фитохимических препаратов //Основные направления работы по улучшению качества лекарственных средств: Тез. научн. конф. Харьков. - 1983. - ч. 2. - С. 64-66.
75. Майкл Рисман. Биологически активные добавки: неизвестное об известном.- М.: Арт Бизнес- центр, 1998.- С.489.
76. Мамчур Ф.И., Кушнирук Ю.И. Фитотерапия в комплексном лечении половых расстройств у мужчин.- Киев, 1992.-144 с.
77. Манждраков K.J1. Хронический простатит. М. - 1980. - 26 с.
78. Мантатов В.В. Влияние комплексного средства «Фитопрост» на течение экспериментального хронического простатита. Автореф. дисс. . . к. м. н. Улан-Удэ, 1999 .- 20 стр.
79. Машковский М.Д. Лекарственные средства М. 1993.-Т. 1-736 с.-Т.2. - 688 с.
80. Минаева В.Г. Лекарственные растения Сибири. Новосибирск, 1991.- 431 с.
81. Минина С.А., Громова H.A. Теория и аппаратурное оформление процесса экстракции. Л: ЛХФИ, 1985. - 35 с.
82. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник.- 4-е изд., перераб. и доп.- М.: Медицина, 2002,- 656 с.
83. Настойки, экстракты, эликсиры и их стандартизация / Александрова А.Е., Арзамасцев А.П., Багирова В.Л. и др.- Санкт-Петербург. 2001 .223 с.
84. Насыров Х.М., Лазарева Д.Н. Изучение противовоспалительной активности производных глицирризиновой кислоты //Фармакология и токсикология. 1980.-Т.43.-№ 4.-С.399-404.
85. Николаев С.М., Матханов Э.И., Перинов P.A. и др. Растения и здоровье. Улан-Удэ, 1994. - 167 с.
86. Николаев С.М., Шантанова JI.H., Мондодоев и др. Фармакологическая активность сухого экстракта из листьев Arctostaphylos uva-vrsi (L.) DC при экспериментальном пиелонефрите //Растительные ресурсы.-1996.-Вып3.-С.113-П8.
87. Никонов Г.К., Савина A.A., Фитохимическое изучение почечного чая //Фармация.-1971 .-№ 1 .-С.29-32.
88. Оболенцева Г.В., Литвиненко В.И., Аммосов A.C. и др. Фармакологические и терапевтические свойства препаратов солодки (Обзор). //Хим. фармац. журн., 1999. № 8. - С.24-31.
89. Пастушенков Л.В., Пастушенков А.Л. Пастушенков В.Л. Лекарственные растения: Использование в народной медицине и в быту. Л.: Лениздат, 1990.-384 с.
90. Пашнев П.Д. Создание составов, разработка технологии новых лекарственных препаратов в форме таблеток и гранул с растительными экстрактами и их исследование. Автореф. дисс . доктора фармац. наук. -Харьков. 1992. - 56 с.
91. Ратникова Г.В., Даргаева Т.Д., Глызин В. И. и др. Способ получения средств, обладающего противовспалительной активностью. Патент РФ № 2064300. от 27.07.1996.
92. Регг М. Предстательная железа, болезни и их лечение./Пер.с англ. под общ. ред. И.А. Горячева.-СПб.: Норинт, 2000.-80 с.
93. Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И. Время достижения равновесия при экстракции сбора, содержащего сумму биологически активных веществ //Фармация. 1984. - № 5. - С. 14-16.
94. Российская Г.И., Даргаева Т.Д., Брутко Л.И., Николаев С.М. Изучение процесса экстракции и количественное определение суммы биологически активных веществ в суммарном препарате желчегонного действия //Фармация. 1985. - № 1. - С. 38-41.
95. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов //Мат. 1-го Между нар. конгр. "Традиционная медицина и питание: теоретические и практические аспекты". М. - 1994. - С. 361.
96. Самылина И.А., Ермакова В.А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья //Химико-фармацевтический вестник. М.: Информация. - 1996. - № 6. - С. 19-22.
97. Сафин В. А. Изучение сырья, процесса экстракции Б AB и некоторых суммарных препаратов крапивы двудомной Автореф. Дисс .канд. фармац.наук. - Тарту. - 1966 - 11 с.
98. Способ получения экстрактивных веществ, обладающих диуретической активностью (Леднева И.П., Николаев С.М., Тимашова Г.Н и др.) A.C. № 1737797 от 15 03.1993.
99. Способ получения средства, обладающего мочегонной и противовоспалительной активностью (Нагаслаева Л.А., Глызин В.И., Даргаева Т.Д. и др.) Патент РФ № 2064301 от 27 .06.1997.
100. Способ получения средства, обладающего противовоспалительной активностью (Ратникова Г.В., Глызин В.И., Даргаева Т.Д. и др.) Патент РФ № 2064300 от 27 .07.1996.
101. Справочник ВИДАЛ. Лекарственные препараты в России.- М. Астра Фарма-Сервис.- 2002- 1540 с.
102. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения. ОСТ 91500.05.001-00. М. - 2000. - 54 с.
103. Сур С.В., Гриценко Э.Н. Проблемы и перспективы разработки и внедрения современных лекарственных средств растительного происхождения //Фарматека. 2001 - № 9.- C.10-Í4.
104. Тареев Е.М. Клиническая нефрология: Б 2 Т./Под ред. Е.М.Тареева.-М.: Медицина. Т.1.-1983.-461 с.:ил.Т.2.- 1983.-461 с.:ил.
105. Тиктинский О.Л., Новиков И.Ф., Михайличенко В.В. Заболевания половых органов мужчин.- М.-1985. — 38 с.
106. Тиктинский О.Л. Хламидийный простатит: как избежать заболевания хламидийным или иным урогенитальным простатитом и болезней партнерши («Гоголевский круг»)/ О.Л.Тиктинский, С.Н. Калинина. СПб: Питер, 2001.-128 с.
107. Тимашова Г.Н. Разработка контроля качества листьев ортоси-фона тычиночного и создание лекарственной формы: Дисс. Кан. фармац. наук. М., 1992,-154 с.
108. Ткачук В.Н. Хронический простатит. Л.: Медицина. 1989.-208с.
109. Трофимов В.И., Кошечкин Д.В. Лекарственные травы: Солодка голая (лакрица) //Санкт-Петербург. Врачебные ведомости.-1993 № 5,-С.67-68.
110. Тутельян В.А., Суханов Б.П., Австриевских А.Н., Поздняков-ский В.М. Биологически активные добавки в питании человека. Томск, 1999.- С. 64-70.
111. Ужегов Г.Н. Болезни мочеполовой системы.-СПб.: Атон: Фолио-Пресс, 1999.-224 е.- (Рецепты знахаря).
112. Фитотерапия с основами клинической фармакологии /Под ред. В.Г. Кукеса.- М.: Медицина, 1999.- 192 с.
113. Хворост П.П., Комиссаренко Н.Ф. Флавоноиды Polygonum avi-culare //Химия природных соединений. 1980.- № 6.- С.840.
114. Щетинин В.В. Лечение хронического простатита: Монография/ В.В. Щетинин, Е.А. Зотоев, Г.И. Колпинский. М.: Медицина, 2002.-240 с.
115. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие /Под ред. Г.П. Яковлева и К.Ф. Блиновой,- СПб: Специальная литература, 1999.- 407 с.
116. Югдурова Е.Д. Фармакогностическое изучение комплексного растительного средства, рекомендуемого для профилактики заболевание мочевыделительной системы. Дисс. канд. фармац. наук, Улан-Удэ, 2004.
117. Юнда И.Ф., Худайбердыев Н.А. Хронический простатит и половые расстройства у мужчин пожилого возраста // Врачебное дело.-1990.-№5.128. Фармакогнозия практикум.
118. Beitten A., Haslam Е. Gallotanninis Phenolic constituents of Аг-tostaphylos uva-ursi L. Spreng //J. Chem. Soc. 1965 - P. 7312-7319.
119. Catapano A.Z. Antioxidant effect of flavonoids //Allergology. -1997. Jan. - 48(1). - P. 39-44.
120. Galensa R., Herrmann K. Analysis of flavonoids by High-performanse liquid chromatography Hi. Chromatogr. 1980. - № 189. - P. 217224.
121. Englert J., Hamischferger J. Diuretic action of aqueous Orthosiphon extract in rats //Planta med 1992- Vol. 58,№ 3 - P. 237-238.
122. Hardin J.M., Stuffe C.A. Analysis of phenolic and flavonoid compounds by High-pressure performance Liquid Chromatography //Anal. Bio-chem. 1980. - vol. 102. - P. 171-175.
123. Harboine I.B., Mabry I.I., Mabry H. The flavonoids //London. -1975.-560 p.
124. Haverland F. Polugonum aviculare //Pharmazie 1963 - Vol. 18. -№ 1 - P. 59-87.
125. Havsteen B. Flavonoids, a class of natural products of high pharmacological potency //Biochemical Pharmacology. 1983. - Vol. 32. - № 7. - P. 1141-1148.
126. Jhordar L., Jitek P. Patkova M. Antimicrobial action of arbutin and the extract from leaves of Artcstaphylos uva ursi in vitro //Cesk. Farm. - 1985, № 34. - P. 174-178.
127. Macander P.J. Plant flavonoids in biology and medicine. New York. - 1986. - P. 489-492.
128. Mitscher L. A., Park Y. H., Clark D. Antimicrobial agents from higher plants Antimicrobial isoflavonoids and related substanties from Glycyr-rhiza glabra (L.) var typica // J. Nat. Prod. 1980 - Vol 43 - №2- P. 259-260.
129. Proliac A. Triterpenes Artcstaphylos uva- ursi //Planta Med et phythoter- 1980-Vo). 14,№3-P. ¡55-158.
130. Robak S., Gryglewski R.S. Bioactivity of flavonoids /Pol. J. Pharmacol. 1996. - 48(6). - P. 555-564.
131. Singia A.K., Pathak Kamia. Quantitative spectrofluoremetric de-formination of flavonoids and their glycosides. //Indian J. Pharm. Sci. 1991. -V. 53.-№ l.-P. 27-30.