Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Стандартизация, оценка качества и антиоксидантные свойства веторона-Е и триовита

Актуальность темы

Антиоксиданты - это новая группа лекарственных средств, разработка которых связана прежде всего с работами школ профессора Б.Н. Тарусова и академика Н.М. Эммануэля (1970-1980 гг.) [43]. В последние годы определению места антиоксидантов для коррекции и регуляции свободнорадикального окисления и в лечении различных заболеваний уделяется повышенное внимание, о чем свидетельствует существенный рост публикаций по этой теме. Препараты антиоксидантного действия находят широкое применение в кардиологии [49, 110, 179], гепатологии [92], онкологии [6, 30, 137, 144, 157], косметологии и многих других областях [32, 130, 137]. Антиоксиданты использовались в клинической практике еще до внедрения свободнорадикальной биологии в медицину. Общей чертой работ такого рода являлось применение какого-нибудь природного антиоксиданта, порой в произвольных дозах с произвольной длительностью, без учета природы и локализации патологии, сезонности, характера питания, влияния на эндогенные антиоксидантные системы организма [157].

Недостаточности АОЗ организма отводится пусковая роль в генезе свободнорадикального окисления [51, 52, 53, 54, 79, 147, 152, 153, 286]. Полагают, что активация свободнорадикального перекисного окисления приводит к нарушению структурно-функционального состояния мембраны и в результате к ее деполяризации, изменению микровязкости липидного слоя, к перекисному окислению белков, аминокислот, ДНК. Повреждающему действию свободных радикалов противостоит эндогенная антиоксидантная система (АОС) организма, которая осуществляет баланс между свободнорадикальным окислением и антиокислительными системами, устраняющими их разрушительное действие. Однако, при интенсивном образовании свободных радикалов и при недостаточной активности системы АОЗ возникает окислительный стресс, который и может явиться причиной многочисленных патологий, вовлекаясь в патогенез практически всех известных болезней [48]. Поскольку при патологии, механизм, предупреждающий и устраняющий последствия повреждений, наносимых свободно радикальным перекисным окислением, а именно, эндогенная АОС, в том числе и антиоксиданты, присутствующие в клетке в малых концентрациях, не всегда справляются с патологическим процессом, требуется поступление антиоксидантов извне [65]. Поэтому в настоящее время интенсивно осуществляется поиск и разработка средств антиоксидантной фармакотерапии [7, 18, 45, 46, 48, 51, 52, 87, 108,109].

В последнее время появилось много рекламных сообщений об эффективных средствах лечения различных заболеваний, и даже онкологических, с помощью различных витаминных препаратов, простого и сложного строения, оформленных как БАД к пище. Механизм действия этих БАД оформлен как антиоксидантный, уничтожающий свободные радикалы кислорода. Однако, к сожалению, до настоящего времени базисные представления об антиоксидантном воздействии БАДов не подтверждались необходимым химико-фармацевтическим анализом. Многие фармакоэпидемиологические работы убеждают в необходимости более требовательного подхода к оценке препаратов с антиоксидантным действием, оформленных как БАД [4, 5].

В свете приведенных данных актуальное значение приобретает проблема стандартизации и разработки методик качественного и количественного определения витаминных лекарственных средств, регулирующих процессы свободнорадикального окисления [3, 13].

Цель и задачи исследования Цель настоящего исследования - стандартизация, оценка качества, изучение антиоксидантного действия и разработка методических рекомендаций по клиническому применению препаратов Веторона-Е (ЗАО «Аквион», Россия) и Триовита (КРКА, Словения).

Задачи исследования: 1. Разработать методики количественного определения а-токоферола ацетата, Р-каротина и аскорбиновой кислоты с помощью ВЭЖХ.

2. Качественно и количественно охарактеризовать состав препаратов Триовит и Веторон-Е.

3. Разработать проект нормативной документации на препарат Веторон-Е.

4. Оценить состояние процессов свободнорадикального перекисного окисления липидов (СПОЛ) и АОС у практически здоровых лиц и больных различными видами пигментного невуса и поллиноза, провести корреляционный анализ нарушений процессов СПОЛ и состояния АОС у детей с различными видами пигментного невуса.

5. Определить динамику концентрации эндогенных витаминов-антиоксидантов, ферментов АОЗ, показателей интенсивности процессов СПОЛ после приема препаратов Веторон-Е и Триовит.

6. Провести сравнительный анализ биохимических показателей: малонового диальдегида (МДА), каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), глутатионпероксидазы (I'll), глутатионредуктазы (ГР), витаминов А, С, Е и (3-каротина, в группах практически здоровых лиц и больных различными видами пигментного невуса и поллинозом, получавших и не получавших антиоксидантную терапию.

7. Определить оптимальные дозы и схемы применения Веторона-Е и Триовита для коррекции нарушений интенсивности процессов СПОЛ и состояния АОС при различных видах пигментного невуса и поллиноза.

Научная новизна

Впервые разработаны методы качественного и количественного определения витаминов-антиоксидантов: аскорбиновой кислоты, а-токоферола ацетата, (3-каротина в препаратах Триовит и Веторон-Е с помощью ВЭЖХ.

Впервые предложен проект нормативной документации на Веторон-Е. Впервые предложен комплексный тест для оценки антиоксидантной активности препаратов Веторон-Е и Триовит, основанный на определении состояния СПОЛ и АОС.

У различных групп практически здоровых лиц и больных, страдающих различными видами пигментного невуса, впервые проведено комплексное изучение интенсивности процессов СПОЛ и состояния АОС, с определением ферментативного и неферментативного звена АОЗ. Это позволило установить значение выявленных нарушений в механизмах возникновения пероксидного стресса и пигментного невуса у детей.

Использованная новая методология обработки результатов факторно-регрессионного анализа с применением компьютерных систем анализа позволила установить наличие тесных корреляционных взаимосвязей между интенсивностью процессов СПОЛ и состоянием АОС у детей в группах контроля и при активизации пигментного невуса [34].

Научно-практическая значимость

На основании анализа и систематизации полученных результатов внесены предложения по совершенствованию методик химико-фармацевтического анализа комплексных витаминных антиоксидантных препаратов и повышению безопасности антиоксидантной фармакотерапии препаратами Веторон-Е и Триовит.

Результаты изучения активности процессов СПОЛ и состояния АОС в норме и при некоторых патологических процессах: пигментном невусе, поллинозе, имеют как общее биологическое значение, так и важное клиническое значение для понимания патогенеза этих заболеваний и прогнозирования их течения.

Методические подходы, разработанные на основе применения методов ВЭЖХ для определения качественного и количественного состава препаратов антиоксидантного действия Веторона-Е и Триовита, спектрофотометрического и флуориметрического определения эндогенных антиоксидантов и ферментов АОЗ, имеют практическое значение и дополняют арсенал методов, использующихся в фармацевтических, клинико-диагностических и научно-исследовательских лабораториях.

Внедрение в практику

1. Методики количественного определения витаминов-антиоксидантов и ферментов антиоксидантной защиты в плазме крови используется в НИИ Детской онкологии и гематологии ГУ Российского Онкологического Научного Центра им. Н.Н. Блохина РАМН (НИИ ДОГ ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН).

2. По результатам выполненных работ были составлены отчеты в Российский Фонд Фундаментальных исследований, подготовлены методические рекомендации по анализу сложно компонентных витаминных препаратов методом ВЭЖХ, а также методам определения активности антиоксидантной системы.

3. Результаты исследования качественного и количественного определения витаминов-антиоксидантов изучаются в учебном процессе на кафедре фармацевтической химии ММА им. И.М. Сеченова.

Связь темы с проблемным планом фармацевтических наук. Работа выполнена в соответствии с планом НИР кафедры фармацевтической химии: «Совершенствование контроля качества лекарственных средств» (№ 01.200.110545).

выводы

1. Разработана методика количественного определения аскорбиновой кислоты с помощью ВЭЖХ (время удерживания 3,8-4,0 мин, время анализа 5 мин), а также методика количественного определения а-токоферола ацетата и Р-каротина в одной пробе с помощью ВЭЖХ (время удерживания а-токоферола ацетата 3,5-3,7 мин, время удерживания (3-каротина 6,4-6,6 мин, время анализа 8 минут).

2. Подтверждена подлинность и количественный состав компонентов препаратов Веторон-Е и Триовит по совпадению времен удерживания определяемого вещества в испытуемом и стандартном образцах.

3. Предложен проект нормативной документации на Веторон-Е.

4. Модифицирована методика определения МДА в плазме крови с помощью спектрофотометрии, измеряли поглощение на 2-х длинах волн (535, 570 нм).

5. Модифицирована методика определения активности каталазы в форменных элементах крови с помощью реакции с молибдатом аммония.

6. Установлена определенная зависимость между обеспеченностью организма витаминами А, С, Е и состоянием обмена глутатиона и антиоксидантных ферментов у больных пигментными невусами. При развитии пигментной патологии изменяются корреляционные зависимости между показателями процессов СПОЛ и состояния антиоксидантной системы.

7. Показана принципиальная возможность коррекции процессов СПОЛ и состояния антиоксидантной системы у больных пигментным невусом препаратами Веторон-Е и Триовит.

8. СИТ больных поллинозом в сочетании с (3-каротином и аскорбиновой кислотой позволяет снизить уровень МДА в плазме крови, активность СОД и каталазы в форменных элементах крови, повысить содержание витаминов-антиоксидантов С, А, Е и Р-каротина, что является одним из показателей оптимизации процессов СПОЛ.