Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.01) на тему:Создание и стандартизация фитоэкстракционных препаратов иммуномодулирующего действия и фитовалеологических средств

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И .¿ЬДИЦИНСШ ¡ШШЛЕННОСТИ

РОССИЙСКОЙ ЛЕДБРАЦШ р р ^ НА^^О-ИССЩОБАТЕИЬСКИЙ ИНСЯЖУТ ¿АР1АЦИИ

3 и Млн №

На правах рукописи

ВАКУРада алиоша дшшовдо

СОЗДАНИЕ И СТАВДАРТИЗАЦИЯ ОДГОЖГГРАКЦИОНШХ ¿¡Р5м1АРАТОВ ИШШЭДУЛИРУЩЕГО ДЕЙСТВИИ И

фжшшшогических средств

Ib.00.01 - Технология лекарств и организация фармацевтического дола

lb.00.0ii - Фармацевтическая химия и фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора,фармацевтических наук

у (./.'..

' / /

Москва - 1994 г. у

<■* - ' \

.У

Диссертационная работа выполнена в Тбилисском государственном медицинском университете.

Официальные оппоненты:

- доктор фармацевтических наук, профессор Т.е. КОНДРАТЬЕВА

- доктор фармацевтических наук, ст.науч.сотр. З.П. КОСТЕННИКОВА

- доктор медицинских наук, ст.науч.сотр. В.М. 1Ш1ЦЕКК0

Ведущая организация - Научно-производственное объединение "Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений"

Защита состоится "Л1" 1994 г. в | часов

на заседании Специализированного совета Д 074.28.01 при Научно-исследовательском институте фармации (117418, г. Москва, ул. Красикова, д. 34).

. Автореферат разослан " " ЛАЯ 1994 г.

Ученый секретарь Специализированного совета Д 074.28.01, канд.фармац.наук,

ст.науч. сотрудник Л.М. БОБРОВА

ОБЩАл ХАРАКГЕРИС1ИКА РАБОТЫ

АКТУАЛЬНОСТЬ 11Р0ЕШШ. В настоящее время одним из перспективных научных направлений являются исследования в области иммунологии. Большой интерес представляет поиск новых эффективных иммуномодулирующих средств - крайне необходимых медицинской практике для лечения инфекционных, аллергических, аутоиммунных и онкологических заболеваний, а также для трансплантации органов и тканей. Указанные патологии, широко распространенные как в нашей стране, так и за рубежом, в последние годы значительно осложняются наслоением вторичных иммунодефицит о в, вызываемых самыми различными воздействиями - химическими, медикаментозными, последствиями Чернобыльской катастрофы и другими экологически неблагоприятными факторами. В этих условиях, существенно ослабляющих иммунную систему, а также в связи с надвигающейся угрозой эпидемии СЩДа проблема разработки новых иммуномодуляторов и валеологических (оздоровительных) средств приобретает особую актуальность.

В последнее время во всем мире значительно повысился интерес к лекарственным растениям. Наряду с синтетическими препаратами не менее важным источником безвредных субстанций, способных определенным образом оказывать влияние на систему иммунитета, являются некоторые растения.

В настоящее время крайне необходимы общедоступные средства, обладающие радиопротекторной активностью, не оказывающие токсического действия при длительном применении. Актуальность созда-■шя валеологических средств, способных повысить устойчивость эрганизма к действию радиации, предотвратить развитие лучевой 5олезни, предупредить возможные осложнения и т.д., в связи с экологической напряженностью в некоторых регионах СНГ, еще

более возрастает и является практически социальным заказом здравоохранения.

ШЬ И ЗАДАЧИ ИСШДОВАНИЯ. Целью работы явилась разработка научно-методических основ создания и стандартизации фитоэкст ракционных препаратов имцуномодулирующего действия, на базе индивидуальной и многокомпонентной растительной композиции, а также фитовалеологических средств, обладвдих радиопротекторной активность».

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать научно-методические основы создания и стандартизации фитоэкстракционных препаратов иммуномодулиругацего действия, на базе индивидуальной и многокомпонентной растительной композиции;

- разработать теоретически у1 экспериментально обоснованные составы многокомпонентных растительных композиций для получения фитоэкстракционных препаратов имнуномодулирующего действия;

- провести исследования по разработке состава и технологии таблеток с сухим экстрактом горечавки жёлтой - "Гентина" с желу' дочнорастворншм пленочшы покрытием;

- выявить закономерность экстрагирования действующих веществ из шогокомпонентной растительной композиции; определить корреляцию размеров частиц составных компонентов сырья в многокомпонентной растительной композиции с использованием математических методов расчета;

- разработать технологию получения препаратов имцуномоду-лиргующего действия - гранул "Имцунофита" и "Тетраиммунофита";

- разработать фитовалеологические средства, обладающие радиопротекторной активностью - "Ачара", "Кутаиси" и "Протектор";

- провести химическое исследование сырья и препаратов им-муномодулидующего действия, а также разработать нормативную документации на предлагаемые субстанции, лекарственные формы и некоторое растительное сырье.

НАУЧНАЯ НОШЗНА И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИЖСТЬ РАБОТЫ.

Разработаны научно-методические основа создания и стандартизации иммуномодулирующих препаратов на базе индивидуальной и многокомпонентной растительной композиции, включающие скрининг на биологическую активность, изучение влияния технологических факторов, выделение и определение роли комплексов биологически активных веществ и индивидуальных соединений в иммуномодулиру-ющей активности, подбор составных компонентов многокомпонентной растительной композиции и определение их количественного соотношения. Исследован ¿1 вид растений, относящихся к 12 семействам, в том числе филогенетически родственные виды на примере растений рода горечавка. Выявлено 6 видов растений, обладающих выраженным иммуномодулирующим действием. Наиболее перспективной оказалась горечавка желтая (корни и надземная часть).

Б процессе создания препаратов широкого спектра специфического и неспецифического действия разработан научно-методический подход конструирования фитокомпозиции, заключающийся во включении в состав не более 3-6 видов растительного сырья. При этом выявлен синергизм биологической активности составляющих компонентов. При включении в npenapiT 7 и более источников сырья наблюдается подавление биологической активности, йто связано с трудностью подбора оптимальной дозы, способной индуцировать специфическую иммунсмодулирующую активность у каждого компонента üiermpiTa. На основании разработанного подхода созданы 4-х и t'-ги компонентные растительные композиции (КРК), биологическая

активность которых в 2 - 1,5 раза (соответственно) превосходит суммарную активность составных компонентов 4-х и 6-ти КРК.

В процессе экстрагирования биологически активных веществ из многокомпонентной растительной композиции выявлены основные закономерности совместного экстрагирования сырья различного ана мо морфологического строения. Они заключаются в определении природа экстрагента - на основании химических и фармакологических исследований получаемых извлечений, а также методом матема тических расчетов в установлении соотношения между размерами частиц сырья в 4-х и б-ти КРК, что обеспечивает одновременное!! извлечения составных компонентов при их экстрагировании.

Методами хроыагоспекгрофогометрии, ВЬЖХ, атомно-абсорбцж» ной спектроскопии, а также с использованием аминокислотного анг лизагора определено содержание основных -р-пироновых соединен^ микроэлементный и аминокислотный состав в исходном сырье, в суС станциях и готовых лекарственных формах. При этом установлено, что исследуемые объект? содержат и-пироновые соединения (рутш мангиферин), микроэлементы (Ьп, Рв. , Дп , Си ) и аминокислота (фенилаланин, валин, лейцин и др.), положительно влияющие на иммуную систему организма.

На основании данных фотохимических, технологических и мед| ко-биологических исследований подобраны составные компоненты и определено их количественное соотношение в многокомпонентных растительных композициях ("Ачара", "Протектор" и "Кутаиси"),' обеспечивающее их высокую радиопротекторцую активность.

С учетом физико-химических свойств свежего растительного сырья разработаны технологические приемы переработки листьев алоэ древовидного, заключающиеся в ступенчатом воздействии экстрагента с различной полярностью, что обеспечивает наиболее

полное извлечение биологически активных веществ, обладающих защитным действием при лучевом поражении.

Приоритет исследований подтвержден 7 авторскими свидетельствами на изобретения.

ФАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. На основании проведенных исследований * разработана и внедрены:

- параметры стандартизации лекарственного растительного сырья: травы горечавки желтой, травы клевера лугового и корнеплодов красной свеклы (ВФС № 30/94, 23/94, ¿9/94, утверждены МЗ республики Грузия. Справка №2X33/263 от 20.03.94 г.);

- состав и технология таблеток "Гентина" с желудочнораство-римым пленочным покрытием и параметры контроля его качества (й£С № 32/94 и опытно-промышленный регламент (ОЛР), утверздены МЗ республики Грузия. Справка * 20-03/260 от 16.03.94 г.);

- состав и технология таблеток "Гентина" с желудочнорастворимым пленочным покрытием (Авторское свидетельство I367I96, разрешены к медицинское применению решением Фармакологического комитета и!3 республики Грузия. Справка № 20-03/261 от Id.03.94r.);

- технологические параметры производства таблеток "Гентина" с желудочнорастворимым пленочным покрытием (ОЯР на производство таблеток "Гентина" апробирована на ПО "Грузбиофармпрепараты" и принята для промышленного освоения, акт апробации от 17.03.94г.);

- технология сухих экстрактов (субстанций) из 6-ти и 4-х компонентных растительных композиций, а также параметры контроля

„1едико-биодогические исследования проведены на базе медико-генетического научного центра А.»1Н Рй, института иммунологии Министерство здравоохранения и медицинской промышленности Рр и института биологии Бурятского филиала Сибирского отделения АН рг.

их качества (Авторское свидетельство I57I825, I59I224, 1474929. ВФС » 19/94, 22/94 и 0IP утверадены МЗ республики Грузия. Справка » 20-03/263 от 20.03.94 г.);

- технологические параметры производства субстанций из 6-ти и 4-х компонентных растительных композиций, а также параметры контроля их качества (В&С Р 19/94, 22/94 и ОПР на субстанции апробированы на ПО "Грузбнофарыпрепараты" и принята для прошшленного освоения, акт апробации от 01.03.94 г.);

- состав и технология гранул "Имцунофита" и "Тетраиммуно-фита", а также параметры контроля их качества (ШС £ 27/94, 28/94 и <?ПР утверадены МЗ республики Грузия. Справка & 20-03/260 от 18.03.94 г.);

г состав и технология гранул "Имцунофита" и "Тетраиммуно-фита" (Авторское свидетельство 1797894, разрешены к клиническому изучении регенкек Фармакологического комитета МЗ республики Грузия. Справка » 20-03/262 от 20.03.94 г.);

- технологические параметры производства гранул "Иммуно-фита" и "Тетраиммунофига" (OiiP на производство гранул "Имцуно-фита" и "Тетраиммунофита" апробированы на ПО "Грузбиофармпрепараты" и принята для промышленного освоения, акт апробации от 17.03.94 г.);

- состав и технология валеологических средств - "Ачара", "Кутаиси" и "Протектор", а также параметр их контроля (ТУ 03-010-92, 03-008-92, 03-009-92 и ГИ на "Ачара", "Кутаиси" и "Протектор" утверждены МЗ республики Грузия. Справка № 20-03/260 от 18.03.94 г.);

- состав и технология валеологических средств - "Ачара", "Кутаиси" и "Протектор" (разрешены к медицинскому применению решением Фармакологического комитета МЗ республики Грузия.

> •

Справка I? ¿0-03/261 от 18.03.94 г.).

НА ЗАЩИТУ ВЫНОСЯТСЯ:

- научно-методические основы создания и стандартизации фито-экстракционных препаратов имцуномодулирующего действия на базе индивидуальной и многокомпонентной растительной композиции;

- результаты химического исследования исходного сырья, субстанции и готовых лекарственных форм;

- состав и технология получения таблеток "Гентина" с сух;ш экстрактом горечавки г.елгой с келудочнорастворишм пленочным покрытием;

- результаты теоретических и экспериментальных исследований по обоснования составов многокомпонентных композиций и способов получения субстанции и готовых лекарственных форм, обладающих иш^уномодулирующей активность»;

- результаты исследований по разработке технологии получения фиговалеологических средств, обладающих радиопротекторной активностью.

АПРОБАЦИЯ РАБСЯЫ. Основные положения диссертационной работы доложены и обсуждены на республиканских научных конференциях (Каунас,-1965; Улан-Уде, 1987; Бакуриани, 1988; Киев, 1988; Ба-куриаки, 1990; Улан-Уде, 1991; Харьков, 1991; Киев, 1992)< на У съезде фармацевтов России (Ярославль, 1987), на 1У съезде фармацевтов СССР (Казань, 1986).

ПУБЛИКАЦИИ. Основное содержание работы отражено в 7 авторских свидетельствах, I брошюре, 31 статьях и тезисах докладов.

СВЯЗЬ ЗАДАЧ ИССЛЕДОВАНИЯ С ПРОБЛЕМНЫМ ПЛАНОМ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК. Тема исследований связана с планом комплексной программы ликвидации последствий аварии на Чернобыльской АХ.

Диссертационная работа выполнена в соответствии с основным

направлением межведомственного Научного Совета по фармации № 47 АМН.РЪ и планом научно-исследовательской работы Тбилисского государственного медицинского университета (№ государственной регистрации 01890055832).

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ. Диссертация изложена на 302 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 5 глав экспериментальной части, общих выводов, библиографии и приложения. Работа иллюстрирована 71 таблицами и 23 -рисунками. Библиографический указатель включает 371 источников литературыиз них 290 на русском и 81 на других иностранных языках.

В обзоре литературы рассмотрена проблема коррекции иммунного ответа: проанализированы данные литературы о состоянии, изучении и перспективах практического использования имцуноыодулято-ров растительного происхождения и валеологических средств; приведены общие принципы создания и стандартизации фитозкстракцион-ныхпрепаратов на основе многокомпонентной растительной композиции; обобщены данные литературы о современном состоянии технологии производства гранул и таблеток.

Во второй главе приведены результаты поиска перспективных источников имцуномодулицующих веществ среди некоторых представителей флоры СНГ. Дана оценка иммунопотенцирующей активности экстрактов в зависимости от домминирующей группы биологически активных веществ. Приведены результаты иммуностимулирующего действия природных индивидуальных соединений. Изложены материалы изучения влияния ряда технологических факторов (продолжительность экстракции, полярность эхстрагента, его концентрация и температура, соотношение к сырью) на эффективность поиска перспективных источников иммуномодулирующих веществ.

Третья глава посвящена фитохимическому изучению исследуемых видов на содержание биологически активных веществ и их стандартизацию.

В четвертой главе изложены результаты исследований по разработке состава и технологии таблеток Тентина", выбору пленкообразующего состава и режимов покрытия таблеток защитной оболочкой, фармацевтическому и биофармацевтическому анализу покрытых таблеток "Гентина''.

пятая глава содержит результаты исследований по разработке технологии получения сухих экстрактов из многокомпонентных растительных композиций с использованием математического планирования эксперимента. Представлены результаты по изготовлению гранул "Имцунофита" и "Тетраиммунофита" и их химического и биофармацевтического анализа.

Глава шестая посвящена созданию фитовалеологических средств, обладающих радиопротекторной активностью.

СОДЕШНИЕ РАБОТЫ ОБЬЕКШ И МЬТОда ИССЛЕДОВАНИЯ

Объектами исследования иыыуномодупирующих свойств являлись дикорастущие и культивируете в СНГ растения, известные в научной и народной медицине. Всего изучено 21 видов растений, относящихся к 12 семействам.

Использованы вспомогательные вещества, растворители и реактивы, отвечающие требованиям соответствующей нормативной документации (ВД).

Для разработки научно-методических основ создания и стандартизации фитоэкстракционных препаратов иммуномодулирующего действия изучены в условиях ¡n vivo иммуномодулирующие

свойства около 40 различных экстрактов, комплексов биологически активных веществ и индивидуальных соединений.

Аминокислотный состав определяли на аминокислотном анализаторе "Т-339" (ЧССР). Исследование минерального состава проводили методом атомно-абсорбционной спектрометрии на ААБ-З (Германия), 305 В (США).

Анализ -р-пироновых соединений проводили методом высокоэффективной жидкостной хроматографии на жидкостном хроматографе "ШйЪегь РР11'(модель 730, США). Использовали ультрафиолетовый спектрофотометр с переменной длиной волны и готовые хроматогра-фические колонки в »Ео&оаВ С^.

Определение высших жирных кислот осуществляли методом газожидкостной хроматографии (ГЖХ) на хроматографе " Уаиап-А1ос1е.£" 3700 (США).

Прочность таблеток определяли на приборе "Ег«/ек.а" модель ТВГ, истираемость - на приборе " Е1»ек.й" модель ТАР, время распадаемости таблеток - на приборе "Ег\»ек.й" модель ХТЗ.

Скорость высвобождения действуюидех веществ из гранул и таблеток изучали на приборе для определения скорости растворения действующих веществ из таблеток и капсул (тип "Вращающаяся корзинка", ТУ 67-7-^98-78).

Ряда параметров, представленных в работе (метрологические характеристики, материальный баланс, математические расчеты соотношения между размерами частиц различного сырья), рассчитывали на программируемом микрокалькуляторе "электроника Ж-56".

ОЩИЬ ¡РйНЦИШ СОЗДАНИИ И СГАНДАРШАЦИИ И.ШНО-ЩЦУШОРОБ РАСТИТЕЛЬНОГО 11Р0ИСХ0лДЬШл

Для разработки научно-методической основы создания л стан-

дартизации фитоэкстракционных препаратов иммуномодулирующего действия проведен поиск перспективных источников их получения среди некоторых представителей флоры СНГ.

Исследован 21 вид растений, в том числе филогенетически родственные виды на примере растений рада горечавки. Выявлено 6 видов растений, обладающих выраженным иммуномодулирующим действием. Наиболее перспективной оказалась горечавка желтая (корни и надземная часть).

Результаты скринингового опыта на биологической активности лекарственных растений не позволяют выбрать источники сырья (кроме горечавки желтой) получения препаратов высокой ищуномо-дулирующей активностью. В связи с этим предстояло разработать многокомпонентные композиции лекарственных растений выраженным специфическим и неспецифическим действием.

Проблема рационального сочетания растений со специфической и- неспецифической активностью является одной из важнейших при конструировании фитокомпозиций. Целесообразным считается подход, основанные на включении в композиции растений с различными механизмами имцуномодулирующего действия.

И использованием данных, полученных при скрининговом опыте растительного сырья, а также, учитывая их химический состав и значения биологически активных веществ (БАВ) в корреции иммунного ответа, составлено 15 вариантов композиций (табл. I).

Критерием выбора оптимального состава исходной многокомпонентной растительной композиции являлась максимальная фармакологическая активность.

Полученные данные (табл. I) показывают, что достоверно стимулировали иммунную реакцию шшей растительные композиции Ш, УШ и IX. ¡Сраженной иммунодепрессивной активностью характе-

Состав исследуемых растительных композиций

Таблица I п =' 5

№

ком-по-зи-ций

Наименование и количество сырья, г

I

■о а

Я) ш га

Л

о к « о

я> о

И I

«о ^

к ю л о

НПО и<1Ь я 5.о ={ с! а;

В

р.

о о и и <о се л

8.6

н с

I

0) о « с-> о> о

И £0

« о

а

о

в*а сод вхВ жом Ля <В Д Ф о ат £ а а ж о

А

ж. .

ю <6 IX Ю

¿цо

§Ё?

л « ж л

о о

3 х а

ев \о

61

а 3

•I

я.

в I кв

и и «я я

1=8 ИЙ

со о

5й

Ж (в

I

о я с к

55

и 8,

(0 ф с

«в

т о

в*

» =5 4 Н8

0) о

н

о

I

<я с

а

е

со п га

^а

Среднее геометрическое число антителеобразу-ющих к леток (АО«) б селезенке .и доверительные интервалы при Р< 0,05 (число животных в каж-.ДРЯ.гРУРпе 9) .

50 мкг

10,0 10,0 20,0 10,0

20,0 20,0 20,0

1 10,0 20,0 10,0 20,0

Л 10,0 10,0 10,0 10,0 10,0 10,и 10,0 10,0

ш 30,0 20,0 ¿0,0

1У 10,0 10,0 20,0 10,0 10,0 10,0 20,0 10,0

У 40,0 ¿0,0 ' 20,0

У1 30,0 ¿0,0 30,0 20,0

УЛ 30,0 " 30,0

Уы 30,0 30,0 ' ■ ' 20,0

IX 30,0 10,0 10,0 10,0 30,0 10,0 .

X 30,0 30,0 20,0

XI 40,0 ¿0,0 40,0 ХЛ ¿0,0 ¿0,0 ¿0,0 ¿0,0 ¿0,0

XII ¿0,0 ¿0,0 30,0 10,0 10,0 Го, о

XIV 10,0 ¿0,0 10,0 10,0 10,0 10,0/ 10,0 10,0

XV 20,0 10,0 10,0 20,0 10,0. • ¿0,0

Примечание: * Р < 0,05 по сравнению с контролем.

10,0 20,0

¿0,0

20,0

10,0 10,0

Контроль 2088(1095+3978)

2073(1140+3775)

2351(780+7150)

8373(3183+22025)*

2160(1300+3052)

4524(712+8452)

718(840+2050)*

4213(1109+8722)

4844(2354+5420)*

6372(2313+10884)*

920(880+0458)*

4009(1710+4991)*

2172(1351+3518)

2000(1109+3818)

3265(1060+3775)

3418(1972+5730)

ризуется У1 композиция. Тенденцией к имцунодепрессивной активности обладала X композиция (Р * 0,05).

Выявлено, что растительные композиции, содержащие 7 и более составных компонентов, не проявляли специфическую иымуномодули-руюцуго активность (табл. 1;И,1У,Х1У и ХУ). Вместе с тем следует отметить, что они содержат компоненты 4-х и 6-ти КРК, которые обладает иммуномодулируицей активность!).

Для выяснения данного вопроса к дополнительному исследованию додвергались различные дозы растительных композиций: П, 1У, Х1У и ХУ. Результаты исследования отражены, на рисунке I.

Как видно из рис. I, растительные композиции, содержащие 7 и более источников сырья в различны* дозах,- не дают достоверно отличительных результатов от контрольного опыта.

Полученные данные (рис. I) позволяют предполагать, что иммуномодуляторы на основе многокомпонентных растительных композиций должны конструироваться не более 3-6 видов растительного сырья. При этом наблюдается синергизм биологической активности составных компонентов. При включении в препарат 7 и более источников сырья, трудно обеспечить дозы, способные индуцировать специфическую имцуномодулирующую активность к каждому компоненту композиций.

Па основании скринингового опыта и изучения растительных композиций (табл. I) для дальнейшего фито-химического и медико-биологического исследования подобраны горечавка желтая (корни и надземная часть); 4-х компонентная растительная композиция, состава

трава зверобоя 30,0 частей плода шиповника 20,0 " Корнеплоды

Результата влияния на АОК растительных-композиций, содержащих 7 и более составных компонентов, . в зависимости от дозы препарата

4000 3000 2000 1000

.7

10

10

I. Контроль в дозе 25 мкг-на мышь

2. Контроль п 75 мкг н

3. 7-КРК п 25 МКГ п

4. 7-КРК 41 75 ыкг !1

5, 8-КРК П 25 мкг п

6. 8-КРК И 75 мкг и

7. 9-КРК <1 25 мкг 1)

8. 9-КРК « 75 мкг »»

9. Ю-КИС г» 25 мкг м

). 10-КЕК 11 75 мкг »1

Рис. I

красной свеклы 30,0 частей

листья сенны 20,0 " и 6-ти компонентная растительная композиция следующего состава:

листья алоэ древовидного 30,0 частей

трава горца птичьего 10,0 "

трава клевера лугового 10,0 "

листья вахты трехлистной 10,0 "

листья морской капусты 10,0 "

кора дуба обыкновенного 30,0 "

Решая задачу разработки научно-методических основ создания и стандартизации имьуномодулирующих средств растительного происхождения изучено влияние на артителообрвдующае клетки фракции флавоноидов, полисахаридов, витаминов, дубильных веществ, микроэлементов, антраценпроизводных и органических кислот, выделенных из 4-х и 6-ти компонентных растительных композиций .

На основании полученных результатов, природные■комплексы биологически активных веществ по влиянию на первичный Иммунный ответ можно представить следующим образом: флавоноиды —» дубильные вещества —► полисахариды —• минеральные вещества —► витамины. Что касается органических кислот и Антраценпроизводных в исследуемой дозе, достоверное отличие от контрольного опыта-не получили.-

С целью установления роли индивидуальных соединений, входящих в доминирующем количестве в 4-х и 6-ти КРК и в надземной Звсти горечавки желтой, исследовано влияние алоина, галловой кислоты, кверцетина, рутина, гиперазида и мангиферина на АОК.

Установлено, что рутин, мангиферин и галловая кислота стимулируют число АОК.

Важность рациональной схемы направленного поиска имцуно-модулирупцих средств среди природных источников побудила нас исследовать' влияние основных технологических факторов (экстра-гент, его концентрация, температура, соотношение к сырью, продолжительность экстракции) на АОК получаемых экстрактов.

Для выяснения данного вопроса в качестве объекта исследования подобраны те растения, экстракты которых обладает выраженной стицулируюцей или депрессивной способностью на АОК. Это: трава зверобоя, хора дуба; трава горечавки желтой, листья алоэ древовидного, листья морской капусты, Экстракцию сырья произвол дили экстрагентамн различной полярности:-вода, этиловый спирт 96$, 40/£, этилацетат, хлороформ. Лри этом время экстракции составляло 2 часа, соотношение сырья и зкетрагента - 1:10, температура экстракции в случае экстрагирования водой - 20°С и 80°С, а при остальных случаях - при температуре кипения экстр-агента.

Сухие экстракты исследовали на влияние АОК в дозе 150 ыкг/иышь.

Зависимость извлечения веществ, оказывающих влияние на АОК от полярности растворителя, показана на секторной диаграмме (рис. 2), построенной по усредненной активности экстрактов 5 видов растений.

Из диаграммы (рис. 2) видно, что носители, имеющие способность действовать на количество иммунных АОК исследуемых объектов, извлекаются преимущественно водой (нагретой до 80°С). По данному критерию, изучаеше экстрагенгы можно расположить в следующей последовательности: вода 80°С > 4056 этиловый спирт > 70% этиловый спирт > 96% этиловый спирт > этилацетат > хлороформ.

Влияние экстрактов на АОК в зависимости от используемого экстрагента

А - вода 20°С Д - 90% этиловый спирт

Б - вода 80°С С - этилацетат

В - 40$ этиловый спирт Е - хлороформ

Г - 70% этиловый спирт

-Р и с. 2

На примере надземной части горечавки желтой установлены и другие технологические факторы: соотношение сырья и экстрагента 1:10, время экстракции - 2 часа, условия упарки экстракта -под вакуумом, а сушки методом распыления или лиофильной.

ЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАСШЕЛЬНОГО СЫРЬЯ

Анализ данных литературы, а также результаты собственных исследований показали, что иммуномодулирующий эффект 4-х и 6-тл компонентных растительных композиций, а также травы горечавки желтой обусловлен наличием в них комплекса биологически активных веществ: V -пироновых соединений, полисахаридов, витаминов и микроэлментов. В этом комплексе преобладающей активностью обладают флавонодные соединения. £ связи с этим оценку качества 4-х и 6-ти компонентных растительных композиций проводили по содержанию суммы флавоноидов.

Разработана методика хроматоспектрофотометрического определения суммы флавоноидов в 4-х и 6-ти компонентных растительных композициях. При этом были изучены следующие стадии: условия экстракции суммы флавоноидов из сырья, отделение от сопутствующих соединений с помощью хроматографии на колонке с полиамидом элюирование суммы флавоноидов с сорбента и спектрофотометрирова ние элюатов. Расчет содержания суммы флавоноидов в сырье проводили е пересчете на рутин-стандарг, так как в УФ-спектрах максимумы поглощения рутина и спиртового элюата 4-х-и 6-ти компонентных растительных композиций с хлоридом алюминия при длине ►^олны 407 нм совпадают.

Относительная ошибка методик количественного определения сумш флавоноидов в 4-х и 6-ти компонентных растительных композициях в пересчете на рутин-стандарт не превышает ± 4,42% и 6,86% соответственно.

Корнеплоды красной свеклы являются составной частью 4-х компонентной растительной композиции. На сырье до сегодняшнего

дня не разработана нормативная документация. В связи с этим проведено фармакогностическое исследование корнеплодов красной свеклы. Установлены диагностические признаки сырья.

11о данным литературы определенную роль в коррекции иммунного ответа играют тритерпеновые сапонины. Данное обстоятельство позволяет предложить в качестве доброкачественного сырья содержание в нем тритерпеновых сапонинов.

Для количественного определения тритерпеновых сапонинов в корнеплодах красной свеклы использован метод, основанный на реакции с концентрированной серной кислотой и последующим измерением оптической плотности раствора, на фотоэлектроколориметре. В качестве стандартного образца применена олеаноловая кислота.

Разработке методики количественной оценки тритерпеновых сапонинов в корнеплодах красной свеклы предшествовало проведение исследований по подбору условий экстракции и очистке целевого продукта от сопутствующих веществ.

Относительная ошибка методики количественного определения суммы тритерпеновых сапонинов в корнеплодах красной свеклы не превышает + Ь,б<3%.

Результаты фармакогностических исследований сырья включены в проект В^С на корнеплоды красной свеклы, который утвержден ЛЗ Республики Грузия.

Трава клевера лугового входит в состав разработанной 6-ти компонентной растительной композиции. Несмотря на ее широкое использование, сырье до настоящего времени остается неофициальным.

В коррекции иммунного ответа решающую роль играют флаво-ноидные соединения. В связи с ятим в качестве доброкачественности сырья принято содержание суммы флавоноидных соединений.

Для количественного определения суша* флавоноидов в траве клевера лугового разработана методика, основанная на образовании окрашенных комплексов с хлоридом алюминия с последующим спектрофотометра ро вашем. Расчет содержания сумш флавоноидов вели в

пересчете на кверцетин-стандарт, т.к. в УФ-спектрах максимумы

s.

поглощения комплексных соединений кверцетина и гидролизата суммы флавоноидов с хлоридом алюминия при 430 нм совпадают.

Относительная ошибка методики при единичном определении не превышает + 5,42£.

Установлены также диагностические признаки и другие показатели качества, которые включены в проект ВДС на траву клевера лугового.

ВЕС на траву клевера дугового ,утверадён МЗ Республики Грузия.

Проведено фаршкогностическое исследование травы горечавки желтой. Подученные результаты включены в проект BSC на сырье, который утверзден ЫЗ Республики Грузия;

Методом высокоэффективной жидкостной хроматографии определено содержание основных -р-пироновых соединений в траве горе->чавки желтой, 4-х и 6-ти компонентных растительных композициях.

Проведенные исследования по идентификации и-пироновызс соединений позволили установить наличие в тра&з горечавки желтой: мангиферина, изоориентина и гентиозида; в 4-х КРК: рутина и 3-глюкозид кемпферола; в б-ти КРК: рутина и гиперозида.

Доминирующими компонентами являются ыангиферин (в траве горечавки желтой), а для 4-х и 6-ти КРК - рутин. Фармаколлоги-ческие исследования показали умеренно выраженную иммуностимулирующую активность мангиферина и рутина. В связи с этим« определяли их количественное содержание в исследуемых объектах.

Установлено, что содержание: мангиферина в траве горечавки желтой, рутина - в 4-х и 6-ти КРК составляет - 0,3055, 0,11^ и 0,05% соответственно.

Аминокислоты в комплексе с микроэлементами могут быть использованы для восстановления иммунной системы организма.

С использованием, аминокислотного анализатора изучен аминокислотный состав некоторых видов растений рода горечавки, а также 4-х и б-ти КРК.

Суммарное содержание свободных аминокислот, обладающих положительным фармакологическим действием на иммунную систему, составляет: в 4-х и 6-ти КРК 12,986 и 12,339 мг!£ соответственно: в траве г.семираздельной - 31,2'мг%, г.крестовидной - 15,7 мг^, г.кавказской - 39,9^мг$, г.желтой - 17,9 иг%.

Изучено также содержание микроэлементов в некоторых представителях растений рода горечавки, 4-х и б-ти КРК.

Для определения минерального состава применяли эмиссионную спектрографию и атомно-абсорбционцую спектроскопию.

Проведенные исследования позволили установить, что 4-х и 6-ти КРК, а также представители растений рода горечавки могут служить источниками биологически доступных микроэлементов (цинка, марганца, железа и меди) при комплексной терапии заболеваний, вызванных нарушением иммунной системы организма.

' ТЕХНОЛОГИЯ ПОЛУЧЕНИИ ТАБЛЕТОК ТЕНТИНА"

Из надземной части горечавки желтой получено сухой экстракт. На основе фармакологических исследований установлено, что он обладает иммуностимулирующей, противовоспалительной и противоязвенной активностью.

Несмотря на широкий спектр действия экстракта сухого из

надземной части горечавки желтой, он неудобен.при дозировке, применении и транспортировке. Исходя из этого, необходимо создание рациональной лекарственной формы.

Целью этого этапа работы явилась разработка оптимальной технологии получения твердой лекарственной формы в виде таблеток из экстракта сухого надземной части горечавки желтой.

Учитывая физико-химические свойства экстракта сухого горечавки желтой, его гигроскопичность, гермолабвдьносгь, необходимо защитить таблетки от влияния факторов внешней среды. Для таблеток, содержащих гигроскопические вещества, целесообразно использовать пленочное покрытие.

Для создания состава и разработки технологии таблеток изучены физико-химические и технологические свойства 5 серий экстракта сухого из надземной части горечавки желтой.

Установлено, что технологические свойства сухого экстракта удовлетворяют не всем требованиям, предъявляемым к таблеточной массе, обладает низкой сыпучестью (1,8 г/с).

С целью улучшения технологических свойств к сухому экстракту из'-надземной части горечавки желтой добавляли .вспомогательные вещества и составили несколько вариантов таблеток под названием "Гентин" (табл. 2). На основе фармакологических исследований установлено, что терапевтическая доза субстанции равна 0;I г. Средняя масса таблеток составляет 0,2 г.

Основным критерием выбора оптимальной прописи явилось минимальное время распадаемости таблеток и оптимальное значение механической прочности.Изготовление таблеток осуществляли методом прямого прессования и влажной грануляции.При этом изучали также влияние гранулирующих агентов,давления прессования и условия сушки гранулята на показатели качества таблеток. Показатели каче-

ства таблеток ядер Тентина", изготовленных по различным прописям и способам представлены в таблице 3.

С технологической и биофармацевтической точек зрения оптимальным составом можно считать пропись У (табл. 3) - таблетки "Гентина" следующего состава:

V

Ькстракта горечавки желтой сухого - 0,1 г Сахара молочного - 0,067 г

Крахмала кукурузного - 0,030 г

Аэросила А-ЗсЗО - 0,001 г

Кальция стеарата - 0,002 г

Показано, что увеличение усилий прессования приводит к снижению растворения таблеток ядер "Гентина". Оптимальным является 100-150 й!Па.

Но данным фармакологических и биофармацевтических исследований, всасывание основных действующих веществ из таблеток "Гентина" начинается в желудке.

В связи с этим разработана технология покрытия таблеток ядра "Гентина" с желудочнорастворимой пленкой в установке кипящего слоя.

С целью покрытия таблеток ядра "Гентина" полимерной пленкой в установке псевдоожижженного слоя были изучены пленкообра-зовагели, пигменты и растворители. '

При совокупности свойств покрытых таблеток (внешний вид, растворимость, стабильность и др.) для покрытия таблеток "Ген- , тина" предложен следующий пленкообразующий состав:

Состав оболочки на одну таблетку

1. ;Летилцеллюлозы - 16

2. Титана двуокиси

3. Тропеолин-0

- 0,00615 г

- 0,0001242 г

- 0,000604 г

Состав иссяедуешх таблетируедах масс "Гентина" в граммах в расчете на I таблетку (содержание субстанции во всех прописях 0,1 г)

Таблица 2

& прописи Крахмал кукурузный / Крахмал картофельный Лактоза Аэросил А-380 Кальция стеарат Тальк

I 0,010 — ' 0,089 - 0,001 -

п - 0,010 0,089 - 0,001 -

Ш 0,02 0,078 - - 0,002

1У о,оз \ - 0,068 0,002 -

У 0,03 - .0,067 0,001 0,002 г-

У1 - 0,03 0,067 0,001 0,002 -

УП 0,03 - 0,067 0,001 - 0,002

УШ 0,04 - 0,054 0,002 - 0,004

IX - 0,04 0,054 0,002 - 0,004

X - 0,04 0,058 0,002 - -

XI- - 0,04 0,054 0,002 - 0,004

Показатели качества таблеток ядер "Гентина", приготовленных по различным прописям и способам

Таблица 3

0 прописи Внешний вид Содержание суммы V -пироновых соединений (мг) Распадае-мость (С) Прочность на Кол-во и-пироновых

излом (Н) истирание, % • иисДппспИИ^ высвиии* давшихся из таблеток за 120 мин. (%) (РН = 6.4)'

I Таблетки коричневого цвета 1,00+0,03 70+2 20,0+2,5 95,72 75,25+4,44

л 1,05+0,05 360+15 43,0+2,1 98,95 68,30+3,89

Ш 1,10+0,03 350+5 . 42,0+3,5 98,50 70,05+4,35

1У 1,12+0,05 340+12 41,0+4,3 98,38 85,90+4,20

У _||_ 1,оа+о,об 330+7 40,0+1,8 98,14 92,60+4,57

У1 1,09+0,07 355+8 42,0+2,2 99,18 80,9+5,05

УП _ 1,10+0,04 425+10 55,0+5,2 99,27 82,2+5,76

УШ 1,15+0,10 455+6 60,'0+4,1 99,40 73,5+5,85

IX 1,08+0,15 510+5 65,0+2,2 99,44 69.2+4.8С

X 1,03+0,06 460+3 50,0+3,0 99,32 65,5+3,95

XI 1,07+0,05 486+8 53,0+4,0 99,43 63,2+5,06

3

Изучен технологический процесс нанесения пленочного покрытия таблеток "Гентина" в условиях псевдоожиженного слоя. В результате разработана технологическая схема получения таблеток с желудочнорастворимым покрытием (рис. 3).

Технологическая схема производства таблеток "Гентина" с желудочнорастворимым покрытием

ВР 1.1. Просеивание сырья 1

ВР 1.2. Подготовка посуды

ВР 1.3. Приготовление бес-одетного раствора

ВР 1.4. Приготовление суспензии двуокиси титана

ВР 1.5. Приготовление спиртового раствора красителя

ВР 1.6. Приготовление окрашенного раствора айд-16

та 1.1. Смешивание и увлажнение порошков

га 1.2. Гранулирование влажной массы

ТП 1.3. Сушка влажной массы

та 1.4. Оухое гранулирование

ТП 1.5. Опудривание гранул Г

ТП 2.1. Таблетирование

ТП 2.2. Обеспыливание таблеток

ВР I.

Т11 I.

г ТЛ 2.

Вспомогательные работы

Потери механические

Лолучение таблеточной массы

Таблетирова-ние_

Влага

Потери механические

Потери меха-нкческие

Таблетки' не-конденционные

продолжение рис. I

Рис". 3

Исследована кинетика высвобождения суммы р-пироновых соединений из таблеток "Гентина", покрытых оболочкой. Определение скорости высвобождения проводили в два этапа согласно требованиям Фармакопеи СШАХХ11. В результате проведенных исследований установлено, что 90% действующих веществ высвобождаются в течение 160 мин.

Результаты изучения доброкачественности таблеток "Гентина" при хранении показали его стабильность в течение 4 лет.

Разработана ЦЦ [¡а>С и опытно-промышснный регламент) на таблетки "Гентина, которые утверждены Министерством здравоохранения Республики Грузия.

На ■Ю "Грузбиофармиропараты" апробирована и принята для томытленного освоения технология производства таблеток "Ген-<:инп".

Роишшем ¿з|>мак'.)лг)'",1Мрпчпро клм;:т»'та Министерства здраво-

охранения республики Грузия таблетки "Гентина" разрешены к медицинскому применению.

РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ ГРАНУЛ ' . "ТЕТРАШМУНОФИТА" И "МаШ/НОША"

Исходным сырьем для получения гранул "Тетраиммунофита" является 4-х КРК, источником получения гранул "Ишунофита" - 6-ти КРК.

В связи с теы, что 4-х и 6-ти КРК содержат комплекс биологически активных веществ (флавоноиды, полисахариды, антрацен-производные, витамины, дубильные вещества, микроэлементы, органические кислоты и др.) предстояло разработать рациональную те> нологию получения препаратов, которая обеспечивала бы полноценный переход действующих веществ из растительного сырья.

Для решения поет-авлешгсй цели в нашу задачу входило выясш ние возможности технологической переработки растительного сырь;

При экстрагировании многокомпонентной' растительной компоэ! ции нужно создать такие условия, при которых истощение сырья с различным морфолого-анатомическим строением наступало бы одновременно. Единственным фактором, который позволяет решить проб лему, будет дисперсность частиц.

В связи с этим представляло интерес разработать методику и способ расчета соотношения между размерами частиц сырья с различным анатомо-морфологическим строением. За основу принят способ расчета предложенный Кравченко Н.В. и др.

Фигохимическими и фармакологическими исследованиями сухи? экстракто», полученных водой и этиловым спиртом различной концентрации установлено, что оптимальным зкстрагентом является: вода для 4-х КРК и 40% этиловый спирт дляб-ти КРК.

Изучали динамику экстракции составных компонентов 4-х и 6-ти КРК размером частиц I, 3, 5 и 7 мм. Экстрагирование проводили на кипящей водяной бане с обратным холодильником. Соотношение меяду сырьем и экстрагентоы во всех опытах составляло 1:10. Экстракцию сырья проводили в течение 2-х часов. Каждое извлечение анализировали на содержание в нем сухих веществ.

Результаты опытов в нарастающем итоге, изображенные графически (рис. 4) показывают, что динамика экстракции составшх компонентов 4-х КРК с одинаковым и предложенным ЦЦ размером частиц имеет существенное различие.

Разработанный способ расчета соотношения меяду размерами частиц различного сырья для одновременного истощения при его совместном экстрагировании основан на том, что количество извлеченных веществ 5 из различного сырья будет являться функцией диаметра частиц с1 и экспозиции экстрагировании Т , т.е. 5 = |(с1т] . Зависимость 5 от (1 и "С установили по данным эксперимента способом средних.

Проведя ряд иатематических вычислений с использованием экспериментальных данных, получали уравнения экстракции, для составных компонентов 4-х КРК:

для листьев сенны 5С= 7,762 • ¿с"0,07 • Хс°>590 ' для травы зверобоя &3= 7,413 -¿з"0'06 • 13 для плодов шиповника 5,495 для корнеплодов

красной свеклы ¿¡с6= 4,467 -с^"0,32 ■ 1с60'570

•При совместном экстрагировании составшх компонентов 4-х КРК задавали размер частиц листьев сенны - с1с = 1 мм и время экстракции 2 часа.

Зависимость количества извлеченных веществ (5 ) от времени экстракции ( "С ) для сырья с различным диаметром частиц I с! )

•100

80

СО

40

30

60

90

120

Т (мин!

1-4 - частицы листьев сенны; 1! - соответственно 1,3,5 и 7 м! Ь-3 - частицы травы зверобоя; -"-

9-12 - частицы плодов шиповника; -"-

13—1о - частицу корнеплодов

красной свеклы;" • -"-

Рис. 4

3J

Приравняв уравнения, т.е. Sj = SL ; SU1=5C; Ste = Sc и проведя преобразования, получали окончательный вид уравнения:

dj-Ü'ü0 = 1,047 • J'0-1 ■ dt~u'Ü7

= 1,413 • ¿°>üt • dc"ü'ü7 .

полученные уравнения позволяют корректировать размер частиц при совместном экстрагировании составных компонентов 4-х КРК.

Очевидно, что для 6-ти КРК справедливыми будут те же условия совместной экстракади, что и для 4-х КРК.

проведя расчеты, аналогичные расчетам по динамике экстракции 4-х КРК, получили уравнения экстракции для б-ти КРК, которые позволяют корректировать размер частиц при совместном экстрагировании составных компонентов 6-ти КРК (в данном случае задавали размер частиц листьев морской капусты - dM= 7 мм и время экстракции - 2 часа).

Для листьев алоэ древовидного Sa= 16,596 • dj0,004

Для листьев морской капусты = 16,216 • •Тц0'^^

Для листьев вахты трехлистной S8 = 15,436 • dB~0'495 • ts

Для травы клевера лугового Ss= 11,749 ■ d"0'00^5-^ц0,¿7б6

Для травы горца птичьего Sr= 10,715 - ¿.Г0'1^5 - Тг

Для корт дуба обыкновенного SA = 10,471 •¿д0,19 -Хд0'^63

Проведенные эксперименты подтверждают возможность совместного экстрагирования различного вида сырья и необходимость корректирования диаметров частиц составных компонентов мкогокоадонёнт-ной растительной композиции.

Найдено, что при совместном экстрагировании оптимальными являются 'размеры частиц для 4-х КРК: травы зверобоя - 1,4 мм,

листьев сенны - 2,0 мм, плодов шиповника - 1,1 мм, корнеплодов красной свеклы - 1,0 мм; для 6-ти КРК: травы горца птичьего -1,6 мм, травы клевера лугового - 1,66 им, листьев вахты трехлистной -£'1,7 мм, листьев морской капусты - 1,8 мм, листьев алоэ древовидного - 2,2 мм, коры дуба обыкновенного - 1,0 мм.

Исследовано такие влияние других факторов на процесс экстрагирования биологически активных веществ из 4-х и 6-ти КРК. В результате установлено - для 4-х и 6-ти КРК соотношение сырья и экстрагента 1:10, температура экстракции - 85°С, ,70°С, продолжительность - 165 мин., 210 мин. - соответственно.

Экспериментально подобраны также оптимальные условия концентрирования, очистки и сушки экстракта из 4-х и 6-ти КРК.

Оптимальные параметры процесса экстрагирования были положены в основу первой серии балансовых загрузок, на основании которой была разработана технологическая схема получения сухого.

I

экстракта из 4-х и 6-ти КРК -(рис. 5).

Сухой экстракт из 4-х и 6-ти КРК представляет собой мелкодисперсные порошки. Небольшая насыпная масса и сыпучесть порошка создают затруднения при фасовке и дозировании.. В связи с' этим возникла необходимость создания гранулированной' лекарственной формы.

Изучена возможность изготовления гранул из сухих экстрактов 4-х и 6-ти КРК. На основании экспериментальных данных в качестве связующего средства подобрана дистиллированная вода, а в качестве вспомогательных веществ - сахар молочный и крахмал картофельный.

В результате проведенных исследований разработана технологическая схема изготовления гранул из сухого экстракта 4-х КРК под названием гранулы "Тетраиммунофита" и из сухого* экс?-

эакта 6-ти КРК Иод названием гранулы "Иммунофита" (рис. 6).

Технологическая схема производства сухого экстракта из 4-х и 6-ти компонентной растительной композиции

Рис. 5

Основные технологические показатели гранул "Тетраиммуно-1та" и "Иммунойита" представлены в табл. 4.

Исследовано растворение действующих веществ из гранул 'етраиммунофита" и "Иммунофита" в опытах I п \fitto на приборе (раздающаяся корзинка".

Установлено, что растворение действующих веществ из гранул етраиммунофита" происходит через 1сЗ мин., а из гранул "Иммуно-та" - 12 мин. При этом в растворяющую среду переходят не менее

Технологическая схема изготовления гранул "Тетраиммунофита" и "ймцунофита"

'ВР 1.1

ВР

Просеивание сырья, вспомогательных

[—(ВР I. | Подготовка сырья

ВР 1.2. Приготовление Увлажнителя

ТП 1.1. Смешивание и увлажнение

та 1.2. Влажное гранулирование

ТП 1.3 Супка гранулята

ТП 1.4. Сухое гранулирование

ТП 1.5. Просеивание гранул

Подготовка тары

ТД I. Изготовление

гранул

г Влага

Потери механические

Некондиционные гранулы и пыль, используемые для регенерации

Т11

2. Фасовка гранул]-цПотери

ТП Фасовка

2.1.

Рис. б

97,16% и 98,21% сумш флавоноидов, соответственно.

С использованием современных физико-химических методов анализа - хроматоспектрофотомегрии, ВЭ2К, атомно-абсорбционной спектроскопии,с использованием аминокислотного анализатора исследован химический состав сухих экстрактов из 4-х и 6-ти КРК, а также гранул "Тетраимцунофита" и "Иммунофита".

Установлено, что технология получения сухих экстрактов из 4-х и 6-ти КРК, а также изготовление гранул "Тетраиммунофита"

Основные показатели качества гранул "Тетраиммунофита" и "Иммунофита"

Таблица 4

* п.яж Гранулометрический состав Сипу- Объемная Распа-

сек- -— честь масса в дае-

ции миоть ^ з мм мм -2+1 мм -1+0,5 мм -0,5+0,2 мм -0,2 мм в г/сек г/СК)з мость

_ _________ , __________сек I

Гранулы "Тетраиммунофита"

I 3,52 0,95 32,04 30,04 25,58 9,01 1,78 10,00 0,65 248

2 4,08 1,22 34,50 32,10* 26,15 5,00 1,03 10,55 0,73 239

3 4,42 0,80 30,63 35,48 24,75 7,18 1,16 10,95 0,88 276

4 4, ¿4 1,25 33,29 29,77 ¿¿8,44 6,10 1,15 9,68 0,70 235

5 4,15 1,10 36,18 34,92 16,68 9,65 1,47 9,46 0,68 280

Гранулы "Иммунофита"

I 5,82. 1,20 30,79 31,27 26,06 8,64 2,04 8,46 0,48 ¿60

■г 5,44 1,10 33,80 34,06 22,63 6,71 1,60 7,69 0,46 240

3 5,76 0,20 26,80 35,20 24,60 11,30 1,90 8,33 0,50 255

4 5,68 0,80 30,60 35,73 23,40 7,97 1,50 7,14 0,45 240

5 5,57 1,24 37,87 34,25 Ы,48 14,01 0,19 7,85 0,47 235

и "Иммунофита" обеспечивает полноценный переход из исходного сырья флавоноидов, аминокислот, микроэлементов, положительно влияющих на иммунную систему организма.

Изучены технологические и физико-химические свойства сухи: экстрактов из 4-х и б^ти HPK, а также гранул "Тетраимцунофита" и "Иммунофита". Установлены основные показатели их качества. Результаты исследований доброкачественности субстанций и препаратов при хранении показали их стабильность в течение 1,5 иЗ-з лет соответственно.

Разработаны öfiC и опытно-прошшленный реглмент на сухие экстракты иэ 4-х и 6-ти КРК, а также на гранулы "Тетраиммунофи-та" и "Имцунофита". ЦЦ утверждены Министерством здравоохраненм республики Груаия.

Гранулы "Тетраиммунофита" и "Иммунофита" в настоящее вреш проводят клиническую апробацию. Получены предварительные положительные результаты.

На ПО "Грузбиофармпрепараты" проведена апробация опытно-промышленных регламентов на производство субстанций из'4-x и 6-ти КРК, а также на гранулы "Тетраиммунофита" и "Иммунофита". В настоящее время технология производства указанных субстанций и препаратов принята для промышленного освоения.

I

СОЗДАНИЕ ФИТОВАДЕОДОГИЧЕСКИХ СРЕДСТВ "На основе имеющихся сведений о лекарственных растениях,

у

результатов фитохимического и фармакологического исследований, проведенных в предварительных экспериментах, разработаны растительные композиции валеологических средств, потенциально обладающих радиопротекторной активностью. Основанием для выбора указанных видов растительного сырья и их соотношений в смеси

39 .

служили данные непосредственного анализа химического состава,-фармакологической (радиопротекториой) активности различных вариантов композиции, в результате которых были определены виды исследуемого сырья и их весовые части в общей смеси:

Балеологическое средство № I

1. Чай (листья) - 70,0

Облепиха крушеновидная (плоды) - 10,0

3. Шдорожник большой (листья) - 10,0

4. Крапива двудомная (листья) - 10,0

Балеологическое средство № 2

1. Чай (листья) - 70,0

2. Подорожник большой (листья) - 10,0

3. Ромашка аптечная (цветки) - 10,0

4. Ежевика (листья) - 5,0

Ь. Шиповник (плоды) - 5,0

6. ^ята перечная (листья) - 5,0

Балеологическое средство № 3

I. Чай (листья) - 70,0

2. Одуванчик лекарственный (листья) - 10,0

3. Ромашка аптечная (цветки) - 10,0

4. Горец птичий (трава) - 5,0

5. Шиповник (плоды) - 5,0

6. «1ята перечная (листья) - 5,0

При составлении растительной композиции (РК) для валеоло-гического средства № I в качестве исходного сырья наряду с другими лекарственными растениями использованы отбросы листьев чая из производства, разработанного препарата "Тиола".

С целью придания приятного товарного вида и максимальногс использования целебного действия растительной композиции № I разработан состав и технология изготовления водорастворимого гранулированного чая под названием "Кутаиси".

На следующем этапе работы изучены условия экстрагирования растительных композиций № 2 и 3. При подборе оптимальных условий экстрагирования в качестве экстрагента использована вода.

При экстрагировании РК К,» <2 и 3 использовали классические способы заваривания чая. При этом оценку качества полученных извлечений проводили по сухому остатку и по вкусовым качествам.

В результате проведенных исследований установлено, что наи большее содержание суммы экстрактивных веществ наблюдается при заваривании валеологических средств №№ И и 3 рациональным способом. Яри этом подученные извлечения обладают тонким, нежным ароматом, с приятным терпким вкусом.

Ваяеологические средства 2 и 3 названы: чай с радиопротекторной активностью "Протектор" и "Ачара" - соответственно.

На радиопротекторные чаи "Кутаиси", "Лротектор" и "Ачара" составлены технические условия и технологические инструкции, которые утверждены гАшистерством здравоохранения республики Грузия.

По решению фармакологического комитета Министерства здраво охранения республики Грузия радиопротекторные чаи "¿Кутаиси", "Протектор" и "Ачара" разрешены для медицинского применения. •

Разработаны технологические приемы переработки листьев алоэ древовидного, заключающиеся в ступенчатом воздействии экст рагента с различной полярностью, что обеспечивает Наиболее полное извлечение биологически активных веществ, обладающих высоким защитным действием при лучевом поражении.

На основании технологических исследований предложен способ получения сухого экстракта из листьев алоэ древовидного, обладающий защитным действием при лучевом поражении.

Получение сухого экстракта из листьев алоэ древовидного осуществляется по разработанной схеме (рис. 7).

Технологическая схема получения сухого экстракта алоэ

ТИ 1.1. Отжим сока М1 ферментированных листьев алоэ древовидного

ТП 1.2. Фильтрование сока

ТП 2.1. Настаивание жома с 96% этиловым спиртом

ТП 2.2. Ькстракция жома водой

ТП 2.3. Смешивание водно-спиртового экстракта и сока

Т11 3.1. Концентрирование объединенного экстракта

ТП 3.2. Очистка концентрированного экстракта сепагиро яание м

'1П 3.3. Сушка очищенного концентрированного экстракта методом распыления

Тн 3.4. Сухой экстракт

ТП I. Получение

сока

жт:

Получение объединенного экстракта

ТП 3. Получение

сухого

экстракта

Потери

—^Потери]

Р и с. 7

11роведено химическое исследование сухого экстракта алоэ. Установлено, что количественное содержание суммы веществ кислотного характера составляет 53,0%. Идентифицировано 16 свободных аминокислот. В больших количествах содержится незаменимые аминокислоты: лизин - 27,60 аргинин - 2В,30 фенилаланин -18, ВО мг#, лейцин -31,32 валин - 21,71 и др. Особенностью жирнокислотного состава сухого экстракта алоэ является высокое содержание непредельных жирных кислот - 63,05/6.

Завершены фармакологические исследования сухого экстракта алоэ. Фармакологическим комитетом ¿¿шистерства здравоохранения республики Грузия материала фармакологических исследований рассматриваются на предмет разрешения к клиническому изучению.

ОБЩИЕ ШВСД* •

1. Б результате физккотхиЫичесних, технологических и биологических исследований разработаны научно-методические основы создания и стандартизации фитозкетракционных препаратов умцуно-модулирующего действия на базе индивидуальной и многокомпонентной растительной композиции.

2. Среди некоторых представителей флоры СНГ проведен целенаправленный поиск по выявлению перспективных растительных источников сырья, получения препаратов имцуномодулируюцего действия. Исследованы сухие экстракты 21 видов растений, относящихся к 12 семействам, в том числе филогенетически родственных видов на примере растений рода горечавок. ВВявлено 6 видов растений, обладающих выраженным имцуномодулирующим действием. Дока-

I

зано, что наиболее перспективной является горечавка желтая (корни и надземная часть).

3. Разработан научно-методический подход конструирования фитокомпозиции, заключающийся во включении в срстав не более 3-6 видов растительного сырья. При этом выявлен синергизм биологической активности составляющих компонентов. При включении в препарат 7 и более источников сырья наблюдается подавление биологической активности. На основании разработанного подхода созданы 4-х и 6-ти компонентные растительные композиции (КРК), биологическая активность которых в 2-1,5 раза (соответственно) превосходит1 суммарную активность составных компонентов 4-х и 6-ти КРК.

4. Исследовано влияние технологических факторов (полярность экстрагента, его концентрация и температура, соотношение экстрагента к сырью, время экстракции, условия упарки и сушки) на иммуномодупирующую активность получаемых сухих экстрактов. Установлено, что чаще носители иммуномодулирующего действия извлекаются водой, нагретой до 80°С, реже - другими органическими растворителями; по данному критерию экстрагенты можно расположить в следующей последовательности: вода 80°С > 40% этиловый спирт 7С$ этиловый спирт > 96% этиловый спирт > этилацегат > хлороформ. На примере надземной части горечавки желтой установлены и другие технологические факторы: соотношение сырья и экстрагента 1:10, время экстракции 2 часа, условия упарки экстракта - под вакуумом, а суяки - методом распыления или лиофильной.

5. На основании физико-химических характеристик экстракта горечавки желтой сухого, изучения влияния различных комбинаций вспомогательных веществ на технологические свойства таблетиру--емых масс, а также остаточной влажности грацулята и давления

прессования на физико-механические показатели таблеток с учетом данных их биофармацевтического анализа, показано, что оптимальный состав и технология таблеток "Гентина" обеспечиваются при использовании в качестве вспомогательных веществ сахара молочного, крахмала кукурузного, аэросила А-380 и кальция стеарата, при влажности гранул <¿,5-4,0$ и удельном давлении прессования 100-150 МЛа.

6. С целью предохранения действующих веществ от неблагоприятного влияния окружающей среды и для устранения дискомфорта вкусовых качеств таблеток "Гентина" разработан состав желудочно-растворимой оболочки, наносимый в установке псевдоониженного слоя. Оптимальный пленкообразующий состав для покрытия таблеток "Гентина" полимерной оболочкой включает метилцеллюлозу, титана двуоксид и тропеолин-0. Исследована кинетика высвобождения суммы р-пироновых соединений из таблеток "Гентина", покрытых оболочкой. Установлено, что 90/5 действующих^веществ из таблеток высвобождаются в течение 160 мин.

7. Исследовано влияние основных факторов на процесс экстрагирования биологически активных веществ из шогокомпонентных растительных композиций. Выявлены основные закономерности совместного экстрагирования сырья различного анатомо-морфологиче-ского строения, заключающиеся в определении природы экстраген-та - на основании химических и фармакологических исследований получаемых извлечений, а также методом математических расчетов

в установлении соотношения между размерами частиц сырья в 4-х и 6-ти КРК, что обеспечивает одновременность извлечения составных компонентов при их экстрагировании.

8. Разработана технология получения сухих экстрактов из

4-х и 6-ти HPK, а также на их основе - состав прописи и технология изготовления гранул "Тетраимцунофита" и "Иммунофита". Изучена кинетика высвобождения сушгы флавоноидов из них.

9. Методами хроматоспектрофотометрии, высокоэффективной жидкостной хроматографии и атокно-абсорбционной спектроскопии, а также с использованием аминокислотного анализатора определено содержание основных v-пироновых соединений, установлено наличие микроэлементов и свободных аминокислот в некоторых видах растений рода горечавки в 4-х и 6-ти КРК, а также в субстанциях и готовых лекарственных формах. Установлено, что технология получения сухих экстрактов из 4-х и .6-ти КРК, а также изготовление гранул'"Тетраимцунофита" и "Имцунофита" обеспечивает полноценный переход из исходного сырья флавоноидов, микроэлементов и аминокислот, положительно влияющих на иммунную систему организма.

IG. Подобраны составные компоненты и определено их количественное соотношение в многокомпонентных растительных композициях ("Ачара", "Протектор" и "Кутаиси'*), а также разработаны технологические приемы переработки листьев алоэ древовидного, обеспечивающие высокую радиопротектурную активность.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТШ ДИССЕРТАЦИИ

I. Бакуридзе А.Д., Вещиков В.В. Количественная оценка ксантоновых соединений в надземной части горечавки желтой методом важх // Тр. УП конф. молодых ученых ВНИИ лекарств, раст. - М., 1965. - 4.1. - 0.10-22. Деп. в ВИНИТИ. - Od.05. I9dü, № 3339-В 66.

¿. Динамика накопления ксянтонов п надземной части горе-

чавки желтой / А.Д.Бакуридзе, В.П.Янулис, Т.Д.Даргаева и др. // Сб. тез. докл. конф., поев. 200-летию высшего фармац. образования в Литве. - 1935. - €.191.

3.Бакуридзе А.Д., Патудин A.B., Рабинович A.M. Динамика накопления иридоидов в надземной части горечавки желтой / Повышение качества лекарственной помощи амбулаторным и стационарным больным на основе ускорения научно-технического прогресса в свете решений ХХУП съезда КПСС: Тез.докл. 1У Всесоюз. съезда фармацевтов. - Казань. - 1986. - С.370-371.

4. Содержание мангиферина у видов сем. Gentianüceae

/ П.В. Дубсандоржиева, Г.Г.Николаева, А.Д.Бакуридзе и др. // Раст. ресурсы. - 1966. - Т. ХХП, № 2. - С.233-236.

5. Влияние настойки из надземной части Grentiana Eulea k. • на секреторную и ферментативную функции желудка / С.¿1.Николаев, Г.А.Шагжеева, Т.Д.Даргаева, А.Д.Бакуридзе // Раст. ресурсы. -1986. - Т. XXil, № 3. - С.401-404.

6. Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующей активностью / Г.Г.Николаева, Т.Д.Даргаева, А.Д.Бакуридзе

и др. // A.c. 12938dl СССР, I960, А 61 К 35/76.

7. Способ получения средства, обладающего иммуностимулирующей активностью / Т.Д.Даргаева, А.Д.Бакуридзе, А.В.Сергеев и др. // A.c. I367196 СССР, I9o7, А 61 К 35/76.

б'. Влияние методов сушки на выход иридсидных соединений при получении сухого экстракта из надземной части горечавки желтой / А.Д.Бакуридзе, Т.Д.Даргаева, А.Б.;1атудин, л.И.Брутко // Семинар. Применение лиофилизации в фармации. Тез.докл., -Рига. - 1966. - 61 с.

9. Лрлдолды растений рода GentiOina сем. Genb'ünaceQe JuSS. / А.д.ьакуридзе, Т.д.Дтрга^ва, Г.Г.Николаева и др. // Химля

природных соединений. - 1987. .- № I. - C.3-II.

10. Бакуридзе А.Д., Патудин A.B., Рабинович A.M. Изучение биологически активных веществ в надземной части Genlittna Eutea Ii. //'.'<1атериалы У Всероссийского съезда фармацевтов: Тез.докл. -Ярославль, 1937. - C.40Ü-40I.

11. О перспективах использования надземной части горечавки желтой в качестве лекарственного сырья / С. iL Николаев, А.Д.Баку-ридзе, Т.Д.Даргаева и др. // ЙзвестшСО АН СССР сер. биологических наук... вып. 3. - 1937. - С.67-70.

12. Бакуридзе А.Д., Берашвили Д.Т., ^ткарадзе Дж.Х. Стандартизация травы горечавки желтой // ХУП республиканская научная конференция молодых медиков Грузии: материалы докл. - Бакуриани, 1966. - С.136-139.

13. jfeTOfl определения содержания суммы иридоидов у Gentland fiuteQ Ь. /А.Д.Бакуридзе, Т.Д.Даргаева, А.В.Патудин и др. //

Раст. ресурсы. - 1937. - № 3. - С.455-458.

14. Бакуридзе А.Д., Брутко Л.¡Л., Нагудин A.B. Локализация •р-пироновых и иридоидшх соединений в различных органах горечавки желтой и зависимость их содержания от места произрастания растения // Лекарственные растения в традиционной и народной медицине: Тез.докл. - Улан-Уде, 1987. - С.13-15.

15.Способ получения сухого экстракта растительного сырья / Н.Б.Леонидов, В.П.Шабатин, А.Д.Бакуридзе и др. // A.c. 1474929 СССР, 1988, А 61 К 35/78.

16. Бакуридзе А.Д., Латудин*A.B., Эриашвили В.М. Количест-веннре определение фенолкарбоновых кислот в траве горечавки желтой методом ВЭЖХ // Современные методы анализа фармацевтических препаратов: науч.тр. ВВ№, Т. ХХУ1, М.: 1988. - С.153-156.

17. Противовоспалительное действие сухого экстракта алоэ

4 d

/Ъ.ь.Артишевский, С.М.Николаев, .А.Д.Еакуридзе и др. // Фармация. - I9d9. - Ii а. - С.63-64.

Id. Способ получения средства, обладающего иммунодепрессив-ным действием / А.Д.Бакуридзе, Х.В.Гогсадзе, ДЛ'.Бератвили и др. И A.c. Io0dcto9 СССР, 19d9, А 61 К 3b/7d.

19. Способ получения сухого экстракта из растительного сырья / А.Д.Бакуридзе, Д.Т.Берашвилк, Б.Л.йриашвили и др. // A.c. 1691 ¿¿4 СССР, 1990, А 61 К 3o/7c¡.

20. Способ получения средств, обладающего гипотензивным действием / А.Д.Бакуридзе, л.Ь.Чхатарптвили, Б.Л.'орипшвили «я?-/i A.c. 1Ь71&& СССР, 1990, А 61 К 3b/7d.

¿1. получение иммуномодуляторов на основе многокомпонентной растительной композиции / А.Д.Бакуридзе, ;Л.П1.Курцикидзе, Х.й.Госадэе и др. // XIX республиканская научная конференция молодых медиков Грузии: материалы докл. - Бакуриани, 1990. -С.lib.

2*-. цитохимическое изучение некоторых видов растений рода горечавок с целью применения в медицинской практике / А.Д.Бакуридзе, НЛ'.цагареишвили, Д.Г.Чинчарадзе и др. // XIX республиканская научная конференция молодых медиков Грузии: -материалы докл. - Бакуриани, 1990. - С.129-130.

¿Ó. «Ьгнкоева С.;.!., Ажунова 'i.A., Бчкуридзо А.Д. Противовоспалительная активность сухого экстракта из надземной части горечавки желтой // Биологические ресурсы л ведение государственных кадастров Бурятской АССР: материалы науч.конф. - Улан-Уде, 1S9I. - С.ltd.

24. Разработка гранулированной лекарственной формы иммуностимулирующей активности / .Д.и.Курцнкидз^, А.Д.Ьакуридэо, ь. К iJiicaj-cB :: др. // Репллзчциг. нцучнмх достиже::;-..! в практически»

фармации: тез. докл. республиканской науч. кон}. - Харьков, 1991. - C.I9U-191.

¿'о. Содержание липофилышх гарных кислот в листьях видов рода Мое ( Тот п. ) U- / А. В.. 1а ту дин., д.'Г.Ьачашвили, А.Д.Ьа-куридзе и др. // Изучение лекарственных растений в ботаническом саду HiJO BHliP: об. науч. тр. - .«I., 1991. - С.в4-3сз.

26. Антосяк ¡i.J., Бакуркдзе А.,4-, Латудин А.В. Биология горечавки желтой. Создание ее искусственных популяций в условиях Закарпатья // Ресурсовсдчсское и фотохимическое изучение лекарственной флоры СССР: науч. тр. БН1Ш. - М., 1991. - Т. XXIX.

- c.id-aa.

¿7. Хидашели Ш.К., Бакуридзе А.Д. Зверобой.^ - Тбилиси: Самшобло, 1991. - 15-с. (Брошюра).

¿d. Разработка и стандартизация раститсльноГ композиции иммуномодулирующего действия / Л.Ш.Курцикидзе, А.Д.Бакуридзе, Г.Ц.Датукишвили, В.М.Писарев // Ресурсовсдческое и фитохимиче-ское изучение лекарственной флоры СССР: науч. тр. ВНИйй. -Ы., 1991. - Т. XXIX. - С.205-210.

29. Хроматоспектрофотомстрическое определение содержания 1»-пироновых соединений в надземной части faentiana tutea U-'А.Д.Бакуридзе, Н.Т.Цагареишвили, Т.Д.Даргаева и др. // Раст. ресурсы. - 1991. - Т. ХХУП, № 4. - C.I15-II7.

30. Противоязвенная активность экстракта из надземной части GrentiCinü tuteáis- / С.Л.фнкоева, Т.А.Ажунова, А.Д.Бакуридзе и др. // Раст. ресурсы. - 1992. - Т. ХХУШ, № I. - С. 100-103.

31. Иммунокоррегируклцие свойства многокомпонентного фито-жстракционного препарата при экспериментальном моделировании зармакологического и экологического иммунодефицита / В. ¡d.Писарев, А.Д.Бакуридзе, М.Ш.Курцккидзе и др. // Ш Украинская конфе-

ренция по медицинской ботанике: Тез. докл. - Киев, 1992. -Ч. 1. - С.109-110.

'¿¿.. Экспериментальное обоснование лечебного применения экстракта горечавки желтой при заболеваниях гепатобилиарной системы/ Т.А.Ажунова, С.Л.Николаев, А.Д.Бакуридзе и др. // Химико-фармацевтический журн. - 1992. - № I. - С.62-64.

33. ¿¡ристави к.'Л., Бакуридзе А.Д. Beta vut^afiS Is- -Фармакогносгическое изучение // Поиск новых лекарственных средств, разработка технологических и аналитических методов: науч. тр. Тбилисского гос. медицинского института. - Тб., 1992. -Т.П. - С.146-152.

34. Изучение процесса экстракции при получении новогалено-вого препарата иммуномодулирующего действия/ М.Ш.Курцикйдзе,

А.Д.Бакуридзе, Р.В.Махарадзе,' Д.Т.Берашвили // Поиск новых лекарственных средств, разработка технологических и аналитических методов: науч. тр. Тбилисского гос. медицинского института. -Тб., 1992. - Т.П. - С.92-96.

36. Бакуридзе А.Д., Берашвили Д.Т. Получение иммуномодуля-торов растительного происхождения // Поиск новых лекарственных средств, разработка технологических и аналитических методов: науч. тр. Тбилисского гос. медицинского института. - 16., 199г. - 1л1.. - С.74-сЯ.

¿6. цитохимическое исследование некоторых видов растений рода горечавок / А.Д.Бакуридзе, Н.К. Легрелидзе, д.Г.Чинчарадзе, Д.Т.Берашвили // поиск новых лекарственных средств, разработка технологических и аналитических методов: науч. тр. Тбилисского гос. медицинского института. - Тб., - Т.Н. - С. 70-74.

¿Г/. Биофармацевтическое исследование таблеток "Гентина"/ Н.Т.Цагареишилли, К.О.Ьухникашнили, А.^.Ьакуридзс, Г.о.,/нхарад-

зе // Поиск новых лекарственных средств, разработка технологических и аналитических методов: науч. тр. Тбилисского гос. медицинского института. - Тб., 1992. - Т.П. - С.67-92.

38. Способ получения средства, обладающего иммуноцодулиру-ющей активностью / .Л.Ш.Курцикидзё, А.Д.Бануридзе, Р.В.иЛахарадзе и др. // A.c. 1797694 СССР, 1992, А 61 К 35/78.

39. Иммуномодуляторы растительного происхождения (обзор) / А.Д.Бакуридзе, Л.Ш.Курцикидзё, В.М.1]исарев и др.'// Химико-фармацевтический журнал. - 1993. - № 8. - С.43-47.

Подл, в печать 10.05.94 Формат 60x90/16 Печ. п. 3,0

Зак. тип. 50 Тираж 100 экз.

ЦНИИТЭИтяжмаш, 129090, Москва, И-90, Троицкая ул.,17