Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Совершенствование способов анализа гамма-аминомасляной кислоты и исследование ее комплексов включения с бета-циклодекстрином

МИНИСТЕРСТВО ЗДРЛВООХРАШШ И {¿ЕДИЦННСКОЯ Пт,5ШЕНН0С1И РОССИЙСКОЙ 5ЕДЕРЛШИ ПЯТИГОРСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ ОАРМАЦЕВТИЧЕСКАЯ ЛКАДШШ

На правах рукописи

СТРУСОВСКАЯ ОЛЬГА ГЕННАДЬЕВНА

УДК 615.225:547.455.31.015.4.07:543(043.3)

ОТВЕРШЕКСТВОВАНКЕ СПОСОБОВ АНАЛИЗА г-тШ'.ЖШт^ кислота И ИССЛЕДОВАНИЕ ЕЁ КОМПЛЕКСОВ В1ШЗЧШШ С 0 - ЦНК2ЮДЕКСТР1Ш0У

15.00.02. - фармацевтическая гкыкя и фзрмакапггепга

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фарнацевтичесгая вауя

Пяткгорся - 1S34 г

Рабо-1й Ешсшена в Пятигорской государственной фариацевтичэскоЯ

академии

Кгучмый руководитель: заслуженный деятель науки Российской ^здарацш!, доктор фармацевтических каук, профессор Беликов В.Г.

Официальные оппоненты: Доктор фаригцдвтическзсг каук, профессор Молчанов Г.И. Доктор фариацэзткчзскик наук, профессор Кошанцез Б.А.

Еедуцза учрезденив - Всероссийский научкс-исследосательскиЯ

институт фармации

Зазита состоится " О^^С/1£94 года б часов

-ка ггседашк диссертационного совета Д 084.45.01 по ггщитам диссертация яри Пятигорской гесударстаенной фармацевтической

академии

/587333, г.Пятигорск, пр. Калинина, 11/.

Дзторгфзрат разослан " " 1634 года.

•С диссертацией моано озкакошсться в библиотека Пятигорской государственно]! фаршцзвтичаехой академик /пр. Каликгла, 11/,

УчяхыЯ секретарь диссертационного с? '¡/ У

спе-зга, дастор фар^зятичзскз: каук £.В. Кош&щзва

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТУ

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕЗаЫ. у-Акшксшсляная кислота- (ГАМК) или амина-лок относится к группе ноотропных средств.

Ашшалон синтезируется ка АО "Акрихин" и выпускается з фора таблеток, покрытых оболочкой по 0,25 г.

При введении в организм ГАМ плохо проникает через гейато-зкцефалическкй барьер и быстра выводится из организма, в связи с чей, суточная дом препарата монет достигать 4,0 г.

По данным лаборатории ОТК АО "Акрихин" препарат б момент выпуска не всегда отвечзет требованиям фармакопейной статьи МО) 42-1903-89 по разделам "цветность" к "наличие органических при-¿зсей". По зтим причинам актуальным является установление природы при.гасей и разработка способов количественного определения их з препарате. Разработка методик соэершенстЕования контроля чистоты амикалона проводилась нами по заявке АО "Акрихин".

Применение аыиналона в больших дозах часто сопровождается появлением диспепсических явлений, нарупежем сна, колебаниями артериального давления, что особенно нежелательно'при применении ноотропного средства. 3 связи с этим целесообразно создание новой лекарственной формы, позволяющей улучшить биофаруацевткчес-кие н Фармакологические свойства ашшалона:. пролонгировать действие препарата и тем сашш снизить его суточную дозу, а таете уменьшить или устранить побочные эффекты.

Исследования последних лет показали, что изменения бкофар-ьгацевтических характеристик лекарственных веществ ыожно достичь путем получения их комплексов включения СКВ) с циклодекстринаии. Получение НВ ГМЖ, обладающего повышенной бяофаршцевти-

ческой доступностью из-за постепенного высвобождения лекарственного средства, позволит уменьшить суточную дозу препарата.

Б изученной нами .литературе отсутствует сведения по получению и исследованию KB ГАШ. Критическое рассмотрение литературных, данных позволило прийти к заключению о тем, что существующие методики анализа ГАМК нуждается в совершенствовании. Они, в частности, напряеилеыы для изучения взаимодействия ГАМК а а-пик-лодекетриноы (р-ЦЦ), и анализа KB, так как отличаются низкой чувствительностью и специфичностью.

ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Целью каЕего исследования явилось совершенствование иетодик контроля чистоты ГАМК и способов анализа аминалона в лекарственной форме, а такае получение, аналитическое к бисфариацевтическое исследование РЗ ГАМК.

Для реализации поставленной цели необходимо было решить следующие задачи ;

Í. Осуществить выбор оптимальных условий хроматографического контроля чистоты ашшалона.

2. Усоверненствовать методики испытания подлинности и количественного определения ашшалона в таблетках.

3. Изучить взаимодействие ГАШ с р-ЦЦ з растворе и в твердом состоянии.

4. Получить KB ГШ' с р-ЦД к разработать ыэтодики их анализа.

о. Изучить биодсст; ткссть KB ГАМК в опытах "in vitro" и "in vivo".

НАУЧНАЯ НОВИЗНА. РАБОТЫ. На основании проведенных исследования Еидплены и идентифицированы содержащиеся в ашналона примеси: пропаргиловый спирт к бутан-2-диол-1,4, являющиеся праыеяуточны-ш продуктами его синтеза. Осуществлен выбор оптимальных условий определения иетсдоы газо-андхсстнсй хрсиатогра^ии прииесеЗ в

аминалоне. Усовершенствованы методики испытания подлинности и количественного определения аминалона в лекарственной фору е. Исследована возможность использования ВЭНХ для определения амина-лсна в таблетках.

Впервые получены комплексы включения ГАШ с р-ЦЦ. . Изучена стабильность ГАМК в процессе ксмплексообразования. Образование КВ ГАМК в твердой фазе доказано комплексом физико-химических методов: дифференциального термического анализа, рентгеноструктур-ного анализа и методами КК-и ЯМ? 13С-слектроскопки. Впервые изучена фармакокинетика КВ ГАМК в опытах на животных. В результате проведенных исследований сделано предположение о возможности получения новой лекарственной формы ГАМК пролонгированного действия на основе образования коыплеса включения ГАМК с р-цикло--екстрином.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Разработаны методики определения примесей в препарате аминалон. Усовершенствована методика испытания подлинности аминалсна в таблетках методом тонкослойной хроматографии. Предлогены методики количественного определения аминалона в таблетках методами высокоэффективной жидкостной хроматографии и потенциометрии.

Методики имеет ряд преимуществ перед существующими: позволяет сократить продолжительность проведения анализа, исклвчают необходимость использования токсичных растворителей (изобутилового спирта, муравьиной, ледяной уксусной и хлорной кислот); уменьшить расход анализируемого вещества. Разработанные методики позволяют повысить специфичность и чувствительность анализа, увеличить точность определения; , •

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ. 1. Методика определения примесей пропаргиловогь спирта и бутин-

- в -

-2-диола-1,4 в ai-шналоне методой газо-жидкостной хроматографии внедрена в практику работы лаборатории ОГК хиюто-фарма-цевтического комбината "Акрихин".

2. Методика количественного определения лропаргилового спирта в амииалоне методом ГйХ внедрена в практику работы лаборатории научно-исследовательского отдела перспективного развития АО "Акрихин". .

3. Усовершенствованная методика испытания подлинности таблеток ашшалона методой ТСХ апробирована и внедрена в практику работы лаборатории СЯК хиыико-фарыацевтического комбината "Акрихин".

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные результаты исследований долоаены на научных конференциях Пятигорского Государственного фармацевтического института ( Пятигорск, 1891, 1992, 1993, 1994 г.г. )

ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано 8 работ.

0Б"ЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Днх.ертационная работа представляет собой рукопись, изложенную ьт. 140 страницах матшсншеи. Ока состоит из введения, пяти глав, яы'-годов, списка литературы. В диссертации приводится 22 рисунка, 22 таблицы. Библиографический указатель включает 155 источников, из них 88 на иностранных языках.

основные пошения, которые выносятся на защиту:

- выбор олтиыальньк условий хроиатографкческого контроля чистоты ашшалона;

- усон*рвенсгзовакте методик испытания подлинности к коли-

- 7 -

чественного определения аминалона в таблетках;

- изучение взаимодействия к-аминсмасляной хислоты с р-цикло-декстринои в растворе и в твердой состоянии;

- получение КЗ ГАМК и разработка методик их анализа;

- изучение биодоступности КБ ГАШ в опытах "in vitro" и "in vivo".

СОДЕРЖАНИЕ РАБОШ РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ХРОНАТОГРАФИЧЕСЖОГО КОНТРОЛЯ

чистота ашналона

Фарлакотерапезтическое действие лекарственных средств находится в непосредственной зависимости от их чистоты. По данным лаборатории ОТК АО "Акрихин",имеют место случаи, когда некоторые серки ашшалона не отвечают требованиям $С по разделам "цветность" и "наличие органических примесей". Для выделения примесей из препарата аминалон и идентификации мы использовали метод ТСХ, поскольку он является одним из наиболее доступных и селективных.

Поскольку некоторые серии аминалона не отвечает требованиям ФС в момент выпуска, деструкция препарата в процессе хранения, з этом случае, монет быть исключена. Поэтому нами исследовались образцы ашшалона, не отвечающего требованиям на содержание продуктов полусинтеза препарата: пропаргилового спирта; бутин-2-диола-1,4; бутан-2-диола-1,4; ^-бу^фолактона и а-пирролвдока.

Нами был проведен выбор оптимальных условий ТСХ-анализа аыиналона в присутствии продуктов его полусинтаза. Разработка методик проводилась в закрепленных слоях сорбента на готовых пластинках "Silufol 07 - 254", размером 150x150 iai. При подборе под-

виансй учитывали гидрофильность исследуемых веществ и полярность растворителей. В качестве основных компонентов подвижной фазы был выбран ряд растворителей: вода, метанол, этанол, ацетон, этилацетат, диэтиловый эфир и хлороформ.

Ii результате проведенных исследований посредство« различных комбинаций растворителей была подобрана система,в которой кроме пятна аминалона на пластинке обнаруживалось два пятна щшесей, значения R^ которых соответствовали значениям Rf пропаргилового спирта и бутин-2-диола-1,4. Пятна примесей обнаруживались в системах растворителей, содержащих этанол и воду в различных со-отнсшэкиях. Оптимальной для разделения пропаргилового спирта и бутин-2-дг"ла-1,4 оказалась система этанол-вода (9 : 1).

Метод ТСХ позволяет идентифицировать примеси в препарате аминалон и был нами использован в дальнейшем для контроля стабильности ГАШ. Из-за близости знаний Rt- пятен разделяемых компонентов определение количественном содервания примесей в препарате методом ТСХ затруднено, С г-;оЙ целы) мы использовали метод ГНХ, отличающийся большей чувствительностью и селективностью.

Ввиду того, что в качестве- примесей в аминалоне были обнаружены сильно полярные вещества, для их разделения необходимо использование полярных неподвижных фаз СК5Ф): триэтаноламина на хромесорбе, силиконового эластомера, карбовакса 20М. В качестве твердого носителя для разделения спиртов и ашшосоединений может быть использован Chronaton.

На основе литературных данных и предварп льных исследований s качестве твердого носителя для разделения аминалона и содержащихся э ней примесей нами был выбран Chronaton M-AW-DüCS СО, 160-C.2CC*M}(4CiF) с HKS - 5% Carbovax 2Ш.

На подготовленных колонках хроматографировали модельные сме-гл, представляющие собой водные растворы аыикалона, отвечающего ■ребованкям ФС. К ним добавляли различные комбинации продуктов "олусинтеза препарата. Для подбора оптимальных условий' разделе-шч компонентов модельных смесей: температуры термостата, колонки, '.спасителя, давления газа-носителя, использовали значения ВЭТТ и фитерий разделения пиков. В результате эксперимента были выбраны следующие условия доведения анализа: температура термостата галонки 190°С, испари1еля 190°С, детектора 250аС, давление газа-гасителя 1,4 х 105 Па.

Идентификации примесей осуществляли по значениям времени ■держивакия б сравнении со стандартными образцами и методом до-гавок. На рис.1 представлены полученные хроматограммы аминалона, .ерекристаллизованного из этанола, пропаргилового спирта, бутин-2-диола-1,4 и аминалона, не отвечающего требованиям 8С.

Методами добавок и сравнения значений времени удерживания еществ содерзащихся в исследуемом растворе и растворах стандар-ных образцов было подтверздено наличие в аыиналоне примесей про-аргилового спирта и бутин-2-диола-1,4.

Следующий этап работы заключался в определении предела обнажения примесей. Пределом обнаружения считали массу вещества, □торой соответствовал пик отклика вдвое превышающий уровень умов детектора.

В результате проведенных исследований было установлено, что выбранных условиях предел обнаружения пропаргилового спирта в линалоне составляет 1,5 х 1(Г7г,бутин-2-диола-1,4 - 2 х КГ^г.

На основании проведенных исследований была предложена нето-оса идентификации примесей в аыиналоне.

i 11 " f i-1 1 ■ 1 i 1 : "i i

t,UKH.

123ÜS67Ö

P/.G. I. Хроыатограммы исследуемых веществ:

1 - аминалока, перекристаллизованного из этанола;

2 - аминалока, не отвечающего требованиям SC;

3 - пропарпиового спирта;

4 - 5утин-2-диопа-1,4

Методика идентификации примесей в аминалоне. Массу аминалона в количестве 0,5 г растворяют в 2 ыл вода. Полученный раствор в количестве 1 мкл хроматографируют на колонке длиной 1200 мы, заполненной СЬгота'Ьоп К-АИ-БМСБ (0,18 мм)в следующих условиях: температура термостата колонки 190°С, испарителя 190°С, детектора ¿50° С, давление газа-носителя - азот - 1,4х105 Па. Затем к раствору аминалона добавляют по' 1 мкл стандартных образцов про-ларгилового спирта и бутин-2-диола-1,4. Полученный раствор тщательно перемешивают и хроматографируют в количестве 1 мкл в тех же условиях. На хроматограмме должно наблюдаться увеличение соответствующих пиков.

Методику количественного определения пропаргилового спирта в аминалоне разрабатывали, используя метод внутреннего стандарта, з качестве которого использовали бензиловый спирт. Физические свойства бензилового и пропаргилового спирта достаточно близки, а параметры удерживания заметно отличаются.

Б результате проведенных исследований была предложена методика количественного определения пропаргилового спирта.

Методика количественного определения пропаргилового спирта в аминалоне. •

Точную массу аминалона (около 0,25 г) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляю! точную массу внутреннего стандарта - бензиловый спирт (около 0,05 г), растворяют в небольшом количестве воды и доводят объем раствора водой до кетки. Полученный раствор в количестве 1 мкл хроматографируют в ранее описанных условиях.

- 12 -

Согласно разработанной методике анализировали образцы амина-лона разных серий. Раэу/ьтаты количественного определения примеси пропаргилового спирта в препарате представлены в таблице 1.

Таблица 1.

Результаты определения пропаргилового спирта в ашшалоне методом ГЯХ ' ■

Номер серии анализируемого образца

Метрологические характеристики

£391033 0,580 0,003 0,015 1,5

6Э1128Э' 0,911 0,010 0,028 2,8

4880530 1,230 0,008 0,014 1,2

1251230 0.8Й1 0,007 0,01? 1,9

Разработанная методика анализа пропаргилового спирта в ами-калоке предусматривает продолактельность выполнения анализа -30 мин, воачая подготовку проб к хроматографирэваниа, к позволяет обнаружить примесь з количестве от 0,05^ до 1,5^. Относительная ошибка определения составляет до ±2,8%.

Результаты предварительных исследований показали, что прк-иееь бутик-2-дкола-1,4 в ашшалоне обнаруживается в следовых количествах к ке во Есех исследуемых образцах. Поэтому мы не ставили перед собой задачу разработки методики количественного

опррдьления бугкн~2-диола-1,4 в гг-жчдонэ.

СОВНгСТСТВОВАНИЕ СПОСОБОВ АНАЛ'ЗЛ АНИНАЛОНА В ТАБЛШАХ

•Согласно ФС определение подлинности аьиналона в таблетках методом ТСХ проводят с использованием токсичных растворителей з системе: изобутиловый спирт-муравьиная кислота-вода. Для экстрагирования препарата из таблеток применяют 70% этиловый спирт.

С цельи исключения токсичных растворителей, уменьшения количества компонентов подвижной фазы и наносимого на пласт:мху вещества нами была усовершенствована методика испытают подлинности ешпгалона а таблетках.

В коде исследований было установлено, что в система растворителей этанол-зода (.1:1} значение Е^ пятна амнналона равно 0,5. Изменяя количество наносимого на хрсматографичесхуо пластинку вещества Сю о получоко оптимальнее значение ндссы пробы, ссст-петстпуглро 40 ¡.кг препарата (вместо 120 ют) .зкетрзгент - 70% этиловый спирт был заменен на воду. Ка основании проведенных исследований была предложена усовершенствованная методика идентификации шглналона в таблетках методом ТСХ,

Методика хроиатогтЬического определения подлинности амяна-пона з таблетках.

Массу растерт»: таблеток 0,2 г встряхивают с 2,5 ил воды и фильтруют чэрчз бумажный фильтр. Полученный фильтрат з количест-1 • I ькл ( '.о 'схг ) с помощью иихрояприца накосят ка етартовуэ пеш хроматограф",гческой пластинки "Silufcl UV - 254". В качест-s свидетеля используют 4% водный раствор препарата (1 нкл}.Х;?о-атограффуат в системе раетт^ин^тей зтаяол - вода (1:1) зос-

ходящий способом до подъема фронта подвижной фазы на 10 cu выше линии старта. Пластинку высушивают на воздухе, В качестве проявителя используют 0,2% раствор нингидрина в этаноле. После опрыскивания пластинку помещают в сушильный шкаф при температуре 100 - 105°С на 5 мин. Значение Rf пятна извлечения из таблето* аминалона должно соответствовать значению Rf пятна свидетеля.

Количественное содержание аминалона в таблетках согласно К 42-1042-89 определяют методом формольного титрования. Используемая методика не позволяет получить точные и воспроизводимые результаты из-за нечеткого перехода окраски индикатора в точке эквивалентности. Относительную ошибку определения увеличивает также необходимость нейтрализации этанола, добавляемого к титруемому раствору, 0,1 моль/л раствором хлористоводородной кислоты. С целью уменьшения относительной ошибки определения нами была разработана методика количественного определения аминалона в таблетках с использованием потенциометрии для установления точки эквивалентности на основе метода формольного титрования.

Методика потекциометрического определения аминалона в таблетках.

10 таблеток аминалона помещают в мерную колбу вместимостью 200 мл и растворяют в 100 ил воды, доводят объем раствора водой до метки.Полученный раствор фильтруют через бумажный фильтр, отбрасывая первые 20-25 ил. К 10 ил фильтрата лрибавляют 10 мл раствора формальдегида .нейтрализованного 0,1 иоль/л раствором гидроксида натрия по фенолфталеину до слабо-розового окрашивания, Титруют из иикросоретгз! 0,1 иоль/л растворои натрия гидроксида при постоянной перемешивании раствора. Титрованный раствор прибавляют по 0,1 ил, измеряя рН. Эквивалента! объем определяют графически.

- 15 -

Полученные данные, свидетельствуют о тон, чг. жсительная табка определения леаит составляй : ± 1,43а» *- то вреия, irc результаты, полученные- согласно методике ФС, си^о^зны отно-1тельноЯ ошибкой определения до -' ,?/»

С целью уменьшения ошибки опрадаления и сокращения продолжи->льности анализа при большом количестве исследуемых образцов am также была разработана методика количественного определения тналона в таблетках методом ВЭЗХ, основанная на способности вшалона образовывать внутрикомплексные соединения с катионами >ди, поглощающими в области 230-254 ны.

Условия работы прибора были выбраны на основе предваритХель-к исследований : чувствительность - 1,6 ; время измерения -3 с ; скорость подачи элнента - 100 икл/мин. Для проведения ЗХ анализа аминалона нами были использованы хроматографичэские лонки заводского изготовления КАХ-4-64-3, заполненные Separon 3. В качзстЕВ элвента использовали 3 х Ю-3 моль/л раствор ые: сульфата.

Методика количественного определения аминалона з таблетках тодом ВЗНХ. 3 фарфоровой ступке измельчают и растирают 20 таб-ток аминалона одной серии, предварительно определив среднюю ссу таблетки. Около 1,0 г (точная масса) растертых таблеток ¡¿ещавт з мерную колбу вместимостью 100 ил я взбалтывают с ао-£ а течение 3-5 мин. Объем раствора доводят водой до метки и ательно перемешивают. Фильтруют через бумажный фильтр, стсра-эая первые 20-25 ил фильтрата. В качестве эталонного раствора тользуют 0,5% водный раствор аминатона, отзечагетЯ требогагасм .Элюент пропускают через колонку до получения стабильной ну-

левой линии.

Условия хроматографирования : расход подвижной фазы 100 цкл/мин; количества вводимой пробы и етртонного раствора по 4 шел. Длина волны детектирования - 240 кн.

По предлагаемой методике анализировали оопазцы таблеток еми-налона разных серий. Относительная ошибка определения составила до +1,4#,

Таким образом, согласно полученным результатам, при использовании потенциометричэского фиксирования точки эквивалентности значительно увеличивается точность определения, по сравнению с методикой <Ю. Использование же метода ВЭНХ позволяет ускорить и упростить анализ при определении большого количества исследуемых ■ образцов.

ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ КОМПЛЕКСОВ ВКЛЮЧЕНИЯ ГАМК С р-ЦЦ

Следующим этапом нашей работы явилось исследование взаимодействия ГАШ с р-ЦЦ в растворе и в твердом состоянии,

ГАШ очень легко растворима в воде. Это свойство чрезвычайно затрудняет исследование взаимодействия ГАМК с р-ЦЦ в растворе, очевидно из-за образования слабых КВ. Установить взаимодействие между ГАМК и р-ЦЦ в растворе удалось только методом Г'/Р-спектроскопии высокого разрешения на ядрах 1Н - ПМР. В качестве внутреннего стандарта применяли тетраыетилсилан, растворителем служила дейтерированная вода. Исследования проводили при температуре 320 К,

Шли получены IMP - спектры исходного 0,005 моль/л раствор р-ЦЦ и 0,005 моль/л раствора ГАМК. Для исследования взаимодействуй к неходаоыу раствору р-ЦЦ прибавляли трчлш массы ГАМК рав-

:&си порциями, каздай раз определят величины г . чэ-мя хими-эсхих сдвигов для Н-1 ; Н-2 ; Н-3 * ~4 ; Н-5 к протонов

-ЦЦ •! Н-а; Н-р и Н-у-протонов 17'"-'.

П-.-лученные значения изменений ".¿:>жческих сдвигов позволили 1ссч;:тать К"обр комплекса включения, образующегося в растворе этодоц Бенези-Хильдебрандта. Значение Kcúp (1398,5 5Г1) соот-зтствуэт образовании в растворе слабого КВ ГА!Ж.

Для получения КВ в твердом состоянии использовали три наибо-;е распространенных метода: удаления растворителя, соосаздения замешгаания. В ходе исследований било установлено, что получо-<е КВ ГАМК возмогао лишь путем диспергирования без добавления ¡створителя (твердофазный метод). Было такге установлено, что присутствии воды ЦЦ ускоряет деструкции ГАШ. КВ получали з ).тярнсм соотношении компонентов 1:1. Полученные КВ исследовали >мплексси Ь;',сика-ког,гческ",1х иетодсз, Использование теста опре-;ления изменения скорости увлаинтшя позволило судить об обра-танки КВ. Так за 180 минут эксперимента окрашенная жидкость даялась по капилляру с ГА)Ж на 63 ми. физической смесыь78 ми, 1 - толькс на 25 ш. Уменьиение скорости увлажнения КБ явилось дтперздением образования нового соединения.

Термсаналитичесхив исследования проводили о интерзале тeu-ра тур от 50 до 500°С. Изучение терысаналитичесгах кривых р-ЦД казало, что э интервалах температур 50-90°С и 2Ю-290ЭС наблп-ется дза термических эффекта, соответствущих удалении влага деструкции вещества. На термограмыах ГАМК а интервала теиперз-р 175-200рС наблюдается оффект, соответстзущий плавлению и зтогению препарата. Терисаналитическив кризые физической смеси ра*агт наложение термических эффектов, характерных для ннлявя-злъных гезветг. Исчезновение эффектов, присущих ГАНК на Q ta-

граммах КВ подтвердило включение молекулы ГАМК в полость молекулы р-ЦЦ.

Кристаллографические характеристики исследуемых соединений, полученные методом рентгеноструктурного анализа свидетельствуют о том, что дифрактогргша физической смеси представляет собой наложение рефлексов, присущих интактным ГШ и р-ЦД. Изменение профиля дифрактограммы КВ по сравнению с физической смесью -уменьшение числа пиков и изменение их интенсивности свидетельствует об изменении кристалличности исследуемого вещества. Появление новых интенсивных пиков при 29=17,75°; 19,(з7с и 28,78° доказывает образование нового соединения с индивидуальной кристаллической решеткой.

Изучение ИК-спектров исследуемых веществ, показало, что Ш-спектр КВ неаддитивен спектру ФС. Так, например, исчезает полоса поглощения в области 1700 см~* характерная для р-ЦД; появление новых полос поглощения в области 1948-1636 см-1 и 1400 см_1может быть объяснено возникновением водородных связей между карбоксильной и аминогруппами ГАМК и гкдроксилами р-ЦП.

Исследования КВ методом ШР 13С-спектроскопии позволили не только доказать образование КВ, но я высказать суждение о возможной структуре образующегося соединения. Поскольку наибольшие изменения химического сдвига наблюдаются для С-а и С-р-углеродных атомов ГАМК и для С-2 и С-3 углеродов р-ЦД (таблица 2), можно говорить о гидрофобном взаимодействии между данными фрагментами молекул, которое возможно лишь при частичном погружении молекулы ГАМК в полость молекулы р-ЦЦ. Менее сильный контакт наблюдается между амино и каре «сильной группами ГАМК и гидроксилами р-ЦД. Таким образом, по-ьдц;шому, молекула Г/Ж координируется с широкого торца молекулы е-ЦЦ и частично погружена в ее полость.

чаолица '¿.

Значения величин изменения химических сдвигов в ЯЫР13С-спектрах исследуемых соединений

Наименование соединения 13 | 5 С, и.д. |

С-1 | С-2 | С~3 | С-4 | С-5 | С-8 | С-а | С-р | 0-{ | С00~"

1 1« 102,637181,675163,610178,483172,850159,6581 | | | 1

| ГАЖ 1 ||||| |3б,172|31,015¡24,672 |175 Ч

| КВ 102,403100.637187,739178,574173,248159,658141,603136,275 |24,097|179,219

Д5 13С, и.д.

-0,234 |-0,8Й8|4,129 | 0,111| 0,393[ 0,188| 2,431| 5,260 | 0,575| 0 ^

■ - аи -

Таким образом, использование комплекса физико-химических не тодов позволило не только.доказать взаимодействие между ГАМК р-ЦЦ в растворе и в твердом состояний с образованием KB, но высказать суждение о структуре образующегося соединения.

ИЗУЧЕНИЕ БИОФАРМАЦЕВ1ЖЕСКИХ СВОЙСТВ КОМПЛЕКСОВ ВКЛЮЧЕНИЯ ГАЬ

Изучение биологической доступности KB проводили методом диг лиза через целлофановую мембрану. Данные проведенных исследова кий показали, что высвобождение ГАМК в опыте с КБ по сравнению интактным веществом замедляется примерно в 1,5 раза. Замедлен« проницаемости ГАМК в случае КЗ позволило предположить возмож ность получения новой лекарстренной формы ГАМК длительного дей ствия.

Поскольку поведение лекарственных веществ в опытах"in vitro и "in vivo" неадекватно, для объективного сравнения оиофармацев тических свойств ГАМК и КБ мы использовали данные фармакокинетм ческого определения ГАМК в кроаи животных (самцов белых крыс).П результатам, полученным в ходе исследований были построены кри вые и рассчитаны фарыакокинетические параметры ГАМК и KB, призе денные в таблице 3. Значения общего клиренса, площадей под фар ыакокинетическими кривыми и, относительной биологической доступности могут свидетельствовать об улучшении биофармацевтическк свойств KB, по сравнению с иктактной ГАМК и возможности уменьшения суточной дозы и числа приемов препарата.

При обсуждении возможной лекарственной формы для KB принималась во внимание специфичность данного соединения: достаточн; большая масса (3,3 г;, заключающая терапевтическую дозу ГАМК исключает возможность использования таблеток; деструкция ГШ г присутствии р-ЦЦ и вода делает невозможным получение гранул, г

Таблица "¿.

Фармакокинепгчесяир параметры ГАМК и KB ГАМК

зследуемов i Кажущийся ¡ Константа j Общий j Площадь j Относительная | вещество j объем (элиминации,jклиренс,j под ¡биологическая!

¡ распре- | ¡ ! кривей| доступность,;

| деления,\ : ! ! !

! sin ¡ МИН-1 ! МЛ/МИН | Wi2 S % !

rm 2,009 0,025 0,050 450 ICO

КЗ ГА)Ж 1,907 0,019 0,038 625 ÍC5

шенение КВ в виде дозированного пороака теряет смысл из-за зильнссти комплекса в растворе. Поэтому в качестве возможной сарственноЯ формы для КБ нами были выбраны михрокапсулы. Мкк-сапсулы получали па технологической схеме разработанной на ка-фэ технологии лекарств Пятигорской государственной фарыацеэ-(еской академии. Для формирования оболочек микрокзпеул были ¡раны зтилцеллплоза, яелатин и агар-агар. 3 ходе предеаритель-: исследований оыло установлено что оптимальным для форыирова-: оболочек микрокапсул КВ является агар-агар.

Для объективной оценки полученной лекарственной форм была чеиа биологическая доступность микрокапеул КЗ метоле« диализа, одэ эксперимента с'ыло установлено, что замедление Еысзсбсаде—

ГАМК из микрокапеул с КВ, по сравнении с интактныы вещест-, замедляется примерно з 3 раза.

Таким образен, в ходе предварительных исследований было сле-о предположение о зсэчсзности использования иинрокапсул КЗ з эстве лекарственной ферггы ГАМК длительного лэйстгкя.

осноачыЕ заводы

1. Установлена причина несоответствия некоторых серий аиккало! выпускаемого АО "Акрихин" требованиям §С.

2. Выделены к идентифицированы содержащиеся в аминалоне примес к разработана методики их определения методам ТСХ и. Г£Х.

3. Усоверсэнотзозана методика установления подлинности аминалс в таблетках методом ТСХ. Предложено использование потенци метрик для определения количественного содержания препарата лекарственной форме.

4. Разработана методика количественного определения анкналона таблетках, основанная на применении метод? ВЭЯХ.Относительн. ошибка определения составляет 1,3-3,4%.

5. Исследовано взаимодействие ГАМК с р-ЦЦ в растворе методом И с образованием КБ. Рассчитана константа образования КВ 1393,5 КГ1.

6. Получек КВ ГАМК, исследованы его состав и химическое строею комплексом физико-химических методов: термогравиыетрии, рент генострухтурного анализа, ИК- и ЯМР-спектроскопии.

8. Установлена возможная структура образующегося КВ методом ffi¿ 13С-спектросксгоп!.

10.Изучены биофармацевтические свойства КВ ГАМК в опытах "i vitro" «"in vivo". Доказано увеличение степени относительно биологической доступности КВ ГАМК по сравнению с иктактНы препаратом.

Наследована возможность использования микрокапсул КВ ГАМК : качестве лекарственна фора ГАМК длительного действия.

ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ ОПУЕЛИКС . Ш ОЛЕДУЩИЕ РАРЧЭТЫ:

1. Беликов В.Г., Струсозская O.P. Еыделение пргагасей из пре-»та ахсшалоя и их идентификация //Актуальные вопросы фарыа-гичг^ской чвухи к практики: Тез докл. научно-практич.

Курск.-1991.-ч.2,- С.40-11.

2. Е-зликоз В.Г., Струсозская О.Г. Идентификация примесей s чарата ашшалон/Д'еп'окальная конф. по фармации и фармакс.та-''48; 1631; Пятигорск/:Тез.дохл.- Пятигорск, 1891.-С, 78.

3. Беликов В.Г., СтрусоЕская О.Г. Количественное определение адсна и содэрзаприся е нем примесей методой ГНХ /Угегно-зная конф. по ijapjaipm к фарыакологии/47; 1982; Пятигорск/ , докл.- Пятигорск, 1892.-С. 48.

4. СтрусоЕская О.Г. Слредаленка пр:шзся пропаргклсвого зта п аминалоне методом гаго-гидкостнсЯ хроматографии //Охрз-¡крузгйв^эЯ среда, вопросы экологии и контроль качества ¡троим /НИИТЭХИМ,- М., 1993.- Выя.4.-С.15-17.

5. Струсопская О.Г., Гаврилин U.B. Количественное спределэ-^-амкномасляноЯ кислоты в таб'зтках методом иысокоэффактив-кядхостноЯ хроматография //Охрана охруаакцеЯ среды, яопросы гагии и контроль качества продукции /КИИТЭХИМ.- И.. 1893,4.- С. 13-15.

В. Беликов В.Г., Струсозская О.Г., Газр'длгн И.З. Нсслэдова-комппекса включения амина,тона с р-цикдсдекстршсы физико-хи-с.чзогл методами //Проблем фармации н использования провигср-; кадров./Региональная кокф.4а;1393; Пят хг стек/ : Тез. дскл. -горек, 1933.-Ч.2.- С.145.

7. Бслдаов В.Г.. Струсозская О.Г. Получение н исслр.дег»»чяв

свойств комплексов включения аыикалона с р-цюиодекотрином Перспективы создания и производства лекарственных средств в У раине./:Тез. докл. научно-практич. конф.--Одесса;1893/.-Харько 1883.- С.128.

8. Беликов В.Г., Номланцева Е.В., Струсовскач О.Г. Испольэ ваше метода ЯМР-спектроскопии для установления структуры ко; плекса включения у-аминомасляной кислоты с р-циклодекстрином а Региональная конф. по фармации, фармакологии и подготовке ка, ров/4Э;18Э4; Пятигорск/:Тез. докл.- Пятигорск, 1ЭЭ4.-С.89.